JPS62278450A - 光学分割剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な光学分割剤、特に高度な基質選択性を有
する光学的に活性な合成モノペプチドまたはポリペプチ
ドを含有してなる光学分子１剤に関する。

特にラセミ混合物の光学分割を目的とした分析のみなら
ず工業的にも使用しうる液体クロマトグラフイー用充填
剤を提供するものである。

〔従来技術〕

これまでに液体クロマトグラフィーによろうセミ混合物
の光学分割については各種の検討が行われてぎた。

天然系の吸着剤には鏡像体区別吸着性があるが、その容
母が小さく、交換速度も遅い。そこで構造がはっきりし
た光学活性な吸着体を合成し、光学分割を試みた報告及
び特許が最近多く提出されて来ている。

光学的に活性なアミノ酸を含有させた光学分υノ剤の例
としては、Ｇ、　Ｌｏｓｓｅら（２，＋ｎａｔｕｒｒｏ
ｒｓｃｈ、　。

ユ乃、　４１９（１９６２）　）にょるＬ−チロシンの
ような光学活性の原料を用いて、フェノールホルムアル
デヒド型の縮合樹脂を合成しアミノ酸の分割を試みた例
、＾、　Ｇ、　ｒｎｖｅｎｔａら（特公昭４Ｏ−９８５
９）によるし−グルタミン酸あるいはＬ−アスパラギン
酸のプロピルエステルにアクリル酸クロリドを反応させ
て光学活性のアクリルモノマーを合成し、ジビニルベン
ゼンと懸濁共重合させた後、エステルを加水分解して得
られるカルボン酸型樹脂によろうセミ分割の例、上材ら
（０化、む、１２３８　（１９６７））によるα−７ミ
ノ駿から出発して光学活性なスチレンおよびアクリル系
、モノマーを合成し、これを架橋剤とともに共重合させ
て得られる樹脂を用いたＤＬ−マンデル酸の分割の例、
隔日ら（王化、二、１２５０（１９７０））によるし−
グルタミン酸を出発物質としたカルボン酸型光学活性イ
オン交換樹脂による各種ラセミ休の光学分割の例、英国
特許１００７６６５に記載されるカルボン酸型イオン交
換樹脂を酸クロリドとし、これにＬ−グルタミン酸ある
いはし一アスパラギン酸を結合させて得られる酸性樹脂
によるリジンの分割の例、Ｊ、　Ｂｏｕｅら（Ｊ、　Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　２０４．１８５（１９８１）　
）によるポリアクリルアミドにホルムアルデヒドを介し
てし一プロリンを結合させた樹脂の例、Ｋ、　ｓｕｇｄ
ｏｎら（Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　１９２．２２
８（１９８０）　）によるシリカゲルなどの無機化合物
にシラン化合物を介してアミノ酸もしくはその誘導体を
担持させた例、大片ら（Ｊ、　Ｃｈｒｏｉａｔｏｇｒ、
ユ８５．１９ｇ（１９Ｊ３４）；　Ｊ、　Ｃｈｒｏｉａ
ｔｏｇｒ、　２９２．４２７（１９８４）　）にょるＬ
−バリンの尿素誘導体をシリカゲルに担持させた例、Ｌ
−バリンの３ｍ体をトリアジンを介してシリカゲルに担
持させた例、特開昭６０−１５８２０２号および６０−
１５８２０３号に記載される光学活性アミノ酸の金属塩
をグリシジルメタクリレートを含む共重合体のグリシジ
ル基に付加させた例等を挙げることができる。しかしな
がら、これらの光学分割剤は、その合成ルートが複雑で
あるうえ、得られた光学分割剤の分割効率もいまだ不充
分であり、分析手段としては使用可能であるとしても、
工業的規模での光学分割には使用不可能である。

また最近では、特開昭６０−１９３５３８号および６１
−２５６３９号に記載される重合度５以上の光学活性な
ポリアミノ酸を構成成分として含む架橋ポリマーによる
Ｄし一マンデル酸の光学分割の例が報告されている。光
学活性なポリアミノ酸のへリックス構造を利用して光学
分割を試みたものであるが、その分割効率は依然として
充分であるとはいえず、しかも、分割効率のｆｆ１ｌ！
！依存性が大きく温度上昇とともに分割効率が低下する
などの欠点を有する。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は、かかる従来技術の欠点を解消し、高度な不斉
選択性を有し、分割効率が高（工業的に使用し得る光学
分割剤の提供を目的とする。

（問題点を解決する為の手段及びその作用）本発明者は
、光学的に活性なアミノ酸および／または、その誘導体
を構成成分とするポリマーを含有する光学分割剤の不斉
選択性を支配する要因について１２意検討を重ねた結果
、不斉選択性を支配するのは、このようなポリマーの重
合度ではなく、それを構成する光学活性なアミノ酸およ
び／またはその誘導体の種類とその配列のさせ方であり
、特に特定の光学的に活性なアミノ酸および／またはそ
の誘導体を配列に組み入れることにより、高度な不斉選
択性の得られること、特にそのような特定の光学的に活
性なアミノ酸および／またはその誘導体をいくつか組合
せることにより、特に高い不斉選択性の得られることを
見出した。

さらには、このような特定の光学的に活性なアミノ酸お
よび／または、その誘導体を配列に組み入れることによ
り、これらから構成されるポリマーの重合度を高くする
必要はなく、重合度が４以下のときに高い不斉選択性が
得られること、特定の光学的に活性なアミノ酸またはそ
の誘導体の単独でもその残塁に対する保護基をつけただ
けで高度な不斉選択性の得られこと、重合度２以上の環
状ポリペプチドにおいても同様に特定の光学的に活性な
アミノ酸および／またはその誘導体を組み入れることに
より、高度な不斉選択性の得られこと、また、このよう
にして得られる光学分割剤の不斉選択性の温度依存性が
小さいこと等を見出し、本発明を完成するに到った。

