JPH07503536A - 同時薬物試験およびフィンガープリンティングアッセイ - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 同時薬物試験およびフィンガープリンティングアッセイ本発明の技術分野 本発明は、体液中の検体の存在または不存在を決定するのに用いられるイムノア ッセイを含む、リガンド−レセプタアッセイに関する。さらに特に、本発明の装 置および方法は、試験対象の同一性を確認することおよび、単一の試験装置を用 いて、体液中の少なくとも１種の検体の存在または不存在を決定することに関す る。。

発明の背景 長年にわたり、リガンド−レセプタアッセイの当業者は、抗原、抗体等の存在お よび／または不存在を検出する、有効、安価かつ信頼できる装置および方法をめ ていた。この技術は、このような装置を備える。

また、長年にわたり、当業者は、試験される試料が、実際にある個体から由来す ることを確認する装置および方法をめていた。多くの計画、若干の苦労、若干の 単純さが確立されて、試料が実際に特定の個体により生成されたことが立証され た。

同様に、多くの計画が存在して、特定の試験結果が特定のヒトと整合するのを妨 害する。

例えば、薬物試験は、現在では、体育、刑務所および作業場における慣例的な方 法である。実験計画は、個別の流体試料、例えば尿または血液を試験して、流体 試料中のある抗体の存在を決定することを含み：陽性の結果は、薬物を使用した ことを示す。

このような試験の間に発生した問題は、試験流体が、試験されるヒト以外のヒト から得られることがあること、または試験が実験室から戻った際に、試験流体が 混合され、失われるかまたは、そのヒトに関して特定的に同定されることができ ないことである。また、これらのアッセイは典型的に、適時な結果を得るのには 長くかかりすぎる。

上記したように、この検出手法の群の基礎を形成する原理は、ヒトの免疫系、即 ち哺乳類の、外来分子、代表的に巨大分子に応答する本質的な能力である。以下 、このような応答を顕現させることができる任意の分子を、抗原、例えば抗体生 成光（ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｇｅｎｅｒａｔｏｒ）と呼称する。抗原に応答して生 成されるタンパク質およびタンパク質フラグメントを、抗体または免疫グロブリ ンと呼称する。

発明の要約 本発明は、従来技術に固有の問題を、試料中の検体の存在または不存在を決定し 、試料を提供するヒトを特定的に同定するように特別に設計されたイムノアッセ イ装置を用いることにより克服する。

本発明は、試験方法および装置、さらに特に体液中の特定の抗原または特定の抗 体の存在を検出する方法および装置に関する。本発明はまた、個々の被検体の陽 性の同定を提供する。

本発明は、検体の存在または不存在を検出し、試験対象を同定するのに適する、 容易に取り扱うことができ、廃棄することができる試験パッドを提供する。例え ば、試験対象の指を、標識したリガンドで覆い、指を、特定の固定リガンド床を 有する膜基材上に押圧して、体液からの検体を採集し、この間同時にインクレス の（ｉｎｋｌｅｓｓ）　（特異的に結合する）被検体の見ることのできるフィン ガープリントを提供して、流体提供者の陽性の同定が確実に得られるようにする 。膜上に得られた、流体提供者のフィンガープリントはまた、試験を実施する際 に提供者の体液中に存在する薬物に関する情報を含む。この情報を記録または保 存して、必要な際に陽性同定をすることができる。

本発明の目的は、検体の存在または不存在に関して試料をアッセイし、一方、試 験される対象を同定することにある。以前は、このような試験は、試験する流体 を異なる容器にシフトさせ、離れた場所で試験するヒトからの流体を除去するこ とを含む、一連の試験により達成された。しばしば、試料の置き違えおよび／ま たは置き換えが、試験される流体の保護のチェーンに関して問題を開いた。

本発明の他の例において、反応媒体の種々の分離された領域は、特定の検体、例 えば薬物または薬物代謝産物に結合するかまたはこれを採集する免疫対（ＭＩＰ ）の特定の要素を含む。

種々の分離された領域は、種々に指定された検体に特異的であるＭＩＰを含み、 これにより、単一のアッセイにおいて１つ以上の検体を決定することができる。

本発明の方法および装置は、少量の信号発生剤のみが必要である点で特に有利で あり、これに対して、従来のフロースルーカセットにおいては；試験装置の表面 上の直接的な接触を維持する間に、圧力を加えることにより、試薬、特に信号発 生剤の局在化された濃度が維持され、これが反応速度を増加させ、例えば試験結 果が秒の程度対分またはこれより長い程度で得られ；若干の例においては、標識 に結合することにより抗原の形状が変化しないため、第２抗体の標識（第１抗体 または抗原の標識に対して）により、アッセイの反応時間が増加する。

！−景 ！、リガンドーレセプタアッセイ：リガンドと、リガンドに結合する物質との間 に形成した複合体の検出を含む任意の手法。

好ましくは、複合体の１つの要素は検体である。好ましいりガント−レセプタア ッセイはイムノアッセイである。リガンド−レセプタアッセイは、体液中のリガ ンドの存在、不存在、量および濃度を決定するのに用いることができる。リガン ド−レセプタアッセイは、拮抗的または非拮抗的、同質または非同質、直接また は間接、あるいは組み合わされた検出手法とすることができ、例えば抗体を小さ い化学的成分、例えばビオチンまたはジニトロフェノール（ＤＮＰ）と結合させ る手法とすることができる。

アッセイの手順の間に、すべての少なくとも１つの所定のりガントまたはりガン トレセプタが所定の位置に残留することが好ましい。リガンドまたはりガントレ セプタを固定する任意の手法は、本発明に含まれる。好適例において、リガンド またはりガントレセプタは、固相上または固相中に結合されるかまたは固定され る。代表的な固定機構は、共有結合、非共有結合、化学結合、物理的エントラッ プメントおよび吸着を含むがこれらに限定されない。

２、リガンド：検体自体または、試料中の検体の存在を推論するのに用いること ができる物質を意味する。リガンド−レセプタは、特異的な結合パートナ、例え ばリガンドが存在する物質を意味する。ここて用いるリガンドおよびリガンド− レセプタは、免疫対（ＭＩＰ）の要素とすることかできる。リガンドおよびリガ ンド−レセプタは、付着体、ホルモン、抗原、抗体（抗抗体および抗体フラグメ ント、例えばＦａｂまたはＦｃを含む）、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド 、核酸および複合体または上記の任意のものの代謝産物を含んでいてもよい。

リガンドまたはりガント−レセプタは、標識されていてもされていなくてもよい 。

３、検体：アッセイされる物質であり、用いられる特定のアッセイに依存して、 リガンドまたはりガント−レセプタであることができる。例示的な検体は、薬物 、タンパク質、付着体、ホルモンおよび他の単独であるかまたはタンパク質と結 合した分子を含むがこれらに限定されない。付着体は、小分子量の物質、例えば 第１にタンパク質と結合して例えば抗原性または免疫原性とならなければならな いいくつかの薬物または薬物代謝産物である。例えば、いくつかの薬物は、遊離 および結合形態の両方で体中に見出され、これか次に、慢性薬物乱用者と急性薬 物乱用者とを区別する可能性を提供する。４１体液：検体の存在または不存在を 決定するために試験される任意の体内の流体であり、血液または血液成分、唾液 、尿を含むがこれらに限定されない。

５、信号発生剤：検出可能な信号を発生するのに用いることができる、リガンド −レセプタアッセイにおいて用いられる任意の薬剤。好ましい信号発生剤は、容 易に識別できる信号、さらに好ましくは色を提供する。

