JPS6227665A - 脂質測定法 - Google Patents
脂質測定法Info
- Publication number
- JPS6227665A JPS6227665A JP60167004A JP16700485A JPS6227665A JP S6227665 A JPS6227665 A JP S6227665A JP 60167004 A JP60167004 A JP 60167004A JP 16700485 A JP16700485 A JP 16700485A JP S6227665 A JPS6227665 A JP S6227665A
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- JP
- Japan
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- lipid
- surfactant
- measuring
- specimen
- sensor
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- Pending
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
この発明は酵素センサを適用した脂質測定法に関するも
のである。
のである。
(従来の技術)
一般に、中性脂質の測定においては、脂質を加水分解し
生じたグリセロールの定量を行うという方法を用いてい
た。しかしこの方法には、操作の煩雑さに伴う種々の欠
点があり、これらの欠点を克服するためセンサによる測
定法が試みられてきた。
生じたグリセロールの定量を行うという方法を用いてい
た。しかしこの方法には、操作の煩雑さに伴う種々の欠
点があり、これらの欠点を克服するためセンサによる測
定法が試みられてきた。
例えば、日本化学会第48秋季年会講演予稿集、P47
8に示された脂質測定法は、酵素センサとして水素イオ
ン感応性電界効果をトランジスタ(以下pH−l5FE
Tと称する)上に有機膜を形成し、その上にリポプロテ
ィンリパーゼを化学修飾したものを用い、また標準試料
としてトリオレインを選び、これをトリトンx−ioo
(ポリオキシエチレンクリコールp−t−オクチルフ
ェニルエーテルのオキシエチレングリコール基の重合数
が9.10のものの商品名)溶液に懸濁させ遠心分離し
、得られた中間層の液を試料として、パッチ方式によっ
て測定を行うものであり、その測定原理は次の如きもの
である。即ち、pH−l5FET上の有機膜に化学修飾
により固定化されたリポプロティンIJ 、ξ−ゼは、
脂質試料を次式(1)に従って脂肪酸とグリセロールに
分解する。この分解生成物である脂肪酸tpH−ISF
ETで定量することによって脂質濃度の測定が可能とな
る。
8に示された脂質測定法は、酵素センサとして水素イオ
ン感応性電界効果をトランジスタ(以下pH−l5FE
Tと称する)上に有機膜を形成し、その上にリポプロテ
ィンリパーゼを化学修飾したものを用い、また標準試料
としてトリオレインを選び、これをトリトンx−ioo
(ポリオキシエチレンクリコールp−t−オクチルフ
ェニルエーテルのオキシエチレングリコール基の重合数
が9.10のものの商品名)溶液に懸濁させ遠心分離し
、得られた中間層の液を試料として、パッチ方式によっ
て測定を行うものであり、その測定原理は次の如きもの
である。即ち、pH−l5FET上の有機膜に化学修飾
により固定化されたリポプロティンIJ 、ξ−ゼは、
脂質試料を次式(1)に従って脂肪酸とグリセロールに
分解する。この分解生成物である脂肪酸tpH−ISF
ETで定量することによって脂質濃度の測定が可能とな
る。
式(1)
%式%
:
CH20CORs アルキル基CHO
COR2+CHOCOR,、+ R,C0OH+ R,
C0OHCH20)1 CH2COR2+R,C0OH+ R3C0OHH20
H H20H CHOH+ R2C0OH 曇 CH,0I( (発明が解決しょうとする問題点) 上述の測定法は、血清中の脂質定量を主な使用目的とし
ており、脂質に対するセンサの応答が得られることを確
認するため、水難溶性のトリオレインを用いてなされて
いる。そして、このトリオレインをトリトンX−100
溶液に懸濁させ、遠心分離で得られた中間層を回収して
脂質センサ用試料とするもので、未だ操作の煩雑さが残
