JPS62284261A - 植物病診断方法およびそのためのキット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 、　発明の分野 本発明は一般に植物病の診断、さらに詳しくは植物病の
野外診断に特に適合した方法、およびかかる方法を実施
するのに必要な材料を包含するキットに関する。

発明の背景 植物病は毎年多大の量の損害および経済的損失をひき起
こしている。例えば、フハイヵご胴枯れ病の如きある種
のタイプの草本病が特定の地域にわたって広範囲に拡が
ると、該感染地域においてはすべでの草本を除去し植え
換える必要があろう。

これが必ずしも必要ではないとしても、該病気を制圧す
るには多大の時間と処理が必要となろう。

該問題の大きさは、一部には、従前は該病気の徴候が目
に見えるようになるまではほとんどの植物病を診断する
のが非常に困難であった。あるいは出費がかさんで実行
できなかったという事実によってひき起こされたもので
ある。特に、該病気の徴候が野外で目に見えるようにな
る前には試験場において非常に少数の植物病しか診断で
きず。

かかる試験場テストのほとんどは費用および時間がかさ
むものである。その結果５これらのテストは、通常植物
が感染しでいるであろうと０１つ目で見える証拠が野外
であるまでは行われず；その結果、はとんどの場合、病
気が最終的に診断されるまでに、該病気はかなり拡がっ
てしまう。

多数の比較的簡便でかつ費用のかからない診断テストが
、感染の非常に初期の段階においてヒトおよび動物の病
気を検知する抗体を用いて開発ｌこ成功してきた。これ
を実行するには１選択された抗原すなわち病気をひき起
こす生物に対して反応性である。あるいはそれに対して
結合する第１の抗体を固体の支持部材上に固定し：次い
で選択された抗原°を有することが凝われる試料液体溶
液を該固定化抗体と接触させる。選択された抗原が該試
料液体溶液中に存在する場合は、抗゛原は第１の抗体と
反応し、それに対して結合した状態となって固体支持部
材上に抗原−抗体二成分複合体を形成する。

未反応物質を支持部材から洗浄した後、やはり選択され
た抗原に対して反応性である第２の標識抗体に該二成分
複合体を接触させる。二成分複合体が固体支持体上に存
在する場合は、この第２の抗体は複合体のうちの抗原成
分と反応し、それに対して結合した状態となっで抗体−
抗原−抗体三成分複合体を形成する。固体支持部材を洗
浄して選択された抗原と反応しないいずれの第２の抗体
も除去した後、いずれかの種類の分析法によって支持部
材を第２の抗体についてテストする。

前記で概略を説明したタイプの診断方法は、特定の病気
に関連する抗原を非常に高い信頼度をもって検知する多
クローンおよび単クローン抗体を用いて開発に成功して
きた。短寿命抗体を産生ずる細胞（通常は肝臓細胞）お
よび長寿命骨髄腫細胞を融合して長寿命抗体を合成する
細胞系を産生ずることによってハイブリドーマが形成さ
れるハイブリドーマ法と呼ばれる方法を介して単クロー
ンは生成される。゛各ハイブリッド細胞系は、非常に高
い特異性をもって単一のタイプの抗原に結合する能力を
有する特別のかつ特徴的な抗体を産生ずる。

融合して特定のハイブリドーマ細胞系を形成する細胞は
、かかる細胞系によって合成された単クローン抗体が選
択された抗原のみに結合するように選択するかまたは処
理できる。かかる抗体を前記方法にで第１または第２の
抗体のいずれかとして用いると、選択された抗原が試料
液体溶液中に存在する場合および存在する場合のみ、抗
体−抗原−抗体三成分複合体が非常に高い正確度をもっ
て固体支持部材上に形成される。適当な親和性および特
異性を有する多クローン抗体を用いて非常に高い正確度
をもって抗原を検知することもできる。

