JPS62502472A - 骨格関節の炎症の治療用製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 骨格関節の炎症の治療用製剤 本発明は、プロテオグリカン（ｐｒｏｔｅｏｏ　１ｙｃａｎｓ）の低下により生 じるような進行性軟骨破壊を防ぐ薬剤として使用される分子量が３×１０６ドル トン以上の高分子量ヒアルロン酸に関する。ここで治療とはヒトを含むホ乳類を 対象とする。

「ヒアルロン酸」という用語は、断りがない限り酸及び生理学的に許容されう番 舊を包含する。

関節軟骨は主としてｌＮ２１外マトリツクスから構成されている。

前記マトリックスは機能的に重要な役割をなし、その組成は比較的少数の細胞に より調節されている。前記マトリックスは（１）組織の容積安定性（ｖｏｌｕｍ ｅ　５ｔａｂｉｌｉｔｙ）に重要な繊維網（ｆｉｂｒｏｕｓｎｅｔｗｏｒｋ）を 形成するコラーゲンと（ｉｉ）組織が弾性と耐圧迫性を有するために重要な成分 である相互に反発する大量の電荷を持つプロテオグリカンとから成る。さらに、 関節軟骨は数糟の蛋白質を含んでいるが、その殆んどは作用が知られていない。

このなかには、プロテオグリカン凝集物の形成に関与しこの凝集物の安定性に奇 与している結合蛋白がある。このような凝集物の形成はプロテオグリカンおよび 組織中の負に帯電したグルーブを固定させるために必要である。

関節軟骨の構造退行は、関節構造の慢性的破壊をひぎ起こす全ゆる疾患に典型的 にみられる特徴である。このような疾患としては慢性関節リウマチ、乾象性関節 炎及び変形性関節症が例示される。又、軟骨の破壊に伴ってしばしば関節が急性 炎症を的な因子は知られていない。急性関節炎症を伴う疾患としては、エルシニ ア性関節炎、ピロリン酸関節炎、痛風性関節炎（尿酸塩関節炎）９敗血性間節炎 及び各種外傷性関節炎が例示される。

関節軟骨の破壊を引き起す可能性のあるその伯の因子としては、例えば、コルチ ゾンによる治療が挙げられる。コルチゾンは長期に亘り変形性関節症の退行化を 促進することが知られている。

このようないわゆる［ステロイド性関節症」は関節内コルチゾン治療の好ましか らざる副作用としてしばしば発現するが治療後十分に艮い坏薬期間を設けること により防ぐことができる。

ステロイド性関節症の特徴は進行した関節破壊と進行性変性関節疾患と同様なＸ 線所見である（Ｎｉｚｏｌｅｋ、　ＤＨ＆　Ｗｈｉｔｅ、　ＫＫ。

Ｃｏｒｎｅｌｌ　Ｖｅｔ、　１９８１．７１：３５５−７５）　。コルチゾン治 療後に起こる変性関節症（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ　ａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ ）の進行に関し、現在、この関節症は軟骨細胞の代謝に対する主たる作用に起因 すると信じられている。しかし、関節に重度の炎症を伴う関節炎の場合コルチゾ ンの注入により臨床所見に全体的な改善が認められたとしても、実際の状態はさ らにずっと複雑であることに注目しなければならない。

大 ヒアルロン酸は天然に存在するグリコサミノグリ沙ンで嗣４分子９がｓｏ、　ｏ ｏｏドルトン以上の高粘性液体である。天然の生物系（ｎａｔｕｒａｌ　ｂｉｏ ｌｏｇｉｃａｌ　ｃｏｎｔｅｘｔｓ）中のヒアルロン酸の実際の分子量に関して は十分に解明されていない、ヒアルロン酸の分子量を測定した場合、用いた分析 方法、原料及び分離法等により得られる値が異なる。本明細古中の分子量はＩｎ ｔ、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ。

Ｍａｃｒｏｍｏｌ、　７（１９８５）、　Ｄ３０−２により測定した値である。

この酸は動物組織ノ（たとえば、髄液、眼液、滑液、鶏冠、皮膚）及びある種の ストレプトコツカス属中に存在する。これまで様々なグレードのヒアルロン酸が 得られたがｉｎ　ｖｉｖｏ投与するのに適した十分に純ｑで高分子のヒアルロン 酸を得ることは極めて難しい。高純度で副作用を全く示さない製剤はＵＳ−Ａ− ４，１４１，９７３７５０，０００ドルトン以上、好ましくは１．２００．００ ０ドルトン以上の分子量を有しており、種々の関節状態の治療用として示唆され ている。

