JPS6275265A - 免疫診断用プロ−ブ系および免疫診断方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は関連抗原（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ａｎｔｉｇ
ｅｎ）を石する感染体の存在を検知すめための系および
方法に、さらに特に試験を直接的に行なうために関連抗
１京を直接的に得るための捕獲メカニズｌ＼（ｃａｐｔ
ｕｒｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　）を使用する免疫診断用
プローブに関する。

感染体の存在を検知するために数多くの方法が開発され
ている。細菌感染の場合に、細菌の臨床的試料はスワブ
を用いて感染した人からｔｉｌｉＷｔづるか、または体
液の試料から得る。この微生物は適当なｊ８地で培養し
、その存在を増幅させる。細菌の同定はたとえば生化学
的試験またはラテックス凝集により確認する。細菌１８
養および試験に要する総０４間は２４時間から数週間で
ある。

感染体はまた細胞培養法を用い検出することもできる。

臨床的試料を採取し、培地に移す。実験室では、試料を
細胞培地、Ｖでインキュベートし、細胞病理学的な顕示
を毎日検査する。インキュベーション後の２４時間〜数
週間で細胞病原性が検知されたならば、Ｉｉｌ胞培養物
を固定し、特異抗体で染色して感染体の存在を確認する
。

患占および医師は病気の正確な診断を迅速に与えるす〒
い試験法を望んでいる。正確でまた比較的迅速な試験法
は多くの場合に用途が制限される。

たとえば迅速な凝集試験法はス１−レブトーコツカス酊
△生物に主として対するものである。この試験では、ス
ワブを用いて得た患者の臨床試料を抽出酵素中で乳化し
、ラテックス凝集媒質中に装入する。陽性の試験は一つ
または二つ以上の対照パターンに対するラテックス　ビ
ーズの凝集パターンにより示される。この試験に要する
総時間は７０分から５時間の間で変わる。

標識した試薬を用いる免疫分析法は現在、多くの感染体
を検知するための定ｍ的で高石に敏感な診断試験方法を
提供している。しかしながら、免疫分析方法は望まれる
ほどには迅速ではない。酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬ
ＩＳＡ）では感染体またはイの関連抗原を検出するため
に、酵素で標識した試薬を使用する。たとえば、感染体
の抗原を捕獲し、この抗原に対して特異性の酵素結合し
た抗体にさらす。捕獲抗原と結合する抗体の数は抗原の
量に正確に依存して変わる。一連の稀釈、インキュベー
ションおよび洗浄工程中に、未結合抗体が洗出され、結
合酵素に対して特異性の基質が加えられ、かくして色の
変化のような反応を生じさせる。

代表的には、臨床試料をプラスチック製微小四部でイン
キュベートして、この微小四部の表面上に抗原を捕獲す
る。インキュベーション後に、凹部を洗浄し、次いで感
染体に対して特−・異Ｈの酵素で標識した抗体を加える
。第２のインキュベーション期間の後に、凹部を洗浄し
、発色性基質を加える。結果は通１れ、高価なＥＬＩＳ
Ａ板読取５１を使用して読取る。これらの工程は現時点
で、その実施に少なくと６２時間、多くの場合に４〜２
０時間を必要とする。各インキュベーション工程は代表
的に３０〜６０分を要する。

ＦＬＩＳＡ試験は、目標抗原が少量だ（）しか存在して
いイ１い場合に特に時間を消費する。不適当な試験結果
を避けるために、歩行１の抗体がまた要求される。づな
りｊつ、人品の抗体が使用されると、抗体の非ｆｊ異的
結合により誤った背好１が多くの場合に生じる。しかし
ながら、少量の抗体を使用すると、抗体が目標抗原に結
合するための適度の（幾分を確保するのにさらに長時間
のインキュベーションが必要になる。

前記方法には多くの欠点がある。細菌および細胞１８古
物にもとづく診断方法は格別に長い時間を要する；すな
わら伝染性病気が漫延しうる１１）間：および医師が忠
名ど接げる時間を長引かせることがある時間が要求され
る。実施方法の速度は特に、病気を有する患者が的確な
結果を明白に受りた１２に処置を受けるために戻らない
ことがある性的伝播病診療所において重要である。感染
体の存在を確認する迅速な試験法は担当医師による適時
で適当な処置の選択を促進する。迅速な試験はまた出産
を引かえており、腔または頚部のヘルペス　ウィルス感
染を有する疑いのある母親にとって重要である。

現時点で利用できる試験方法は融通性、確実な結果を得
るのに要する時間、および簡便性の点で不適当である。

迅速な凝集試験法は融通性に欠けており、確実な結果を
得るために１時間以上が必要である。ＥＬＩＳＡ試験法
は試＄３１の移動、２回または３回以上のインキュベー
ション工程、２１回または３回以上の遮断工程および３
回または４回以上の１寸ざ工程を要する多工程法である
。ざらにまた、ＥＬＩＳＡ法は繊細なピペットＨ１ｔｆ
）用具または特殊な処理装買を必要とする。従って、Ｅ
ＬＩＳＡ法を実施し、結果を解釈するためには技術的熟
練が必要である。さらにまた、大半の多種の試薬が必要
である。

