JPS6236680B2 - - Google Patents
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- JPS6236680B2 JPS6236680B2 JP55021220A JP2122080A JPS6236680B2 JP S6236680 B2 JPS6236680 B2 JP S6236680B2 JP 55021220 A JP55021220 A JP 55021220A JP 2122080 A JP2122080 A JP 2122080A JP S6236680 B2 JPS6236680 B2 JP S6236680B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ドナー：ハイドロゲン−パーオキシ
ド・オキシドレダクターゼ（Donor:hydrogen−
peroxide oxidoreductase）、常用名ペルオキシダ
ーゼ（peroxidase）：以下単にペルオキシダーゼ
というおよび水素供与体を含有してなる測定試薬
を使用してなる脂質過酸化物の測定用組成物に関
する。
ド・オキシドレダクターゼ（Donor:hydrogen−
peroxide oxidoreductase）、常用名ペルオキシダ
ーゼ（peroxidase）：以下単にペルオキシダーゼ
というおよび水素供与体を含有してなる測定試薬
を使用してなる脂質過酸化物の測定用組成物に関
する。
脂質過酸化物とは、脂肪酸をはじめとする脂質
の過酸化物で、近年老化、アテローム性動脈硬化
症、発癌等、その毒性が問題となつている。従つ
て、インスタント食品、マーガリンやバター等の
食品、血清、尿等の生体液中の脂質過酸化物を容
易に、かつ精度よく測定することが食品の安全
性、病気の予防、診断および治療上極めて重要で
ある。
の過酸化物で、近年老化、アテローム性動脈硬化
症、発癌等、その毒性が問題となつている。従つ
て、インスタント食品、マーガリンやバター等の
食品、血清、尿等の生体液中の脂質過酸化物を容
易に、かつ精度よく測定することが食品の安全
性、病気の予防、診断および治療上極めて重要で
ある。
今日まで、脂質過酸化物の測定法として、ウイ
ラー法、ロダン鉄法、チオバルビツール酸法等が
知られている。しかし、これらの方法には何れも
一長一短があり、上記の目的を達成する上で満足
できるものではなかつた。即ち、ウイラー法
〔D.H.Wheeler、oil and soap、9、89〜97
(1932)〕とは、脂質過酸化物をヨウ化カリウムと
反応せしめてヨウ素を遊離せしめ、これをチオ硫
酸ナトリウム標準溶液で滴定する方法であるが、
この測定法では有機溶媒としてクロロホルムおよ
び酢酸を大量使用し、またヨウ化カリウム等の高
価な試薬を多量使用すること、さらに過酸化物価
の低いサンプルの場合にはサンプル量として５〜
10ｇを必要とすること、また滴定法であるために
操作がはん雑であり、その感度も他の方法に比べ
て余りよくない等の欠点があつた。またロダン鉄
法〔C.M.Stine、H.A.Harland、S.T.Caulter、R.
Jeness、J.Dairy.sci.、37．202（1954）〕とは、
脂質過酸化物にロダンアンモニウムおよび塩化第
一鉄を加えて生成するロダン鉄の青色を比色定量
する方法で、その測定感度はかなり良好である
が、発色後急速に退色するため正確に３分後に比
色することを必要とし、また精度が若干劣り、操
作に熟練を要し、さらに測定範囲が狭いために稀
釈率を決定するのに時間と労力を要する等の欠点
があつた。さらに、チオバルビツール酸法〔A.
L.Tappel、H.Zalkin、Arch、Biochem.Biophys.