図面の簡単な説明 図１は、本発明のアッセイ装置の平面図である。

図２は、抗原の存在または不存在および、試験対象を同定するのに適するパター ンの形成に関する試験を実施した結果を例示する、本発明のアッセイ装置の平面 図である。

図３は、反応媒体中ての反応帯域を示す、本発明のアッセイ装置の拡大断面図で ある。

回４は、反応媒体中での対照帯域を示す、本発明のアッセイ装置の拡大断面図で ある。

図５は、陽性の試験結果を示す、本発明のアッセイ装置の拡大断面図である。

図６は、陰性の試験結果を示す、本発明のアッセイ装置の拡大断面図である。

図７は、本発明のアッセイ装置方法を接触させることを例示する、本発明のアッ セイ装置の断面の要約図である。

図８は、反応媒体の対照帯域中のフィンガープリントの形成を例示する、本発明 のイムノアッセイ装置の断面の要約図である。

図９は、試験混合物の、綿棒から、試料を提供するヒトの指への移動を例示する 、本発明のイムノアッセイ装置の他の例の断面の要約図である。

図１０は、試料を提供するヒトの指により、試験混合物を反応媒体に塗布するこ とを例示する、図９のイムノアッセイ装置の断面の要約図である。

発明の詳細な説明 本発明のりガントレセプタアッセイ装置は、試験対象の同定を達成することがで きる、少なくとも１つの反応帯域および少なくとも１つの対照帯域を有する反応 媒体を含む。本発明の好適例において、反応帯域は、少なくとも１つのリガンド 、リガンド−レセプタ対の要素を有し、上記要素は、試料中の物質の存在または 不存在を決定することができる。本発明の他の好適例において、試験対象の同一 性を、リガンドを少なくとも１つの対照帯域に含ませて、試験対象同定パターン を提供することにより達成することができる。

本発明の方法は、反応媒体の一部上または反応媒体の一部中で、試料中の検体の 存在または不存在の免疫学的アッセイを実施し、試料を反応媒体の一部上に提供 した試験対象の同一性を個別に確認することを含む。

本発明の１つの例は、アッセイ装置、好ましくは多孔質支持体および多孔質支持 体の一部を覆う反応媒体を有するイムノアッセイ装置に関する。反応媒体は、少 なくとも１つの反応帯域および少なくとも１つの対照帯域を有し、ここで対照帯 域は、試験対象を同定するのに適するパターンを提供することができる。さらに 好適な例において、対照帯域は、フィンガープリントを含むパターンを提供する ことができる。反応帯域は、リガンド／抗リガンドを実施する手段、好ましくは 、検体の存在または不存在に関するアッセイを実施する手段を含む。他の好適例 において、アッセイを実施する手段は、免疫対の要素を含む。

本発明の他の例は、免疫対の要素を含む、少なくとも１つの反応帯域および少な くとも１つの対照帯域を有し、ここで対照帯域は、試験対象を同定することがで きる、アッセイ装置に関する。対照帯域は、好ましくは、フィンガープリントを 含むパターンを提供することができる。

他の概念において、本発明は、支持体、好ましくは多孔質支持体；反応媒体、好 ましくは支持体上に載置された多孔質媒体を含み、ここで上記反応媒体は、少な くとも１つの反応帯域および少なくとも１つの対照帯域を有し、ここで対照帯域 の少な（とも一部は、試験対象の同一性を確認することができる。好適例は、反 応媒体中またはこの上に位置する免疫対の要素を含む。他の好適例において、対 照帯域の少なくとも一部は、免疫対の１つの要素を含む。本発明のいくつかの例 において、反応媒体は支持されていなくてもよい。

本発明はまた、アッセイ装置の反応帯域を試料と接触させ；試料中の少なくとも １つの検体の存在または不存在を決定し；アッセイ装置の対照帯域に、試験対象 同定パターンを形成する、試料を加工する方法に関する。

本発明はまた、イムノアッセイ装置の反応帯域中の検体のイムノアッセイを実施 し、これにより試料中の検体の存在または不存在を決定し：イムノアッセイ装置 の対照帯域に試料を提供するヒトの同一性を決定する、試料中の検体の存在また は不存在を決定する方法に関する。

本発明の方法は、試料中の検体の存在または不存在を、好ましくは、任意のリガ ンド結合に基づくアッセイを用いることにより決定し、試料を提供したヒトの同 一性を、好ましくは任意の免疫学に基づいた実験計画を用いることにより確認す ることを含む。試料中の検体の存在および／または不存在は、体液を少なくとも １つの反応帯域２０に用い、所定のリガンド／レセプタ結合反応が発生するよう にすることにより決定することができる。本発明の好適例において、反応の完了 の結果、信号が発生する。好ましくは、信号は、識別可能な色または色の不存在 の形態で発生する。例えば、図２において、識別可能な色でハツチングした領域 ３２〜３４の形成は、試料中に検体が存在しないことを示し、色の不存在領域３ ５〜３７は、試料中に検体か存在することを示す。本発明は、用いられる特定の 結合アッセイ、信号の発生方法、発生した信号のタイプ並びに陽性および／また は陰性結果の特定の局在に制限されないことは事実である。

本発明において、試料を提供するヒトを同定するイメージまたはパターンの形成 を、ヒトの指または足を対照帯域に接触させ、所定のリガンド／レセプタ反応が 発生するようにし、これによりフィンガープリントのイメージを形成することに より達成することができる。本発明の好適例において、信号発生剤、好ましくは 色形成剤を塗布したヒトの指先を、ヒトの指に塗布した信号発生剤と結合するＭ ＩＰを有する対照帯域の表面に接触させる。本発明の好適例において、免疫反応 の完了の結果、ヒトのフィンガープリントに対応する識別可能な色が形成する。

図２は、識別可能なフィンガープリントの例を示す。

本発明の例、特に小児科への使用において、形成しうるイメージまたはパターン は、足または足の一部であることができる。

本例において、予め標識剤を塗布した足または足の一部を、本発明の装置に接触 させることができる。

以下本発明の実施例を、図面を参照して説明する。

本発明のイムノアッセイ装置１０は、好ましくは支持体または支持部材１２上に 載置された反応媒体１４を含む。支持部材１２は、好ましくは多孔質支持体であ る。本発明の好適例において、反応媒体１４は、少なくとも１つの反応帯域２０ および少なくとも１つの対照帯域１６を有する。図１および２に示す実施例にお いて、イムノアッセイ装置１０は、６つの反応帯域２０（符号３２〜３７）並び に２つの対照帯域１６および１８を有する。

本発明の検出装置ｌＯにおいて、少なくとも１つの反応帯域２０は、免疫学的ア ッセイを実施する手段を含んで、好ましくは試料中の検体の存在および／または 不存在を確認する。図３に示す実施例において、反応帯域２ｏは、反応媒体１４ 中に固定された少なくとも１つの担体、例えば粒子２２を有する。示すように、 粒子２２は、免疫対の要素２１で塗布されている。

本発明の検出装置ｌＯにおいて、少なくとも１つの対照帯域１６は、好ましくは 免疫対の要素を含む、試験対象の同一性を確認する手段を含む。図４に示す実施 例において、対照帯域１６は、反応媒体１４中に固定された担体、例えば粒子２ ４を有する。示すように、粒子２４は、免疫対の要素２５で塗布されている。本 発明の好適例において、ＭＩＰ２５は、信号発生剤またはＭＩＰ−信号発生剤結 合体に結合することができる。

本発明の実施例を、図５〜８を参照して説明することができる。図５において、 試料中に検体３１が存在することを確認することができる。体液を、免疫対の要 素２１で塗布された粒子２２を有する反応帯域２０の表面に塗布する。検体３１ が体液中に存在する場合には、これは、検体３１に特異的であるＭＩＰ３０に結 合するかまたはこれにより補集される。形成した免疫対５０は、ＭＩＰ２１に結 合せず、これにより補集されず、反応媒体１４を通過する。本発明のこの例にお いて、色形成剤は、塗布された粒子に結合しない。

図６において、試料中に検体が存在しないことを確認することができる。体液を 、免疫対の要素２１で塗布された粒子２２を有する反応帯域２０の表面に用いる 。検体が体液中に存在しない場合には、ＭＩＰ３０がＭＩＰ２１に結合するかま たはこれにより補集される。本発明のこの例において、反応媒体の表面に用いら れた色形成剤は、塗布された粒子上のＭＩＰ３０に結合する。本発明の他の例に おいて、ＭＩＰ３０は、色形成剤を含むことができる。

図７および８は、対照帯域の表面上のフィンガープリントのイメージを形成する 実施例を示す。ヒトの指の表面６０は、隆起６１およびくほみ６２を有する。ヒ トの指に色形成剤１０２を塗布した際には、比較的大きい割合の色形成剤がくぼ み６２に採集される傾向がある。指を反応媒体１４の表面に接触させた際には、 比較的高濃度の色形成剤の帯域が、くぼみの領域に局在すると考えられる。対照 帯域の表面中の塗布された粒子は典型的に、比較的高い割合の色形成剤に結合し 、次にこれにより、ヒトのフィンガープリントのくぼみに対応する比較的強い識 別可能な色が形成する。

