JPS6219087A - 新規なヒト甲状腺刺激ホルモンのβサブユニツトのＤＮＡ配列 - Google Patents
新規なヒト甲状腺刺激ホルモンのβサブユニツトのＤＮＡ配列Info
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- JPS6219087A JPS6219087A JP15867885A JP15867885A JPS6219087A JP S6219087 A JPS6219087 A JP S6219087A JP 15867885 A JP15867885 A JP 15867885A JP 15867885 A JP15867885 A JP 15867885A JP S6219087 A JPS6219087 A JP S6219087A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
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- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は新規なヒト甲状腺刺激ホルモンのβ型サブユニ
ット（以下、ｈＴＳＨβという）をコードする配列を有
するＤＮＡ配列に関する。特に、Ｎ（５’）末端に２０
個のアミノ酸からなるシグナルペプチドをコードするＤ
ＮＡＮＡ配列３’）末端に６個の疎水性アミノ酸をコー
ドするＤＮＡ配列約４６０の塩基体（以下、ｂｐという
）のイントロンおよび１１２個ｈＴｓＨβをコードする
ｒ）ＮＡ配列を少なくとも含有する新規なりＮＡ配列に
関する。
ット（以下、ｈＴＳＨβという）をコードする配列を有
するＤＮＡ配列に関する。特に、Ｎ（５’）末端に２０
個のアミノ酸からなるシグナルペプチドをコードするＤ
ＮＡＮＡ配列３’）末端に６個の疎水性アミノ酸をコー
ドするＤＮＡ配列約４６０の塩基体（以下、ｂｐという
）のイントロンおよび１１２個ｈＴｓＨβをコードする
ｒ）ＮＡ配列を少なくとも含有する新規なりＮＡ配列に
関する。
ヒト甲状腺刺激ホルモン（以下、ｈＴＳＨという）は、
下垂体の前葉細胞から分泌される糖蛋白ホルモンであり
、甲状腺からの甲状腺ホルモンの生産と分泌を刺激する
ことによって、視床下部−下垂体−甲状腺軸の調節に重
要な生理学的役割を果たしている。ところで、従来、視
床下部−脳下垂体−甲状腺をつなぐ中枢の異状の診断に
は牛ＴＳＨを使用されたこともあるが、アナフィラキシ
−ショックが生起するため、その使用は中断されている
。しかして、ヒト由来のＴＳＨにおいては、アナフィラ
キシ−ショックがないので、前記診断に有効に使用でき
る。また、甲状腺機能検査にＴＳＨラジオイムノアッセ
イが多く用いられているが、この際もヒト由来ＴＳＨが
必要とされている。
下垂体の前葉細胞から分泌される糖蛋白ホルモンであり
、甲状腺からの甲状腺ホルモンの生産と分泌を刺激する
ことによって、視床下部−下垂体−甲状腺軸の調節に重
要な生理学的役割を果たしている。ところで、従来、視
床下部−脳下垂体−甲状腺をつなぐ中枢の異状の診断に
は牛ＴＳＨを使用されたこともあるが、アナフィラキシ
−ショックが生起するため、その使用は中断されている
。しかして、ヒト由来のＴＳＨにおいては、アナフィラ
キシ−ショックがないので、前記診断に有効に使用でき
る。また、甲状腺機能検査にＴＳＨラジオイムノアッセ
イが多く用いられているが、この際もヒト由来ＴＳＨが
必要とされている。
しかし、現時点においては、ｈＴＳＨは脳下垂体前葉に
存在することが分ってはいるが、それはごく微量にしか
存在せず、診断等の目的に使用するほど多量に入手する
ことは不可能と言ってもよい。
存在することが分ってはいるが、それはごく微量にしか
存在せず、診断等の目的に使用するほど多量に入手する
ことは不可能と言ってもよい。
一方、ｈ Ｔ Ｓ Ｈは、２つの非共有的に結合したサ
ブユニット（αとβ）からなり、黄体形成ホルモン（Ｌ
Ｈ） 、絨毛膜性腺刺激ホルモンＣＣＧ’）、及び卵胞
刺激ホルモン（ＦＳＨ）のような糖蛋白質ホルモンのグ
ループに属する。これらのホルモンは、同じα型サブユ
ニットをもち、これは単一の遺伝子によってコードされ
ている。そして、β型サブユニット部分の相違によって
、それぞれのホルモンの機能が分れてくる。過剰なα型
サブユニットは、（β型サブユニットと関係なく）、正
常な下垂体および正常胎盤に遊離型で存在しており、こ
のことはα型とβ型サブユニットは無関係に合成されて
おり、特異的なβ型サブユニットの合成は、これらホル
モンの生産における律速過程となりうろことを示唆して
いる。α型サブユニットのｃＤＮＡと遺伝子がクローン
化され、ヒト・マウス・ウシ・ラット等のｃ ｒ）ＮＡ
のヌクレオチド配列が決定された。しかし、β型サブユ
ニットに関しては、ヒトＣＧ、ヒトＬＨ及びラットＬ
Ｈの遺伝子についての報告はあるが、ｈＴＳＨβの遺伝
子は未だ詳しく解明されておらず、従って対応するｈ
Ｔ Ｓ ＩＩｓの正確なアミノ酸配列も決定されてはい
ない。
ブユニット（αとβ）からなり、黄体形成ホルモン（Ｌ
Ｈ） 、絨毛膜性腺刺激ホルモンＣＣＧ’）、及び卵胞
刺激ホルモン（ＦＳＨ）のような糖蛋白質ホルモンのグ
ループに属する。これらのホルモンは、同じα型サブユ
ニットをもち、これは単一の遺伝子によってコードされ
ている。そして、β型サブユニット部分の相違によって
、それぞれのホルモンの機能が分れてくる。過剰なα型
サブユニットは、（β型サブユニットと関係なく）、正
常な下垂体および正常胎盤に遊離型で存在しており、こ
のことはα型とβ型サブユニットは無関係に合成されて
おり、特異的なβ型サブユニットの合成は、これらホル
モンの生産における律速過程となりうろことを示唆して
いる。α型サブユニットのｃＤＮＡと遺伝子がクローン
化され、ヒト・マウス・ウシ・ラット等のｃ ｒ）ＮＡ
のヌクレオチド配列が決定された。しかし、β型サブユ
ニットに関しては、ヒトＣＧ、ヒトＬＨ及びラットＬ
Ｈの遺伝子についての報告はあるが、ｈＴＳＨβの遺伝
子は未だ詳しく解明されておらず、従って対応するｈ
Ｔ Ｓ ＩＩｓの正確なアミノ酸配列も決定されてはい
ない。
本発明は、絹換えＤＮＡ技術を用いる、ｈＴＳ■１βの
ポリペプチドをコードする遺伝子を提供することを目的
とする。
ポリペプチドをコードする遺伝子を提供することを目的
とする。
ｃ問題点を解決するための手段〕
本発明者らは、上記目的を達成するために、当該遺伝子
のクローニングを行い、そのＤＮＡ配列およびアミノ酸
配列を決定することにより、従来のｈＴＳＨβについて
知られていたアミノ酸配列と２個異なった新規なポリペ
プチドをコードするＤＮＡ配列を見出して本発明を完成
した。
のクローニングを行い、そのＤＮＡ配列およびアミノ酸
配列を決定することにより、従来のｈＴＳＨβについて
知られていたアミノ酸配列と２個異なった新規なポリペ
プチドをコードするＤＮＡ配列を見出して本発明を完成
した。
本発明は、１１２個のアミノ酸からなる成熟ヒトＴ Ｓ
Ｈのβ型サブユニット（ｈＴｓＨβ）をコードする新
規ＤＮＡ配列に関する。更に好ましくは、本発明のＤＮ
Ａ配列は、少なくともＮ末端に２０個アミノ酸からなる
シグナル配列のペプチドをコードするＤＮＡ配列及び／
又はＣＯＯＨ（３’）末端に６個の疎水性アミノ酸配列
をコードするＤＮＡ配列を含有する新規なりＮＡ配列か
らなる。
Ｈのβ型サブユニット（ｈＴｓＨβ）をコードする新
規ＤＮＡ配列に関する。更に好ましくは、本発明のＤＮ
Ａ配列は、少なくともＮ末端に２０個アミノ酸からなる
シグナル配列のペプチドをコードするＤＮＡ配列及び／
又はＣＯＯＨ（３’）末端に６個の疎水性アミノ酸配列
をコードするＤＮＡ配列を含有する新規なりＮＡ配列か
らなる。
即ち、本発明は、下記で表わされるｈＴＳＨβのポリペ
プチドをコードする配列を有することを特徴とするＤＮ
Ａ配列 Ｐｈｅ Ｃｙｓ ｒｌｅ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｔ
ｙｒ Ｔｈｒ Ｍｅｔ １ｌｉｓ １ｉｅＧｌｕ Ａｒ
ｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｃｙｓ＾Ｉａ Ｔｙｒ Ｃｙｓ
１．ｅｕ Ｔｈｒ Ｉ！ｅ＾ｓｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｉ
Ｉｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｍｅ
ｔ Ｔｈｒ八ｒへ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ａｓｎ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ｐｒｏ ＬｙｓＴｙｒ Ａｌａ Ｌｅａ Ｓｅｒ
Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｙ
ｒ ＡｒｇＡｓｐ Ｐｈｅ ｌｉｅ Ｔｙｒ Ａｒｇ
Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｔｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌ
ｙＣｙｓ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｖａｌ＾ｌａ Ｐ
ｒｏ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ ＴｙｒＰｒｏＶａｌＡ
ｌａＬｅｕＳｅｒＣｙｓＬｙｓＣｙｓＧｌｙｌ、ｙｓＣ
ｙｓ八ｓｎ へＴｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｓｅｒ
Ａｓｐ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｇｌｕ
Ａｈａ＋１ｅ １．ｙｓ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｎ ＬｙｓＳ
ｅｒ Ｔｙｒ に関するものであり、好ましくは塩基配列としては下記
が例示される。
プチドをコードする配列を有することを特徴とするＤＮ
Ａ配列 Ｐｈｅ Ｃｙｓ ｒｌｅ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｔ
ｙｒ Ｔｈｒ Ｍｅｔ １ｌｉｓ １ｉｅＧｌｕ Ａｒ
ｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｃｙｓ＾Ｉａ Ｔｙｒ Ｃｙｓ
１．ｅｕ Ｔｈｒ Ｉ！ｅ＾ｓｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｉ
Ｉｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｍｅ
ｔ Ｔｈｒ八ｒへ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ａｓｎ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ｐｒｏ ＬｙｓＴｙｒ Ａｌａ Ｌｅａ Ｓｅｒ
Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｙ
ｒ ＡｒｇＡｓｐ Ｐｈｅ ｌｉｅ Ｔｙｒ Ａｒｇ
Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｔｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌ
ｙＣｙｓ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｖａｌ＾ｌａ Ｐ
ｒｏ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ ＴｙｒＰｒｏＶａｌＡ
ｌａＬｅｕＳｅｒＣｙｓＬｙｓＣｙｓＧｌｙｌ、ｙｓＣ
ｙｓ八ｓｎ へＴｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｓｅｒ
Ａｓｐ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｇｌｕ
Ａｈａ＋１ｅ １．ｙｓ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｎ ＬｙｓＳ
ｅｒ Ｔｙｒ に関するものであり、好ましくは塩基配列としては下記
が例示される。
ＴＴＴ ＴＧＴ ＡＴＴ ＣＣＡ ＡＣＴ
ＧＡＧ ＴＡＴ ＡＣＡ ＡＴＧ ＣＡＣＡＴ
ＣＧＡＡ ＡＧＧ ＡＧＡ ＧＡＧ ＴＧＴ ＧＣＴ
ＴＡＴ ＴＧＣＣＴＡ ＡＣＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＣ
ＣＡＴＣＴＧＴ ＧＣＴ ＧＧＡ ＴＡＴ Ｔ
ＧＴ ＡＴＧ ＡＣ八へＧＧ ＧＡＴ ＡＴＣ
ＡＡＴ ＧＧＣ八＾Ａ ＣＴＧ ＴＴＴ ＣＴ
Ｔ ＣＣＣＡＡＡＴＡＴ ＧＣＴ ＣＴＧ Ｔ
ＣＣＣＡＧ ＧＡＴ ＧＴＴ ＴＧＣＡＣＡ
ＴＡＴ ＡＧ＾ＧＡＣＴＴＣ’ＡＴＣＴＡＣＡＧＧ
ＡＣＴ ＧＴＡ ＧＡＡ ＡＴＡ ＣＣＡ
ＧＧ八へＧＣＣＣＡ ＣＴＣＣＡＴ ＧＴＴ
ＧＣＴ ＣＣＣＴＡＴ ＴＴＴ ＴＣＣＴＡＴＣ
ＣＴ ＧＴＴ ＧＣＴ ＴＴＡ ＡＧＣＴＧＴ
ＡＡＧ ＴＧＴ ＧＧＣＡＡＧ ＴＧＣＡＡ
Ｔ ＡＣＴ ｒ、ＡＣＴＡＴ ＡＧＴ ＧＡＣ
ＴＧＣＡＴＡ ＣＡＴ ＧＡＡ ＧＣＣＡＴＣＡ
ＡＧ ＡＣＡ ＡＡＣＴＡＣＴＧＴ ＡＣＣＡＡ
Ａ ＣＣＴ ＣＡＧ ＡＡＧＴＣＴ ＴＡＴ 又、ＤＮＡ配列は、ｈ Ｔ Ｓ Ｈβのポリペプチドを
コードとするＤＮＡ配列に加えて、Ｃ（３’）末端に疎
水性アミノ酸を６個付加されていてもよく、好ましいポ
リペプチドとして １、ｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｖａｌが
例示され、好ましい塩基配列として、ＣＴＧＧＴＡＧＧ
ＡＴＴＴＴＣＴＧＴＣが例示される。
ＧＡＧ ＴＡＴ ＡＣＡ ＡＴＧ ＣＡＣＡＴ
ＣＧＡＡ ＡＧＧ ＡＧＡ ＧＡＧ ＴＧＴ ＧＣＴ
ＴＡＴ ＴＧＣＣＴＡ ＡＣＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＣ
ＣＡＴＣＴＧＴ ＧＣＴ ＧＧＡ ＴＡＴ Ｔ
ＧＴ ＡＴＧ ＡＣ八へＧＧ ＧＡＴ ＡＴＣ
ＡＡＴ ＧＧＣ八＾Ａ ＣＴＧ ＴＴＴ ＣＴ
Ｔ ＣＣＣＡＡＡＴＡＴ ＧＣＴ ＣＴＧ Ｔ
ＣＣＣＡＧ ＧＡＴ ＧＴＴ ＴＧＣＡＣＡ
ＴＡＴ ＡＧ＾ＧＡＣＴＴＣ’ＡＴＣＴＡＣＡＧＧ
ＡＣＴ ＧＴＡ ＧＡＡ ＡＴＡ ＣＣＡ
ＧＧ八へＧＣＣＣＡ ＣＴＣＣＡＴ ＧＴＴ
ＧＣＴ ＣＣＣＴＡＴ ＴＴＴ ＴＣＣＴＡＴＣ
ＣＴ ＧＴＴ ＧＣＴ ＴＴＡ ＡＧＣＴＧＴ
ＡＡＧ ＴＧＴ ＧＧＣＡＡＧ ＴＧＣＡＡ
Ｔ ＡＣＴ ｒ、ＡＣＴＡＴ ＡＧＴ ＧＡＣ
ＴＧＣＡＴＡ ＣＡＴ ＧＡＡ ＧＣＣＡＴＣＡ
ＡＧ ＡＣＡ ＡＡＣＴＡＣＴＧＴ ＡＣＣＡＡ
Ａ ＣＣＴ ＣＡＧ ＡＡＧＴＣＴ ＴＡＴ 又、ＤＮＡ配列は、ｈ Ｔ Ｓ Ｈβのポリペプチドを
コードとするＤＮＡ配列に加えて、Ｃ（３’）末端に疎
水性アミノ酸を６個付加されていてもよく、好ましいポ
リペプチドとして １、ｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｖａｌが
例示され、好ましい塩基配列として、ＣＴＧＧＴＡＧＧ
ＡＴＴＴＴＣＴＧＴＣが例示される。
さらに又、ｒ）ＮＡ配列は、ｈＴＳＨβのポリペプチド
をコードするＤＮＡ配列に加えて、Ｎ（５”）末端にシ
グナルペプチドを付加されていてもよく、かかるシグナ
ルペプチドとしては具体的には下記のポリペプチドが例
示される。
をコードするＤＮＡ配列に加えて、Ｎ（５”）末端にシ
グナルペプチドを付加されていてもよく、かかるシグナ
ルペプチドとしては具体的には下記のポリペプチドが例
示される。
Ｍｅｔ Ｔｈｒ＾Ｉａ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｍｅ
ｔ Ｓｅｒ Ｍｅｔ １．ｅｕＰｈｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｉｎ Ａｌａ Ｍｅｔ
Ｓｅｒ好ましい具体例としては、塩基配列が、＾ＴＧ
ＡＣＴ ＧＣＴ ＣＴＣＴＴＴ ＣＴＧ ＡＴＧ ＴＣ
ＣＡＴＧ ＣＴＴＴＴＴ ＧＧＣＣＴＴ ＧＣＡ ＴＧ
Ｔ ＧＧＧ ＣＡＡ ＧＣＧ ＡＴＧ ＴＣＴである。
ｔ Ｓｅｒ Ｍｅｔ １．ｅｕＰｈｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｉｎ Ａｌａ Ｍｅｔ
Ｓｅｒ好ましい具体例としては、塩基配列が、＾ＴＧ
ＡＣＴ ＧＣＴ ＣＴＣＴＴＴ ＣＴＧ ＡＴＧ ＴＣ
ＣＡＴＧ ＣＴＴＴＴＴ ＧＧＣＣＴＴ ＧＣＡ ＴＧ
Ｔ ＧＧＧ ＣＡＡ ＧＣＧ ＡＴＧ ＴＣＴである。
従来のｈＴＳＨβは、２８と２９番目のアミノ酸がメチ
オニンとスレオニンからなり、それをコードする塩基配
列は従来未知であった。本発明からなるＤＮＡ配列は、
２８と２９番目のアミノ酸はスレオニンとメチオニンで
あり、それをコードする塩基配列はＡＣＡＡＴＧである
。
オニンとスレオニンからなり、それをコードする塩基配
列は従来未知であった。本発明からなるＤＮＡ配列は、
２８と２９番目のアミノ酸はスレオニンとメチオニンで
あり、それをコードする塩基配列はＡＣＡＡＴＧである
。
本発明に係るｈ Ｔ Ｓ Ｈβのｒ）ＮＡ配列は以下の
ように調製される。
ように調製される。
原１’ｕ［Ｈ胞として、たとえばヒト白血球又はヒト肝
臓細胞を用いる。この細胞からＤＮＡを抽出し、電気泳
動及びサザーン ハイブリダイゼーションによって、目
的とするＤＮＡを検出する。検出されたＤＮＡを、常套
手段にて回収し、適当なベクターに挿入する。この組換
えベクターで適当な宿主を形質転換させる。形質転換体
を適当なマーカーで、スクリーニングし、更にコロニー
ハイブリダイゼーションや、制限酵素処理により、ｈＴ
ＳＨβのＣ遺伝子を含有するベクターをｌｌｌする。
臓細胞を用いる。この細胞からＤＮＡを抽出し、電気泳
動及びサザーン ハイブリダイゼーションによって、目