、80、326(1959)〕とは、脂質過酸化物を酸性条
件下にて加熱することにより生じるマロンジアデ
ヒドをチオバルビツール酸と縮合せしめて生じる
赤色の色調を比色する方法で、その感度は極めて
良いが、マロンジアルデヒド以外のアルデヒドお
よびグルコース等もある程度発色するために、そ
れらを含むサンプルでは正確な値は得られず、ま
たその測定範囲も狭く、さらに酸性条件下加熱に
てマロンジアルデヒドを生じないような過酸化物
は本法では測定できない等の欠点があつた。
ラー法、ロダン鉄法、チオバルビツール酸法等が
知られている。しかし、これらの方法には何れも
一長一短があり、上記の目的を達成する上で満足
できるものではなかつた。即ち、ウイラー法
〔D.H.Wheeler、oil and soap、9、89〜97
(1932)〕とは、脂質過酸化物をヨウ化カリウムと
反応せしめてヨウ素を遊離せしめ、これをチオ硫
酸ナトリウム標準溶液で滴定する方法であるが、
この測定法では有機溶媒としてクロロホルムおよ
び酢酸を大量使用し、またヨウ化カリウム等の高
価な試薬を多量使用すること、さらに過酸化物価
の低いサンプルの場合にはサンプル量として５〜
10ｇを必要とすること、また滴定法であるために
操作がはん雑であり、その感度も他の方法に比べ
て余りよくない等の欠点があつた。またロダン鉄
法〔C.M.Stine、H.A.Harland、S.T.Caulter、R.
Jeness、J.Dairy.sci.、37．202（1954）〕とは、
脂質過酸化物にロダンアンモニウムおよび塩化第
一鉄を加えて生成するロダン鉄の青色を比色定量
する方法で、その測定感度はかなり良好である
が、発色後急速に退色するため正確に３分後に比
色することを必要とし、また精度が若干劣り、操
作に熟練を要し、さらに測定範囲が狭いために稀
釈率を決定するのに時間と労力を要する等の欠点
があつた。さらに、チオバルビツール酸法〔A.
L.Tappel、H.Zalkin、Arch、Biochem.Biophys.
、80、326(1959)〕とは、脂質過酸化物を酸性条
件下にて加熱することにより生じるマロンジアデ
ヒドをチオバルビツール酸と縮合せしめて生じる
赤色の色調を比色する方法で、その感度は極めて
良いが、マロンジアルデヒド以外のアルデヒドお
よびグルコース等もある程度発色するために、そ
れらを含むサンプルでは正確な値は得られず、ま
たその測定範囲も狭く、さらに酸性条件下加熱に
てマロンジアルデヒドを生じないような過酸化物
は本法では測定できない等の欠点があつた。
最近、各種酵素の特異性を利用して、生体液等
サンプル中の各種成分を容易に、かつ正確に測定
し、臨床診断等の目的に使用されている。即ち、
従来の化学的分析法では、多種類の類似化合物を
含むサンプル中における目的化合物のみを測定し
ようとする場合には、なるべく目的化合物を予め
他の成分から分離、抽出してから分析しないと正
確な値は望めず、そのために多くの労力、煩雑な
前処理、それに費する時間、費用等を必要として
いた。しかし、上記の酵素の特異性を利用してな
る酵素法では、目的化合物のみに作用する特異性
の高い、しかも純度の高い酵素を使用することに
より、目的化合物を他の類似化合物から分離する
ことなく、そのまま測定することを可能にした。
サンプル中の各種成分を容易に、かつ正確に測定
し、臨床診断等の目的に使用されている。即ち、
従来の化学的分析法では、多種類の類似化合物を
含むサンプル中における目的化合物のみを測定し
ようとする場合には、なるべく目的化合物を予め
他の成分から分離、抽出してから分析しないと正
確な値は望めず、そのために多くの労力、煩雑な
前処理、それに費する時間、費用等を必要として
いた。しかし、上記の酵素の特異性を利用してな
る酵素法では、目的化合物のみに作用する特異性
の高い、しかも純度の高い酵素を使用することに
より、目的化合物を他の類似化合物から分離する
ことなく、そのまま測定することを可能にした。
例えば、尿酸、グルコース、中性脂肪、コレス
テロール、クレアチン、過酸化水素等何れも酵素
法を適用して極めて容易に、しかも正確に測定で
きるようになつた。また過酸化水素に対しては、
主に西洋ワサビのペルオキシダーゼがその酵素と
して使用されているもので、西洋ワサビのペルオ
キシダーゼについては多くの研究者より詳細に研
究されており、その基質特異性に関しては、Paul
らにより非常に特異性が高いといわれ、即ち、こ
のペルオキシダーゼにより酵素作用を受ける化合
物としては過酸化物中、ジハイドロジエン
（H2O2＝過酸化水素）、モノメチルハイドロジエ
ン（CH3OOH）、モノエチルハイドロジエン
（C2H5OOH）の三種のみであると言われた〔K．
G.Paul、Theenzyme8 227（1963）〕。
テロール、クレアチン、過酸化水素等何れも酵素
法を適用して極めて容易に、しかも正確に測定で
きるようになつた。また過酸化水素に対しては、
主に西洋ワサビのペルオキシダーゼがその酵素と
して使用されているもので、西洋ワサビのペルオ
キシダーゼについては多くの研究者より詳細に研
究されており、その基質特異性に関しては、Paul
らにより非常に特異性が高いといわれ、即ち、こ
のペルオキシダーゼにより酵素作用を受ける化合
