JPS6266158A - 生理活性物質を固定化した担体およびその調製法 - Google Patents
生理活性物質を固定化した担体およびその調製法Info
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- JPS6266158A JPS6266158A JP60203192A JP20319285A JPS6266158A JP S6266158 A JPS6266158 A JP S6266158A JP 60203192 A JP60203192 A JP 60203192A JP 20319285 A JP20319285 A JP 20319285A JP S6266158 A JPS6266158 A JP S6266158A
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- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6866—Interferon
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は、表面に生理活性物質を固定化した担体に関
する。特には、生理活性物質ポＵＩ、ポリＣが表面に固
定化されたカルボキシル基含有ポリマー担体好ましくは
活性型ポリメタクリル酸メチル担体に関する。またこの
発明は、担体表面にポＩＪＩ ：Ｃを固定化する方法お
よび診断の目的でそのような担体表面を使用する方法に
関する。
する。特には、生理活性物質ポＵＩ、ポリＣが表面に固
定化されたカルボキシル基含有ポリマー担体好ましくは
活性型ポリメタクリル酸メチル担体に関する。またこの
発明は、担体表面にポＩＪＩ ：Ｃを固定化する方法お
よび診断の目的でそのような担体表面を使用する方法に
関する。
ポリＩ、ポリＣ（ポリエ二〇と略記）は、ポリリ？イノ
シン酸（ポリエ）鎖およびポリリボシチジル酸（ポリＣ
）鎖から成る合成ポリヌクレオチドである。この２本の
鎖は、鎖中のプリンおよびピリミジン塩基間の水素結合
によって結合している。その基本構造は、ＤＮＡのよう
な天然のポリヌクレオチドのそれに似ている。
シン酸（ポリエ）鎖およびポリリボシチジル酸（ポリＣ
）鎖から成る合成ポリヌクレオチドである。この２本の
鎖は、鎖中のプリンおよびピリミジン塩基間の水素結合
によって結合している。その基本構造は、ＤＮＡのよう
な天然のポリヌクレオチドのそれに似ている。
生体外実験で、ポＩＪＩ：Ｃには強いインターフェロン
誘導活性があることがわかっている。
誘導活性があることがわかっている。
これは、インターフェロンがある種の疾病例えばある種
の癌に対する生体防御において重要な役割を担っている
と目されるため臨床上の観点から非常に興味のある観察
事実である。
の癌に対する生体防御において重要な役割を担っている
と目されるため臨床上の観点から非常に興味のある観察
事実である。
しかし、臨床用にＩす■：Ｃを用いることは、特に２つ
の理由から制限されてきた。第１には、ポリＩ：Ｃは静
注されると、血中のヌクレアーゼにより分解されてしま
う。更には、＆ＩＪＩ：Ｃは肝臓や腎臓に有害な副作用
を膏すことが示されている。
の理由から制限されてきた。第１には、ポリＩ：Ｃは静
注されると、血中のヌクレアーゼにより分解されてしま
う。更には、＆ＩＪＩ：Ｃは肝臓や腎臓に有害な副作用
を膏すことが示されている。
この発明は、固定したポリエ：Ｃを診断に利用する方法
にも関する。診断に応用する適当な例として、自己免疫
疾患の患者、抑癌剤治療をＡＩＤＳの試験等が挙げられ
る。
にも関する。診断に応用する適当な例として、自己免疫
疾患の患者、抑癌剤治療をＡＩＤＳの試験等が挙げられ
る。
感染や発癌においては、免疫系細胞の分化の段階および
その分裂能力並びに活性化されて防御因子を放出する能
力を診断することは非常に重要なことである。まず、イ
ンターフェロン（ＩＦＮ−α、−βおよび−γ）を効果
的に産生する末剤血中の単核性細胞が注目される。イン
ターフェロンの一般的な機能は、増殖および分化を促進
し、免疫担当細胞を刺激して、それに防御力を付与した
シ、防御因子を産生させたシすることである。
その分裂能力並びに活性化されて防御因子を放出する能
力を診断することは非常に重要なことである。まず、イ
ンターフェロン（ＩＦＮ−α、−βおよび−γ）を効果