すなわち、本発明は光学的に活性なアミノ酸および／ま
たはその誘導体を構成成分として含む重合度が４以下で
ある光学的に活性な合成ペプチドまたはポリペプチドを
含有してなる光学分割剤を提供するものであり、特にモ
ノペプチドの場合には特定の光学的に活性なアミノ酸ま
たはその誘導体とアミノ酸残基に対する保護基との組合
せにより、線状ジペプチド、トリペプチド、テトラペプ
チドの場合には少くとも１種の特定の光学的に活性なア
ミノ酸および／またはその誘導体を配列に組み入れるこ
とにより、また、環状ポリペプチドを構成成分として含
むジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドの場合に
は特定の光学的に活性なアミノ酸および／またはその誘
導体を環状ポリペプチドの構成成分として組み入れるこ
とにより高度な不斉選択性を付与された光学分割剤を提
供するものである。

本発明の光学分割剤に含有される光学的に活性な合成モ
ノペプチドまたはポリペプチドは光学的に活性なアミノ
酸および／またはその誘導体から構成される。

構成単位である光学的に活性なアミノ酸としては０体お
よび１体の、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシ
ン、セリン、トレオニン、プロリン、メチオニン、シス
チン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、
オキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アル
ギニン、ヒスチヂン、リジン、オルニチン等を挙げるこ
とができる。また、光学的に活性なアミノ酸誘導体とし
ては、上記の光学的に活性なアミノ酸のカルボキシル基
、アミノ基、ヒドロキシル基等を利用してこれらに導入
可能な各種の置換基を導入したものであり、γ−メチル
グルタメート、γ−ベンジルグルタメート、β−メチル
アスパルテート、β−ベンジルアスパルテート、ε−カ
ルボエトキシリジン、ε−カルボベンゾキシリジン、δ
−カルポエトキシオルニヂン、δ−カルボベンゾキシオ
ルニチン リン等をその例として挙げることができる。

合成モノペプチドまたはポリペプチドの末端アミノ酸の
残塁であるアミノ基あるいはカルボキシル基を保護する
場合の保；！を基としては、各種の保ＩＩＩが利用可能
であるが、メトキシカルボニル塁、エトキシカルボニル ルボニル基等のフルコキシカルボニル基、ベンジルオキ
シカルボニル ボニル基、アセチル基、エチルカルボニル基、ターシャ
リ−ブチルカルボニル ベンジルカルボニル基等のアシル基、メチル基、エチル
基、ターシャリ−ブチル基等のアルキル基、ベンジル基
等のアラルキル基等をその例として挙げることができる
。

光学的に活性な合成モノペプチドまたはポリペプチドを
構成する光学的に活性なアミノ酸および／またはその誘
導体として、また、末端アミノ酸の残基を保護する場合
の保護基として、前出の光学的に活性なアミノ酸、アミ
ノ酸誘導体、保′Ｓ基をそれぞれ使用しつるが、本発明
においては、これらの種類の選択が非常にｍ要な役割を
はたす。

本発明で特に重要な役割をはたす特定の光学的に活性な
アミノ酸およびその誘導体は、不斉炭素にメチレン基を
介して嵩高い塁が結合しているものであり、そのような
アミノ酸およびその誘導体の例としては、ヒスチヂン、
ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、ト
リプトファン、オキシプロリンおよびこれらの誘導体、
例えば、ヒスチヂンのイミダゾール基、チロシン、オキ
シプロリンのヒドロキシル基、トリプトファンのインド
ール核にベンジル基、ベンジルカルボニル基、ベンジル
オキシカルボニル基、ターシャリ−ブチルカルボニル基
、ターシャリ−ブトキシカルボニル基、ホルミル基など
を導入したもの等を挙げることができる。バリンおよび
イソロイシンは不斉炭素に直接嵩高すぎる基が結合して
いるので好ましくない。

嵩高い基とは例えば分校を有するアルキル基、フェニル
基、イミダゾール基、インドール核、環状アミノポリメ
チレン基（環の構成成分として不斉炭素を有するもの）
及びこれらにヒドロキシル基が導入されたもの、さらに
これらのヒドロキシル基、イミダゾール基、インドール
核がベンジル基、ベンジルカルボニル基、ベンジルオキ
シカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブチ
ルカルボニル基、ホルミル基等で置換されているもの等
が挙げられる。

不斉炭素に隣接したこれらの嵩高い基が安定した高度に
不斉な環境を作り出し、分割対象である基質との相互作
用を制御することにより、不斉選択性を向上させるのに
効果を発揮する。

末端アミノ酸の残塁を保護する場合には、その保護基の
種類も重要である。トリチル基のような非常に嵩高い保
ｆｆｌ基は、合成モノペプチドまたはポリペプチドと基
質との相互作用を妨げることが多い。適度な嵩高さを持
つターシャリ−ブトキシカルボニル基、ベンジルカルボ
ニル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブチルカル
ボニル基、ベンゾイル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基等
を好ましい保護基の例としで挙げることができる。

合成モノペプチドの場合には、残基に対する保ｍｌは必
須であり、高い不斉選択性を得るためには、光学的に活
性なアミノ酸またはその誘導体として前出の不斉炭素に
隣接した嵩高い基を有する光学的に活性なヒスチヂン、
ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、ト
リプトファン、オキシプロリンおよびこれらの誘導体の
中から選ぶのが好ましい。保護基としては、前出のター
シャリ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボ
ニル基、ベンジルカルボニル基、ｔ−ブチルカルボニル
基、ベンゾイル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基の中から
選ぶのが好ましい。

線状ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドの場合
には、光学的に活性なアミノ酸および／またはその誘導
体として少くとも１種類は前出の不斉炭素に隣接した嵩
高い基を有するものの中から選ぶのが好ましい。ポリペ
プチドの構成成分として不斉炭素に隣接した嵩高い基を
有するこれら特定の光学的に活性なアミノ酸および／ま
たはその誘導体の数が多いほど、不斉選択性が向上する
。

