JPS62181296A - 抗８：ｃ抗体の分離法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

発明の背景 本発明は、血漿のような液体中に存在する抗Ｉ：Ｃ抗体
の分離方法に関する。さらに詳しくは本発明は、凝固第
ｖｌ：ｏ因子の特異抗体（すなわちＡ型血友病患者の血
漿中に存在する抗糧：Ｃ抗体）の選択的精製に使用可能
な、不溶性ポリマー又はコポリマー支持体に関する。′
５′なわち何度も輸血をうけたＡ型血友病患者では一般
的に、輸血された第■：０因子の凝固活性を中和する抗
■：Ｃ抗体が形成される。この抗体が存在すると重症に
なる。さらにＡ型血友病患者の出血な止めるためには、
普通血漿の交換が必要であり、この後直ちに通常のホメ
オスタシスを得るために直ちに第ｖｌ：Ｃ因子が注射さ
れる。患者の病状の程度によりこの治療はしばしば長期
間続ける必要がある。この患者血漿の必須成分を所期の
レベルで維持することが困離な状態においては、重大な
問題である。 さらに輸血回数が増加するにつれて、肝炎ウィルスやＩ
、ＡＶ／ＨＴＬ’Ｖウィルスによる感染の危険が増加す
る。 さらにここ数年間、適当な支持体上に障害要素を吸着さ
せて血漿を直接精製することを目的とする研究が行われ
ている。Ｂ型血友病の場合は第■因子特異抗体（すなわ
ち抗■抗体）を、アガロースの共有結合したプロティン
Ａにルンン（Ｎｉｌｓｓｏｎ）ら、Ｂｌｏｏｄ　、第５
８巻、ＡＩ（１９８１年７月）、ｐ３８−４４に記載】
に吸着させてこの精製を行うことが可能である。プロテ
ィンＡは免疫グロブリンのＩＰＣＦ！ｉ５分と反応し、
セファロースと結合している場合免疫グロブリン（）′
４ｆ単離するための（従って抗第■因子を単離するため
の）免疫吸着剤として使用可能である。しかしこうして
処理した血漿の総免疫グロブリン含量は本来の値の１１
５以下であり、これが若干の問題となる。 さらに最近の研究の目的は所期の抗体、Ｗに血友病患者
の血液中に存在する抗体を選択的に分離できる免疫吸着
剤を得ることである。 抗％１［：Ｃ抗体についてはこれまでの研究では抗体な
定置的に分離できていない。従って抗橿：Ｃ抗体の固定
されたクロマトグラフィーデルによる選択的吸着を利用
してごの分離を行うことが考えられている。しかし抗Ｖ
１１：Ｃ抗体は急速にその抗原活性を失うため、この方
法は実施不可能である。 ここ数年例えば血液のある成分に対し特別の親和性を与
えることを可能にするような、適当な固定化化合物の結
合した不活性の支持体な使用することについて研究が続
けられている。例えばフランス国特許８３／１０７７３
（１９８３年６月２９日、シーイーニー（Ｃ！、Ｅｌ、
Ａ、）が申請）は、トロンビンの分離と精製にこの型の
ポリマーを便うことを例示している。この場合支持体に
トロンビンに対する親和性を与えるために、アルギニン
、ニトロアルギニン又はそれらの誘導体（例えばメチル
エステル）がポリマー又はコポリマーに固定されてｂる
。 発明の要約 本発明を１Ａ型血友病患者の血液の血漿精製に用い得る
ものと同じ型の支持体（この方法により抗５１：Ｃ抗体
を他の免疫グロブリンから選択的に分離可能なためンを
用いる、液体中の抗■：Ｃ抗体の分離方法に関する。 従って本発明は液体中に存在する抗［：Ｑ抗体の分離方
法において： ａ）鎖の中に置換可能な官能基を有し、少なくともその
一部は式−（ＳＯ３）ＸＭ　（式中Ｍは液体と反応しな