物としては過酸化物中、ジハイドロジエン
（H2O2＝過酸化水素）、モノメチルハイドロジエ
ン（CH3OOH）、モノエチルハイドロジエン
（C2H5OOH）の三種のみであると言われた〔K．
G.Paul、Theenzyme8 227（1963）〕。
しかし、脂質過酸化物については、今日まで、
この化合物に作用する酵素が全く知られていなか
つたために、上記のような酵素法による測定法は
全く考えられなかつた。そのため、種々の欠点は
あつたが、上述したような化学的分析法を採用せ
ざるを得なかった。
この化合物に作用する酵素が全く知られていなか
つたために、上記のような酵素法による測定法は
全く考えられなかつた。そのため、種々の欠点は
あつたが、上述したような化学的分析法を採用せ
ざるを得なかった。
本発明者らは、脂質過酸化物を含む食品の安全
衛生等の立場から脂質過酸化物を分解して、その
毒性を消去せしめるような作用を有する物質を検
索した結果、意外にもペルオキシダーゼが脂質過
酸化物を分解せしめることを知り、かつその際反
応系に適当な水素供与体が存在することにより、
その反応系は脂質過酸化物の量に応じて強く発色
することを知り、この現象に基いて脂質過酸化物
を測定し得る測定用組成物を完成した。
衛生等の立場から脂質過酸化物を分解して、その
毒性を消去せしめるような作用を有する物質を検
索した結果、意外にもペルオキシダーゼが脂質過
酸化物を分解せしめることを知り、かつその際反
応系に適当な水素供与体が存在することにより、
その反応系は脂質過酸化物の量に応じて強く発色
することを知り、この現象に基いて脂質過酸化物
を測定し得る測定用組成物を完成した。
本発明は上記の知見に基いて完成したもので、
ペルオキシダーゼおよび水素供与体と含有してな
る測定試薬であることを特徴とする脂質過酸化物
の測定用組成物である。
ペルオキシダーゼおよび水素供与体と含有してな
る測定試薬であることを特徴とする脂質過酸化物
の測定用組成物である。
まず本発明に使用されるペルオキシダーゼとし
ては、好ましくは市販されている西洋ワサビのペ
ルオキシダーゼであり、通常１テスト当り１単位
（1U.）以上あればよく、好ましくは1.5〜5U．程度
である。
ては、好ましくは市販されている西洋ワサビのペ
ルオキシダーゼであり、通常１テスト当り１単位
（1U.）以上あればよく、好ましくは1.5〜5U．程度
である。
また水素供与体としては、酸化され得る化合物
で、酸化により発色、螢光または発光する化合物
であればよく、通常発色試薬、螢光試薬または発
光試薬が使用される。発色試薬としては、公知の
種々の化合物が挙げられるが、例えばグアヤコー
ル、４−アミノアンチピリンとフエノール、４−
アミノアンチピリンとジメチルアニリン、３−メ
チル−２・ベンゾチアゾリノンとジメチルアニリ
ン、オルトジアニシジン等が挙られ、螢光試薬と
しては例えばホモバニリン酸、ｐ−ヒドロキシフ
エニル酢酸等が挙られ、発光試薬としてはルミノ
ール等が挙られるもので、これらの試薬は例示で
あつて何んら本発明の水素供与体を限定するもの
ではない。またこれらの水素供与体の使用量とし
ては、被検サンプル中に含有されている脂質過酸
化物に対して等モル以上、好ましくは２倍モル以
上を使用すればよく、適当使用するサンプル量、
サンプル中の脂質過酸化物の含有量により変更せ
しめればよい。
で、酸化により発色、螢光または発光する化合物
であればよく、通常発色試薬、螢光試薬または発
光試薬が使用される。発色試薬としては、公知の
種々の化合物が挙げられるが、例えばグアヤコー
ル、４−アミノアンチピリンとフエノール、４−
アミノアンチピリンとジメチルアニリン、３−メ
チル−２・ベンゾチアゾリノンとジメチルアニリ
ン、オルトジアニシジン等が挙られ、螢光試薬と
しては例えばホモバニリン酸、ｐ−ヒドロキシフ
エニル酢酸等が挙られ、発光試薬としてはルミノ
ール等が挙られるもので、これらの試薬は例示で
あつて何んら本発明の水素供与体を限定するもの
ではない。またこれらの水素供与体の使用量とし
ては、被検サンプル中に含有されている脂質過酸
化物に対して等モル以上、好ましくは２倍モル以
上を使用すればよく、適当使用するサンプル量、
サンプル中の脂質過酸化物の含有量により変更せ
しめればよい。
さらに反応に当つては、適当な反応媒体、例え
ばジメチルグルタル酸−水酸化ナトリウム緩衝
液、リン酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、その他
一般に用いられている種々の緩衝液が使用され、
通常pHとしては５〜９の範囲内にて目的を達成す
るpHを選べばよい。
ばジメチルグルタル酸−水酸化ナトリウム緩衝
液、リン酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、その他
一般に用いられている種々の緩衝液が使用され、
通常pHとしては５〜９の範囲内にて目的を達成す
るpHを選べばよい。
例えば、0.03％（Ｗ／Ｖ）４−アミノアンチピ
リン、0.04（Ｖ／Ｖ）ジメチルアニリンおよびペ
ルオキシダーゼ4.5U．含む50ｍＭジメチルグルタ
ル酸−水酸化ナトリウム緩衝液（pH6.0）からな
る組成を有する測定用組成物３mlを調整する。次