的とするＤＮＡを検出する。検出されたＤＮＡを、常套
手段にて回収し、適当なベクターに挿入する。この組換
えベクターで適当な宿主を形質転換させる。形質転換体
を適当なマーカーで、スクリーニングし、更にコロニー
ハイブリダイゼーションや、制限酵素処理により、ｈＴ
ＳＨβのＣ遺伝子を含有するベクターをｌｌｌする。
これによりｈＴＳＨβをコードするＤＮＡ配列を調製す
ることができる。このＤＮＡ配列を例えばサンガー（Ｓ
ａｎｇｅｒ ）等の方法〔ブロシーデインダス オプ
ナショナル アカデミ−オプ サイエンス、イン ニー
、ニス、エイ（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
ることができる。このＤＮＡ配列を例えばサンガー（Ｓ
ａｎｇｅｒ ）等の方法〔ブロシーデインダス オプ
ナショナル アカデミ−オプ サイエンス、イン ニー
、ニス、エイ（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ｌｌ５Ａ）、 ７４．５４６３
−５４６７ （１９７７））によって決定し、ｈ Ｔ
Ｓ Ｈβの構造遺伝子の存在を確８忍する。
−５４６７ （１９７７））によって決定し、ｈ Ｔ
Ｓ Ｈβの構造遺伝子の存在を確８忍する。
得られたｈＴＳＨβをコードする塩基配列を有するＤＮ
Ａ配列は、以下必要により組換えベクターの調製に供せ
られる。ベクターは適当なプロモーターをＳＤ配列の下
流につなぐことも可能である。組換えベクターは、適当
な宿主を常法に従い形質転換することにより、形質転換
体を得ることができる。形質転換体は、各々の宿主に適
応した培地中で培養され、菌体又は培養液中から産生さ
れたｈＴＳＨβを回収することができる。
Ａ配列は、以下必要により組換えベクターの調製に供せ
られる。ベクターは適当なプロモーターをＳＤ配列の下
流につなぐことも可能である。組換えベクターは、適当
な宿主を常法に従い形質転換することにより、形質転換
体を得ることができる。形質転換体は、各々の宿主に適
応した培地中で培養され、菌体又は培養液中から産生さ
れたｈＴＳＨβを回収することができる。
以下、本発明の具体的な処理方法を説明する。
なお、本発明者らはｈＴＳＨβ遺伝子のヌクレオチド配
列を決定するにあたって、直接ヒト甲状腺刺激ホルモン
（ｈＴＳＨ）に対応するｍＲＮＡを採取し、これを逆転
写により遺伝子ＤＮＡのヌクレオチド配列を決定する方
法をとることはあえて避けた。これは、ｈＴＳＨβのｍ
ＲＮＡは脳下垂体前葉でのみ生産されると考えられてお
り、材料が極めて微量で実験に用いるほどのｍＲＮＡの
採取は不可能に近いと考えられたからである。本発明者
らは、比較的入手容易なウシＴＳＨβのＣＩ）ＮＡをプ
ローブとして用いて、ヒトＤＮＡから直接ｈＴＳＨβの
遺伝子をクローン化することを試み、これに成功した。
列を決定するにあたって、直接ヒト甲状腺刺激ホルモン
（ｈＴＳＨ）に対応するｍＲＮＡを採取し、これを逆転
写により遺伝子ＤＮＡのヌクレオチド配列を決定する方
法をとることはあえて避けた。これは、ｈＴＳＨβのｍ
ＲＮＡは脳下垂体前葉でのみ生産されると考えられてお
り、材料が極めて微量で実験に用いるほどのｍＲＮＡの
採取は不可能に近いと考えられたからである。本発明者
らは、比較的入手容易なウシＴＳＨβのＣＩ）ＮＡをプ
ローブとして用いて、ヒトＤＮＡから直接ｈＴＳＨβの
遺伝子をクローン化することを試み、これに成功した。
実施例１
■使用される酵素
制限酵素、ＤＮＡポリメラーゼＩ、クレノー断片は、宝
酒造から購入した。Ｔ４リガーゼは、Ｔ。
酒造から購入した。Ｔ４リガーゼは、Ｔ。
Ｔｓｕｒｉｍｏｔｏ （ツリモト）博士から入手した
。
。
■遺伝子ＤＮＡのサザーンブロソティングハイプリダイ
ゼーション法（以下、サザーン法）ヒトの白血球ＤＮＡ
を、タカハシ（Ｔａｋａｈａｓｈｉ）ら〔プロシーデイ
ンダス オブ ナショナル アカデミ−オブ サイエン
ス、イン ニー、ニス。
ゼーション法（以下、サザーン法）ヒトの白血球ＤＮＡ
を、タカハシ（Ｔａｋａｈａｓｈｉ）ら〔プロシーデイ
ンダス オブ ナショナル アカデミ−オブ サイエン
ス、イン ニー、ニス。
エイ （Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ
、 ｌｌ５Ａ） 、８２．１９３１−１９３５ ）に記
載の方法に準じて分離した。このＤＮＡの約１０ｐｇを
、ＥｃｏＲＴ、ｐｙ（Ｉ Ｔｌ 、Ｈｉｎ４ＴＩＩ、及
び他の適当な制限酵素で１２〜１６時間処理を行うこと
によって消化した。制限酵素は表１に示される各々の酵
素に適応した条件で使用される。
、 ｌｌ５Ａ） 、８２．１９３１−１９３５ ）に記
載の方法に準じて分離した。このＤＮＡの約１０ｐｇを
、ＥｃｏＲＴ、ｐｙ（Ｉ Ｔｌ 、Ｈｉｎ４ＴＩＩ、及
び他の適当な制限酵素で１２〜１６時間処理を行うこと
によって消化した。制限酵素は表１に示される各々の酵
素に適応した条件で使用される。
表１
目的とするＤＮＡ断片の回収は、消化物をロバート（Ｒ
ｏｂｅｒｔ）等の電気泳動法〔メソソズ インエンザイ
モロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ） ６８＋１７６−１８２ （＋９７９） ）および
サザーン法〔ジャーナル オブ モレキュラー バイオ
ロジー〇、 Ｍｏｌ。
ｏｂｅｒｔ）等の電気泳動法〔メソソズ インエンザイ
モロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ） ６８＋１７６−１８２ （＋９７９） ）および
サザーン法〔ジャーナル オブ モレキュラー バイオ
ロジー〇、 Ｍｏｌ。
Ｂｉｏｌ、） ９ｊ３．５０３−５］７ （１９７５）
〕に、よって行った。
〕に、よって行った。
ウシのＴＳＨのβ型サブユニットのＣＤＮＡが挿入され
た断片は、アール、モーラ−（Ｒ，Ｍａｕｒｅｒ）博士
〔ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー
（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 ＣｈｅＩｌｌ、 ） ２５９．５
０２４−５０２７（１９８４））から入手し、ニック
（ｎｊｃｋ） ）ラスレーションによって［α−”ｐ
］ｄＣＴＰでラヘルされ、比活性１〜５Ｘ１０＠ｃｐｍ
／ｐｇＤＮＡを得た。
た断片は、アール、モーラ−（Ｒ，Ｍａｕｒｅｒ）博士
〔ジャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー
（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 ＣｈｅＩｌｌ、 ） ２５９．５
０２４−５０２７（１９８４））から入手し、ニック
（ｎｊｃｋ） ）ラスレーションによって［α−”ｐ
］ｄＣＴＰでラヘルされ、比活性１〜５Ｘ１０＠ｃｐｍ
／ｐｇＤＮＡを得た。
サザーン法に使用されるフィルターは、前ハイブリダイ
ズされ〔プロシーデインダス オブ ナショナル アカ
デミ−オブ サイエンス、インニー、ニス、エイ（Ｐｒ
ｏｃ、 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、 Ｓｃ、ｉ、ＵＳＡ）
。
ズされ〔プロシーデインダス オブ ナショナル アカ
デミ−オブ サイエンス、インニー、ニス、エイ（Ｐｒ
ｏｃ、 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、 Ｓｃ、ｉ、ＵＳＡ）
。
煕、 １９３１−１９３５ （１９８５）） 、次いで
、ハイブリダイゼーションは、６５℃でハイブリダイゼ
ーション液１ ｍｌ当たり、６ｘＳＳＣ（１ｘＳＳＣは
０．１５Ｍ塩化ナトリウム／１５ｍＭクエン酸ナトリウ
ム）１０．１％ＳＤＳ （ソディウム ドデシル サル
フエイト）／１×デンハーツ（Ｄｅｎｈａｒｄ ｔ’
ｓ）溶液〔ブロシーデインダス オブ ナショナル ア
カデミ− オブ サイエンス、イン ニー、ニス、エイ
（Ｐｒｏｃ、、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、
ＵＳ＾）、 １３２．１９３１−１９３５（１９８５）
’ｌ ／す）ｒ精子ＤＤＮＡ１００Ｐ中において処理さ
れた。フィルターは、洗浄され、オートラジオグラフィ
ーによって分析された〔プロシーデインダス オブ ナ
ショナル アカデミーオブ サイエンス、イン ニー、
ニス、エイ （Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。
、ハイブリダイゼーションは、６５℃でハイブリダイゼ
ーション液１ ｍｌ当たり、６ｘＳＳＣ（１ｘＳＳＣは
０．１５Ｍ塩化ナトリウム／１５ｍＭクエン酸ナトリウ
ム）１０．１％ＳＤＳ （ソディウム ドデシル サル
フエイト）／１×デンハーツ（Ｄｅｎｈａｒｄ ｔ’
ｓ）溶液〔ブロシーデインダス オブ ナショナル ア
カデミ− オブ サイエンス、イン ニー、ニス、エイ
（Ｐｒｏｃ、、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、