前記で概略を述べた一般的タイブの方法は、とりわけヒ
トおよび動物病についてテストする試験所にて、商業的
規模で成功して受用されてきた。

このタイプの方法の比較的簡単なことおよび正確なこと
のために、植物病を診断するための同様なテストを提供
することが望ましい。しかしながら。

植物病の野外診断のための、前記一般タイブの商業的に
実施可能な方法を開発するにおいては、特別な問題に遭
遇しできた。例えば、テストして植物が特定の抗原に感
染しているか否かを信頼性をもって示すことができる有
効量の植物試料を含有する適当な液体溶液を調製するた
めの簡単で、費用がかからず、しかも野外において有効
な方法を開発するのは困難であった。

発明の開示 本発明は、植物試料を採取し、該試料を第１および第２
の抽出パッド間で摩擦して試料から樹液を抽出し、該樹
液を該第１の抽出パッド上に収集する工程よりなること
を特徴とする植物を問題とする抗原の存在についてテス
トする方法を提供するものである。該樹液は第１の抽出
パッドから液体溶液に移し１次いでかかる液体溶液を問
題とする抗原の存在についてテストする。

第１の態様に詔いて、このテストは、該液体溶液を、問
題とする抗原に対して反応性である付加抗体右よび問題
とする抗原に対してやはり反応性である付着した捕獲抗
体を有する担体と接触させることによって行う。問題と
する抗原が液体溶液中に存在する場合、付加抗体−抗原
−捕獲抗体複合体が担体上に形成され、次いで該担体を
付加抗体の存在についてテストする。付加および捕獲抗
体は共に単クローン抗体であってよく、それらは共に多
クローン抗体であってよく、あるいは一方は単クローン
抗体であって他方は多クローン抗体であってよい。

本発明の方法を実施するためのキットは、第１および第
２の抽出パッド、ならびに前記液体溶液を保持し、かつ
第１の抽出パッドを受容してそこから樹液を液体溶液に
移すのに適合した容器よりなる。該キットは、さらに、
担体、付加抗体の備品、および担体を付加抗体の存在に
ついてテストするための手段を包含することができる。

好ましくは、キットのすべての部品は小さな、容易に運
べる箱の中にぴったりとかつ確実に収納する。

本発明の好ましい具体例を具体化しかつ示す添附図面を
参照し、以下の詳細な説明を考慮することより、本発明
のさらなる有利詔よび利点が明らかになるであろう。

第１図は本発明の方法を実施するのに用いる装置を示す
概略図である。

第２図は本発明を実施するのに用いることができるキッ
トの斜視図である。

本発明に関し、第１図を参照して、植物を問題トスる抗
原についてテストするには、植物の試料１０を採取し、
第１および第２の抽出パッド１２および１４間で摩擦し
て試料から樹液を抽出する。

該樹液を第１の抽出パッド１２上に収集し、好ましくは
容器または試験管２０内に保持された液体溶液１６にそ
こから移し１次いでその液体溶液を問題とする抗原の存
在についていずれかの適当な方法でテストする。

本発明の１の具体例において、液体溶液を問題とする抗
原に対して反応性である第１の標識抗体および問題とす
る抗原に対してやはり反応性である付着した第２の抗体
を有する担体２２と接触させることによって溶液１６を
問題とする抗原についてテストする。好ましくはビン２
４中の溶液から採取した第１の抗体を付加抗体と名付け
、第２の抗体を捕獲抗体と名付ける。問題とする抗原が
液体溶液１６中に存在する場合、抗原は付加抗体および
捕獲抗体の双方と反応し、それらに付着した状態となっ
で担体２２上にまたはそれに付着した付加抗体−抗原−
捕獲抗体複合体を形成する。