いで測定に当つて、一例を示せば、まず、37℃で
予備加温したのち、これに脂質過酸化物を含む被
検サンプル50μを加え、37℃で15分間反応し、
反応後呈色した度合を分光光度計にて測定波長、
例えば565nｍにより測定する。そして、そのと
きの吸光度から、サンプル中に含まれている脂質
過酸化物を算出するものである。
リン、0.04（Ｖ／Ｖ）ジメチルアニリンおよびペ
ルオキシダーゼ4.5U．含む50ｍＭジメチルグルタ
ル酸−水酸化ナトリウム緩衝液（pH6.0）からな
る組成を有する測定用組成物３mlを調整する。次
いで測定に当つて、一例を示せば、まず、37℃で
予備加温したのち、これに脂質過酸化物を含む被
検サンプル50μを加え、37℃で15分間反応し、
反応後呈色した度合を分光光度計にて測定波長、
例えば565nｍにより測定する。そして、そのと
きの吸光度から、サンプル中に含まれている脂質
過酸化物を算出するものである。
なお、本発明の反応を推定すれば、以下の式に
基くものと推定される。
基くものと推定される。
（但し、Ｒは脂質残基、AH2は水素供与体を示
す。） 例えば食品等に含有されているリノール酸は、
酸化により９−ハイドロペルオキシ−10・12−オ
クタデカジエノイツク・アシツド（９−hydro−
pevoxy−10・12−octadecadienoic acid）、また
は13−ハイドロペルオキシ−９・11−オクタデカ
ジエノイツク・アシツド（13−hydoro−peroxy
−９・１１−octadecadienoic acid）にて示される
二種類の脂質過酸化物を生じるもので、本発明に
おいてはこれらの脂質過酸化物が良好に測定でき
るものである。
す。） 例えば食品等に含有されているリノール酸は、
酸化により９−ハイドロペルオキシ−10・12−オ
クタデカジエノイツク・アシツド（９−hydro−
pevoxy−10・12−octadecadienoic acid）、また
は13−ハイドロペルオキシ−９・11−オクタデカ
ジエノイツク・アシツド（13−hydoro−peroxy
−９・１１−octadecadienoic acid）にて示される
二種類の脂質過酸化物を生じるもので、本発明に
おいてはこれらの脂質過酸化物が良好に測定でき
るものである。
さらに本発明において、反応pH、時間、測定波
長等については、それぞれ使用する試薬によつて
異なるもので、適宜好適な条件を設定すればよ
い。
長等については、それぞれ使用する試薬によつて
異なるもので、適宜好適な条件を設定すればよ
い。
次に実施例を挙げて本発明を具体的に述べる
が、本発明はこれによつて何んら限定されるもの
ではない。
が、本発明はこれによつて何んら限定されるもの
ではない。
実施例 １
0.03％（Ｗ／Ｖ）４−アミノアンチピリン、
0.04％（Ｖ／Ｖ）ジメチルアニリンおよび5.0Uペ
ルオキシダーゼ（西洋ワサビより、シグマ社製
100U／mg）を含む50mＭジメチルグルタル酸−
水酸化ナトリウム緩衝液（pH6.0）3.0mlよりなる
組成を有する測定用組成物を調整した。
0.04％（Ｖ／Ｖ）ジメチルアニリンおよび5.0Uペ
ルオキシダーゼ（西洋ワサビより、シグマ社製
100U／mg）を含む50mＭジメチルグルタル酸−
水酸化ナトリウム緩衝液（pH6.0）3.0mlよりなる
組成を有する測定用組成物を調整した。
次いでこの測定用組成物の溶液3.0mlづつを試
験管に分注し、５分間37℃にて予備加温した。こ
れに、リノール酸メチルエステルの過酸化物（純
度95％、過酸化物価5850mg／kg；Wheeler法にて
測定）の０〜４μmoles／mlのイソプロパノール
溶液50μを添加し、反応せしめ、反応開始後15
分間、37℃に保つた後発色した色調を測定波長
565nｍにより分光光度計を用いて測定した。
験管に分注し、５分間37℃にて予備加温した。こ
れに、リノール酸メチルエステルの過酸化物（純
度95％、過酸化物価5850mg／kg；Wheeler法にて
測定）の０〜４μmoles／mlのイソプロパノール
溶液50μを添加し、反応せしめ、反応開始後15
分間、37℃に保つた後発色した色調を測定波長
565nｍにより分光光度計を用いて測定した。
その結果、第１図に示す通りで、リノール酸メ
チルエステルの過酸化物量と吸光度の間に直接関
係が成立し、極めて良好に測定されたものであつ
た。
チルエステルの過酸化物量と吸光度の間に直接関
係が成立し、極めて良好に測定されたものであつ
た。
実施例 ２
0.01％（Ｗ／Ｖ）ホモバニリン酸、西洋ワサビ
ペルオキシターゼ5.0Uを含む100ｍＭリン酸緩衝
液（pH7.0）3.0mlよりなる組成の測定用組成物を
調整した。
ペルオキシターゼ5.0Uを含む100ｍＭリン酸緩衝
液（pH7.0）3.0mlよりなる組成の測定用組成物を
調整した。
次いでこの測定用組成物の溶液に、人血清50μ
ｌを添加し、37℃、15分間反応せしめた。反応後
励起波長315nｍ、螢光波長425nｍで螢光強度を
日立螢光光度計を用いて測定し、市販キツト（チ
オバルビツール酸法：和光純薬社製）による測定
値との相函を求めた。
ｌを添加し、37℃、15分間反応せしめた。反応後
励起波長315nｍ、螢光波長425nｍで螢光強度を
