FR2629309A1 - Produit alimentaire a base de proteines de soja et son procede de fabrication - Google Patents
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Abstract
Ce produit alimentaire à base de protéines de soja est fabriqué à l'aide d'un microorganisme nouvellement découvert, lequel libère une enzyme de coagulation des protéines de soja. La nouvelle enzyme agit pour coaguler les protéines de soja (lait de soja), permettant ainsi de fabriquer de manière efficace des nouveaux produits fermentés à base de protéines de soja, tel qu'un fromage de lait de soja ou une crème de lait de soja, de même que toute une variété de produits alimentaires à base de protéines de soja. On décrit également un procédé pour fabriquer de manière efficace l'enzyme de coagulation des protéines de soja.
Description
PRODUIT ALIMENTAIRE A BASE DE PROTEINES DE SOJA
La présente invention porte sur un produit à base de protéines de soJa ainsi que sur un procédé de fabrication de ce produit, et, en particulier, sur l'enzyme de coagulation des protéines de soja qui est utilisée dans le procédé de fabrication du produit à base de protéines de soJa, sur un procédé pour obtenir, d'une manière efficace, l'enzyme de coagulation des protéines de soja, et sur un procédé de fabrication du produit alimentaire à base de protéines de soJa à l'aide de l'enzyme de coagulation des
protéines de soja.
Ces dernières années, les produits alimentaires végétaux ont reçu une grande attention de la part de beaucoup de gens se préoccupant davantage de leur état de santé, compte tenu du fait que la tendance de la plupart des gens à consommer une quantité excessive d'aliments ou graisses d'origine animale, est la cause de maladies mortelles, telles que les maladies cardiaques ou
l'artériosclérose.
De façon générale, la plupart des produits alimentaires végétaux, que l'on peut se procurer couramment, sont fabriqués artificiellement à partir d'huiles et graisses végétales, en tant qu'aliments quasi-végétaux, et en tant que tels, les produits alimentaires d'origine purement végétale ne sont pas faciles à trouver de nos Jours
dans les magasins locaux.
Parmi d'autres végétaux, le soJa est, sans mentionner la qualité élevée de ses protéines végétales, un aliment majeur qui est utilisé depuis longtemps dans une diversité de produits alimentaires, et il est dit contenir presque tous les nutriments essentiels pour la santé humaine. Des travaux d'étude et de développement ont été entrepris dans le but d'utiliser les protéines de soJa pour
la production d'aliments d'origine purement végétale.
Cependant, une difficulté se posait encore dans la production d'aliments à base de protéines de soja fermentés, analogues aux fromages qui sont obtenus à partir du lait. La raison est qu'un fromage est produit par l'intermédiaire de l'enzyme rennine qui coagule les protéines du lait, mais que personne Jusqu'à maintenant n'avait découvert une enzyme capable de coaguler les protéines de soja d'une manière analogue à une cette enzyme rennine. La présente invention a d'abord pour but de proposer un nouveau produit alimentaire & base de protéines
de soja.
Pour atteindre ce but, conformément à la présente invention, les présents inventeurs ont découvert une bactérie, qui est estime appartenir au genre Bacillus et
qui libère une enzyme de coagulation des protéines de soja.
La bactérie est appelée bactérie 26D7. Il a donc été découvert que l'addition d'une telle enzyme libérée par la bactéerie 26D7 dans des protéines de soja permet d'obtenir d'une manière efficace un nouvel aliment à base de protéeines de soja, tel que par exemple, un fromage de lait de soJa ou
une crème de lait de soja.
La présente invention a pour autre but de proposer un procédé permettant de fabriquer, de manière efficace, une
enzyme de coagulation des protéines de soja.
Pour atteindre cet objectif, conformément à. la présente invention, on cultive la bactérie mentionnée ci-dessus (26D7) sur un milieu comprenant: - 0,1% d'extrait de levure; - 0,02% d'acide casamino; - 0,1% de sulfate d'ammonium; - 0,05% de citrate de sodium; - 0,01% de sulfate de magnésium; - 1,0% de phosphate; et - 5,0% de lait de soja:
(ajusté à pH 6,0 par addition de KOH).
