JPS622799B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS622799B2 JPS622799B2 JP58041633A JP4163383A JPS622799B2 JP S622799 B2 JPS622799 B2 JP S622799B2 JP 58041633 A JP58041633 A JP 58041633A JP 4163383 A JP4163383 A JP 4163383A JP S622799 B2 JPS622799 B2 JP S622799B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glycerin
- measuring
- reagent
- nad
- dehydrogenase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 117
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 60
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 48
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 33
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 13
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 12
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 11
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 11
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 8
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 8
- WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 4-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1 WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 3
- 239000007999 glycylglycine buffer Substances 0.000 claims 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 26
- 108010090622 glycerol oxidase Proteins 0.000 abstract description 14
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 abstract description 10
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 abstract description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 abstract description 5
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 abstract description 5
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 10
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 8
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Chemical compound CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 4
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 4
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 4
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 4
- -1 aromatic alcohols Chemical class 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical class O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 3
- PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N (e)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazine Chemical compound C1=CC=C2S\C(=N\N)N(C)C2=C1 PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 3-cholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940120503 dihydroxyacetone Drugs 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 208000006575 hypertriglyceridemia Diseases 0.000 description 2
- CKFGINPQOCXMAZ-UHFFFAOYSA-N methanediol Chemical compound OCO CKFGINPQOCXMAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000005002 naphthylamines Chemical class 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010052895 Coronary artery insufficiency Diseases 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014486 Elevated triglycerides Diseases 0.000 description 1