い金属であり、Ｘは金属Ｍの結合価を表わす）。 及び／又は式−ＳＯ２Ｙ及び／又は−ＣＯＹ　（式中Ｙ
はアルギニン以外の　−アミノ酸の、又はアルギニン以
外のα−アミノ酸誘導体のアミノ基から水素原子を除く
ことにより得られるラデイカルを表わす〕（これらは抗
［：（：！抗体に対する親和性と。 他の免疫グロブリンに比較して抗■：Ｃ抗体に対して選
択性を■する）により１１換されたポリマー又はコポリ
マーより成る個体支持体に、その液体を接触させ、そし
て ｂ）抗Ｗ：Ｃ抗体の吸着された支持体から液体を分離す
ることより成る、上記分離方法に関する。 他の免疫グロブリンに比較して抗ｖｌ：ｃ抗体に対して
親和性及び選択性の良好な吸着剤を得るために、ラデイ
カルＹは好ましくは式： ％式％ （式中、Ｒ″は　−アミノ酸の側鎖であり、Ｒ２は水素
原子又は例えば１−５個の炭素原子な有するアルキル基
であり、基Ｒ１はＣ！ＯＯＨ，ＮＨ２％ＯＨそしてＳＲ
基から選ばれる少なくとも１つの官能基を表わす）に一
致する。 使用可能な基Ｙの例としては、グルタミン酸、とＶロキ
シプロリン、アラニン、フェニルアラニン、スレオニン
及びリジンより得られるものがある。好ましくは基Ｙは
グルタミン酸、とＶロキシプロリン、スレオニン又はリ
シンからの基である。 本発明によれば、基Ｙの前駆体である　−アミノ酸が数
個のアミノ基を含有する場合、このα−アミノ酸又ヲ工
その誘導体（ここから水素原子を除いて基Ｙを虫取する
）のアミン基はα位に存在するアミノ基である。 本発明によれば、−ＳＯ２Ｙ、　−（ｓｏ３）ｘＭ及ヒ
／又は−ＣＯＹは炭化水素化鎖又は基（例えばＣＯＹ基
の場合はペプチド鎖）ｆｆ介してポリマーに結合できる
。 本発明によれば、使用可能なポリマー及びコポリマーは
、鎖にそってクロロスルホン酸と反応できる［１換可能
な基を有する個体物質である。このようなポリマーの例
としては架橋したポリスチレン、セルロースエステル、
セルロースエーテル、ポリビニルアセテート、ポリビニ
ルクロリド、ボリオインゾレン及びポリブタジェンがあ
る。又スチレンのコポリマー、ビニルアセテートのコポ
リマー、ビニルクロリドのコポリマー、インダノンのコ
ポリマー及びブタジェンのコポリマーも使用可能である
。又コポリマーとｂ５単語は塩基性ポリマーにビニルモ
ノマーを結合させて得られるコポリマー（例えばクロロ
スルホン化耐性ポリマーにスチレンを結合させて得られ
るスチレンコポリマー）＝ｒ４意味する。この場合クロ
ロスルホン化耐性塩基性ポリマーは、ポリオレフィン、
フッ素化ポリマー及びポリビニルクロリドから選ばれる
。 好ましくハ、スチレン又はスチレンコポリマーを用いる
。この場合ポリマー又はコポリマーに結合した基は２種
類であり、１つは式−ＳＯ２（式中Ｙは前記した意味を
有する）であり、他の１つは式−（ＳＯ３）ｘ［（式中
Ｍは液体と反応しなか金属であり、Ｘは金属Ｍ（これは
普通ナトリウムである）の結合１曲である）である。 本発明は又カルボキシメチル化可能なポリマー及びコポ
リマー（例えばポリデキストランのような多糖）にも適
用される。 塩基性ポリマーがスチレン又はスチレンコポリマーであ
る本発明の支持体は、クロロスルホン酸との反応により
ポリマー又はコポリマーをクロロスルホン化する第一段
階と、ポリマー又はコポリマーに結合した一ＳＯ２０１
基の少なくとも一部−ＳＯ２Ｙ基に変える第２段階より
成る工程により得られる。 ポリスチレンを使用する場合はクロロスルホン化反応は