En conséquence, on a trouvé qu'en présence de 5,0% de lait de soja, la souche 26D7 produit une activité suffisantr d'enzyme de coagulation des protéines de soja, de façon à coaguler le lait de soja d'une manière satisfaisante. La présente invention a encore pour autre but de proposer une enzyme de coagulation des protéines de soJa, en tant que telle, laquelle est efficace pour coaguler les
protéines de soJa.
A cet effet, conformément à la présente invention, il est proposé une enzyme de coagulation des protéines de soja possédant les caractéristiques suivantes: Xasse moléculaire approximativement 30000 Température optimale approximativement 80'C Stabilité thermique: stable à 35 C-40'C, pendant 30 minutes pH optimal: au-dessous de pH 6,0 Stabilité au pH stable à pH 4-pH 9,
pendant 12 heures.
Influence d'ionsmétalliques: nulle Influence d'inhibiteurs: l'activité enzymatique est arrêtée par le fluorure de phényl méthyl sulfonyle et le fluorure de tosyle Activité protéolytique et enzyme proteolytique une sorte de serine protease
Brève description du dessin
- La Figure 1 est un graphe montrant l'activité de l'enzyme de coagulation des protéines de soJa en fonction de la concentration en lait de soja d'un milieu de culture; - la Figure 2 est un graphe montrant la relation entre la croissance de la bactérie et l'activité de l'enzyme de coagulation des protéines de soja, graphe sur lequel est également montrée l'activité protéolytique de la même enzyme de coagulation des protéines de soJa; - la Figure 3 est un graphe montrant les résultats des mesures optiques conduites sur des fractions enzymatiques brutes éluées par chromatographie sur colonne de CX-cellulose conformément à un gradient linéaire de NaCl, et montrant également les activités de pic respectives d'un premier (I) et d'un second groupe (II) de fractions d'enzyme de coagulation des protéines de soja; - la Figure 4 est un graphe montrant les résultats des mesures optiques conduites sur les- fractions davantage purifiées des enzymes de coagulation des protéines de soja correspondant au premier groupe de fractions (I) de la Figure 3; - la Figure 5(A) est un graphe montrant la plage des températures optimales pour les activités respectives du premier (I) et du second groupe (II) de fractions d'enzyme de coagulation des protéines de soja; - la Figure 5(B) est un graphe montrant la plage de stabilité thermique pour les activités respectives du premier (I) et du second groupe (II) de fractions d'enzyme de coagulation des protéines de soJa; - la Figure 6(A) est un graphe montrant l'influence du pH sur les activités respectives du premier (I) et du second groupe (II) de 'fractions d'enzyme de coagulation des protéines de soja; la Figure 6(B) est un graphe montrant la plage de stabilité au pH pour les activités respectives du premier (I) et du second groupe (II) de fractions d'enzyme de coagulation des protéines de soJa; - la Figure 7 est un graphe montrant la plage des valeurs optimales de pH pour l'activité protéolytique de l'enzyme de coagulation des protéines de soja, à l'état isolé; et - la Figure 8 est un graphe montrant la plage des températures optimales pour l'activité protéolytique de l'enzyme de coagulation des protéines de soja, à l'état isolé.
Description détaillée des modes de réalisation
préférés de l'invention Tout d'abord, on soulignera que les présents inventeurs ont mis en oeuvre un certain nombre de techniques de sélection (screening), dans le but de découvrir un microorganisme, ou une bactérie, capable de libérer une enzyme de coagulation des protéines de soja. Des échantillons de terrains et de plantes ont, en grande partie, été recueillis et soumis à des techniques de
sélection de la manière classique bien connue.
Ces travaux ont permis aux inventeurs de découvrir et de réussir a isoler une nouvelle bactérie ayant la propriété de libérer une enzyme de coagulation des protéines de soJa, en présence de protéines de soja, et, par là, de faire connaître que la souche bactérienne est désignée comme étant la souche 26D7 et qu'elle a été déposée sous le numéro de dépôt FERX BP-1778 auprès de l'autorité de dépôt internationale au Japon {{Agency of Industrial Science and Technology, 1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi Ibaraki-ken, Japon", conformément aux dispositions du Traité de Budapest
sur la reconnaissance internationale du dépôt de micro-
organismes aux fins des procédures d'examen des brevets.
