JPS62179382A - Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の菌体外分泌酵素の培地組成 - Google Patents
Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の菌体外分泌酵素の培地組成Info
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- JPS62179382A JPS62179382A JP1970186A JP1970186A JPS62179382A JP S62179382 A JPS62179382 A JP S62179382A JP 1970186 A JP1970186 A JP 1970186A JP 1970186 A JP1970186 A JP 1970186A JP S62179382 A JPS62179382 A JP S62179382A
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はＢａｃｉｌｌｕｓＪＩＧの菌体外分泌酵素、特
にプロテアーゼの分泌を高めるために用いる培地組成に
関するものである。
にプロテアーゼの分泌を高めるために用いる培地組成に
関するものである。
（発明の背景）
従来から８ａｃｉｌｌｕｓＪｉのバクテリアは菌体外に
分泌する酵素（特にアミラーゼおよびプロテアーゼ）が
他のバクテリアと比較すると高いといわれているため、
このバクテリアを使用して工業的に有用な酵素が次々に
生産されている。ところが、それだけでは需要に追いつ
くことが出来ず、前記Ｂａｃｉｌｌｕｓ属のバクテリア
に紫外線、Ｘ線および化学物質（変異原物質）を作用さ
せ、これにより突然変異株を取り出し、その中から目的
とするバクテリアをスクリーニングしてきて使用してい
た。
分泌する酵素（特にアミラーゼおよびプロテアーゼ）が
他のバクテリアと比較すると高いといわれているため、
このバクテリアを使用して工業的に有用な酵素が次々に
生産されている。ところが、それだけでは需要に追いつ
くことが出来ず、前記Ｂａｃｉｌｌｕｓ属のバクテリア
に紫外線、Ｘ線および化学物質（変異原物質）を作用さ
せ、これにより突然変異株を取り出し、その中から目的
とするバクテリアをスクリーニングしてきて使用してい
た。
その中で、現在主流となっているのは、遺伝子繰作を用
いて、分泌ベクター（分泌酵素量を高めるための遺伝子
）を取り出し、それを宿主細胞に入れ、分泌酵素量を従
来の株より数倍高めようとするものである。
いて、分泌ベクター（分泌酵素量を高めるための遺伝子
）を取り出し、それを宿主細胞に入れ、分泌酵素量を従
来の株より数倍高めようとするものである。
（発明が解決しようとする問題、ζχ）上記のように、
菌体外分泌酵素量を高めるには、バクテリアに紫外線、
Ｘ線、化学物質を作用させ、突然変異株を作り出し、そ
の中から目的とするバクテリアをスクリーニングしてき
て使用したり、または、ｊ衣伝子操作を用いて、分泌ベ
クターを作り出し、それを宿主細胞に入れるという複雑
な操作を行なってきた。
菌体外分泌酵素量を高めるには、バクテリアに紫外線、
Ｘ線、化学物質を作用させ、突然変異株を作り出し、そ
の中から目的とするバクテリアをスクリーニングしてき
て使用したり、または、ｊ衣伝子操作を用いて、分泌ベ
クターを作り出し、それを宿主細胞に入れるという複雑
な操作を行なってきた。
この発明は上記問題点を解決するためになされたもので
あり、複雑な操作を行なうことなく、分泌酵素量を高め
ることができる分泌酵素の培地組成を提供することを目
的とする。
あり、複雑な操作を行なうことなく、分泌酵素量を高め
ることができる分泌酵素の培地組成を提供することを目
的とする。
（問題点を解決するための手段）
この発明にががるＤａｃｉｌｌｕｓ属の菌体外分泌酵無
調整豆乳、培養時間、２４時間ないし３５時間、培養温
度、４５°Ｃからなるものである。
調整豆乳、培養時間、２４時間ないし３５時間、培養温
度、４５°Ｃからなるものである。
（作用）
えることにより、簡単な操作により分泌酵素の量を高め
ることができる。
ることができる。
（実施例）
以下、この発明に係る一実施例を説明する。
表１に列挙した各バクテＩ７７をそれぞれ通常の枯店菌
培地（ＳＰｌ培地、組成は表２）と枯草培地に５％無調
製豆乳を添加した培地とに入れた。
培地（ＳＰｌ培地、組成は表２）と枯草培地に５％無調
製豆乳を添加した培地とに入れた。
表Ｉ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ５ｔｒａｉｎｓＳ
ａｄａｉｅ、Ｙａｎｄ Ｔ、 Ｋａｄａ、１９８５．［
１ａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｇｅｎｅ Ｉ
ｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ Ｃｅ１ｌＤ １ｖｉｓ
ｉｏｒｔｙ Ｓ ｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ＋ ａｎｄ
Ｅ ｘｏｅｎｚｙｍｅＳｅｃｒｅｔｉｏｎ、 Ｊ
、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 Ｉ Ｇ ３ ：６表２
ＳＰＩ培地組成 ５ａｄｃ＋ｉｅ、Ｙ、ｐｎｄ Ｔ、Ｋａｄａ、１９８
３゜Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＣｏＢｅｔｅｎｔ
Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｃｅ１ｌｓ