しかし基質によっては、立体障害が大きすぎ基質との相
互作用が妨げられることもあり、このような場合には、
その伯の光学的に活性なアミノ酸および／またはその誘
導体、例えばアラニン、セリン、トレオニン、γ−メチ
ルグルタメート、β−メチルアスパルテートなどと組合
けて使用すると有効である。末端アミノ酸の残基を保護
することば必須ではないが好ましく、その場合には、合
成モノペプチドの場合と同様、ターシャリ−ブトキシカ
ルボニル ルオキシカルボニル基、ｔ−ブチルカルボニル基、ベン
ゾイル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基等の中から選ぶの
が好ましい。

環状ポリペプチドを構成成分として含ませる場合は、光
学的に活性なグルタミン酸、アスパラギン酸のような酸
性アミノ酸、またはアルギニン、ヒスチヂン、リジン、
オルニチンなどの塩基性アミノ酸と少くとも１種類の前
出の不斉炭素に隣接した嵩高い基を有する、特定の光学
的に活性なアミノ酸および／またはその誘導体を使用す
る。

本発明は、前記したような光学的に活性なモノペプチド
またはポリペプチドを含有してなる光学弁ノ２１剤であ
るが、かかる光学分割剤の製造方法は大別すると次の２
通りがある。

第１の方法は、光学的に活性な合成モノペプチドまたは
ポリペプチドを側鎖に有するビニルモノマーを合成し、
これを架橋性ノマーと懸濁重合する方法である。

第２の方法は適当な担体に官能基を導入し、この官能基
を利用して合成モノペプチドまたはポリペプチドを固定
化する方法である。

第１の方法における光学的に活性な合成モノペプチドま
たはポリペプチドを側鎖に有するビニルモノマーを合成
する方法としてはアクリル酸クロライド、クロロメチル
スチレン、グリシジルメタクリレートなどのアミノ基と
反応する官能基を有するビニルモノマーと別途既知の方
法で合成したアミノ残基を有する光学的に活性なモノペ
プチドまたはポリペプチドのアミノ酸とを反応させる方
法、アリルアミンなどの側鎖にアミン基を有するビニル
モノマーのアミノ酸と別途既知の方法で合成したカルボ
キシル残基を有する光学的に活性なモノペプチドまたは
ポリペプチドのカルボキシル基と反応させる方法、アリ
ルアミンなどの側鎖にアミノ基を有するビニルモノマー
のアミノ基を利用して、光学的に活性なアミノ酸および
／またはその誘導体Ｎ−カルボキシ−α−アミノ酸無水
物（以下ＮＣＡと略記する）を順次付加させる方法など
がある。

アミノ残基あるいはカルボキシル残基を有するモノペプ
チドまたはポリペプチドの合成法はアミノ酸の官能基を
保護してペプチド結合形成反応を行い保護基を除去する
ことを原理とし、各種の方法が可能であるが、これらの
方法については「生化学実験講座１　タンパク質の化学
■　化学躇飾とペプチド合成」　（日本生化学会編、東
京化学同人（１９７７年））の２０７〜４００頁に詳し
く記載されている。

ポリペプチドが環状ポリペプチドを含む場合も前記の成
書３６９〜３７７頁に詳しく記載されている。

ＮＣＡを利用する方法にいては「ポリアミノ酸一応用と
展望−」　（藤本康夫編、講談社　昭和４９年４月１０
日発行）の６８〜１１１頁に詳しく記載されており、ア
ミン基を有するビニルモノマーとＮＣＡをほぼ等当量づ
つ反応させることにより、光学的に活性なアミノ酸およ
び／またはその誘導体を順次付加して行くことが可能で
ある。

光学的に活性なモノペプチドあるいはポリペプチドを側
鎖に有するビニルモノマーの末端アミノ酸の残塁に必要
に応じて保護基を入れたり、あるいは保護基のタイプを
変更することも可能であり、その方法についても前出の
「生化学実験講座１タンパク質の化学■　化学修飾とペ
プチド合成」の２１３〜３１１頁に詳しく記載されてい
る。

このようにして得られた光学的に活性なモノペプチドま
たはポリペプチドを側鎖に有するごニルモノマーを架橋
性モノマーであるジビニルベンゼン、スチレンビスアク
リルアミド、エチレングリコールジメタクリレートなど
の重合性二重結合を２個以上有するビニルモノマーとと
もに既知の方法で懸１１３重合させて本発明の光学分割
剤を得る。

必要に応じアクリルアミド、２−ヒドロキシニブルメタ
クリレート、スチレン、メチルメタクリレートなどの親
水性、疎水性をコントロールできる単官能のごニルモノ
マーを共重合成分として加えることも可能である。また
、パラフィンなどの不活性な溶媒を共存させて懸濁重合
を行った後、不活性な溶媒を抽出等により除去すること
により１ｑられる光学分割剤のポロシティ−をコントロ
ールすることも可能であり、好ましい方法である。

本発明の光学分割剤を製造する第２の方法は適当な担体
に導入された官能基を利用して合成モノペプチドまたは
ポリペプチドを固定化する方法であるが、担体としては
無機系のもの有機系のものいずれでもよく、高速液体ク
ロマトグラフィーにも使用可能な球状の担体であれば一
層良好である。

有様系の担体はペプチドとの結合が強く好ましい。

無機系担体としては、シリカゲル、ポーラスシリカ、ゼ
オライト等のシラノール基を有する担体が好ましい。こ
れに例えばシランカップラーを使って既知の方法でアミ
ノ基、ヒドロキシル基、クロル基などの官能基を導入す
る。例えばアミノプロピルトリエトキシシラン等のアミ
ノアルキルトリエトキシシランなどによるアミン基の導
入、ヒドロキシメチルトリエトキシシラン等によるヒド
ロキシル基の導入、りＯロメチルトリエトキシシラン等
のクロロアルキルトリエトキシシランなどによるクロル
基の導入などをその例として挙げることができる。また
このようなシランカップラーでシラノール基の約１０％
にアミノ基、ヒドロキシル基、りＯ残基などの官能基を
導入した後にメチルトリエトキシシラン等のフルキルト
リエトキシシランなどで更に残存シラノール基の除去を
ほどこしたものを用いるのがより好ましい方法である。

