JPS62294613A - 酸化ストレスが原因の病気の治療のための薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 本発明は、２−フェニル−１，２−ベンジソセレナゾー
ル−３（２Ｈ）−オン（属名：エプセレ７　（Ｅｂｓｅ
ｌｅｎ　）　）の新規利用、すなわち酸化性ストレスが
原因の病気の治療およびこの目的のための、この活性物
質を含む薬剤に関する。

２−フェニル−１，２−ペンシソセレナソール−３（２
Ｈ）−オンは、リウマチ病の治療に用いられる周知の化
合物であシ（ドイツ特許第３０２７０７３号、米国特許
第４３５２７９９号）、Ｂｕｌｌｅｔｉｎ　ｄｅ　ｌａ
　Ｓａｃ、　Ｃｈｉｍ、　ｄｅ　Ｆｒａｎｃｅ１９７６
年（７７８）、１１２４〜１１２６頁のウェーバ−、レ
ンソン（Ｒ，Ｗｅｂｅｒ　、　Ｍ、Ｒｅｎ５ｏｎ　）Ｋ
よる、２−メチルセレノ−２−フェニル−ベンズアミド
と五塩化燐との反応およびその後の加水分解による方法
に従って製造される。

酸化ストレス すべての好気性生体は、エネルギーを生みだすため酸素
を用いる。しかし、酸素使用の利点は、酸化プロセスが
治療されなければならないような障害の原因となりうる
危険性とも関連しているという多くの指摘がある。種々
の活性酸素代謝産物がそのような酸化プロセスに関係し
、また向時に、種々の生物的物質を功撃する。はとんど
すべての種類の化合物が、そのような酸素化合物により
酸化損傷をうける。例えば、核酸、蛋白質並びに遊離ア
ミノ酸、脂質および炭化水素化合物は酸素毒性により影
響をうける。人間は、その酸化と抗酸化プロセスの平衡
を保つため、精製された広範囲の、明らかＫとても重要
なシステムを有している（シーズ（Ｈ，５ｌｅｓ）の酸
化ストレス、２〜４頁、１９８５年参照）。

酸化プロセスへのこの平衡の移動は、２つの理由がある
。

１、活性酸素代謝産物の産出による抗酸化システムの過
負担、および／または ２、抗酸化システムの不全。

この結果は「酸化ストレス」という表現で要約された。

今日そのよう外平衡の移動は多くの異った病気、特に肝
炎のような炎症性の病気、てんかんまたはパーキンソン
病のようなＣＮＳ　（中枢神経系）の病気、ぜん息のよ
うな肺組織の病気、乾癖、抗癌剤の副作用、／４ラクア
ットのような化学薬品、および照射の副作用並びに心筋
梗塞のような冠状動脈循環の病気、が原因である。

２−フェニル−１，２−ペンジノセレナゾール−３（２
Ｈ）−オンが、以下の試験管内試験によって示されるよ
うに、酸化ストレスが原因の病気の治療に有効な化合物
であることは、驚くべき発見であった。

１、化学ルミネセンス 活性化細胞による、反応性酸素種の発生は、しばしば化
学ルミネセンス（ＣＬ）の測定により決定される。形成
したラジカル種は光子産出化学物質（ルミノール）と反
応し、生じる光放出は光電池により測定される。化学ル
ミネセンスは白血球の刺激の結果として検出でき、その
酸化縄胞毒性活性の程度を示すものである（プラン（Ｒ
，Ｃ。

Ａ１１ｏｎ）らのＢｌｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、
　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、＋４７巻、６７９頁、１９
７２年参照）。それは刺激された人の血小板（パンダイ
ク（Ｋ、　ｙＢｎＤｙｋｅ　）らのＭｉｃｒｏａｈｅｍ
、　Ｊ、、　２５巻、５１４頁、１９８０年参照）およ
びリンノ臂球（ヒュームス（Ｄ、Ａ。

Ｈｕｍｅ＠）らのＢｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、　１９８巻
、６６１頁、１９８１年）により発生し、並びに肝蔵、
脳および肺組織により、酸化ストレスへと至る（カデナ
（Ｅ、　Ｃａｄｅｎａｓ　）らの、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　
Ｊ、＋　１９２巻・３０３頁、１９８０年、ブバリス（
Ａ、　Ｂｏｖｅｒｉｓ　）らのＦ’ｅｄ、　Ｐｒｏｅ、
、　４０巻、１９５頁、１９８１年参照）。