従って、本発明の目的は感染体を検知するための、免疫
診断用プローブ系および免疫診断方法を提供することに
ある。

本発明のｂう一つの目的は動作の早い免疫診断用プロー
ブ系および免疫診断方法を提供することにある。

本発明のさらにもう一つの］」的は短縮されたインキュ
ベージコン時間を使用する免疫診断用ブ「１−ブ系およ
び免疫診断方法を提供することにある。

本発明のｂう一つの１」的は使用するイン１゛コベーシ
ヨン工程数が少ない免疫診断用ブ１−１−ブ系おＪ：び
免疫診断方法を提供することにある。

本発明のさらにもう一つの］二１的は使用する遮断工程
が少ない免疫診断用プローブ系および免疫診断方法を提
供することにある。

本発明のｂう一つの目的は複頌４１装冒またはピペット
処理用具が不必要な免疫診断用プローブ系および免疫診
断方法を提供することにある。

本発明のもう一つの目的は通常の熟練していない名によ
り湯１足な結果がｉ！ｌられる免疫診断用ブ［−］−ブ
系および免疫診断方法を提供することにある。

本発明のもう一つの目的は少量の試薬を使用する免疫診
断用プローブ系Ｊ５よび免疫診断方法を提供することに
ある。

本発明のさらにｂう一つの目的は計器を使用することな
く視覚的に容易に判断できる結末を与える免疫診断用プ
ローブ系および免疫診断方法を提供することにある。

本発明のもう一つの目的は免疫診断用プローブを抗原の
百接的捕獲に使用する免疫診断用プローブ系および免疫
診断方法を提供することにある。

本発明のもう一つの目的は病巣のような身体膜に「１接
的に適用できる免疫診断用プローブを提供することにあ
る。

本発明のさらにもう一つの目的は身体開口部内に挿入で
きる免疫診断用プローブを提供することにある。

本発明のさらにもう一つの目的は試験を直接的に実施で
きる免疫診断用プローブを提供することにある。

本発明は関連抗原を右す゛る感染体の存在を検知するた
めの真に効宋的な免疫診断用プローブ系および免疫診断
方法が長形支持体の一方の末端に近接して、これを関連
抗原と接触させると、関連抗原を捕獲する結合性部位を
有する捕獲メジウムを配置することにより達成できるこ
とを実現する。

本発明の特徴は関連抗原を有する感染体の存在を検知す
る方法にある。この方法はプローブに損持されている捕
獲メジウム牙関連抗原と接触さぼ、関連抗原を捕獲メジ
ウム内の結合性部位に捕獲し、次いで捕獲メジウムをこ
の関連抗原に対しＣ特異性の酵素結合した顕在性抗体（
ｄｉｓｃｌｏｓｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙ）を含有ツる顕
在化溶液中に浸すことを包含する。この方法は捕獲メジ
ウムを顕在化溶液から取り出し、未結合顕在性抗体を捕
獲メジウムから洗出し；次いで捕獲メジウムを、顕在性
抗体に結合している酵素に対して特異性の基質を含有す
る溶液中に浸すことをさらに包含する。

関連抗原はこの関連抗原が患賃の身体膜に存在する場合
におけるように患者に保有されているままで、あるいは
患者の身体開口部内に存在しているままで接触させるこ
とができる。捕獲メジウムの結合性部位は関連抗原に対
して特異性であって、関連抗原に対して特異性のレクチ
ンのようなりガントまたは付加抗体を包含する。付加抗
体はヘルペス　シンプレックス　ウィルスの関連抗原の
捕獲について特異性であることができ、およびウサギ抗
−１−Ｉ　Ｓ　Ｖポリクロナル抗体を包含しうる。

本発明の方法はまた、捕獲メジウムを関連抗ＤＳＬと接
触さＶｔこ後に、捕獲メジウムの果梗１１１結合＋１部
位を遮断する遮断溶液中に浸し、次いて・未使用結合性
部位が飽和された後に捕獲メジウムを取り出すことをさ
らに包含でさ・る。捕獲メジウムは静電荷を示すことが
でき、二１〜口セルロースを含有でき、および５〜１０
分間遮断溶液中に入れることができる。

捕獲メジウムは顕在性抗体溶液中に２〜１０分間入れる
ことができ、および捕獲メジウムは基質溶液中に１〜１
０分間浸すことができる。本発明の方法はさらにまた、
捕獲メジウムを、未使用結合性部位が飽和された後であ
って、捕獲メジウムを顕在化溶液に入れる前に、水中で
４５秒〜１分間洗浄する工程をさらに包含できる。この
方法はまた捕獲メジウムを基質の変色に充分な時間が経
過した復に、視覚的に検査する工程をさらに包含できる
。本発明のプローブは基質の変色に充分な時間が経過し
た後に捕獲メジウムと比較Ｃきる陰性結果表示要素を包
含できる。さらにまた、このプローブはその通路の一方
の末端に近接して捕）（メジウムと連絡する通路を有す
るハンドルを有することかでき、この場合の接触にはこ
の通路を経て関連抗原を吸引して、捕獲メジウムの結合
性部位を抗原と接触させることが含まれる。

本発明による方法の一つで用いられる′ｉＭＩｆＩｉ溶
液は７．０〜９．０のｐＨに保持されるように緩衝ひき
、またゼラチン１〜５％または生血清アルブミン１〜５
％ｄ３よびエタノールアミン０．０５〜０．１モルを含
有できる。感染体がヘルペス　シンプレックス　ウィル
スである場合に、顕在性抗体はグルコース　オキシダー
ゼで標識したウサギ抗−Ｈ８Ｖポリクロナル抗体を包含
できる。顕在性抗体溶液はぜラテン０．５〜１％または
生血清アルブミン０．５〜１％を含有できる。顕在性抗
体溶液は７．０〜９．０のｐＨが保持されるように緩衝
できる。

基質は不溶性生成物を生成づるものであることができる
。酵素はホースラディツシュ　ペルオキシダーゼである
ことができ、そしてこの場合の基質は４−クロルナフト
ール０．０５〜０．１０％および過酸化水素０．０００
１〜０．０００５％を含有するトリス−１１Ｃ１緩衝液
である。別様には、酵素はグルコース　オキシダーゼで
あり、この場合の基質はグルコース０．５０−０．７５
％、フェナジン　メトスルフェート０．１５〜０．２５
％およびニトロブルー　デトラゾリウム６．５〜８．０
％を含有する。