On decrira maintenant les propriétés bactériennes
et la culture de la souche 26D7 mentionnée ci-dessus.
Milieu de Culture Le microorganisme identifié par "28D7" a été cultivé dans un milieu préparé à partir des ingrédients
présentés dans le Tableau i ci-dessous.
Ta1leu Extrait de viande de boeuf.. 10 g Polypeptone................. 10 g NaCi........................ 5 g
Eau distillée............... 1000 ml.
Le milieu précédent peut être formé sur une plaque en tant que milieu de culture sur plaque si l'on y incorpore
1,5 g d'agar.
Fropriétés Bactériennes -On a déterminé les propriétés bactériennes de la souche 26D7 ainsi cultivée. Les résultats sont présentés
dans le Tableau 2 ci-après.
Tableau 2
Forme.............................. bAtonnet Sporulation..................
.... + Coloration par le Gram............. + Croissance à 45'C............DTD: ...... +..DTD: à 65'C.................. -
Croissance dans NaCl à 7%.......... + Réaction de Voges-Proskaver........ + Catalase........................... + Croissance à l'état anaérobie..... + Motilité........................... +++ Utilisation des glucides glucose........................... + Les résultats ci-dessus suggèrent que la souche
26D7 en question pourrait appartenir au genre Bacillus.
On décrira maintenant la libération de l'enzyme de coagulation des protéines de soja par la bactérie 26D7, et les techniques d'isolement et de purification d'une telle enzyme. Le premier stade pour favoriser la production, par la souche 26D7 mentionnée ci-dessus, d'enzymes de coagulation des protéines de soja est tel que -la souche 26D7 lg soit cultivée dans un meilleur milieu préféré, préparé conformément à ce qui est indiqué dans le Tableau 3 ci-dessous. On bien, en variante, on peut utiliser n'importe quelle autre sorte de milieu, qui contient les sources nutritionnelles requises, comprenant des sources
d'azote et de carbone, dans la mesure o les milieux en eux-
mémes contiennent une source d'azote (protéines de soja) et du phosphate. Il est important que la source d'azote (protéines de soJa) et le phosphate puissent être ajoutés dans le milieu de façon à assurer la libération des enzymes de coagulation des protéines de soja par la bactérie 26D7, qui agit pour coaguler ou cailler le lait de soja dans ce cas
Tableau 3
Extrait de levure......................... 0,1% Acide casamino............
.............. 0,02% Sulfate d'ammonium........................ 0,1% Phosphate................................. 10% Citrate de sodium............DTD: ............. 0,05% Sulfate de magnésium.................... 0,01% Lait de soJa.............................. 5,0% Note: Ajuster à pH 6,0 par addition de KOH Si l'on examine la composition du milieu qui est énumérée ci-dessus dans le Tableau 3, il est préférable que la concentration du lait de soja soit fixée de façon stricte à 5,0% comme ci-dessus, étant donné que les expériences montrent que des concentrations en lait de soJa se situant au-dessous ou au-dessus de 5,0% conduisent à une production réduite de l'enzyme de coagulation. des protéines de soja, comme on peut le comprendre en examinant la figure 1. La souche 26D7 a été inoculée dans le milieu mentionné ci-dessus, et elle y a été cultivée dans des conditions aérobies au moyen d'un dispositif d'aération et d'agitation classique du type secoueur, à la température de 1 45'C, pendant 48-72 heures. En ce qui concerne l'aération, on doit prendre soin de régler l'introduction de la quantité d'air dans le milieu à un degré modéré, évitant une quantité trop grande ou trop faible d'air introduit, parce que cela affecte de façon défavorable la productivité en enzyme de coagulation des protéines de soJa. De préférence, l'aération et l'agitation doivent être effectuées à l'aide..DTD: d'un secoueur rotatif approprié à 200-400 tpm, en maintenant.
l'introduction d'air à 0,5-0,8 VVm.
