JPS62502119A - 抗アレルゲン性阻止抗体の力価が高い免疫グロブリン製剤、その製法及びアレルギ−治療への使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗アレルゲン性素子抗体の力価が高い免疫グロブリン製剤、その製法及びアレル ギー治療への使用 本発明は、特に抗アレルゲン性阻止抗体の力価が高い免疫グロブリン製剤組成物 と、この組成物の製法及びアレルギー治療への使用とに係わる。

アレルギーの発現は、免疫性作用因子細胞の表面と循環血液の中とに存在するＩ ｇＥタイプの抗体即ちレアギンの存在に関係がある。

感作された被験者の体内にはアレルゲンに特異的なこれらの■ｇＥ抗体が大量に 存在する。これらと同一のアレルゲンに対抗するＩ＝Ｃタイプの抗体はＩｇＥと アレルゲンとの出会いによって生じるアナフィラキシ−反応に対して保護作用を 及ぼす、これら＋ｇｃ抗体は阻止抗体と呼ばれる。この種の抗体の存在はアレル ギー反応を示さない被験者の血清において立証することができる。この種の抗体 はアレルゲン（花粉、ダニ又は膜翅類の毒素）抽出物による脱感作治療を行なう と増加し、この増加に伴って臨床症状が軽減する。

現時点ではアレルギー反応を軽減すべく種々のＩｇＣベース組成物が使用されて いる。これらの組成物はヒト血漿からの抽出によって得られる。一般的にはＨｅ １ｖｅｔｉｃａ　Ｃｈｉｍｉ−ｃａ　Ａｃｔａ（１９５４年）、３７．８６６〜 ８７３ページに記載のＫ１５ｔｌｅｒ　Ｐ。

Ｎｉｔｅｈｍａｎｎ　）１．及びＬｅｒｇｉｅｒ　ＩＡ、の抽出法を改良したＶ ｏｘ　Ｓａｎ−ｇｕｉｎｉｓ、１９６２年、ｔ、７、Ｖｏｌ、４．４１４〜４２ ４ページに記載のごときに１ｓｔｌｅｒ　Ｐ、及びＮｉｔｃｈｍａｎｎ　Ｈ，の 方法が使用されている。

この方法はアルコール分別（分画）に基づくものであり、アルコールの最終濃度 がｐＨ５，８５で１９又は２２％になるまで血漿にアルコールを加えることから なる。

形成される沈殿物は沈殿物Ａと称し、画分Ｉ（フィブリノ−ケン、因子ｖＩＩＩ ）トＩＩ＋ＩＩ■（■８Ｇ、因子１１、Ｖｌｌ、ＩＸ、Ｘ並びにα及びβグロブ リン）とを含む。

治療に使用される■ｇＧベース組成物は通常画分１１＋ＩＩＩから得られる。

この分別を研究した結果本発明者等は、沈殿物Ａ全体を特定条件下で処理すると 、抗アレルゲン性阻止抗体の力価がより高くてアレルギー症状をより効果的に軽 減させるようなＩｇＧベース組成物の選別が可能になることを発見した。

そこで本発明は、抗アレルゲン性免疫調節特性（ｐｒｏ−ｐｒｉ５ｔ５ｓ　ｉｍ ｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｒｉｃｅｓ）を有する新規のＩｇＧベース組成物を提供 する。

本発明はまた、血漿からこの種の組成物を選別するための方法も提供する。

本発明は更に、受動免疫療法によるアレルギー症状の治療におけるこれら組成物 の使用にも係わる。

本発明の１ｇＣベースの組成物はサブクラス４のＩｇＧ即ちＩｇ（：４の力価が 少なくとも約４％であり、抗アレルゲン性、特に抗花粉性及び抗ダニ性の阻止抗 体の力価が組成物１ｍｌ当たり少なくとも約２００（単位）であり、通常は少な くとも約１５ｕであることを特徴とする。

