KR100227949B1 - 활성 시약 착화합물의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 초기 착화합물이 적어도 부분적으로 변형된 구조를 갖는 성분을 적어도 부분적으로 포함하는 균일 상을 변성시키거나 각 성분들로 분해시킴으로써 적어도 부분적으로 형성됨을 특징으로 하는, 성분들을 갖는 하나 이상의 초기 착화합물로부터 활성 시약 착화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 재생 공정에 의해 최종 착화합물은 균일 상중의 적어도 일부분과 함께 하나 이상의 소정의 성분으로부터 형성된다. 당해 최종 착화합물은 변성공정 및 재생공정으로 이루어진 하나 이상의 주기를 거친 후에 활성 시약 착화합물을 형성한다. 본 발명의 공정은 활성 시약 착화합물을 제공하며, 이는 단기 활성 시약이 살아 있는 유기체에서 사용되는 경우에서 조차도 목적하는 위치에서 목적하는 시간 동안 효력을 발생할 수 있다.

Description

활성 시약 착화합물의 제조방법

본 발명은 특허청구의 범위 제1항의 서문에 나타낸 양태를 갖는 활성 시약 착화합물의 제조방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 생물 학적 부분을 제조하는 방법에 따라 제조된 활성 시약 착화합물 및 이의 용도에 관한 것이다.

활성 시약 착화합물은, 둘 이상의 성분을 갖고 성분 중의 하나 이상이 활성 시약인 착화합물의 형태이다. 활성 시약은 일반적으로, 이들이 활성 기능의 케리어로서 세포와 상호작용을 한다는 사실로 인해 효과가 발생한다. 그러므로, 활성 시약은 내생적으로, 즉 세포 대사 작용의 생성물로서 체내에서 생성되거나, 식품, 주변물질 또는 약제로서 외부로 부터 체내에 공급될 수 있다. 어느 경우에서나, 유기체 내에서 하나 이상의 표적 구조물간의 상호작용은 생물학적 효과를 달성하기 위해 필요하다.

내생 활성 시약의 경우, 이들의 생성 및 작용 사이의 공간적 및 연대기적 차이는 크게 상이할 수 있다. 그러므로, 예를 들면, 호르몬은 넓게 작용할 수 있으며, 조직 호르몬으로서 매우 짧은 범위로 작용될 수 있다. 활성 시약의 생성 위치와 작용 위치 사이의 신호 흐름 변동이 단기간내에 이루어질 수 있도록 하기 위하여, 여러가지 내생 활성 시약(예: 호르몬, 신경전달물질, 시토키닌 등)의 경우, 반감기가 짧고, 이로 인해 증식 매체 중에서 활성 시약의 유효수명이 매우 짧다. 혈중 반감기는 예를 들면, 다수의 활성 시약에 대해 수분 내지 수초의 범위이다.

매우 신속한 분해 동력학을 갖는 이러한 생성 및 효과 특성은, 내생 활성 시약의 경우에는 생성된 다음 신속하게 필요한 곳에 적용시킬 수 있기 때문에 일반적으로 유리하지만, 이들 단기 활성 시약을 외부로부터 적용시키는 경우에는 이들의 반감기가 너무 짧아서 상응하는 표적 구조물과의 상호작용을 더 이상 일으키지 않아서 아무런 효과도 발생하지 않기 때문에 중요한 활성 시약을 외부로부터 적용할 수 없는 심각한 문제가 수반된다.

활성 시약 착화합물을 제조하는 공지된 방법에 있어서, 성분으로서 특히 하나 이상의 필요 활성 시약을 갖는 초기 착화합물은 변성 공정을 거치며, 초기 착화합물은 이들이 각 성분으로 분해되고 각 성분들이 부분적 또는 전체적으로 구조가 변화되는 경우 부분적 또는 전체적으로 균일상을 나타낼 수 있다. 또한, 이러한 변성 공정의 경우, 각각의 초기 착화합물은 생리학적으로 불활성이다. 이어서, 각각의 필요 활성 시약을 균일상으로부터 분리시키고, 활성 시약 착화합물을 수득하기 위해 상응하는 방식으로 "수집"한다. 이러한 공지된 방법에 따라 제조된 활성 시약 착화합물은 살아있는 유기체 내에서 단기 활성 시약으로 사용하기에 적합하지 않다.