本発明の好適例において、体液中の物質の存在／不存在を決定することおよびフ ィンガープリントのイメージを形成することを、代表的にわずか数分以内に達成 することができる。

以下本発明の個々の概念を、さらに詳細に説明する。

リガンド−レセプタアッセイ 本発明において、検出装置を、関連する検体を検出する任意のアッセイ手法と共 に用いることができる。本発明において用いられるすへてのアッセイにおいて、 検体を、少なくとも１つのリガンドまたはりガント−レセプタに結合させる。例 示的な結合アッセイは、固相が結合試薬に結合する拮抗的結合アッセイを含む標 識リガンドアッセイ、例えば１つ以上の個別の工程を含む同時または連続的イン キュベーションおよび置換アッセイ；並びに、固相が結合試薬またはリガンドで あるアッセイを含む、非拮抗的および拮抗的結合アッセイを含む標識結合試薬ア ッセイ並びにサンドイッチアッセイを含むが、これらには限定されない。

沈殿、ラジオイムノアッセイまたは酵素結合イムノソーベントアッセイ（ｉｍｍ ｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ）　ｏ本発明は、用いられるイムノアッセイ のタイプまたはアッセイを実施する際に用いられる特定の実験計画により制限さ れるものではない。例示的なイムノアッセイ手法を、実施例に示す。

反応媒体 本発明において、反応媒体は、リガント−レセプタアッセイを実施するのに適す る任意の媒体とすることができる。上記したように、反応媒体は、少なくとも１ つの反応帯域および少なくとも１つの対照帯域を有する。代表的に、リガンド− レセプタアッセイを、ビーズ、チューブ、プレート、かい、多孔質または非多孔 質マトリックス、あるいは多孔質または非多孔質膜またはフィルターの形懇の反 応媒体を用いて実施することができる。

反応媒体は、表面または表面付近の領域が少なくとも１つの反応帯域を有する深 さ媒体を含むことができる。反応媒体はまた、表面層として反応帯域を有する層 状構造を有することができる。本発明において、反応および対照帯域を、信号発 生剤が存在する場合には、これが容易に識別できるように、反応媒体中に配置さ せる。

本発明において、好ましい反応媒体は多孔質であり、さらに好ましくは多孔質膜 である。本発明は、反応媒体のタイプまたは構造により制限されるものではない 。当業者には、反応媒体の選択は、性質、例えば感受性、結合能力、安定性、結 合することができる分子またはＭＩＰのタイプおよび特定のアッセイの実験計画 との整合性を含むがこれらに限定されない所望の物理的性質に依存することが容 易に理解できる。

反応媒体を形成する例示的な材料は、ラテックス、ニトロセルロース、ナイロン およびセルロースを含むがこれらには限定されない。

好ましい反応媒体は、市場で入手できるゲルマンスーパー（Ｇｅｌｍａｎ　５ｕ ｐｏｒ）膜である。スーパー膜は、親水性表面を有するラテックス低タンパク質 結合ポリスルホン膜である。当業者には、この膜は、優れた流速および粒子維持 ；滑らかな表面；診断試験における信号の対照性を増強させる顕著な白さおよび 不透明性；試料の汚染および背景の影響を減少させる低抽出分；並びに最終生成 物の整合性を確実にする均一な多孔性を提供するため、望ましいことが明らかで ある。また、この膜を用いることにより、不所望な抽出外の導入を制御するのに 望ましい外部湿潤剤が不必要になる。

他の好ましい膜、ＩＡＭ、イモ−ピロン　アフィニティ　メンブラン（Ｉｍｍｏ ｂｉｌｏｎ　Ａｆｆｉｎｉｔｙ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ）　（ミリボア　コーポレー ション（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）から市場で入手できる ；例えば、米国特許第４．４０７．９４３号明細書参照）、疎水性支持重合体、 ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）は、タンパク質と結合する。ＩＡＭは また、タンパク質結合の範囲にわたり高程度の調整ができ、使用者は、表面上の ナノグラム−マイクログラムの量のタンパク質を再現性をもって固定して、種々 のアッセイの必要性に適合させることができる。リガンドのＩＡＭへの結合およ びこのイムノアッセイへの使用は、当業者に知られている。

膜を固体支持体として本発明の反応媒体に用いることは、固相、代表的に高タン パク質結合能力および膜のフロースルー特性の付加的な好都合のために望ましい 。

ニトロセルロースは、このタンパク質、核酸、他の細胞状抗原および細胞状巨大 分子への高い親和性のため、最も一般的に用いられる膜の１つであり、所望のＭ ＩＰ結合がイオン性または疎水性である場合に望ましい。ニトロセルロースはま た、タンパク質および核酸をブロッティングするための優れたマトリックスを提 供する。ニトロセルロースを必要な任意の形状に切断することができ、これは、 フィンガープリント中のタンパク質の量が明瞭に識別できるという有用な特性を 有する。

本発明の範囲内に、膜上の異なる表面特性を変化させるかまたは含ませて所望の 結果を達成することが含まれる。例えば、ホルモンの拮抗的結合アッセイのため に設計された膜の表面特性は、治療的薬物のイムノメトリックアッセイと異なる 。例えば、親水化されたＰＶＤＦ膜の表面をエタノールアミンで処理することに より、膜表面の非特異的結合が減少することが示された。特定の表面処理剤また は表面特性の選択は、表面に与えられた所望の化学的特性；生物活性剤または反 応帯域の機能性を変性させるかまたは損なう不活性または減少した能力；固定さ れた生物活性分子のある配向に作用すること：固定された生物活性分子の長期に わたる安定性を促進させること；所望の核置換基を含むこと；並びに入手可能性 および費用に基づくことができる。二官能性または多官能性試薬を含む他の表面 処理剤を用いて膜の表面特性に影響を与えることは、本発明に含まれる。

当業者は、多孔質である反応媒体を含むことに由来する利点を容易に理解するこ とかできる。陽性の試゛料は反応媒体を容易に通過し、このために色形成剤を加 える前に反応媒体の表面を洗浄することが不必要になる。これは比較的望ましく ないが、本発明は、非孔質媒体の使用を含む。

上記したように、反応媒体は、支持されていてもされていなくてもよい。好適例 において、反応媒体は支持されており、さらに好ましくは支持体は多孔質である 。例示的な支持体は、ポリスチレンを含むが、これには限定されない。

本発明の他の例において、支持体は、試験を実施する際に用いる流体および試薬 を透過しない二本例において、反応媒体は、媒体の表面またはこの付近に反応帯 域を有するのに十分「深い」のが好ましい。

対照帯域 本発明の好適例において、反応媒体は、試料中の検体の存在または不存在を決定 する際の参照点を確立する対照帯域（参照対照帯域）および試料を提供する試験 対象の同一性を確認する対照帯域（同一性対照帯域）を含む。

本発明において、試料を提供した試験対象の同一性を確認する対照帯域（同一性 対照帯域）は、ＭＩＰを含む任意の表示機構を含むことができる。例えば、対照 帯域は、信号発生剤に結合することができる免疫対の要素を含み、これは、試験 対象の指を同一性対照帯域の表面上に接触させた際に、フィンガープリントのイ メージを試験装置上に形成させる。

ここで用いる、試験対象の同一性を確認する可能性とは、試験される試料を提供 した対象を特定的に同定することができることをいう。本発明の好適例において 、対照帯域は、予め信号発生剤を塗布した試験対象の指を接触させた際に、フィ ンガープリントのイメージ、好ましくは容易に識別できるフィンガープリントイ メージを形成することができる免疫対の要素を含む。

比較的望ましくない例において、本発明は、試験対象を同定するのに用いること ができるヌクレオチド配列に結合することができる免疫対の要素またはヌクレオ チド配列を有する対照帯域を含む。

本発明において、試料中の検体の存在または不存在を決定する参照点を確立する 対照帯域は、対照を提供する任意の手段を含む。対照を提供する若干の例を、例 中に示す。本発明は、試験結果を判定する際の比較の標準を確立する手段または 機構に制限されない。

