JPS6281312A - 抗変異原性剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、コスツノライドを有効成分として含む抗変異
原性剤に関するものである。

生活環境中には数多くの発癌性物質が分布し、これが人
類の健康上問題になっている。いままでの報告によると
、発癌物質は各種加工食品、飲物等に幅広く分布し、た
とえ望ましくない上記食品等であっても、これを人間の
食品から除くのは非常に困帷である。このような状況に
対する対策としては、これら発癌物質を効率よく除去す
る吸着剤によってと９除き、当該食品の安全性の向上に
ついて検討されているが、一方食品の特殊性からそのよ
うな処理の不可能な場合も多く、その対策を考えること
は極めて重要である。本発明は１発癌物質の作用を体内
で停止あるいは減温させ、その危険性を防止あるいは予
防しようとするものである。

〔従来の技術〕

発癌物質が変異原性を示すことは周知の事実であり、こ
のような抗発癌物質の検出に、抗変異原性の手段を用い
て、効率よく研究を進めることができる。このような抗
変異原性の検出による変異原性の減温あるいは消滅を目
指す試みは、従来から多少行なわれており、例えば、コ
バルト、ケイ皮酸アルデヒド、クマリン、プロトアネモ
ニンなどが抗変異原物質として発表されている。（グロ
シーディング・オヴ・ジャパン・アカテミー、５４巻、
２３４頁、１９７８年、ミューテンシうン・リサーチ、
１０７巻、２１９頁、１９８３年、ミューテンシーン・
リサーチ、１１７巻、１３５頁、１９８３年。

ミューテンシラン・リサーチ、１１６巻、３１７頁。

１９８３年）これら抗変異原物質は、一般に毒性が強く
、副作用を呈するという欠点があった。

〔発明が解決しようとする問題点〕

発明の目的は、正常細胞に対する毒ぜが極めて低く、突
然変異原性も示さない抗変異原性剤を提供することにあ
る。

〔問題点を解決するだめの手段〕

本発明者らは、天然物中の抗変異原物質の検索を広〈実
施していたところ、漢方薬の木香の抽出物が強い抗変異
原性作用を有することを見出し。

木香中の抗変異原性作用物質の追求を続けたところ、上
記のコスツノライドに極めて強力な抗変異原性剤ックす
ることを発見し、本発明を完成した。

以下に、本発明の抗変異原性剤について詳細に説明する
。

この発明の抗変異原性剤の有効成分は、で表わされるコ
スツノライド この発明の抗変異原性剤は、高い抗変異原注効果を有し
、正常細胞に対する毒性が極めて低く。

突然変異原性も示さない。従って、変異原性発現が疑わ
れる場合の抗変異原性の目的で、安全に使用することが
できる。

この発明の抗変異原性剤の成人１日当りの投与量は、変
異原物質摂取による予想される影響に応じ適宜定められ
るが、通常体重１−当り１〜１００ダである。投与経路
は、経口、皮下注射、静脈注射９局所的投与などが好ま
しい。投与剤の形態は製薬上許容し得る賦形剤又は浴剤
との混和に工り。

常法で製剤した散剤、顆粒２錠剤、カプセル、注射液９
局所用剤など、どのようなものであってもよい。

〔作　用〕

コスツノライドの抗変異原性効果は、変異原物質によっ
て傷がついたデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の傷を修復す
る酵素の活性を上昇させることによるものと考えられ、
この点において変異原性の成立過程にあるＤＮＡに対し
て修復効果を発揮する。

このようなことが発癌性の発現の抑制に結びつくものと
考えられる。

（実施例１．） コスツノライドの製造 木香（８ａｕｓｓｕｒｅａ　　１ａｐｐａ　　ｃｌａｒ
ｋｅ　）乾燥根ｌｌ１ｉＦをトルのジクロルメタンを加
え、攪拌し、しばらく放置後ろ過する。この操作をさら
にもう一回行なう。ジクロルメタン抽出物を４０℃以下
で、溶媒を減圧濃縮した。得られた濃縮物を１００ｍｇ
のベンゼンに溶解した。次に１５０ｇのシリカゲルをベ
ンゼンでスラリーして充填したカラム（内径５ｃｌｌｌ
Ｘ高さ８５ｃｍ）に、抽出物のベンゼン溶液を添加し、
ベンゼンで溶出した。ジヒドロコスツスラクトンは、ベ
ンゼンで完全に溶出される。ジヒドロコスツスラクトン
を溶出した後のシリカゲルカラムラ、ベンゼン−酢酸エ
チル（２０：ｌ・Ｖ　／　Ｖ）で溶出し、溶出部を４０
℃以下で、減圧濃縮し、５ｇのコスツノライドを得た。