그러므로, 본 발명은 단기 활성 시약이 사용되는 경우조차도 필요한 활성 위치에서 필요한 기간 동안 살아있는 유기체내에서 효과적으로 작용될 수 있는 활성 시약 착화합물을 제조하는 방법을 제공하려는 목적을 근간으로 한다.

본 발명에 따라서, 이러한 목적은 특허청구의 범위 제1항의 양태를 갖는 방법에 의해 성취된다. 최종 착화합물은 하나 이상의 소정의 성분과 함께 일정 부분 이상의 균일상으로부터 재생 공정에 의해 형성된다는 사실과 최종 착화합물은 변성 및 재생 공정으로 이루어진 하나 이상의 주기를 거친 후 활성 시약 착화합물을 형성한다는 사실로 인해, 반감기가 짧은 활성 시약을 외부로부터 적용하는 경우에도 사용할 수 있다. 그러므로, 각각의 소정 성분은 본 발명에 따라 제조된 활성 시약 착화합물이 유기체내에서 후속적으로 사용되는 경우 포함되는 활성 시약이다. 재생 공정에서 주지해야할 점은 일반적으로 변성공정을 위해 제공된 수단이 제거된다는 것이다.

그러므로, 이러한 방법으로 제조된 활성 시약 착화합물은, 이들이 함유하는 각 활성 시약이 유기체내에 존재하는 경우에만 목적에 맞게 방출된다. 단일 활성 시약이 존재할 수 있다. 그러나, 다수의 활성 시약이 또한 착화합물내에 존재할 수 있다. 변성-재생 공정의 각 주기는 그 자체가 각 경우 소정의 활성 시약에 대한 농축 단계의 형태이다. 여러 주기를 거치는 경우, 활성 시약 착화합물 중의 특정한 소정의 활성 시약은 유기체내에 도입되는 경우 엄밀하게 한정된 소정의 기간 동안 유효한 방식으로 농축될 수 있다. 이러한 결과로서, 자체 내생하여 살아있는 유기체내에서 단지 소량만 생성되고 특정한 조건하에 본 발명에 따른 방법의 적용에 필요한 초기 착화합물중에 미량만 존재하는 활성 시약은 외부로부터 적용되는 것이 바람직하다. 또한, 활성 시약 착화합물을 형성하기 위해 초기 착화합물중의 성분으로서 서로 독립적으로 매우 상이한 농도로 존재하는 다수의 활성 시약을 농축시키는 것도 본 발명에 따른 방법의 범주내에 속한다.

본 발명에 따른 방법의 바람직한 양태에 있어서, 균일상의 일부분으로부터 특정한 소정의 성분을 소모시키거나 농축시키거나 분리시킨다. 그러므로, 특정갯수의 부분들이 균일상으로부터 형성될 수 있다.

바람직하게는, 균일상은 2개의 부분으로 분리되고, 균일상의 한 부분으로부터 소정의 각 성분은 소모되거나 농축되거나 분리되어 균일상의 또 다른 한 부분과 혼합된다.

본 발명에 따른 방법의 바람직한 추가 양태에 있어서, 초기 착화합물중에 존재하지 않는 하나 이상의 추가 성분을 활성 시약 착화합물에 가한다. 이러한 결과로 인해, 내생 활성 시약을 완전히 신규한 소정의 효과가 본 발명에 따른 활성 시약 착화합물을 사용함으로써 성취될 수 있는 방식으로 추가의 천연 또는 합성 활성 시약과 혼합시킬 수 있다.