一方、有灘系担体としては、アミノ基、ヒドロキシル基
、クロル基、グリシジル基などの官能基を有するポリマ
ーであれば何でもよい。好ましくは架橋ポリマーを使用
する。そのような架橋ポリマーとしては、次のいくつか
の例を挙げることができる。

１）スチレン−ジビニルベンゼン架橋ポリマーにイオン
交換樹脂などの製造時に通常行われている既知の方法で
クロロメチル基などのクロ０アルキル基、アミノメチル
基などのアミノアルキル基、ヒドロキシメチル基などの
ヒドロキシアルキル基を導入したもの。さらにはクロロ
アルキル基を有する架橋ポリマーの場合には、さらにア
ンモニア、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、
ヘキサメチレンジアミンなどのアミンをクロル基と反応
させて、アミノ基を導入したもの。

２）アミノ基、ヒドロキシル基、クロル基、グリシジル
基などを側鎖に有するビニルモノマー、例えばアリルア
ミン、ヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロキシエチ
ルメチクリレート、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ
−メチロールメタクリアミド、アクリル酸りＯライド、
メタクリル酸クロライド、クロロメチルスチレン、グリ
シジルメタクリレートなどとジビニルベンゼン、メチレ
ンビスアクリルアミド、エチレングリコールジメタクリ
レートなどの架橋性モノマーを含むモノマー混合物を懸
濁重合で共重合させた球状の架橋ポリマー、さらにはク
ロル基を有する架橋ポリマーの場合にはアンモニア、エ
チレンジアミン等のアミンを反応させてアミノ基を導入
したもの。

またグリシジル基を有する架橋ポリマーの場合には、グ
リシジル基にアンモニア、エチレンジアミン等のアミン
を付加してアミノ基を導入したもの。

３）アクリル酸エステルやメタクリル酸エステル、例え
ばメチルアクリレート、エチルアクリレート、メチルメ
タクリレート、エチルメタクリレート、ノルマルブチル
メタクリレート、ターシャリ−ブチルメタクリレートな
どとジビニルベンゼン、メチレンビスアクリルアミドな
どの架橋性モノマーとを含むモノマー混合物を懸濁重合
で共重合させて得られる球状の架橋ポリマーにエチレン
ジアミン、プロピレンジアミン、ブチレンジアミン、ヘ
キサメチレンジアミン、ジエチレントリアミンなどのジ
アミンあるいはポリアミンをアミツリシス反応で付加し
、アミノ基を導入したもの。

４）ポリアミノ酸の球状粒子であって、側鎖または末端
基にアミノ基またはヒドロキシル基を有するもの。

これらの有機系担体を合成するに際し、パラフィンなど
の不活性な溶媒を共存させ、￥Ｊ造後、これら不活性な
溶媒を抽出等により除去してポロシティ−を与えること
も可能であり好ましい方法である。また、アクリルアミ
ド、メタクリルアミド、スチレンなどの親水性、疎水性
をコントロールできる単官能のビニルモノマーを適宜共
重合成分として加えることも可能である。

これらの７ミノ基、ヒドロキシル基、りＯ残基、グリシ
ジル基等の官能基を有する無機あるいは有機系の担体に
光学的に活性な合成モノペプチドまたはポリペプチドを
固定化する方法としては次の方法がある。

１）別途合成したカルボキシル残基を有する光学的に活
性なモノペプチドまたはポリペプチドと、アミノ基を有
する担体の場合にはシアノリン酸、ジエチルのような縮
合剤を用いて、ヒドロキシル基を有する担体の場合には
ジシクロへキシルカルボジイミドのような縮合剤を用い
て、クロル基を有する担体の場合には１．８−ジアザビ
シクロ。

（５，４，０）−ウンデセン−７のような縮合剤を用い
て、それぞれアミド結合あるいはエステル結合により担
体に固定化する方法。

２）別途合成したアミノ残基を有する光学的に活性なモ
ノペプチドまたはポリペプチドをクロル基、グリシジル
基を有する担体と反応させて固定化する方法。

３）アミン基を有する担体に光学的に活性なアミノ酸お
よび／またはその誘導体のＮＣＡを逐次添加して行く方
法。

このようにして担体に固定化された光学的に活性なモノ
ペプチドまたはポリペプチドの末端アミノ酸の残基に必
要に応じて保ｒ！１基を入れたり、そのタイプを変えた
りすることも可能であり、その方法も前出に準ずればよ
い。

〔発明の効果〕

本発明の光学分割剤は前記したような方法で製造される
が、その中に含まれる構成成分として前出の少くとも１
秤の特定の光学的に活性なアミノ酸および／またはその
誘導体、即ち不斉炭素に隣接した嵩高い基を有するアミ
ノ酸および／またはその誘導体を使用することが重要で
ある。これらの特定の光学的に活性なアミノ酸および／
またはそれらの誘導体が高度に不斉な環境を作り出し、
高い不斉選択性を発揮する。

本発明の光学分割剤に光学的に活性な合成ポリペプチド
を含有させる場合、その重合度は４以下である。重合度
５以上では、その合成が複雑となって来るにもかかわら
ず、かならずしも不斉選択性は向上しない。これは合成
ポリペプチドによる不斉認識に関与する部位がアミノ酸
単位で多くて４１！Ｉ程度までであるためと考えられ、
重合度を高くすることによりかえって立体障害が大きく
なりすぎるためか不斉選択性が低下したり、また不斉選
択性の温度依存性が大ぎくなるなどの欠点があられれて
来る。

本発明の光学分割剤は各種のラセミ混合物の分離に有効
であり、そのような分離対象としては各種のアミノ酸の
ラセミ混合物、例えばＤＬ−アラニン、ＤＬ−バリン、
ＤＬ−ロイシン、ＤＬ−イソロイシン、ＤＬ−セリン、
ＤＬ−トレオニン、ＤＬ−プロリン、ＤＬ−メチオニン
、ＤＬ−シスチン、ＤＬ−フェニルアラニン、ＤＬ−チ
ロシン、ＤＬ−トリプトファン、ＤＬ−オキシプロリン
、ＯＬ−アスパラギン酸、ＯＬ−グルタミン酸、ＤＬ−
アルギニン、ＤＬ−ヒスチヂン、ＯＬ−リジン、ＤＬ−
オルニチン、などおよびこれらＯＬ−アミノ酸のアミン
基、ヒドロキシル基、カルボキシル基などに各種Ｕ換基
が導入されたＤＬ−アミノ酸Ｆｆ／：導体、ジペプチド
およびその誘導体、トリペプチドおよびその誘導体など
、ヒトＯキシカルボン酸およびその誘導体などを例とし
て挙げることができる。