的に産生する末剤血中の単核性細胞が注目される。イン
ターフェロンの一般的な機能は、増殖および分化を促進
し、免疫担当細胞を刺激して、それに防御力を付与した
シ、防御因子を産生させたシすることである。
この発明によれば、免疫系の段階および分化細胞の全能
力を診断することができる。この診断は、細胞試料をあ
る時間ポリＩ ：Ｃ表面に接触させ、この試料がある種
の腫瘍細胞を死滅させる能力を測定することにより可能
である。
力を診断することができる。この診断は、細胞試料をあ
る時間ポリＩ ：Ｃ表面に接触させ、この試料がある種
の腫瘍細胞を死滅させる能力を測定することにより可能
である。
この診断試験に反応し得る最も重要な単核性細胞は次の
ようなものが挙げられる。
ようなものが挙げられる。
０１ｐ−１７７１球。この細胞は、細胞性免疫のエフエ
フター細胞であシ、細胞毒活性を有する。この細胞は、
他の白血球を刺激して成熟させ、ＩＦＮ−αおよび一β
を産生させる。
フター細胞であシ、細胞毒活性を有する。この細胞は、
他の白血球を刺激して成熟させ、ＩＦＮ−αおよび一β
を産生させる。
０ ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）。この細胞は、
大きな顆粒のあるリンパ球であシ、特に腫瘍細胞死滅能
を有する。
大きな顆粒のあるリンパ球であシ、特に腫瘍細胞死滅能
を有する。
ｏ Ｂ、、−リンパ球。この細胞は、抗体産生細胞の
前駆体である。ＩＮＦ−αを産生ずるＢ細胞もある。
前駆体である。ＩＮＦ−αを産生ずるＢ細胞もある。
０ マクロファージ。この細胞は幅広い作用を有する免
疫細胞である。これは、貧食作用を発揮し、数多くの免
疫因子、補体、ＩＦＮ −ＣＬおよび−βを産生する。
疫細胞である。これは、貧食作用を発揮し、数多くの免
疫因子、補体、ＩＦＮ −ＣＬおよび−βを産生する。
更に、これは、活性化された段階で、腫瘍細胞を殺し、
抗原を貧食する。この過程は、免疫系にとって大切なも
のである。
抗原を貧食する。この過程は、免疫系にとって大切なも
のである。
インターフェロンは、免疫機能が正常であれば、これら
の細胞を刺激する。刺激の機構は複雑であるが、刺激を
受けた場合血中の単核性細胞自身が、インターフェロン
を産生ずるということが大切な点である。この発明は、
いわゆる正の自己調節を利用したものであシ、例として
次の試料を調べることができる。
の細胞を刺激する。刺激の機構は複雑であるが、刺激を
受けた場合血中の単核性細胞自身が、インターフェロン
を産生ずるということが大切な点である。この発明は、
いわゆる正の自己調節を利用したものであシ、例として
次の試料を調べることができる。
０ 既知の手法で得られた単核細胞の試料０ 白血球の
全分画 ０ ペノ母リン添加血液 細胞を適当な溶液に懸濁して、固定化したポリＩ：Ｃの
表面に接触させる。活性化すなわちポＩＪ Ｉ ： Ｃ
との接触は、通常数時間行なう。その際、適当な細胞系
、例えばＭｏ１ｔ−４，に−５６２およびメラノーマＲ
ＰＭＩ７９３１を利用して、活性化の程度および細胞毒
性効果を測定する。尚、これらの細胞系は、既知の手法
によって定量測定に適したＮＫ感受性標的細胞で゛ある
。
全分画 ０ ペノ母リン添加血液 細胞を適当な溶液に懸濁して、固定化したポリＩ：Ｃの
表面に接触させる。活性化すなわちポＩＪ Ｉ ： Ｃ
との接触は、通常数時間行なう。その際、適当な細胞系
、例えばＭｏ１ｔ−４，に−５６２およびメラノーマＲ
ＰＭＩ７９３１を利用して、活性化の程度および細胞毒
性効果を測定する。尚、これらの細胞系は、既知の手法
によって定量測定に適したＮＫ感受性標的細胞で゛ある
。
この発明の基本原理は、カルボキシル基含有する担体表
面にポＩＪ Ｉ ： Ｃを共有結合により固定化すると
いうことである。担体表面は、カルボキシル基を有する
ポリマーであってもよいし、または活性型プリメタクリ
ル酸メチルのような活性化によってカルボキシル基を生
じるようなポリマーであってもよい。他に適当なポリマ
ー担体を挙げれば、モノマーとして例えばアクリル酸ま
たはメタクリル酸を含むアクリレートプラスチック、不
飽和−リエステルゾラスチ、りおよびポリアミドプラス
チックがある。
面にポＩＪ Ｉ ： Ｃを共有結合により固定化すると
いうことである。担体表面は、カルボキシル基を有する
ポリマーであってもよいし、または活性型プリメタクリ
ル酸メチルのような活性化によってカルボキシル基を生