本発明の特徴はまた関連抗原を捕獲するだめの結合性部
位を有する捕獲メジウムおよび捕獲メジウムをその第一
の末端に近接して担持するための細長形支持体を有する
プローブを含む、感染体の存在を検知するだめの免疫診
断用プローブ系にある。

態様の一つにおいて、捕獲メジウムは支持体の第一の末
端部に配置されてＪ３す、身体開口部中に挿入できるよ
うな形状である。第一の末端部は円柱形であることがで
きる。捕獲メジウムは静電荷を示すことがでさ、おＪ：
び二１−口　セルロースを含有できる。

別のｆぶ様では、結合性部位が関連抗Ｄλに対して特異
性であり、この抗原に対して特？シ性の付加ｖＬ体を包
含できる。付加抗体はヘルペス　シンプレックス　ウィ
ルスの関連抗原の捕獲について特異性であって、つυギ
抗−Ｉｆ　Ｓ　Ｖポリクロナル抗体であることかできる
。別法として、結合性部位は抗原に対して特異性のリガ
ンドを包含する。

細長形支持体は捕獲メジウムと連絡している通路を有す
ることができる。本発明の免疫診断用ブロー１系はまた
通路と連結でき、捕獲メジウムの結合性部位を会合抗原
と接触させるための吸引手段をさらに有することができ
る。

本発明のｂう一つの特徴は捕獲メジウム、陰性結果表示
要素および捕獲メジウムおよび陰性結果表示要素をその
第一の末端に近接して担持するための細長形支持体並び
にそれぞれ試薬を含有するためのおよびプローブを受け
入れるための少なくとも２個の四部を有する組立容器を
含むプローブ系にある。各凹部はその開口の周囲に而取
りされた縁部を有することができる。このプローブ系は
また少なくとも一つの組立容器を取り離し可能に保持す
る土台、捕獲メジウムの未使用結合性部位を遮断するた
めの遮断ｉ８液、関連抗−原に対して特異性の＾り素結
合した顕在ｒ＋抗体を含有する顕在化溶液および顕在セ
１抗体に結合している酵素に対して特異性の基質を含有
する溶液をさらに包含できる。

本発明のその他の目的、特徴および利点を下記の好′ｌ
ｉ態様および添付図面の記載から明白にする。

第１図は本発明による免疫診断用プローブを軸測投象法
により示すものぐある。

第２図は小さい身体開口部に挿入できる別のプローブを
軸測投象法で示すものである。

第３図は第１図および第２図のプローブを使用する代表
的工程を示す一覧図である。

第４Ａ図は第１図および第２図のプローブおよび第３図
の諸工程を実施するための試薬を入れるための組立容器
および土台を軸測投象法により示す図面である。

第４８図は第４Ａ図の組立容器内に入れられた一種の試
薬を含有するビンを軸測投象法により承り図面である。

第５図は４Ｆ１’の宜なる抗原−ＱＳ＋　光性捕獲メジ
ウムおよび陰性結果表示要素を含むさらにもう一つの免
疫診断用プローブを軸測投象法により示す図面である。

第６Ａ図は中空ハンドル型免疫診断用プローブ、吸引ホ
ースおにびポンプの図解式図面である。

第６８図は第６Δ図のプローブの拡大した部分的断面図
である。そして 第７図はハンドル内の通路と連絡している捕獲パッド内
の捕獲抗体が示されでいる本発明にＪζるもう一つの中
空ハンドルｌＷ免疫診断用プローブの横断面図である。

本発明は感染体と会合している一種または二種以上の抗
原を捕獲するための結合性部位をイ１する捕獲メジウム
が一方の末端に近接して配置されている長形支持体を３
むプローブにより実施できる。

この捕獲メジウムは支持体に接着させたパッチ形材料で
あることができ、または支持体りに成型した液状膜であ
ることができる。捕獲メジウム十の結合性部位はタンパ
ク質または糖タンパク？’ｊを非選択的に捕獲できる。

別様には、捕獲メジウムはそこに目標抗原に対して特異
性の抗体または特巽種の分子を捕獲するリガンドを都合
よく結合させる、ニトロセルロース、ＤＥＡＥあるいは
酢酸セルロースのような免疫学的に不活Ｍな物質よりな
る捕獲パッドである。好ましくは、支持体は金属または
プラスデックより＜Ｋる免疫学的に不活性なハンドルま
たはパドルである。

ハンドルの材質、寸法Ｊ５よび形状並びに捕獲メジウム
の特性はこのプローブを使用する用途に応じＣ変える。

二ｉ−口ピルロースのような非特異的捕獲メジウムを担
持する平たい支持体は大部の抗原が存在し、タンパク質
断片が少ししかない場合に使用できる。このようなハン
ドルおよび非特異的捕獲メジウムは抗原の濃縮溶液でｂ
使用できる。

目標抗原が存在ザる全物質の中の極少ｆｆ）である場合
には、特）°４的結合性部位をイ１づる捕獲メジウムが
好ましい。一つのこのような用途にはその他のタンパク
質および糖タンパク質が高濃度で存在する血液中のＨＴ
ＬＶ−Ｉ［１の検知がある。特異的捕獲メジウムが望ま
れるｂう一つの用途は大ｆｉｌの粘液に遭遇する呼吸器
合胞体ウィルスのにうな呼吸器感染体の検知である：粘
液は非情５’４的捕獲メジウムを急速に圧迫する。