以下の反応に従う： この反応はニトロメタンの結合した塩素化溶媒（例えば
ニトロメタンの結合したジクｏｏメタン］より成る有機
浴媒中で実施することが有効である。 第２段階ではり０ｃ１スルホニル２１ｉ　−ＳＯ２０１
ｋ’！、式： ％式％ （式中ＨＡはα−アミノ酸の側鎖を、Ｒ２は水素原子又
はアルキルラデイカルを表わす）に一致する対応するα
−アミノ酸と反応させることによりＹ基に変換される。 この反応は下記の反応式に対応する： 図　　− ロー悶 ■ 国 寓 口 この反応は、Ｒ２が水素原子である場合は周囲温度で水
−ジオキサン混合液中で実施され　Ｒ２がアルキルラデ
イカルである場合は周囲温度より少し高い温度でジクロ
ロメタン中で実施される。 ポリスチレンの場合は反応の最後に下記の式の基が得ら
れる： Ｒよ の数は特に反応条件に依存する。良好な結果な得るため
にをヱ、−８Ｏ２Ｙ又は−ＣＯＹ基に置換されるスチレ
ン基の数は１０−３０％であることが好ましい。 式−ＣＯＹの基を有するポリマー又はコポリマーより成
る本発明の個体支持体は、カルポキシメチル化の第１段
階、適当なアミン又はベンゾルクロリ−を固定する第２
段階、ラデイカルＹの得られるアミノ酸を固定する第３
段階そして第４のスルホ化段階より成る工程により得ら
れる。 この場合ポリマーは多糖（例えばポリデキストラン）で
もよく、塩基性ポリマーに結合する基は式−ＣＯＹのみ
でなく、式ＣＨ２Ｃ！０ＮＨＲ’−８Ｏ３Ｒ５（式中Ｒ
４は置換されている又は置換されていなりアルキル、ア
リール、又はアルキルアリールラデイカルな表わし％Ｒ
５は水素原子、又は液体と反応しないナトリウムのよう
な金属を表わす）でもよ＾。 クロロスルホン化耐性ポリマーにスチレンを結合させて
得られるスチレンコポリマー支持体を使用する場合は、
イオン化光線を照射して結合させることが好ましい。こ
の場合クロロスルホン化耐性ポリマーをスチレン浴液に
入れて酸素ｆｔ言まな１／ｈ空気中で、例えばコバルト
６０を照射することも可能である。 この粉末の結合ｔは、溶液のスチレン濃度、溶媒の種類
、拡散時間、総照射奮そして照射速度を変えることによ
り、調節できる。照射後普通結合生成物ケ、例えばスチ
レンで次にアルコールで洗滌し、次に乾燥させる。 この結合粉末の調製方法は、粉末の表面にスチレンを結
合させ、適当な基を固定してから、抗■：Ｃ抗体に対す
る良好な親和性及び選択性を付与できるため、特に有効
である。 本発明の方８−は、血漿（特にＡ型血友病患者の血漿）
より取る液体の処理に特に夏用できる。この場合、こり
種の型の患者の血液の生体外精製に本発明の方法を使用
することが可能である。

【図面の簡単な説明】

以下本発明な非限定的態様と図面に関して詳細に記載す
る。図中： 第１図は、部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ　）に
基づき、試料の抗糧：Ｏ抗体譲度を定量を可能にする標
準曲線を示す。 第２図及び第３図は、異なる支持体上の免疫グロブリン
と抗■：０抗体の吸着等温式を示す。 第４図は、本発明の方法を実施するためのカラム血漿精
製器の茸である。 第５図は、又別の血漿精製器の図である。 発明の詳細な説明 実施例１　：　−５ｏ２Ｇ１ｕと一８Ｏ３ＮＡ基を有す
るポリスチレン支持体の調製 ａ）クロロスルホン化ポリスチレンの調製粒径Ｉ　Ｄ−
７０μｍの架橋したポリスチレンボールの１８ｇを、１
４４　Ｑ　ｍｌのジクロロメタン中で周囲温度で５時間
膨潤させ、次に２７０　ｍｌのジクロロメタンと２２７