ＵＳ＾）、 １３２．１９３１−１９３５（１９８５）
’ｌ ／す）ｒ精子ＤＤＮＡ１００Ｐ中において処理さ
れた。フィルターは、洗浄され、オートラジオグラフィ
ーによって分析された〔プロシーデインダス オブ ナ
ショナル アカデミーオブ サイエンス、イン ニー、
ニス、エイ （Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＩＩｓ＾Ｌ −８２，１９３１
−１９３５（１９８５））。
−１９３５（１９８５））。
■ヒト遺伝子ＤＮＡライブラリー
２種のヒト由来の遺伝子ライブラリーが使用された。第
１のライブラリーは、ＥｃｏＲＩで完全に分解したヒト
肝１ｔｉｉｔ伝子ＤＮＡをλシャロン２８アーム（ンヤ
ロンベクター）〔ティー、ナガヤ（Ｔ。
１のライブラリーは、ＥｃｏＲＩで完全に分解したヒト
肝１ｔｉｉｔ伝子ＤＮＡをλシャロン２８アーム（ンヤ
ロンベクター）〔ティー、ナガヤ（Ｔ。
Ｎａｇａｙａ）氏とティー、ナカムラ（Ｔ、Ｎａｋａｍ
ｕｒａ ）氏より入手した〕と結合させることにより調
製される。絹換えクローンの最初の活性値は、８．０×
１０５であった。このライブラリーは、ヘントンとデー
ビスの方法〔サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １９６゜
１８０−１８２ （＋９７７））によって増幅なしにス
クリーニングされた。
ｕｒａ ）氏より入手した〕と結合させることにより調
製される。絹換えクローンの最初の活性値は、８．０×
１０５であった。このライブラリーは、ヘントンとデー
ビスの方法〔サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １９６゜
１８０−１８２ （＋９７７））によって増幅なしにス
クリーニングされた。
第２のライブラリーは、部分的に濃縮されたｈＴＳＨβ
遺伝子を用いて、ＥｃｏＲＴで消化されたヒト白血球１
）ＮＡから調製された。ＤＮＡの約１２００ｐｇの消化
物を、約０．７％アガロースゲル上で電気泳動にかけた
。そして、アガロースの垂直断片について、プローブと
して、ウシＴＳＨβｃ ｒ）ＮＡ〔ジャーナル オブ
バイオロジカル ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃ
ｈｅ＋ｎ、） ２５９．５０２４−５０２７ （１９８
４））を使ってサザーン法によるハイブリダイゼーショ
ンにかけた。これによって２．２ ｋｂｐと３．２ ｋ
ｂｐの２つのバンドが現われた。相当するサイズのＤＮ
Ａが、電気泳動法によって残ったアガロースゲルから溶
出され、ＣｓＣ１−エチジウムブロマイド密度勾配によ
って精製された。ＤＮＡは、各々ｐＲＲ３２５のＥｃｏ
ＲＩサイトに組み込まれ、Ｅ、 ｃｏｌｉ ＲＲＩを形
質転換させた。約４Ｘ１０５コロニーが生産され、Ｈａ
ｎａｈａｎ （ハナハン）と、Ｍｅｓｅｌｓｏｎ （メ
ーセルソン）の方法で、プローブとしてうシＴＳＨβｃ
ＤＮＡを使って、スクリーニングした〔ジーン（Ｇｅ
ｎｅ）↓ｑ。
遺伝子を用いて、ＥｃｏＲＴで消化されたヒト白血球１
）ＮＡから調製された。ＤＮＡの約１２００ｐｇの消化
物を、約０．７％アガロースゲル上で電気泳動にかけた
。そして、アガロースの垂直断片について、プローブと
して、ウシＴＳＨβｃ ｒ）ＮＡ〔ジャーナル オブ
バイオロジカル ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃ
ｈｅ＋ｎ、） ２５９．５０２４−５０２７ （１９８
４））を使ってサザーン法によるハイブリダイゼーショ
ンにかけた。これによって２．２ ｋｂｐと３．２ ｋ
ｂｐの２つのバンドが現われた。相当するサイズのＤＮ
Ａが、電気泳動法によって残ったアガロースゲルから溶
出され、ＣｓＣ１−エチジウムブロマイド密度勾配によ
って精製された。ＤＮＡは、各々ｐＲＲ３２５のＥｃｏ
ＲＩサイトに組み込まれ、Ｅ、 ｃｏｌｉ ＲＲＩを形
質転換させた。約４Ｘ１０５コロニーが生産され、Ｈａ
ｎａｈａｎ （ハナハン）と、Ｍｅｓｅｌｓｏｎ （メ
ーセルソン）の方法で、プローブとしてうシＴＳＨβｃ
ＤＮＡを使って、スクリーニングした〔ジーン（Ｇｅ
ｎｅ）↓ｑ。
６３−６７ （１９８０））。
■ＤＮＡ配列の分析
配列の決定は、クローニング ヘクターとして、Ｍ１３
ｍｐｌＯとｍｐＨについてサンガー（Ｓａｎｇｅｒ）等
の方法〔プロシーディンゲス オブ ナショナル アカ
デミ−オブ サイエンス、イン ニー。
ｍｐｌＯとｍｐＨについてサンガー（Ｓａｎｇｅｒ）等
の方法〔プロシーディンゲス オブ ナショナル アカ
デミ−オブ サイエンス、イン ニー。
ニス、エイ（Ｐｒｏｃ、、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、Ｓ
ｃｉ、ｌｌ５Ａ ） Ｙ４゜５４６３−５４６７ （１
９７７））によった。
ｃｉ、ｌｌ５Ａ ） Ｙ４゜５４６３−５４６７ （１
９７７））によった。
■遺伝子ＤＮＡのサザーンハイプリダイゼーション法
ウシのＴ Ｓ ＨβｃＤＮＡの３２０ｂｐ断片〔アール
、モーラ−（Ｒ，Ｍａｕｒｅｒ）博士 、ジャーナルオ
ブ バイオロジカル ケミストリーＵ、旧０１゜Ｃｈｅ
ｍ、） ２ｆｉ−９，５０２４−５０２７（１９８４
）によって提供〕は、シグナルペプチドの部分（９個の
アミノ酸残基）と成熟ＴＳＨβの９９個のアミノ酸残基
をコードする。プローブとしてこの断片を用いて、白血
球からのヒト遺伝子ｒ）ＮＡの１ｌｉｎｄＩＩｌとＰｖ
ｕ ＩＩ断片のザザーンハイプリダイゼーションを行っ
たところ第１図のレーン２と３の単一ハンドを与えた。
、モーラ−（Ｒ，Ｍａｕｒｅｒ）博士 、ジャーナルオ
ブ バイオロジカル ケミストリーＵ、旧０１゜Ｃｈｅ
ｍ、） ２ｆｉ−９，５０２４−５０２７（１９８４
）によって提供〕は、シグナルペプチドの部分（９個の
アミノ酸残基）と成熟ＴＳＨβの９９個のアミノ酸残基
をコードする。プローブとしてこの断片を用いて、白血
球からのヒト遺伝子ｒ）ＮＡの１ｌｉｎｄＩＩｌとＰｖ
ｕ ＩＩ断片のザザーンハイプリダイゼーションを行っ
たところ第１図のレーン２と３の単一ハンドを与えた。
一方、ＴＵＮＡの賭ｏＲ１断片は第１図のレーンｌのよ
うに３．２ ｋｂｐと２．２ ｋｂｐのハンドを与えた
。相当するサイズの断片はゲルから切り出され、ｐＢＩ
＋３２５の旦ｃｏＲ１サイト中にクローン化され、ｐｆ
ｌＲ３２５ライブラリーを調製した。
うに３．２ ｋｂｐと２．２ ｋｂｐのハンドを与えた
。相当するサイズの断片はゲルから切り出され、ｐＢＩ
＋３２５の旦ｃｏＲ１サイト中にクローン化され、ｐｆ
ｌＲ３２５ライブラリーを調製した。
■ヒ）ＴＳＨβ遺伝子を担持するヒ）ＤＮＡ断片のクロ
ーニング ＥｃｏＲＩ消化ヒト肝臓ＤＮＡを担持するλシャロン２
８遺伝子ＤＮＡライブラリーとＥｃｏＲ［消化ヒト白血
球ＤＮＡを担持するｐＢＲ３２５Ｄ Ｎ Ａライブラリ
ーがＴＳＨβ遺伝子のクローンをスクリーニングするた
めに使用された。約８．０Ｘ１０５の組換えファージに
ついて、ウシＴ Ｓ ［Ｉβｃ１１ＮＡＣジャーナル
オブ バイオロジカル ケミストリＵ、 Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、） ２５９．５０２４−５０２７ （１９８
４））をプローブに使って検査した。そして一つの陽性
クローンを得た。このファージクローンのサザーンハイ
プリダイゼーションは、このクローンが３．２ｋｂｐの
組成物を担持することを示した。この３．２ｋｂｐの均
遼Ｒ１断片は、ｐＢＲ３２２のは辺Ｒ１サイト中にサブ
クローン化され、ｐＴβＥ２１と命名された。
ーニング ＥｃｏＲＩ消化ヒト肝臓ＤＮＡを担持するλシャロン２
８遺伝子ＤＮＡライブラリーとＥｃｏＲ［消化ヒト白血
球ＤＮＡを担持するｐＢＲ３２５Ｄ Ｎ Ａライブラリ
ーがＴＳＨβ遺伝子のクローンをスクリーニングするた
めに使用された。約８．０Ｘ１０５の組換えファージに
ついて、ウシＴ Ｓ ［Ｉβｃ１１ＮＡＣジャーナル
オブ バイオロジカル ケミストリＵ、 Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、） ２５９．５０２４−５０２７ （１９８
４））をプローブに使って検査した。そして一つの陽性
クローンを得た。このファージクローンのサザーンハイ
プリダイゼーションは、このクローンが３．２ｋｂｐの
組成物を担持することを示した。この３．２ｋｂｐの均
遼Ｒ１断片は、ｐＢＲ３２２のは辺Ｒ１サイト中にサブ
クローン化され、ｐＴβＥ２１と命名された。
同じウシのｃＤＮＡプローブを使って、２．２ｋｂｐＥ
ｃｏＲＩ ＩｔｆＴ片を担持するｐＢＲ３２５ライブラ
リーを約４ＸＩ０５コロニースクリーニングすることに
より５つの陽性クローンが得られた。これら５つのクロ
ーンすべて、２．２ ｋｂｐ ＥｃｏＲＩ断片を担持す
ることが確認され、一つのクローン（ｐＴβＥ３１）が
次の分析に利用された。
ｃｏＲＩ ＩｔｆＴ片を担持するｐＢＲ３２５ライブラ
リーを約４ＸＩ０５コロニースクリーニングすることに
より５つの陽性クローンが得られた。これら５つのクロ