光学分割の方法としては、バッチ法、カラム法があるが
高い分割効率の得られるカラム法すなわら液体クロマト
グラフィー法が好ましい。

〔実施例〕

以下、本発明を実施例をあげて具体的に説明する。

合成例−１ クロロメチルスチレン５０ｇ、５５重ｓ％ジビニルベン
ゼン１０．９ｇ、スチレン２３８ｇ、７５重母％ジベン
ゾイルパーオキシド２．０ｇからなる混合溶液を、窒素
下、２重量％の部分酢化ポリビニルアルコールを含有す
る水溶液１０００ｄの中に、パドル型撹拌機で激しく撹
拌しつつ滴下して懸濁させた。滴下後７０℃で１２時間
、８００から１ｏＯＯ回転／分で撹拌し、球状粒子を得
た。生成した球状粒子をｊ濾過し、水洗、熱水、メタノ
ールおよびアセトンにて洗浄後、５０℃で減圧乾燥し、
架橋ポリマーを得た。この架橋ポリマー１００ｇを大過
剰のフタル酸イミドカリ１００ｇ、ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ＞８００１ｄとに混合し、１２０℃にて８時
間撹拌後、架橋ポリマーをジ戸取し、洗浄した。次に架
橋ポリマーを８０％の水加ヒドラジン８０ｄとジオキサ
ン８００ｄとに混合し、９０℃にて８時間撹拌後、ミ戸
取し、充分洗浄し、５０℃で減圧乾燥してクロロメチル
基をアミノメチル基に変換した架橋ポリマーを１！′７
た。このもののアミン基含有Ｏは１．７８重母％（アミ
ン基濃度１．１　ｌｍ−ｌ１ｌｏｔ　７ｇ）であり、は
ず１００％アミツメデル基に変換された架橋ポリマーを
得た。

得られたゲル状架橋ポリマー担体５０ｇ（アミド基５５
　、５ｍ−ｍｏｌ含有）にＮ−カルボキシ−α−アミノ
酸無水物（以下、ＮＣＡという）である光学活性なし一
ロイシンＮＣＡ　　８．８ｇ（５６，ＯＩＩｌ−ｍｏｌ
　）をジメチルホルムアミド４００ａｉｔ中で３０℃に
て２時間かきまぜた。

５６．５ｇのし一ロイシンの１分子がアミノメチル基に
付加したＮ末ＯＥ　ＪｌをもつＬ−ロイシン付加樹脂を
得た。

この樹脂は赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）測定により、
１６５０ＣＩＲ−’および１５３５α−１にペプチド結
合にもとづくアミド■および■の特性吸収を示した。

このＬ−ロイシン担体架橋ポリマー２８．１ｇをジオキ
サン２００ｄ、ターシャリーブトキシ力ルポニルクＯラ
イド４．０ＳＦ　（２９，３１ｍｏｌ　）、トリエチル
アミン２．Ｃ１の溶液に加え、３０℃にて２４時間反応
撹拌後、単離精製した。この様にしてＮ末端アミノ基を
ターシャリ−ブトキシカルボニル基により保護したＮ−
ターシャリ−ブトキシカルボニル−し−ロイシンを担持
させた球状架橋ポリマー（以下ＰＳ−Ｌｅｕと言う）を
得た。

１１五ニユ 合成例−１と全く同様にして、はぼ１００％アミノメチ
ル基に変換したアミノ基濃度１．１１１００／ｇ樹脂の
２重量％ジビニルベンゼン含有スチレンコポリマー担体
５Ｃ１にし一フェニルアラニンＮＣＡ　　１０．５９　
（５６，０１１１−１０１）をジメチルホルムアミド 問かきまぜる。

５８、　０ｇのし一フェニルアラニンの１分子がアミノ
メチル基に付加したＮ末端をもつし一フェニルアラニン
付加樹脂が得られる。

この樹脂も合成例−１と同様ＩＲ測測定より１６５００
１１　　および１５３５ｃａ＋−１にペプチド結合にも
とづくアミドＩおよび■の特性吸収を示した。

このし−フェニルアラニン担持架橋ポリマー２９ｇをジ
オキサン２００ｍ，ターシャリ−ブトキシカルボニルク
ロライド アミン２．０９の溶液に加えて３０℃にて２４時間反応
撹拌した後、単離精製した。

この様にしてＮ末端アミノ基をターシャリ−ブトキシカ
ルボニル基にて保護したＮ−ターシャリ−ブトキシ−Ｌ
−フェニルアラニンを担持させて球状架橋ポリマー（以
下、ＰＳ−Ｐｈｅと言う）を得た。

合成例−３ 合成例−１及び−２と同様の方法により、し−〇イシン
ＮＣＡやＬ−フェニルアラニンＮＣＡの代りにＬ−トリ
プトファンＮＣＡ　　１２．９ｇ（５６．　０ｓ−ｍｏ
ｌ　）を用いて全く同様にＬ−トリプトファンのＮ末端
をターシャリーブトギシカルボニル基にて保護したＮ−
ターシャリ−ブトキシ−Ｌ−トリプトファンを担持させ
た球状架橋ポリマー（以下ＰＳ−Ｔｒｙと言う）を得た
。

比較合成例−１ 合成例−１に記述した方法でクロロメチルスチレン１０
ｇ、５５噌吊％ジビニルベンゼン１０、９！Ｊ、スチレ
ン２７８ｇを用いた以外は全く同様にして合成し、球状
のアミノメチル化ポリスチレン（ＰＳ、アミノ基含有伍
０．２２２ｍ−ｅｑ／ｇ）５０ｇ（アミノ基１　１　、
　１　Ｉｎ−１０１含有）に光学活性なし一ロイシンＮ
ＣＡ　　８．８９（　５　５　、　７　ｍ−ｇｏｌ　）
をジメチルホルムアミド４００ｄ中で３０℃にて２日間
かきまぜた。