　ｍｌのクロロスルホン酸の混合液を加える。この懸濁
液な周囲温度で２５分攪拌し、原料樹脂を濾過した後、
これ？ジクロロメタンーゾキサン混合液中で注意深く洗
滌し、次に５０゛Ｃで真空乾燥する。 次に以下の方法でクロロスルホン！　（−ＳＯ２０１）
の濃度を定量する。２００ｑのりａａスルホン化ポリス
チレンな４０ｍ１のＩＭＮａ□Ｈ中で還流しながら２４
時間加水分解する。酸性化した後、放出さ江たＣ１−イ
オンを、銀指示電極な用いて０．１Ｍ　Ｏ）　ＡｇＮＯ
ｓ溶液中で滴定する。 ｂ）クロロスルホン基へのグルタミン酸の固定水とジオ
キサン（３：２）の混合液より成る溶媒中でグルタミン
酸を溶解させるため４Ｍのソーダを添加して−を９／１
０に調整してグルタミン酸溶液を調製する。次にあらか
じめ得たクロロスルホン化ポリスチレ７１０ｇを添加し
、２Ｍグ）ソーダを加えてｐＨｆｆ最初の９−１０に維
持する。ＰＨが一定の場合反応が完了する。次にポリマ
ーを濾過し、まず十分量の水で、矢に１０”−２Ｍ１７
）ソーダ、そして水で洗滌した後、真空中で乾１＃！す
る。 矢に窒素の元素分析からポリマー中の一８Ｏ２Ｇ１ｕの
含量？定置する。又あらかじめ求めたクロロスルホン基
の言置と一８Ｏ２Ｇ１ｕ基の言置からＳＯ３Ｎａの言量
を求める。こうして得られた結果を表に示す。 実施例２から８　：　−８Ｏ２Ａｌａ、　−８Ｏ２Ｐｈ
ｅＡｌａ、　−８Ｏ２０ＨＰｒｏ。 −８Ｏ２Ｔｈｒｅｏ、　−８Ｏ２Ｙ　（Ｙはグルタミン
酸メチルから得られるラディカルを表わｆ）、−８Ｏ２
Ｐ　ｒ　Ｏ又は−８Ｏ２Ｌ７８基を胃するポリスチレン
支持体の調製実施例１ａ）で得られた様なりロロスルホ
ン化ポリスチレンを使用し、ここに実施ＰＩ　１　ｂ　
）と向様の方法をｍ９てアミノ酸又をヱ対応するアミノ
酸誘導体、すなわちアラニン（実施例２）、フェニルア
ラニン（実ＭｆＪ３）、ヒーロキシプロリン（実施例４
）、スレオニン（実施例５）、グルタミツ酸メチル（実
施例６）、プロリン（実ｍｆｌＪ７）又はリジン（実施
例８）を固定させる。前記した様にこうして得られる支
持体の−ＳＯ２Ｙ及び−５ｏ３Ｎ＆基の含量を測定する
。結果な表に示す。 実施例９：本例では血友病患者の血漿中に存在する抗ｌ
：Ｃ抗体を吸着するだめの、実施例１−８の支持体の使
用法を示す。 ａ）支持体の馴化と洗滌 血液中の蛋白に反応する可能性のある不純物な完全に除
去するために、実施例１−８の支持体をまず馴化させる
。次に支持体ｉ１１．５　Ｍの塩化ナトリウム、そして
１．０Ｍのクエン酸ナトリウム溶液で順番に洗滌する。 次にこの支持体をミカエリス緩衝液（Ｆ８７．５　）中
で平衡化させ、濾過し、水で数回洗滌し真空中で乾燥さ
せる。この粒子をすりつぶすと、水中で膨潤させた粒子
の平均径（ＴＡＢ型定量顕微鏡で測定）は５−１０μｍ
の範囲にある。 ｂ）試料の調製 まず血清試料を調製する：１つは抗■：Ｃ抗体を有する
血友病患者の血液から、そして他の１つは１５人の普通
の対照患者から調製する。血［は３．８％のクエン酸三
ナトリウム溶液（クエン酸浴液１部に対して血液９部）
中に採取し、−７０°Ｇで保存する。 次に血漿中の抗ｖｍ　：　ａ抗体の抗体価が６４０ベセ
スダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ　）単Ｑ　／　ｍｌである血友
病患者の血漿の免疫グロブリンな単離する。このために
血友病患者の血漿の繊維素を除いた後リン酸緩衝液（０