結果として、化学ルミネセンスは酸化ストレスに対する
細胞または組織の反応であると考えてよい。エブセレン
が刺激されたマウスのマクロファージより（以下の表１
参照）または肝臓ミクロソームより発生した化学ルミネ
センスを抑制することが示された。その結果、エブセレ
ンは細胞または組織における酸化ストレスの生成物の抑
制剤として考えられる。

表１　試験管内におけるチモサンにオゾソニンを作用さ
せることにより、またはホルボールミリスチン酸アセテ
ート刺激マウス腹膜マクロファージにより発生したＣＬ
のエブセレンによる抑制 オプソニン化チモサン　　内在マクロファージ　　０．
６　　１２１．８　　４０ ６．０　　５３ １８．３　　９７ ホＨ−ルミリスチン　　／４’ルパム活性化　　　０．
１０酸アセテート　　　　　マクロファージ　　　　１
．０　　１７１０．０　　７６ だから、エブセレンは、照射や化学毒性のような、酸化
ストレスが過度におこるような種々の状態の治療のため
の主成分を提供する。

２、　ドキソルビシン誘発細胞毒性 多くの細胞毒性薬剤が癌の治療に用いられている（ヤン
グ（Ｒ，Ｃ，Ｙｏｕｎｇ　）らのＪ、Ｍｅｄ、、　３０
５巻、１３９頁、１９８１年参照）。その細胞毒性のた
め、それらの化合物は多くの副作用を引起す。

その化合物の１種であるドキソルビシンは、反応性ラジ
カルの発生により創作用を引起すと考えられている（ト
リトンおよびイー（Ｔ、Ｒ，Ｔｒｉｔｔｏｎａｎｄ　Ｇ
、　Ｙｅｓ　）の５ｃｉｅｎｃｅ　Ｎ　２１７巻、２４
８頁、１９８２年参照）。試験管内で、エブセレンが、
ドキソルビシンによる細胞致死の抑制剤であることが示
されている（表２参照）。Ｈ２ｏ２掃去剤であるカタラ
ーゼのような化合物もまた有効である。

以下余白 表２　　ＭＣＦ−７細胞におけるエブセレンによるドキ
ソルビシンが原因の細胞死の抑制 ドキソルビシン　ドキソルビシン　ドキソルビシン０．
４１１ｍｏｔ／ｌ　　０．５ＡｍｏＬ／ｌ　　０．７５
μｍｏＬ／１無　　　　　　　６０　　　　４９　　　
　　４２エブセレン （５μｍｏＬ／ｌ） カタラーゼ （３０００Ｕ／ｌＬ／）　　　　９１　　　８７　　　
６９これらのデータは、エブセレンがラジカル誘発化学
物質の損傷作用から細胞をまもることができることを示
している。環境毒性を引起す種々の化学物質は酸化ラジ
カルストレスを引起すことが知られているので、上記の
試験は、エブセレンが通常そのような酸化ストレス反応
の治療に有効であることを示している。

３、ジクワット（ｄｉｑｍａｔ　）誘発細胞毒性酸化還
元循環をうけると知られているビピリジリウム化合物で
あるジクワ、トの細胞毒性のメカニズムを調べるため、
折衷単離肝細胞システムを用いる。スー／量−オキシド
陰イオン０２−およびＨ２Ｏ２は、この肝細胞モデルに
おいて、ジクワットの循環還元および酸化の結果として
生ずる。折衷肝細胞はグルタチオン還元酵素活性を抑制
するため、１．３−ビス−（２−クロロエチル）−１−
二トロソウレアによる前処理により調製される。

この折衷肝細胞へのジクワ、トの添加は、細胞内グルタ
チオンレベル（ＧＳＨ）をすげやく消失させ、Ｇ５５Ｇ
形成を増やし、１時間以内に明らかな細胞死ヲ引起ス。

１，３−ビス−（２−クロロエチル）−１−二）ロソウ
レアで前処理しないで肝細胞に加えた場合、ジクワ、ト
はＧＳＨ／Ｇ５５Ｇレベルを変えず、細胞死にもならず
、ジクワット発生Ｈ２０゜に対する防護におけるグルタ
チオン還元酵素／−！ルオキシダーゼ酵素システムの重
要性を示している。インキュページ、ンへのグルタチオ
ン（ＧＳＨ）またはＮ−アセチルシスティンの添加は、
ジクワ、ト細胞毒性に対して折衷肝細胞を防護しない。