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 101710163410 Probable glycerol kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001243 acetic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 229940058934 aminoquinoline antimalarials Drugs 0.000 description 1
- 150000005010 aminoquinolines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001448 anilines Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 150000004780 naphthols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000003918 potentiometric titration Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- FNXKBSAUKFCXIK-UHFFFAOYSA-M sodium;hydrogen carbonate;8-hydroxy-7-iodoquinoline-5-sulfonic acid Chemical class [Na+].OC([O-])=O.C1=CN=C2C(O)=C(I)C=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 FNXKBSAUKFCXIK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/61—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving triglycerides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明はグリセリンの酵素測定法を実施するた
めの測定試薬に関する。 トリグリセリド（長鎖脂肪酸のグリセリンエス
テル）の測定は医学診断法にとつて著しく重要で
ある。血中でのトリグリセリド濃度の上昇は動脈
硬化の顕著な危険要因である。高いトリグリセリ
ド値、すなわち高トリグリセリド血症においては
冠動脈不全及び心筋硬塞が低いトリグリセリド値
におけるよりしばしば起こる。高トリグリセリド
血症は動脈硬化及び冠状脈疾患の発生を促進する
ので、治療を早目に開始するために早期に発見し
なければならない。従つて、トリグリセリドもし
くはグリセリンの測定のための迅速で信頼できる
方法が必要とされている。 トリグリセリド測定のための公知で使用可能な
方法はリパーゼ／エステラーゼによりトリグリセ
リドを酵素的に加水分解し、かつ遊離したグリセ
リンをグリセロキナーゼ／ピルビン酸キナーゼ／
乳酸デヒドロゲナーゼを用いて測定することによ
りなる（A.W.Wahlefeld，in Methods of
Enzymatic Analysis ，H.U.Bergmeyer，
Ed.Academic press，New York，London，
1974年、第1831〜1835頁）。 しかしながら、この公知法は大きな欠点を示
す。血清自体の色（ビリルビン、ヘモグロビン）
並びに濁りによる妨害を除去するために、試料空
値測定を常に実施しなければならず、このことは
分析あたりの必要時間並びに試薬使用量、従つて
費用を高める。更に、多数の不安定な助触媒及び
酵素が存在するので、使用溶液の安定性は比較的
低い。 UV―試験のほかにもホルマザン形成を基礎と
する呈色テストも公知である。後者のものは試薬
空値に対する測定を可能とするが、比較的複雑で
妨害をうけやすい。 更に、グリセリンデヒドロゲナーゼ（西ドイツ
国特許第2831580号明細書）又はグリセリンオキ
シダーゼ（西ドイツ国特許出願公告第2817087号
公報）を用いてグリセリンを測定する方法及び試
薬が公知である。この方法によれば、これ以前に
公知の方法の欠点を回避することができるが、そ
の他の測定法の感度や特異性に関しての改良が所
望である。 従つて、前記欠点を示さない方法及び試薬に対
する必要がある。容易に、良好な収率で入手可能
な酵素で実施することができ、かつ改良された感
度と特異性を供する方法が必要である。 この課題は本発明により、酸素の存在下に水性
媒体中でグリセリンをグリセリンデヒドロゲナー
ゼ及びグリセリンオキシダーゼと一緒に恒温保持
し、酸素消費量又は生成したH2O2を測定するこ
とにより解決する。 意外にも、本発明により測定の高めた特異性及
び感度が達せられる。反応機構は公知ではない
が、はじめにグリセリンデヒドロゲナーゼにより
ジヒドロキシアセトンが生じ、このジヒドロキシ
アセトンはグリセリンオキシダーゼにより酸素使
用及びH2O2の形成下に酸化される。 本発明により、グリセリンデヒドロゲナーゼ及
びその補酵素NADの存在下にグリセリンオキシ
ダーゼ（Glyc―OD）を用いて測定を行なつた。
グリセリンデヒドロゲナーゼ（EC1，１，１，
６）及びグリセリンオキシダーゼは公知であり、
例えば微生物から得られるかもしくは市販されて
いる。グリセリンデヒドロゲナーゼ（Glyc―
DH）の存在下にグリセリンオキシダーゼでの測
定の感度及び特異性が更に改良されることが判明
した。 本発明の方法は予め又は同時にグリセリンの遊
離下にトリグリセリドを酵素的に鹸化することに
よつても、又はトリグリセリドをあらかじめ化学
的に鹸化することによつても実施することができ
る。化学的鹸化には例えばアルコール性水酸化カ
リ溶液が好適であり、酵素的鹸化のためにはエス
テラーゼを有するリパーゼ又はエステラーゼ単独
が有利である。 酸素使用量又はH2O2生成の測定はこれに公知
の方法で行なわれる。 酸素消費量の測定のためにの好適な方法は例え
ばガスクロマトグラフイー及び電気化学的測定法
である。酸素電極を用いてポーラログラフイー測
定を行なうことは、この方法が特に測定の自動的
実施に好適であるので有利である。この種の測定
法は公知である。水性媒体中の酸素消費量のポー
ラログラフイー測定のために西ドイツ国特許出願
公開第2130340号公報及び同第2130308号公報に記
載された方法が特に好適であることが判明した。
生じた過酸化水素は滴定法でも電位差滴定法、ポ
ーラログラフイー法及び比色定量法並びに酵素法
によつても測定することができる。カタラーゼ又
はペルオキシダーゼを用いる酵素法は、この方法
が著しく特異的で信頼できるだけでなく、過酸化
水素を形成する主反応とも最も容易な方法で組み
合わせることができるので有利である。β―ジケ