じるようなポリマーであってもよい。他に適当なポリマ
ー担体を挙げれば、モノマーとして例えばアクリル酸ま
たはメタクリル酸を含むアクリレートプラスチック、不
飽和−リエステルゾラスチ、りおよびポリアミドプラス
チックがある。
担体の最も簡単な形状は、小さな板状または棒状であυ
、その１つ以上の面にポリＩ：Ｃが固定化されている。
、その１つ以上の面にポリＩ：Ｃが固定化されている。
上記の如く、担体の表面としては、活性型ポリメタクリ
ル酸メチル（ＰＭＭＡ）が望ましい。この物質は、薄い
板が受ける化学的および機械的ストレスに耐えるために
、実用的観点から好ましい。更に、疎水性のプレキシガ
ラスの表面は、血液とよくなじみ、滅菌できるという点
で都合がいい。
ル酸メチル（ＰＭＭＡ）が望ましい。この物質は、薄い
板が受ける化学的および機械的ストレスに耐えるために
、実用的観点から好ましい。更に、疎水性のプレキシガ
ラスの表面は、血液とよくなじみ、滅菌できるという点
で都合がいい。
しかしながら、ＰＭＭＡ表面は化学的に不活性であるの
で、共有結合を必要とする場合の担体材料として使用す
るのに無理がある。（化学反応が生じにくいということ
は、生体適合性がよい１つの理由である。）しかし、以
下のようなことが分かっている。アルカリ溶液処理によ
り表面が活性化され、表面のメチルエステル基の一部が
加水分解され、カルボキシル基が生じる。
で、共有結合を必要とする場合の担体材料として使用す
るのに無理がある。（化学反応が生じにくいということ
は、生体適合性がよい１つの理由である。）しかし、以
下のようなことが分かっている。アルカリ溶液処理によ
り表面が活性化され、表面のメチルエステル基の一部が
加水分解され、カルボキシル基が生じる。
、理論的には、それが生理活性物質を固定化する際の結
合基となり得る。更に具体的に言うと、表面は、水酸化
アルカリ金属溶液、好ましくは２ないし１５Ｍの水酸化
ナトリウムまたは水酸化カリウム溶液で処理することに
より活性化される。゛活性化処理の温度は、重要ではな
いが、約１０ないし１００℃の範囲であることが好まし
いＯ 生理的活性物質をカルボキシル基に固定化することは、
以前から知られておシ、酵素や他の蛋白に応用されてい
る。ところが、ポリエ：Ｃのような二重鎖ポリヌクレオ
チドを共有結合により固定化することは難かしく、今ま
で文献に記載された例はない。生理的活性物質を共有結
合により固定化するには、担体物質の官能基に直接また
は架橋を経て結合し得る何らかの官能基が必要である。
合基となり得る。更に具体的に言うと、表面は、水酸化
アルカリ金属溶液、好ましくは２ないし１５Ｍの水酸化
ナトリウムまたは水酸化カリウム溶液で処理することに
より活性化される。゛活性化処理の温度は、重要ではな
いが、約１０ないし１００℃の範囲であることが好まし
いＯ 生理的活性物質をカルボキシル基に固定化することは、
以前から知られておシ、酵素や他の蛋白に応用されてい
る。ところが、ポリエ：Ｃのような二重鎖ポリヌクレオ
チドを共有結合により固定化することは難かしく、今ま
で文献に記載された例はない。生理的活性物質を共有結
合により固定化するには、担体物質の官能基に直接また
は架橋を経て結合し得る何らかの官能基が必要である。
上記の如く、ポ１．ＩＩ ：Ｃには、プリンおよびピリ
ミジン塩基にアミン基が付いておシ、それ自体担体ポリ
マー表面のカルボキシル基と反応し得るが、実際にはそ
のアミン基は鏡開における水素結合に使われているため
全く不活性である。
ミジン塩基にアミン基が付いておシ、それ自体担体ポリ
マー表面のカルボキシル基と反応し得るが、実際にはそ
のアミン基は鏡開における水素結合に使われているため
全く不活性である。
ポリＩ：Ｃを担体に共有結合させることを目的とした実
験をいくつか記載している文献がある。ここで使用され
たカップリング技術は従来からのものであり、それによ
ってポリヌクレオチドをその活性を保持したまま共有結
合させることは不可能である。この課題に関するごく最
近の要約記事ＣＰ、ピサ、メソド・イン・エンデイムオ
コジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｌｎ Ｅｎｉｙｍｏｌｏｇｙ
７８（１９８１）２３６）には次のような事が記載さ
れている。「固定化ポリエ：Ｃが使用された実験により
、担体に結合したポリエ：Ｃには抗ウィルス活性のある
ことが示された。しかし、すべての実験において、担体