ーンすべて、２．２ ｋｂｐ ＥｃｏＲＩ断片を担持す
ることが確認され、一つのクローン（ｐＴβＥ３１）が
次の分析に利用された。
■ヒ） Ｔ Ｓ Ｈβ遺伝子のヌクレオチド配列ｐＴβ
Ｆ、２１とｐＴβＥ３１の制限酵素地図を作製した。こ
れは第２Ｈに示した。ヌクレオチドの配列決定は、同図
に示されたストラテジーに従って、全クローン化断片ま
たはその一部分について行われた。ヌクレオチド配列は
第３図に示した。
Ｆ、２１とｐＴβＥ３１の制限酵素地図を作製した。こ
れは第２Ｈに示した。ヌクレオチドの配列決定は、同図
に示されたストラテジーに従って、全クローン化断片ま
たはその一部分について行われた。ヌクレオチド配列は
第３図に示した。
ｐ”ｒβＥ３１が担持する２、２ｋｂｐ＋’）ＮＡ断片
において、プレプロ（Ｐｒｅｐｒｏ） Ｔ Ｓ Ｈβの
推定される開始メチオニンが検知され、アミノ酸残基と
して＋１の数値を与えた。オープンリーディングフレー
ム（アミノ酸配列として翻訳されうるＤＮＡ塩基配列）
は、′ａから９ｂの間の領域である（第３図を参照）。
において、プレプロ（Ｐｒｅｐｒｏ） Ｔ Ｓ Ｈβの
推定される開始メチオニンが検知され、アミノ酸残基と
して＋１の数値を与えた。オープンリーディングフレー
ム（アミノ酸配列として翻訳されうるＤＮＡ塩基配列）
は、′ａから９ｂの間の領域である（第３図を参照）。
この領域の最初の部分は、シダナルベプチドであり、２
０個のアミノ酸よりなる。
０個のアミノ酸よりなる。
そしてこの部分は、疎水性残基を多く含む。続く＋２１
から＋５４のアミノ酸配列ば、ヒｌ−Ｔ Ｓ Ｈβサブ
ユニット蛋白質〔カナディアン ジャーナルオプバイオ
ケミストリー（Ｃａｎ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、）５
５、７５５−７６０ （１９７７））の分析によって決
定されたアミノ酸配列と一致した。アミノ酸をコードす
る配列は、ＧＴ配列で始まるアミノ酸＋５４番目以降中
断されている。これは共ｉ［１］のイントロンドナー側
配列に相当する。残基＋５５から＋１３２のヒトＴＳＨ
βアミノ酸配列の残りの部分と一致するヌクレオチド配
列は、ｐＴβＥ２１が担持する３、２ｋｂｐＤＮＡ断片
中に存在する。これば、共通イントロンアクセプター側
配列ＡＣに続いている。
から＋５４のアミノ酸配列ば、ヒｌ−Ｔ Ｓ Ｈβサブ
ユニット蛋白質〔カナディアン ジャーナルオプバイオ
ケミストリー（Ｃａｎ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、）５
５、７５５−７６０ （１９７７））の分析によって決
定されたアミノ酸配列と一致した。アミノ酸をコードす
る配列は、ＧＴ配列で始まるアミノ酸＋５４番目以降中
断されている。これは共ｉ［１］のイントロンドナー側
配列に相当する。残基＋５５から＋１３２のヒトＴＳＨ
βアミノ酸配列の残りの部分と一致するヌクレオチド配
列は、ｐＴβＥ２１が担持する３、２ｋｂｐＤＮＡ断片
中に存在する。これば、共通イントロンアクセプター側
配列ＡＣに続いている。
アミノ酸＋１３２のコドンば、さらに疎水性アミノ酸の
６個のコドンを結合している。そして、終止コドンＴＡ
ＡＴ：終わる。これらのデータは、ｐＴβＥ３１とｐＴ
βＦ、２１が担持するヒトＤＮＡ断片は、ヒ） Ｔ Ｓ
Ｈβ遺伝子をすべて保有しており、それらはコドン＋
５４と＋５５の間に、位置する約０．ｌ６ｋｂｐのＤＮ
Ａ領域を伴って一列に配列されうろことを示している。
６個のコドンを結合している。そして、終止コドンＴＡ
ＡＴ：終わる。これらのデータは、ｐＴβＥ３１とｐＴ
βＦ、２１が担持するヒトＤＮＡ断片は、ヒ） Ｔ Ｓ
Ｈβ遺伝子をすべて保有しており、それらはコドン＋
５４と＋５５の間に、位置する約０．ｌ６ｋｂｐのＤＮ
Ａ領域を伴って一列に配列されうろことを示している。
そして本発明者らは、この領域がイントロンであること
を決定した。
を決定した。
また、小さな響ｏＲ１断片が、２．２ ｋｂｐと３．２
ｋｂｐＤＮＡ断片の間に存在するかもしれない可能性
を除くことはできない。本発明者らの見出したアミノ酸
配列は、アミノ酸＋２８と＋２９の位置で既知アミノ酸
配列［カナディアン ジャーナル オブ バイオケミス
トリー（Ｃａｎ、 Ｊ、 Ｒｉｏｃｈｅｍ、） ５５゜
７５５−７６０ （１９７７）］と異なっていた。その
位置でメチオニンとスレオニン残基の代わりに各々スレ
オニンとメチオニン残基であった。
ｋｂｐＤＮＡ断片の間に存在するかもしれない可能性
を除くことはできない。本発明者らの見出したアミノ酸
配列は、アミノ酸＋２８と＋２９の位置で既知アミノ酸
配列［カナディアン ジャーナル オブ バイオケミス
トリー（Ｃａｎ、 Ｊ、 Ｒｉｏｃｈｅｍ、） ５５゜
７５５−７６０ （１９７７）］と異なっていた。その
位置でメチオニンとスレオニン残基の代わりに各々スレ
オニンとメチオニン残基であった。
＋１の開始メチオニンコドンの決定は次の理由によった
。
。
１）メチオニンコドンの５°上流６ｈｐの位置に終止コ
Ｉ゛ンＴ Ｇ Ａがある。
Ｉ゛ンＴ Ｇ Ａがある。
２）残基＋２１のフェニルアラニンに先行する３つのメ
チオニンコドンの内、＋１のメチオニンは、シグナルペ
プチドに相当するサイズの疎水性アミノ酸配列を伴って
いる。
チオニンコドンの内、＋１のメチオニンは、シグナルペ
プチドに相当するサイズの疎水性アミノ酸配列を伴って
いる。
３）開始メチオニンコドンが確定されている〔プロシー
ディンゲス オブ ナショナル アカデミ−オブ サイ
エンス、イン ニー、ニス、エイ（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ
ｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ） ８０．２］２
２−２１２６（１９８３） ）マウスＴＳＨβｃＤＮＡ
の配列との比較で、最初のメチオニンが開始コドンであ
ることが強く示唆された。
ディンゲス オブ ナショナル アカデミ−オブ サイ
エンス、イン ニー、ニス、エイ（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ
ｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ） ８０．２］２
２−２１２６（１９８３） ）マウスＴＳＨβｃＤＮＡ
の配列との比較で、最初のメチオニンが開始コドンであ
ることが強く示唆された。
これまで、Ｔ Ｓ Ｈβコーディング配列は、マウスと
ウシのｃ ＤＮＡについてのみ分析された。本発明から
なるＴＳＨβ遺伝子は、初めてイントロンの存在を確認
した。
ウシのｃ ＤＮＡについてのみ分析された。本発明から
なるＴＳＨβ遺伝子は、初めてイントロンの存在を確認
した。
ヒトのＴＳＨβのコーディング領域のヌクレオチド配列
は、マウスとウシのコーディング領域と各々８４．７％
および８９．９％同一であった。しかしながら、交差ハ
イブリダイゼーション テストによって判断したところ
では、ヒトＴ Ｓ Ｈβ遺伝子とウシＴＳＨβｃＤＮＡ
（ジャーナル オブバイオロジ力ル ケミストリー（Ｊ
、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）２５９、５０２４−５０
２７ （１９８４） ）の５°非翻訳領域においては明
白な同一性はなかった。ヌクレオチド配列における同一
性の欠除とヒ）ＴＳＨβｍＲＮＡはたやずくは人手でき
ないということで、ヒトＴＳＨβ遺伝子の５°および３
゛非翻訳領域またはそのプロモーター領域を詳細に決定
できなかった。
は、マウスとウシのコーディング領域と各々８４．７％
および８９．９％同一であった。しかしながら、交差ハ
イブリダイゼーション テストによって判断したところ
では、ヒトＴ Ｓ Ｈβ遺伝子とウシＴＳＨβｃＤＮＡ
（ジャーナル オブバイオロジ力ル ケミストリー（Ｊ
、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）２５９、５０２４−５０
２７ （１９８４） ）の５°非翻訳領域においては明
白な同一性はなかった。ヌクレオチド配列における同一
性の欠除とヒ）ＴＳＨβｍＲＮＡはたやずくは人手でき
ないということで、ヒトＴＳＨβ遺伝子の５°および３
゛非翻訳領域またはそのプロモーター領域を詳細に決定
できなかった。
同様の理由のために、３°非翻訳領域について現在のと
ころ論しられない。これらの問題は、さらに研究を必要
とする。
ころ論しられない。これらの問題は、さらに研究を必要
とする。
ヌクレオチド配列から導かれたヒトＴ Ｓ Ｈβ前駆体
は、成Ｖ！！ Ｔ Ｓ Ｈβポリペプチドのカルボキシ
ル末端に結合された６個の疎水性アミノ酸の付加があっ
た。カルボキシル末端におけるこのような付加アミノ酸
の存在は、ウシのＴＳＨβｃ ＤＮＡ〔ジャーナル オ
ブ バイオロジカル ケミストリー（，１，Ｒｉｏｔ、
Ｃｈｅｍ、） ｇ５９．５０２４−５０２７ （１
９８４））でも報告されている。しかし、その付加数は
、５個のアミノ酸残基であった。この付加は、実験の過
程で生したものとは考えられない。なぜなら、ヒトとウ