次いで担体２２を付加抗体の存在についてテストするが
、いずれの種類の分析法もこれを行うのに用いることが
できる。

好ましくは本発明の実施で用いる担体２２は、ディツプ
スティックと名付ける薄（細長いスティック２６を包含
し、このスティックの第１の端部には捕獲抗体を含有す
る膜３０を装備する。単にスティックの第１の端部を下
げて容器２０中に入れて膜３０を液体溶液中に浸漬する
ことによって液体溶液１６をこの担体２２と接触させる
。捕獲抗体の液体溶液１６に対する適当な暴露を確実に
するには、好ましくは膜３０を液体溶液中に約２時間の
如き長時間の間浸漬したままにする。

担体２２を液体溶液１６中に浸漬すると、問題とする抗
原との反応およびそれへの付着以外の手段によって、通
常いくらかの付加抗体が担体に付着した状態となる。か
くしで、担体２２を液体溶液１６から取り出したとき１
問題とする抗原が液体溶液中に存在しない場合およびそ
れが担体に付着した状態となっていない場合でも、通常
付加抗体が担体上に存在するであろう。問題とする抗原
の不存在において、かかる未反応付加抗体の担体２２上
での存在は、それが担体上の問題とする抗原の存在につ
いて誤った結論に導く可能性があるので望ましくない。

本明細書中に記載する本発明の好ましい具体例においで
、具体的には、問題とする抗原もまた担体上に存在する
ことを間接的に示すような抗体を存在させで、担体２２
を付加抗体について直接テストする。これにより、担体
２２上に付加抗体は存在するが問題とする抗原は存在し
ない場合１問題とする抗原が担体上に存在すると誤って
結論する恐れがある。

この理由のため、好ましくは溶液１６から取り出した後
担体２２を慎重に洗浄しまたはすすいで未反応付加抗体
・・・・・・すなわち、問題とする抗原との反応以外の
手段によっで担体に付着しているすべての付加抗体を除
去する。この方法においては。

もし存在しても担体２２上に残存するすべての付加抗体
は問題とする抗原を介してそれに付着しており、付加抗
体が担体上に存在することを示すひき続いてのテストは
問題とする抗原もまたその担体上に存在することを信頼
性をもって示す。推奨される方法においては、担体２２
を溶液１６から取り出した後、担体、特に膜３０にビン
３２からのすすぎ溶液を慎重に散布し１次いで容器また
は試験管３６中の溶液３４中に約５分間浸漬し、次いて
再びビン３２からのすすぎ溶液を十分に散布する。

いずれの適当な方法も付加抗体の存在について担体２２
をテストするのに用いることができる。

例えば、付加抗体は１選択された酵素基質と反応して特
定の色を有する産生物を産生ずる酵素結合体を包含する
ことができ、膜３０は、この色が酵素の触媒活性の結果
膜３０上に生成したものかを見るための選択された酵素
基質を含有する溶液４２を有する容器または試験管４０
中ｌこ浸漬することができる。色が生じた場合、あるい
はある強度まで生じた場合、受用者は、付加抗体が担体
２２上に存在する、およびかくして問題とする抗原が担
体上におよび診断テストで用いた植物試料１０中に存在
すると結論することができる。逆に、この特定の色が生
じなかった場合、あるいはある強度まで生じなかった場
合、膜３ｏを溶液４２中に浸漬すると、付加抗体は担体
２２上に存在せず、植物試料１０には問題とする抗原が
ないことを示す。

この方法においては、膜３ｏ上に生じた色の強度も植物
試料１０が問題とする抗原を有する程度の指標である。

所望するならば、植物試料を抽出パッド１２および１４
間で摩擦することを除いた前記方法を用いてテストを行
うことができる。かかる陰性対照テストは、テスト方法
が適当になされているかどうかを決定するのに、および
もし存在するならば酵素基質および付加抗体−問題とす
る抗原−捕獲抗体複合体との反応以外の手段によって担
体２２が特定の色を生じる程度を示すのに望ましいもの
である。適当す濃度で問題とする抗原を含有するこきが
既知の液体溶液１６を用０）る陽性対照テストは抗原が
担体２２上で検知できることを確認するために行うこと
ができる。