，００５Ｍ、　Ｍ＝６．５　）中で４℃で一晩透析する
。 得られた血清をＤｗｈｚ　５２セルロースカラムにかけ
、免疫グロブリンＧを含有する画分を集め濃縮する。次
にこれを０．１５　ＭのＮａＣ１で十分に透析する。血
友病患者の免疫グロブリンの最終調製液（工ｇＧａ）は
、ペセスダ（ＢｅｔｈｅｓｄｅＪ単ｔｌ、／ｖ工ｇＧＯ
）抗糧：Ｃ抗体活性な有している。 カスパー（０，Ｋ、　ＫＡ８ＰＫＲ）らがベセスダ（Ｂ
ｅｔｈｅｓｄａ）会議で記載した方法（”Ａ　ｍｏｒｅ
　ｕｎｉｆｏｒｍｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｆａ
ｃｔｏｒ　［１ｎｈｉｔ）ｉｔｏｒｓ”、スロンボ・ヂ
アス１１ヘモＡ／　（Ｔｈｒｏｍｂ、Ｄｉａｔｈ、　Ｈ
ａｅｍｏｒｒｈ、　）第３４巻、８６９頁、１９７５年
）に従い抗■：Ｃ抗体濃度な測定する。この方法では抗
％’Ｉｆ：Ｏ抗体な含有する血漿濃縮液又は工ｇＧの調
製物Ｑ、１ｍｌを、正常血漿ｌ　ｍｌと３７℃で２時間
インキュベートする。次にこの混合液の第１因子の凝血
促進活性な測定し、ミカエリス緩衝液と正常血漿をイン
キュベートさせた対照試験官の活性と比較する。 第糧因子の凝血促進作用は、第糧因子欠損ヒト血漿を基
質とし、前記した方法で調製した正常血漿ケスタンダー
ト（１σ／ｍ１）として用いて、トロンボプラスチ７時
間（ＰＴＴ）に基づき測定する。 ２時間のインキュベーションで凝血促進活性の５０％な
不活性化する電を１抗ＶＩＩＩ：Ｃ抗体単位とする。従
ってペセスダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ）単位で表示した抗ｖ
ｉｉ：ａ抗体鏝度は、２時間のインキユバ−ジョンの間
に■：Ｃの０６５ｕを不活性化する対照血漿又は工ｇＧ
調製物の希釈率の逆数を測定することにより求められる
。 Ｃ）吸着試験 これらの試験は植々の濃度の５０μｍの工ｇＧＨを、実
施例１から７の支持体のうちの１つの懸濁液（支持体１
ｍｌ当たり２−１０ｑ）と、又はミカエリス緩衝液とイ
ンキュベートすることにより実施する。６０分経過後工
ｇＧａｔｆｔむ混合液を遠心分離し、以下の方法に従い
上澄液の工ｇ、ａ及び／又は抗ｖｌ：Ｃ抗体濃度を一１
１定する：１）　工ＣＬプレート（工ＣＬサイエンチフ
ィツク（Ｆｏｕｎｔａ　ｉｎ　Ｖａｌｌｅｙ、カリフォ
ルニア州）が販売している）を用いて放射免疫拡散法に
より１ｇ０６度を測定する。測定すべき１ｇＧｍ度によ
り低濃度又は極低濃度キットを使用する。測定に際して
１枚のプレートの上に工ｇＧ濃度が既知の２棟類のスタ
ンダード（それぞれ０．１５と６η／ｍ１）と、１ｇ（
）Ｈな富有する４個の上澄液を処理した。又再現性なよ
くするため５．０μｍの上澄液が各位置に正確に添加で
きるマイクロピペットを使用する。 さらに結果の偏りをなく丁ため、吸着前後の工ｇＧ濃度
に対応する試料を隣り合う２つの位置に置く。 ２）部分トロンざプラスチン時間（ＰＴＴ）と抗■：Ｃ
抗体濃度を関係づける標準曲線な用いて抗ｖｌ：Ｃ抗体
定量測定を行う。この標準曲線は抗ＶＩＩＩ：Ｃ抗体濃
度が０−２ベセスダ（Ｂｅｔｈｅｓｃｌａ　）単（ｑ　
／　ｍｌ（ＩｇＧｕ調展物を希釈して得られる）の工ｇ
ＧＨ調製物から得られる。標準曲線を得るために、抗■
：Ｃ抗体を含有する希釈率の異なる工ｇＧ希釈液を、ま
ず正常血漿と５７°Ｃで２時間インキュベートシ２次に
１／１０希釈して、この混合液の０．１ｍ１ｐ３．１ｍ
