CN117180304A - 一种透明质酸粘多糖复合溶液、其制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种透明质酸粘多糖复合溶液，所述溶液包含900‑2000kDa的高分子量透明质酸，和50‑800kDa的低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖；并且，所述透明质酸粘多糖复合溶液经过紫外高温处理得到。本发明的透明质酸粘多糖复合溶液具有优良粘弹性和缓冲性并且降解速度慢，可有效治疗骨关节炎。本发明还提供所述复合溶液的制备方法及其制备用于治疗关节炎的药物中的用途。
Description
技术领域
本发明涉及医学领域，具体而言，本发明涉及一种通过高温紫外处理得到的透明质酸粘多糖复合溶液及其在关节炎治疗中的应用。
背景技术
骨关节炎是临床常见的慢性关节疾病之一。中国关节炎患者发病率仅次于高血压，据2015年统计，我国关节炎患者超1.3亿，占当年总人口10％以上，其中60岁以上人口发病率为50％，而75岁以上老年人的患病率更是高达80％。可预见的是，在未来随着人口老龄化及肥胖率的不断加剧，其发病率也将持续上升，并有着年轻化的趋势。
骨关节炎的病理发生过程较为缓慢，其主要表现为关节软骨磨损、骨赘形成、以及轻度滑膜炎等。具体在临床上，其症状表现为关节疼痛、肿胀、僵硬等。该病在发病早期往往症状较轻，但若未及时采取治疗，病情将逐渐加重，最终导致关节变形，并面临截骨、关节置换的风险。据统计，在骨关节炎的发病晚期，其致残率高达53％，其给患者的日常生活与工作带来巨大困扰。
目前临床上对轻中度骨关节炎药物治疗也主要是采取绥靖疗法，包括简单的通过局部给药的方式来使用镇痛或非甾体类药物等，其仅可在短时间内缓解症状，而无法从根源上减缓疾病进程。目前，对关节炎发病机制的研究转向并集中于病因及改善疾病微环境，进而寻找从根本上扭转关节炎病情发展的治疗手段。
透明质酸是关节软骨组成成分之一，也是关节液中的主要成分，其具有一定的粘弹性，以起到减震的作用，同时有助于维持软骨表面的润滑。骨关节炎患者关节液中透明质酸分子量和浓度对比正常人呈现出有不同程度的降低。而这一病理过程导致关节液对关节软骨的保护作用显著减弱，进而加速关节软骨退行性病变的发生。针对这一机制，通过向关节腔内注射天然透明质酸的治疗手段因其具有生物相容性、生物降解性和低免疫原性而备受关注，并被广泛应用于骨关节炎的治疗及软骨修复等领域。近年来多项研究指出，关节腔内注射透明质酸注射液，或手术治疗后辅助注射透明质酸产品对关节炎有着显著的治疗效果。透明质酸注射液在润滑关节的同时，更有利于改善关节软骨的生理功能，除此之前，透明质酸注射液还可有效地抑制关节腔内的局部炎症反应及氧化应激反应，起到消炎镇痛的作用。
市面现有关节注射液产品大多采用非交联型透明质酸或是化学交联型透明质酸材料。其中非交联型透明质酸因其易于被体内透明质酸酶代谢，故在体内的存续时间极为有限，往往需要较长的疗程，以及多次注射，对患者造成不便的同时也加大了反复注射导致感染的风险。化学交联型透明质酸产品通过添加交联剂或化学修饰使透明质酸分子间形成3D网络结构，更有利于其抵抗透明质酸酶的代谢作用，有效的延长了其在体内的存续时间。但其使用的交联剂往往具有一定毒性，存在安全隐患，而化学修饰透明质酸产率低且成本高。因此，开发一款能有效延长透明质酸体内降解周期、风险低、生物相容性好且生产效率高的关节炎治疗用注射针剂，成为临床医生及患者的一致呼声。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种针对关节炎治疗的透明质酸粘多糖溶液，该溶液兼具高分子量透明质酸优良粘弹性、缓冲性与交联型透明质酸降解速度缓慢等优点，以有效治疗关节炎、特别是骨关节炎。并且，在该透明质酸粘多糖溶液的制备过程中尽量少引入、甚至完全不借助于外源性交联剂，不采用化学修饰手段，以减少这类试剂或手段带来的毒性等安全隐患，同时制备过程应简单易操作，从而在保证优良治疗效果的同时还能降低生产难度与成本。
针对上述目的，本发明的技术方案如下：