本発明の実施においては種々のタイプの抽出パッドを用
いることができる。例えば、第１の抽出パッド１２は、
植物試料に対して摩擦されでいるときに第１の抽出パッ
ドに支持を与える裏材に連結した平らなシートの材料で
あってよい。この構成においては、パッド１２上に収集
された樹液は、第１の抽出パッドを裏材４４から取りは
ずし次いでこの抽出パッドを液体溶液中に入れることに
よってそこから液体溶液１６に移される。好ましくは、
次いで試験管を覆い、十分に振盪して抽出パッド１２上
のいずれの問題とする抗原の液体溶液１６への適当な移
動も確実とし；および、この後、試験管２０の覆をとり
、抽出パッド１２を試験管から単に取り出し、捨てる。

好ましくは、第１および第２の抽出パッド１２および１
４は共に研摩紙の平らなシートである。

しかしながら、抽出パッド１２および１４を、植物試料
が抽出パッド１２および１４間で摩擦されているとき、
あるいはパッド１２が溶液１６中にある場合のいずれか
に、破゛損する材料、あるいは破砕してしまう研摩剤か
ら製作するのを避けるのが望まし０）。実際に実施化さ
れてきた本発明の具体例においては、第１の抽出パッド
はしっかりした板紙裏材４４に剥離可能α状態で連結し
た約３／４インチ×２１／／８　インチのエメリー紙の
平らなシートであり、第２の抽出パッド１４は約１５／
／８インチ×１インチのエメリー紙の平らなシートであ
る。使用におＩＪｌては、第１の抽出パッドが完全に樹
液で覆われるまで単に植物試料１０をこれらの第１およ
び第２の抽出パッド間で摩擦し。

次いで第１の抽出パッドを支持裏材４４から剥離し、液
体溶液１６中に入れる。

本明細書中で開示する抽出パッド１２および１４は多数
の困難に見える目的を効果的に達成する。

これらのパッド１２および１４は植物試料１ｏの物理的
ζ元の形を、樹液および抗原をそこから抽出するのに必
要な程度まで破壊する。また、樹液および抗原は第１の
抽出パッド上に効果的に収集され、抽出樹液を保持また
は担持するためのざらなる別個の装置の必要性を排除す
る。同時に、第１の抽出パッド１２の研摩性にもかかわ
らず、抗原はこのパッドを通過して溶液１６中に入り、
これは多くの通常の分析法に非常によく適合した形態で
ある。第１の抽出パッド１２の大きさは液体溶液１６ｆ
こ加えられる樹液量をコントロールするものでよく、パ
ッド１２の大きさはテスト結果が信つぎ実とすることを
補助するように選択できる。さらに、抽出パッド１２お
よび１４は非常に小さく。

軽くかつ費用がかからない。

本発明の方法は比較的簡単であり、十分に訓練および実
習を受けていない者によっても実施できる。また１本法
は野外で行うのが非常に容易であり、費用のかかる１重
いまたは面倒な装置を必要としない。事実１本法を実施
するのに必要なすべでの装置は、あちこちに持ち運びが
非常に容易な、後記の小さな、軽量のキット中に装備す
ることができる。

第２図は本発明の方法を実施するのに使用することがで
きるキット５０を示し；一般に、該キットは、抽出パッ
ド１２および１４．溶液１６を保持する容器２０．およ
びその溶液を問題とするノ抗原の存在についてテストす
る手段を包含する。好ましくは、このテスト手段は付加
抗体を保持する担体２２およびビン２４を包含し、キッ
ト５０はさらに一対のすすぎビン３２（第２図には１個
のみ示す）、すすぎ用試験管３６、および呈色反応用試
験管４０を包含する。

抽出パッド１２および１４．溶液１６．ビン２４中の付
加抗体、担体２２、すすぎビン３２．およびすすぎ用試
験管３６は１問題とする抗原がテストした植物試料中に
存在する場合、付加抗体−抗原一捕獲抗体廐合体が担体
上に形成されるように前記の如くに用いる。キット５０
中に備える付加抗体はホースラデイシュ・ペルオキシダ
ーゼ結合体を包含し；担体２２上の付加抗体を検知する
には、キット５０の試験管４０にペルオキシダーゼ基質
を保持させ、キットには過酸化水素溶液の如き過酸化物
源を保持するビン５４を包含させる。