본 발명에 따른 방법의 적용시 사용되는 초기 착화합물은 동물 또는 사람 세포, 조직 또는 기관을 샘플링함으로써 형성시킬 수 있다. 그러나, 미생물 또는 식물 세포 배양액 또는 유기체로부터 형성시키거나 합성에 의해 생성될 수도 있다.

또한, 본 발명에 따른 방법을 적용하는 경우, 초기 착화합물은 초기 착화합물 또는 이들 성분 중의 하나의 비가역적인 전환이 발생하지 않는 방식으로 가역적으로 변성될 수 있으며, 이로 인해 재생 공정이 용이해진다.

바람직하게는, 산, 염, 카오트로픽 물질(예 : 우레아) 및 세제 등이 변성공정에서 사용될 수 있다. 본 발명에 따르면, 재생은 변성수단을 제거함으로써 발생하며, 이는 물리적, 화학적 또는 생물학적 공정을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 방법을 사용함으로써, 생물학적 부분, 특히 생물의 기관을 생성하기 위해 추가로 활성 시약 착화합물을 제조할 수 있다. 이러한 목적에 맞는 활성 시약 착화합물은 DE OS 제39 36 568호에 기재되어 있다. 활성 시약 착화합물은 물질적으로 서로 동일하지 않는 4개 이상의 상이한 성분(구조 성분, 가용성 보충 성분, 불용성 점착 성분, 및 성장 및 숙성 성분)을 포함한다. 피브로넥틴이 보충 성분을 형성하기 위해 용액중에 존재하는 경우, 점착 성분은 피브로넥틴과는 상이하고 불용성인 다른 물질로부터 형성되어야 한다. 반대의 경우, 즉 피브로넥틴이 점착 성분의 형성을 위해 불용성 형태로 사용되는 경우에도 동일하게 적용된다. 서로 상이한 본 발명의 성분은 표적 세포에 적합하고 내생 세포로부터 생물학적 부분을 구성하는데 사용된다.

생물학적 부분은 이의 기능을 수행하기 위한 소정의 공간을 차지한다. 종종, 이의 기능은 주어진 기하학적 형태와 관계가 있으며 생물학적 부분은 이들이 기능을 수행하는 한정된 범위를 갖는다. 유사하게는, 이를 본 발명에 따른 활성 시약 착화합물에 의해 생성되는 생물학적 부분에 적용한다. 생성 방법에 사용되는 활성 시약 착화합물은, 한편으로는 공간 절감 기능을 수행하고 다른 한편으로는 생성된 생물학적 부분이 기능을 수행하는 범위내에 기하학적 형태가 한정되도록 하는 구조 성분을 사용하여 이러한 기능을 수행한다.

활성 시약 착화합물의 구조 성분의 바람직한 양태로는, 물 및 염과 함께 상이한 팽윤 상태를 갖는 겔 형태로 존재할 수 있는 고분자가 주류를 이루는 3차원 매트릭스가 있다. 따라서, 예를 들면, 프로테오글리칸 겔이 매트릭스로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 상이한 형태의 콜라겐 또는 엘라스틴과 같은 섬유의 망상구조가 또한 구조 성분을 형성할 수 있다. 마찬가지로, 겔과 그 사이에 삽입된 섬유와의 혼합물이 복합 활성 시약으로서 적합하다. 생물학적 부분을 생성하기 위해 상이한 적용을 하는 경우, 구조 성분은, 예를 들면, 부직물로서, 겔 형태 또는 유체 겔로서 절단 또는 제분되거나 가소적으로 변형되거나 주조될 수 있는 용도에 적합하도록 상이한 방법으로 제조된다.