一方面，本发明提供一种透明质酸粘多糖复合溶液，所述复合溶液包含900-2000kDa的高分子量透明质酸，和50-800kDa的低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖；并且，所述透明质酸粘多糖复合溶液经过紫外高温处理得到。
优选地，所述高分子量透明质酸的分子量为900-1500kDa，优选1000-1200kDa。优选地，所述低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖的分子量为80-600kDa，优选80-400kDa，更优选80-250kDa，进一步优选100-200kDa。优选地，所述其他高分子粘多糖为选自硫酸软骨素、海藻酸钠和明胶中的一种或多种。
优选地，所述高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖的质量比为1:0.1-0.1:1。优选地，以质量(g)体积(ml)比浓度计，高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖的在所述溶液中的浓度分别为0.5-3％、优选1-2％、更优选1.5％。
优选地，本发明提供的透明质酸粘多糖复合溶液为在水、生理盐水或渗透压为270-350mOsm/L的缓冲盐溶液中的溶液，所述缓冲盐溶液例如柠檬酸盐、甲酸盐、乙酸盐、邻苯二甲酸盐、枸橼酸盐、磷酸盐等缓冲液。进一步优选地，所述透明质酸粘多糖复合溶液为注射剂，优选为关节腔注射剂。
本发明提供的透明质酸粘多糖复合溶液经紫外高温处理得到，所述紫外高温处理为在60-200℃温度下以220-365nm紫外光照射5-60min。
优选地，所述紫外高温处理中，紫外光为250-300nm，优选260-280nm，进一步优选265nm。优选地，温度为80-120℃，优选100-120℃。优选地，照射时间为10-30min，优选10-20min，例如15min。
进一步地，所述透明质酸粘多糖复合溶液还可以包含治疗关节炎的其他药物，例如干细胞。优选地，所述干细胞为人或其他哺乳动物来源的间充质干细胞，例如脂肪组织来源间充质干细胞、脐带来源间充质干细胞、骨髓来源间充质干细胞、胎盘来源间充质干细胞、牙髓来源间充质干细胞，更优选脂肪组织来源间充质干细胞、脐带来源间充质干细胞。根据本发明的具体实施方式，所述干细胞为脂肪组织来源间充质干细胞。
另一方面，本发明提供上文所述的透明质酸粘多糖复合溶液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将900-2000kDa的高分子量透明质酸和50-800kDa的低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖混合溶解，得到溶液；
(2)将所述溶液进行紫外高温处理。
步骤(1)中，优选地，所述高分子量透明质酸的分子量为900-1500kDa，优选1000-1200kDa。优选地，所述低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖的分子量为80-600kDa，优选80-400kDa，更优选80-250kDa，进一步优选100-200kDa。优选地，所述其他高分子粘多糖为选自硫酸软骨素、海藻酸钠和明胶中的一种或多种。
步骤(1)中，优选地，所述高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖以质量比为1:0.1-0.1:1混合溶解。优选地，以质量(g)体积(ml)比浓度计，所述高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖以在所述溶液中的浓度分别为0.5-3％、优选1-2％、更优选1.5％混合溶解。优选地，所述高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖在水、生理盐水或渗透压为270-350mOsm/L的缓冲盐溶液中混合溶解，所述缓冲盐溶液例如柠檬酸盐、甲酸盐、乙酸盐、邻苯二甲酸盐、枸橼酸盐、磷酸盐等缓冲液。