出願人らはヒトの「炎症性の関節状態」の適応症に対して各種臨床実験を行なっ てきた。これらの実験では、分子量が実質だ。前述の適応症に対して一般に認め られた治療方法はコルチコステロイド療法であるが、これらコルチコステロイド 類の効果は幾分不明確である（上記参照）。動物（馬）薬の分野でも多くの研究 が行なわれている。関節状ｑ　（ａｒＮｃｕｌａｒ　ｃｏｎｄｉ−ｔｉＯｎＳ） の治療用にヒアルロン酸を使用することが記載されている文献としては、Ｎ１ｚ ｏｌａｋ、　ＤＫ　＆　Ｗｈｉｔｅ、　ＫＫ（Ｃｏｒｎｅｌｌ　Ｖｅｔ、　１９ ８１、７１：３５５−３７５）；　Ｎａｏ＋ｉｋｉ、　０ら（Ｉｎｔ、　Ｊ、　 Ｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、。

Ｔｈｅｒａｐｙ　ａｎｄ　Ｔｏｘｉｃｏｌ、　２０／１９８２／ｐ、５０１〜７ ）；Ａｓｈｅｉｍ、　Ａ　ｌｉ　Ｌｉｎｄｂｌａｄ、　Ｇ（Ａｃｔａ　Ｖｅｔ、 　５ｃａｎｄ、　１７／１９７６／ｐ、３７９−９４）＋　ｓｖａｎｓｔｒ６ｍ 、　ｏｃ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　２４ｔｈ　ａｎｎｕａｌ　 ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏ ｎ　ｏｆ　Ｅｑｕｉｎｅ　Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ；　ｓｔ）［ｏｉＨｉｓ ｓｏｕｒｉ、１９７８年１２月、　ｌ）、３４５−３４８）；　Ｗｉｏｒｅｎ、 Ａ、ら（Ｕｐｓａｌａ　Ｊ。

Ｈｅｄ、　ＳＣｉ、　５Ｕｐｌ）１．１７（１９７５）ｐ、１〜２０３及びＧｉ ｒ＋ｇｅｒｉｃｈ、　ＤＡら（Ｒｅｓ、　ｖｅｔ、　Ｓｃｉ、　３０（１９８０ ）　ｐ、１９２−＄例示される。特許公報もしくは明細書にも、関節の炎症状態 の通常の治療用ヒアルロン酸製剤が記載されている。例えば、ＪＰ−へ−５８− ３７００１，ＥＰ−Ａ−１３８、５７２（１０６ドルトン以下の範囲内の分子量 ）及びＥＰ−Ａ−１４３゜３９３（核酸及び蛋白質を含まず、細菌源由来であり 、分子量が２−４Ｘ　１０６ドルトンのヒアルロン？りに記載されている。ＥＰ −特許明細書は優先年（ｐｒｉｏｒｉｔｙ　ｙｅａｒ）に公開されたものである ことに留意されたい。

高分子量ヒアルロン１１（＞３Ｘ１０”ドルトン）のプロテオグリカン低下を含 む進行性軟骨破壊に対する正の効果は、従来技術では言及されていなかった。

ＥＰ−Ａ−１４５，６８１に記載された発明により、軟骨破壊の早期段階につい ての研究が活発になった。前記方法では軟骨から滑液あり、従ってＸ線又は関節 鏡により肉眼で認められる変化が関節上にあられれるよりかなり前にこの状態を 診断することができる。この方法によれば、各種治療が軟骨変性に及ぼす効果を 早期段階でモニターすることが可能になった。ここに示した我々の実験によれば 分子量が約３×１０６ドルトンｒ以上のヒアルロン酸を関節内に投与すると滑液 中のプロテオグリカン含９がほぼ正常値まで低下する傾向がある。このことは関 節のプロテオグリカン代謝に及ばず正の効果を示すものである。ヒアルロン酸が 炎症状態及びｌコルチコステロイド製剤のような対症療法により生じた変性にも 適用可能であることが判明した。従って、十分高分子量のヒアルロン酸がコルチ コステロイドや同様な効果を与える他の対症療法（ｓｙｍｐｔｏｌｌａｔｉｃｓ ）により生じる恐れのある副作用を防ぐ傾向があることは明らかである。コルチ コステロイドを投与すると２滑膜腔のヒアルロン１１０１が実質上増加する（実 験１参照）ので、この知見は全く予期ゼぬものであった。従って、使用したヒア ルロン酸はステロイド療法により放出されたヒアルロン酸よりはるかにすぐれた 作用を有することも知見された。