特異的捕獲メジウムが望まれるもう一つの用途にはウィ
ルス粒子の全量が非常に低量であるｊ＆１合の尿中のサ
イ１−メガロウイルスの検知がある；この場合に、特異
的捕獲メジウムは免疫診断用プローブの小面積上にウィ
ルス抗原を捕獲することができる。ブＯ−ブは本発明に
従い、プローブがハンドル内に通路を有し、抗原溶液が
そこを通って吸引されるように設計り−ることにより増
強される。

第１図において、プローブ１０は患者の病巣にまたは口
、肛門または腟のような身体間口部に保有されている＋
！［１連抗原と直接的に接触させるのに適している。ハ
ンドル１２は捕獲パッド１４および陰性結果表示要素１
６を担持している。プロー１１０は膣中に１１人して、
たとえばヘルペス　シンプレックス　ウィルスの存在を
検知Ｊ−るのに適している。ハンドル１２は１７の範囲
で長さ１２ｃｍおよびｒｂ　５　＃である。捕獲パッド
はハンドル１２の一端の周囲に液状膜として成形されて
いるニトロセルロ−スである。捕獲パッド１４は矢印範
囲１８で１　ｃｍの長さを右し、矢印範囲２０でｆ　４
　ｍｍの高さを有する。

非特異的捕獲の場合に、二１ヘロセルロースそれ自体が
結合性部位を促供する。特異的捕獲の場合には、パッド
１４は（＝Ｊ加抗体をさらに含有り−る。

プローブ１０を使用する前に、パッド１４を遮断溶液で
処理して、パッドによる物質の非特異的捕獲を防止する
；この場合には免疫捕獲はパッド１４に結合されている
抗体によってだけ生じる。捕獲パッド１４はヘルペス　
シンプレックス　ウィルスと会合した抗原を捕獲するに
はウサギ抗−１」Ｓ■ポリク［１ナル抗体のような付加
抗体を担持している。

陰性結果表示要素１４は下記のような免疫診断法で使用
する。表示要素１６は捕獲パッド１４の材料と同様の材
料よりなるが、捕獲抗原、顕在性抗体およびその他の物
質に対する表示要素１６の能力を陰性にＪ゛るために、
遮断溶液で予備処１！Ｊ’！　？＋’る。表示要素１６
４．Ｌ矢印範囲２２で０．５ｃｍの長さを有づる。

プローブ１０ａは尿道またはの腔のような小さい身体開
口部中に挿入すると好ましい。ハンドル１２ａは一端に
環を右し、および捕獲バッド１４ａおよび陰性結果表示
要素ｉ　５　ａを他の−・喘に有するねじれたワイｔ７
−である。ハンドル１２ａは範囲２４に沿って１０〜１
１ｃｒＲＴ：あり、他方捕１〜バッド１４ａおＪ：び表
示ｆｆ１１６ａはそれぞれ３ｃｍの長さを有する。パッ
ド１４ａおよび表示要素１６ａについて、これらがニト
ロセルロースよりなる場合には、０．１〜０．５Ｍの厚
さ力１′［容できる。

プローブ１ｏおよび１０ａを使用する諸工程は第３図に
例示されている。工程２６はニトロセルロースのような
一般的捕獲メジウムによる非特異的捕獲を示している。

工程２６に要する時間は捕獲メジヴムを抗原と直接的に
接触させる場合には、即座の捕獲から、たとえば洗浄工
程にお【）る１０〜１５分の浸漬までの範囲である。こ
のプローブを次いで工程２８のｍ１ｇ１溶液に、結合性
部位の結合能力が充分に飽和されるまで、代表的には５
へ・１０分間移す、遮断溶液は、好ましくはゼラチン１
〜５％または生血清アルブミン１〜５％およびエタノー
ルアミン０．０５〜０．１モルを含有する０、０５Ｍト
リス−ＨＣｊ！　（Ｆｌｌ＋８．０）のような７．０〜
９．０のｐＨを有する緩衝液よりなる。

未使用結合性部位の遮断は工程３２における抗体溶液中
の顕在性抗体が捕獲された目標抗原にだけ結合すること
を１イ「実にづる。プローブは次いで遮断溶液から取り
出し、所望によりＶずいて過剰の遮断溶液を除去する。

一付加抗体のような捕獲メジウムの結合性部位が目標抗
原に対して特異性である場合に、遮断工程は不必要であ
る。工程３０の特異的捕獲はプローブを高濃度抗原に直
接接触させで即座的に実施ひきる。別法として、溶液中
での浸漬は（ＮＩ加抵抗体結合能力を充分に飽和するた
めに１０〜１５分までを要することがある。

特異的および非特異的捕獲の両方において、３種の仕上
げた工程は同一である。プローブを浸漬づる（工程３２
）顕在付抗体溶液は検知しようとする感染体に応じて変
える。同様に、■稈３２．３４および３６に要ザる時間
は検知しようとする各感染体について実験的に決定され
る。顕在性抗体はグル」−ス　オｔニシダーピ、ホース
ラディツシュ　ペルオキシダーゼまたはベーターラクタ
マーピのような酵素゛Ｃ−標識をｆＪける。抗体は０．
０５Ｍ１−リス−ＨＣ１（ｐＨ７，４）のような化合物
によって７．０〜９．０のｐＨに緩衝されている稀釈液
中に受容されうる濃度に稀釈する。この稀釈液はまたゼ
ラチン０．５〜１．０％または牛血清アルブミン０．５
〜１．０％を含有する。