反応帯域 反応帯域とは、検体の存在または不存在を決定することができる位置をいう。

例えば、反応帯域は、好ましくは、反応媒体の表面上またはこの付近、または表 面下であることができる。本発明の好適例において、反応帯域は、関連する検体 を補集するのに適するマトリックスまたはフィルタ中の粒子またはビーズに結合 した少なくとも１つのリガンドまたはりガント−レセプタを含む。本発明の他の 例において、少なくとも１つの反応帯域は、参照点を確立する対照、例えば色の 不存在を示す比較対照であること信号発生剤とは、検出可能な信号を発生するか またはリガンドが検出できるようにする任意の薬剤をいう。好ましい信号発生剤 は、装置を用いずに、好ましくは視覚的手段により検体を検出することができる ものである。例示的な信号発生剤は、色形成剤、例えば酵素、重合体含有染料、 化学ルミネセント剤、蛍光剤、放射性同位体または強磁性粒子を含むがこれらに は限定されない。色形成剤は、着色した粒子、着色した分子または若干の種、例 えば酵素であり、着色マーカーを形成することかできる一連の事象を誘発するこ とができるものとすることができる。着色分子は、蛍光染料、例えばフルオレセ インまたはローダミン；化学ルミネセント化合物；生物発光化合物：または、紫 外線放射、可視放射および赤外線放射を含む、電磁放射の吸収により検出するこ とができる化合物とすることができる。着色分子は、リガンドまたはりガント− レセプタに直接、または間接的に結合していることかできる。あるいはまた、着 色分子を粒子、特にミクロソーム中に含ませることができる。

色形成剤として有用である酵素は、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペ ルオキシダーゼまたはＢ−ガラクトシダーゼを含む。このような酵素はしばしば 、クロモゲニック基質と結合させて用いられる。酵素色形成剤と共に用いること ができる若干の例示的なりロモゲニック基質のリストを以下の実施例１１に示す 。

本発明の好適例において、色形成剤は、電子的に密な粒子、例えばコロイド状金 、コロイド状金を塗布した銀またはフェリチンとすることができる。

本発明の他の好適例において、色形成剤は、ＭＩＰに結合することができる。

本発明は、信号発生剤を含み、これは、色形成剤であることができる。好ましく は、信号発生剤は、検体あるいは反応媒体中またはこれ上の検体結合体の吸着を 検出するための、標識したＭＩＰを含む。標識したＭＩＰは、多くの適切な標識 、例えば酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、強磁性原子あるいは着色粒子また はミクロソームのうちの任意の１つを含むことかで　゛きる。好適例において、 本発明において用いられる標識は、コロイド状金である。金は、生物学的に不活 性であり、極めて良好な電荷分布を有し、多くの有用な形態で広範囲に有用であ る。

この検出を、若干の銀沈着方法を用いて増強することができ、これにより肉眼で 監視しつる発色が可能である。広範囲の抗イムノグロブリン抗体、プロティンＡ またはストレブタビジン（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）と結合したコロイド状金 粒子が市場で入手できる。

コロイド状金基質が他の染色した粒子またはミクロソームより好ましい一方、ク ロモゲニック基質は、酵素結合の他の鋭敏な検出方法を提供する。

方法 本発明の方法は、アッセイ装置の反応帯域中の検体のりガント−レセプタアッセ イを実施し、これにより試料中の検体の存在または不存在を決定し；アッセイ装 置の対照帯域において試料を提供するヒトの同一性を確認することを含む。本発 明の好適例において、試料を提供するヒトの同一性を確認することは、リガンド −レセプタアッセイ方法を用いて、例えばＭＩＰを信号発生剤に結合させて達成 することができる。

上記したように、少なくとも１つの検体の存在または不存在を試験する体液試料 を、本発明のイムノアッセイ装置の表面に接触させる。体液試料を検出装置に接 触させる任意の方法を用いることができる。例えば、本発明の１つの例において 、体液、例えば尿を、標準のイムノアッセイ方法に従ってＭＩＰと混合し、ピペ ットで採取し、試験装置の表面上に載置することができる。

他の例において、体液、例えば血液を、ピペットで採集し、試験装置の表面上に 載置するかまたは、固体アプリケータ、例えば指先に塗沫することができる。好 適例において、血液を試験対象の指先に塗沫し、これを次に検出装置の表面に接 触させて押圧する。試料を検出装置に用いる他の例示的な方法を、実施例に示す 。

本発明の好適例は、１種以上の試薬を試験装置の表面上に、圧力を用いて塗布す ることを含む。例えば、信号発生剤を試験対象の指先に塗沫し、この指先を試験 装置に接触させることにより、必要な信号発生剤の量が顕著に減少し、アッセイ が進行する速度が顕著に上昇することか見出された。例えば、わずか１０マイク ロリツトル、好ましくは約１２マイクロリツトルのコロイド状金を、試験対象の 指先に塗沫して、アッセイを実施することかできる。対照的に、フロースルーカ セットアッセイ装置においては、典型的に、１００マイクロリツトルまたはこれ 以上の多量の信号発生剤が必要である。

操作の特定の理論に制限する意図はないが、試験対象の指を、アッセイ装置上に 配置した際に発生する圧力および／または表面張力の結果、リガンドおよびリガ ンド−レセプタの増加した濃度が局在化し、試薬がアッセイ装置の局在化した領 域に保持される時間か増加し、信号発生剤の、フィンガープリントの隆起からく ぼみへの移動が発生して、試験装置の表面上の明瞭なフィンガープリントパター ンが形成すると考えられる。

試験装置は、反応帯域中に固定された１種以上のＭＩＰを含むのが好ましい。例 えば、関連する検体か抗体である場合には、試験装置は、反応帯域中に固定され たミクロスフイアまたは粒子に結合した抗原を含むことができる。当業者には、 所望の量の抗原を反応帯域中に固定することができ、結合したＭＩＰのしきい濃 度を用いて所定の量の検体を検出することができることが明らかである。本発明 の１つの例において、検出装置はいくつかの反応帯域を有し、各反応帯域は異な る検体用であり、各反応帯域は所定のしきい濃度の結合したＶＩＰを含んで所定 の量の検体を検出することができる。ここで用いるしきい量または濃度とは、検 体の濃度範囲の下限をいう。本発明の他の例において、検出装置は、いくつかの 反応帯域を有し、各反応帯域は同一の検体に関して異なるしきい濃度を有する。

この例において、しきい濃度は、検体の濃度範囲の上限を決定する参照点を提供 する。実施例に示すように、反応帯域におけるしきい濃度を変化させることは、 試料中の検体の量を定量する例示的な方法である。

試験する体液を、検出装置の表面に塗布した後、試料中の検体の存在または不存 在を、好ましくは色（信号）または色（信号）の不存在を視覚的に確認すること により決定することができる。本発明の好適例において、陽性の応答、即ち体液 中の検体の存在の暗示は、色の不存在に相当する。本発明の好適例において、陰 性の応答、即ち体液中の検体の不存在の暗示は、視覚化された色に相当する。

本発明の１つの概念において、試験する体液が血液である際には、予想外なこと に、試料を試験装置に塗布する前に血清を分離することを必要とせずに、全血を 試験装置の表面に直接塗布することができることが見出された。本発明のこの例 において、全血試料を試験装置の表面に塗布し、次に洗浄剤を血液試料に用いる 。洗浄剤、例えばトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）を用いて、赤血球等を全血試料から 除去することができることが知られている一方、予想外なことに、透明化試薬、 例えば洗浄剤（好ましくは、イオン性、非イオン性の混合物およびアルコールを 含む洗浄剤）を用いることにより、細胞状成分を血清から、装置に塗布する前に 分離することを必要とせずに、全血試料をアッセイ装置の表面に塗布することが できることが見出された。洗浄剤の適用は、洗浄剤が血液細胞を破裂させるため 、好ましい。

次に、破裂した細胞の破片は、媒体を通過し、反応帯域から除去される、即ち固 定された表面抗原による影響から除去される。

検体の存在または不存在が決定された後、本発明に従って構成された検出装置を 用いて、体液を試験した試験対象を同定することができる。本発明の好適例にお いて、試験対象の同一性の決定は、リガンド−レセプタアッセイの実施を含み、 この結果、個体のフィンガープリントが発生する。本発明の好適例において、試 験対象の同一性の決定は、体液中の検体との任意の反応とは無関係である。

本発明の方法に従って、ヒトの指先に、ＭＩＰに結合した信号発生剤を塗布する 。塗布された指先を対照帯域の表面に接触させた際には、信号発生剤結合体は、 試験装置の対照帯域中に固定されたＭＩＰに結合する。本発明は操作の特定の理 論に制限されるものではないか、ヒトの指先の隆起およびくぼみは、高濃度の信 号発生結合体の局在領域（くぼみに対応する）および低濃度の信号発生結合体の 局在領域（隆起に対応する）を提供する。本発明の装置の対照帯域の表面に接触 させた際に、明瞭に同定することができるフィンガープリントのイメージが形成 し、これにより試料を提供したヒトの同一性を提供することができる。