（実施例２．） コスツノライドの抗変異原性効果 抗変異原性の検定は、買出らの方法（プロシーディング
・オヴ・ジャパン・アカデミ−１５４巻。

２３４頁、１９７８年）に従い、大腸菌（＆ｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａｃｏｌｉ　Ｖ７Ｐ２ｓ、　ｕｖｒＡ−）を使用
して実施した。すなわち、１２時間、３７℃で振とり培
養した大腸菌培養液を、遠心分離により、菌体と培養液
とにわけ、菌体をリン酸緩衝液で洗浄、菌体をリン酸緩
衝液に浮遊させ、　４　Ｘ　１０’　ｃｅｌｌｓ　／−
の濃度とする。

それに、発癌物質４−ニトロキノリン−１−オキシドを
４ダ／−の割合で加え、３７℃、３０分間振とうし、Ｄ
ＮＡに傷を与える。その後、遠心分離洗浄して菌体を集
め、あらかじめ４５℃に加温しておいた軟寒天２−に、
コスツノライド溶液（０，１〜２■）、ＤＮＡに傷のつ
いた変異大腸菌０、１　ｔｔ／　（菌数約２Ｘ１０’個
）を加えて攪拌後、シャーレ中の寒天培地に注入して広
げた。

なお、４−ニトロキノリン−１−オキシドを加えないで
、上記同様に操作した場合についても同様、シャーレに
注入した。なお、抗変異原性物質は、一方で、菌の生育
を抑制する場合もあるので、菌の生育抑制のない状況で
の効果であることを確認するため、同様の操作で菌数を
希釈した場合（５Ｘ１０”）についてもシャーレに注入
した。

これらを３７℃で２日間培養後、寒天上に生じた変異コ
ロニー及び菌生育抑制検出用のシャーレのコロニーを計
数した。変異コロニーの減少割合の大きさによって、抗
変異原性０強さを表示した。

検定結果を第１表に示した。第ヤ表より明らかなように
、ブランクとして行なった４−ニトロキノリン−１−オ
キシド無処理の菌では、変異コロニーはほとんど検出さ
れていないが、一方、４−二トロキノリン−１−オキシ
ド処理菌では、コスノノライドの添加量の増加に比例し
て変異コロニー数が低下した。ゴスツノライド１■添加
で、無添加対照のわずか２３チの変異コロニー数を示し
たにすぎない。すなわち、本条件下でプレート当り１ダ
のコスツノライドの添加で、顕著な抗変異原性効果が認
められた。

第１表　抗変異原性効果 毒性 （１）急性毒性試験 ６週令のＩＣＲ−ＪＣＬ　マウス及びウィスターＪＣＬ
ラットを用い、腹腔内及び経口投与により急性毒性を調
べた。コスツノライドをオリーブ油に溶かし、腹腔内は
注射にＩす、経口的には経口ゾンデにより、強制投与し
た。投与後、７日飼育観察を続け、８白目に屠殺解剖し
、肉眼所見をとった。ＬＤ、ｏ値は、リッチフィールド
・ウィルコックノン法により求めた。

解剖時の創見所見には、特に異常は認められなかった。

得られたＬＤ、。値は、第２表に示した。

マウス・ラットのいずれにおいてもコスツノライドのＬ
Ｄ、。値は３ｇ／に９以上であり、ルーミスの分類によ
るところの「微弱毒性」の範囁に属する安全性の高い物
質であると言える。

第２表　急性毒性試験（ＬＤ、。値） （２）変異原性試験 エームスの方法（ミューテン・リサーチ、１１３巻、１
７３頁、１９８３年）に従って、サルモネラ・チフイム
リウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉ
ｕｍ　）　Ｔ　Ａ１５３５、ＴＡ１５３７．Ｔｉ２Ｂ、
ＴＡｌｏｏ　の４菌株を用いて変異原性試験を行なった
。

予め４５℃に加温しておいた軟寒天（０，０５ｍＭのヒ
スチジンとビオチンを含む）２−に、Ｓａ１ｍｏｎｅｌ
ｌａ菌液０．ＩＷｔ（２Ｘ１０’菌数）　８９ｍ１ｘ０
．５　ｍ　（ラット肝ホモシネ−）　９０００ｇ遠心上
清にニコチンアデニンジスクレオチドを加えたもの）又
はリン酸緩衝液０．５　ｍ、コスツノライドのジメチル
スルホキサイド溶液０．１ｄを順次加え、攪拌後、寒天
プレート上に注入して拡げた。これを３７℃で２日間放
置後、寒天プレート上に生じたコロニーを計測し、復帰
突然変異数とした。

結果を第３表に示す。Ｓ　９　ｍｉｘの添加、無添加の
両条件下においてＴＡ１５３５．ＴＡｔ５３７．Ｔｉ２
Ｂ、ＴＡｌｏｏのいずれの菌ユにおいても、コスツノラ
イドの突然変異原性は認められず、安全性の高い化合物
であることが示された。

第３表　変異原性試験 〔発明の効果〕 この発明の抗変異原性剤は、高い抗変異原性効果を有し
、正常細胞に対する毒性が極めて低く、突然変異原性も
示さない。従って、突然変異原性が疑われる場合の予防
効果を目的として長期間にわたって安全に使用すること
ができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式で示されるコスツノライドを有効成分とする抗変
   異原性剤 ▲数式、化学式、表等があります▼