トン、例えばアセチルアセトン及びメタノールも
しくはエタノール又はメチレングリコールの存在
下にカタラーゼを用いて測定することも、１種以
上の色原体の存在下にペルオキシダーゼを用いて
測定することも好適であることが判明した。カタ
ラーゼ、アセチルアセトン及びメタノールを用い
て測定する際、メタノールが酸化されてホルムア
ルデヒドとなり、このホルムアルデヒドはアセチ
ルアセトンと呈色反応を起こし、これを測定する
ことができる。ペルオキシダーゼを用いて測定す
る際、発色団として反応の後測光法で測定するこ
とのできる化合物を使用する。好適な発色団の例
は２，2′―アミノベンズチアゾリンスルホン酸
（ABTS）である。他の例はトリンダー
（Trinder）による指示薬系であり（Ann.Clin.
Biochem第６巻（1969）、第24〜27頁）、ここでは
フエノールと４―アミノアンチピリン（４―
AAP）をPODの存在下にH2O2を作用させて酸化
的にカツプリングさせ色素にする。フエノールの
かわりに、他の芳香族アルコール、例えばｐ―ク
ロルフエノール、アニリン誘導体、ナフトール、
ナフトール誘導体、ナフチルアミン、ナフチルア
ミン誘導体、アミノキノリン、ヒドロキシキノリ
ン、ジヒドロフエニル酢酸及び同様に反応する物
質を使用することもできる。４―アミノアンチピ
リンのかわりに４―アミノアンチピリン誘導体、
例えば４―アミノアンチピリンアミド、フエニレ
ンジアミンスルホン酸、MBTH（メチルベンゾ
チアゾロンヒドラゾン）、Ｓ―MBTH（スルホン
化メチルベンゾチアゾロンヒドラゾン）、MBTH
誘導体及びＳ―MBTH誘導体並びに同様に反応
する化合物を使用する。 ペルオキシダーゼ及び色原体、例えばｐ―クロ
ルフエノール／４―アミノアンチピリン又は
ABTSの存在下で反応を行なうことは特に有利で
あり、従つて本発明の範囲において優れている。
この方法においては短かい反応時間で吸光度差及
びグリセリン濃度間の直線的関係が確認されたの
で、本発明方法のこの実施形式は動力学的測定に
特に好適であるが、終点測定法にも使用可能であ
る。 NADを化学量論量を越える量で添加すること
もできるが、触媒量NAD及びNAD―再生系を加
えるのが有利である。好適なNAD―再生系は例
えば西ドイツ国特許出願公開第2834705号公報に
記載されている。本発明の範囲で使用する有利な
NAD―再生システムは乳酸デヒドロゲナーゼ及
びその基質ピルベートからなる。 本発明のこれら実施形においてはPH値を7.0〜
9.0に調節すべきであり、こうしてこの範囲にお
いてすべての関与する酵素、すなわちグリセリン
オキシダーゼ（Glyc―OD）、Glyc―DH及び場合
によりペルオキシダーゼ（POD）はこの方法に
とつて良好な活性を示す。 両方の酵素グリセリンオキシダーゼ及びグリセ
リンデヒドロゲナーゼはグリセリンに関して競合
し、かつグリセリンデヒドロゲナーゼは酸素を使
用しないしH2O2を形成することもないが、意外
にもこの実施形においてこの反応は分子状酸素を
使用し、かつH2O2の形成下にスムーズに定量的
に進行する。 グリセリンオキシダーゼ及びグリセリンデヒド
ロゲナーゼを組み合わせて使用することにより、
感度は少なくとも0.001モル／まで下がる。 測定の実施は試薬空値に対する終点法によつて
も動力学的方法によつても実施することができ
る。 本発明方法の実施形はトリグリセリドの酵素的
鹸化と同時に実施することもできるが、この場合
グリセリンを遊離し、本発明によりすぐに測定す
るのである。 この方法は唯一の標準を用いて較正することに
よりグリセリン濃度を正確に測定することができ
るので、自動分析法にとつて特に好適である。こ
のことは自動分析装置で整え、図面中にグラフと
して示した結果に十分に示されている。第１〜第
１０図を例中で詳細に説明する。 更に、本発明の課題はグリセリンデヒドロゲナ
ーゼ、NAD、グリセリンオキシダーゼ及びH2O2
測定系からなるグリセリンの測定試薬である。一
番有利な実施形において、この試薬は主にグリセ
リンデヒドロゲナーゼ、NAD、グリセリンオキ
シダーゼ、ペルオキシダーゼ、少なくとも１種の
色原体及び緩衝剤から、個々に又は混合して構成
されている。色原体としてはABTSが有利であ
る。これ以外の有利な色指示薬系としてはトリン
ダー（Trinder）系がある。 その他の有利な実施形においては試薬は主にグ
リセリンデヒドロゲナーゼ、グリセリンオキシダ
ーゼ、NAD、カタラーゼ、アセチルアセトン、
メタノール及び緩衝剤から、個々に又は混合して
なる。 前記有利な試薬の組み合わせは前記必須成分の
他に付加的に常用の溶剤、安定剤又は／及び界面
活性剤を含有していてよい。これらのすべての添
加物は専門家に公知であり、過酸化水素の検出シ
ステムにおいて常用である。 本発明による試薬は更に付加的に脂肪分解酵
素、例えばリパーゼ／エステラーゼ又はエステラ
ーゼ単独を含有しているのが有利であり、こうし
てトリグリセリドの形で存在する結合グリセリン
の測定にも使用することができる。 有利な実施形においては、本発明による試薬は
付加的にNAD―再生系を含有している。 NAD再生系にとつても前記方法で記載したと
同じことが言える。有利なNAD―再生系は乳酸
デヒドロゲナーゼ（LDH）及びピルベートから
なる。NAD再生系の存在は、触媒量のNADで十
分であることを可能とする。 本発明による試薬の本質的な成分は次の量比で
含有されているのが有利である。 グリセリンオキシダーゼ 10〜200U／ml グリセリンデヒドロゲナーゼ 10〜200U／ml NAD １〜50ｍMol／ NAD再生系を添加する場合、有利に 乳酸デヒドロゲナーゼ ５〜100U／ml ピルベート １〜50ｍMol／ からなる。 有利なH2O2―検出系は ペルオキシダーゼ 0.5〜20U／ml ４―アミノアンチピリン 0.2〜５ｍMol／ フエノール誘導体 １〜100ｍMol／ からなる。 グリセリンをまずトリグリセリドから遊離させ
る場合、試薬は付加的にリパーゼ及び／又はエス
テラーゼ、有利にコレステリンエステラーゼを含
有しており、この際試薬の前記有利な量組成に
は、この場合２〜50U／mlが有利である。 本発明はグリセリンを測定するための優れた特
異性と感度を有する簡単な方法のための試薬を提
供する。この方法は特に自動分析装置に使用する
ために好適である。 次に、実施例につき本発明を更に詳説する。 例 １ 試薬： 試薬組成 トリシンPH8.0 100mgMol （NH4）2SO4 160ｍMol ZnSO4×7H2O 0.1ｍMol K2SO4 50ｍMol MgSO4×7H2O 20ｍMol ｐ―クロルフエノール 10ｍMol ４―アミノアンチピリンアミド 0.5ｍMol コール酸ナトリウム 3.5ｍMol 界面活性剤１（Dobanol） 0.09％ 界面活性剤２（Genapol×80） 0.06％ NAD ５ｍMol ピルベート ５ｍMol 乳酸デヒドロゲナーゼ 10000U／ コレステリンエステラーゼ 8000U／ グリセリンデヒドロゲナーゼ 30000U／ グリセリンオキシダーゼ 80000U／ ペルオキシダーゼ 1500U／ 試料： １〜10ｍMol／の範囲のグリセリン水溶液。 測定配合物： 測定光：546nm 層厚：１cm 温度：25℃ キユベツト中に試薬１mlを加え、試料0.01mlで
