JPS6256153B2

JPS6256153B2 -

Info

Publication number: JPS6256153B2
Application number: JP13555782A
Authority: JP
Inventors: Katsuhisa Oosugi; Junji Ichida; Eisaku Takahashi
Original assignee: Kureha Corp
Current assignee: Kureha Corp
Priority date: 1982-08-03
Filing date: 1982-08-03
Publication date: 1987-11-24
Also published as: JPS5925398A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、化学構造式で表わされる新規化合物の３−（６−イソシアノ
−３・７−ジオキサトリシクロ〔４・１・０・０
²、⁴〕ヘプタン−４−イル）プロペノイクアシド
に関する。本発明化合物は、ペニシリウム属に属する或る
種の菌（以下「No.2188生産菌」と記す）を培養し
た培養物中から得られる新規な抗生物質である。
ペニシリウム属に属する糸状菌の生産する抗生物
質に関しては、ペニシリン、グリセオフルビンを
はじめ、アンチビオテイクSL3238、シアネイ
ン、フニクロシン、グリオトキシン、ジヤンチネ
リン、ミコフエノリツクアシツド、ネガフイリ
ン、パリタンチン、ヴオルトマンニン等の多くの
報告があるが、本発明化合物は前記既知抗生物質
等とは理化学的性状ならびに抗菌スペクトルにお
いて明らかに異なる新規な抗生物質である。本発明はこの新規抗生物質を解明することによ
りなされたものである。本発明化合物の元素分析値はＣ：56.35％、
Ｈ：3.49％、Ｎ：7.34％、Ｏ：32.82％であり、か
つ、質量分析の結果分子量は193であることから
分子式はC₉H₇NO₄である。本発明化合物の物理化学的性質は下記に示す通
りである。 (a) 融点 135〜136℃（分解） (b) 比旋光度〔α〕^２０ _Ｄ＝−128.8（ｃ＝1.0％、
酢
酸エチル） (c) 紫外部吸収スペクトル（第１図参照） λメタノール_ｎａｘ＝215nｍ（ε14378） (d) 赤外部吸収スペクトル（KBr法）（第２図参
照） 3450、3000、2150、1700、1665 1425、1330、
1090、980、900、875、 (e) 水素核磁気共鳴スペクトル（重水素化アセト
ン） δ（ppm）、2.55（ｄ、ｄ、1H、Ｊ＝16、Ｊ＝
1.0） 3.05（ｄ、ｄ、1H、Ｊ＝16、Ｊ＝0.5） 3.98（ｄ、1H、Ｊ＝1.0） 4.45（ｄ、1H、Ｊ＝0.5） 6.11（ｄ、1H、Ｊ＝16） 6.71（ｄ、1H、Ｊ＝16） (f) 炭素−13核磁気共鳴スペクトル（重水素化メ
タノール） δ（ppm）168.1（ｓ）、165.1（ｓ）、141.9(d) 125.8(d)、66.4(d)、66.1(d) 64.9（ｓ）、62.5（ｓ）、36.6（ｔ）上述した性質から本発明化合物の化学構造は下
記の如く決定され、３−（６−イソシアノ−３・
７−ジオキサトリシクロ〔４・１・０・０²、⁴〕
ヘプタン−４−イル）プロペノイクアシドと命名
される。文献未記載の新規化合物である。本発明化合物はメタノール、エタノール、アセ
トン、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン等の
溶剤に溶けるが、ヘキサン、石油エーテルには不
溶である。本発明化合物は、ペニシリウム属に属する菌株
の培養物から得られる。本発明者等は新たに土壌
から分離したペニシリウム属に属する糸状菌より
本発明化合物を得たが、この糸状菌は工業技術院
微生物工業技術研究所に「微工研条寄第142号」
として寄託されている。上記「微工研条寄第142号」として寄託された
糸状菌の菌学的性質を示すと次のとおりである。 () 各種培地における生育状態麦芽汁寒天培地、バレイシヨ・ブドウ糖寒天
培地、サブロー寒天培地、オートミール寒天培