別の特徴として、本発明の１ｇＣベースの組成物はＩｇｔｌ、４の力価が少なく とも約４％である以外に、少なくとも約１０％のポリマー鎖率を有する。

本明細書ではポリマーとは、相互作用の態様に係わりなく、複数のＩｇＣモノマ ー単位からなる鎖を意味する。

別の特徴として本発明の１ｇＣベース組成物は、少なくとも約４％のＩｇＧ４力 価及び少なくとも約１０％のポリマー鎖率を有する他に、組成物１ｍｌ当たり約 ２０ｕ、通常は少なくとも約１５ｕの抗アレルゲン性、特に抗花粉性及び抗ダニ 性阻止抗体力価を有する。

前述の組成物は、本発明の実施態様の１つでは、平均８０〜８％特に約５％の１ ｇＭとを含む。

以後、ｒＩｇＧ組成物」とはＩｇＧをベースとする組成物であると理解されたい 。

本発明はまた、前述の特徴を満たすＩｇＧ組成物の分別法にも係わる。

この方法は、ヒト血漿のアルコール沈殿処理によって得た１８０画分に、好まし くは０４〜Ｃ１２の飽和線状脂肪酸を作用させ、可溶部分を回収することからな る。

尚、ヒト血漿は予め下記のごとく処理し得る：凍結血漿を＋５℃以下の温度まで 徐々に加熱する。血漿は沈殿物を含んだ溶液の形状を示す、この低温沈殿物（ｅ ｒｙｏ−ｐｒ≦ｃｉｐｉｔ≦）は特にＶＩＩＩ因子とフィブリノーゲンと、フィ ブロネクチンとを大量に含む、この低温沈殿物の上澄は沈殿物Ａの製造で血漿の 代わりに使用し得る。

有利な措置法の１つとして、回収した溶液は少なくとも１回の精製処理にかける 。

本発明の好ましい実施態様の１つでは、出発材料として使用される１８０画分は 、ｐＨ５，８５で最終濃度が１９〜２２％になるような量の９５％エタノールを 用いて温度を一１０℃まで漸減しながらヒト血漿をアルコール分別することによ って得られるタイプの両分である。

この種のアルコール分別はＫ１５ｔｌｅｒ及びＮｉｔｃｈｍａｎｎによって前出 の文献に記述されている。

血漿にアルコールを加えると沈殿物Ａが形成される。この沈殿物は画分１＋ＩＩ ＋ＩＩＩを含む。

沈殿物Ａは飽和脂肪酸を用いて分別処理すべく再溶解する。

有利にはｐｉ（４，５〜５．５、好ましくは約４．８の緩衝溶液を１５〜３０℃ 、好ましくは２２℃の温度で使用する。

ｇ／ｌ、好ましくは２０ｇ／ｌの割合で前記緩衝溶液に添加する。

この脂肪酸は乳濁液の形態で前記緩衝溶液に加えると有利である。

形成沈殿物は他の工業的用途で使用すべく例えば遠心分離によって集める。所望 の画分を含む上澄を回収する。

大きな選択性をもってＩｇＧを保護する特に好ましい脂肪酸にはカプリル酸があ る。

本発明のＩｇＧ組成物は治療に使用されるため、得られた脂肪酸溶液、より特定 的にはカプリル酸溶液は少なくとも１回の精製処理にかけると有利である。

この精製処理は特定的にはタンパク質に結合した脂肪酸及び過剰脂肪酸を除去す ることからなる。

これに関しては一変形例として、脂肪酸に対する親和力を持つアジュバント、特 にリン酸三カルシウムのごとき塩を使用すると有利である。ｐＨは予め約６．５ に調整すると有利である。

所望の分離を生起させるに十分なアジュバント濃度は約１〜５ｇ／ｌ、特に約２ 〜４ｇ／ｌである。

過剰アジュバントを例えば遠心分離によって除去し、このようにして清澄化した 溶液を回収し、且つ例えば活性炭を用いて濾過する。

別の変形例では、脂肪酸溶液を例えば活性炭で直接濾過し、リン酸三カルシウム の添加は行なわない。

所望であれば更に別の精製ステップによって脂肪酸と本発明のＩｇＧ組成物とを より完全に分離する。

適切な方法としては、アルコール沈殿法又はＩｇと脂肪酸との大きさの差異に基 づく分離法、例えば、透析、限外濾過もしくは正接限外濾過が挙げられる。

アルコール沈殿法を用いる場合には処理される溶液のｐＨを約７に調整すると有 利である。

アルコール沈殿に必要な条件としては、アルコール、有利にはエタノールを最終 濃度が約２０〜４０％、特に約３０％になるまで室温より低い温度で、好ましく は約Ｏ℃に冷却した溶液上に加えることが挙げられる。前記溶液の温度はアルコ ール添加中に一１０℃〜−１５℃、特に約−１２℃まで下げる。

