JPS62257398A - アシルアミダ−ゼ産生能検査用培地組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の背景 ■」 本発明は微生物のアシルアミダーゼ産生能検査用培地組
成物にｒ！Ｉｌｖる。さらに詳しくは、本発明はグルコ
ース非発酵性グラム陰性桿菌のアシルアミダーゼ産生能
検査用培地組成物に関するものである。

細菌感染症に対して適切な治療を隔りためには病原菌を
同定し、感受性試験を行い、その病原菌に有効な薬剤を
決定することが重要である。このような病原菌の同定に
際しては多項目にわたる生化学的性状検査が行われ、そ
の項目の１つとしてグルコース非発酵性グラム陰性桿菌
についてアシルアミダーゼ産生能の検査が行われる。こ
れは、上記筒が有するアシルアミダーゼ産生能を利用し
、菌の同定を行うものである。本発明の培地組成物はこ
のような試験に好適に使用される。

−　　およびその　　− アシルアミダーゼは培地中のアシルアミド化合物を加水
分！１ｌＴｊる酵素であり、微生物がこの酵素を産生ず
る能力を有するか否かの検査には従来、自家製の液体培
地または市販の寒天培地が使用されていた。

ところが、自家製の液体培地は調製の繁雑さおよび保存
性に難点があり、また液体培地、寒天培地ともに正確な
判定を行なうためには１昼夜の培養時間を必要とした。

細菌感染症の早期治療のためには、菌の同定はできるだ
け速やかに行うことが必要であり、より短かい時間で菌
の同定が可能な培地の出現が望まれていた。しかし、一
方においては、検査作業の都合上、判定を翌日に行なわ
ざるを得ない場合も生じ、このような場合には培養期間
が厳格に規制されておらず、都合により培養時間を延長
しても反応過剰になったすせず、正確な判定が可能な培
地が望ましい。

■９発明の目的 本発明は短時間の培養で同定が可能であるとともに長時
間培養しても正確な同定が可能であるグルコース非発酵
性グラム陰性桿菌のアシルアミダーゼ産生能の検査用培
地組成物を提供することを目的とする。

かかる目的を達成するため、本発明はアシルアミド化合
物１．０部（重１部、以下同じ）に対し、マグネシウム
塩０．００１２５〜０．０２部、リン酸二水素一アルカ
リ金属塩０．０２５〜０．３部、リン酸一水素二アルカ
リ金属塩０．０２５〜０．３部および保水性物質０．７
８８７５〜１２．６２部の組成よりなるグルコース非発
酵性グラム陰性桿菌のアシルアミダーゼ産生能検査用培
地組成物からなる。

さらに本発明はリン酸二水素一アルカリ金属塩がリン酸
二水素一カリウムであり、リン酸二水素二アルカリ金属
塩がリン酸一水素二ナトリウムであるアシルアミダーゼ
産生能検査用培地組成物からなる。

■１発明の詳細な説明 本発明の培地組成物においてアシルアミド化合物は基質
であり、これが検査菌によって加水分解されてアンモニ
アを生成する。生成したアンモニアをネスラー試薬によ
って検出することにより検査菌のアシルアミダーゼ産生
能を判定する。

アシルアミド化合物としては低級脂肪族カルボン酸のア
ミド誘導体が好適に使用され、特にアセトアミド、プロ
ピオン酸アミドが好ましい。ところがこれらのアシルア
ミド化合物は完全な乾燥状態では不安定であるので本発
明の培地においては保水ｆ１物質を加え、若干の保水性
を持たせ、これににって乾燥保存時の安定性を高めてい
る。保水性物質としては、グリセリン、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン等がある。

マグネシウム塩はＭ０２＋によってアシルアミダーゼの
活性を高める目的で加えられ、硫酸マグネシウム、塩化
マグネシウム、硝酸マグネシウム等が使用される。リン
酸二水素一アルカリ金属塩とリン酸一水素ニアルカリ金
属塩はｐｌ＋調整剤であり、菌の発育に最適なｐｌ＋６
．７〜６．９になるにうな範囲に設定されている。本発
明の培地組成物にはさらに浸透圧調整剤としてアルカリ
金属塩２〜３０部が使用されるのが望ましく、塩化ナト
リウム、塩化カリウムのようなアルカリ金属塩化物が好
適である。