ｌの血友病患者の血漿及び１０分間活性化したケファリ
ンＱ、ｉ　ｍｌとインキュベートする。次に３．１ｍｌ
のａａｃ１２を添７ＪＤした恢部分トロンボプラスチン
時間（ＰＴＴ）を測定する。 抗ｖｉ　：　ａ抗体濃度が上昇すると丁ぐＰＴＴが上昇
する。得られた結果は第１図に示す。この図は。 抗橿：Ｃ抗体濃度（０７ｍ１）の関数としてのＰＴＴ　
（秒）の標準曲線を示す。 標準曲線を作成した後、上澄液について部分トロンボプ
ラスチン時間を測定し、標準曲線と希釈率から抗ｖ１　
：　ａ抗体濃度を求める。 これらの方法により、吸着前の試料の最初の工ｇＧと抗
ｖｍ　：　ｃ抗体の濃度、及び吸着支持体に接触した後
の試料の工ｇＧと抗Ｖ膳：Ｃ抗体の残存濃度を求めるこ
とができる。 ｊなわちミカエリス緩衝液と接触させた試料の工ｇＧと
抗ｙｌ：ｃ抗体濃度は、試料の最初のＩｇＧ及び抗ｖｍ
　：　ｃ抗体濃度を２で割ったものに対応する。吸着支
持体に接触させた試料の工ｇＧと抗ＶＩＩＩ：Ｃ抗体濃
度は残存する工ｇＧ及び抗ｖｉ　：　ｃ抗体濃度に対応
する。従ってここから異なる支持体に吸着された工ｇＧ
と抗［：Ｏ抗体級度を求めることができる。 第２図と第６図は、実施列１．２及び７の支持体に対応
する工ｇＧと抗ｖｍ　：　ａ抗体の吸着等温線である。 曲線１は工ｇＧの吸着に対応し、横軸には吸着前のＩｇ
Ｇａｋ度（■／ｍｌ）、そして縦軸には支持体に吸着さ
れた工ｇＧ濃度（〜／ｍ１）がプロットしである。曲線
２は抗■：Ｃ抗体の等温吸着に対応し、横軸には吸着前
の抗ｖｌ：Ｃ抗体濃度（σ／　ｍｌ　）　、そして縦軸
には支持体に吸着された抗ｙｌ：ａ抗体濃度（０７ｍ１
）がプロットしである。工ｇＧＨσ、）具体的な活性を
考慮した目盛りにより２つの紋着線を直接比較すること
ができる。 これらの曲線に基づき、抗ＶＩ：（３抗体に対する吸着
等温線（２）の傾きと工ｇＧに対する吸着等温線（１）
の関係を示ｊＳ１の値、及びこの２つの等温線間のプラ
トー状態での吸着値の関係を示ｊ　８２の値が求められ
る。支持体の抗ｖｌ：　ａ抗体に対する選択性がゼロの
場合、この２つの吸着等温線はかさなり、Ｓｌと８２は
１に近くなる。しかし選択性が高い場合は、Ｓｌと８２
は高い値となる。 添付した表には、吸着試験中に得られたＳｌ及び／又は
Ｓ２の値を、実施例１−８の支持体に変換しである。実
施例４．１．５及び８の支持体でそれぞれクロロスルホ
ン化ポリスチレンへのヒドロキシゾロリン、グルタミン
酸、スレオニン及びリジンの固定に対応して最も良い選
択性が得られている。実施例１の支持体の場合、抗％１
１：Ｏ抗体の６０％が吸着され、ｘｇＧの吸５１Ｆはわ
ずか１６％であるという、良好な選択性が得られている
。実施例２及び３についても良好な結果が得られて藝る
。 しかし実施例６の場合８１の匝は１より小さく、抗ｖｌ
：Ｃ抗体が選択的に吸着されないため良好な選択性は得
られていない。 すなわちグルタミン酸メチルは選択性は悪いが、グルタ
ミン酸は非常に良い選択性を有している。 これはＹのラデイカルＲ１が１１！注官能基の場合に良
好な結果が得られることを示している。同様にプロリン
で得られた結果はヒドロキシプロリンで得られた結果よ
りも悪く、これはプロリンのラデイカルＲ１がＯＨ基で
あるためである。 すなわち固定されたアミノ酸の性質は結束乞大きく左右
する。 実施Ｎ　１０　ニー５ｏ３Ｎａ基のみを固定したポリス
チレン支持体 実施例１のように４ｍ当駄／ｇの一８Ｏ２Ｃ１基を含む
クロロスルホン化ポリスチレンを調製した後、２　Ｍ　