形成した沈殿物を回収する。有利には前述のごとく清澄化したＩｇＧ溶液、又は アルコール沈殿の結果回収した沈殿物を注射用組成物を得るべく処理すると有利 である。

この処理は透析タイプ又は限外−過タイブの操作からなる。

良好な筒内注射条件は約１００ｇ／　Ｉのタンパク質を含む組成物を用いること によって得られる。この濃度は例えば、室温より低い温度、有利には約４℃で、 ３〜７ｇ／ｌ好ましくは約４．５ｇ／ｌの割合のＮａＣｌに対する透析により得 られる。

前記溶液の容量オスモル濃度（ｏｓｍｏｌａｒｉｔｅ）は例えばグリココルのご とき可溶化及び安定剤を用いて約２５０〜５００ｎ＋Ｏｓｍ／　ｌ、特に約３０ ０ｍＯｓｍ／ｌに調整する。

このようにすれば、沈殿物Ａ全体から極めて有用なＩｇＣ組成物を選別すること ができる。

本発明の組成物は抗アレルゲン性阻止抗体の力価が高く、且つ別の特徴としてＩ ｇＧポリマーの含量も高いため、アレルギーの治療に特に適している０本発明の 組成物は耐性も高いためより一層有利である。

そこで本発明は薬剤の有効成分としての前述のごとき組成物の使用にも係わる。

本発明の組成物を感作被験者に注射して行なった二重盲検法による臨床実験の結 果、本発明の組成物は受動免疫療法において効果的であり、あるものは季節的花 粉症に見られるアレルギー症状を著しく軽減させることが判明した。

本発明の薬剤はアレルギー特に花粉又は家屋内のほこりに起因する季節的花粉症 又は季節的もしくは非季節的アレルギー性鼻炎の治療に使用し得る。

枯草熱（花粉症）にかかった被験者の場合は一定の間隔をおいて繰り返し注射す ると、アレルギーの臨床症状が目、鼻又は呼吸器を問わずに予防又は軽減される 。

これらの薬剤は、脱感作の初期において特に有用な脱感作アジュバントを構成し 、脱感作を強化、補充するものであり、注入アレルゲン量のより急速な増加を可 能にすると共にステロイド療法の使用を回避せしめる。

この受動免疫療法は能動免疫療法（脱感作）を妨害することはない、抗アレルゲ ン性■ｇＧ抗体を注入しても脱感作時に観察されるＩｇＧ抗体の増加は阻止され ないのである。

従って本発明の薬剤は従来の又は最近の脱感作治療と併用することができる。

本発明の薬剤はまた、脱感作が行き、詰まった時、又は脱感作が遅い時にも使用 し得る。

本発明の薬剤は、ウィルス性疾患によって一時的免疫機能低下が生起した後で、 特に家屋内のほこりに起因する無周期けいれん性態カタル及びアレルギー性態− 気管−気管支炎のアレルギー症状が再発した時により大きな有用性を示す。

本発明の薬剤は筒内注射し得る。

本発明の薬剤は例えば、本発明のＩｇＣ組成物を１００ｇ／Ｉで含む溶液が５又 は１０ｍ１入っている筋向自己注射可能な注射器の形態であると有利である。

好ましいＩｇＧＭｌ成物は下記の特徴を有する：タンパク質を合計で有利には約 １００〜１７０ｇ／ｌ含むｐＨ約６．４〜７．２の無菌非発熱性無毒性組成物で あること、抗体活性が抗花粉の場合は１５ｕ／ａ＋１より大きく、抗ダニの場合 も１５ｕ／ｉｆより大きいこと。これらの組成物の電気泳動的純度が約９０％を 越え、容量オスモル濃度が約２５０〜５００ｍＯｓ＋＋＋／　ｌであること。