Dans ces conditions, la bactérie 26D7 s'est 2o développée et des enzymes de coagulation des protéines de soja ont été obtenues, comme présenté sur la Figure 2. Sous cet aspect, les présents inventeurs ont également déterminé l'activité protéolytique des mêmes enzymes de coagulation des protéines de soja, par souci de comparaison entre l'activité de coagulation des protéines de soJa et l'activité protéolytique des enzymes de coagulation des
protéines de soja.
Apres la culture décrite ci-dessus de la bactérie 26D7, la purification et l'isolement de l'enzyme de coagulation des protéines de soja ont été conduits, ce qui
sera développé ci-dessous.
Le milieu cultivé (sous forme liquide) a été filtré sur kieselguhr, et la couche résiduelle se trouvant sur le kieselguhr, qui contient des enzymes de coagulation des protéines de soja, à l'état brut, a été inJectée dans une solution de sulfate d'ammonium saturée, à 55%, en vue de la précipitation. Ensuite, le précipité des enzymes de coagulation des protéines de soja, à l'état brut, a été dessalé par chromatographie par filtration sur gel à l'aide d'une colonne de gel de Sephadex G25 (disponible auprès de la Société "Pharmacia Fine Chemicals"), permettant ainsi d'obtenir les fractions des enzymes de coagulation des
protéines de soJa, & l'état brut.
Les fractions enzymatiques dessalées ont été purifiées par chromatographie, à l'aide d'une colonne de CN-cellulose (Pharmacia Fine Chemicals). De façon spécifique, après que les fractions dessalées aient été chromatographiées sur une telle colonne de poudre de cellulose, des volumes appropriés (3-5 ml) de différentes solutions de NaCl avec des concentrations de NaCl variant de façon progressive entre ON et 2! ont été préparés de façon qu'un gradient linéaire en NaCl soit obtenu pour obtenir des fractions multiples conformément au gradient linéaire de NaCl. Ensuite, en distribuant chacune de ces différentes solutions de NaCl dans la colonne, chaque éluat issu de la colonne a été reçu dans une cellule, de sorte que plusieurs cellules d'eluat ont eté préparées. portant les numéros de fraction respectifs. Ensuite, les cellules d'éluat ont été soumises à une mesure à l'aide d'un spectrophotomêtre à 280 nm. L'absorbance résultante de chaque éluat est représentée par la ligne en traits pointillés sur la Figure 3, qui révèle les valeurs
d'absorbance de pic pour les numéros de fraction 75-100.
Par ailleurs, l'activité des enzymes de coagulation des protéines de soJa a été déterminée pour chacune de ces celluleE d'éluat, avec le résultat que l'activité enzymatique (- * -> a été observée de façon substantielle pour les numéros de fraction 75-100 en tant que premier groupe de fractions de pic (I), coïncidant ainsi avec les valeurs précédentes d'absorbance de pic du même éluat, et à nouveau observée de façon substantielle pour les numéros de fraction 120-130 en tant que second groupe de fractions de pic <II), comme
représenté sur la Figure 3.
En conséquence, on peut voir que les enzymes de coagulation des protéines de soJa existent pour les numéros de fraction 75-100, de même que 120-130. Ensuite, les éluats présents dans les cellules ayant les numéros de fraction 75-100 et 120-130 ont été encore purifiés par chromatographie par filtration sur gel, à l'aide d'une colonne de gel de Sephadex G-100 ("Pharmacia Fine Chemicals"), de façon à obtenir une enzyme de coagulation des protéines de soja, à l'état isolé. Chaque éluat en provenance de la colonne a été renuméroté avec un numéro de fraction, son absorbance à 280 nm a été mesurée, et l'activité de l'enzyme de coagulation des protéines de soja a été déterminée. Les résultats sont présentés sur la Figure 4, et le chromatogramme du premier groupe de fractions de pic (I) sur cette colonne de gel de Sephadex G-100 represente une image de bande unique dans un sens
analogue à celle développée par l'electrophorèse avec SDS.