本発明において、試料中の関連する検体の存在または不存在を、試料を反応媒体 の表面に塗布することにより決定することができ、上記反応媒体は、免疫対の要 素を含む少なくとも１つの反応帯域を含み；直接または間接的に結合した信号発 生剤（例えば第２抗体）をＶＩＰまたは関連する検体に結合させる信号発生剤を 用いる。

試験キット 本発明の例において、本発明に従って構成されたアッセイ装置をキットに含ませ ることができる。キットはまた、リガンド−レセプタアッセイを実施する多くの 任意の試薬を含むことができる。例えば、キットは、少なくとも１種の信号を発 生する試薬（または信号発生剤を指に移動させるための［インク」パッド）およ び少な（とも１種の洗浄または透明化試薬を含むことができる。キットはまた、 １種以上のりガントまたはりガントレセプタ、例えば凍結乾燥した第１抗体およ び第２抗体並びに１種以上の緩衝液を含むことができる。

本発明のイムノアッセイ装置の１例を下記の手順に従って調製した。多孔性支持 体に担持された低タンパク質結合ポリスルフォン膜（ゲルマン　スボル　メンプ ラン（Ｇｅｌｍａｎ　５ｕｐｏｒ　ｍｅｍｂｒａｒｅ））の１部分に、ヒト血清 アルブミンーベンゾイルエクゴニン（ＢＳＡ−ＢＥ）でコートされたポリスチレ ン粒子を埋め込んで反応領域を構成した。該膜の別の部分に、ヤギ抗−マウス抗 体でコートされたポリスチレン粒子を埋め込んでコントロール領域１６を構成し た。反応領域及びコントロール領域の代表的な概略断面図を図３及び図４に示す 。

アッセイ装置を下記の手順で調製した。リン酸緩衝溶液中の２％ポリビニルアル コール（ＰＶＡ）、１％グリシン及び０．０５％トゥイージー２０からなるブロ ッキング緩衝溶液（溶液Ａ）の４００〜５００で第１に反応媒体を洗浄した。イ ムノアッセイ装置の中央ウェル（コントロール領域１６）を、４％スクロース、 １．０％ＢＳＡ及び０．０５％アザイドを含むリン酸緩衝溶液中の、（ヒト血清 に吸着された）ヤギ抗−マウスイムノグロブリンＧでコートしたポリスチレンラ テックスの希釈溶液でスポットした。０．２Ｍ重炭酸ナトリウム中の、ヒト血清 アルブミンーベンゾイルエクゴニン（ＢＳＡ−ＢＥ）でコードンたポリスチレン ラテックスの希釈溶液で反応領域をスポットした。その後、反応媒体を、疏水性 ポリエチレンに転化して、８０〜１０００Ｆの間で乾燥室中で１時間乾燥した。

疏水性ポリエチレンから反応媒体を除去した後、アッセイ装置を使用のために用 意した。

実施例２ ペンゾイルエクゴニンの存否を試験するために、ヒトから唾液試料を得た。０． １％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び０．０５％トウイージー２０を含む、リ ン酸緩衝液中のマウス抗−ベンゾイルエクゴニンイムノグロブリンＧ（マウス抗 −ＢＥ　ＩｇＧ）の希釈溶液の２００マイクロリツトルアリコートを、唾液試料 の２００マイクロリツトルアリコートに加えた。得られた混合物を３分間インキ ュベイトした。このインキュベイジョンの間、溶液Ａの４００マイクロリツトル を、実施例１にて調製したイムノアッセイ装置の反応媒体に添加し、反応媒体を 排出した。

その後、マウス抗−ＢＥ［ｇＧ／唾液混合物を、反応媒体に添加し、２分間イン キュベイトした。その後溶液への別の４００マイクロリツトル了りコートを反応 媒体に添加して排出した。

溶液Ａを排出した後、唾液試料を提供した人の指を、１．０％ＢＳＡ、０．０５ ％トゥイーン−２０及び０．０５％アザイドを含有するトリス緩衝液中の、コロ イドゴールド複合ヤギ抗−マウスイムノグロブリンＧの希釈溶液（以降、「ゴー ルド　ラベル溶液」という）の１５マイクロリツトルでペイントした。この指を 、イムノアッセイ装置の反応媒体にやさしく挿圧して、３秒間そのまま保持した 。その後、指を反応媒体から注意深く外した。

反応媒体を１５秒間インキュベイトした後、溶液Ａの別の４００マイクロリツト ルアリコートを、反応媒体に添加した。手順が完了した後、反応領域は着色して 、ペンゾイルエクゴニンに対する陰性の試験結果を示した（例えば、図２中反応 領域３２〜３４に示すように）。

少量のペンゾイルエクゴニンを唾液試料に添加した直後にマウス抗−ＢＥ　［ｇ Ｇ溶液の添加をしたことを除いて、この決定を繰り返した。この場合、試験完了 後、反応領域は完全に百であった（例えば、図２中反応領域３５〜３７に示すよ うに）。

両決定の完了時に、中央ウェルコントロール領域は唾液試料を提供したヒトの指 の跡を含んでいた。

実施例３ イムノアッセイ装置か異なったアナライトに対して６の反応領域を含んでいるこ とを除いては実施例１の手順に従って装置を調製した。各反応領域は膜に埋め込 まれた異なったアナライト複合体でコートされたポリスチレン粒子を含む。反応 領域３２〜３７は、（図１に示すように）アナライトとして、コカイン（３２） 、オビエイト（３３）　、ＰＣＰ　（３４）　、アンフェタミン／メトアンフェ タミン（３５）、テトラヒドロカンナビノール（３６）及びアルコール（３７） でそれぞれコートされたポリスチレンラテックスを含む。中央コントロール領域 １６は、膜に埋め込まれた、ヤギ抗−マウスイムノグロブリンＧでコートされた 、ポリスチレン粒子を用いて実施例１におけるようにして調製する。

６のアナライトの存否に対して試験するために、唾液試料をヒトから得る。リン 酸緩衝液中の各６の異なるアナライトに対するマウス抗−アナライトイムノグロ ブリンＧの希釈溶液（以降、［マウス抗−アナライト［ｇＧ溶液■」という）の ２００マイクロリツトルアリコートを唾液試料の２００マイクロリツトルに添加 する。実施例２で示したように、この混合物をインキュベイトする一方、反応媒 体を溶液へで前処理する。マウス抗−アナライト［ｇＧ溶液Ｉ／唾液混合物を反 応媒体に添加した後、実施例２で示した試験手順の残り手順に従う。コロイドゴ ールド複合ヤギ抗−マウスイムノグロブリンＧの希釈溶液でコートした試験対象 の指に接触した、溶液Ａで反応媒体を処理し、その後再び溶液Ａで処理する。こ の手順を行った後、中央コントロール領域１６は尿試料を提供したヒトの指の跡 を含む。反応領域３２〜３７はすべて着色し、全６アナライトの存在に対して陰 性の試験結果を示した。その後残りの唾液を少量のアンフェタミン／メトアンフ ェタミン、テトラヒドロカンナビノール及びアルコールでスパイクする。その後 マウス抗−アナライト［ｇＧ溶液Ｉの２００マイクロリツトルアリコートを、ス パイクした唾液の２００マイクロリツトルに添加し、スパイクしない試料に対し て示したように決定を繰り返す。この手順を行った後、アッセイ装置は図２で示 した結果を示した。中央コントロール領域Ｉ６は尿試料を提供したヒトの指の跡 を含む、反応領域３２〜３４は陰性の試験結果を示して着色する。反応領域３５ 〜３７は陽性の結果を示して白である。

実施例４ ６の反応領域を含むイムノアッセイ装置を実施例１の手順に従って調製する。実 施例３におけるように、反応領域３２〜３７は、アナライトとして、コカイン（ ３２Ｌオビエイト（３３）　、ＰＣＰ　（３４）　、アンフェタミン／メトアン フェタミン（３５）　、テトラヒドロカンナビノール（３６）及びアルコール（ ３７）でコートしたポリスチレンラテックスをそれぞれ含む。しかしながら、こ の場合、実施例１におけるように調製した中央コントロール領域１６は膜中に埋 め込まれたマウス抗−ヤギイムノグロブリンＧでコートしたポリスチレン粒子を 含む。