本発明の培地組成物の前述した成分割合は臨界的であり
、アシルアミド化合物１．０部に対し、マグネシウム塩
０．００１２５〜０．０２部（好ましくは０、００２５
〜０．０１部）、リン酸二水素一アルカリ金属塩０．０
２５〜０．３部（好ましくは０．０５〜０．１５部）、
リン酸一水素ニアルカリ金属塩０．０２５〜０．３部（
好ましくは０．０５〜０，１５部）、保水性物質０．７
８８７５〜１２．６２部（好ましくは１．６〜６．３部
）である。本発明の培地は小スケールの液体培地として
使用するので小スケールでも正しい検査結果が得られる
ようにアシルアミド化合物の組成が選択されている。

本発明の培地は乾燥状態で保存でき、かつ接種菌数を適
宜選択することにより短時間培養（４〜５時間）または
−昼夜培養（１８〜２４時間）のいずれによっても正し
い判定が可能なにうに各成分の組成が選択されている。

本発明の培地組成物は常法に従ってアシルアミド化合物
１部当り２３．１２５〜９７．５部の滅菌蒸留水に溶解
して使用される。近年生化学的性状検査は多数の試験を
多穴プレート上で同時に行うのが普通であり、このよう
な場合には本発明培地組成物の水溶液を試験用プレート
のウェルに注入し、乾燥さけて乾燥培地どする。ここで
本発明では、保水個物質を使用するため、ウェルへの固
着が悲くなる。そこで、メチルセルロース等をウェルへ
の固着をよくするために用いる。量はアシルアミド化合
物１型帛部に対し、０．００１２５〜０．０２申聞部が
適当である。試験に際しては該ウェルに試験菌の懸濁水
を所定量分注し、３０℃で所定時間培養する。

４〜５時間の培養で判定することが望まれる場合は、液
体培地５０μｇ当り約７．５×１０７個の菌を接種し、
１８〜２２時間培養後の判定が望まれる場合は約１．５
×１０７個の菌を接種するのが好ましい。このように接
種菌数を調整Ｊ゛ることにより、短時間でもまた翌日で
も検査が行える。

次に本発明の培地組成物を使用して細菌のアシルアミダ
ーゼ産生能を検査した実施例を示す。

太−１−例 表１に記載の組成を有する本発明培地組成物を常法に従
って蒸留水に溶解し、菌同定用培地１〜３を得た。

表　　　１ 上記培地１〜３を多穴プレートの各ウェルに５０μρず
つ分注し、４０℃で乾燥した。次に寒天培地上で各種細
菌を３０℃で１８〜２４時間培養し、１．０ｍｆ！の滅
菌蒸留水中に培養時間が４時間の場合は１．５×１０９
個／威また２０時間の場合３　ｘ　ｉｏｅ個／　ｍＱと
なるように懸濁し各ウェルに５０μβずつ接種し、３０
℃で所定時間培養した。比較試験として、下記の組成を
有する培地（新井法）を用いる従来法により培養を行な
った。

Ｌ」Ｌ仄」［１ Ｋｌ−＋２ＰＯ４２ｇ ＮａＣ９５ｇ Ｍ（１８０４・７Ｈ２００，１ｇ プロピオン酸アミド　　　　　　１重 蒸　　留　　水　　　　　　　　　　　　　　１０１０
０Ｏ！培養終了後各培地についてネスラー試薬を用いて
アンモニア生成の有無を判定した。結果を表２に示す。

表　　　２ ■０発明の具体的作用および効果 表２から明らかなように、グルコース非発酵牲グラム陰
竹桿菌のアシルアミダーゼ産生能検査において、本発明
の培地を使用すると、培養時間の長短を問わず正しい菌
の同定が可能である。従って検査作業の都合にＪ：り即
日同定、翌日同定のいずれも選択することができる。こ
れに対して対照培地は少くとも２０時間の培養が必要で
あり、即日判定は不可能である。

さらに本発明の培地は、グリセリンおよびメチルセルロ
ースを含有し、保水性を有するので乾燥保存時において
も基質のアシルアミド化合物は安定である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）アシルアミド化合物１．０部（重量部、以下同じ
   ）に対し、マグネシウム塩０．００１２５〜０．０２部
   、リン酸二水素一アルカリ金属塩０．０２５〜０．３部
   、リン酸一水素ニアルカリ金属塩０．０２５〜０．３部
   および保水性物質０．７８８７５〜１２．６２部の組成
   よりなるグルコース非発酵性グラム陰性桿菌のアシルア
   ミダーゼ産生能検査用培地組成物。
2. （２）リン酸二水素一アルカリ金属塩がリン酸二水素一
   カリウムであり、リン酸一水素二アルカリ金属塩がリン
   酸一水素二ナトリウムである特許請求の範囲第１項記載
   の培地組成物。