開始する。試薬空値に対して20分後の吸光度を測
定する。定量測定にとつてはこの△Ｅを標準を介
してグリセリン濃度に関係づける。試料空値を一
緒に実施することは必要ではない。546nm及び25
℃での吸光度に対するグリセリン濃度を書き込む
ことにより得られる曲線を第１図に記載する。25
℃で時間に応じる吸光度変化を第２図中に記載す
る。 例 ２ 試薬：例１に記載した試薬を使用する。 試料：トリグリセリド約450mg／dlまでの種々
の人血清 測定配合物： 測定光 546nm 層厚 １cm 温度 25℃〜37℃ キユベツト中に試薬1.0mlを加え、血清0.01ml
で開始する。試薬空値に対する25分後の吸光を測
定する。定量測定のためにはこの△Ｅをグリセリ
ン標準を介してトリグリセリン濃度に関係づけ
る。546nm及び25℃におけるトリグリセリド濃度
を書き込み得られた曲線を第３図に示す。試料空
値の実施は必要ではない。時間に応じた吸光度変
化を第４図に記載する。 例 ３〜８
めの測定試薬に関する。 トリグリセリド（長鎖脂肪酸のグリセリンエス
テル）の測定は医学診断法にとつて著しく重要で
ある。血中でのトリグリセリド濃度の上昇は動脈
硬化の顕著な危険要因である。高いトリグリセリ
ド値、すなわち高トリグリセリド血症においては
冠動脈不全及び心筋硬塞が低いトリグリセリド値
におけるよりしばしば起こる。高トリグリセリド
血症は動脈硬化及び冠状脈疾患の発生を促進する
ので、治療を早目に開始するために早期に発見し
なければならない。従つて、トリグリセリドもし
くはグリセリンの測定のための迅速で信頼できる
方法が必要とされている。 トリグリセリド測定のための公知で使用可能な
方法はリパーゼ／エステラーゼによりトリグリセ
リドを酵素的に加水分解し、かつ遊離したグリセ
リンをグリセロキナーゼ／ピルビン酸キナーゼ／
乳酸デヒドロゲナーゼを用いて測定することによ
りなる（A.W.Wahlefeld，in Methods of
Enzymatic Analysis ，H.U.Bergmeyer，
Ed.Academic press，New York，London，
1974年、第1831〜1835頁）。 しかしながら、この公知法は大きな欠点を示
す。血清自体の色（ビリルビン、ヘモグロビン）
並びに濁りによる妨害を除去するために、試料空
値測定を常に実施しなければならず、このことは
分析あたりの必要時間並びに試薬使用量、従つて
費用を高める。更に、多数の不安定な助触媒及び
酵素が存在するので、使用溶液の安定性は比較的
低い。 UV―試験のほかにもホルマザン形成を基礎と
する呈色テストも公知である。後者のものは試薬
空値に対する測定を可能とするが、比較的複雑で
妨害をうけやすい。 更に、グリセリンデヒドロゲナーゼ（西ドイツ
国特許第2831580号明細書）又はグリセリンオキ
シダーゼ（西ドイツ国特許出願公告第2817087号
公報）を用いてグリセリンを測定する方法及び試
薬が公知である。この方法によれば、これ以前に
公知の方法の欠点を回避することができるが、そ
の他の測定法の感度や特異性に関しての改良が所
望である。 従つて、前記欠点を示さない方法及び試薬に対
する必要がある。容易に、良好な収率で入手可能
な酵素で実施することができ、かつ改良された感
度と特異性を供する方法が必要である。 この課題は本発明により、酸素の存在下に水性
媒体中でグリセリンをグリセリンデヒドロゲナー
ゼ及びグリセリンオキシダーゼと一緒に恒温保持
し、酸素消費量又は生成したH2O2を測定するこ
とにより解決する。 意外にも、本発明により測定の高めた特異性及
び感度が達せられる。反応機構は公知ではない
が、はじめにグリセリンデヒドロゲナーゼにより
ジヒドロキシアセトンが生じ、このジヒドロキシ
アセトンはグリセリンオキシダーゼにより酸素使
用及びH2O2の形成下に酸化される。 本発明により、グリセリンデヒドロゲナーゼ及
びその補酵素NADの存在下にグリセリンオキシ
ダーゼ（Glyc―OD）を用いて測定を行なつた。
グリセリンデヒドロゲナーゼ（EC1，１，１，
６）及びグリセリンオキシダーゼは公知であり、
例えば微生物から得られるかもしくは市販されて
いる。グリセリンデヒドロゲナーゼ（Glyc―
DH）の存在下にグリセリンオキシダーゼでの測
定の感度及び特異性が更に改良されることが判明
した。 本発明の方法は予め又は同時にグリセリンの遊
離下にトリグリセリドを酵素的に鹸化することに
よつても、又はトリグリセリドをあらかじめ化学
的に鹸化することによつても実施することができ
る。化学的鹸化には例えばアルコール性水酸化カ
リ溶液が好適であり、酵素的鹸化のためにはエス
テラーゼを有するリパーゼ又はエステラーゼ単独
が有利である。 酸素使用量又はH2O2生成の測定はこれに公知
の方法で行なわれる。 酸素消費量の測定のためにの好適な方法は例え
ばガスクロマトグラフイー及び電気化学的測定法
である。酸素電極を用いてポーラログラフイー測
定を行なうことは、この方法が特に測定の自動的
実施に好適であるので有利である。この種の測定
法は公知である。水性媒体中の酸素消費量のポー
ラログラフイー測定のために西ドイツ国特許出願
公開第2130340号公報及び同第2130308号公報に記
載された方法が特に好適であることが判明した。
生じた過酸化水素は滴定法でも電位差滴定法、ポ
ーラログラフイー法及び比色定量法並びに酵素法
によつても測定することができる。カタラーゼ又
はペルオキシダーゼを用いる酵素法は、この方法
が著しく特異的で信頼できるだけでなく、過酸化
水素を形成する主反応とも最も容易な方法で組み
合わせることができるので有利である。β―ジケ
トン、例えばアセチルアセトン及びメタノールも
しくはエタノール又はメチレングリコールの存在
下にカタラーゼを用いて測定することも、１種以
上の色原体の存在下にペルオキシダーゼを用いて
測定することも好適であることが判明した。カタ
ラーゼ、アセチルアセトン及びメタノールを用い
て測定する際、メタノールが酸化されてホルムア
ルデヒドとなり、このホルムアルデヒドはアセチ
ルアセトンと呈色反応を起こし、これを測定する
ことができる。ペルオキシダーゼを用いて測定す
る際、発色団として反応の後測光法で測定するこ
とのできる化合物を使用する。好適な発色団の例
は２，2′―アミノベンズチアゾリンスルホン酸
（ABTS）である。他の例はトリンダー
（Trinder）による指示薬系であり（Ann.Clin.