구조 성분은 생성되는 생물학적 부분의 필요조건에 부합되는데, 이는 주어진 특수성이 생물학적 부분의 세포상 분획과 세포의 분획 사이에 존재하기 때문이다. 그러므로, 구조 성분을 생성하기 위한 공급원은 대체적으로, 상이한 조직 또는 기관의 세포의 물질인데, 예를 들면, 피부 생성시 피부의 프로테오글리칸 및 섬유 단백질이 구조 성분의 생성에 사용되고, 비장 특이성 프로테오글리칸 및 섬유 단백질이 비장 생성에 사용되며, 골 특이성 프로테오글리칸 및 섬유 단백질이 골 생성에 사용되는 등의 경우이다. 구조 성분은 또한 구조 성분의 기하학적, 기계적, 화학적 또는 기타 특성이 개질될 수 있는 수단에 의해 금속, 세라믹, 유리질, 중합체 또는 지방질 케리어 물질을 포함할 수 있다. 그러므로, 케리어 물질은 생물학적 부분의 생성으로 인한 필요조건 및 이의 후속기능에 따라 고체, 기공, 막, 미셀라, 점액질 또는 유체 형태로서 구조 성분과 함께 존재할 수 있다.

본 발명에 따른 활성 시약 착화합물의 추가의 바람직한 양태에 있어서, 활성 시약 착화합물이 생물학적 부분 생성시 실질적으로 일시적으로만 효과를 발생하는데, 즉 활성 시약 착화합물은, 조절가능 하여 연대기적으로 분해하며 생물학적 부분이 생성되는 경우에는 더 이상 존재하지 않는 방식으로 형성된다. 따라서, 활성 시약 착화합물의 분해속도는 중합체 매트릭스의 상이한 가교결합 및/또는(효소) 억제제 및/또는 면역억제제 및/또는 소염물질의 첨가에 의해 미리 결정지워질 수 있다. 이 경우 사용되는 억제제는 분해 효소의 활성 중심을 차지하는 저분자량 화합물 일 수 있지만, 이들은 또한 그 자체가 효소의 필수적인 보조인자를 형성하는 착물화제이거나, 중성화 항체일 수 있다. 추가의 억제 메카니즘이 존재할 수도 있다. 이러한 경우, 다음 물질이 소염 및/또는 면역억제 첨가제로서 사용될 수 있다: 포스포리파제 억제제(예: 스테로이드), 사이클로옥시게나제 억제제(예: 인도메타신), 리폭시게나제 억제제(예: 노르디하이드로구아이아레트산), 사이클로스포린 형태 및/ 또는 안티티모사이트 글로불린 형태의 면역 억제제 등.

필요한 형태의 살아있는 세포가, 생물학적 부분을 생성시키기 위해 구조 성분 주변에 농축된다. 이러한 목적에 맞게, 활성 시약 착화합물의 구조 성분은 바람직한 세포가 일정 방향으로 이동하도록 자극을 줄 수 있는 수단에 의해 하나 이상의 보충 성분을 함유한다. 주화성 물질(케모탁신)이 보충 성분(들)으로서 적합하다.

각 경우에 적합한 주화성 물질이 다수의 세포에 대해 기재되어 있으며, 사람, 동물, 식물 또는 미생물 공급원으로부터 분리시키거나 심지어 화학적 합성 또는 생물기술학적 공정에 의해 제조할 수 있다. 생물의 체외로부터 생성된 구조성분이 이의 보충성분(들)과 함께 유기체내로 도입되고/되거나 유기체의 외부로부터 표적 세포와 함께 혼합되는 경우, 농도 구배는 표적 세포가 배향되는 방향으로 높아지고, 보충 성분은 수용체로도 공지된 표적 세포상에서 특정의 검출 구조물과 상호작용을 한다. 생성될 생물학적 부분이 다수의 세포 형태로 구성되는 경우, 구조 성분은 세포 형태의 갯수에 따라 주화성 물질의 형태로 다수의 보충 성분을 포함한다.

상이한 표적 세포에 대한 각각의 보충 성분의 특이성 및 주화성 물질의 활성도는, 소정의 여과 기공을 통한 목적하는 세포의 이동 방향이 주화성 물질의 구배 효과하에 챔버에서 측정되는 경우 이를 조사함으로써 측정한다. 이러한 형태의 조사 기술에 의해, 활성 시약 시스템을 산업적 규모로 활성 시약 착화합물의 제조시 중요한 이의 각 보충 성분에 대하여 생물학적으로 정규화할 수 있다.