されていた。
COR2+CHOCOR,、+ R,C0OH+ R,
C0OHCH20)1 CH2COR2+R,C0OH+ R3C0OHH20
H H20H CHOH+ R2C0OH 曇 CH,0I( (発明が解決しょうとする問題点) 上述の測定法は、血清中の脂質定量を主な使用目的とし
ており、脂質に対するセンサの応答が得られることを確
認するため、水難溶性のトリオレインを用いてなされて
いる。そして、このトリオレインをトリトンX−100
溶液に懸濁させ、遠心分離で得られた中間層を回収して
脂質センサ用試料とするもので、未だ操作の煩雑さが残
されていた。
(問題点を解決するための手段)
この発明は上記のような問題点を解消するためになされ
たもので、水難溶性の脂質試料を簡便に調整し、測定に
供することを目的とする。
たもので、水難溶性の脂質試料を簡便に調整し、測定に
供することを目的とする。
即ちこの発明は、酵素センサによる脂質測定において、
界面活性剤を用いて水難溶性の脂質を可溶化して、セン
サ用試料としたことを特徴とする脂質測定法である。こ
こで界面活性剤として、ポリオキシエチレングリコール
p−t−オクチル7二二ルエーテル、アルキルグルコシ
ド、ホリオキシエチレンクリコールステアリルエーテル
、ホリオキシエチレングリコールンルビタンモノラウレ
ート、ソルビタンラウレート、ジギ゛トニン等の非イオ
ン性界面活性剤、コール酸塩、デオキシコール酸塩等の
陰イオン性界回活性剤、ドデシルトリメチルア/モニウ
ムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド等
の陽イオン性界面活性剤、デオキシリゾレシチン、単鎖
レシチン等の両性界面活性剤が用いられる。
界面活性剤を用いて水難溶性の脂質を可溶化して、セン
サ用試料としたことを特徴とする脂質測定法である。こ
こで界面活性剤として、ポリオキシエチレングリコール
p−t−オクチル7二二ルエーテル、アルキルグルコシ
ド、ホリオキシエチレンクリコールステアリルエーテル
、ホリオキシエチレングリコールンルビタンモノラウレ
ート、ソルビタンラウレート、ジギ゛トニン等の非イオ
ン性界面活性剤、コール酸塩、デオキシコール酸塩等の
陰イオン性界回活性剤、ドデシルトリメチルア/モニウ
ムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド等
の陽イオン性界面活性剤、デオキシリゾレシチン、単鎖
レシチン等の両性界面活性剤が用いられる。
(作 用)
この発明では、試料調整のため界面活性剤を用いた結果
、脂質を可溶化することができ、測定操作の簡略化が可
能となる。
、脂質を可溶化することができ、測定操作の簡略化が可
能となる。
(実施例)
以下、この発明の一実施例を図について説明する。第1
図は測定に用いる酵素センサの構造図で、1はリード線
、2はエポキシ樹脂、3は参照電極、4はpH−l5F
ET、5はリパ−ゼ固定化膜、6は基材である。リパー
ゼ固定化膜5は、リパーゼを感光性樹脂を用いて包括固
定化したものである。
図は測定に用いる酵素センサの構造図で、1はリード線
、2はエポキシ樹脂、3は参照電極、4はpH−l5F
ET、5はリパ−ゼ固定化膜、6は基材である。リパー
ゼ固定化膜5は、リパーゼを感光性樹脂を用いて包括固
定化したものである。
第2図はフロ一方式による脂質測定装置の概略図で、7
は洗浄液、8は可溶化した脂質試料、9は切ジ換えノ々
ルブ、lOはポンプ、1)はウォータージャケット、1
2は酵素センサ、1はリード線、13は測定回路、14
は記録計、15は洗浄液あるいは脂質試料をウォーター
ジャケット内に流すためのチューブである。
は洗浄液、8は可溶化した脂質試料、9は切ジ換えノ々
ルブ、lOはポンプ、1)はウォータージャケット、1
2は酵素センサ、1はリード線、13は測定回路、14
は記録計、15は洗浄液あるいは脂質試料をウォーター
ジャケット内に流すためのチューブである。
この装置において、脂質試料8がチューブ15を通って
酵素センサ12に達すると、リスぞ−ゼ固定化膜5中の
りノぞ−ゼは脂質を前記式(1)に従って分解する。こ
の反応の結果生ずる脂肪酸をpH−I 5FI4でモニ
タし、測定回路13で信号処理を行い、記録計14に記
録する。脂質試料として、界面活性剤トリトンX−10
0溶液によって可溶化されたトリオレイン(3mM )