グルタチオン−４λオキシダーゼ活性を有するエブセレ
ンも細胞毒性に対し防護しないが、ジクワ。

トが関係した脂質過酸化を抑制する。しかし、エブセレ
ンがＧＳＨまたはＮ−７セチルシステインのどちらかと
組み合せて加えられた場合、細胞内ＧＳＨレベルのジク
ワ、トが関係した消失が明らかに遅れ、細胞死はインキ
ュページ、ンの少なくとも最後の３時間までみられなか
った。これらの結果は、エブセレンがジクワットおよび
酸素ラジカルおよびヒドロ、イルオキシドが基礎となる
プロセスによって誘発される酸化ストレスのもとての他
の病的状態を防ぐに有効であることを示している。

４、試験管内での脂質過酸化 体重的２００１の雌成体のウィスター系う、トを実験に
用いた。このＮＵ動物を標準条件、すなわち、ア／Ｉ／
）ロミン（Ａｌ　ｔｒｏｍｉｎ　）　飼料、通常の飲料
水、マクｏｏン（Ｍａｋｒｏｌｏｎ　）ケージ、１２時
間のリズムでのネオン照明、２２℃、および湿度３０チ
で飼育した。

ウレタン麻酔（体重時あたｖ２５％水溶液を５−腹腔内
）下、門脈を通して生理的ＮａＣｔ溶液で洗った後、肝
臓をとりだす。肝臓ミクロソームを超遠心により、通常
の方法で調製した０新鮮に調製したミクロソー゛ム懸濁
液を、すべてのテストに用いた。ミクロソーム画分をｐ
Ｈ７，４の燐酸バッファー溶液に懸濁した。肝臓ミクロ
ソームでのアスコルビン酸により１時間以内に刺激され
た脂質過酸化のテストは、標準方法で行なわれた。１時
間後に脂質過酸化の間に生じたマロンジアルデヒドを分
光測光で定量した。その濃度は脂質過酸化の間接的分量
として用いる。仁のテスト生成物を、テストサンプルに
１０μノのエタノール溶液となるよう加える（５ゴ中５
ダのミクロソーム蛋白）。

この少量のエタノール濃度は脂質過酸化に何の影響もカ
い。

対照として、アスコルビン酸刺激より生ずるマロンジア
ルデヒド濃度を１００係与える。テストする化合物を含
む各サンプルを、この対照に関して与える。得られたデ
ータより平均値子ＳＥＭを計算する。有意差をスチュー
デント分布のｔ検定によシ計算する。ｐ（０，０５の差
を有意であると考える。１時間後のアスコルビン酸によ
り刺激されたマロンジアルデヒドの形成（対照）は８４
．６±１４、７　ｎＭ／ｍ／　（平均上ＳＥＭ　：　ｎ
　：すべての対照、正常値、１００％値）であった。マ
ロンジアルデヒドの形成開始後に各テストサンプルにエ
ブセレンを、テストサンプルばあたり３６〜３６０　ｎ
Ｍの濃度で加えると、テスト化合物のすべての濃度で、
マロンジアルデヒド形成を減らした（７６〜９０係；各
ケースともｐ（０，００１）。

アスコルビン酸との反応開始前３０分に、テストサンプ
ル−あたりエブセレンを３６〜３６０　ｎＭの濃度で加
えた場合、３６　ｎＭ、ろゾテスト体積の濃度ではマロ
ンジアルデヒド形成は生じず、一方テスト体撰ばあたｔ
）７２〜３６０ｎＭを加えると、完全ナマロンジアルデ
ヒド形成の開始となった（ｐ（０，００１）。

このように、エブセレンは低濃度では脂質過酸化を抑制
し、ラジカル掃去剤として連鎖反応の初期の段階で働く
。だから、エブセレンは、過剰な脂質過酸化を形成する
酸化ストレスが原因の病的状態の抑制および治療に適当
であると考えられる。

５、グルタチオンイルオキシダーゼの性質試験管内テス
）において、チオール存在下で用いられた際の４ルオキ
シドの分解を触媒する２−フェニル−１，２−ベンジソ
セレナゾール−３（２Ｈ）−オン（エブセレン）の可能
性を示した。

このエブセレンの性質は補乳類の酵素、グルタチオンペ
ルオキシダーゼ（ＧＳＨ−ＰＸ）の性質と同じである。

だから、エブセレンは偽酵素として働く。

チオールの反応性はウェンデルの方法（Ａ。

Ｗｅｎｄｅｌ　、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ　ｒ　７７巻１３２５〜３３３頁（１９８１
年））によって測定する。