ソの付加配列は高い相同関係を示したからである。さら
に、マウスｃ、 Ｄ Ｎ Ａの研究から、同様の付加ポ
リペプチドが予知された〔プロシーデインゲス オブ
ナショナル アカデミ−オブ サイエンス、イン ニー
、ニス、エイ（Ｐｒｏｃ。
は、成Ｖ！！ Ｔ Ｓ Ｈβポリペプチドのカルボキシ
ル末端に結合された６個の疎水性アミノ酸の付加があっ
た。カルボキシル末端におけるこのような付加アミノ酸
の存在は、ウシのＴＳＨβｃ ＤＮＡ〔ジャーナル オ
ブ バイオロジカル ケミストリー（，１，Ｒｉｏｔ、
Ｃｈｅｍ、） ｇ５９．５０２４−５０２７ （１
９８４））でも報告されている。しかし、その付加数は
、５個のアミノ酸残基であった。この付加は、実験の過
程で生したものとは考えられない。なぜなら、ヒトとウ
ソの付加配列は高い相同関係を示したからである。さら
に、マウスｃ、 Ｄ Ｎ Ａの研究から、同様の付加ポ
リペプチドが予知された〔プロシーデインゲス オブ
ナショナル アカデミ−オブ サイエンス、イン ニー
、ニス、エイ（Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ） ８０．
２１２２−２１２６ （１９８３））。
２１２２−２１２６ （１９８３））。
次いで、成熟ヒトＴＳＨβサブユニットは翻訳後切断に
よって生産される。付加ポリペプチドの欠除は、蛋白質
分子の立体構造的変化を導くかもしれない。このことは
、ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ） とバーソン（Ｐａｒｓｏｎ
）によって示唆された〔アニュアルレビュー オブ バ
イオケミストリー（Ａｎｎｕ、 Ｒｅｖ。
よって生産される。付加ポリペプチドの欠除は、蛋白質
分子の立体構造的変化を導くかもしれない。このことは
、ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ） とバーソン（Ｐａｒｓｏｎ
）によって示唆された〔アニュアルレビュー オブ バ
イオケミストリー（Ａｎｎｕ、 Ｒｅｖ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、） ５０．４６５−４９５ （１９８
１））。
１））。
■ヒトＴＳＨβ遺伝子のコピー数
第１図に示されるように、ヒト遺伝子ＤＮＡのハｒｕｎ
とＨｊｎｄｌＴＩ 断片のサザーンブロソトパターンで
、各々約２．０ ｋｂｐと１４ｋｂｐの単一バンドが検
出された。ＤＮＡのＲｃｏＲＩ断片については、２つの
バンドが検出された。これは、短いイントロンは、Ｅｃ
ｏＲＩサイトを有しているという知見と一致した。これ
らの結果は、ヒトＴＳＨβ遺伝子が単一コピーであるこ
とを強く示唆した。
とＨｊｎｄｌＴＩ 断片のサザーンブロソトパターンで
、各々約２．０ ｋｂｐと１４ｋｂｐの単一バンドが検
出された。ＤＮＡのＲｃｏＲＩ断片については、２つの
バンドが検出された。これは、短いイントロンは、Ｅｃ
ｏＲＩサイトを有しているという知見と一致した。これ
らの結果は、ヒトＴＳＨβ遺伝子が単一コピーであるこ
とを強く示唆した。
■他の糖蛋白質ホルモンのβ遺伝子とヒトＴＳＨβ遺伝
子の比較 ｈ Ｔ Ｓ Ｈβ遺伝子の一般的特徴は、ｈＣＧまたは
ｈＬＨ〔ネーチ＋ （Ｎａｔｕｒｅ） ２８６．
６８４ ６８７（１９８０） ）、〔ネーチ＋ −（Ｎ
ａｔｕｒｅ） ３０Ｑ、 ４１９−４２２（１９Ｂ２）
）、［ネーチ＋ （Ｎａｔｕｒｅ） ３０７．３７−
４０（１９８４）］、〔ジャーナル オブ バイオロジ
カルケミストリー （Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
） ２５８．１１４９２−１ｉ、＋９９（１９８３））
のような他の糖蛋白質のβサブユニットの遺伝子の一般
的特徴と類似している。ｈＴＳＨβ遺伝子のアミノ酸コ
ーディング領域内にイントロンの存在は、ｈＣＧβとｈ
ＬＨβ遺伝子において知られているものと同一である。
子の比較 ｈ Ｔ Ｓ Ｈβ遺伝子の一般的特徴は、ｈＣＧまたは
ｈＬＨ〔ネーチ＋ （Ｎａｔｕｒｅ） ２８６．
６８４ ６８７（１９８０） ）、〔ネーチ＋ −（Ｎ
ａｔｕｒｅ） ３０Ｑ、 ４１９−４２２（１９Ｂ２）
）、［ネーチ＋ （Ｎａｔｕｒｅ） ３０７．３７−
４０（１９８４）］、〔ジャーナル オブ バイオロジ
カルケミストリー （Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
） ２５８．１１４９２−１ｉ、＋９９（１９８３））
のような他の糖蛋白質のβサブユニットの遺伝子の一般
的特徴と類似している。ｈＴＳＨβ遺伝子のアミノ酸コ
ーディング領域内にイントロンの存在は、ｈＣＧβとｈ
ＬＨβ遺伝子において知られているものと同一である。
他のイントロンとしては、ｈＣＧβとｈＬＨβ遺伝子の
両方において、翻訳開始メチオニンコドンの下流部１５
ｂｐに位置する〔ネーチャー （Ｎａｔｕｒｅ） ３０
７゜３７−４０ （１９８４） ）。このイントロンは
ｈ Ｔ Ｓ Ｈβ遺伝子には存在しない。このことは、
ｈＴＳＨβ遺伝子は、進化の過程において他の３つの糖
蛋白質βサブユニツト遺伝子より以前に、共通の先祖の
遺伝子から分化したことを示唆している。アミノ酸配列
は、ある程度保持されており、同一領域はｈＬＨβとｈ
ＴＳＨβ〔第４図（ａ）〕のエクソン２と３の両方にみ
られる。一方、ヌクレオチド配列は、ｈ Ｌ Ｈβ遺伝
子のエクソン２でのみ同一領域をわずかに保持している
〔第４図（ｂ）〕。この狭いが高度に保持された領域は
、アミノ酸配列とヌクレオチド配列の両方の意味でカー
ギー（ＣＡＧＹ）領域として知られる他の糖蛋白質〔プ
ロシーディンゲス オブ ナショナル アカデミ−オブ
サイエンス、イン ニー、ニス、エイ （Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ。
両方において、翻訳開始メチオニンコドンの下流部１５
ｂｐに位置する〔ネーチャー （Ｎａｔｕｒｅ） ３０
７゜３７−４０ （１９８４） ）。このイントロンは
ｈ Ｔ Ｓ Ｈβ遺伝子には存在しない。このことは、
ｈＴＳＨβ遺伝子は、進化の過程において他の３つの糖
蛋白質βサブユニツト遺伝子より以前に、共通の先祖の
遺伝子から分化したことを示唆している。アミノ酸配列
は、ある程度保持されており、同一領域はｈＬＨβとｈ
ＴＳＨβ〔第４図（ａ）〕のエクソン２と３の両方にみ
られる。一方、ヌクレオチド配列は、ｈ Ｌ Ｈβ遺伝
子のエクソン２でのみ同一領域をわずかに保持している
〔第４図（ｂ）〕。この狭いが高度に保持された領域は
、アミノ酸配列とヌクレオチド配列の両方の意味でカー
ギー（ＣＡＧＹ）領域として知られる他の糖蛋白質〔プ
ロシーディンゲス オブ ナショナル アカデミ−オブ
サイエンス、イン ニー、ニス、エイ （Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ 、ＵＳＡ） ７３．８４２−８４
６ （１９７６））のβサブユニットに相当する領域と
同一であった。分子分化の観点から、ヌクレオチド配列
における完全一致の領域はアミノ酸配列において同一性
の観察される他の領域のうちＣＡＧＹ ｔｉｌｔ域にま
さに限られるということは興味深い。
６ （１９７６））のβサブユニットに相当する領域と
同一であった。分子分化の観点から、ヌクレオチド配列
における完全一致の領域はアミノ酸配列において同一性
の観察される他の領域のうちＣＡＧＹ ｔｉｌｔ域にま
さに限られるということは興味深い。
このようにしてｈＴｓＨβの構造遺伝子が決定されたの
で、これに基づき、公知の手段を用いて＋１のトリプレ
ットコドンンから＋１３８までのトリプレットコドンま
でのイントロン部分を含まないＤＮＡを合成的に、又は
もしヒト脳下垂体前葉からある程度の量のｍＲＮＡを入
手できれば逆転写の手段で製造し、これを公知の手段で
適宜のベクター、例えば大腸菌プラスミド、ファージ・
ベクター等に挿入して発現ベクターをつくり、大腸菌、
酵母等の適宜の宿主に移入して形質転換体をつくり、そ
の培養により大量のｈＴＳＨβを取得することができる
。上記したように＋１のメチオニンをコードするトリプ
レットコドンから＋２０までの２０個のトリプレットコ
ドンは、シグナルペプチドをコードする部分であるから
、この部分は分泌に際して切断されるかも知れない。ま
た、ｈＴＳＨβの分泌に際して切断されうるペプチドを
コードするトリプレットコドンであれば、他のＤＮＡ配
列を有する場合であっても本発明の目的を達成しうる。
で、これに基づき、公知の手段を用いて＋１のトリプレ
ットコドンンから＋１３８までのトリプレットコドンま
でのイントロン部分を含まないＤＮＡを合成的に、又は
もしヒト脳下垂体前葉からある程度の量のｍＲＮＡを入
手できれば逆転写の手段で製造し、これを公知の手段で
適宜のベクター、例えば大腸菌プラスミド、ファージ・
ベクター等に挿入して発現ベクターをつくり、大腸菌、
酵母等の適宜の宿主に移入して形質転換体をつくり、そ
の培養により大量のｈＴＳＨβを取得することができる
。上記したように＋１のメチオニンをコードするトリプ