Biochem第６巻（1969）、第24〜27頁）、ここでは
フエノールと４―アミノアンチピリン（４―
AAP）をPODの存在下にH2O2を作用させて酸化
的にカツプリングさせ色素にする。フエノールの
かわりに、他の芳香族アルコール、例えばｐ―ク
ロルフエノール、アニリン誘導体、ナフトール、
ナフトール誘導体、ナフチルアミン、ナフチルア
ミン誘導体、アミノキノリン、ヒドロキシキノリ
ン、ジヒドロフエニル酢酸及び同様に反応する物
質を使用することもできる。４―アミノアンチピ
リンのかわりに４―アミノアンチピリン誘導体、
例えば４―アミノアンチピリンアミド、フエニレ
ンジアミンスルホン酸、MBTH（メチルベンゾ
チアゾロンヒドラゾン）、Ｓ―MBTH（スルホン
化メチルベンゾチアゾロンヒドラゾン）、MBTH
誘導体及びＳ―MBTH誘導体並びに同様に反応
する化合物を使用する。 ペルオキシダーゼ及び色原体、例えばｐ―クロ
ルフエノール／４―アミノアンチピリン又は
ABTSの存在下で反応を行なうことは特に有利で
あり、従つて本発明の範囲において優れている。
この方法においては短かい反応時間で吸光度差及
びグリセリン濃度間の直線的関係が確認されたの
で、本発明方法のこの実施形式は動力学的測定に
特に好適であるが、終点測定法にも使用可能であ
る。 NADを化学量論量を越える量で添加すること
もできるが、触媒量NAD及びNAD―再生系を加
えるのが有利である。好適なNAD―再生系は例
えば西ドイツ国特許出願公開第2834705号公報に
記載されている。本発明の範囲で使用する有利な
NAD―再生システムは乳酸デヒドロゲナーゼ及
びその基質ピルベートからなる。 本発明のこれら実施形においてはPH値を7.0〜
9.0に調節すべきであり、こうしてこの範囲にお
いてすべての関与する酵素、すなわちグリセリン
オキシダーゼ（Glyc―OD）、Glyc―DH及び場合
によりペルオキシダーゼ（POD）はこの方法に
とつて良好な活性を示す。 両方の酵素グリセリンオキシダーゼ及びグリセ
リンデヒドロゲナーゼはグリセリンに関して競合
し、かつグリセリンデヒドロゲナーゼは酸素を使
用しないしH2O2を形成することもないが、意外
にもこの実施形においてこの反応は分子状酸素を
使用し、かつH2O2の形成下にスムーズに定量的
に進行する。 グリセリンオキシダーゼ及びグリセリンデヒド
ロゲナーゼを組み合わせて使用することにより、
感度は少なくとも0.001モル／まで下がる。 測定の実施は試薬空値に対する終点法によつて
も動力学的方法によつても実施することができ
る。 本発明方法の実施形はトリグリセリドの酵素的
鹸化と同時に実施することもできるが、この場合
グリセリンを遊離し、本発明によりすぐに測定す
るのである。 この方法は唯一の標準を用いて較正することに
よりグリセリン濃度を正確に測定することができ
るので、自動分析法にとつて特に好適である。こ
のことは自動分析装置で整え、図面中にグラフと
して示した結果に十分に示されている。第１〜第
１０図を例中で詳細に説明する。 更に、本発明の課題はグリセリンデヒドロゲナ
ーゼ、NAD、グリセリンオキシダーゼ及びH2O2
測定系からなるグリセリンの測定試薬である。一
番有利な実施形において、この試薬は主にグリセ
リンデヒドロゲナーゼ、NAD、グリセリンオキ
シダーゼ、ペルオキシダーゼ、少なくとも１種の
色原体及び緩衝剤から、個々に又は混合して構成
されている。色原体としてはABTSが有利であ
る。これ以外の有利な色指示薬系としてはトリン
ダー（Trinder）系がある。 その他の有利な実施形においては試薬は主にグ
リセリンデヒドロゲナーゼ、グリセリンオキシダ
ーゼ、NAD、カタラーゼ、アセチルアセトン、
メタノール及び緩衝剤から、個々に又は混合して
なる。 前記有利な試薬の組み合わせは前記必須成分の
他に付加的に常用の溶剤、安定剤又は／及び界面
活性剤を含有していてよい。これらのすべての添
加物は専門家に公知であり、過酸化水素の検出シ
ステムにおいて常用である。 本発明による試薬は更に付加的に脂肪分解酵
素、例えばリパーゼ／エステラーゼ又はエステラ
ーゼ単独を含有しているのが有利であり、こうし
てトリグリセリドの形で存在する結合グリセリン
の測定にも使用することができる。 有利な実施形においては、本発明による試薬は
付加的にNAD―再生系を含有している。 NAD再生系にとつても前記方法で記載したと
同じことが言える。有利なNAD―再生系は乳酸
デヒドロゲナーゼ（LDH）及びピルベートから
なる。NAD再生系の存在は、触媒量のNADで十
分であることを可能とする。 本発明による試薬の本質的な成分は次の量比で
含有されているのが有利である。 グリセリンオキシダーゼ 10〜200U／ml グリセリンデヒドロゲナーゼ 10〜200U／ml NAD １〜50ｍMol／ NAD再生系を添加する場合、有利に 乳酸デヒドロゲナーゼ ５〜100U／ml ピルベート １〜50ｍMol／ からなる。 有利なH2O2―検出系は ペルオキシダーゼ 0.5〜20U／ml ４―アミノアンチピリン 0.2〜５ｍMol／ フエノール誘導体 １〜100ｍMol／ からなる。 グリセリンをまずトリグリセリドから遊離させ
る場合、試薬は付加的にリパーゼ及び／又はエス
テラーゼ、有利にコレステリンエステラーゼを含
有しており、この際試薬の前記有利な量組成に