N-F-Met-Leu-Phe와 같은 펩티드 및/또는, 예를 들면, 류코트리엔과 같은 아라키돈산의 대사산물이, 예를 들면, 소정의 세포를 혈액 또는 식세포로부터 흡인할 수 있는 수단에 의해 주화성 물질로서 사용된다. 단백질 흡인성 메센카임 세포와 같은 단백질은 특히 결합 조직 세포에 대해 영향을 미치는 주화성 물질을 갖는다.

바람직한 표적 세포에 대한 각각의 보충 성분의 특이성 및 주화성 물질의 활성도 이외에도, 주화성 물질 농도 구배가 생성 및 유지되는 기간은 중요하다. 본 발명에 따른 활성 시약 착화합물의 경우, 이들의 동력학은 구조 성분으로부터 각각의 보충 성분의 방출을 조절함으로써 생물학적 부분의 생성을 위한 필요조건에 순응한다. 이와 관련해서, 그 자체의 분해 속도는 구조 성분과 각각의 보충 성분 사이의 결합형태, 예를 들면 공유 결합인지 준결합인지에 따라 좌우 된다. 공유결합인 경우, 주화성 물질 구배는 이온력 또는 수소 가교 결합에 의한 단순한 준결합의 경우보다 완만하게 생성되어 오랫동안 유지된다. 그러나, 대부분의 경우, 생물학적 부분을 생성하기 위한 세포의 보충은 구조 성분의 분해보다 신속하게 일어나는데, 이는 이동 세포가 프로테오글리칸/콜라겐 물질의 분해에 대해 실질적으로 상당한 기여를 하기 때문이다.

생물학적 부분을 생성하기 위해, 세포가 구조성분으로 이동하는 경우, 이들은 주변환경으로의 방출을 방지하고 생성될 생물학적 부분의 구조를 안정하게 확보하기 위해 해당 위치에 고정시킨다. 이러한 목적에 맞도록, 활성 시약 착화합물은 이동 세포를 구조 성분의 위치에 고정시킬 수 있는 수단에 의해 하나 이상의 점착 성분을 함유한다. 따라서, 점착 성분은 한편으로는 생물학적 부분으로 집적되는 세포에 고정되고, 다른 한편으로는 구조 성분의 고분자 망상구조에 고정된다. 이러한 형태의 점착물은 공지되어 있으며 소정의 고정 특이성을 나타낸다. 이의 예들로는 피브로넥틴 또는 라미닌 형태의 알부민체가 있으며, 이들에 의해 예를 들면 결합 조직 세포 또는 상피세포가 구조 성분에 고정될 수 있다. 특이도가 상이한 무수한 추가의 점착 인자가 입수 가능하며 본 발명에 따른 활성 시약 착화합물의 경우에 생성될 생물학적 부분에 따라 사용된다. 여기에는 특히 세포 점착 분자 L-CAM, N-CAM, 매트릭스 점착분자 시토택틴, 테나신, 라미닌, 피브로넥틴, 콜라겐 형태 IV, V, VII 및 합성 펩티드가 포함되며, 이들은 각종 점착물 및 막투과 결합 단백질(예: 인테그린)의 부분 시퀀스이다.

생물학적 부분이 생성될때 구조 성분에 대한 목적 세포의 접착 특이성을 증가시키기 위해, 목적하지 않은 점착 성분에 대한 항체가 사용될 수 있다. 점착 성분의 생물학적 활성은 상이한 형태의 점착 시험으로(예: 원심력 등에 의해) 측정될 수 있으므로, 전체 활성 시약 착화합물에 대해 정규화될 수 있다.