これらの溶液は有利にはナトリウムマーキュロチオラートのごとき防腐保存剤を 含む、この物質の用量は約１０，０００に対して１以下が適当である。これらの 溶液はまた、グリココルのごとき可溶化及び安定剤も含む、グリココルの適切な 濃度は約１８〜２５ｇ／ｌである。ナトリウム及び塩化物の含量は約７ｇ／ｌで ある。

一例として、ａ）中程度のアレルギー症状、及びｂ）免疫調節障害の軽い免疫欠 損症又は重度のアレルギー症状の場合に使用し得る用量を下記に示す。

ａ） 一被験者体重６０ｋｇ以下＝５ｍｌの注射を１週間に２回の割合で３週間行なう 。

一被験者体重６０ｋｇ以上：　１０ｎ＋Ｉの注射を１週間に２回の割合で３週間 行なう。

ｂ） 一被験者体重６０ｋｇ以下：５ｎ＋１の注射を１週間に３〜４回の割合で３週間 行なう。

−被験者体重６０に、以上：　１０ｍ１の注射を１週間に３〜４回の割合で３週 間行なう。

医師は必要であれば特定の事例に応じて前述の薬用量を変えることができる。

一４０℃で保存したプーリングフラスコ又はプーリング袋もしくは個々の袋から 取り出した血漿を注意深く解凍する。

冷凍室に通すことによって一１０℃及びＯ’Ｃに徐々に再加熱し、次いで＋３℃ の湯せんにより解凍し、最終温度を＋３℃に維持する。

タンパク質の割合とｐＨとを検査し、細菌テストを行ない且つ低温沈殿物を除去 した後で、前述のＮ１ｔｓｃｈ…ａｎｎＫｉｓｔ！ｅｒの方法に従いエタノール で分別処理を行なう。

このアルコール分別処理の主要ステップは下記の通りである。

−０，５％塩化ナトリウム溶液を用いてタンパク質の割合を５０ｇ／ｌに調整す る。

一最終濃度が１９％（又は２２％）になるような量の９５％エタノールを使用し 、温度を一１０℃まで徐々に低下させてｐＨ５，８５の免疫グロブリンを沈殿さ せる。

−免疫グロブリンを構成する沈殿物（沈殿物Ａ）を遠心分離にかけて回収し、必 要であれば ｍ−２５℃で凍結する。

画分Ｉｄｌ＋ＩＩＩを含む沈殿物Ａはペーストの形態で存在する。

２）立り二〇と敢Ｊう圧 ａ）孔ｉＬ 前記沈殿物を酢酸０．０５Ｍ溶液と酢酸ナトリウム０．０５Ｍ溶液との混合によ って得たｐＨ４，８〜４．９の酢酸／酢酸塩Ｍ街混合液中に再溶解する。

ペースト１ｋｇ当たり９１の緩衝液を使用する。２０〜２２℃の温度で緩衝液中 のペーストの漸進的分裂が観察される。

この混合液を均質化の目的で約２時間放置する。

タンパク質の割合は約２５ｇ／Ｉである。

ｂ＞ｉ乙去区１１肢 α：カプリル酸の添加 攪拌下で２０ｇ／１．のカプリル酸（純度９９％、ｒｅｆ　、１９３−Ｍｅｒｃ ｋ　）を加える。この添加の終了後も、更に４５分間攪拌を続ける。

−変形例ではカプリル酸（純度９９％ｒｅｆ、１９３−Ｍｅｒｃｋ）　２０Ｅｌ ／ｌを含む乳濁液を前記タンパク質溶液に攪拌しながら加える。Ｐ！拌はタンパ ク質の沈殿物が出現するまで続けるが、この操作の所要時間は前述の場合より短 い。