日立螢光光度計を用いて測定し、市販キツト（チ
オバルビツール酸法：和光純薬社製）による測定
値との相函を求めた。
なお、盲検は、反応液中、ペルオキシターゼを
除去したものを用い、同じ操作を行つた。
除去したものを用い、同じ操作を行つた。
その結果、第２図に示す通りで、非常に良好な
相函を示した。
相函を示した。
相函係数 γ＝0.934
ｙ＝0.93ｘ−0.2ｎ＝48
第１図は、リノール酸メチルエステルの過酸化
物の定量曲線を示し、第２図は人血清の脂質過酸
化物定量における本発明と市販品との相函図を示
す。
物の定量曲線を示し、第２図は人血清の脂質過酸
化物定量における本発明と市販品との相函図を示
す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ドナー：ハイドロゲン−パーオキシド・オキ
シドレダクターゼおよび水素供与体を含有してな
る測定試薬であることを特徴とする脂質過酸化物
の測定用組成物。 ２ ドナー：ハイドロゲン−パーオキシド・オキ
シドレダクターゼが、西洋ワサビよりのドナー：
ハイドロゲン−パーオキシド・オキシドレダクタ
ーゼである特許請求の範囲第１項記載の測定用組
成物。 ３ 水素供与体が、発色試薬、螢光試薬または発
光試薬である特許請求の範囲第１項または第２項
記載の測定用組成物。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2122080A JPS56117798A (en) | 1980-02-21 | 1980-02-21 | Kit for measuring lipoid peroxide |
| CA000370893A CA1156913A (en) | 1980-02-21 | 1981-02-13 | Assaying lipid peroxide in lipid compositions |
| US06/234,668 US4367285A (en) | 1980-02-21 | 1981-02-17 | Assaying lipid peroxide in lipid compositions |
| DE19813106006 DE3106006A1 (de) | 1980-02-21 | 1981-02-18 | "verfahren und praeparat zur bestimmung von lipidperoxiden" |
| GB8105316A GB2070768B (en) | 1980-02-21 | 1981-02-19 | Measuring lipid peroxides |
| IT19862/81A IT1136567B (it) | 1980-02-21 | 1981-02-19 | Corredo per la misurazione di perossidi lipidici |
| FR8103475A FR2476677A1 (fr) | 1980-02-21 | 1981-02-20 | Necessaire pour l'analyse quantitative des peroxydes de lipides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2122080A JPS56117798A (en) | 1980-02-21 | 1980-02-21 | Kit for measuring lipoid peroxide |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56117798A JPS56117798A (en) | 1981-09-16 |
| JPS6236680B2 true JPS6236680B2 (ja) | 1987-08-07 |
Family
ID=12048924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2122080A Granted JPS56117798A (en) | 1980-02-21 | 1980-02-21 | Kit for measuring lipoid peroxide |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4367285A (ja) |
| JP (1) | JPS56117798A (ja) |
| CA (1) | CA1156913A (ja) |
| DE (1) | DE3106006A1 (ja) |
| FR (1) | FR2476677A1 (ja) |
| GB (1) | GB2070768B (ja) |
| IT (1) | IT1136567B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01254572A (ja) * | 1988-03-31 | 1989-10-11 | Nippon Suisan Kaisha Ltd | 筒状包装体及びその製造方法 |