６のアナライトの存否を試験するために、ヒトから尿試料を得る。尿の２００マ イクロリツトルアリコートをマウス抗−アナライトＩｇＧ溶液Ｉの２００マイク ロリツトルに混合し、その後試験手順を実施例２に示したように正確に行う。決 定の完了後、中央コントロール領域１６は唾液試料を提供したヒトの指の跡を含 み、反応領域３２〜３７は全て着色し、全６のアナライトの存否に対して陰性の 試験結果を示した。

その後、残りの尿を少量のアンフェタミン／メトアンフェタミン、テトラヒドロ カンナビノール及びアルコールでスパイクする。その後、マウス抗−アナライト ＩｇＧ溶液１の２００マイクロリツトルアリコートをスパイクした尿の２００マ イクロリツトルに添加し、スパイクしない試料に対して示したように決定を繰り 返した。決定の完了後、イムノアッセイ装置は図２で示した結果を示した。中央 コントロール領域１６は唾液試料を提供したヒトの指の跡を含む。反応領域３２ 〜３４は着色しく陰性結果）、反応領域３５〜３７は白（陽性結果）である。

実施例５ 図９及びＩＯで示すイムノアッセイ装置の反応媒体８３を実施例１で示した手順 に従って調製する。反応媒体８３は６の反応領域３２〜３７を有し、アナライト としてコカイン（３２）、オビエイト（３３）　、ＰＣＰ　（３４）　、メトア ンフェタミン（３５）、テトラヒドロカンナビノール（３６）及びアルコール（ ３７）でそれぞれコートしたポリスチレンラテックスを含み、中央コントロール 領域１６は（図１に示すように）膜に埋め込まれた、マウス抗−ヤギイムノグロ ブリンＧでコートした、ポリスチレン粒子を含む。

無菌のスワブ８５を、唾液について６のアナライトの存否を試験するために、ヒ トの舌の下に置く。１分後、スワブ８５を除去し、（図９に示すように）イムノ アッセイ装置のインキュベイジョンチャンネル８０及びたらい８１に置く。各６ の異なるアナライトに対するマウス抗−アナライトイムノグロブリンＧの銀コー トゴールドミクロソーム複合体の希釈溶液（以降、［マウス抗−アナライトＩｇ Ｇ溶液■」という）の３滴を唾液スワブに添加する。処理したスワブを１分間イ ンキュベイトした後、唾液試料を提供したヒトの指８２を１０秒間スワブに押し つける。その後、スワブから指をあげて、直ぐにイムノアッセイ装置の反応媒体 上に挿し付け、３０秒間そのまま保持する。

その後、反応媒体から指をあげて、この媒体を２分間インキュベイトした後、結 果を判定する。この際、中央コントロール領域１６は唾液試料を提供したヒトの 指の跡を含み、反応領域３２〜３７はすべて着色し、全６のアナライトの存在に つき陰性の試験結果を示した。

マウス抗−アナライト１ｇＧ溶液■をスワブに添加する前に、少量のメトアンフ ェタミン、テトラヒドロカンナビノール及びアルコールを含む溶液の１滴をスワ ブに添加することを除いては、新しい無菌のスワブを用いてこの試験手順を繰り 返す。試験完了後、イムノアッセイ装置は図２で示した結果を示した。

中央コントロール領域１６は唾液試料を提供したヒトの指の跡を含む。反応領域 ３２〜３４は着色しく陰性結果）、反応領域３５〜３７は白（陽性結果）である 。

実施例６ イムノアッセイ装置は実施例５におけるように調製する。唾液試料を、無菌のス ワブを用いて６のアナライトの存否に対して試験するために、ヒトの舌下から集 める。唾液試料を集める一方、マウス抗−アナライトＩｇＧ溶液１の８００マイ クロリツトルをＰＣＰの希釈溶液の１滴と共に試料チューブに入れる。

唾液含有スワブを２分間試料チューブの溶液中で浸漬する。得られた混合物の４ ０マイクロリツトルアリコートを反応媒体に適用し、２０秒間インキュベイトす る。その後、溶液Ａの４００マイクロリツトルアリコートを反応媒体に添加し、 排水する。

溶液への排水終了後、唾液試料を提供したヒトの指をゴールドラベル溶液の１５ マイクロリツトルでペイントする。この指を直ぐにイムノアッセイ装置の反応媒 体に対してやさしく挿し付けて５秒間そのまま保持する。指を注意深く反応媒体 から外した後、媒体を１５秒間インキュベイトした後、溶液Ａの別の４００マイ クロリツトルアリコートを反応媒体に添加する。手順完了後、反応領域は完全に 白であり、ＰＣＰに対して陽性の試験結果を示す。中央コントロール領域は唾液 を提供したヒトの指の跡を含む。

実施例フ イムノアッセイ装置を実施例１の手順に従って調製した。反応媒体はナイロン膜 からなる。反応領域は膜に埋め込まれたヒト血清アルブミン−コカインでコート したポリスチレン粒子を含む。中央コントロール領域は膜に埋め込まれた、ヤギ 抗−ヒトイムノグロブリンＧでコートしたポリスチレン粒子を含む。

血液中にコカインの存否を試験するヒトの指を針で刺し、血液を１滴得る。滴は 無菌のスパチュラで拡げ、指先に血液の薄膜を形成する。血液でおおわれた指先 を反応媒体に挿し付け、約１０秒そのまま保持する。指をあげた後、反応媒体を 家庭用洗剤の希釈溶液で処理し、これにより反応媒体から赤い血液の色を除去す る。赤い血液の色を除去した後、反応媒体をアルカリホスファターゼ複合マウス 抗−コカインイムノグロブリンＧの希釈溶液で処理し、２分間インキュベイトす る。その後反応媒体を、溶液Ａ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホス フェート及びニトロブルーテトラゾリウムの希釈溶液（ＢＣＩＰ／ＮＥＴ）並び に再び溶液Ａで順に処理する。反応媒体を、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ処理及び最後の溶 液Ａ処理の間に数分間インキュベイトする。手順か完了した際、中央コントロー ル領域は血液試料を提供したヒトの指の跡を含み、反応領域は着色し、コカイン に対して陰性の試験結果を示した。

実施例８ イムノアッセイ装置を実施例７におけるように調製する。０．１％ウシ血清アル ブミン（ＢＳＡ）及び０．０５％トゥイージー２０を含んだリン酸緩衝液中のマ ウス抗−コカインイムノグロブリンＧの希釈溶液（以降、［マウス抗−コカイン ！ｇＧ溶液」という）の５００マイクロリツトルアリコートを、小さい試料チュ ーブに入れる。少量のコカインを含んだ溶液の１滴を試料チューブに添加する。

血液中のコカインの存否を試験すべきヒトの指を針で刺し、１滴の血液を得て、 ２滴の血清を試料チューブ中の混合物に添加する。得られた混合物を試料チュー ブ内で２分間インキュベイトした後、この混合物をイムノアッセイ装置の反応媒 体に添加する。この混合物を反応媒体上で１分間インキュベイトし、その後、こ れを溶液Ａで洗浄する。血液試料を提供したヒトの指を１５マイクロリツトルの ゴールドラベル溶液でペイントする。指をイムノアッセイ装置の反応媒体にやさ しく挿し付け、５秒間そのまま保持し、その後注意深く反応媒体から外す。反応 媒体を１５秒間インキュベイトし、別の溶液Ａの４００マイクロリツトルアリコ ートを反応媒体に添加する。操作完了後、反応領域は完全に白（コカインに対し て陽性試験）であり、コントロール領域は血液試料提供者の指の跡を含む。

実施例９ イムノアッセイ装置が６の反応領域（図１参照）を含むことを除いては装置が実 施例１の手順に従って調製される。各反応領域は膜に埋め込まれた異なった量の コレステロール複合体でコートされたポリスチレン粒子を含む。反応領域３２は 、全コレステロールレベルが１５０ミリグラム／デシリツトルに等しいか又はこ れより多い体液に接触すると、陽性信号を生成するコレステロール複合体を含む 。反応領域３３〜３６は、中間量のコレステロール複合体を含む、ここにおいて 、コレステロール複合体の量は領域３２〜３５にかけて順次増加する、即ち、１ ８０ｍｇ／ｄｉ、２４０ｍｇ／ｄ１．　２８０ｍｇ／ｄｌである。また、反応媒 体は３Ｑｒｄ／ｄｉ及び６５ｍ１’／ｄｉの高密度リポタンパク質に対応する２ の参照コントロール領域を含む。