La mesure de ce groupe de fractions (I) indique que la masse moléculaire de l'enzyme de coagulation de:s protéines de
soja, à l'état isolé, est d'approximativement 30000.
La plage des températures optimales et la stabilite thermique pour l'activité de pic des enzymes de coagulation des protéines de soja décrites ci-dessus ont été examinées, et les résultats sont présentés sur les Figures respectivement 5(A) et 5(B). On observe que la température d'activité optimale des enzymes pour le premier groupe de fractions de pic (I) est d'approximativement 80'C, alors qu'en ce qui concerne les enzymes brutes pour le second groupe de fractions de pic (II), leur température d'activité optimale est d'approximativement 65 C, comme montré par la Figure 5(A), et que, en termes de stabilité thermique, l'enzyme isolée en fin de compte, obtenue par le Sephadex G-100, reste stable à 35-40'C pendant 30 minutes, comme
montré par la Figure 5(B).
L'influence du pH et la stabilité au pH des enzymes de coagulation des protéines de soJa pour les premier et second groupes de fractions de pic (I) et (II) ont été déterminés, et les résultats sont présentés sur les Figures 6(A) et 6(B). Sur la Figure 6(A), on remarque que la plage des pH optimaux pour l'activité enzymatique des fractions de pic (I) et (II) est celle des pH inférieurs à 6,5, alors qu'au contraire, à un niveau de pH dépassant 6,5, la plus grande partie de l'activité enzymatique est terminée. La stabilité au pH des enzymes pour ces groupes de fractions de pic, comme montré par la Figure &(B), est maintenue entre pH 4 et pH 9; en d'autres termes, aux valeurs de pH allant de 4 à 9, environ 70% des enzymes des deux groupes restent vivantes et actives pendant
17 heures à la température de 4'C.
En outre, l'influence des ions métalliques et des inhibiteurs sur les enzymes de coagulation des protéines de soja a été examinée, et comme résultat de cet examen, il n'y a presque pas eu d'linfluence des ions métalliques sur les enzymes de coagulation des protéines de soja à la fois pour le premier (I) et le second (II) groupe de fractions de pic, cependant, conformément aux expériences faites avec des inhibiteurs, l'activité de coagulation de l'enzyme pour le premier groupe de fractions de pic (I) a été complètement inhibée par le fluorure de phényl méthyl sulfonyle (PXSF> et par le fluorure de tosyle (TSF), alors que seul l'acide éthylène diamine tétra-acétique (EDTA) a complètement inhibé l'activité de coagulation de l'enzyme pour le second groupe de fractions de pic (II). Cesrésultatsmontrent que le premier groupe de fractions de pic (I) contient une sorte de sérine protéase, et que le second groupe de fractions de pic (II) contient une sorte de métal protéase. Les détails de ces expériences avec des ions métalliques etdesinibiteurs sont présentés dans le Tableau 4 ci-dessous: 1 2 Produit Conc.(M) Activité relative (Z) chimique (I) (Il) S ZnSO4 7H20 1 x 10 3 100 100 CuSO4 5H20. 100 93,3 MgC12 6H20 94,3 96,4 MnSO4 4H20 100 100 CaCl 2'2H20 91/6 100 BaC12 2H20 100 100 FeSO4 7H20 100 96 2 LiOH H20 100 100 HgC12 100 90 2 2-
-2 0 100
TSF. 1 x 10
EDTA 100 O
PMSF 0 100
aucun 100 100 Les Figures 7 et 8 sont destinées à montrer respectivement la plage optimale des pH et la température optimale pour l'activité protéolytique de l'enzyme de
coagulation des protéines de soja, à l'état isole.
Procédé de Fabrication d-'un Aliment à Base de Protéines de S6aa On décrira maintenant le procédé de fabrication d'un aliment de type fromage à base de protéines de soja, en tant que l'un des modes de réalisation préférés de i'invention, par l'utilisation de l'enzyme de coagulation
des protéines de soja qui vient d'être décrite.
Conformé-ment à la présente invention, le procédé que l'on preéfère le plus pour fabriquer un tel aliment de type fromage met en Jeu, tout d'abord, la préparation d'une matière de base par le mélange des ingrédients mentionnés ci-dessous, et la stérilisation de la matière de base par un
traitement thermique à 80'C pendant 30 minutes.