を選び、測定を行った結果得られた応答曲線を第3図に
示す。この図から明らかなように、安定したセンサの応
答が得られている。
酵素センサ12に達すると、リスぞ−ゼ固定化膜5中の
りノぞ−ゼは脂質を前記式(1)に従って分解する。こ
の反応の結果生ずる脂肪酸をpH−I 5FI4でモニ
タし、測定回路13で信号処理を行い、記録計14に記
録する。脂質試料として、界面活性剤トリトンX−10
0溶液によって可溶化されたトリオレイン(3mM )
を選び、測定を行った結果得られた応答曲線を第3図に
示す。この図から明らかなように、安定したセンサの応
答が得られている。
さらに、界面活性剤トリトンX−100溶液によって可
溶化されたトリオレインについての検量線を第4図に示
す。測定は1mM)リスマレイン酸緩衝液中で、PH7
,0,30℃の条件で行った。第4図から明らかなよう
に、トリオレイン濃度06mM〜3.0mMの範囲で直
線応答を得ている。
溶化されたトリオレインについての検量線を第4図に示
す。測定は1mM)リスマレイン酸緩衝液中で、PH7
,0,30℃の条件で行った。第4図から明らかなよう
に、トリオレイン濃度06mM〜3.0mMの範囲で直
線応答を得ている。
なお、上記実施例ではフロ一方式による脂質測定法を示
したが、パンチ方式でも同様に測定可能である。また界
面活性剤としてトリトンX−100溶液を用いたが、他
の非イオン性界面活性剤や、コール酸塩等の陰イオン性
界面活性剤、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド
等の陽イオン性π 界面活性剤、レシチン等の両性界面
活性剤を用いても、上記実施例と同様の効果を奏する。
したが、パンチ方式でも同様に測定可能である。また界
面活性剤としてトリトンX−100溶液を用いたが、他
の非イオン性界面活性剤や、コール酸塩等の陰イオン性
界面活性剤、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド
等の陽イオン性π 界面活性剤、レシチン等の両性界面
活性剤を用いても、上記実施例と同様の効果を奏する。
さらに脂質試料としてトリオレインを用いた力;、他の
水難溶性脂質でも同様に測定可能である。
水難溶性脂質でも同様に測定可能である。
また酵素センサに関しては、pH−l5FETの代pに
ガラス電極など水素イオンの測定が可能なものを用いて
も良く、す・々−ゼの代りにリボプロティンリパーゼを
用いることも可能である。さらに酵素の固定化に感光性
樹脂による包括固定法を用いているが、ポリアクリルア
ミドや寒天による固定化や化学修飾による固定化等でも
上記実施例と同様の効果を奏する。
ガラス電極など水素イオンの測定が可能なものを用いて
も良く、す・々−ゼの代りにリボプロティンリパーゼを
用いることも可能である。さらに酵素の固定化に感光性
樹脂による包括固定法を用いているが、ポリアクリルア
ミドや寒天による固定化や化学修飾による固定化等でも
上記実施例と同様の効果を奏する。
(発明の効果)
以上のように、この発明の脂質測定法では界面活性剤を
用いたことにより、水難溶性の脂質を可溶化することが
でき、従来法に比べよυ簡便な試料調製及び測定が可能
となるのである。
用いたことにより、水難溶性の脂質を可溶化することが
でき、従来法に比べよυ簡便な試料調製及び測定が可能
となるのである。
第1図は測定に用いた酵素センサの構造図、第2図は7
0一方式による脂質測定装置の概略図、第3図は測定の
結果得られたセンサの応答を示す曲線図、第4図は酵素
センサのトリオレインに対する検量線を示す図である。 1・・・リード線、2・・・エポキシ樹脂、3・・・参
照電極、4・・・pi(−ISFET、5・・・U、ξ
−ゼ固定化膜、6・・・基材、7・・・洗浄液、8・・
・可溶化した脂質試料、9・・・切り換えバルブ、10
・・・ポンプ、1)・・・ウォータージャケント、12
・・・酵素センサ、13・・・測定回路、14・・・記
録計、15・・・チューブ。 なお図中、同一符号は同一または相当部分を示す。
0一方式による脂質測定装置の概略図、第3図は測定の
結果得られたセンサの応答を示す曲線図、第4図は酵素
センサのトリオレインに対する検量線を示す図である。 1・・・リード線、2・・・エポキシ樹脂、3・・・参
照電極、4・・・pi(−ISFET、5・・・U、ξ
−ゼ固定化膜、6・・・基材、7・・・洗浄液、8・・