担体２２上の付加抗体を検知するには、ビン５４中の溶
液を適当なあらかじめ設定したレベルまで試験管４０中
の溶液に加え、担体２２上の膜３０を試験管４０中の混
合溶液中に挿入する。膜３０上に色が生じると、そのと
きは付加抗体がその上に存在するが；膜上に色が生じな
いと、そのときは膜には付加抗体および問題とする抗原
がない。

キット５０の好ましい具体例は、１０回分の診断テスト
用の必要物を保持するように設計される。

かくしで、キット５０は、各々１０個のパッド１２およ
び１４、試験管２０．３６および４０、ならびに担体２
２を包含し：ビン２４．３２．５２および５４はテスト
１０回用の十分量の材料を保持する。しかしながら、図
を簡単にするために、各々１個のパッド１２および１４
．試験管２０．３６および４０、ならびに担体２２のみ
を第２図に示す。各担体２２は第１の保護包み５６内に
包むことができ、各対の抽出パッド１２および１４は第
２の保護包み６０内に包むことができる。複数のバッグ
（図示せず）または他の容器を植物試料を収集および保
持するためにキット５０中に装備することができる。ビ
ン２４および５２は頂部放出開口を包含するフレキシブ
ルな絞り出しビンであってよく；ビン２４からの溶液は
簡単にそこから絞り出されて溶液１６中に入り、ビン５
２からの溶液はそこから絞り出されて試験管４ｏ中に入
る。

箱６４はキット５０の構成成分を保持するために備えら
れ、スチロホーム（ｓｔｙｒｏｆｏａｍ　）ベース６６
は各装置部品をキット中に充填し、積み込み、および取
り扱うのを容易にするために備えられる。ベース６６は
凹所２０ａ、３６ａ、４０ａ。

２４および５４ａを包含し；組立でた位置において、ベ
ース６６は、試験管２０．３６および４０が各々凹所２
０ａ、３６ａおよび４０ａ中に位置し、かつビン２４お
よび５４が各々凹所２４および５４ａ中に収納される状
態で１箱６４の底部に位置する。また、ベース６６は包
み５６を保持する凹所５６ａ、包み６０を保持する凹所
６０ａを包含し；箱６４はビン３２を確実に保持するた
めの部屋３２ａを数箱の端部に形成する。加えて。

理解されるであろう如く、好ましくは箱６４は。

すべてのキット５０の部品がぴったりとかつ確実にその
内に保持された状態で、閉じた位置まで折りたたまれる
。

第２図に示される抽出手段の具体例においで。

第１の抽出パッド１２は支持裏材４４に連結し。

第２の抽出パッド１４はそれ自身の支持裏材７２に連結
する。裏材７２は裏材４４に連結して第１および第２の
抽出パッド１２および１４をそれらが使用されるまで一
緒に保持し、裏材４４および７２間の連結個所にひきは
がし線７４が形成されて抽出パッドを使用するためにそ
れらの裏材をひきはがすのを補助することができる。

抽出パッド１２には中央の長手方向の折りたたみ線７６
を付すことができて、その全体の大きざを減少させるた
めに該パッドをこの線に沿って折りたたんで該抽出パッ
ドを試験管２０中に挿入するのを補助することができる
。第１の抽出パッド１２を裏材４４から剥離により取り
はずすことができる本発明の具体例においで、好ましく
は、これを行う場合、パッド１２の裏表面・・・・・・
すなわち。

支持裏材２６に直接接触しでいるその表面上にいくらか
の接着材料を残存させる。この接着剤は、抽出パッド１
２を線７６Ｇこ沿って折りたたんだ場合に裏表面の両側
を一緒に保持するために用いることができる点においで
役に立つものである。