(a) Solution de protéines de soJa, préparée par dissolution d'une poudre de protéines de soJa de telle sorte que la concentration en protéines de soJa s'élève à 7,5%
(b) Lactose..... 2%.
(c) Graisse......25% (sous forme de graisse solide)
(d) Emulsifiant. 2% (pour la graisse).
Alors que dans le présent mode de réalisation, on utilise de la poudre de protéines de soJa, il doit être entendu que les laits de soja courants du marché, ou les laits de soJa pour utilisation industrielle dans d'autres produits alimentaires A base de soJa, peuvent également être utilisés. Durant le traitement de stérilisation par la
chaleur, la protéine de soja est dénaturée.
Ensuite, la matière de base mentionnée ci-dessus est homogénéisée au moyen d'un homogénéiseur approprié a une pression de 14,71 KPa (150 kg/cm2), à la température de 70'C, puis la matière de base homogénéisée est placée dans un réciDient à thermostat ou thermostatique approprié (tel qu'un récipient pour la fermentation des fromages), et elle y est maintenue à la température de 40'0 (de préférence,
dans des conditions de pH 6,5-6,6 et d'acidité d'approxi-
mativement 0,2). A cette étape, 2-3% d'une culture bactérienne d'acide lactique (pH 4,5-4,7 et acidité de 0,75) est introduite dans le récipient thermostatique. On laisse reposer la matière de base dans ces conditions pendant
environ 30 minutes.
Dans l'intervalle, on prépare une solution d'enzyme de coagulation des protéines de soJa par addition
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de 0,03-0,06% de la poudre de l'enzyme de coagulation des protéines de soJa précédemment décrite dans une solution de
NaCl 0,2X.
Lorsque les conditions de pH et d'acidité du récipient thermostatique viennent à âtre respectivement de 6,4-4,7 et d'environ 0,2- 0,25, la solution d'enzyme de coagulation des protéines de soJa est injectée dans le récipient, sur quoi la matière de base se coagule pour donner une matière caillée, par suite du fait que le lait de soJa de la matière de base est coagulé par l'enzyme de
coagulation des protéines de soJa.
La matière de base est transforme en une matière caillée de type fromage pendant environ 2 heures et minutes, puis, lorsque l'on s'est assuré que l'état caillé de la matière de base a atteint à un degré convenable, la matière caillée est découpée en morceaux prédéterminés, et chacun de ces morceaux de matière caillée est laissé au repos, pendant environ 30 minutes, ce qui
permet à du petit lait de se séparer de ces morceaux.
Ensuite, la matière caillée est mise en place sur un dispositif de moulage comprenant une matrice supérieure plate et une matrice inférieure de forme sensiblement cubique, ouverte à sa partie supérieure, présentant une pluralité d'orifices pratiqués dans ses parois latérales et sa paroi de fond, puis, après avoir placé la masse caillée dans la matrice inférieure, la matrice supérieure est abaissée pour pénétrer dans la matrice inférieure, afin de comprimer ainsi la masse caillée, forçant l'eau présente dans la matière caillée à s'échapper vers l'extérieur à
travers les divers orifices de la matrice Inférieure.
A ce stade, il est important de noter que des variations de la pression s'exerçant sur la matière caillée fournissent un certain nombre de produits alimentairesfezmatés, de
iifférentes naturesà,& base de protéines de soJa.
Par exemple, maintenir l'application d'une pression de 0,39-0,49 XPa (4-5 kg/cm) sur la matière caillée, pendant environ 10 heures, à une température ambiante de 12-15'C, conduit à la production d'un produit alimentaire à base de protéines de soja, du type fromage mou. Un produit alimentaire du type fromage dur, ou un produit alimentaire du type yogourt, peuvent être obtenus par un ajustement de la pression s'exerçant sur la masse caillée, à la valeur désirée. De plus, une crème de protéines de soJa peut être produite si l'on n'ajoute pas de culture bactérienne d'acide lactique. En outre, l'addition d'un agent arSmatisant ou d'un autre agent d'assaissonnement peut éviter le goût amer propre à ce produit alimentaire fermenté, et lui donner une
saveur plus douce.