からポ１７ Ｉ ： Ｃがはずれて培地中に放出された
ジ、細胞との会合が観察された。・・・固定化インデュ
ーサーの使用は、インデューサーが担体かちはずれるた
めに制限されている。」 ポリＩ ： Ｃの固定化に関するその他の文献としては
、ケミカル・アブストラクト８３（１９７５）： １９
１２４４ｄおよび８２（１９７５）：１３７５７８ｇを
参照のこと。固定化のための担体としてＰＭＭＡの使用
に関しては、ケミカル・アブストラクト８２（１９７５
）：１０３１１７ｒおよびアルツナィミッテル・フォル
シュング２１（１１）、 １９７１年、１６７１−５頁
に述べられている。
験をいくつか記載している文献がある。ここで使用され
たカップリング技術は従来からのものであり、それによ
ってポリヌクレオチドをその活性を保持したまま共有結
合させることは不可能である。この課題に関するごく最
近の要約記事ＣＰ、ピサ、メソド・イン・エンデイムオ
コジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｌｎ Ｅｎｉｙｍｏｌｏｇｙ
７８（１９８１）２３６）には次のような事が記載さ
れている。「固定化ポリエ：Ｃが使用された実験により
、担体に結合したポリエ：Ｃには抗ウィルス活性のある
ことが示された。しかし、すべての実験において、担体
からポ１７ Ｉ ： Ｃがはずれて培地中に放出された
ジ、細胞との会合が観察された。・・・固定化インデュ
ーサーの使用は、インデューサーが担体かちはずれるた
めに制限されている。」 ポリＩ ： Ｃの固定化に関するその他の文献としては
、ケミカル・アブストラクト８３（１９７５）： １９
１２４４ｄおよび８２（１９７５）：１３７５７８ｇを
参照のこと。固定化のための担体としてＰＭＭＡの使用
に関しては、ケミカル・アブストラクト８２（１９７５
）：１０３１１７ｒおよびアルツナィミッテル・フォル
シュング２１（１１）、 １９７１年、１６７１−５頁
に述べられている。
今や驚くべきことに、ポリエ：Ｃをカルぎキシル官能基
を含む担体表面に固定化し得ることがわかった。それは
、まずポリヌクレオチド溶液を加熱し、その溶液を冷や
しながら水溶性のカップラーと共に担体に加えればよい
。加熱時間および温度は重要ではないが、５分ないし４
時間で７０ないし１００℃が適当であろう。もちろん低
温であれば長時間かかるし、高温であれば短時間ですむ
。現在では９０〜１００℃の加熱で１〜２時間が好まし
い。カッグラ−をポリヌクレオチド溶液に加える前に、
その溶液をある程度冷却しておく必要がある。添加時の
温度は、５０〜１００℃好ましくは５０〜８０°が適当
である。溶液がまだ暖かいうちに、その溶液をカル？キ
シル基含有担体に加え、ポリヌクレオチドを担体表面に
固定化する。その際、カップラーをポリヌクレオチド溶
液に加えておくか、別個に担体溶液に加えておく必要が
ある。
を含む担体表面に固定化し得ることがわかった。それは
、まずポリヌクレオチド溶液を加熱し、その溶液を冷や
しながら水溶性のカップラーと共に担体に加えればよい
。加熱時間および温度は重要ではないが、５分ないし４
時間で７０ないし１００℃が適当であろう。もちろん低
温であれば長時間かかるし、高温であれば短時間ですむ
。現在では９０〜１００℃の加熱で１〜２時間が好まし
い。カッグラ−をポリヌクレオチド溶液に加える前に、
その溶液をある程度冷却しておく必要がある。添加時の
温度は、５０〜１００℃好ましくは５０〜８０°が適当
である。溶液がまだ暖かいうちに、その溶液をカル？キ
シル基含有担体に加え、ポリヌクレオチドを担体表面に
固定化する。その際、カップラーをポリヌクレオチド溶
液に加えておくか、別個に担体溶液に加えておく必要が
ある。
共有結合により活性物質を担体に結合し得る様々なカッ
プラーが当該分野で知られている。この発明で好ましい
カップラーとしては、水溶性のカルボジイミド、すなわ
ち１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカ
ルボジイミドｔた１ｉｌ−シクロヘキシル−３−（２−
モルホリノエチル）カルボジイミドが挙げられる。
プラーが当該分野で知られている。この発明で好ましい
カップラーとしては、水溶性のカルボジイミド、すなわ
ち１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカ
ルボジイミドｔた１ｉｌ−シクロヘキシル−３−（２−