β二遠心分離 前記懸濁液を温度が低下しないようにして約５０１／ｈの割合で遠心分離にかけ る（装置：　５ｈａｒｐｌｅｓ　ＡＳ　１６）　、糖タンパク質とアルブミンと を含有している形成沈殿物を回収しく　４０ｋｇ当たり約３０ｋｇ＞　、他の工 業的用途、例えばアルブミン源としての用途に再使用する。上澄を回収する（約 ３６０〜３８０１）。

γ：ｐＨの調整 ＮａＯＨＩＮを用いて前記上澄のｐ）ｌを６．５に調整する。

δニリン酸三カルシウムの添加 上澄１１当たり２ｇの割合でリン酸三カルシウムを加え、３０分間攪拌する。

ε：遠心分離 前述の条件で遠心分離を実施して前記リン酸塩を除去する。

η：濾過 活性炭含有プレート（例えば５ｅｉｔｚ　ＡＫＳ４プレート）を用いて前記上澄 を濾過する。この操作の所要時間は約１時間である。

ζ：ｐＨの調整 ＮａＯＨによりｐＨを７に調整する。

λ：３０％エタノールによるＩｒＣの沈殿予め０℃に冷却□した前記溶液に濃度 が３０％になるような量のエタノールを加える。このアルコール添加の間に温度 を一１２℃まで下げる０本発明の方法の一変形例として、この沈殿処理の代わり に後述のステップしで説明するごとき限外濾過を行なってもよい。

ε：遠心分離 前記溶液を先ず’３０＋／ｈの割合で遠心分離にかける（装置は５ｈａｒｐｌｅ ｓ　ＡＳ　１−６を使用）。

沈殿物Ａ　４０ｋｇに対して約１２ｋｇの青味がかった粘稠性沈殿物が回収され る。

に：再溶解 前記沈殿物を５．１７ｋｔｒの割合でＮａＣｌ：８ｇ／ｌ、グリココル：４．５ ε／１（透析の場合う又はｌ１ｇ／ｌ　（限外濾過の場合）のＭ清液６０１に再 溶解する。

必要であればｐＨを７．５に調整する。タンパク質の割合は約５０ｇ／Ｉである 。

Ｌ：透析又は限外濾過 予め濾過した前記溶液を＋４℃で約１０時間ＮａＣＩ（４，５１／Ｉ）に対して 透析する。タンパク質の割合を調べる（約１４０ｇ／ｌ）。

グリココル（ｌ１ｇ／ｌ）を用いて前記溶液の容量オスモル濃度を約３００＋ａ Ｏｓｍ／　Ｉに調整する。ナトリウムメルチオラート（１ｐｌｏ、０００）を加 え、次いで細孔直径０．２２μのフィルタで無菌濾過する。

注射器に分配する前にタンパク質の割合を最低１００ｇ／Ｉ（実際には１０５〜 １００ｇ／ｌ）に調整する。希釈によって塩、グリココル及びメルチオラートの 用量を補足し、次いで無菌濾過する。これらの組成物は好ましくは約＋２〜＋６ ℃の温度で保存する。

本発明の方法の一変形例では、前述のステップγで得られた生成物を前述のステ ップηの方法に従い活性炭含有プレートで直接濾過し、ステップζ及びεは省略 する。この方法は特に上澄が乳状又は乳白状で存在しない場合に適している。

ＩＧ■＾ＩＭの　ム　びＩＧの　ブクース１Ｇ４の割ムの呼Ｍａｎｃｉｎｉ他に よりＩ＋ｍｕｎｏ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｎｏ３、ｐ、２３５．１９６５年に開 示されている技術に従って繰作を行なう、市販の特異的抗血清（例えばＮｏｒｄ ｉｃマーク又はオランダ国赤十字のもの）と、ＩｇＧ、１．＾又はＩｇＭの割合 がわかっている対照とを使用する。Ｉｇに４の対照はドナー５０人分のＩｇＧ４ 率０．４ｇ／Ｉの健全血液のプールからなる。