종종, 구조 성분의 주변에 주화적으로 흡인되어 적합한 점착물에 의해 고정되는 생물학적 부분 생성용 세포의 수는 생물학적 부분을 구성하기에 부족하다. 또한, 이들 공정을 위해 유기체에서 입수할 수 있는 이동성 세포는 대부분 생물학적 부분의 기능을 완전히 수행하기에 충분한 정도로 숙성된 상태가 아니다. 역으로, 이들은 생성될 생물학적 부분의 기능성 숙성 세포가 전개되는 전구체 또는 모세포인 경우가 빈번하다. 이러한 목적에 맞게, 본 발명에 따른 활성 시약 착화합물은 이동성 세포의 수가 증가되고 또한 세포가 숙성하는 효과하에 바람직하게는 하나 이상의 시토키닌 형태인 하나 이상의 성장 및/또는 숙성 성분을 포함한다.

시토키닌은, 세포와 상호작용하여 이들의 분리 및 성장 거동 뿐만 아니라 숙성 및 생합성능에도 영향을 미침을 특징으로 하는 상이한 화학구조를 갖는 물질이다. 따라서, 시토키닌은 호르몬과 유사한 효과를 갖지만, 호르몬과는 달리 어느 정도 떨어진 거리에서는 효과를 발휘하지 못하지만 국부적인 영역에서는 효과를 발휘하는데, 이러한 점은 생물학적 부분의 생성과 같이 국부적으로 진행되는 공정의 경우 유리하다.

특이성이 상이한 다수의 상이한 시토키닌이 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 이들은 세포성장, 분화 및 숙성에 영향을 미치고 본 발명에 따른 활성 시약 시스템에서 추가 성분으로서 이동성 세포의 대사 작용에 영향을 미치는데 사용된다. 소정의 세포에 대한 시토키닌의 특이성은 표적 세포에 대한 상응하는 수용체의 존재에 의해 측정되며, 시토키닌과 수용체 간의 상호작용은 세포상 후속 공정을 유발한다. 이경우 언급되는 표적 세포에 대한 수용체는, 사용되는 주화성 물질과 상호작용하고 이와 결합하여 세포의 내부에 갇히는 막 단백질이다. 수용체는 재순환하기 때문에, 이들은 주화성 물질의 결합시 항시 입수될 수 있다.

이는, 상호작용의 메카니즘은 유사하고 특이성만 상이하게 사용되는 각각의 시토키닌에 대한 수용체와 유사하다. 주화성 물질의 결합이 표적 세포를 일정방향으로 유도하는 한편, 표적 세포의 상응하는 수용체에 대한 시토키닌의 결합은 성장 및/또는 분화를 유발한다. 대부분의 경우, 수용체는 관련 리간드(주화성 물질, 시토키닌 등)에 대한 이들의 특이성에 의해서만 인지되며, 분자적으로는 아직 규정 지워지지 않는다.

이와 관련해서, 종종 자극 또는 억제 후속 공정이 사용되는 시토키닌 및 표적 세포의 특이성에 따라 세포에서 유발될 수 있다는 사실을 유념해야 한다. 생물학적 부분의 생성에 필요한 시토키닌 상호작용의 세포상 후속 공정은, 유리하게는 둘 이상의 시토키닌이 성장 및 분화를 목적으로 본 발명에 따른 활성 시약 착화합물의 경우에 사용되는 이중 신호 교대 공정과 연결된다. 시토키닌과 상호작용한 후 다수의 세포가 추가의 시토키닌을 생성하여 이를 방출한 다음, 이들은 자체적으로 스스로를 자극 또는 억제할 수 있다(일명 오토크린 메카니즘). 때때로, 소정의 시토키닌에 대한 세포의 특이성은 추가의 상호작용이 발생하지 않는 개별 분화 단계로 변화되거나 세포상 후속 공정을 자극하는 반응이 세포상 후속 공정을 억제하는 반응으로 변할 수 있다. 다수의 시토키닌의 특성은 공지되어 있으므로, 활성 시약 시스템에서의 시토키닌 효과도 마찬가지로 정규화될 수 있다.