は、この場合２〜50U／mlが有利である。 本発明はグリセリンを測定するための優れた特
異性と感度を有する簡単な方法のための試薬を提
供する。この方法は特に自動分析装置に使用する
ために好適である。 次に、実施例につき本発明を更に詳説する。 例 １ 試薬： 試薬組成 トリシンPH8.0 100mgMol （NH4）2SO4 160ｍMol ZnSO4×7H2O 0.1ｍMol K2SO4 50ｍMol MgSO4×7H2O 20ｍMol ｐ―クロルフエノール 10ｍMol ４―アミノアンチピリンアミド 0.5ｍMol コール酸ナトリウム 3.5ｍMol 界面活性剤１（Dobanol） 0.09％ 界面活性剤２（Genapol×80） 0.06％ NAD ５ｍMol ピルベート ５ｍMol 乳酸デヒドロゲナーゼ 10000U／ コレステリンエステラーゼ 8000U／ グリセリンデヒドロゲナーゼ 30000U／ グリセリンオキシダーゼ 80000U／ ペルオキシダーゼ 1500U／ 試料： １〜10ｍMol／の範囲のグリセリン水溶液。 測定配合物： 測定光：546nm 層厚：１cm 温度：25℃ キユベツト中に試薬１mlを加え、試料0.01mlで
開始する。試薬空値に対して20分後の吸光度を測
定する。定量測定にとつてはこの△Ｅを標準を介
してグリセリン濃度に関係づける。試料空値を一
緒に実施することは必要ではない。546nm及び25
℃での吸光度に対するグリセリン濃度を書き込む
ことにより得られる曲線を第１図に記載する。25
℃で時間に応じる吸光度変化を第２図中に記載す
る。 例 ２ 試薬：例１に記載した試薬を使用する。 試料：トリグリセリド約450mg／dlまでの種々
の人血清 測定配合物： 測定光 546nm 層厚 １cm 温度 25℃〜37℃ キユベツト中に試薬1.0mlを加え、血清0.01ml
で開始する。試薬空値に対する25分後の吸光を測
定する。定量測定のためにはこの△Ｅをグリセリ
ン標準を介してトリグリセリン濃度に関係づけ
る。546nm及び25℃におけるトリグリセリド濃度
を書き込み得られた曲線を第３図に示す。試料空
値の実施は必要ではない。時間に応じた吸光度変
化を第４図に記載する。 例 ３〜８
【表】
【表】
試料：
例３，５及び７にはトリグリセリド100，200及
び500mg／dlに相応するグリセリン標準容液を使
用した。 例４，６及び８にはトリグリセリド約100，200
及び600mg／dlを含有する人血清を使用した。 測定配合物： 例２に記載したと同様。 この測定を例２に記載したと同様に実施した。
得られた結果を、前記種々の量の時間に応じた吸
光度変化を示す曲線群の形で第５図〜第１０図に
記載する。この際曲線１はそれぞれの試薬空値を
示し、曲線２，３及び４は前記のトリグリセリド
の増加量で得られる。
び500mg／dlに相応するグリセリン標準容液を使
用した。 例４，６及び８にはトリグリセリド約100，200
及び600mg／dlを含有する人血清を使用した。 測定配合物： 例２に記載したと同様。 この測定を例２に記載したと同様に実施した。
得られた結果を、前記種々の量の時間に応じた吸
光度変化を示す曲線群の形で第５図〜第１０図に
記載する。この際曲線１はそれぞれの試薬空値を
示し、曲線２，３及び４は前記のトリグリセリド
の増加量で得られる。
添付図面は本発明によるグリセリン測定法及び
測定試薬を用いた実験結果並びに比較実験結果を
それぞれグラフとして表わした図である。第１図
及び第３図はそれぞれ実施例１及び２により測定
した吸光度（E546）とグリセリン濃度（トリグリ
セリドmg／dl）との関係をグラフに示した図であ
る。第２図及び第４図はそれぞれ実施例１及び２
により測定した吸光度（E546）と時間との関係を
グラフに示した図である。第５〜第１０図も同様
にそれぞれ実施例３〜８の条件下に測定した吸光
度（E546）と時間との関係をグラフに示した図で
ある。
測定試薬を用いた実験結果並びに比較実験結果を
それぞれグラフとして表わした図である。第１図
及び第３図はそれぞれ実施例１及び２により測定
した吸光度（E546）とグリセリン濃度（トリグリ
セリドmg／dl）との関係をグラフに示した図であ
る。第２図及び第４図はそれぞれ実施例１及び２
により測定した吸光度（E546）と時間との関係を
グラフに示した図である。第５〜第１０図も同様
にそれぞれ実施例３〜８の条件下に測定した吸光
度（E546）と時間との関係をグラフに示した図で
ある。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ グリセリンデヒドロゲナーゼ、NAD、グリ
セリンオキシダーゼ及びH2O2測定系からなるこ
とを特徴とするグリセリンの測定試薬。 ２ H2O2の測定系がペルオキシダーゼ、少なく
とも１種の色原体及び緩衝剤からなる特許請求の
範囲第１項記載の測定試薬。 ３ 色原体がＰ―クロルフエノール及び４―アミ
ノアンチピリンアミドからなる特許請求の範囲第
２項記載の測定試薬。 ４ Ｐ―クロルフエノール５〜15μMOl／ml及び
４―アミノアンチピリンアミド0.1〜1.0μMOl／
mlを含有する特許請求の範囲第３項記載の測定試
薬。 ５ 色原体が２，2′―アジノジ―（３―エチル―
ベンズチアゾリンスルホン酸―６）―ジアンモニ
ウム塩からなる特許請求の範囲第２項記載の測定
試薬。 ６ グリシルグリシン緩衝剤又はトリシン緩衝