以下の偽酵素活性値を、基質として（１ｍｍｏｌ／Ａ’
）グルタチオン（ＧＳＨ）を用いて測定し、エブセレン
中セレニウムのｍｏｌ／ｌあたり３２ｇｇ　ＧＳＨ／ｍ
ｉｎのグルタチオンペルオキシダーゼユニｙ　ｔ’　（
Ｕ）で表した； Ｈ２Ｏ２，１，ｌＸ１０’ ｔ−ブチルヒドロ４ルオキシド（ｔ−ＢｕＯＯＨ）、１
．１７Ｘ１０’クモルヒドロペルオキシド（ＣｕＯＯＨ
）、１．７Ｘ１０’これらの条件下で、牛血法！Ｊ）ら
の精製ＧＳＨ−Ｐｘは、酵素結合セレニウムのモルあた
。り１０１０Ｕの活性を示した。

エブセレンおよび哨乳類のセレノ−酵素ＧＳＨ−Ｐｘは
、無機並びに種々の有機ヒドロペルオキシドの両方の反
応を触媒する。しかしエブセレンは天然の酵素とは異な
り、天然の酵素は基質としてのＧＳＨＫ高い特異性があ
るが、一方エプセレンは多くのその他のチオールとの反
応を触媒する。

柚々のチオールに対する偽酵素の活性 （ｔ−ＢｕＯＯＨ，ΔｔｏｇＧＳＨの代わりにエブセレ
ンΔｔｏｇ　Ｒ８Ｈ）グルタチオン　　　　　　　　　
　１．１７　ＸＩＯ’システィン　　　　　　　　　　
　２．５　　ＸＩＯ’Ｎ−アセチル−システィン　　　
　０．４７　Ｘｌ０６３−メルカプトプロピオン酸　　
　１．０５　Ｘｌ０６２−メルカグト酢酸エチルエステ
ル　　３．８　　Ｘｌ０６エリスロー１．４−ジメ４）
−２，３−プタンタろｔ−ル　４．６　　　ＸＩＯ’こ
のテストに従い、成人呼吸困難症（ＡＲＤＳ　）を含む
気管支系の病気または抗癌剤の副作用のような酸化スト
レスによる病気、てんかんまたはノ母−キンソン病のよ
うなＣＮＳ病、照射障害またはパラコートのような化学
物質の毒性作用、肝臓疾患、心筋梗塞のような心臓循環
病、または乾鮮に対する、貴重な予防薬および／または
治療薬として、エブセレンを用いてもよい。

さらに本発明は、活性物質としてエブセレンを含む薬剤
に関する。本発明に係る薬剤は腸内並びへ にθでｔたは直腸並びに非経口で投与される。それらは
、薬剤活性物質として、エブセレンのみまたは通常の薬
剤的に適当な担体物質を共に含む。

錠剤、糖衣錠、カプセル、座薬、顆粒、溶液、乳剤また
は懸濁液のような望ましい治療法に従って一回の投与形
として活性剤を含む薬剤が好ましい。

通常のエブセレンの投与量は１日あたｖ１０〜２０００
ｒｎ９の間であり、好ましくは３０〜３００■の間であ
り、１回でまたは数回にわけて投与してもよく、好まし
くは１日２〜３回にわけて投与してもよい。

本発明に係る薬剤の製造を以下の例によって説明する。

例１ 錠剤 ラクトース　　　　　　　　　　　　　１５０ダ結晶セ
ルロース　　　　　　　　　　　　５０１Ｒ９カルシウ
ムカＨキシメチルセルロース　　　　　　　　　７即ス
テアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　３Ｔｎ
９上記の成分を混合し、通常の方法で錠剤に圧縮する。

望むなら、この圧縮した粗製錠剤を通常の方法で包む。

例２ 錠剤 微結晶セルロース　　　　　　　　　　１５０１ｎ９キ
、チナ”）（Ｃｕｔｉｎａ（Ｒ））ＨＲ１５Ｗヒドロキ
シグロビルメチルセルロースフタレー・）　　　　　２
０１ｎ９例３ カプセル ラクトース　　　　　　　　　　　　　　１０２■結晶
セルロース　　　　　　　　　　　　５６ダコロイドシ
リシウムジオキシド　　　　　　　　２■上記成分を通
常の方法で混合し、粗砕し、ハードゼラチンのカプセル
につめる。

例４ カプセル タルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５１ｎ
９エアロゾル２００　　　　　　　　　　　１０ｒｎ９
以下余白

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、活性物質として２−フェニル−１，２−ベンジソセ
   レナゾール−３（２Ｈ）−オンを含んでなる、酸化スト
   レスが原因の病気の治療のための薬剤。