本発明の目的は、早期段階の軟骨変性に対して改善された治療法を提供すると共 に例えばコルチコステロイド治療、や他の同様な作用をする対症療法による軟骨 からのプロテオグリカン逸脱を抑制することによりプロテオグリカン代謝を正常 化させることにある。

上記目的を達成すべく、平均分子量が３Ｘ　１０６ドルトン以上好ましくは４× １０　ドルトン以上（通常７Ｘ　１０６ドルトンを越えない）のヒアルロン酸の 有効量が関節内に投与され゛る。ヒアルロン酸の投与量は５〜８０Ｉｆｔｇの範 囲内であることが望ましい。

１回当り投与される酸又はその塩の水溶液の吊は通常６０ｄ以下（例えば２０ｄ 以’Ｆ）である。例えば、水溶性ナトリウム塩のように酸を水に溶解させた形態 （＜２％Ｗ／Ｗ、生理学的ＰＨに緩衝させる）で投与することが有利である。正 確な呈は治療対象と上 なる関節に依存する。滑脱腔が大きければ、前記範囲ｗ丘化程復投与が必要であ る。

療法と組合せてもよい。

本発明によれば、分子量が３×１０６ドルトン以上のにアルロン酸を含むことが 公知の動物組織から抽出されたヒアルロン酸を使用する。前記ヒアルロン酸は例 えば抽出によってヒアルロン酸を産生する細胞培養物から回収することもできる 。使用しうる原料は鶏冠（Ｗｈｉｔｅ　ＬｅｇｈｏｒｒＱから）及びストレプト コツカス属のようなある種の細菌である。生きている有機体が１１当な。

種類のヒアルロン酸を産生する能力は遺伝的なものであり、従って、用いた種（ ５ｐｅｃｉｅｓ）の中の個体（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）を常に注意深く選別する ことが必要である。

使用すべきヒアルロン酸は、治療対象の個体とは異なるソースに由来しており、 異種である。

精製法としては前述したりＳ−＾−４，１４１，９７３に記載されている方法が 適当である。適当な（ｒｉｇｈｔ）種類の原料ソースから、平均分子（６）３× １０６ドルトン以上で蛋白含量が０．５％（Ｗ／Ｗ）以下の寅質的に純粋なヒア ルロン酸が得られるであろう。

多数の非限定例により、本発明をさらに詳しく説明する。下記例より、ヒアルロ ン酸の効果は投与されたヒアルロン酸の分子量に大きく依存することが明らかで ある。一般的に、分子量が１．５ｘ１０６ドルトン以下では効果が極めて乏しく 、一般に分子量が３×１０６ドルトン以上のときには軟骨変性によるプロテオグ リカンの放出は十分に抑制されうる。

実　験 臨床状態ニステロイド性関節症。関節内投与されたコルチゾン及び各種分子量の ヒアルロン酸が軟骨変性に及ぼす影響について、滑液中の（ｉ）プロテオグリカ ン（ＥＰ−Ａ−１４５，６８１による）及び（ｉｉ）ヒアルロン酸（Ｒｏｗｌｅ ｙ、　Ｂ、ら、八ｍ、　Ｊ、　Ｖｅｔ、　Ｒｅｓ、４３（１９８２）、　ｐ、１ ０９６−９）の濃度を測定することにより検討した。

実験に 頭の競争馬（速歩馬）について治療した。これらの馬はもはや競争馬として使用 されずしかも関節性疾患の臨床症状も呈していなかった。次に示した製剤を用い た。

−Ｃｅ１ｅｓｔｏｎａ＠−■ Ｂｉｆａｓ　（注射液、１ｄ当りグルココルチコイド６■含≠ｃｈｅｒｉｎｇ社 ） −　ヒアルロン酸ナトリウム水溶液（１０ｍｇ／ａ＋ｅ、　ｐＨ７，３，分子１ １＝　３Ｘ１０６ドルトン、特定の−ｈｉｔｅ　Ｌｅｇｈｏｒｎ雄鶏からｕｓ− ＾−４，１４１，９７３に従って生産された／　ＰｈａｒｍａＣｉａ　ＡＢ。