| JPH02296673A (ja) * | 1989-04-28 | 1990-12-07 | Kureha Chem Ind Co Ltd | フィルム包装体 |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3124594A1 (de) * | 1981-06-23 | 1983-01-05 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel und verfahren zum nachweis von wasserstoffperoxid |
| JPS58126798A (ja) * | 1982-01-21 | 1983-07-28 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規な不飽和脂肪酸の定量法 |
| EP0087959B1 (en) * | 1982-03-03 | 1985-09-25 | National Research Development Corporation | Enhanced luminescent and luminometric assay |
| DE3463395D1 (en) * | 1983-02-11 | 1987-06-04 | Nat Res Dev | Enhanced luminescent or luminometric assay |
| JPS63233374A (ja) * | 1987-03-20 | 1988-09-29 | Tohoku Denshi Sangyo Kk | 過酸化脂質の測定方法およびその測定装置 |
| US5989845A (en) * | 1996-04-05 | 1999-11-23 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5776719A (en) * | 1997-07-07 | 1998-07-07 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US6040151A (en) * | 1998-03-10 | 2000-03-21 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5958714A (en) * | 1996-10-02 | 1999-09-28 | Safety Associates, Inc. | Test kits for determining at least two specific analytes in foods and other complex matrices |
| FR2800874B1 (fr) * | 1999-11-09 | 2001-12-21 | Jean Morelle | Procede permettant de mettre rapidement en evidence le malondialdehyde (mda) dans l'urine, dans les produits alimentaires et cosmetiques |
| US7250304B2 (en) * | 2000-03-31 | 2007-07-31 | The Regents Of The University Of California | Functional assay of high-density lipoprotein |
| US6596544B1 (en) * | 2000-03-31 | 2003-07-22 | The Regents Of The University Of California | Functional assay of high-density lipoprotein |
| DK1272666T3 (da) * | 2000-03-31 | 2006-02-27 | Univ California | Et funktionsassay for höjdensitetslipoprotein |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5621600A (en) * | 1979-07-30 | 1981-02-28 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Determination of lipid peroxide |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3406016A (en) * | 1965-02-01 | 1968-10-15 | Raymond O. Foster | Means for detecting the fertile period |
| GB1104137A (en) * | 1966-02-08 | 1968-02-21 | Boehringer & Soehne Gmbh | Diagnostic agents |
| DK678474A (ja) * | 1974-02-15 | 1975-10-13 | Hoffmann La Roche | |
| NL7801413A (nl) * | 1977-03-09 | 1978-09-12 | Hoffmann La Roche | Peroxydasebepaling. |