ヘルペス　シンプレックス　ウィルスを検知するには、
グルコース　オキシダーゼ′ｒ″標識付けしたウサギ抗
−Ｈ８Ｖポリクロナル抗体のような抗体を使用できる。

この抗体の場合に、プローブは抗体溶液中に２〜１０分
間浸漬すると望ましい。

捕獲された抗原の結合能力が充分に飽和された後に、プ
ローブを水道水で４５秒〜１分間洗浄して未結合顕在性
抗体を除去する（工程３４）。プローブを次いで顕在性
抗体に結合している酵素に対する基質を含有する基質溶
液中に浸す（工程３６）。パッドは基質の色の変化のよ
うな信号を生じさせるに充分な時間、基質中に浸す。結
合酵素がホースラディツシュ　ペルオキシダーゼである
場合に、トリス−ＨＣ１緩衝液中の４−クロルナフトー
ル０．０５〜０．１０％および過酸化水素ｏ、ｏｏｏｉ
〜０．０００５％の溶液が使用できる。グルコース　第
１−シダーピの場合には、グルコース０．５０〜０．７
５％、フェナジン　メ１〜スルフＩ−ｈｏ、１５〜０．
２５％および二１−口ブルー　テトラゾリウム６．５〜
８．０％の溶液が好ましい。これらのＩＪ質は１〜１０
分で、装ｚ１を使用することなく見ることができる不溶
性の明るく呈色した生成物を捕獲メジウム十に生成する
。

これらの酵素と基質との２絹の組合ぜの場合の陽性試験
では、捕獲メジウムが白色から明るい青色にまたは帯紫
色にそれぞれ変色する。これらの試験に第３ける陰竹結
果表示要木【よ白色Ｃあって試験全体をとおして白色の
まま残る。

従って、本発明による免疫診断用プローブ系は３０分よ
り少ない時間で実施できる。従来技術系は少量の抗原を
捕獲するだ１ノであり、従つＣそれらの捕獲機構の過飽
和を回避するために少量の剣１在竹抗体を要求する。し
かしながら、少量の抗体を使用する代償として、艮いイ
ンキュベーション時間が従来技術系で要求される。これ
にり・１して、本発明による免疫診断プローブ系では非
常に短いインキュベーション時間が必要であるだけであ
る。

さらにまた、必要な総工稈数が少なくなる。

第３図の工程２８．３２．３４および３６は第４Ａ図の
組立容器３８で都合よ〈実施できる。組立容器３８は土
台４０で支持されている。容器３８は本発明によるプロ
ーブを四部４２に導くための面取りした縁部４４を有す
る凹部４２のような凹部４１を有する。特異的捕獲プロ
ーブを処理する場合には、組立容器は２個一組の多数の
四部を有し、−組の凹部は処理しようとする各プローブ
のためのものである。その１個の四部は顕在性抗体溶液
を含有し、他の１個は基質溶液を含有する。

非特異的捕獲の場合には、組立容器３８は３個一組の多
数の凹部を有する。この追加の四部は遮断溶液を含有す
る。これらの四部に第４８図のピン４６のような滴下ビ
ンから試薬を満たす。

好ましくは、組立容器３８は試薬結果がその側面を通し
て見ることができるように透明であり、ボリスヂレンよ
りなる。第１図および第２図のプローブを受け入れるた
めには、各四部４２は矢印範［１１４８で７＃の長さと
矢印範囲５ｏで５＃の［１］を有する。組立容器３８は
範囲５２で５　ｃｍの高さと範囲５４で１　ｃｒｍの［
１］を右づる。土台４０は範囲５８で１５Ｍの巾をイｉ
する１個または２個以上の凹所を有する。組立容器３８
はプローブの処理後に容易に廃棄でき、組立容器を取り
替えることができるように土台４０から容易に取りｌｉ
ｎ？ｌことができる。

本発明による免疫診断用プローブを感染体の一種の関連
抗原に対する一つの捕獲メジウムを用いる場合について
前記したけれども、これは本発明を制限するものではな
い。非特異的捕獲および異なる捕獲抗体を含有する１つ
または２つ以上の特巽的捕獲パッドを使用することによ
り、広範囲の感染体が検知できる。これらの感染体には
ウィルス、細菌、糸状菌およびカビが含まれる。第５図
のブロープロ０は呼吸器感染体の存ｔｊを検知するため
の特異的捕獲パッド６６．６８．７ｏｚ３よび７２およ
び陰性結果表示２２素６４を担持するバドル６２を含ん
でいる。各パッドは選ばれた感染体に対して特異性の捕
獲抗体を含有する。たとえば、パッド６６はウナギ抗−
トＩＳＶポリクロナル抗体を含有し、パッド６８はウサ
ギ抗インフルエンザポリクロナル抗体を含有し、バット
７ｏはウサギ抗バラインフルエンザ　ポリクロナル抗体
を含有し、そしてパッド７２はウサギ抗アデノウィルス
ポリクロナル抗体を含有し、Ｒ８Ｖ、インフルエンザ、
バラインフルエンヂおよびアデノウィルス感染体をそれ
ぞれ検知する。

プローブ６０を使用する場合に、顕在性抗体溶液は感染
体のイれぞれに対するそれぞれ−・秤の酵素標識を有す
る抗体を含有する酵素ＩｆＡ識した抗体を含有する。顕
在性抗体溶液は各目標抗原に対して特賃性のマウス　モ
ノクロナル抗体またはつ勺ギ、ヤギあるいはヒツジ　ポ
リクロナル抗体のような酵素結合した抗体の混合物を含
有づる。特定のパッドの色の変化のような陽性試験結末
は感染体の存在を示す。従って、プローブ６０は−・つ
のプローブを使用する一回の処置で多くの感染体の存在
を同定するように設計できる。