시토키닌의 예는, 예를 들면, 혈액생성시 집락 자극 인자, 결합 조직 생성시의 섬유아세포 성장 인자, 피부 생성시의 외피 성장 인자, 연골 생성시 연골 유도 인자, 비장 또는 림프 결절 생성시의 림프구 활성 인자 및 비장 펩티드, 흉선 생성시의 T-세포 성장 인자 및 흉선 펩티드, 골 생성시의 골 성장 인자 및 변형 성장 인자, 및 혈관 생성시의 맥관형성인자이다. 또한, 다음과 같은 시토키닌도 사용된다: 인터류킨, 인슐린형 성장 인자, 종양 괴사 인자, 프로스타글란딘, 류코트리엔, 변형 성장 인자, 혈소판으로부터 파생된 성장 인자, 인터페론, 및 내의 세포로부터 파생된 성장인자.

생물학적 부분이 다수의 세포 형태로 구성되는 경우가 많으므로, 혼합물이 발생될 수 있다. 그러므로, 예를 들면, 혈관의 생성은 생성된 생물학적 부분의 공급에 있어서 중요한데, 활성 시약 시스템의 시토키닌 성분으로서 맥관 형성 인자를 첨가함으로써 혈관 생성을 촉진 하는 것이 적합하기 때문이다. 유사하게는, 활성 시약 착화합물에서 추가의 시토키닌을 상응하게 사용함으로써 발생될 수 있는 신경 결합부의 형성을 촉진시키는 것도 중요할 수 있다.

하기에, 본 발명은 실시양태를 참조로 하여 보다 상세하게 기재될 것이다.

제1양태:

소의 골로부터의 골 형성 활성 시약 착화합물의 제조

소의 골을 세정하여 제분하고 탈회시킨다. 생성된 골 매트릭스가 본 발명에 따른 공정에 적용되는 초기 착화합물이다. 골 매트릭스를 적합한 변성제(예: 우레아)의 용액과 혼합하여 10℃에서 24시간 동안 교반한다. 원칙적으로 산화 환원 반응, 효소 촉매화 전환, 카오트로픽 염과의 반응, pH, 온도 또는 이온 강도의 조절, 기계적 효과, 및 계면활성제 특성을 갖는 물질(세제)이 변성 수단으로서 사용된다. 용액에서 균일한 골 매트릭스 분획이 분리제거된다. 이는, 예를 들면, 여과 또는 원심분리에 의해 수행될 수 있다. 균일상중의 분획은 1:1의 용적비로 분리된다. 이러한 방식으로 분리된 변성 균일상의 한 부분은, 크로마토그래피, 전기영동, 초여과 또는 투석에 의해 분별결정 시킨다. 본 발명에 따라, 생성된 바람직한 분획은 변성된 균일상의 제2부분에 가해져서 이와 함께 재생된다.

재생은 변성제를, 예를 들면 여과에 의해, 제거함으로써 일어난다. 일반적으로, 각종 물리적, 화학적 또는 생물학적 공정이 본원에서 사용될 수 있다. 생성된 최종 착화합물은 골 형성에 적합한 활성 시약 착화합물이다.

제2양태:

생물학적 물질(예: 결합 조직) 10kg을 저분자량 변성제(예: 6몰 우레아)의 수용액 80ℓ와 혼합하여 실온에서 72시간 동안 교반한다.

용해된 분획을 적합한 분리공정, 예를 들면, 원심분리에 의해 불용성 잔사로부터 분리시킨다. 변성된 잔사를, 예를 들면, 1:1의 용적비로 분리한다. 저분자량 활성 시약 분획의 부분 1로부터 목적 하는 몰질량, 예를 들면, 30000 Dalton까지 농축시키고, 고분자량 기질 분획을, 예를 들면, 중공 섬유 여과 카트릿지 중의 적합한 초여과 장치 상에서 여과에 의해 제거한다.