液体溶液１６はトリス緩衝の食塩水の如き緩衝溶液であ
り：有利には、該溶液１６は問題とする抗原を抽出パッ
ド１２から抽出するのを補助するものである。また、溶
液１６には、付加抗体の担体２２への直接付着を抑制す
る通常ブロッキング剤と呼ばれる抗結合剤を配すること
ができる。好ましくは、溶液１６のｐＨは５と９の間で
あり。

この液体溶液のｐＨを約６．５および７．５間に保つの
が最善であると考えられる。

容器２４中の溶液は緩衝食塩水であり、好ましくは、蛋
白質を補充して溶液中の抗体を保護する。

好ましくは、容器２４中の溶液のｐＨは約５と９の間で
あり、さらに好ましくは、約６．５と７．５間に保持す
る。付加抗体はいずれの許容される方法にても容器２４
から溶液１６に移すことができる。

例えば、少量の溶液を容器２４からピペットまたは滴ビ
ン中に吸０上げ１次いでピペットまたは滴ビンから溶液
１６中に注入することができる。付加抗体を溶液１６に
添加した後、好ましくは試験管２０にキャップをつけ、
十分振数して付加抗体の溶液全体への適当な分配を確実
とする。ビン３２および試験管３６中の溶液も緩衝食塩
水であり。

同一の溶液をピノ３２および試験管３６の双方中に用い
ることができる。好ましくは、これらの溶゛液のｐＨは
５と９の間であり、かかるｐＨが６．５と７．５の間で
ある場合に最良の結果が得られると考えられる。

種々の別法タイプの担体を本発明の実施に用り）ること
ができる。例えば、担体は、試験管の内側表面に被覆し
た捕獲抗体を有するテスト試験管であってよく、あるい
は担体はビーズまたはディスクの内側表面上に被覆した
捕獲抗体を有するプラスチック製ビーズまたは丸いディ
スクよりなっでいてよ０）。また、担体は捕獲抗体を被
覆した多数のウェルを有するミクロ滴定プレートであっ
てよい。しかしながら、ディツプスティックは取り扱う
のがおよび洗浄するのが非常に容易であり、非常に効果
的であって価、格的にも有利であることが証明されてい
るので、かかるタイプの担体が好ましい。

好ましくは、膜３０は多量の抗体をはめ込んだニトロセ
ルロースまたはナイロン材料よりなり。

液膜は、その両面上に接着剤を有する平らなテープ製品
の如き通常の接着剤によってスティック２６に連結され
る。しかしながら１問題とする抗原または付加もしくは
捕獲抗体を破壊しまたは不活性とする接着剤を使用する
のを避けるべく注意すべきである。いずれの適当な方法
も抗体を膜３０にはめ込むのに用ＩＪ）ることができる
。好ましくは、捕獲抗体を膜３０中にはめ込むときまた
はその後に、膜をブロッキング剤で処理して捕獲抗体で
満たされていない膜上の抗体付着部位を満たす。このブ
ロッキング剤は、溶液１６中の遊離付加抗体・・・・・
・すなわち１問題とする抗原とまだ反応していαＧ）付
加抗体・・・・・・を膜３０から除去するのを補助する
。

通常の反射計（図示せず）をキット５０中に備えで膜３
０上に生ずる色がもしあればその強度を測定することが
でき：かかる計量器を用いる場合。

膜の大きさはそれを計量器について適当に用いることが
できるようにすべきである。側面ショルダー２２ａを担
体２２上に形成して膜３０が反射計中に挿入できる程度
を制限し、かくして該計量器中で膜を適当に位置させる
のを補助することができる。

本発明の実施においで、単クローンおよび多クローン抗
体の種スの組合せを用いることができる。

例えば、付加および捕獲抗体は共に単クローン抗体であ
ってよく２あるいはそれらは共に多クローン抗体であっ
てよい。別法として、付加抗体は単クローン抗体であっ
て捕獲抗体は多クローン抗体であってよく、あるいは捕
獲抗体は単クローン抗体であって付加抗体は多クローン
抗体であってもよい。