レットコドンから＋２０までの２０個のトリプレットコ
ドンは、シグナルペプチドをコードする部分であるから
、この部分は分泌に際して切断されるかも知れない。ま
た、ｈＴＳＨβの分泌に際して切断されうるペプチドを
コードするトリプレットコドンであれば、他のＤＮＡ配
列を有する場合であっても本発明の目的を達成しうる。
従って、このシグナルペプチドを有しない＋２１から下
流に相当するペプチドはｈＴＳＨβの活性を有する。一
方、＋１３３から下流の６個の疎水性アミノ酸をコード
するトリプレットコドンは翻訳後に除去されうる部分で
あって、この部分がコードする６個のアミノ酸部分は直
接にはｈＴＳＨβの活性に関与しないと考えられている
。従ってこの部分は他の疎水性アミノ酸からなるペプチ
ドをコードするコドンで置きかえられてもよく、＋１３
２のＴＡＴの直後、又は数個の疎水性アミノ酸をコード
するトリプレットコドンを介して終止コドンを有してい
てもｈＴＳＨβ活性を発現する蛋白質を発現しうる。
流に相当するペプチドはｈＴＳＨβの活性を有する。一
方、＋１３３から下流の６個の疎水性アミノ酸をコード
するトリプレットコドンは翻訳後に除去されうる部分で
あって、この部分がコードする６個のアミノ酸部分は直
接にはｈＴＳＨβの活性に関与しないと考えられている
。従ってこの部分は他の疎水性アミノ酸からなるペプチ
ドをコードするコドンで置きかえられてもよく、＋１３
２のＴＡＴの直後、又は数個の疎水性アミノ酸をコード
するトリプレットコドンを介して終止コドンを有してい
てもｈＴＳＨβ活性を発現する蛋白質を発現しうる。
＋１３２から＋１３８までの６個のトリプレットコドン
ンによりコードされるペプタイドはｈＴＳＨβの活性に
は直接関与しないものと考えられるが、この部分はｈＴ
ＳＨβに特異的に存在するペプタイドであって、例えば
ｈ Ｔ Ｓ Ｈβの検出等に利用されうるという意味か
ら重要な両分である。
ンによりコードされるペプタイドはｈＴＳＨβの活性に
は直接関与しないものと考えられるが、この部分はｈＴ
ＳＨβに特異的に存在するペプタイドであって、例えば
ｈ Ｔ Ｓ Ｈβの検出等に利用されうるという意味か
ら重要な両分である。
上記のようにｈＴｓＨβの成熟蛋白質は＋２１から＋１
３２までのトリプレットコドンがコードする蛋白質であ
って、上流にシグナルペプチド部分を、下流に疎水性ア
ミノ酸からなるペプチド部分を有している。もちろん、
本発明者らが決定した＋２１から＋１３２のアミノ酸を
コードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡならば、本発明暑ら
が決定したＤＮＡ配列ｌソ外のＤＮＡ配列であっても、
適当な条件さえ選べばいずれもｈ Ｔ Ｓ Ｈβ活性を
有する蛋白質を発現しうる。
３２までのトリプレットコドンがコードする蛋白質であ
って、上流にシグナルペプチド部分を、下流に疎水性ア
ミノ酸からなるペプチド部分を有している。もちろん、
本発明者らが決定した＋２１から＋１３２のアミノ酸を
コードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡならば、本発明暑ら
が決定したＤＮＡ配列ｌソ外のＤＮＡ配列であっても、
適当な条件さえ選べばいずれもｈ Ｔ Ｓ Ｈβ活性を
有する蛋白質を発現しうる。
本発明の完成により、これまで大量に人手することが困
難であったｈＴＳＨβが遺伝子組み換えの手法に容易に
大量に入手しうるようになり、視床下部−脳下垂体−甲
状腺を結ぶ中枢に関係する病変についての治療・診断あ
るいは該中枢の生理学的研究のための試薬等としての使
用への道がひらかれるようになった。
難であったｈＴＳＨβが遺伝子組み換えの手法に容易に
大量に入手しうるようになり、視床下部−脳下垂体−甲
状腺を結ぶ中枢に関係する病変についての治療・診断あ
るいは該中枢の生理学的研究のための試薬等としての使
用への道がひらかれるようになった。
第１図 ヒトＴ Ｓ Ｈβサブユニット遺伝子の染色体
サザーンプロソトハイプリダイゼーション分析： ヒト白血球ＤＮＡが肘ｏＲＩ（レーン１）、坦１４（１
）（レーン２）及び１ｖｕｌＴ（レーン３）で消化処理
された。０．７％アガロースゲルで電気泳動後、ＤＮＡ
はニトロセルロースフィルターに移された。次いで、そ
のフィルターをウシＴ Ｓ Ｈβサブユニットをコード
する３２０ｂｐｃＤＮＡ断片の〔α−３２ｐ〕ラベル化
物をプローブとしてハイブリダイズした。 １１■消化λフアージｒ）ＮＡ中のマーカーＤＮＡの位
置は、図の左に示された。 第２図 ｈＴＳＨβ遺伝子の２．２ ｋｂｐと３．２
ｋｂｐＤＮＡ断片を各々担持するｐＴβＥ２１とｐＴβ
Ｅ３１の制限酵素地図と配列ストラテジ一二 使用された制限酵素サイトのみが図示されている。密な
棒状部は、第３図のヌクレオチド配列から導かれるアミ
ノ酸コーディング領域を示す。ＭｅｔとＴｅｒは各々開
始メチオニンコドンと終止コドンを示す。 第３図 ｈＴｓＨβサブユニット遺伝子のヌクレオチド
配列： 相当するアミノ酸配列も図示し、プレプロＴＳ［Ｉβの
推定される開始メチオニンは、＋１と番号をつけた。＊
ａから１ｂと１０から”ｄのヌクレオチド配列は、１３
８個のアミノ酸をコードする完全な配列を示す。アミノ
酸の＋５４と＋５５の間にはイントロンが介在する。最
初の２０個のアミノ酸は、シグナルペプチドであるだろ
う。＋２１残基のＰｈｅから＋１３２残基のＴｙｒのア
ミノ酸配列は、成熟ｈ Ｔ Ｓ Ｈβポリペプチドのア
ミノ酸配列決定〔カナディアン ジャーナル オブ バ
イオケミストリー（Ｃａｎ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、
） ５５．７５５−７６０（１９７７） ）により得ら
れた結果と一致した。 第４図ｔａ＋および第４図ｆｂｌ ｈ Ｔ Ｓ ＨβとｈＬＨβのアミノ酸とヌクレオチド
の配列の比較のためのハール プロソト（Ｈａｒｒ ｐｌｏｔ ）分析：ｈＴＳＨβと
ｈＬＨβ及びこれらの相当する遺伝子の間のアミノ酸〔
第４図（ａ）〕とヌクレオチド〔第４図（ｈ）〕の配列
の相同関係を証明するために、バール プロットを行っ
た。ｈＬＨβとその遺伝子のアミノ酸とヌクレオチドの
配列は、マーギュインーロジスタ−（Ｍａｒｇｈｕｉｎ
−Ｒｏｇｉｓｔｅｒ）など〔ヨーロピアン ジャーナル
オブ バイオケミストリー（Ｈｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、） ３９．２５５−２６３ （１９７３））とタ
ルマッシ（Ｔａｌｍａｄｇｅ） ら〔ネーチャー （Ｎ
ａ ｔｕｒｅ）坦１７．３７−４０ （１９８４） ）
の実験結果を引用した。各々のドツトは、一つのアミノ
酸または４つのヌクレオチドが２つの配列において一致
するところの位置を表わしている。矢の先は、イントロ
ンの位置を表わす。 特許出願人 宮 井 潔 松原謙−
サザーンプロソトハイプリダイゼーション分析： ヒト白血球ＤＮＡが肘ｏＲＩ（レーン１）、坦１４（１
）（レーン２）及び１ｖｕｌＴ（レーン３）で消化処理
された。０．７％アガロースゲルで電気泳動後、ＤＮＡ
はニトロセルロースフィルターに移された。次いで、そ
のフィルターをウシＴ Ｓ Ｈβサブユニットをコード
する３２０ｂｐｃＤＮＡ断片の〔α−３２ｐ〕ラベル化
物をプローブとしてハイブリダイズした。 １１■消化λフアージｒ）ＮＡ中のマーカーＤＮＡの位
置は、図の左に示された。 第２図 ｈＴＳＨβ遺伝子の２．２ ｋｂｐと３．２
ｋｂｐＤＮＡ断片を各々担持するｐＴβＥ２１とｐＴβ
Ｅ３１の制限酵素地図と配列ストラテジ一二 使用された制限酵素サイトのみが図示されている。密な
棒状部は、第３図のヌクレオチド配列から導かれるアミ
ノ酸コーディング領域を示す。ＭｅｔとＴｅｒは各々開
始メチオニンコドンと終止コドンを示す。 第３図 ｈＴｓＨβサブユニット遺伝子のヌクレオチド
配列： 相当するアミノ酸配列も図示し、プレプロＴＳ［Ｉβの
推定される開始メチオニンは、＋１と番号をつけた。＊
ａから１ｂと１０から”ｄのヌクレオチド配列は、１３
８個のアミノ酸をコードする完全な配列を示す。アミノ
酸の＋５４と＋５５の間にはイントロンが介在する。最
初の２０個のアミノ酸は、シグナルペプチドであるだろ
う。＋２１残基のＰｈｅから＋１３２残基のＴｙｒのア
ミノ酸配列は、成熟ｈ Ｔ Ｓ Ｈβポリペプチドのア
ミノ酸配列決定〔カナディアン ジャーナル オブ バ
イオケミストリー（Ｃａｎ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、
） ５５．７５５−７６０（１９７７） ）により得ら
れた結果と一致した。 第４図ｔａ＋および第４図ｆｂｌ ｈ Ｔ Ｓ ＨβとｈＬＨβのアミノ酸とヌクレオチド
の配列の比較のためのハール プロソト（Ｈａｒｒ ｐｌｏｔ ）分析：ｈＴＳＨβと
ｈＬＨβ及びこれらの相当する遺伝子の間のアミノ酸〔
第４図（ａ）〕とヌクレオチド〔第４図（ｈ）〕の配列
の相同関係を証明するために、バール プロットを行っ
た。ｈＬＨβとその遺伝子のアミノ酸とヌクレオチドの
配列は、マーギュインーロジスタ−（Ｍａｒｇｈｕｉｎ