剤、PH7.0〜9.0を含有する特許請求の範囲第２項
記載の測定試薬。 ７ グリセリンデヒドロゲナーゼ、NAD、グリ
セリンオキシダーゼ及びH2O2の測定系からな
り、エステル化グリセリンを鹸化するための薬剤
を付加的に含有することを特徴とするグリセリン
の測定試薬。 ８ H2O2の測定系がペルオキシダーゼ、少なく
とも１種の色原体及び緩衝剤からなる特許請求の
範囲第７項記載の測定試薬。 ９ 色原体がＰ―クロルフエノール及び４―アミ
ノアンチピリンアミドからなる特許請求の範囲第
８項記載の測定試薬。 １０ Ｐ―クロルフエノール５〜15μMOl／ml及
び４―アミノアンチピリンアミド0.1〜1.0μ
MOl／mlを含有する特許請求の範囲第９項記載の
測定試薬。 １１ 色原体が２，2′―アジノジ―（３―エチル
―ベンズチアゾリンスルホン酸―６）―ジアンモ
ニウム塩からなる特許請求の範囲第８項記載の測
定試薬。 １２ グリシルグリシン緩衝剤又はトリシン緩衝
剤、PH7.0〜9.0を含有する特許請求の範囲第８項
記載の測定試薬。 １３ グリセリンデヒドロゲナーゼ、NAD、グ
リセリンオキシダーゼ及びH2O2測定系からな
り、付加的にNAD―再生系を含有することを特
徴とするグリセリンの測定試薬。 １４ NAD―再生系がピルベート及び乳酸デヒ
ドロゲナーゼからなる特許請求の範囲第１３項記
載の測定試薬。 １５ グリセリンデヒドロゲナーゼ、NAD、グ
リセリンオキシダーゼ及びH2O2測定系からな
り、かつ付加的にエステル化グリセリンを鹸化す
るための薬剤及びNAD再生系を含有することを
特徴とするグリセリンの測定試薬。 １６ NAD―再生系がピルベート及び乳酸デヒ
ドロゲナーゼからなる特許請求の範囲第１５項記
載のグリセリンの測定試薬。 １７ グリセリンデヒドロゲナーゼ、NAD、グ
リセリンオキシダーゼ及びH2O2測定系からな
り、付加的に界面活性剤を含有することを特徴と
するグリセリンの測定試薬。 １８ グリセリンデヒドロゲナーゼ、NAD、グ
リセリンオキシダーゼ及びH2O2測定系からな
り、かつ付加的にエステル化グリセリンを鹸化す
るための薬剤及び界面活性剤を含有することを特
徴とするグリセリンの測定試薬。 １９ グリセリンデヒドロゲナーゼ、NAD、グ
リセリンオキシダーゼ及びH2O2測定系からなる
グリセリンの測定試薬が担持材料、例えば紙に含
浸されていることを特徴とするグリセリンの測定
試薬。 ２０ グリセリンデヒドロゲナーゼ、NAD、グ
リセリンオキシダーゼ及びH2O2測定系からな
り、かつ付加的にエステル化グリセリンを鹸化す
るための薬剤を含有するグリセリンの測定試薬が
担持材料、例えば紙に含浸されていることを特徴
とするグリセリンの測定試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19823210095 DE3210095A1 (de) | 1982-03-19 | 1982-03-19 | Verfahren und reagenz zur bestimmung von glycerin |
| DE3210095.7 | 1982-03-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58165799A JPS58165799A (ja) | 1983-09-30 |
| JPS622799B2 true JPS622799B2 (ja) | 1987-01-21 |
Family
ID=6158722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58041633A Granted JPS58165799A (ja) | 1982-03-19 | 1983-03-15 | グリセリンの測定試薬 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0089606B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58165799A (ja) |
| AT (1) | ATE23194T1 (ja) |
| DE (2) | DE3210095A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3211167A1 (de) * | 1982-03-26 | 1983-09-29 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Testsystem und verfahren zur bestimmung von substanzen in fluessigkeiten |
| JPS59140900A (ja) * | 1983-01-28 | 1984-08-13 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規な酵素的高感度測定法 |
| US4654310A (en) * | 1984-01-10 | 1987-03-31 | Ly Uy Vu | Instrumentless quantitative analysis system |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6049477B2 (ja) * | 1977-04-19 | 1985-11-01 | 協和醗酵工業株式会社 | グリセロ−ル酸化酵素およびその製造法ならびにグリセロ−ル酸化酵素を用いるグリセロ−ルの定量法 |