步骤(2)中，优选地，所述紫外高温处理为在60-200℃温度下以220-365nm紫外光照射5-60min。优选地，紫外光为250-300nm，优选260-280nm，进一步优选265nm。优选地，温度为80-120℃，优选100-120℃。优选地，照射时间为10-30min，优选10-20min，例如15min。
优选地，根据上述制备方法得到的透明质酸粘多糖复合溶液为注射剂，优选为关节腔注射剂。
进一步地，所述制备方法还包括如下可选步骤：
(3)将步骤(2)经处理得到的透明质酸粘多糖复合溶液与其他药物，例如干细胞混合。
再一方面，本发明提供上述透明质酸粘多糖复合溶液在制备用于治疗关节炎的药物中的用途。
优选地，所述关节炎为骨关节炎，优选具有关节部位疼痛、关节活动受限、关节软骨过度磨损等症状。
优选地，所述药物为注射剂，优选为关节腔注射剂。
与现有技术相比，本发明提供了一种针对关节炎治疗的透明质酸粘多糖复合溶液。实验证明，该溶液不仅具有高分子量透明质酸优良粘弹性和缓冲性的特点，同时还具备了交联型透明质酸所特有的降解速度缓慢的特点，可有效用于骨关节炎的治疗。复合溶液中的高分子量的透明质酸组分具有与关节腔内滑液类似的粘弹性、内聚性和成膜性，不仅对关节起到润滑作用，其降解后产生的小分子部分还能加速软骨缺损部位的愈合进程。另一方面，低分子量的粘多糖还具有促进细胞增殖分化、预防和修复皮肤损伤的功效。
并且，本发明提供的透明质酸粘多糖复合溶液是通过高温紫外处理得到的。经过高温紫外的特殊处理，高分子量透明质酸与低分子量粘多糖之间还产生特异性的自组装。这一过程使得透明质酸粘多糖复合溶液相比单独的多组分或交联型透明质酸具有更长的体内降解时间，以及更为优秀的力学及生物学性能。进一步地，该透明质酸粘多糖复合溶液还可与其他试剂联用，进一步提升治疗效果。
此外，本发明提供的透明质酸粘多糖复合溶液在制备过程中没有借助于外源性交联剂，并且不采用化学修饰方法，通过特定的高温紫外处理实现了上述技术效果。其制备过程简单易于操作，在保证优良治疗效果的基础上极大的降低了生产难度及生产成本，具有极为广阔市场及临床应用潜力。
附图说明
图1：脂肪间充质干细胞在高温紫外照射后的透明质酸复合粘多糖溶液中培养28天时的细胞活性。
图2：软骨细胞与负载有脂肪间充质干细胞的透明质酸复合粘多糖溶液共培养1周后SOX9、一型及二型胶原蛋白基因的mRNA表达情况。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
实施例1在不同紫外波长下处理透明质酸粘多糖复合溶液
称取4份150mg高分子量透明质酸(分子量为1000kDa)及150mg低分子量透明质酸(分子量100kDa)分别溶解于5ml超纯水中过夜搅拌溶解。待完全溶解后分别将高低分子量透明质酸溶液完全混合，获得终浓度为3％的四组透明质酸粘多糖复合溶液并命名W1、W2、W3、W4。将其分别放入高温紫外容器中进行处理，设定紫外波长分别为220nm、254nm、265nm、330nm。加热温度分别为100℃，时间10分钟，即得不同性能的透明质酸粘多糖复合溶液。
实施例2在不同温度情况下紫外处理透明质酸粘多糖复合溶液
称取5份150mg高分子量透明质酸(分子量为1000kDa)及150mg低分子量透明质酸(分子量100kDa)分别溶解于5ml超纯水中过夜搅拌溶解。待完全溶解后分别将高低分子量透明质酸溶液完全混合，获得终浓度为3％的五组透明质酸粘多糖复合溶液并命名D1、D2、D3、D4、D5。将其分别放入高温紫外容器中进行处理，设定紫外波长265nm，对应加热温度分别为60、80、100、120、及140℃，时间10分钟，即得不同性能的透明质酸粘多糖复合溶液。
实施例3在不同时间情况下高温紫外处理透明质酸粘多糖复合溶液