、Ｊ、［１ａｃｔｅｒｉｏ１１５３：８１３−８２１ 枯「に菌は３７°Ｃ，ロー６−４Ｊ菌は４５°Ｃで培養
する。なお、Ｂ−６−４Ｊ菌は、工業技術院微生物工業
技術研究所に受託番号、微工研菌寄）４１４号として寄
託されている。
ａｄａｉｅ、Ｙａｎｄ Ｔ、 Ｋａｄａ、１９８５．［
１ａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｇｅｎｅ Ｉ
ｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ Ｃｅ１ｌＤ １ｖｉｓ
ｉｏｒｔｙ Ｓ ｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ＋ ａｎｄ
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、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 Ｉ Ｇ ３ ：６表２
ＳＰＩ培地組成 ５ａｄｃ＋ｉｅ、Ｙ、ｐｎｄ Ｔ、Ｋａｄａ、１９８
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Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｃｅ１ｌｓ
、Ｊ、［１ａｃｔｅｒｉｏ１１５３：８１３−８２１ 枯「に菌は３７°Ｃ，ロー６−４Ｊ菌は４５°Ｃで培養
する。なお、Ｂ−６−４Ｊ菌は、工業技術院微生物工業
技術研究所に受託番号、微工研菌寄）４１４号として寄
託されている。
手の訪％−Ｊ−ハＦｈめノ（り子Ｉ＋ ７か飲鄭１鳴地
で２４時間培養した際の上清であるプロテアーゼ活性と
枯草菌培地に５％無調製豆乳を加えた培地で２４時間培
養した際の上清であるプロテアーゼ活性とを比較した場
合には、枯１ｐ：薗培地に５％無調整豆乳を加えた培地
でのプロテアーゼ活性が着しく高い（表３参照）。
で２４時間培養した際の上清であるプロテアーゼ活性と
枯草菌培地に５％無調製豆乳を加えた培地で２４時間培
養した際の上清であるプロテアーゼ活性とを比較した場
合には、枯１ｐ：薗培地に５％無調整豆乳を加えた培地
でのプロテアーゼ活性が着しく高い（表３参照）。
表３ Ｓｒ’Ｉ培地およびＳＰＩ＋５％無調製豆乳無
地製豆乳培地ロテアーゼ活性の比較 なお、プロテアーゼ活性の測定方法は次のとおりである
。
地製豆乳培地ロテアーゼ活性の比較 なお、プロテアーゼ活性の測定方法は次のとおりである
。
ハイドバラグーを使用（シグマ製品）
＋１．１１１ＮＤＥＲＫＮＥｃＩＩＴ、Ｍ、Ｃ，０ＥＤ
ＫＡＳ、Ｉ’、ＳＩＬＶＥＩＩＭ八ＮａｎｄＢ、へ、Ｈ
ＡＶＥＲ８ＡＣＫ、ＣＩ ｉｏ、ｃｌ＋ｉｍ、八ｅｔａ
、２１（１９６８）１９７−・小試験管にハイドパウダ
ー３０＋ｏｇを測り取りリン酸ｔｌｆＦｊｎを一定址入
れて予め５５°Ｃに設定しておく ・およそ３０分後に培養液を遠心して得られた上清戒を
一定量加えて反応させる。３０分間反応させる間に５分
おきに撹拌する。
ＫＡＳ、Ｉ’、ＳＩＬＶＥＩＩＭ八ＮａｎｄＢ、へ、Ｈ
ＡＶＥＲ８ＡＣＫ、ＣＩ ｉｏ、ｃｌ＋ｉｍ、八ｅｔａ
、２１（１９６８）１９７−・小試験管にハイドパウダ
ー３０＋ｏｇを測り取りリン酸ｔｌｆＦｊｎを一定址入
れて予め５５°Ｃに設定しておく ・およそ３０分後に培養液を遠心して得られた上清戒を
一定量加えて反応させる。３０分間反応させる間に５分
おきに撹拌する。
・３０分後に氷水に入れて反応を停止させろ過して上清
を得る。
を得る。
・得られた上清の５９５ｎｍにおける吸光度を測定する
（吸光度は０．１〜１．５の間になるように加える培′
ｇ！液の量を調節する） 量をこれよりも増加させたり、減少させた場合には活性
が下がる（第１図参照）。
（吸光度は０．１〜１．５の間になるように加える培′
ｇ！液の量を調節する） 量をこれよりも増加させたり、減少させた場合には活性
が下がる（第１図参照）。
培養時間については、２４時間から３５時間で活性は略
一定を保ち、培養時間がこれよりも長くなったり短くな
ると活性が徐々に下がる。
一定を保ち、培養時間がこれよりも長くなったり短くな
ると活性が徐々に下がる。
したがって、培養時間は２４時間から３５時間が好適で
ある。
ある。
このプロテアーゼの菌体外分泌と同時にＢ−６−４Ｊと
いうバクテリアからは、ｓ調製豆乳を添加することによ
り、豆乳を凝固させる比較的強い活性の凝固酵素が得ら
れる。
いうバクテリアからは、ｓ調製豆乳を添加することによ
り、豆乳を凝固させる比較的強い活性の凝固酵素が得ら
れる。
（発明の効果）
以上説明したとおり本発明によれば、通常バクテリアを
無機塩培地、グルコース、酵母エキス、カザミノ酸、Ｃ
ａＣｌ２’Ｍ％無調製豆乳から成る培地で、４５°Ｃ１
培養時１７１５２４時間ないし３５時間培養することに
より、ｒｒＪ単な繰作で分泌酵素の量を高めることがで
きるＤａｃｉｌｌｕｓ属の菌体外分泌酵素の培地組成を
得ることができるという効果を生じる。
無機塩培地、グルコース、酵母エキス、カザミノ酸、Ｃ
ａＣｌ２’Ｍ％無調製豆乳から成る培地で、４５°Ｃ１
培養時１７１５２４時間ないし３５時間培養することに
より、ｒｒＪ単な繰作で分泌酵素の量を高めることがで
きるＤａｃｉｌｌｕｓ属の菌体外分泌酵素の培地組成を
得ることができるという効果を生じる。
第１図はｌｔ−８−４Ｊを無調製豆乳の量を変化させて
培養した際の活性との関係を示すグラフ、第２図はＢ−
８−４Ｊを５％無調製豆乳を加えた培地での培養時間を
変化させた際の活性との関係を示すグラフである。 特許出願人 日清製某株式会社 （株）日清インターナシ１ナル
培養した際の活性との関係を示すグラフ、第２図はＢ−
８−４Ｊを５％無調製豆乳を加えた培地での培養時間を
変化させた際の活性との関係を示すグラフである。 特許出願人 日清製某株式会社 （株）日清インターナシ１ナル