| DE2831580C2 (de) * | 1978-07-18 | 1980-09-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Glycerin |
-
1982
- 1982-03-19 DE DE19823210095 patent/DE3210095A1/de not_active Withdrawn
-
1983
- 1983-03-15 EP EP83102556A patent/EP0089606B1/de not_active Expired
- 1983-03-15 AT AT83102556T patent/ATE23194T1/de active
- 1983-03-15 JP JP58041633A patent/JPS58165799A/ja active Granted
- 1983-03-15 DE DE8383102556T patent/DE3367254D1/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0089606A3 (en) | 1985-06-05 |
| EP0089606B1 (de) | 1986-10-29 |
| DE3367254D1 (en) | 1986-12-04 |
| JPS58165799A (ja) | 1983-09-30 |
| EP0089606A2 (de) | 1983-09-28 |
| DE3210095A1 (de) | 1983-09-29 |
| ATE23194T1 (de) | 1986-11-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4416982A (en) | Composition and method for decomposing hydrogen peroxide | |
| KR920001449B1 (ko) | 효소적산화에 의한 검체의 비색적 측정방법 및 시약 | |
| US5126247A (en) | Method, system and devices for the assay and detection of biochemical molecules | |
| EP0102504B1 (en) | Ascorbate-resistant broad range glucose test composition, test device and method | |
| JPH0577399B2 (ja) | ||
| US4587100A (en) | Multilayer analytical element for the detection of hydrogen peroxide | |
| US4492754A (en) | Composition and method for the determination of hydrogen peroxide | |
| US4212938A (en) | Reagent and method for the determination of cholesterol | |
| US4399218A (en) | Method and reagent for the determination of glycerin | |
| JPS5818080B2 (ja) | コレステリンの測定法及び測定試薬 | |
| Cohenford et al. | Colorimetric assay for free and bound L-fucose | |
| JPS6338199B2 (ja) | ||
| US4409328A (en) | Method and reagent for the determination of glycerol | |
| JPH07121901B2 (ja) | 新規な尿素誘導体及びこれを発色成分として用いる測定法 | |
| EP0121254A2 (en) | Process for determining substrate or enzymatic activity | |
| EP0101945A1 (en) | Multilayer analytical element | |
| JPS622799B2 (ja) | ||
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| JPS6259782B2 (ja) | ||
| US4778757A (en) | Method for the determination of substrates or enzyme activities | |
| EP0038753B1 (en) | Method for inhibiting the activity of lactate oxidase | |
| JPH0131880B2 (ja) | ||
| JPH05260994A (ja) | ペルオキシド−ペルオキシダーゼ試験系を使用する唾液中の被検体の検出法 | |
| JPS6123998B2 (ja) | ||
| JP2643205B2 (ja) | 高感度比色定量法 |