アミノメチル基１ケあたりＬ−ロイシンの５分子を付加
させたアミド末端基をもつし一ロイシン付加球状架橋ポ
リマーを得た。さらに合成例−１と同様にしてＮアミド
末端基をターシャリ−ブトキシカルボニル基により保護
したＬ−ロイシン付加球状架橋ポリ？−　（ＰＳ−Ｌｕ
ｅ　（５））を得た。

Ｌ狡豆里■二１ 比較合成例−１で合成したと同様にして合成した球状の
アミノメチル化ポリスチレン（ＰＳ、アミノ基含有ｆｆ
ｉ０．２２２ｍ−ｅｑ／ｇ）５０ｇ（アミノ基ｉ　ｉ　
、　（Ｍ−ｆｆｉ０１含有）に光学活性なし一ロイシン
ＮＣＡ　　８．８ｇ（５５．６ｍ−ｍｏｌ　＞をジメチ
ルホルムアミド４００ｄ中で３０℃にて２日問かきまぜ
た。

アミン基１ケあたりＬ−ロイシンの５分子を付加させた
アミド末端をもつし一ロイシン付加球状架橋ポリマーを
分取、精製後、同様にジメチルホルムアミド中、光学活
性なＬ−フェニルアラニンＮＣＡ　　４．２ｇ（２２，
４１１−２０１）を再度付加させＬ−ロイシンの５分子
のアミド末端にし一フェニルアラニンＮＣＡ　　２分子
を付加させたアミド末１ｇをもつし一ロイシン（５）−
Ｌ−フェニルアラニン（２）よりなる付加球状架橋ポリ
マーを得た。

さらに比較合成例−１と同様にしてＮアミド末端基をタ
ーシャリ−ブトキシカルボニル基で保護したし一ロイシ
ン（５）−Ｌ−フェニルアラニン（２）よりなる付加球
状架橋ポリマー（ＰＳ−Ｌｅｕ　（５）−Ｐｈｅ　（２
））を得た。

１１五ニユ 合成例−、、−２、−３で得られた光学活性アミノ酸１
モルをターシャリ−ブトキシカルボニルでＮ末端を保護
した側鎖を担持した球状架橋ポリマーをそれぞれ２００
メツシユと４００メツシユの金属性ふるいにて分級し、
粒径をそろえた。

この分級した粒径の均一な球状架橋充填剤を、ステンレ
スカラム（内径５ｍ，長さ１５０ｍ＞に充填し高速液体
クロマトグラフィー法によりジペプチド光学異性体の光
学分割を行った。

光学分割の対象Ｍ質物質として、ターシャリ−ブトキシ
カルボニル− ェニルアラニンメチルエステル（ｔｅｒ−３ｏｃ−Ｄ，
Ｌ−Ｌｅｕ−Ｄ，Ｌ−Ｐｈｅ）及びシクロ−し−ロイシ
ン−し−フェニルアラニン（ｃｙｃｌｏ−Ｌ−Ｌｅｕ−
Ｌ−Ｐｈｅ）とシクロ−Ｄ−ロイシン−Ｄ−フェニルア
ラニン（ｃｙｃｌｏ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｐｈｅ）の混合
物について行った。又、高速液体クロマト条件は、カラ
ム：内径５　ｔｍ　、長さ１５０ｍ＋温　度＝４０℃ 溶離液二ヘキサン／クロロホルム＝９５１５流　速：０
．５Ｉｄ／分 検　　出　：ＵＶ（２５４ｎｍ） 結果は表−１に示す通りであった。

金遣」（二Ａ 合成例−１で記述した方法と全く同じ方法により合成し
た得られたアミノメチル基を含有する球状の架橋ポリマ
ー担体５０ｇ（アミド基５５．６トー０１含有）に光学
活性なし一ヒスチヂンＮＧＡＩ　０．２！Ｊ　（５６，
０ｉ−ｍｏｌ　）をジメブールホルムアミド４００ＩＩ
ｔｌ中で３０℃にて２日間かきまぜた。

５７．７ＳＦのし一ヒスチヂンの１分子がアミノメチル
基に付加したアミド末端基をもつし一ヒスチヂン付加樹
脂を得た。

このＬ−ヒスチヂン担体架橋ポリマー５７．７グにＬ−
ロイシンＮＣＡ　　８．８９　（５６、Ｏトｍｏｌ　）
を上記と同様にして反応し、し−ヒスチヂンーＬ−０イ
シン付加樹脂を得た。

このし−ヒスチヂンーし一ロイシン担体架橋ポリマー３
２．（１（アミド基２３　、Ｑ　ｎｌ−ｓｏｌ含有）を
ジオキサン２００ｄ、ベンジルオキシカルボニルクロラ
イド エチルアミン２．０ｇの溶液に加え、３０℃にて２４時
間反応撹拌後、水洗、熱水、メタノールおよびアセトン
にて洗浄精製し、５０℃で減圧乾燥し、Ｎ末端アミン基
をベンジルオキシカルボニル基により保護したジペプチ
ドよりなるし一ヒスチヂンーし一ロイシン（以下Ｄ−Ｈ
Ｌと言う）を担持させた球状架橋ポリマー（以下ＰＳ−
Ｄ−ＨＬと言う）を得た。

合成例−５ 合成例−４と同様にしてまずし一ロイシンを反応させた
後、Ｌ−ヒスチヂンを反応させることにより、同様にし
てＮ末端アミノ基をベンジルオキシカルボニル基により
保護したジペプチドよりなるし一ロイシンーし一ヒスチ
ヂン（以下Ｄ−ＬＨと言う）を担持させた球状架橋ポリ
マー（以下ＰＳ　−　Ｄ　−　ＬＨと言う）を得た。