ＮａＯＨンーダソーを用いて６０℃でり（２ＣＺ、Ｃル
ホン基を加水分解した。クロロスルホン化したこの粉末
をソーダ溶液に２４時間浸し、全ての−ＳＯ２Ｃ１基’
ｆ−８Ｏ３Ｎａ基に変換サセタ。 こうしてｖ４襄した支持体を馴化させ実施例９ａ）のよ
うに洗滌し、実施例９と同じ条件で血友病、患者の血漿
中に存在する抗■：Ｃ抗体の吸着試験を行った。 実施例９と同じ条件で得られた吸着等温式に基づき、８
１．とＳ２の値を求めると、５１＝５．２で８２＝２．
７である。従ってこの支持体も抗■二Ｃ抗体の選択的ａ
＊Ｖ実施するのに興味深い性質を有して論る。 本発明の支持体は第４図と第５図に示す精製器中で血漿
の精製用に使用できる。 血漿の連続的精製を示す第４図から明らかなように、精
製器は、本発明の吸着支持体を含むカラム１、精製すべ
き血液から血漿を分離するだめの細胞分離機３、そして
一方で（３で）処理されるべき血液の分離された細胞が
導入され、他方では精製された血漿が導入される捕集器
５より構成される。 この装置ではポンプ９と圧力測定手段１１ケ備えた最初
のパイプＴを用すて患者の血液８−′細胞分離機３に導
入し、ここで細胞はパイプ１３により捕集器５に排出さ
れ、一方血漿はポンプ１７を備えたパイプ１５に導かれ
て、本発明の吸着支持体を含有するカラム１に入る。カ
ラム１を出ると精製血漿は、圧力測定手段２１ｆｆ備え
たパイプ１９により捕集器５に排出され、この捕集器は
又こσ）ように復元した血液の泡を防ぐための安全装置
となる。圧力測定手段２５を荷するパイプ２３により、
復元血液は患者の循環系に排出される。従って装置に血
液な導入するためのパイプ７と循環系に血液を戻丁ため
のパイプ２３は患者の静脈に接続されている。 第５図に示す血漿を精製するための精製器では、患者血
液が装置に連続的に移動してくる間、ｇ製は断続的に実
施される。第４図の精製器ｇ）　ｆｑとんどの成分が出
ておりこれらは同様の意味を有している。この場合、細
胞分離機３からの血漿は、本発明の吸着支持体な含有す
る容器３１と３２中で断続的に精製される。この場合ポ
ンプ１Ｔで循環される血漿は回路から抽出され抽出弁１
８により容器３１に導入される。容器３１で精製された
後、血漿は再びパイプ１６によりポンプ１７の上流に導
入されるが、この開弁１４は閉じたままである。 本発明の支持体は又第糧：Ｃ因子の精製に用いることも
できろ。この場合、支持体にまず抗ｖｌ：Ｃ抗体な富有
する血漿を接触させて抗体を吸着させる。次にこの抗体
が結合した支持体に、第ｖｌ：Ｃ因子を含有する液体を
接触させることにより、第１：Ｃ因子の精製に使用でき
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、部分トロンざプラスチン時間（ＰＴＴ　）に
基づき、試料の抗ｖｍ　：　ａ抗体濃度な定置するだめ
の標準曲線な示す。 第２図及び第６図は、異なる支持体上の免疫グロブリン
と抗ｖ１１：Ｃ抗体の吸着等温式を示す。 第４図は、本発明の方法？実施するだめのカラム血漿Ｎ
製器の図である。 第５図は、文例の血漿精製器の図である。

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. （１）液体中に存在する抗VIII：Ｃ抗体の分離方法にお
   いて： ａ）鎖の中に置換可能な官能基を有し、少なくともその
   一部は式−（ＳＯ＿３）ＸＭ（式中、Ｍは液体と反応し