本発明の実施で用いる抗体は適当な方法で生成されある
いは得られる。例えば、１９８４年４月１９日出願の米
国特許出願７７３８１１号、および１９８５年８月８日
出願の８３４１９８号は本発明で用いることができる適
当な単クローン抗体のいくつかの製法を開示しでいる。

好ましくは付加抗体と共に用いる標識酵素はペルオキシ
デー・トベータガラクトシダーゼ、アルカリ性ホスファ
ターゼまたはウレアーゼよりなる群から選択される。ペ
ルオキシダーゼ用の適当な酵素基質は○−フェニルダミ
ン、０−トルアジン、４−クロロナフトールまたはＡＢ
ＴＳ　　を包含する。

ベータガラクトシダーゼ用の適当な酵素基質はパラもし
くはオルトニトロフェノール−ｄ−ガラクトシダーゼを
包含する。尿素はウレアーゼ用の適当は基質であり、パ
ラニトロフェノールホスフェートはアルカリ性ホスファ
ターゼ用の適当な基質である。

前記で具体的に記載したもの以外の数多くの適当な構成
を使用して溶液１６中の問題とする抗原の存在を検知す
ることができる。例えば、所望ならば、担体２２を溶液
１６と接触させて抗原−捕獲抗体複合体を担体上に生成
させ、次いで溶液１６中または別の溶液中のいずれかで
付加抗体と接触させて担体上に付加抗体−抗原−捕獲抗
体複合体を生成させることができる。また２問題とする
抗原自体が担体２２上で直接に検知可能である場合。

付加抗体の灰層は排除できる。

本発明の実施にお０）で用いる植物試料１０はいずれの
方法にでも採取することができる。例えば、植物が草本
である場合、該草木の葉、根または茎を切断し、あるい
は地面から引き抜き、植物試料として用いることができ
る。別法としで、植物が木である場合、葉を茨木からち
ぎりまたは切断して植物試料としで用いることができる
。用いる試料の特別のタイプにかかわらず、注意深くそ
れを同定し、試料を採取する植物の位置を注意深く記録
すべきである。

以上、本発明の好まし０）具体例について説明したが２
本発明の精神を逸脱することす＜１種々の変形および修
飾を加えることができることは当業者に明らかであり、
それらも本発明の範囲内のものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の方法を実施するのに用いる装置を示す
概略図である。 第２図は本発明を実施するのに用いることができるキッ
トの斜視図である。 図面中の主な符号は次のものを意味する。