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 基本培地 無機塩培地、グルコース、酵母エキス カザミノ酸、ＣａＣｌ＿２、２〜５％無調整豆乳培養時
間 ２４時間ないし３５時間 培養温度 ４５℃ これらからなることを特徴とするＢａｃｉｌｌｕｓ属の
菌体外分泌酵素の培地組成。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1970186A JPS62179382A (ja) | 1986-01-31 | 1986-01-31 | Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の菌体外分泌酵素の培地組成 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1970186A JPS62179382A (ja) | 1986-01-31 | 1986-01-31 | Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の菌体外分泌酵素の培地組成 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62179382A true JPS62179382A (ja) | 1987-08-06 |
| JPH0440985B2 JPH0440985B2 (ja) | 1992-07-06 |
Family
ID=12006572
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1970186A Granted JPS62179382A (ja) | 1986-01-31 | 1986-01-31 | Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の菌体外分泌酵素の培地組成 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62179382A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2629309A1 (fr) * | 1988-03-30 | 1989-10-06 | Hokkaido Nissin Kk | Produit alimentaire a base de proteines de soja et son procede de fabrication |
| JPH022340A (ja) * | 1988-06-13 | 1990-01-08 | Otsuka Takashi | 変性水和コロイドの製造方法 |
| EP0550626A1 (en) * | 1990-09-28 | 1993-07-14 | Smithkline Beecham Corporation | Method of improving the yield of heterologous proteins produced by streptomyces lividans |
| US7628594B2 (en) | 2006-11-24 | 2009-12-08 | Matsushita Electric Works, Ltd. | Vane pump having a labyrinth seal and gap between a top surface of a rotor and a ceiling surface of a rotor chamber that is formed between upper and lower cases |
-
1986
- 1986-01-31 JP JP1970186A patent/JPS62179382A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2629309A1 (fr) * | 1988-03-30 | 1989-10-06 | Hokkaido Nissin Kk | Produit alimentaire a base de proteines de soja et son procede de fabrication |
| JPH022340A (ja) * | 1988-06-13 | 1990-01-08 | Otsuka Takashi | 変性水和コロイドの製造方法 |
| EP0550626A1 (en) * | 1990-09-28 | 1993-07-14 | Smithkline Beecham Corporation | Method of improving the yield of heterologous proteins produced by streptomyces lividans |
| US7628594B2 (en) | 2006-11-24 | 2009-12-08 | Matsushita Electric Works, Ltd. | Vane pump having a labyrinth seal and gap between a top surface of a rotor and a ceiling surface of a rotor chamber that is formed between upper and lower cases |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0440985B2 (ja) | 1992-07-06 |
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