モルホリノエチル）カルボジイミドが挙げられる。
担体をポリヌクレオチド溶液およびカップラーで処理し
た後、担体表面を温度約０〜５０℃、好ましくは０〜２
５℃に冷却する。
た後、担体表面を温度約０〜５０℃、好ましくは０〜２
５℃に冷却する。
このような固定化技術の反応機構はまた説明されていな
いが、１つの理論が存在する。これは、加熱に際して２
本鎖ポリヌクレオチドが一部１本鎖のポリマーに分離す
るというものである。続いて、水溶性のカルボジイミド
により、・ポリＣ鎖のシトシンの１級アミン基と担体表
面のカル？キシル基の間にアミド結合が形成される。そ
の後、冷却することによって少なくとも部分的に二本鎖
構造が再構成される。すなわち、溶液からボリエ鎖が引
き戻されて、水素結合を介して固定化された相補鎖に再
結合する。以後記載する実施例から明らかになるように
、固定化ポリヌクレオチドの生理的効果は著しい。この
ことは、二重鎖が元のコンホメーションにほぼ再構成さ
れたことを意味している。
いが、１つの理論が存在する。これは、加熱に際して２
本鎖ポリヌクレオチドが一部１本鎖のポリマーに分離す
るというものである。続いて、水溶性のカルボジイミド
により、・ポリＣ鎖のシトシンの１級アミン基と担体表
面のカル？キシル基の間にアミド結合が形成される。そ
の後、冷却することによって少なくとも部分的に二本鎖
構造が再構成される。すなわち、溶液からボリエ鎖が引
き戻されて、水素結合を介して固定化された相補鎖に再
結合する。以後記載する実施例から明らかになるように
、固定化ポリヌクレオチドの生理的効果は著しい。この
ことは、二重鎖が元のコンホメーションにほぼ再構成さ
れたことを意味している。
知るかぎ夛では、二重鎖ポリヌクレオチドを固定化する
というこの発明の方法は以前の文献には見られない。こ
の方法は、先行技術とは全く趣を異にしているため、成
功の可能性は推測だにできないにちがいない。熱処理に
よりニ重鎖の開裂が生じ、この鎖の一本が担体表面に結
合すると考えると、もう一方の鎖が冷却によりほとんど
元の位置に戻るということは非常に奇妙な現象と言える
。研究が行なわれた他のポリヌクレオチド（例えばＤＮ
Ａ ）を取り上ばて見ると、温度による開裂でさえすべ
て可逆的とは言えない。すなわち構造（同様に生理学的
効果）は、固定化の段階を省略したとしても、沸騰後元
に戻らない。
というこの発明の方法は以前の文献には見られない。こ
の方法は、先行技術とは全く趣を異にしているため、成
功の可能性は推測だにできないにちがいない。熱処理に
よりニ重鎖の開裂が生じ、この鎖の一本が担体表面に結
合すると考えると、もう一方の鎖が冷却によりほとんど
元の位置に戻るということは非常に奇妙な現象と言える
。研究が行なわれた他のポリヌクレオチド（例えばＤＮ
Ａ ）を取り上ばて見ると、温度による開裂でさえすべ
て可逆的とは言えない。すなわち構造（同様に生理学的
効果）は、固定化の段階を省略したとしても、沸騰後元
に戻らない。
ポリヌクレオチドが実際表面に結合したかどうかを確か
めるために、担体プレート（ＰＭＭＡ ）をＥＳＣＡ分
析に掛けた。固定化後、塩溶液を流しながら？すＩ：Ｃ
を濾過により分離しようとする試みは完全に失敗した。
めるために、担体プレート（ＰＭＭＡ ）をＥＳＣＡ分
析に掛けた。固定化後、塩溶液を流しながら？すＩ：Ｃ
を濾過により分離しようとする試みは完全に失敗した。
実施例１
ポリエ：Ｃの水溶液（２５０１１の水にｔＯｙ９）を１
時間還流沸騰した。７０℃に冷却後、１−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
（１，１）を加えた。この均質溶液を、前もってＩＯＭ
のＮａＯＨで処理して表面にＣｏｏＨ基を生じさせたＰ
ＭＭＡの表面に加えた。
時間還流沸騰した。７０℃に冷却後、１−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
（１，１）を加えた。この均質溶液を、前もってＩＯＭ
のＮａＯＨで処理して表面にＣｏｏＨ基を生じさせたＰ
ＭＭＡの表面に加えた。
表面に加えられた時の温度が７０℃の溶液を、連続循環
させながらゆっくりと４℃まで冷却させた。１６時間た
って、固定化が完了した。
させながらゆっくりと４℃まで冷却させた。１６時間た
って、固定化が完了した。
２人の患者（１人はＡＩＤＳに罹っている患者１、もう
１人はＡＩＤｓとカポシズ肉腫に罹っている患者）の血