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. （１）植物試料を採取し； 該試料を第１および第２の抽出パッド間で摩擦して該試
   料から樹液を抽出し； 該樹液を第１の抽出パッド上に収集し； 該樹液を第１の抽出パッドから液体溶液に移し；次いで 該液体溶液を問題とする抗原の存在についてテストする
   工程よりなることを特徴とする植物を問題とする抗原の
   存在についてテストする方法。
2. （２）該テストする工程が： 該液体溶液を問題とする抗原に対して反応性である付加
   抗体と接触させ； 該液体溶液を問題とする抗原に対してやはり反応性であ
   る付着した捕獲抗体を有する担体と接触させ、ここに問
   題とする抗原が液体溶液中に存在する場合は付加抗体−
   抗原−捕獲抗体複合体が該担体上に形成される工程を包
   含する前記第（１）項の方法。
3. （３）該第１の抽出パッドが取りはずし可能な状態で裏
   材に連結し；および 該移す工程が該第１の抽出パッドを裏材から取りはずし
   、次いで該第１の抽出パッドを該液体溶液中に入れる工
   程を包含する前記第（１）項または第（２）項のいずれ
   かの方法。
4. （４）該第１の抽出パッドが該裏材に剥離可能な状態で
   連結し；および 該取りはずす工程が該第１の抽出パッドを裏材から剥離
   する工程を包含する前記第（３）項の方法。
5. （５）該入れる工程が該第１の抽出パッドを該液体溶液
   中に浸漬する工程を包含する前記第（３）項または第（
   ４）項のいずれかの方法。
6. （６）第１および第２の抽出パッド間で摩擦した植物試
   料から樹液を抽出するのに適合した第１および第２の抽
   出パッドであつて、該第１のパッドがさらに該樹液を収
   集するのに適合したもの；液体溶液を保持するのに適合
   しかつ第１の抽出パッドを収容して樹液を第１の抽出パ
   ッドから液体溶液に移すのに適合した第１の容器；およ
   び該液体溶液を問題とする抗原の存在についてテストす
   る手段よりなることを特徴とする前記第（１）項の方法
   を実施するためのキット。
7. （７）さらに該第１の抽出パッド用の裏材よりなり、こ
   こに該第１の抽出パッドが該裏材に取りはずし可能な状
   態で連結している前記第（６）項のキット。
8. （８）該第１の抽出パッドが該裏材に剥離可能な状態で
   連結している前記第（７）項のキット。
9. （９）該第１の抽出パッドが折りたたみ線を有する研摩
   紙の平らなシートよりなつて該第１の抽出パッドを折り
   たたみ次いで該第１の抽出パッドを該第１の容器中に挿
   入するのを容易とする前記第（８）項のキット。
10. （１０）液体溶液をテストする該手段が： 問題とする抗原に対して反応性である付着した捕獲抗体
    を有し、および該第１の容器に挿入されて液体溶液に接
    触するのに適合し、問題とする抗原が液体溶液中に存在
    する場合は抗原−捕獲抗体複合体がその上に形成される
    担体； 液体溶液中で混合されるのに適合しかつ問題とする抗原
    に対してやはり反応性である付加抗体を保持し、ここに
    問題とする抗原が液体溶液中に存在する場合は付加抗体
    −抗原−捕獲抗体複合体が該担体上で形成される第２の
    容器；および 該担体を付加抗体の存在についてテストする手段を包含
    する前記第（６）項〜第（９）項のいずれか１つのキッ
    ト。
11. （１１）該担体が： 細長い部材；および 該細長い部材の第１の端部に付着した膜を包含し、ここ
    に該膜がそれに付着した捕獲抗体を有する前記第（１０
    ）項のキット。
12. （１２）支持裏材；および 該支持裏材に取りはずし可能な状態で連結し、植物試料
    から樹液を抽出しかつ該樹液を第１の抽出パッド上に収
    集するのに適合した第１および第２の抽出パッドよりな
    ることを特徴とする前記第（６）項のキットで使用する
    植物試料から樹液を抽出する装置。
13. （１３）該第１および第２の抽出パッドの各々が研摩紙
    の平らなシートであり；および第１の抽出パッドが剥離
    可能な状態で該支持裏材に連結している前記第（１２）
    項の装置。
14. （１４）第１の長手方向の端部を有する薄く細長いステ
    ィック；および 抗体がはめ込まれ、該スティックの第１の端部に連結し
    た薄い膜よりなることを特徴とする前記第（６）項のキ
    ットで用いる抗体担持用部材。
15. （１５）該膜上の色の強度を感知する計量器と共に用い
    、 ：ここに該スティックの第１の端部が左方および右方の
    側面シヨルダーを形成して該計量器に対してあらかじめ
    設定した位置に該スティックを入れるのを容易とし；お
    よび 該膜が該左方および右方シヨルダー間の中央に位置する
    前記第（１４）項の担持用部材。
16. （１６）さらに該膜を該スティックに連結する接着手段
    を包含し、該接着手段が： 接着剤を有しかつ該スティックに連結した第１の面；お
    よび 接着剤を有しかつ該膜に連結した、該第１の面の反対側
    の第２の面を包含するテープよりなる前記第（１４）項
    の担持用部材。