| DE2716061C2 (de) * | 1977-04-09 | 1982-03-25 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Guajaconsäure A, Verfahren zu ihrer Herstellung und die Verwendung dieser Substanz als diagnostische Mittel |
| JPS5425892A (en) * | 1977-07-29 | 1979-02-27 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Quantitative determination of hydrogen peroxide |
| DE2856487A1 (de) * | 1977-12-29 | 1979-07-12 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Verfahren zur bestimmung von peroxidischen substanzen und hierfuer brauchbare verbindungen |
| JPS5520471A (en) * | 1978-08-01 | 1980-02-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Hydrogen peroxide quantifying method |
| US4273868A (en) * | 1979-02-23 | 1981-06-16 | Miles Laboratories, Inc. | Color stable glucose test |
| US4260393A (en) * | 1979-01-15 | 1981-04-07 | Technology Resources, Inc. | Method and combined test elements for detection of heme |
-
1980
- 1980-02-21 JP JP2122080A patent/JPS56117798A/ja active Granted
-
1981
- 1981-02-13 CA CA000370893A patent/CA1156913A/en not_active Expired
- 1981-02-17 US US06/234,668 patent/US4367285A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-02-18 DE DE19813106006 patent/DE3106006A1/de active Granted
- 1981-02-19 IT IT19862/81A patent/IT1136567B/it active
- 1981-02-19 GB GB8105316A patent/GB2070768B/en not_active Expired
- 1981-02-20 FR FR8103475A patent/FR2476677A1/fr active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5621600A (en) * | 1979-07-30 | 1981-02-28 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Determination of lipid peroxide |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01254572A (ja) * | 1988-03-31 | 1989-10-11 | Nippon Suisan Kaisha Ltd | 筒状包装体及びその製造方法 |
| JPH02296673A (ja) * | 1989-04-28 | 1990-12-07 | Kureha Chem Ind Co Ltd | フィルム包装体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT8119862A0 (it) | 1981-02-19 |
| DE3106006C2 (ja) | 1990-07-05 |
| GB2070768B (en) | 1983-09-28 |
| FR2476677A1 (fr) | 1981-08-28 |
| US4367285A (en) | 1983-01-04 |
| CA1156913A (en) | 1983-11-15 |
| FR2476677B1 (ja) | 1985-03-22 |
| JPS56117798A (en) | 1981-09-16 |
| IT1136567B (it) | 1986-09-03 |
| GB2070768A (en) | 1981-09-09 |
| DE3106006A1 (de) | 1982-01-07 |
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