称取5份150mg高分子量透明质酸(分子量为1000kDa)及150mg低分子量透明质酸(分子量100kDa)分别溶解于5ml超纯水中过夜搅拌溶解。待完全溶解后分别将高低分子量透明质酸溶液完全混合，获得终浓度为3％的五组透明质酸粘多糖复合溶液并命名T1、T2、T3、T4、T5。将其分别放入高温紫外容器中进行处理，设定紫外波长265nm，加热温度100℃，对应加热时间分别为5、10、15、30、60分钟，即得不同性能的透明质酸粘多糖复合溶液。
实施例4在不同分子量情况下高温紫外处理透明质酸粘多糖复合溶液
称取4份150mg高分子量透明质酸(分子量为1000kDa)及4份150mg低/中分子量透明质酸(分子量分别为100、200、400及800kDa)分别溶解于5ml超纯水中过夜搅拌溶解。另称取4份150mg低分子量透明质酸(分子量为100kDa)及4份150mg低/中分子量透明质酸(分子量分别为100、200、400及800kDa)分别溶解于5ml超纯水中过夜搅拌溶解。待完全溶解后分别将高低、高中、低低和低中分子量透明质酸溶液完全混合，获得终浓度为3％的八组透明质酸粘多糖复合溶液并对应命名M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7、M8。将其分别放入高温紫外容器中进行处理，设定温度紫外波长265nm，加热温度100℃，时间10分钟，即得不同性能的透明质酸粘多糖复合溶液。
实施例5使用高温紫外处理不同种类多糖构成的透明质酸粘多糖复合溶液
称取4份150mg高分子量透明质酸(分子量为1000kDa)及150mg低分子量透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠、明胶(分子量均为100kDa)各一份，分别溶解于5ml超纯水中过夜搅拌溶解。待完全溶解后分别将高分子量透明质酸溶液与低分子量粘多糖溶液完全混合，获得四组终浓度为3％的透明质酸粘多糖复合溶液并对应命名P1、P2、P3、P4。将其分别放入高温紫外容器中进行处理，设定温度紫外波长265nm，加热温度100℃，加热时间10分钟，即得不同性能的透明质酸粘多糖复合溶液。
实施例6力学性能评价
参考人体内关节滑液的特征力学性能，关节腔内注射液弹性模量的理想范围为100-500Pa，粘性模量的理想范围为30-100Pa。本测试将实施例1-5中制备的粘多糖复合溶液样品置于流变仪上，设定模拟体温环境37℃，在固定频率模式(1-20Hz)下进行蠕动扫描，检测获得水凝胶的弹性模量G’及粘性模量G”。具体结果数值参见表1-表5。
表1在不同紫外波长下高温处理得到的透明质酸粘多糖复合溶液的力学性能
| 样品 | W1 | W2 | W3 | W4 |
| G’(Pa) | 95±2.4 | 298±4.7 | 373±5.4 | 575±7.5 |
| G”(Pa) | 20±1.5 | 65±3.2 | 74±4.9 | 114±5.2 |
表2在不同温度情况下紫外处理得到的透明质酸粘多糖复合溶液的力学性能
| 样品 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 |
| G’(Pa) | 673.3±7.5 | 552.1±4.6 | 374.3±6.3 | 253.2±3.1 | 95.2±2.4 |
| G”(Pa) | 70.7±4.1 | 78.4±3.2 | 75.7±5.5 | 80.3±2.7 | 79.4±3.5 |
表3在不同时间情况下高温紫外处理得到的透明质酸粘多糖复合溶液的力学性能
| 样品 | T1 | T2 | T3 | T4 | T5 |
| G’(Pa) | 512.4±6.6 | 371.6±5.7 | 237.3±4.1 | 155.2±6.1 | 71.2±4.6 |
| G”(Pa) | 82.6±3.7 | 75.2±4.1 | 70.7±6.2 | 67.9±4.2 | 69.3±5.3 |
表4在不同分子量情况下高温紫外处理得到的透明质酸粘多糖复合溶液的力学性能
表5使用高温紫外处理不同种类多糖构成的透明质酸粘多糖复合溶液的力学性能
| 样品 | P1 | P2 | P3 | P4 |
| G’(Pa) | 372.4±4.3 | 401.6±5.7 | 397.3±4.1 | 355.2±6.1 |