１皮且二玉 合成例−４と同様にしてまずＬ−ロイシンを反応させた
ＩＬ−フェニルアラニンを反応させることにより、Ｎ末
端アミノ基をベンジルオキシカルボニル基により保護し
たジペプチドよりなるＬ−ロイシン−Ｌ−フェニルアラ
ニン（以下Ｄ−ＬＰと言う）を担持させた球状架橋ポリ
マー（以下ＰＳ−Ｄ−ＬＰと言う）を得た。

実施例−２ 合成例−４、−５、−６で得られた球状架橋ポリマーを
、実施例−１と同様にして分級し粒径の均一な球状架橋
充填剤とし、ステンレスカラムに充填し、高速液体クロ
マトグラフィー法により光学活性な基質の光学分割を行
った。

光学分割の対称基質物質としてフェニル−Ｎ−アセチル
−ＤＬ−フェニルアラネート（以下ＰＡＰと略す）と、
フェニル−Ｎ−７セチルー［）Ｌ−アラネート（以下Ｐ
ＡＡと略す）について、光学分割を行った。

高速液体クロマト条件は、溶離液としてヘキサン／クロ
ロホルム＝９０／１０を用いた以外は、実施例１に同じ
。

結果は表−２に示す通りである。

表−２ １）分離係＠：光学活性りの場合の保持容Ｒｋ′，を基
準とした。

１炎璽ニユ 球状のシラノール基を有するポーラスシリカにアミノプ
ロピルトリエトキシシランを用いシランカップリングを
ほどこし、アミン基を含有させた無機担体５０ｇ（アミ
ド基３　０　ＩＩＩ−１１１０１含有）に光学活性なア
ミノ酸ＮＣＡを合成例−４に示した方法と同様にして、
し−ロイシンＮＣＡ４．７ｇ（３０ｍ−ｍｏｌ　）をジ
メチルボルムアミド４００ｄ中で３０℃にて２日間かき
まぜた。

このＬ−ロイシン付加担体５３．４ｇにし一フェニルア
ラニンＮＧＡ　　５．　６ｇ（３０＋１１−ｍｏｌ　＞
を上記と同様に反応し、さらに１ｑられたＬ−ロイシン
−Ｌ−フェニルアラニン付加但体５７．７ｗに１−ｏイ
シンＮＣＡ　　４．７ｇ（３０ｆｆｌ−１１１０１”）
を付加さけた後、このＬ−ロイシン−Ｌ−フェニルアラ
ニン−Ｌ−ロイシン付加担体６１．１ｇをジオキサン２
００Ｉ１、、ベンジルオキシカルボニルクロライド５．
２９　（３０ｍ−ｍｏｌ　）　、トリエチルアミン２．
０ｇの溶液に加え３０”Ｃにて２４時間反応撹拌後、洗
浄精製し、Ｎ−末端アミノ基をベンジルオキシカルボニ
ル基により保護したトリペプチドよりなるし一ロイシン
ーし一フェニルアラニンーＬ−ロイシン（以下Ｔｒ−Ｌ
ＰＬ−１と言う）を担持させて球状の無殿質担体を得た
。

１１五二１ 合成例−７と同様にして、Ｎ−末端アミノ基をベンジル
オキシカルボニル基により保護した］・リベブチドより
なるＤ−ロイシン−Ｌ−フェニルアラニン−Ｌ−ロイシ
ン（以下Ｔｒ−ＬＰＬ−２と言う）を担持させた球状の
無機担体を１９だ。

合成例−９ 合成例−７と同様にして、Ｎ−末端アミン基をベンジル
オキシカルボニル基により保護したテトラペプチドより
なるＬ−アラニン−し−ロイシン−し−フェニルアラニ
ン−Ｌ−ロイシン（以下Ｔｅ−ＡＬＰＬ−１と言う）を
担持させた球状の無機質担体を得た。

丸１ｉニュ 合成例−７、−８、−９で得られた球状のポリペプチド
付加無機質担体を実施例−１と同様な分級をほどこした
後、ステンレスカラムに充填し、高速液体クロマトグラ
フィー法により光学活性な基質の光学分割を行った。光
学分割の対称基質物質は実施例−２と全く同様な、ＰＡ
ＰとＰＡＡについて光学分割を行った。

高速液体クロマト条件は溶離液としてヘキサン／クロロ
ホルム＝９０／１０を用いた以外は実施例１に同じ。

結果は表−３に示す通りである。

表−３ １）分離係数；光学活性りの場合の保持容ａｋ′ｏを基
準とした。

１ｉ且ニユヱ 合成例−１に記述した同様な方法により合成したアミノ
メチル化ポリスチレン（ＰＳ、アミノ基濃度１．２ｍｅ
ｑ　／ｒＪ）１．５ｇ（アミノ基１８トｎ＋ｏｌ　）と
Ｎ−ターシャリ−ブトキシカルボニル−Ｌ−グルタミン
酸メチル（Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ　）　、　Ｃ１
１Ｈ１９ＮＯ６　＝　２　６　１　）　５．　２　ｇ（
　２　０　ｍ−ｍｏｌ　）をジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）２００厩中に加え、氷温でかきまぜながらトリエ
チルアミン４．２ｇ（４０ｍ−ｍｏｌ　）とシアンリン
酸ジエチル３．　２６ＳＪ　（２０＋１１−１１１０１
　）を添加した。

１時間同温でかきまぜたのち、室温で更に２４時間かき
まぜた。

吸引ろ取し、ＤＭＦ、メタノール、エーテルで十分洗浄
、乾燥させて、１９．５ｇのＮ−ターシャリ−ブトキシ
カルボニル− チルを担持させた球状架橋ポリマー（３ｏｃ　−　１−
Ｇｌｕ　（ｏＭｅ）−ＰＳ）を得た。

次にＢｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ　（ｏＭｅ）−ＰＳを２００１
Ｒｉのギ酸中で１２時間加熱することにより保護基のタ
ーシャリ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）を除去した
化合物、Ｌ−グルタミン酸メチル担持球状架橋ポリマー
（Ｌ−Ｇｌｕ（ｏＭｅ）−　ＰＳ）を得る。収量は１６
．８９Ｆあった。