血液中のコレステロール量に対する試験をすべきヒトの指を針で刺し１滴の血液 を得た。この滴を、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び０．０５％トゥ イージー２０を含むリン酸緩衝液中の、マウス抗−コレスチロールイムノグロブ リンＧ及びコロイドゴールド複合マウス抗−コレスチロールイムノグロブリンＧ の希釈溶液（以降、［マウス抗−コレスチロールＩｇＧ溶液ｊという）の４００ マイクロリツトルを含む小さい試料チューブに添加する。３分間のインキュベイ ト後、この混合物の薄いフィルムを無菌のスパチュラを用いて、血液試料提供者 の指先に拡げる。直ぐに指先をイムノアッセイ装置の反応媒体に対してやさしく 挿し付ける。５秒間指をそのまま保持した後、指を注意深く反応媒体から外す。

反応媒体を１分間インキュベイトし、その後家庭用洗剤の希釈溶液で処理し、反 応媒体から赤い血液色を除去する。この手順完了後、コントロール領域は、血液 試料提供者の指の跡を含む。反応領域３２〜３３は着色しくコレステロールに対 して陰性試験）、一方反応領域３４及び３５は白（コレステロールに対して陽性 ）である。各反応領域は、少なくともコレステロールが予定限界量あるときには コレステロールに対する陽性試験を与える。限界コレステロール濃度は、その領 域において反応媒体中に吸着されたコレステロール複合体の量に応じて各反応領 域に対して異なる。

実施例ＩＯ 本発明を用いてその存否を決定できる、他の多くの薬剤のリストを以下に示す。

以下の表は、前述のコロイドゴールドラベルの代わりに、本発明の適当な酵素複 合体を用いることができる典型的な水不溶性生成物を産生ずるクロモゲン基質を 示す。酵素／クロモゲン結合を用いたラベル化法は周知であり、当業者が容易に 実施できる。

クロモゲン基質産生水不溶性生成物 西洋わさびの茶　ジアミノベンゾン　ＤＡＢ　透明ペルオキシダーゼ 灰／　ジアミノベンゾン　ＤＡＢ／　透明黒　ニッケル強化　二フケル ３−アミノー９−エチル　カルバゾール　ＡＢＣ透明　赤青　４−クロ叶１−ナ フトール　−−−　透明　。

アルカ　リ　ナフトール−ＡＳ−Ｂｌ−フォスフェート／　ＮＡＢＰ／　透明　 赤７オスフＴターゼ　ファースト　レフト　ＴＲＦＲナフト−ｈ−ＡＳ−ＭＸ− １ｔｌｙｚ−ト／　ＮＡＭＰ／　透明　赤フＴ−スト　レフト　ＴＲＦＲ ナフトール−ＡＳ−Ｂｌ−フォスフェート／　ＮＡＢＰ／　透明　赤二コー７ク ノン　ＮＦ 透明　ブロモクロロインドリル　パープル　ＢＣ［Ｐ／青　５−ブロモ−４−ク ロロ−ＢＣＩＧ　透明３−インドリル−Ｂ−ｄ−ドラクトビラノンド実施例１２ この実施例では、アッセイ装置が実施例３で示したアナライトに対する反応領域 を含み、反応媒体の表面が溶液Ａで予め濡らされており、試験患者の指を刺して 、患者の指先に血液を塗りつけるのに十分な量の血液を得て、及び塗りつけた血 液を患者の指上で乾燥することを除いて、実施例７の装置及び方法を用いた。そ の後乾燥した血液の付いた指をアッセイ装置の表面にくっつけて、役１５秒間装 置に接触したまま保持する。指を外した後、反応媒体をクリヤリング剤の希釈溶 液で処理し、これにより反応媒体から赤い血液色を除去する。赤い血液色を除去 した後、反応媒体を、第二抗体に結合したコロイドゴールドの複合体の希釈溶液 で処理し、各複合体は特異的に指定のアナライトのｌに結合する。約２分間イン キュベイト後、血液をつけるのに使用していない指先をコントロール領域におい てリガンド受容体に対して特異的なリガンドに複合した約１０マイクロリツトル のコロイドゴールドでコートした。指先を除去した後、中央コントロール領域は 血液試料提供者の指の跡を含み、反応領域は着色し、アナライトに対して陰性試 験結果を示した。

実施例１３ この実施例では、アッセイ装置は実施例３で示したアナライトに対する反応領域 を含み、反応媒体の表面を乾燥し、試験患者の指を刺して患者の指先に血液を塗 りつけるのに十分な量の血液を得て、及び直ぐに塗りつけた血液を（乾燥の前に ）約１５秒間反応媒体にくっつけたことを除いて、実施例７の装置及び方法を用 いた。指を外した後、反応媒体を乾燥しく典型的に約１〜２分間）、赤血球を除 去するために洗浄溶液で処理して、及び洗浄剤の希釈溶液で処理し、これにより 、反応媒体から赤い血液色を除去する。赤い血液色を除去した後、反応媒体を第 ２抗体に結合したコロイドゴールドの複合体の希釈溶液で処理し、各複合体は指 定のアナライトの１に特異的に結合する。約２分間インキュベイトした後、血液 をつけるのに使用していない指先を、コントロール領域においてリガンド受容体 に対して特異的なリガンドに複合したコロイドゴールドの約１０マイクロリツト ルでコートした。指先を除去した後、中央コントロール領域は血液試料提供者の 指の跡を含み、反応領域を着色し、アナライトに対して陰性試験結果を示した。

実施例１４ （図１の３２及び３４〜３７エリアに対応して）５の反応領域を含むアッセイ装 置は図１の手順に従って調製する。実施例３におけるように、反応領域はアナラ イトとしてコカイン（３２）、Ｐ　ＣＰ　（３４）、アンフェタミン／メトアン フェタミン（３５）、テトラヒドロカンナビノール（３６）及びアルコール（３ ７）でそれぞれコートしたポリスチレンラテックスを含む。しかしながらこの場 合、領域３３は吸着したアナライト又は抗体のいずれも含まず、参照コントロー ル領域即ち、試験の結果において完全に白のままでいる領域として機能する。中 央コントロール領域（図１における領域１６に対応した「同一のコントロール領 域」）を、膜に埋め込まれたヤギ抗−ウサギイムノグロブリンＧでコートしたポ リスチレン粒子を含むことを除いて、実施例１におけるように調製する。

反応媒体を溶液Ａの５００マイクロリツトルで処理し、これにより反応媒体を濡 らす。血液の試料を試験患者から得て、血液中の５のアナライトの存否に対して 試験する。試料の一部を試験患者の指先にコートし、５の反応領域及び参照コン トロール領域にくっつける。押圧は約ｌＯ〜１５秒間反応媒体上に保持される。

その後、希釈家庭用洗剤溶液の数滴、例えば約５００マイクロリツトルアリコー トを反応媒体に添加し、排水する。家庭用洗剤処理は反応媒体に存在する赤血球 を溶解し、媒体から血液の暗赤色を洗浄する。その後、５の反応領域及び参照コ ントロール領域を、１．０％ＢＳＡ、０．０５％トゥイーン−２０及び０．０５ ％アザイドを含むトリス緩衝液中の、コロイドゴールド複合マウス抗−アナライ トイムノグロブリンＧの混合物の希釈溶液の約１０ｍ１で処理する。

その後、血液試料提供者の指を、１．０％ＢＳＡ、０．０５％トウイージー２０ 及び０．０５％アザイドを含むトリス緩衝液中の、コロイドゴールド複合ウサギ 抗−ヤギイムノグロブリンＧの希釈溶液の１５マイクロリツトルでペイントする 。この指を反応媒体の同一コントロール領域に対してやさしく挿圧し、３秒間そ のまま保持する。反応媒体から指を注意深く外した後、媒体を１５秒間インキュ ベイトして溶液への別の４００マイクロリツトルアリコートを反応媒体に添加す る。

この手順の完了後、反応領域３２及び３４〜３７は着色し、アナライトに対して 陰性試験結果を示す。参照コントロール領域３３は完全に白であり、同一コント ロール領域は血液試料提供者の指の跡を含む。