   ない金属であり、Ｘは金属Ｍの結合価を表わす）、及び
   ／又は式−ＳＯ＿２Ｙ及び／又は−ＣＯＹ（式中、Ｙは
   アルギニン以外の−アミノ酸の、又はアルギニン以外の
   α−アミノ酸誘導体のアミノ基から水素原子を除くこと
   により得られる基を表わす〕（これらは抗VIII：Ｃ抗体
   に対する新和性と、他の免疫グロブリンに比較して抗V
   III：Ｃ抗体に対して選択性を有する）により置換され
   たポリマー又はコポリマーより成る固体支持体に、その
   液体を接触させ、そして ｂ）抗VIII：Ｃ抗体を吸着させた支持体から液体を分離
   することより成る、上記分離方法。
2. （２）基Ｙは式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１はα−アミノ酸の側鎖を表わし、Ｒ＾２
   は水素原子又はアルキル基を表わし、基Ｒ＾１は官能基
   ＣＯＯＨ、ＮＨ＿２、ＯＨ及びＳＨから選ばれる官能基
   の１つである）である、特許請求の範囲第１項に記載の
   方法。
3. （３）基Ｙはグルタミン酸のアミノ基から水素原子を除
   くことにより得られる、特許請求の範囲第１項記載の方
   法。
4. （４）基Ｙはヒドロキシプロリンのアミノ基から水素原
   子を除くことにより得られる、特許請求の範囲第１項に
   記載の方法。
5. （５）基Ｙはスレオニンのアミノ基から水素原子を除く
   ことにより得られる、特許請求の範囲第１項に記載の方
   法。
6. （６）基Ｙをエアラニン、フェニルアラニン及びリジン
   から選ばれるアミノ酸のアミノ基から水素原子を除くこ
   とにより得られる、特許請求の範囲第１項に記載の方法
   。
7. （７）支持体は、式−ＳＯ＿２Ｙ（式中、Ｙは特許請求
   の範囲第１項から第６項までのいずれか１項に記載の意
   味を有する）と式−（ＳＯ＿３）ＸＭ（式中、Ｍは液体
   と反応しない金属であり、Ｘは金属Ｍの結合価を表わす
   ）の基が結合したポリスチレン又はスチレンコポリマー
   より構成される、特許請求の範囲第１項から第６項まで
   のいずれか１項に記載の方法。
8. （８）スチレンコポリマーは、スチレンの結合したクロ
   ロスルホン化耐性ポリマーにより構成される、特許請求
   の範囲第７項に記載の方法。
9. （９）クロロスルホン化耐性ポリマーは、ポリオレフィ
   ン、フッ素化ポリマー及びポリビニルクロリドより選ば
   れる、特許請求の範囲第８項に記載の方法。
10. （１０）支持体は、式−ＣＯＹ（式中、Ｙは特許請求の
    範囲第１項から第６項までのいずれか１項に記載の意味
    を有する）、及び式ＣＨ＿２ＣＯＮＨＲ＾４−ＳＯ＿３
    Ｒ＾５（式中、Ｒ＾４は置換されている又は置換されて
    いないアルキル、アリール、又はアルキルアリールを表
    わし、Ｒ＾５を水素原子又は、液体と反応しない金属を
    表わす）の結合した多糖により構成される、特許請求の
    範囲第１項から第６項までのいずれか１項に記載の方法
    。
11. （１１）多糖はポリデキストランである、特許請求の範
    囲第１０項に記載の方法。
12. （１２）液体は血漿である、特許請求の範囲第１項から
    第１１項までのいずれか１項に記載の方法。
13. （１３）特許請求の範囲第１項から第１２項までのいず
    れか１項に記載の方法の、Ａ型血友病患者の血液の生体
    外精製への応用。