液を、表面が上記のととくポＩＪＩ：Ｃで固定化された
ＰＭＭＡ壁でできている容器の中で２時間インキュベー
トした。インキュベート前と後に、血液からの単核性細
胞の試料の黒色腫細胞に対する細胞ｉ活性について試験
した。
１人はＡＩＤｓとカポシズ肉腫に罹っている患者）の血
液を、表面が上記のととくポＩＪＩ：Ｃで固定化された
ＰＭＭＡ壁でできている容器の中で２時間インキュベー
トした。インキュベート前と後に、血液からの単核性細
胞の試料の黒色腫細胞に対する細胞ｉ活性について試験
した。
ＡＩＤＳのみに罹っている患者は、インキュベート前に
は１０％よシも低い細胞毒活性を示したが、インキュベ
ート後には８０％の値を示した。
は１０％よシも低い細胞毒活性を示したが、インキュベ
ート後には８０％の値を示した。
ＡＩＤＳとカポシズ肉腫に罹っている患者ではそれらの
値がそれぞれ５％および２０％であった。
値がそれぞれ５％および２０％であった。
後者の患者で細胞毒性が著しく増大したのは、この患者
の免疫防御力が非常に低下していることの表れである。
の免疫防御力が非常に低下していることの表れである。
実施例２
ポリエ：Ｃの水溶液（水２５０簾！中に１０ダ）後、１
−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カル
ボジイミドを加えた。前もって８ＭのＫＯＨで処理し、
表面にＣｏｏ）！基を生じさせたポリメタクリル酸メチ
ルの板を均質溶液に浸した。その溶液を６℃まで冷却さ
せた。１６時間後、固定化が完了した。免疫系の活性は
、末削血の単核性細胞の細胞毒活性に反映するが、これ
を−週間センドキサン（シクロホスファミド）で治療し
ている悪性リンツク腫の患者で試験した。試料の細胞を
、センドキサン治療後インキュベートした。インキュ４
−トに際し、細胞を、上記の如く表面にポリエ：Ｃを固
定化したＰＭＭＡと接触させた。細胞毒活性は、細胞系
Ｍｏ１ｔ−４を用いて測定した。センドキサン治療が行
なわれている期間中、ポリＩ：Ｃと共にインキユベート
する前とした後に測定した細胞毒活性を次の表に示す。
−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カル
ボジイミドを加えた。前もって８ＭのＫＯＨで処理し、
表面にＣｏｏ）！基を生じさせたポリメタクリル酸メチ
ルの板を均質溶液に浸した。その溶液を６℃まで冷却さ
せた。１６時間後、固定化が完了した。免疫系の活性は
、末削血の単核性細胞の細胞毒活性に反映するが、これ
を−週間センドキサン（シクロホスファミド）で治療し
ている悪性リンツク腫の患者で試験した。試料の細胞を
、センドキサン治療後インキュベートした。インキュ４
−トに際し、細胞を、上記の如く表面にポリエ：Ｃを固
定化したＰＭＭＡと接触させた。細胞毒活性は、細胞系
Ｍｏ１ｔ−４を用いて測定した。センドキサン治療が行
なわれている期間中、ポリＩ：Ｃと共にインキユベート
する前とした後に測定した細胞毒活性を次の表に示す。
表
細胞毒活性
治療日数 インキ、ベート前 インキュベート後１
５０チ ６５チ ２ ２５チ ３５チ ３ ２０％ ２０チ ４ １０チ １０％５
０チ ０％ここで示された如く、ポリ■：
Ｃのインキュペー）Ｋよりても、３日目からは細胞毒活
性が高まらない。この診断法によれば、この患者の免疫
系は障害を受けていることが分る。つまシ、免疫防御力
がほとんど失なわれ、活性化されなくなっている。
５０チ ６５チ ２ ２５チ ３５チ ３ ２０％ ２０チ ４ １０チ １０％５
０チ ０％ここで示された如く、ポリ■：
Ｃのインキュペー）Ｋよりても、３日目からは細胞毒活
性が高まらない。この診断法によれば、この患者の免疫
系は障害を受けていることが分る。つまシ、免疫防御力
がほとんど失なわれ、活性化されなくなっている。
Claims (9)
- （１）生理活性物質を共有結合により固定化したカルボ
キシル基含有ポリマーの担体であって、該固定化した活
性物質がポリＩ：Ｃであることを特徴とする担体。 - （２）該カルボキシル基含有ポリマーが活性型ポリメタ
クリル酸メチルである特許請求の範囲第１項記載の担体
。 - （３）カルボキシル基含有ポリマーの担体に生理的活性
物質を固定化する方法であって、５０〜１００℃の温度
に保った生理的活性物質ポリＩ：Ｃの水溶液および水溶
性カルボジイミド型のカップラーをカルボキシル基含有
担体ポリマーの表面に加え、続いて該担体表面を０〜５