検査の結果本発明のＩｇＧ組成物は平均８５％のＴｇＧ、１０％のＩｇ＾及び５ ０％のＩＢＭを含んでいた。これら組成物のＩｇＧＪ率は４％以上である。

本発明の組成物６０ツトとアルコール分別したγグロブリン６０ツトとを比較す ると、ｔｇｃの割合は本発明の組成物で平均４．５％、前記グロブリンで２％で ある。対照血漿プールは３％のＩｇＧ４を含んでいた。

ＩＣイブの　アレル　ン　の２　の ａ）ｍ １−抗アレルゲン性抗体を固相放射線免疫テストにより測定する。共有結合によ ってアレルゲン抽出物を結合したニトロセルロースディスクを血清又は免疫グロ ブリンの希釈物と共にインキュベートする。何回も洗浄した後、前記ディスクを ヨード１２５で標識したブドウ球菌タンパク質Ａと共にインキュベートする　（ Ｒａｄｉｏ−ｉｓｏｔｏｐｅｓサービスＣ，Ｎ、Ｔ、Ｓ。

〉、前記タンパク質Ａは大きな親和力をもって９３％のヒトＩｇｃのＦｃ部分に 固定される。

１８時間の接触後、固定されなかったタンパク質Ａを一連の洗浄処理で溶離する 。

ＩｇＧに結合したタンパク質Ａの量をガンマ−線計数器によっＩｇＧに結合した タンパクＡの量をガンマ−線計数器によって測定し、反応に関与した放射能の合 計量に対する％で表わす。

２−Ｅｌｉｓａ　（Ｅｎｚｙｍｅ　１ｉｎｋｅｄ　ｉｍａ＋ｕｎｏ−ｓｏｒｂｅ ｎｔ　ａｓｓａｙ）タイプの別の方法に従い、禾本科の花粉から抽出したアレル ゲンを微量滴定プレートに吸収させ、次いで本発明の溶液と接触させる。アレル ゲンによって固定されたＩｇＧの存在は、アルカリ性ホスファターゼ又はペルオ キシダーゼで標識した免疫グロブリンによって示される。溶液の希釈度の関数と して光学的濃度を表わすシグマ状曲線が得られる。

これらの曲線に基づいて、治療用免疫グロブリン組成物中の抗アレルゲン性■ｇ Ｇが測定される。

ｂ）　Ｅの′′　に存　る１　の言 ドナー１００人分の血清プール（各血清２ｍ１）の活性を基準として使用する。

これは定義上１単位／＋＋＋ｌとして表わされる。

この活性は１／２００〜１／２５の血清希釈度で測定する。血清プールの希釈度 とタンパク質Ａの固定率との間の関係を示す基準曲線を形成する。

約１／１００の血清プール希釈度に対応するタンパク質の固定率を得るべく、治 療用γグロブリン溶液を希釈する。

前述の基準曲線に基づいて、当該治療溶液中に存在する抗アレルゲン性免疫グロ ブリンの１ｍｌ当たりの単位数を計ＩｇＧ抗体を、少なくとも１種類の禾本科花 粉（ｐｈＩｅｕｎｐｒａｔｅｎｓｅ又はＤａｃｔｙｌｉｓ　ｇｌｏｍｅｒａｔａ ）抽出物とダニ（Ｄｅｒａ＋ａｔｏ−ｐｈａｇｏｏｉｄｓ　ｐＬｅｒｏｎｙｓｓ ｉｎｕｓ）抽出物とに対する活性に関して測定する。

本発明のＩｇＧ組成物の抗アレルゲン性阻止抗体の力価は抗花粉が最低１５ｕ／ ｗｌｆ且つ抗ダニが最低１５ｕ／ｍｌである。

本発明の組成物１６０ツトの平均抗花粉活性は２３ｕ／ｍｌであり、抗ダニ活性 はそれと同じかやや大きい。

担九にへ訃丸 分子量２０，０００〜３５０，０００ダルトンのタンパク質を分離するゲルを用 いてパーミェーションクロマトグラフィを行なう。

下記のように操作すると後述の結果が得られた。

Ｕｌｔｒｏｇｅｌ八Ｃ＾３４（ＬへＢ）マークで市販されている製品をゲルとし て収容した直径２．５ｃｍの１００ｃｍカラムを使用する。

２．５ｍｌ中に１００ｍｇのタンパク質を配置する。

溶離速度は２０ｍ１八である。

ピークは２８０ｍｍで検出される（光学的濃度の測定）、ブラニメータによって 表面積を測定する。

得られた結果によれば、ポリマーの割合は本発明の■ｇＧ組成物では１０％より 大きく（５０ツトの平均１５％）、アルコールで分別した免疫グロブリン画分で はほとんど５％以下（１３０ツトの平均４．５％）である。