−Ｒｏｇｉｓｔｅｒ）など〔ヨーロピアン ジャーナル
オブ バイオケミストリー（Ｈｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、） ３９．２５５−２６３ （１９７３））とタ
ルマッシ（Ｔａｌｍａｄｇｅ） ら〔ネーチャー （Ｎ
ａ ｔｕｒｅ）坦１７．３７−４０ （１９８４） ）
の実験結果を引用した。各々のドツトは、一つのアミノ
酸または４つのヌクレオチドが２つの配列において一致
するところの位置を表わしている。矢の先は、イントロ
ンの位置を表わす。 特許出願人 宮 井 潔 松原謙−
Claims (7)
- （１）ヒトの甲状腺刺激ホルモンのβ型サブユニットを
コードする塩基配列を有する遺伝子ＤＮＡ配列。 - （２）下記で表わされるポリペプチドをコードする配列
を有することを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記
載の遺伝子ＤＮＡ配列。 【ＤＮＡ配列があります】 - （３）下記の塩基配列を有することを特徴とする特許請
求の範囲第（１）項記載の遺伝子ＤＮＡ配列。 【ＤＮＡ配列があります】 - （４）下記で表わされるポリペプチドをコードする配列
がＣ（３′）末端に付加されることを特徴とする特許請
求の範囲第（２）項又は第（３）項記載のＤＮＡ配列。 【ＤＮＡ配列があります】 - （５）下記の塩基配列がＣ（３′）末端に付加されてな
ることを特徴とする特許請求の範囲第（２）項又は第（
３）項記載のＤＮＡ配列。 【ＤＮＡ配列があります】 - （６）下記で表わされるポリペプチドをコードする配列
がＮ（５′）末端に付加されてなることを特徴とする特
許請求の範囲第（２）項〜第（５）項のいずれかに記載
のＤＮＡ配列。 【ＤＮＡ配列があります】 - （７）下記の塩基配列がＮ（５′）末端に付加されてな
ることを特徴とする特許請求の範囲第（２）項〜第（５
）項のいずれかに記載のＤＮＡ配列。 【ＤＮＡ配列があります】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60158678A JP2640096B2 (ja) | 1985-07-17 | 1985-07-17 | 新規なヒト甲状腺刺激ホルモンのβサブユニットのＤＮＡ配列 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60158678A JP2640096B2 (ja) | 1985-07-17 | 1985-07-17 | 新規なヒト甲状腺刺激ホルモンのβサブユニットのＤＮＡ配列 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6219087A true JPS6219087A (ja) | 1987-01-27 |
| JP2640096B2 JP2640096B2 (ja) | 1997-08-13 |
Family
ID=15676970
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60158678A Expired - Lifetime JP2640096B2 (ja) | 1985-07-17 | 1985-07-17 | 新規なヒト甲状腺刺激ホルモンのβサブユニットのＤＮＡ配列 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2640096B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0228604A2 (en) * | 1985-12-11 | 1987-07-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Isolation of a gene encoding human thyrotropin beta subunit |
| JPH04501802A (ja) * | 1989-01-11 | 1992-04-02 | アメリカ合衆国 | 生物学的に活性な合成チロトロピンおよびそれを製造するためのクローン化遺伝子 |
| WO1998020343A2 (de) * | 1996-11-06 | 1998-05-14 | B.R.A.H.M.S Diagnostica Gmbh | Rezeptorbindungsassay, für den rezeptorbindungsassay geeigneter rekombinanter fusionsrezeptor, vektor zu dessen herstellung sowie reagenziensatz für die durchführung des rezeptorbindungsassays |
| US20110052591A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Board Of Regents Of The University Of Texas System | Variants of Thyroid Stimulating Hormone Beta |
-
1985
- 1985-07-17 JP JP60158678A patent/JP2640096B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CAN.J.BIOCHEM=1977 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0228604A2 (en) * | 1985-12-11 | 1987-07-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Isolation of a gene encoding human thyrotropin beta subunit |
| EP0228604A3 (en) * | 1985-12-11 | 1988-10-12 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Isolation of a gene encoding human thyrotropin beta subunit |
| JPH04501802A (ja) * | 1989-01-11 | 1992-04-02 | アメリカ合衆国 | 生物学的に活性な合成チロトロピンおよびそれを製造するためのクローン化遺伝子 |
| US6284491B1 (en) | 1989-01-11 | 2001-09-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Biologically active synthetic thyrotropin and cloned gene for producing same |
| WO1998020343A2 (de) * | 1996-11-06 | 1998-05-14 | B.R.A.H.M.S Diagnostica Gmbh | Rezeptorbindungsassay, für den rezeptorbindungsassay geeigneter rekombinanter fusionsrezeptor, vektor zu dessen herstellung sowie reagenziensatz für die durchführung des rezeptorbindungsassays |
| WO1998020343A3 (de) * | 1996-11-06 | 1998-07-16 | Brahms Diagnostica Gmbh | Rezeptorbindungsassay, für den rezeptorbindungsassay geeigneter rekombinanter fusionsrezeptor, vektor zu dessen herstellung sowie reagenziensatz für die durchführung des rezeptorbindungsassays |
| US20110052591A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Board Of Regents Of The University Of Texas System | Variants of Thyroid Stimulating Hormone Beta |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2640096B2 (ja) | 1997-08-13 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
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| EXPY | Cancellation because of completion of term |