０℃に冷却することを特徴とする固定化方法。 - （４）該担体ポリマーがポリメタクリル酸メチルであっ
て、その表面が１０〜１００℃の温度におけるアルカリ
溶液の処理により活性化され、カルボキシル基が生成し
ている特許請求の範囲第３項記載の方法。 - （５）ポリメタクリル酸メチルの表面が水酸化アルカリ
金属溶液で活性化されている特許請求の範囲第４項記載
の方法。 - （６）ポリＩ：Ｃ水溶液を約５分間ないし約４時間熱処
理する特許請求の範囲第３項記載の方法。 - （７）ポリＩ：Ｃ水溶液を７０ないし１００℃の温度で
熱処理する特許請求の範囲第３項記載の方法。 - （８）ポリＩ：Ｃ水溶液を、カップラーと共に担体表面
に加えるに際し、約５０〜８０℃の温度に保つ特許請求
の範囲第３項記載の方法。 - （９）カップラーとして、１−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩または１−
シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボ
ジイミドを加える特許請求の範囲第３項記載の方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP85850271A EP0212039B1 (en) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | A carrier with an immobilised, biologically active substance, a method for its preparation, and the use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6266158A true JPS6266158A (ja) | 1987-03-25 |
Family
ID=8194722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60203192A Pending JPS6266158A (ja) | 1985-08-29 | 1985-09-13 | 生理活性物質を固定化した担体およびその調製法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4767701A (ja) |
| EP (1) | EP0212039B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6266158A (ja) |
| AT (1) | ATE41159T1 (ja) |
| DE (1) | DE3568583D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4813712B2 (ja) * | 1999-08-09 | 2011-11-09 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション | 薬物−担体複合体およびその使用方法 |
| JP2012515927A (ja) * | 2009-01-23 | 2012-07-12 | ドレクセル・ユニバーシティー | 炎症を検出するための量子ドットを用いた装置および方法 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5206178A (en) * | 1986-11-19 | 1993-04-27 | Genetic Systems Corporation | Membrane affinity concentration immunoassay |
| WO1990014090A1 (en) * | 1989-05-19 | 1990-11-29 | Hem Research, Inc. | SHORT THERAPEUTIC dsRNA OF DEFINED STRUCTURE |
| JP4006058B2 (ja) * | 1997-03-11 | 2007-11-14 | 第一三共株式会社 | 多臓器不全予防及び／又は治療剤 |
| GB2325233B (en) * | 1997-05-16 | 2001-07-18 | Norsk Hydro As | Substrates having bound polysaccharides and bacterial nucleic acids |