本発明は典型的な例に関して説明したが、この例に限定されない。本発明の範囲 内の別の例、実施例、変形例は当業者が容易に特に先行技術を考慮して実施でき る。故に、以下の請求の範囲は請求の範囲によって規定した本発明の精神及び範 囲内の別の例、実施例、変形例、又は等価例をカバーすると思われる。

ＩＧ　１ ＦＩＧ　２ ＦＩＧ　３ ＦＩＧ４ ＦＩＧ　５ ＦＩＧ６ ＦＩＧ７ ＦＩＧ　Ｂ ＦＩＧ　９ ＩＧ１０

Claims (35)

【特許請求の範囲】
1. １．リガンド／レセプタ対の要素を含む少なくとも１つの反応帯域および少なく とも１つの対照帯域を有する反応媒体を備えたアッセイ装置において、 上記対照帯域が、試験対象の同一性を確認することができることを特徴とするア ッセイ装置。
2. ２．上記対照帯域が試験対象を同定するパターンを提供することができ、ここで パターンがフィンガープリントを含むことを特徴とする請求の範囲１記載のアッ セイ装置。
3. ３．上記対照帯域が試験対象を同定するパターンを提供することができ、ここで パターンが足型を含むことを特徴とする請求の範囲１記載のアッセイ装置。
4. ４．上記反応帯域が、少なくとも１つの検体の存在または不存在を決定するリガ ンドーレセプタアッセイを実施する手段を含むことを特徴とする請求の範囲１記 載のアッセイ装置。
5. ５．上記検体を決定する手段が、コカイン、ベンゾイルエクゴニン、オピエート 、フェンシクリジン、アンフェタミン、メトアンフェタミン、テトラヒドロカン ナビノールおよびアルコールの少なくとも１つの存在または不存在を決定するこ とができることを特徴とする請求の範囲４記載のアッセイ装置。
6. ６．上記反応帯域が、リガンド／レセプタ対の要素を含むことを特徴とする請求 の範囲１記載のアッセイ装置。
7. ７．上記反応帯域が、免疫対の要素を含むことを特徴とする請求の範囲６記載の アッセイ装置。
8. ８．アッセイ装置において： 多孔質支持体； 多孔質支持体の一部を覆う反応媒体（上記反応媒体は、少なくとも１つの反応帯 域および少なくとも１つの対照帯域を有し、上記対照帯域が試験対象を同定する のに適切なパターンを提供することができる）；並びに 上記反応帯域においてリガンド／レセプタアッセイを実施する手段を含むことを 特徴とするアッセイ装置。
9. ９．試験対象を同定するパターンがフィンガープリントを含むことを特徴とする 請求の範囲８記載のアッセイ装置。
10. １０．リガンド／レセプタアッセイを実施する手段が、リガンド／レセプタ対の 要素を含むことを特徴とする請求の範囲８記載のアッセイ装置。
11. １１．リガンド／レセプタアッセイを実施する手段が、免疫対の要素を含むこと を特徴とする請求の範囲１０記載のアッセイ装置。
12. １２．リガンド／レセプタアッセイを実施する手段が、少なくとも１つの検体の 存在または不存在を決定する手段を含むことを特徴とする請求の範囲３記載のア ッセイ装置。
13. １３．試料を加工するにあたり： （ａ）アッセイ装置の反応媒体を試料と接触させ；（ｂ）試料中の少なくとも１ つの検体の存在または不存在を決定し； （ｃ）試験対象同定パターンを反応媒体の対照帯域中に形成する ことを特徴とする試料の加工方法。
14. １４．試料を含む反応媒体の接触が、試料を反応媒体にアプリケータを用いて塗 布することを含むことを特徴とする請求の範囲１３記載の方法。
15. １５．アプリケータが、指、足、綿棒またはピペットを含むことを特徴とする請 求の範囲１４記載の方法。
16. １６．試験対象同定パターンが、試験対象の指を対照帯域に接触させ、これによ りフィンガープリントを形成することを特徴とする請求の範囲１３記載の方法。
17. １７．ヒトの同一性の確認がさらに、指を対照帯域に接触させる前に、ヒトの指 に信号発生剤を塗布することを含むことを特徴とする請求の範囲１３記載の方法 。
18. １８．信号発生剤が、色形成剤で標識したリガンド／レセプタ対の要素を含むこ とを特徴とする請求の範囲１７記載の方法。
19. １９．信号発生剤が、色形成剤を含むことを特徴とする請求の範囲１７記載の方 法。
20. ２０．色形成剤が、コロイド状金を含むことを特徴とする請求の範囲１９記載の 方法。
21. ２１．さらに、指を対照帯域に接触させた後に、対照帯域に、銀塗布溶液を接触 させることを含むことを特徴とする請求の範囲２０記載の方法。
22. ２２．検体が、コカイン、ベンゾイルエクゴニン、オピエート、フェンシクリジ ン、アンフェタミン、メトアンフェタミン、テトラヒドロカンナビノールまたは アルコールの少なくとも１つであることを特徴とする請求の範囲１３記載の方法 。
23. ２３．リガンドーレセプタアッセイの実施が、体液中の少なくとも１つの検体の 存在または不存在を決定することを含むことを特徴とする請求の範囲１３記載の 方法。
24. ２４．体液が、血液、血液生成物、唾液または尿であることを特徴とする請求の 範囲２３記載の方法。
25. ２５．リガンドーレセプタアッセイの実施が、血液を反応媒体に接触させ、その 後透明化溶液を反応媒体に塗布することを含むことを特徴とする請求の範囲１３ 記載の方法。
26. ２６．リガンド−レセプタアッセイの実施が、試料中の少なくとも１つの検体の しきい量の存在または不存在を決定することを含むことを特徴とする請求の範囲 １３記載の方法。
27. ２７．検体の存在の決定が、反応媒体の反応帯域中に色を形成し、検体の不存在 の決定が、反応帯域中に色を形成しないことを特徴とする請求の範囲２６記載の 方法。
28. ２８．検体の存在の決定が、反応媒体の反応帯域中に色を形成し、検体の不存在 の決定が、反応帯域中に色を形成しないことを特徴とする請求の範囲１３記載の 方法。
29. ２９．血液試料を加工するにあたり： （ａ）透明化溶液を、アッセイ装置の反応媒体に塗布し；（ｂ）試験対象の指を 突き刺して血液の小滴を形成し；（ｃ）血液を塗沫して、指を血液の薄膜で塗布 し；（ｄ）血液の薄膜を乾燥し； （ｅ）指を反応媒体に接触させ； （ｆ）試料中の少なくとも１つの検体の存在または不存在を決定し； （ｇ）反応媒体の対照帯域に、試験対象同定パターンを形成する ことを特徴とする血液試料の加工方法。
30. ３０．血液試料を加工するにあたり： （ａ）試験対象の指を突き刺して血液の小滴を形成し；（ｂ）血液を塗沫して、 指を血液の薄膜で塗布し；（ｃ）指をアッセイ装置の反応媒体に接触させ、血液 を乾燥し； （ｄ）透明化溶液を反応媒体に塗布し；（ｅ）試料中の少なくとも１つの検体の 存在または不存在を決定し； （ｆ）反応媒体の対照帯域に、試験対象同定パターンを形成する ことを特徴とする血液試料の加工方法。
31. ３１．試料を加工するキットにおいて、上記キットが：（ａ）リガンド／レセプ タ対の要素を含む少なくとも１つの反応帯域および少なくとも１つの対照帯域を 有する反応媒体を備えたアッセイ装置（ここで上記対照帯域は、試験対象の同一 性を確認することができる）； （ｂ）少なくとも１つの上記反応帯域および上記対照帯域中に信号を発生するこ とができる少なくとも１種の試薬を含むことを特徴とする、試料を加工するキッ ト。
32. ３２．信号発生剤が、リガンド／レセプタ対の要素と結合したことを特徴とする 請求の範囲３１記載のキット。
33. ３３．さらに、試料補集装置を備えたことを特徴とする請求の範囲３１記載のキ ット。
34. ３４．工程ｃが、対照帯域に、標識したアプリケータを直接接触させることを含 むことを特徴とする請求の範囲１３記載の方法。
35. ３５．検体の存在により色が発生し、検体の不存在により色が発生しないことを 特徴とする請求の範囲４記載のアッセイ装置。