本発明の組成物のモノマー、ダイマー及びポリマー画分の組成を調べた結果、各 画分毎に免疫グロブリン組成が異なっていた。

夫々に測定したＩｇＣ、ＩｇＡ及びＩｇＭの種々の割合を次表に示す。

本発明の組成物　重合画分　「ダイマー」　「モノマー」１［？［；　８５％　 ５０％　７０％　９５％Ｉｇ＾　１０％　１０％　よ２５％　５％ＩＢＭ　５％ 　４０％　５５％　０％ 実施例２：本発゛明の組成物の溶液を用いて行なった臨床テストの結果 本発明のＩｇＣ組成物を１００ｇ／Ｉ含み、抗花粉力価が１５単位／ｍ１、抗ダ ニ力価が１５単位／ｎ＋Ｉであり且つ添加剤として１ｐ１０．０００のマーキュ ロチオラートを含む溶液を使用する。

使用した治療法プロトコールに従い、本発明の組成物を１週間に２０ｍ　ｌの割 合で５週間にわたり筋向注射した。この組成物は、アレルギーの原因と花粉又は ダニとの関連を判定せずに、アレルギー性被験者に対して使用した。活性の評価 は患者の症状を毎日観察することによって行なった。

臨床症状（ｊ！、目及び呼吸器）を記録した。この治療を受けた３３人の患者の 内１５人が極めてよい結果を示し、１０人が良い結果を示し、８人は好結果を示 さなかった。

別のテストで□は被験者１９人の内８人が極めて良い結果を示し、３人が良い結 果を示し、８人が好結果を示さなかった。

偽薬グループは本発明の組成物で治療した患者グループと異なり「スコア症状（ ｓｃｏｒｅ　ｓｙｍｐｔｓＩＩｌｅ）　Ｊを示し且つ薬剤消費が著しく少ない、 前記スコア症状は治療の最後の３週間は統計的に弱くなる。

種々のテストを行なった結果、本発明のＩｇ（、組成物の耐性は常に満足なもの であり、且つ患者の臨床症状に改善が見られた。

記録されたこれらのポジティブな結果はこれら被験者の免疫反応に対する調整活 性を立証するものである。

前述のごとき本発明の組成物を免疫調節活性の目的で使用することも本発明の範 囲内に含まれる。

これらの免疫調節現象は主に、特定の免疫欠損症、特に子供に見られるもの、及 び自己免疫病理学において重要な役割を果たす。

国際調査報告 −一一哨１師−一―−やＣＴ／ＦＲ８６１０００７５ＡｈＪＮＥＸ　Ｔｏ　ＴＦ ？＋　ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ　５ＥＡＲＣＨＲＥＰＯＲＴ　ＯＮ