・可溶化した脂質試料、9・・・切り換えバルブ、10
・・・ポンプ、1)・・・ウォータージャケント、12
・・・酵素センサ、13・・・測定回路、14・・・記
録計、15・・・チューブ。 なお図中、同一符号は同一または相当部分を示す。
Claims (5)
- (1)酵素センサによる脂質測定において、界面活性剤
を用いて水難溶性の脂質を可溶化して、センサ用試料と
したことを特徴とする脂質測定法。 - (2)界面活性剤として、ポリオキシエチレングリコー
ルp−t−オクチルフェニルエーテル、アルキルグルコ
シド、ポリオキシエチレングリコールステアリルエーテ
ル、ポリオキシエチレングリコールソルビタンモノラウ
レート、ソルビタンラウレート、ジギトニン等の非イオ
ン性界面活性剤を用いることを特徴とする特許請求の範
囲第(1)項記載の脂質測定法。 - (3)界面活性剤として、コール酸塩、デオキシコール
酸塩等の陰イオン性界面活性剤を用いることを特徴とす
る特許請求の範囲第(1)項記載の脂質測定法。 - (4)界面活性剤として、ドデシルトリメチルアンモニ
ウムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド
等の陽イオン性界面活性剤を用いることを特徴とする特
許請求の範囲第(1)項記載の脂質測定法。 - (5)界面活性剤として、デオキシリゾレシチン、単鎖
レシチン等の両性界面活性剤を用いることを特徴とする
特許請求の範囲第(1)項記載の脂質測定法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60167004A JPS6227665A (ja) | 1985-07-29 | 1985-07-29 | 脂質測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60167004A JPS6227665A (ja) | 1985-07-29 | 1985-07-29 | 脂質測定法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6227665A true JPS6227665A (ja) | 1987-02-05 |
Family
ID=15841594
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60167004A Pending JPS6227665A (ja) | 1985-07-29 | 1985-07-29 | 脂質測定法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6227665A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0471293A2 (en) * | 1990-08-15 | 1992-02-19 | Abbott Laboratories | Solubilization reagent for biological test samples |
WO1995000609A1 (fr) * | 1993-06-18 | 1995-01-05 | Fractionnement Tirtiaux S.A. | Procede de degommage d'un corps gras et corps gras ainsi obtenu |
-
1985
- 1985-07-29 JP JP60167004A patent/JPS6227665A/ja active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0471293A2 (en) * | 1990-08-15 | 1992-02-19 | Abbott Laboratories | Solubilization reagent for biological test samples |
WO1995000609A1 (fr) * | 1993-06-18 | 1995-01-05 | Fractionnement Tirtiaux S.A. | Procede de degommage d'un corps gras et corps gras ainsi obtenu |
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