本発明による免疫診断用プローブは一端に１つまたは２
つ以上の捕獲メジウムと連絡している通路を有するハン
ドルを有することができる。このハンドルはハンドル内
の通路を通して抗原含有液体を採取し、それによってこ
の液体が１個または２個以上の捕獲パッドを通過できる
吸引装置を具備することができる。このような設削は抗
原の１ｆｉが低量である溶液に対して望ましいｂのであ
る。

第６Δ図および第６Ｂ図のプローブ６０ａのハンドル６
２８は中空であり、ハンドル６２ａの孔７４のような開
口部上に捕５ｇｔバッド６６ａ、６８ａ、７Ｑａおよび
７２ａをＡ　する。これら孔のうらの３個は断面で示さ
れている。表示要素６４ａはこのような間口部の上にあ
る必要はない。捕獲パッドがニトロセルロースよりなる
場合に、パッドの厚さは０．１〜０．５ｍｍであること
ができる。

ハンドル６２ａの開口部を通しての液体の吸引はポンプ
７６から吸引ホース７８を経て吸引ＦＸ東フラスコ７９
までの吸引を生じさける。ホース７８は弾性スリーブ８
０によりハンドル６２ａに結合されている。別様には、
ハンドル６２ａの外イ￥をホース７８の内径と一致させ
る。ポンプ７６により生じる吸引力は電位差５１８２に
より調節して、捕獲パッド６６ａ、６８ａ、７０ａおよ
び７２ａを通過する液体の流速を通溝なものにする。

捕獲パッドの結合性部位が適量の抗原を捕獲するに充分
な機会をイ・１与するように杼験的に決定された時間の
吸引の後に、ハンドル６２ａをホース７８からはずす。

プローブ６０ａは次いで前記の工程に従い試験する。

第７図の１０−ブ８４は身体開口部中に挿入できるよう
に円柱形であるが、これはまた患者から得た流体試料に
４浸すためにも適している。ハンドル８６は通路８７を
有し、および矢印範囲９０により示されている方向でハ
ンドル８６中に流体を導入するための３〜６＃ＩＩＩ＋
の開口部８８を有する。

これにより流体はハンドル８６の先端を取り巻いている
捕獲パッドのマトリックス９４内の免疫捕獲試薬９２を
通過して流れる。試薬９２は糖タンパク質を捕獲するた
めのレクチンのようなりガントまたは特異性抗原を捕獲
するための抗体であることができる。別様では、試薬９
２はパッド９４の外部表面に固定されている。

ｍ一種以上の抗原の特異的捕獲の場合に、ブ１コー７８
４はハンドル８６を取り巻いているパッド９６（影で示
されている）のような追加の捕獲パッドを包含する。パ
ッド９４および９６を通る流体の匹敵できる流速を１１
１６ために、ハンドル８６は影で示されているＪ：うに
、ＩＬ９８の環１００を有する。

本発明の特別の態様をいくつかの図面で示し、他の態様
は示されていないが、これは便宜上のためだ【ノであっ
て、本発明に従い、各態様はその他の態様のいづれかま
たは全部と組合μることかできるものである。