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. １．ＩｇＧをベースとする製剤であって、サブクラス４のＩｇＧ即ちＩｇＧ４の 力価が少なくとも約４％であり、抗アレルゲン性、特に抗花粉性及び抗ダニ性の 阻止抗体の力価が製剤約１ｍｌ当たり少なくとも約２０単位であり、通常は少な くとも約１５単位であることを特徴とする組成物。
2. ２．少なくとも約４％のＩｇＧ４力価と、少なくとも約１０％のポリマー鎖率と を有することを特徴とするＩｇＧベース製剤。
3. ３．少なくとも約４％のＩｇＧ４力価と、少なくとも約１０％のポリマー鎖率と 、製剤１ｍｌ当たり約２０単位、通常は少なくとも約１５単位の抗アレルゲン性 、特に抗花粉性及び抗ダニ性阻止抗体力価とを有することを特徴とするＩｇＧベ ース製剤。
4. ４．平均８０〜９０％、特に約８５％のＩｇＧと、７〜１５％特に約１０％の１ ｇＡと、３〜８％特に約５％のＩｇＭとを含むことを特徴とする請求の範囲１か ら３のいずれかに記載の製剤。
5. ５．タンパク質を合計で有利には約１００〜１７０ｇ／１含み、抗体活性が抗花 粉の場合は１５単位／ｍｌより大きく、抗ダニの場合も１５単位／ｍｌより大き く、電気泳動的純度が約９０％を越え、容量オスモル濃度が約２５０〜５００ｍ Ｏｓｍ／ｌであるｐＨ約６．４〜７．２の無菌非発熱性無毒性組成物からなり、 有利にはナトリウムマーキュロチオラートのごとき防腐保存剤を特に１０，００ ０に対して１以下の用量で含むと共に、グリココルのごとき可溶化及び安定剤も 特に約１８〜２５ｇ／ｌの割合で含むことを特徴とする請求の範囲１から４のい ずれかに記載の１ｇＧベース製剤。
6. ６．処理又は未処理ヒト血漿のアルコール沈殿処理によって得た免疫グロブリン 画分に、好ましくはＣ４〜Ｃ１２の飽和線状脂肪酸を作用させ、可溶部分を有利 には少なくとも１回の精製ステツプにかけることからなるサブクラス４のＩｇＧ 製剤の製法。
7. ７．出発材料として使用されるＩｇＧ画分が、ｐＨ５．８５で最終濃度が１９〜 ２２％になるような量の９５％エタノールを用いて、温度を−１０℃まで漸減し ながら処理又は未処理ヒト血漿をアルコール分画し、このアルコール添加の結果 としてＩｇＧ含有沈殿物Ａを形成せしめることによって得られるタイプの画分で あることを特徴とする請求の範囲６に記載の製法。
8. ８．特にｐＨ４．５〜５．５好ましくは約４．８の緩衝溶液に再溶解した沈殿物 Ａを、この溶液のタンパク質濃度約２０〜３０ｇ／ｌ、好ましくは２５ｇ／ｌに 対して、特に約１０〜５０％、好ましくは沈殿物Ａ含有緩衝溶液１１当たり約２ ０ｇの飽和脂肪酸処理することを特徴とする請求の範囲６又は７に記載の製法。
9. ９．飽和脂肪酸としてカブリル酸を使用することを特徴とする請求の範囲６から ８のいずれかに記載の製法。
10. １０．脂肪酸に対する親和力を与えられたアジュバント、特にリン酸三カルシウ ムのごとき塩を好ましくは１〜５ｇ／ｌ、特に２〜４ｇ／ｌの割合で加えるよう な少なくとも１つの精製ステップ、及び／又はアルコール沈殿処理ステップ、及 び／又はＩｇと脂肪酸との大きさの差異に基づく分離、例えば透析もしくは限外 濾過も含むことを特徴とする請求の範囲６から９のいずれかに記載の製法。
11. １１．アルコール沈殿処理ステップを、アルコール、有利にはエタノールを量終 濃度が約２０〜４０％、特に約３０％になるまで室温より低い温度で、好ましく は約０℃に冷却した溶液に加え、この溶液の温度をアルコール添加中に−１０℃ 〜−１５℃、特に約−１２℃まで下げることによって実施し、透析を室温より低 い温度、有利には約４℃で、３〜７ｇ／ｌ好ましくは約４．５ｇ／ｌの割合のＮ ａＣｌに対して行ない、前記溶液の容量オスモル濃度を例えばグリココルのごと き可溶化及び安定剤を用いて約２５０〜５００ｍＯｓｍ／ｌ、特に約３００ｍＯ ｓｍ／ｌに調整することを特徴とする請求の範囲１０に記載の製法。
12. １２．有効成分中に請求の範囲１から５のいずれかに記載のＩｇＧ製剤を少なく とも１種類含むことを特徴とする薬剤。
13. １３．筋内注射し得る殺菌溶液の形態であることを特徴とする請求の範囲１２に 記載の薬剤。