Ｓｗｅｄｅｎ） 一生理食塩水 名馬の８箇所の関節が治療された：関節内投与量を以下に示す。

関　節　治　療 ■−■ 球部り、　Ｆ、　（ＣＩ）　Ｃｅ１ｅＳｔＯｎａ　Ｂｉｆａｓ　４ｍ上部手根骨 り、　Ｆ、　（Ｃ２） 球部Ｒ，Ｆ、　（Ｐｌ）　生理食塩水６ＩｎＩｌ上部手根骨Ｒ，Ｆ、　（Ｐ２） ＥＸＩＬ″Ｌ、（Ｈｌ）　ヒアルロン酸ナトリウム２ｄ中部手根骨り、　Ｆ、　 （Ｒ２） 球部Ｒ，Ｌ、　（ｌｌｃｌ）　Ｃｅ１ｅｓｔｏｎａ■−■Ｂｉｆａｓ　４ｄ 中部手根骨Ｒ，Ｆ、　（ＨＯ２）　ヒアルロン酸ナトリウム２ｄＯ日、１週間後 、２週間後の３回治療を行なった。０日、１週間後、及び２週間後の治療直前、 治療後３週、４週、６週及び８週〆後に滑液サンプルを採取した。さらに、治療 関節中のプロテオグリカン断片及びヒアルロン酸の総量の測定を行なうことが望 ましいので、アイソトープ標識したＰＶＰを注入しその希釈液を測定することに より滑液容量を測定した。１関節当りのプロテオグリカン及びヒアルロン酸ナト リウムの総量を以下示す。

本実験からコルチゾンが軟骨中の細胞外マトリックスを破壊するであろうことが 示され、よって既知のコルチゾンの軟骨変性作用及び／あるいはその軟骨細胞へ の負の作用が説明される。

分子量３，０００，０００のヒアルロン酸はこの作用及び持続時間を抑上記結果 から、コルチゾンが関節腔中のヒアルロンｆ２ｆｉを増加させることが明らかで ある。

関節腔内のブＯチオグリカン増加に対する上記作用が投与されたヒアルロン酸ナ トリウムの分子量と関連があるか否かを明らかにするために、以下の実験２を行 なった。

実験２ もはや競争馬として用いられていない馬３頭（馬Ｍ、馬Ａ及び馬旧を本試験に用 いた。各馬Ｑ以下に示した関節（疾患の臨床症状がない）に関節内投与した。

球部！、前肢（△） 球面ｒ、前肢（Ｂ） 上部手根骨ρ、前肢（Ｃ） 上部手根骨ｒ、前肢（Ｄ） 馬Ｍの上記関節に４ｄのＣｅ１ｅｓｔｏｎａ■−ＢｉｆａＳ■（コルチゾロン酸 ナトリウム（１％水溶液）を投与した。この治療を１週間間隔で繰り返した。滑 液中のプロテオグリカン断片濃度を測定するために治療前及び２回目の治療の１ 週間後にサンプルを採取した。

ある以外はまったく同様にして治療を行った。さらに馬Ｈに対まったく同様にし て治療を行った。実験１に類似した方法で上記結果から、プロテオグリカン放出 （変性）がヒアルロン酸ナトリウムの分子量が大きくなるにつれて抑制されるこ とが明らかである。分子量が３Ｘ１０６以上の場合、プロテオグリカンの放出は 何れの方法でもほとんど測定不可能である。

実験３ もはや訓練や競争用に用いられていない馬二頭を用いた。関節症の臨床症状を示 していない二頭の馬（１と２）の左右の前球部関節（ｆｏｒｅ−ｆｅｔｌｏｃｋ ）および−頭ヰの左右中手骨相（ｍｉｄｄｌｅｃａｒｐａｌ　ｄｉｖｉｓｉｏｎ ）（３）を対象とした。

滑液サンプルを採取後、各々の上記関節に１％カラゲニン溶液、ｙ　０．５ｄを 注入した。８時間後に、その関節の滑液を空にし、治療を行なった。右関節には ２ｄの１％ヒアルロン酸ナトリウる）滑膜炎を示していたプロテオグリカン測定 の結果を図１に態の改善を示し、２日以内に臨床症状は寛解した。ＮａＣｊ）で が追跡期間（注入後７日間）も残存した。この結果は非常に興味深く、カラゲナ ンがプロテオグリカン退行作用及び滑液からのプロテオグリカン除去に対する障 害作用を生ずるものと解釈されうる。

本発明の特許請求の範囲に記載されている通りである。

７７コチオク゛リヤ／　（ｍｇ／Ｉ） 国際刺青報告 ＩＩＩＩＩＩｉｉ＃言１ｏｎａｌ＾００””−””ＰＣＴ／Ｓｔ：８６１００１ ５３

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. １．プロテオグリカン低下により生じた進行性軟骨変性の治療にあたり関節内投 与される、分子量が３ｘ１０６ドルトン以上のヒアルロン酸を有効量含むヒアル ロン酸製剤。
2. ２．ステロイド性関節症の予防のために関節内投与される、分子量が３×１０６ ドルトン以上のヒアルロン酸製剤。