| G”(Pa) | 75.1±2.9 | 80.4±6.5 | 79.8±2.2 | 87.4±8.1 |
由表中数据可知，由相对高分子量透明质酸与相对低分子量透明质酸或硫酸软骨素、海藻酸钠、明胶混合制成的粘多糖复合溶液在紫外高温处理后其粘弹性也均处于理想区间，适用于关节腔内注射。
实施例7对高温紫外处理所获得的透明质酸粘多糖复合溶液进行体外降解评价
本发明设计的经高温紫外处理所获得的透明质酸粘多糖复合溶液具有更长的体内有效作用时间，预期其体外降解时间为1-3个月。参考人体内关节滑液的微环境特征，将实施例1-5中所制备的粘多糖复合溶液样品W2、W3、D4、T3、T4、M2、M3、P2、P3、P4置于带通透性半透隔膜的上室中，并在下室中充满等渗磷酸盐缓冲液。随后将整个共培养系统置于37℃环境下进行恒温震荡孵育(～150rpm)。于固定时间点对上室样品进行取样并使用凝胶渗透色谱监测分子量(Mwt)，直至样品分子量完全降至1kDa以下，记录降解周期。具体结果参见表6。
表6.复合水凝胶制剂的体外降解测试结果
| 样品编号 | 复合水凝胶体外降解周期(周) |
| W2 | 10 |
| W3 | 11 |
| D4 | 9 |
| T3 | 6 |
| T4 | 3 |
| M2 | 12 |
| M3 | 13 |
| P2 | 10 |
| P3 | 11 |
| P4 | 3 |
由表中数据可知，除T4和P4两组外其余透明质酸复合粘多糖在经紫外高温处理后均可在体外环境下实现超过4周的降解时间，这表明其有效作用时间远远优于传统的膝关节透明质酸注射液。
实施例8对高温紫外处理所获得的透明质酸粘多糖复合溶液进行体内降解评价
本发明设计的经高温紫外处理所获得的透明质酸粘多糖复合溶液具有更长的体内有效作用时间。将实施例1-5中所制备的粘多糖复合溶液样品W2、W3、D4、T3、M2、M3、P2、P3各500μl注射入体重为200±10g的SD大鼠皮下。于固定时间点使用一次性注射器对注射部位取样，并使用凝胶渗透色谱监测分子量(Mwt)，直至样品分子量完全降至1kDa以下，记录降解周期。具体结果参见表7。
表7.复合水凝胶制剂的体内降解测试结果
| 样品编号 | 复合水凝胶体内降解周期(周) |
| W2 | 3 |
| W3 | 10 |
| D4 | 7 |
| T3 | 5 |
| M2 | 10 |
| M3 | 11 |
| P2 | 10 |
| P3 | 10 |
由表中数据可知，除W2组外其余透明质酸复合粘多糖在经紫外高温处理后均可在体内环境下实现超过4周的降解时间。
实施例9透明质酸粘多糖复合溶液包裹干细胞的活性评价
选择实施例8中W3、D4、T3、M2、M3、P2、P3已经过高温紫外处理的透明质酸粘多糖复合溶液进行包裹干细胞实验。首先于洁净台内收集脂肪来源间充质干细胞并进行细胞计数，分别使用七组处理后的粘多糖复合溶液及一组新鲜培养基重悬细胞，以获得1 x 106/mL细胞悬液。待混合均匀后于5-10分钟内转移至细胞培养器具中进行体外培养，其中纯培养基组为空白对照组。
结果表明，脂肪来源间充质干细胞在七组高温紫外处理的透明质酸粘多糖复合溶液体系内培养28天后均可保持较高的细胞活性并保持持续增殖的能力，其增殖速率显著高于传统的2D细胞培养体系，结果见图1。
实施例10包裹有间充质干细胞的透明质酸粘多糖复合溶液对软骨修复效果的体外评价
选择实施例9中七组负载有间充质干细胞的高温紫外处理后的透明质酸粘多糖溶液与软骨细胞进行体外共培养实验，并设置单独培养的软骨细胞作为空白对照。并在共培养后一周后使用荧光实时定量PCR检测软骨细胞中转录因子SOX9、一型及二型胶原蛋白基因的表达程度。mRNA表达情况采用相对ΔΔCT相对定量法计算。结果中所有检测的因子都以CT值来表示，并以β-actin为内参计算。所得结果即为相对空白对照组的表达倍数，结果见图2。
结果表明，负载有间充质干细胞的高温紫外处理后的透明质酸粘多糖复合溶液均可上调SOX9及二型胶原的表达水平并显著降低一型胶原的表达，具有加速新生胶原沉积，加速软骨修复的能力。