地、YpSs寒天培地およびブドウ糖・乾燥酵母
寒天培地においてよく生育する。しかし合成ム
コール寒天培地では若干生育が劣り、ツアペツ
ク寒天培地では生育は遅い。一般に30℃ではビロード状であるが、20℃で
は羊毛状で、くすんだ黄緑色、かんらん緑色、
明るい緑灰色〜灰緑色など培地により種々異な
る；分生子層は、暗緑色；菌糸層は黄色〜橙黄
色；集落裏面は黄橙色〜橙赤色；37℃では生育
しない。 () 形態観察分生子柄：ほふく菌糸及び気生菌糸から直生、
2.5×3.0μ×100〜300μ、壁は滑面あるいは
やや粗面。ペニシリ：複輪生体−対称型。メトレ：2.5〜3.5μ×7.5〜15μ、３〜６本束
生。フイアライド：先端はペン先状にとがる、2.0
〜3.8×7.5〜13μ、２〜６本の輪生体とな
る。分生子：だ円形、2.5〜３μ×３〜3.8μ、緑
色、滑面、連鎖はもつれるか並行。上記の観察の結果「微工研条寄第142号」とし
て寄託された菌はレイバーら、「ア・マニユア
ル・オブ・ザ・ペニシリア」（ジ・ウイリアム
ス・アンド・ウイルキンス・コンパニー発行、
1949年）（K.B.Raper and C.Thom；Ａ Manual
of the Penicillia、The Williams and Wilkins
Company、1949年）によりペニシリウム・ルグ
ロサム〔Penicillium rugulosum〕と同定され
る。本発明化合物は、生産する菌株をカビの培養法
として公知の培養法により好気的に培養して培養
物中に生産せしめられる。例えば、本発明化合物の生産菌株は酵母エキス
0.1％、肉エキス0.1％、ペプトン0.2％、グルコー
ス１％、寒天２％からなる培地に継代培養され、
本発明化合物の生産のためにこの寒天培地上の発
育菌体を直接生産培地に接触して培養させること
が出来る。又、生産培地に発育させた菌体を新し
い生産培地に培養して、そこに本発明化合物を生
産させることが出来る。本発明化合物の生産菌は10〜35℃で発育する
が、本発明化合物の生産には通常20〜30℃が好ま
しい。本発明化合物を生産するペニシリウム属菌
を培養するためには、カビその他の微生物の培養
に公知の栄養源はすべて利用できる。例えばグル
コース、マルトース、デキストリン、デンプン、
ラクトース、サツカロース、グリセリン等を炭素
源として利用できる。本発明化合物を生産するた
め、カビその他微生物の発育のために公知の窒素
源はすべて利用できる。例えばペプトン、肉エキ
ス、酵母、酵母エキス、大豆粉、落花生粉、綿実
粕、コーンスチープリカー、米ぬか、無機窒素等
を利用できる。本発明化合物の生産菌の培養で本発明化合物を
生産させる場合、必要とするときは無機塩、金属
塩を加える。また必要とするときは重金属の微量
を加えることもでき、さらに必要に応じてその他
の栄養素及び発育促進物質の如き物質を添加する
こともできる。本発明化合物はその生産菌を好気的に培養して
得られるが通常の好気培養法、例えば固体培養
法、振とう培養法、通気撹拌培養法が用いられ得
る。培養あるいは培地滅菌中消泡を必要とすると
きはシリコーンオイル、界面活性剤等の消泡剤を
使用できる。培養温度は20〜30℃が好ましい。培養は本発明化合物が実質的に著積されるまで
続け、本物質の培養液から取得は、後記実施例に
示すごとく、本発明者らによつて明らかにされた
本物質の性状にもとづいて種々の方法を適当に組
み合わせることによつて行ない得る。すなわち、
たとえばエーテル、クロロホルム、酢酸エチル、
酢酸ブチル、ブタノールなどの有機溶剤による抽
出、アセトン、アルコール等極性の大きい溶剤へ
の溶解、石油エーテル、ヘキサン等極性の小さい
溶剤による不純物の除去、セフアデツクスカラム
によるゲル濾過、活性炭、シリカゲル等を用いる
吸着クロマトグラフイー及びイオン交換クロマト
グラフイー等である。これらの手段を適当に組み
合せて使用することにより本発明化合物は培養物
から単離される。本発明化合物の生物学的性質は下記に示す通り
である。 (1) 抗菌性この抗菌スペクトルは肉汁寒天培地を用いる
寒天希釈法により決定したものである。