同上と同様の縮合、洗浄の方法を用いて、１６、８９の
Ｌ−Ｇｌ　ｕ　（ｏＭｅ）−ＰＳは更に４、３ｇのター
シャリ−ブトキシカルボニル−一ロイシン（３ｏｃ　−
　１　−　Ｌｅｕ。

Ｃ１１Ｈ２８ＮＯ３−２１４、２Ｑｍ−ｍｏｌ　）と、
縮合させて化合物Ｎ−クーシャリ−ブトキシカルボニル
−し−ロイシンーヒーグルタミン酸メチルを担侍球状檗
橋ボ’）マー　（Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｇ　ｌ　ｕ
　（ｏＭｅ）−ＰＳ）　、収ｆｆ１２０ｇを得た。

次いでＢＯｃ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｇｌｕ　（ｏＭｅ）−
ＰＳは同上と同様にしてギ酸によって脱ＢＯＣされ、Ｌ
−ロイシン−Ｌ−グルタミン酸メチル担持球状架橋ポリ
マー（Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｇｌｕ（ｏＭｅ）−ＰＳ）、収
ｆｆ１１７ｇを得た。

得られたし−Ｌｅｕ　−Ｌ−Ｇ　ｌ　ｕ　（ｏＭｅ）−
ＰＳの一部は既に環化しているが、これを５ｅＣ−ブチ
ルアルコール１００Ｉｄ１トルエン５０Ｉｄの混合溶媒
中で２４時間還流することにより、はず完全に環化され
た化合物ｃｙｃｌｏ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｇｌｕ−ＰＳ（
Ｃｙｃｌｏ−ＬＧ−ＰＳ）１６．５ｇを得た。

主区旦ニュユ 合成例−１に記述した同様な方法でクロロメチルスチレ
ンの代りにメチルメタアクリレート（ＭＭＡ）を用いて
、ＭＭＡ／スチレン／ジビニルベンゼンよりなる球状架
橋ポリマーを合成後、アルカリ加水分解を行い、メタア
クリルＭ／スチレン／ジビニルベンゼンよりなる球状架
橋ポリマー（ＰＭ）を得た。

この球状架橋ポリマー（カルボキシル基濃度１．２ｍ−
ｅＱ／ｇ）１．５９　（カルボキシル基１８ｍ−ｍｏｌ
　）と、Ｎ−ターシャリ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リ
ジン−メチルエステル（３ｏＣ−１−ＬｙＳ（ＯＭｅ）
、Ｃｌ２Ｈ２４Ｎ２０４＝２６０）５、２！Ｊ　（２０
＋−ｍｏｌ　）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ＞２０
０ｉ中に加え、氷温でかきまぜながら、トリエチルアミ
ン４．２ｇ（４０ｍ−ｍｏｌ　）とシアノリン酸ジエチ
ル３．２６ｇ（２０ｍ−ｍｏｌ　）を添加した。１時間
同温でかきまぜたのち、空温で更に２４時間かきまぜた
。

吸引ろ取し、ＤＭＦ、メタノール、エーテルで十分洗浄
、乾燥させて、Ｎ−ターシャリ−ブトキシカルボニル−
Ｌ−リジンーメチルエステルを担持させた球状架橋ポリ
マー（Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（ｏＭｅ）−ＰＭ）１９．３
ｇを得た。

次に合成例−１０と全く同様にして、保護基のターシャ
リ−ブトキシカルボニル 除去した後、３ｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕと縮合させ、さらに脱
ＢＯＣし、これをＳｅＣ−ブチルアルコール１００ｄ，
トルエン５０ｍの混合溶媒中で２４時間還流することに
より、はイ完全に環化された化合物ｃｙｃｌｏ−Ｌ−Ｌ
ｅｕ−Ｌ−ＬＶＳ−ＰＭ　（ｃｙｃ　ｔｏ−ＬＬ−ＰＭ
＞１６．３ｇを得た。

支１五二Ａ 合成例−１０、−１１で得られた球状架橋ポリマーを、
実施例−１と同様にして分級し粒径の均一な球状架橋充
填剤とし、ステンレスカラムに充填し、高速液体クロマ
トグラフィー法により光学活性な基質の光学分割を行っ
た。

光学分割の対象基質物質としては、実施例−１と同様な
ｔｅｒ−Ｂｏｃ−ＤＬ−Ｌｅｕ−ＤＩ　−Ｐｈｅ　（Ｌ
ｐ）及びＣｙＣＩＯ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−　ｐｈｅとｃｙ
ｃｌｏ−Ｑ−１−ｅｕ−［）−ｐｈｅの混合物（Ｃ−Ｌ
ｐ）について行った。

又高速液体クロマトグラフィー条件も実施例１と同様と
した。結果は表−４に示す通りであった。

手続ネ［ｎ正史 昭和６１年６月２７日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、光学的に活性なアミノ酸および／またはその誘導体
   を構成成分として含む重合度が４以下である光学的に活
   性な合成モノペプチドまたはポリペプチドを含有してな
   る光学分割剤。 ２、合成ポリペプチドの重合度が２以上４以下である特
   許請求の範囲第１項の光学分割剤。 ３、合成ポリペプチドが重合度２以上４以下の環状ポリ
   ペプチドを構成成分として含む特許請求の範囲第２項の
   光学分割剤。 ４、合成ポリペプチドが２種類以上の光学的に活性なア
   ミノ酸および／またはその誘導体を構成成分として含む
   特許請求の範囲第２項又は第３項の光学分割剤。 ５、光学的に活性な合成モノペプチドまたはポリペプチ
   ドがその構成成分として光学的に活性なヒスチヂン、、
   ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、ト
   リプトファン、オキシプロリンおよびこれらの誘導体の
   中から選ばれた１種類以上を含有する特許請求の範囲第
   １項の光学分割剤。 ６、合成モノペプチドまたはポリペプチドの末端アミノ
   酸の残基を保護基で保護した特許請求の範囲第１項の光
   学分割剤。 ７、その形態が球状である特許請求の範囲第１項の光学
   分割剤。