实施例11对高温紫外处理所获得的透明质酸粘多糖复合溶液的软骨修复效果评价
优选实施例1-5中所制备的粘多糖复合溶液样品为实验组，并选用商业化产品阿尔治作为阳性对照组，生理盐水作为阴性对照组。
1.样品制备：
如实施例1-5制备的实验组：
1)实验组1：0.3mL W3，即采用波长265nm，温度100℃，时间10分钟处理高分子量透明质酸(1000kDa)和低分子量透明质酸(100kDa)的粘多糖复合溶液；
2)实验组2：0.3mL P2，即采用波长265nm，温度100℃，时间10分钟处理高分子量透明质酸(1000kDa)和低分子量硫酸软骨素(100kDa)的粘多糖复合溶液；
3)实验组3：0.3mL P3，即采用波长265nm，温度100℃，时间10分钟处理高分子量透明质酸(1000kDa)和低分子量海藻酸钠(100kDa)的粘多糖复合溶液；
4)对照组1：高分子量透明质酸(1000kDa)和低分子量透明质酸(100kDa)的粘多糖复合溶液，按照实施例1制备，但未经高温紫外处理；
5)对照组2：高分子量透明质酸(1000kDa)和低分子量硫酸软骨素(100kDa)的粘多糖复合溶液，按照实施例5制备，但未经高温紫外处理；
6)对照组3：高分子量透明质酸(1000kDa)和低分子量海藻酸钠(100kDa)的粘多糖复合溶液，按照实施例4制备，但未经高温紫外处理；
7)阳性对照组：0.3mL阿尔治；
8)阴性对照组：0.3mL生理盐水。
2.实验动物分组：
取体重为2±0.1kg健康雄性新西兰白兔48只，将其随机分为8组，每组6只。
3.骨关节炎模型的制备与给药
通过前交叉韧带横断制造关节炎病变模型，在造模完成四周时对实验组兔关节腔连续五周每周分别注射实验组1、2、3及未经高温紫外处理的对照组1、2、3的粘多糖复合溶液0.3mL，阴性对照组兔关节腔注射0.3mL生理盐水，阳性对照组给予阿尔治0.3mL，期间持续观察动物五周。
4.样本的采集与检测
连续五周每周注射样品、阿尔治或生理盐水后，于最后一次注射七天后处死动物，取出关节液进行观测并鉴定其中总蛋白含量及葡聚糖含量，对关节部位组织进行大体观察，进行关节组织固定，制作石蜡切片，分别进行HE及番红固绿染色并于光镜下观察评估关节软骨损伤程度。
5.软骨修复结果评估：
1)根据OARSI宏观评分，实验组1、2、3、对照组1、2、3及阳性对照组对比阴性对照组均有显著差异，其中实验组1和2较其它对照组表现更为优秀。实验证实经高温紫外处理的透明质酸粘多糖复合溶液实施例对关节炎治疗效果表现优秀。
2)关节组织切片染色结果显示实验组1、2、3及对照组较阴性对照组在软骨面修复、软骨细胞形态等方面均显示有较好的疗效，对缓解软骨退行性变有明显效果。其中实验组1和2相较于其它组别在软骨损伤修复方面表现更佳，结果证实经高温紫外处理的透明质酸粘多糖复合溶液对关节炎的治疗效果及软骨的损伤修复效果极佳。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
Claims (11)
1.一种透明质酸粘多糖复合溶液，所述溶液包含900-2000kDa的高分子量透明质酸，和50-800kDa的低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖；并且，所述透明质酸粘多糖复合溶液经过紫外高温处理得到。
2.根据权利要求1所述的透明质酸粘多糖复合溶液，其特征在于，所述高分子量透明质酸的分子量为900-1500kDa，优选1000-1200kDa；
优选地，所述低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖的分子量为80-600kDa，优选80-400kDa，更优选80-250kDa，进一步优选100-200kDa；
优选地，所述其他高分子粘多糖为选自硫酸软骨素、海藻酸钠和明胶中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的透明质酸粘多糖复合溶液，其特征在于，所述透明质酸粘多糖复合溶液中，高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖的质量比为1:0.1-0.1:1；