その他の態様は当業者にとって明白であり、特許請求の
範囲内にある。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図および第５図は本発明による免疫診断用
プローブを示り゛軸測役栄法図であり；第３図は操作工
程を示す一覧図であり；第４Ａ図は第３図の工程で使用
する組立容器および試薬を示す軸測投象法図であり：第
４８図は試薬用ビンを示す軸測投象法図であり：第６Ａ
図は本発明による中空ハンドル型プローブ、吸引ホース
およびポンプを示寸図解式図であり：第６Ｂ図は第６Ａ
図のプローブの拡大部分的断面図であり：ぞして第７図
は本発明による中空ハンドル型プローブの横断面を示グ
゛。 １０および１０ａ・・・プローブ；１ ２および１２ｒ］・・・ハンドル；１ ４および１４ａ・・・捕獲パッド：１ ６および１６ａ・・・陰性結宋表示装索；３８・・・組
立容器：　　　　４ｏ・・・土台：４１および４２・・
・凹部；　４４・・・而取り縁部：４６・・・滴下ピン
：　　　　５６・・・凹所；６０および６０ａ・・・プ
ローブ；６ ２および６２ａ・・・ハンドル：６ ４および６４ａ・・・陰性結果人示要糸；６６．６６ａ
、６８．６８ａ、７ｏ、７０ａ、７２および７２ａ・・
・捕獲パッド； ７４・・・孔；　　　　　　　７６・・・ポンプニア８
・・・ボース；　　　　　８０・・・弾性スリーブ：８
４・・・プローブ；　　　　８６・・・ハンドル：８７
・・・通路；　　　　　　８８・・・開口部：９２・・
・試薬： ９４および９６・・・捕獲パッド： ９８・・・孔：　　　　　　　１００・・・環。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）関連抗原を有する感染体の存在を検知する方法で
   あつて、 プローブにより担持されている捕獲メジウムを関連抗原
   と接触させ； 捕獲メジウム内の結合性部位に関連抗原を捕獲し； 捕獲メジウムを、関連抗原に対して特異性の酵素結合し
   た顕在性抗体を含有する顕在化溶液中に浸し； 捕獲メジウムを顕在化溶液から取り出し； 捕獲メジウムから未結合顕在性抗体を洗出し；次いで 捕獲メジウムを、顕在性抗体に結合している酵素に対し
   て特異性の基質を含有する溶液中に浸す；ことを特徴と
   する前記検知方法。 （２）関連抗原を患者により保有されているままで接触
   させる特許請求の範囲第１項の方法。 （３）関連抗原を患者の身体膜に存在しているままで接
   触させる特許請求の範囲第２項の方法。 （４）関連抗原を患者の身体開口部内にある間に接触さ
   せる特許請求の範囲第２項の方法。 （５）捕獲メジウムの結合性部位が関連抗原に対して特
   異性である特許請求の範囲第１項の方法。 （６）捕獲メジウムのに結合性部位が関連抗原に対して
   特異性の付加抗体を包含する特許請求の範囲第５項の方
   法。 （７）付加抗体がヘルペス　シンプレックス　ウィルス
   の関連抗原の捕獲について特異性である特許請求の範囲
   第６項の方法。 （８）抗体がウサギ抗−ＨＳＶポリクロナル抗体を含む
   特許請求の範囲第７項の方法。 （９）捕獲メジウムの結合性部位が関連抗原に対して特
   異性のリガンドを含む特許請求の範囲第５項の方法。 （１０）特異性リガンドが捕獲する糖タンパク質に対す
   るレクチンを含む特許請求の範囲第９項の方法。 （１１）捕獲メジウムを、関連抗原と接触させた後に、
   捕獲メジウムの未使用結合性部位を遮断する遮断溶液中
   に浸し、次いで未使用結合性部位が飽和された後に、捕
   獲メジウムを取り出す工程をさらに含む特許請求の範囲
   第１項の方法。 （１２）捕獲メジウムが静電荷を示す特許請求の範囲第
   １１項の方法。 （１３）捕獲メジウムがニトロセルロースを含有する特
   許請求の範囲第１２項の方法。 （１４）捕獲メジウムを遮断溶液中に５〜１０分間入れ
   る特許請求の範囲第１１項の方法。 （１５）捕獲メジウムを顕在性抗体溶液中に５〜１０分
   間入れる特許請求の範囲第１項の方法。 （１６）捕獲メジウムを未使用結合性部位が遮断溶液中
   で飽和された後であつて、捕獲メジウムを顕在性溶液中
   に入れる前に、水中で洗浄する工程をさらに含む特許請
   求の範囲第１項の方法。 （１７）捕獲メジウムを４５秒〜１分間洗浄する特許請
   求の範囲第１６項の方法。 （１８）捕獲メジウムを基質溶液中に１〜１０分間浸す
   特許請求の範囲第１項の方法。 （１９）捕獲メジウムを基質の変色に充分な時間が経過
   した後に視覚により検査する工程をさらに含む特許請求
   の範囲第１項の方法。 （２０）プローブが基質の変色に充分な時間が経過した
   後に捕獲メジウムと比較するための陰性結果表示要素を
   含んでいる特許請求の範囲第１９項の方法。 （２１）遮断溶液が７．０〜９．０のｐＨを保持するよ
   うに緩衝されている特許請求の範囲第１１項の方法。 （２２）遮断溶液がゼラチン１〜５％を含有する特許請
   求の範囲第２１項の方法。 （２３）遮断溶液が牛血清アルブミン１〜５％およびエ
   タノールアミン０．０５〜０．１モルを含有する特許請
   求の範囲第１項の方法。 （２４）感染体がヘルペス　シンプレックス　ウィルス
   であり、そして顕在化溶液がグルコース　オキシダーゼ
   で標識されたウサギ抗−ＨＳＶポリクロナル抗体を含有
   する特許請求の範囲第１項の方法。 （２５）顕在性抗体溶液がゼラチン０．５〜１．０％ま
   たは牛血清アルブミン０．５〜１．０％を含有する特許
   請求の範囲第１項の方法。 （２６）顕在性抗体溶液が７．０〜９．０のｐＨを保持
   するように緩衝されている特許請求の範囲第２５項の方
   法。 （２７）基質が不溶性生成物を生成する特許請求の範囲
   第１９項の方法。 （２８）酵素がホースラディッシュ　ペルオキシダーゼ
   である特許請求の範囲第２７項の方法。 （２９）基質がトリス−ＨＣｌ緩衝液中の４−クロルナ
   フトール０．０５〜０．１０％および過酸化水素０．０
   ００１〜０．０００５％である特許請求の範囲第２８項
   の方法。 （３０）酵素がグルコース　オキシダーゼである特許請
   求の範囲第２７項の方法。 （３１）基質がグルコース０．５０〜０．７５％、フェ
   ナジン　メトスルフェート０．１５〜 ０．２５％およびニトロブル−テトラゾリウム６．５〜