【表】

【表】 (2) 毒性マウスの腹腔内投与による急性毒性試験では
100mg／Kg投与しても毒性を示さない。上記から明らかな通り、本発明化合物は種々
のグラム陽性及びグラム陰性菌に対して抗菌活
性を有する。従つて治療薬及び消毒薬として使
用することができる。薬剤は本発明化合物を適
合しうる薬剤担体と共に含有しうる。この担体
は、経腸、特に経口又は非経口投与に適した有
機又は無機の不活性な担体材料であつて、水、
ゼラチン、アラビアゴム、ラクトース、デン
粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物
油、ポリアルキレングリコール、黄色ワセリン
等を例示することができる。この該薬剤は固形
形態（例えば錠剤、糖衣丸、坐薬又はカプセル
剤）、半固体形態（例えば軟膏）又は液体形態
（例えば溶液、懸濁液、又は乳濁液）にするこ
とができる。該薬剤は殺菌用に使用することが
でき、及び／又は補助薬剤例えば保存剤、安定
剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧を変えるための塩
類又は緩衝液を含んでもよい。次に実施例により本発明をさらに説明する。実施例１ペニシリウム・ルグロサム〔微工研条寄第142
号〕の寒天斜面培養物を用い、ベネツト培地（酵
母エキス0.1％、肉エキス0.1％、N.Z.アミンタイ
プＡ（Sheffield Chemical Co.、San Ramon、
CA 94583、USA）0.2％、グルコース１％、PH
7.2）各100mlを含む一連の300mlエルレンマイヤ
ーフラスコに接種する。フラスコを180r.p.mで
操作されている回転振盪機上で24℃、72時間培養
する。上記種培養した50個の振盪フラスコ（合計５
）を用い下記の成分；可溶性澱物 1.5％グリセリン 1.5％綿実粕 1.0％大豆粉 1.0％酵母エキス 1.0％リン酸２カリウム 0.7％硫酸マグネシウム 0.05％塩化コバルト 0.001％消泡剤（旭電化工業アデカノールLG126） 0.1％から成る殺菌培地100を含む200発酵槽で、60
時間培養する。その間、温度を24℃に調節し、濾
過した空気を50／分の速度で供給し、撹拌を
200r.p.m.の速度で行う。全発酵液（100）をシヤープレス（TOMOE
ENGI−NEERING、Co.、TYPE JP−U122−
１）とデラバル（スウーデン製長瀬産業輸入
TYPE BRP×309−355−60）を通し菌体除去
し、塩酸でPH４にし、酢酸エチル1/5量を用い
て、連続遠心抽出製置（日立製作所連続遠心抽出
装置TYPE Ｃ−1333）で抽出した。この抽出液
を、日立コントロ装置及び凝縮器を用い濃縮し
た。この濃縮液を１％NaHCO₃液で逆抽出し、さ
らに１％NaHCO₃液層をPH4.0に塩酸によつて調
整し、酢酸エチルを用いて抽出した。この抽出液
を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に40℃以
下で濃縮した。このようにして作られた粗No.2188
物質を活性炭（和光純薬製）が充填されているカ
ラムを通過させ、さらにクロロホルムで洗浄され
ているシリカゲル（和光純薬ワコーゲルQ23）が
充填されているカラム（直径４cm高さ50cm）の上
部にのせ、酢酸エチル−クロロホルム（１：19、
容積比）で展開して、抗生物質No.2188を溶出し
た。次にｎ−ヘキサンを添加し、白色粉末３ｇを
得た。このものの物理化学的性質は前記の通りで
あつた。実施例２グルコース１％酵母エキス 0.1％肉エキス 0.1％ポリペプトン 0.2％各々上記組成物からなる培地（PH7.2に調整）
100mlを含む５本の300mlエルレンマイヤーフラス
コを加圧滅菌した後、微工研条寄第142号糸状菌
の寒天斜面培養物からの胞子を接種し、26℃にお
いて70時間、毎分180回転で振盪培養を行なつ
た。該培養物500mlを下記の成分； NaNO₃ 0.3％ K₂HPO₄ 0.1％ MgSO₄・7H₂O 0.05％ KCl 0.05％ FeSO₄・7H₂O 0.001％シヨ糖３％酵母エキス１％消泡剤（旭電化工業アデカノールLG109） 0.1％から成るPH7.0の殺菌培地15リツトルを含む30リ
ツトルジヤーフアーメンターに接種した。発酵は、毎分15の濾過空気を通気しながら、
26℃において、毎分300回転の撹拌下に60時間行
なつた。次に発酵液をセライト545を濾過助剤として用
いて濾過し、濾液をセフアデツクスHP20（フア
ルアシア社）を充填してあるカラム（直径４cm、
高さ50cm）に吸着させ、水洗浄後60％メタノール
で溶出し、溶出液を40℃以下で減圧濃縮し、メタ
ノール除去後酢酸エチルで抽出し、無水硫酸ナト
リウムで脱水し、減圧下に40℃以下でさらに濃縮
した。この液状物質を活性炭（和光純薬製）が充填さ
れているカラム（直径1.5cm、高さ30cm）を通過
させ、さらにクロロホルムで洗浄されているシリ
カゲル（和光純薬ワコーゲルＣ・2000）が、充填
されているカラム（直径２cm、高さ30cm）の上部
にのせ、酢酸エチル−クロロホルム（１：19、容
積比）で展開して本発明化合物を溶出した。次にこの液にｎ−ヘキサンを添加し白色粉末
200mgを得た。このものの物理化学的性質は前記
の通りであつた。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図、第３図、第４図は夫々本発明
化合物の紫外部吸収スペクトル、赤外部吸収スペ
クトル、水素核磁気共鳴スペクトル、炭素−13核
磁気共鳴スペクトルを示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】１式で表わされる３−（６−イソシアノ−３・７−ジ
オキサトリシクロ〔４・１・０・０²、⁴〕ヘプタ
ン−４−イル）プロペノイクアシド。