Bien qu'ayant décrit la présente invention comme ci-dessus, on soulignera que celle-ci n'est pas limitée aux modes de réalisation illustrés, mais que des substitutions, modifications ou additions sont possibles, sans que l'on
s'écarte pour autant de son cadre et de son esprit.
En conséquence, de la description ci-dessus, il
ressortira que les enzymes de coagulation des protéines de soJa conformes à la présente invention sont tout à fait efficaces pour coaguler des protéines de lait de soja ou d'autres protéines de soja, et qu'elles peuvent trouver utilisation dans une très large diversité d'applications pour fabriquer de nombreux nouveaux produits alimentaires a
base de protéines de soJa.
Claims (5)
- REVENDICATIONSl. Produit alimentaire à base de protéines de soja, caractérisé par le fait qu'il est obtenu par l'introduction d'une enzyme de coagulation des protéines de soja dans des protéines de soja, ladite enzyme de coagulation des protéines de soja étant libérée par un microorganisme appartenant au genre Bacillus et étant capable de produire ladite enzyme decoagulation des protéines de soja.
- 2. Produit alimentaire à base de protéines de soja selon la revendication 1, caractérisé par le fait que ledit microorganisme est celui ayant fait l'objet d'un dépôt sous le numéro FERMBP-1778 auprès de "Agency of Industrial Scienceand Technology" au Japon.
- 3. Produit alimentaire à base de protéines de soja selon la revendication 1 ou 2, caractérisé par le fait que l'enzyme de coagulation des protéines de soja possède les propriétés de: (a) présenter une masse moléculaire d'approximativement30000.(b) présenter une première activité de pic de coagulation des protéines de soJa à une température d'environ 80'C, et une seconde activité de pic de coagulation des proteines de soJa à une température d'environ 65'C; (c) rester stable pendant 30 minutes à une température de35-40'C;(d) rester stable pendant 17 heures à une température de 4'C, dans des conditions de pH allant de pH 4 à pH 9, avec maintien de 70% de son activité de coagulation des protéines de soja; (e) présenter une activité accrue de coagulation des protéines de soJa dans la zone des pH inférieurs à 6,0, alors que son activité de coagulation des protéines de soja est terminée dans la zone des pH supérieurs à 7,0; (f) voir complètement inhibée sa première activité de pic de coagulation des protéines de soJa par le fluorure de phényl méthyl sulfonyle et le fluorure de tosyle, et complètement inhibée sa seconde activité de pic de coagulation des protéines de soJa par l'acide éthylène diamine tétra- acétique; et <g) présenter une activité normale de coagulation des protéines de soja sans que les ions métalliques aientbeaucoup d'influence sur elle.
- 4 - Produit alimentaire & base de protéines de soJa selon la revendication 3, caractérisé par le fait que l'enzyme de coagulation des protéines de soJa est cultivée & l'aide d'un microorganisme appartenant au genre Bacillus et capable de produire ladite enzyme de coagulationdes protéines de soJa.
- 5- Produit alimentaire à base de protéines de soJa selon la revendication 4, caractérisé par le fait que ledit microorganisme présente des propriétés bactériennes telles que: Forme bâtonnet Sporulation + Coloration par le Gram + Croissance a 45'C + a 65 Cc Crols=ance dans VaC! a 7% + Réaction de Voges-Proskaver Catalase + Croissance à l'état anaérobie + Xotilité +++ Utilisation des glucides glucose 6 - Produit alimentaire à-base-de protéines de soJa selon la revendication 4, caractérisé par le fait que le microorganisme est cultivé dans un milieu de culture comprenant: - 0,1% d'extrait de levure; - 0,02% d'acide casamino; - 0,1% de sulfate d'ammonium; - O,05% de dtrate de sodium; - 0, 01% de sulfate de magnésium; - 1,0% de phosphate; - 5,0% de lait de soja; et que ledit milieu de culture est aJusté à pH 6,0 parincorporation de KOH.
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