   ８．０％を含有する特許請求の範囲第３０項の方法。 （３２）プローブが捕獲メジウムと連絡する通路を有し
   、そして接触がこの通路を経て関連抗原を吸引して抗原
   を捕獲メジウムの結合性部位と接触させることよりなる
   特許請求の範囲第１項の方法。 （３３）関連抗原を有する感染体の存在を検知する方法
   であつて、 プローブに担持されている捕獲メジウムを関連抗原と接
   触させ； 関連抗原を捕獲メジウム内の結合性部位に捕獲し； 捕獲メジウムを、関連抗原に対して特異性の酵素結合し
   た顕在性抗体を含有する顕在化溶液中に入れ； 捕獲メジウムを顕在化溶液から取り出し； 未結合顕在性抗体を捕獲メジウムから洗出し；次いで 捕獲メジウムを、顕在性抗体に結合している酵素に対し
   て特異性の基質を含有する溶液中に入れる； ことを特徴とする前記検知方法。 （３４）捕獲メジウムを、関連抗原と接触させた後に、
   捕獲メジウムの未使用結合性部位を遮断する遮断溶液中
   に入れ、次いで捕獲メジウムを未使用結合性部位が飽和
   された後に取り出す工程をさらに含む特許請求の範囲第
   ３３項の方法。 （３５）関連抗原を有する感染体の存在を検知する方法
   であつて、 プローブに担持されている捕獲メジウムを関連抗原と接
   触させ； 関連抗原を捕獲メジウム内の結合性部位に捕獲し； 捕獲メジウムを、関連抗原に対して特異性の酵素結合し
   た顕在性抗体を含有する顕在化溶液中に浸し； 捕獲メジウムを顕在化溶液から取り出し； 未結合顕在抗体を捕獲メジウムから洗出し；次いで 捕獲メジウムを、顕在性抗体に結合している酵素に対し
   て特異性の基質を含有する溶液中に浸す；ことより基本
   的になる前記検知方法。 （３６）捕獲メジウムを、捕獲メジウムの未使用結合性
   部位を遮断する遮断溶液中に浸し、次いで未使用結合性
   部位が飽和された後に捕獲メジウムを取り出す工程をさ
   らに含む特許請求の範囲第３５項の方法。 （３７）関連抗原を有する感染体の存在を検知するため
   の免疫診断用プローブ系であつて、プローブが： 関連抗原を捕獲するための結合性部位を有する捕獲メジ
   ウム；および この捕獲メジウムをその第一の末端に近接して担持する
   ための細長形支持体； を含むことを特徴とする前記免疫診断用プローブ系。 （３８）第一の末端が身体開口部中に挿入できる形状で
   ある特許請求の範囲第３７項の免疫診断用プローブ系。 （３９）第一の末端が円柱形である特許請求の範囲第３
   ７項の免疫診断用プローブ系。 （４０）捕獲メジウムが支持体の第一の末端に配置され
   ている特許請求の範囲第３７項の免疫診断用プローブ系
   。 （４１）捕獲メジウムが静電荷を示す特許請求の範囲第
   ３７項の免疫診断用プローブ系。 （４２）捕獲メジウムがニトロセルロースを含有する特
   許請求の範囲第４１項の免疫診断用プローブ系。 （４３）結合性部位が関連抗原に対して特異性である特
   許請求の範囲第３７項の免疫診断用プローブ系。 （４４）結合性部位が抗原に対して特異性の付加抗体を
   含む特許請求の範囲第４３項の免疫診断用プローブ系。 （４５）付加抗体がヘルペス　シンプレックス　ウィル
   スの関連抗原の捕獲に対して特異性である特許請求の範
   囲第４４項の免疫診断用プローブ系。 （４６）付加抗体がウサギ抗−ＨＳＶポリクロナル抗体
   である特許請求の範囲第４５項の免疫診断用プローブ系
   。 （４７）結合性部位が抗原に対して特異性のリガンドを
   含む特許請求の範囲第４３項の免疫診断用プローブ系。 （４８）特異性リガンドが糖タンパク質を捕獲するため
   のレクチンを含む特許請求の範囲第４７項の免疫診断用
   プローブ系。 （４９）細長形支持体が捕獲メジウムと連絡している通
   路を含んでいる特許請求の範囲第３７項の免疫診断用プ
   ローブ系。 （５０）通路に接続できる、関連抗原を結合性部位と接
   触させるための吸引手段をさらに含んでいる特許請求の
   範囲第４９項の免疫診断用プローブ系。 （５１）関連抗原を有する感染体の存在を検知するため
   の免疫診断用プローブ系であつて、プローブが： 関連抗原を捕獲するための結合性部位を有する捕獲メジ
   ウム； 陰性結果表示要素；および その第一の末端に近接して捕獲メジウムおよび陰性結果
   表示要素を担持している細長形支持体；を含むことを特
   徴とする前記免疫診断用プローブ系。 （５２）関連抗原を有する感染体の存在を検知するため
   の免疫診断用プローブ系であつて、プローブが： 関連抗原を捕獲するための結合性部位を有する捕獲メジ
   ウム； 陰性結果表示要素； 捕獲メジウムおよび陰性結果表示要素をその第一の末端
   に近接してプローブとして担持するための細長形支持体
   ；および それぞれ試薬を含有させるためのおよびプローブを受け
   入れるための少なくとも２個の凹部を有する組立容器； を含むことを特徴とする前記免疫診断用プローブ系。 （５３）各凹部がその開口部の周囲に面取りした縁部を
   有する特許請求の範囲第５２項の免疫診断用プローブ系
   。 （５４）少なくとも１個の組立容器を取り離し可能で保
   持する土台をさらに含んでいる特許請求の範囲第５２項
   の免疫診断用プローブ系。 （５５）捕獲メジウムの未使用結合性部位を遮断するた
   めの遮断溶液をさらに含む特許請求の範囲第５２項の免
   疫診断用プローブ系。 （５６）関連抗原に対して特異性の酵素結合した露顕性
   抗体を含有する顕在化溶液をさらに含む特許請求の範囲
   第５２項の免疫診断用プローブ系。 （５７）顕在性抗体に結合している酵素に対して特異性
   の基質を含有する溶液をさらに含む特許請求の範囲第５
   ６項の免疫診断用プローブ系。 （５８）組立容器が透明である特許請求の範囲第５２項
   の免疫診断用プローブ系。 （５９）それぞれの関連抗原を有する多くの感染体の存
   在を検知するための免疫診断用プローブ系であつて、 各捕獲メジウムが関連抗原を捕獲するための結合性部位
   を有する複数個の捕獲メジウム； 陰性結果表示要素；および その第一の末端に近接して捕獲メジウムおよび陰性結果
   表示要素を担持するための細長形支持体；を含むことを
   特徴とする免疫診断用プローブ系。 （６０）各捕獲メジウムの結合性部位が異なる抗原に対
   して特異性である特許請求の範囲第５９項の免疫診断用
   プローブ系。