优选地，以质量(g)体积(ml)比浓度计，所述高分子量透明质酸与/中低分子量透明质酸或其他高分子粘多糖的在所述溶液中的浓度分别为0.5-3％、优选1-2％、更优选1.5％；
优选地，所述透明质酸粘多糖复合溶液为在水、生理盐水或渗透压为270-350mOsm/L的缓冲盐溶液中的溶液；
优选地，所述透明质酸粘多糖复合溶液为注射剂，优选为关节腔注射剂。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的透明质酸粘多糖复合溶液，其特征在于，所述紫外高温处理为在60-200℃温度下以220-365nm紫外光照射5-60min；
优选地，所述紫外高温处理中，紫外光为250-300nm，优选260-280nm，进一步优选265nm；
优选地，所述紫外高温处理中，温度为80-120℃，优选100-120℃；
优选地，所述紫外高温处理中，时间为10-30min，优选10-20min。
5.一种透明质酸粘多糖复合溶液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将900-2000kDa的高分子量透明质酸和50-800kDa的低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖混合溶解，得到溶液；
(2)将所述溶液进行紫外高温处理。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述高分子量透明质酸的分子量为900-1500kDa，优选1000-1200kDa；
优选地，所述低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖的分子量为80-600kDa，优选80-400kDa，更优选80-250kDa，进一步优选100-200kDa；
优选地，所述其他高分子粘多糖为选自硫酸软骨素、海藻酸钠和明胶中的一种或多种。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖以质量比为1:0.1-0.1:1混合溶解；
优选地，以质量(g)体积(ml)比浓度计，所述高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖以在所述溶液中的浓度分别为0.5-3％、优选1-2％、更优选1.5％混合溶解；
优选地，所述高分子量透明质酸与低/中分子量透明质酸或其他高分子粘多糖在水、生理盐水或渗透压为270-350mOsm/L的缓冲盐溶液中混合溶解。
8.根据权利要求5至7中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述紫外高温处理为在60-200℃温度下以220-365nm紫外光照射5-60min；
优选地，所述紫外高温处理中，紫外光为250-300nm，优选260-280nm，进一步优选265nm；
优选地，所述紫外高温处理中，温度为80-120℃，优选100-120℃；
优选地，所述紫外高温处理中，时间为10-30min，优选10-20min；
优选地，所述透明质酸粘多糖复合溶液为注射剂，优选为关节腔注射剂。
9.权利要求1至4中任一项所述的透明质酸粘多糖复合溶液在制备用于治疗关节炎的药物中的用途。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含用于治疗关节炎的其他药物；
优选地，所述其他药物为干细胞。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述关节炎为骨关节炎，优选具有关节部位疼痛、关节活动受限、关节软骨过度磨损等症状；
优选地，所述药物为注射剂，优选为关节腔注射剂。
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