| US6087342A (en) * | 1998-05-15 | 2000-07-11 | Fmc Biopolymer As | Substrates having bound polysaccharides and bacterial nucleic acids |
| CN112830495B (zh) * | 2020-12-31 | 2023-12-29 | 苏州国纳思新材料科技有限公司 | 一种单分散胶体乳液的制备方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56115727A (en) * | 1980-02-19 | 1981-09-11 | Kuraray Co Ltd | Carrier for immobilizing physiologically active substance |
| JPS56141559A (en) * | 1980-04-04 | 1981-11-05 | Toray Ind Inc | Reagent for immunological inspection |
| US4357142A (en) * | 1980-07-18 | 1982-11-02 | Akzona Incorporated | Glass support coated with synthetic polymer for bioprocess |
| US4362697A (en) * | 1981-04-20 | 1982-12-07 | Miles Laboratories, Inc. | Homogeneous specific binding assay test device having copolymer enhancing substance |
| JPS58209984A (ja) * | 1982-05-28 | 1983-12-07 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | 粒子状重合体よりなる担体 |
| JP2548112B2 (ja) * | 1983-09-02 | 1996-10-30 | シンジェン，インコーポレイテッド | 担体およびオリゴヌクレオチドの合成 |
-
1985
- 1985-08-29 DE DE8585850271T patent/DE3568583D1/de not_active Expired
- 1985-08-29 EP EP85850271A patent/EP0212039B1/en not_active Expired
- 1985-08-29 AT AT85850271T patent/ATE41159T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-09-03 US US06/771,679 patent/US4767701A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-09-13 JP JP60203192A patent/JPS6266158A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4813712B2 (ja) * | 1999-08-09 | 2011-11-09 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション | 薬物−担体複合体およびその使用方法 |
| JP2012515927A (ja) * | 2009-01-23 | 2012-07-12 | ドレクセル・ユニバーシティー | 炎症を検出するための量子ドットを用いた装置および方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0212039B1 (en) | 1989-03-08 |
| ATE41159T1 (de) | 1989-03-15 |
| DE3568583D1 (en) | 1989-04-13 |
| US4767701A (en) | 1988-08-30 |
| EP0212039A1 (en) | 1987-03-04 |
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