이러한 방식으로 농축 및 분리된 활성 시약 분획을 선행기술 에서와 같이 활성 시약에 대해 가공되는 것이 아니라 변성 잔사의 부분 2와 혼합되어 고분자 기질의 존재하에 재생을 위해 이동된다. 재생은 변성제, 예를 들면, 우레아를 제거함으로써 수행된다. 이와 관련해서, 활성 시약 착화합물은 기질과 활성 시약과의 혼합에 의해 형성되며, 기질의 재생은 활성 시약의 재생을 유도한다. 변성-재생 주기를 반복함으로써, 바람직한 생물학적 효과를 갖도록 최적화된 활성 시약 착화합물이 생성될 때까지 기질을 활성 시약으로 포화시킬 수 있다. 동결건조법을 사용하여 활성 시약 착화합물을 분리시킬 수 있다.

측정용 활성 시약 착화합물은 구조적인 주화성 물질로 인해 매우 상이한 적용물로서 제조될 수 있으며, 본 발명에 따르는 활성 시약 착화합물에서 수득된 점착, 증식 및 분화 특성은 본 발명에 따른다.

기타 특성은, 예를 들면, 면역성 및 독성 등에 관한 것이며, 본 발명에 따른 생성 공정에 의해 활성 시약 착화합물 중에서 신중히 조절될 수 있다.

본 발명의 방법에 따라 제조된 활성 시약 착화합물의 추가 적용 영역에는 생혼화성을 증가시키거나 세포와의 소정의 반응을 수행하기 위한 계면 개질 분야가 있다. 예를 들면, 생물기술학적 목적 또는 연구 목적으로 세포를 배양하는 경우, 이러한 형태의 활성 시약 착화합물을 사용한 기술적인 피복물이 중요하다. 적용물은 또한 진단 또는 치료 시스템(예: 투석제 및 산소화제)의 경우 체외 적용되거나 인공기관의 경우 체내 적용된다.

위의 설명에서 언급된 모든 양태는, 이들이 특히 강조되지 않았고 특히 특허청구의 범위에 명시되지 않은 경우라 할지라도 추가의 전개부분으로서 본 발명의 구성요소이다.

Claims (10)

1. 균일상이 두 부분 이상으로 분리되고 최종 착화합물이, 균일 상중의 한 부분 또는 또 다른 한 부분과 함께 부분적 또는 전체적으로, 하나 이상의 소정의 성분으로부터 재생 공정에 의해 형성되며 최종 착화합물이 변성공정과 재생공정으로 이루어진 하나 이상의 주기를 거친후에 활성 시약 착화합물을 형성함을 특징으로 하여, 성분들을 포함하는 하나 이상의 초기 착화합물(여기서, 초기 착화합물은, 부분적 또는 전체적으로 변형된 구조를 갖는 성분을 부분적 또는 전체적으로 포함하는 균일 상을 변성시키거나 각각의 성분들로 분해 시킴으로써 부분적 또는 전체적으로 형성되며, 단 각 성분의 공급원으로서 인체는 제외한다)로부터 활성 시약 착화합물을 제조하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 각각의 소정의 성분이 균일상의 일부분으로 부터 소모, 농축 또는 분리됨을 특징으로 하는 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 균일 상이 두 부분으로 분리되고 각각의 소정의 성분이 균일 상의 한 부분으로부터 소모, 농축 또는 분리되어 균일 상의 또 다른 부분과 혼합됨을 특징으로 하는 방법.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 초기 착화합물중에 존재하지 않는 하나 이상의 추가 성분을 활성 시약 착화합물에 첨가함을 특징으로 하는 방법.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 초기 착화합물이 동물의 세포, 조직 또는 기관으로부터 형성됨을 특징으로 하는 방법.
6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 초기 착화합물이 미생물 또는 식물 세포 배양액 또는 유기체로부터 형성됨을 특징으로 하는 방법.
7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 초기 착화합물이 합성에 의해 제조됨을 특징으로 하는 방법.
8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 변성공정이 가역적으로 수행됨을 특징으로 하는 방법.
9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 산, 염, 카오트로픽 물질 및 세제를 변성공정에 사용함을 특징으로 하는 방법.
10. 제1항 또는 제2항에 있어서, 재생 공정이 변성공정을 위해 제공된 수단을 제거함으로써 수행됨을 특징으로 하는 방법.