JPS62162964A - 臨床測定用の生物活性体固定化デイスクの製造方法 - Google Patents
臨床測定用の生物活性体固定化デイスクの製造方法Info
- Publication number
- JPS62162964A JPS62162964A JP477686A JP477686A JPS62162964A JP S62162964 A JPS62162964 A JP S62162964A JP 477686 A JP477686 A JP 477686A JP 477686 A JP477686 A JP 477686A JP S62162964 A JPS62162964 A JP S62162964A
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、重合性生伍体を放射線照射によって重合する
際に、抗体、抗原等の生物活性体を担体に固定化するこ
とによって臨床検査において使用される薄膜状固定化デ
ィスクを製造する方法に関する。
際に、抗体、抗原等の生物活性体を担体に固定化するこ
とによって臨床検査において使用される薄膜状固定化デ
ィスクを製造する方法に関する。
［従来の技術］
臨床検査にＪ３いては抗原抗体反応の特異性を利用し、
マーカーとして微ａ測定が可能な、放射性同位元素、酵
素、蛍光物質などを用いたイムノアッセイが使用されて
いる。これらの方法において、抗原又は抗体を抗原抗体
反応を利用して分Ｐｉる操作は重要であり、この操作は
手動化および自動化によって行われている。特にザンド
ウイッヂ法による分離操作の場合は洗浄の操作があるた
めに抗原又は抗体の固°定化物を取り扱い易いようにプ
レート、球状ディスクなどの形状のものが開発され れている。従って、抗原又は抗体の固定化物の球状は手
動化の場合、プレート又はディスク状が好んで用いられ
る。一般に、これらプレート、ディスク、ビーズには抗
体又は抗原の非特異吸着を利用した固定化、化学反応に
にる固定化が研究開発されている。
マーカーとして微ａ測定が可能な、放射性同位元素、酵
素、蛍光物質などを用いたイムノアッセイが使用されて
いる。これらの方法において、抗原又は抗体を抗原抗体
反応を利用して分Ｐｉる操作は重要であり、この操作は
手動化および自動化によって行われている。特にザンド
ウイッヂ法による分離操作の場合は洗浄の操作があるた
めに抗原又は抗体の固°定化物を取り扱い易いようにプ
レート、球状ディスクなどの形状のものが開発され れている。従って、抗原又は抗体の固定化物の球状は手
動化の場合、プレート又はディスク状が好んで用いられ
る。一般に、これらプレート、ディスク、ビーズには抗
体又は抗原の非特異吸着を利用した固定化、化学反応に
にる固定化が研究開発されている。
［発明が解決しようとする問題点］
非特異吸着による固定化では結合力が弱いため、脱離が
生じる問題があるため、現在はリンパ球（Ｔセル、Ｂセ
ル）の分離などによる臨床検査に利用されている。従っ
て、触媒を用いた化学結合法が主に開発され市販されて
いるものが多い。化学結合性による固定化では、抗体な
どの固定化操作において多くの抗体を使い固定化収率が
悪いという問題がある。これに対し、本発明者らが開発
した低温放射線重合による固定化法は固定化効率が良い
ということと種々の形状に抗体を失活させることなく固
定できるという特長がある。現在までに本発明者らはビ
ーズ状、コーティング法による薄膜状のイムノアッセイ
のたーめの固定化法を開発してきた。しかし、薄膜状固
定化物においては抗体が担体の表面に固定化されている
のが理想的であるが、抗体と単量体水溶液を担体の表面
に塗布するコーティング法では単量体によって抗体の一
部が覆われることがあり、十分な抗体活性を発現させる
ことができない問題点があることが判明した。
生じる問題があるため、現在はリンパ球（Ｔセル、Ｂセ
ル）の分離などによる臨床検査に利用されている。従っ
て、触媒を用いた化学結合法が主に開発され市販されて
いるものが多い。化学結合性による固定化では、抗体な
どの固定化操作において多くの抗体を使い固定化収率が
悪いという問題がある。これに対し、本発明者らが開発
した低温放射線重合による固定化法は固定化効率が良い
ということと種々の形状に抗体を失活させることなく固
定できるという特長がある。現在までに本発明者らはビ
ーズ状、コーティング法による薄膜状のイムノアッセイ
のたーめの固定化法を開発してきた。しかし、薄膜状固
定化物においては抗体が担体の表面に固定化されている
のが理想的であるが、抗体と単量体水溶液を担体の表面
に塗布するコーティング法では単量体によって抗体の一
部が覆われることがあり、十分な抗体活性を発現させる
ことができない問題点があることが判明した。
［問題点を解決するための手段］
そこで、本発明者らは検討を重ねた結果、多孔性薄膜状
４ｓ体に抗体を含む親水性単量体を含浸させ、それを重
ねた層状複合体を照射車台によってつくり、小合俊、こ
れをはがすことにより抗体が表面に露出した固定化物を
製造するという新しい方法を発明することができた。
４ｓ体に抗体を含む親水性単量体を含浸させ、それを重
ねた層状複合体を照射車台によってつくり、小合俊、こ
れをはがすことにより抗体が表面に露出した固定化物を
製造するという新しい方法を発明することができた。
［作 用］
すなわち、本発明は紙、繊維織布などの表面積の大きい
担体を用い、これを１重にも重ねたちのに抗体又は抗原
などを溶かしたビニール単量体溶液を担体の表面が少し
被覆される程度に含浸させて低温下で放則線重合さける
。この状態では抗体又は抗原が表面にも露出しているも
のもあるが担体の表面部の高分子膜の中に埋っているも
のが多い。そのため、重ねて３重合させた層状重合体を
担体の一枚づつにはがす操作をする、この操作は担体の
表面部の高分子膜（繊維同志を接着している）を剥離さ
せることになる、それによって高分子膜中の抗体が表面
に露出される。このように、本発明のポイントは層状担
体を重ねて重合させ、それをはがすことによる抗体の表
面露出固定化にある。
担体を用い、これを１重にも重ねたちのに抗体又は抗原
などを溶かしたビニール単量体溶液を担体の表面が少し
被覆される程度に含浸させて低温下で放則線重合さける
。この状態では抗体又は抗原が表面にも露出しているも
のもあるが担体の表面部の高分子膜の中に埋っているも
のが多い。そのため、重ねて３重合させた層状重合体を
担体の一枚づつにはがす操作をする、この操作は担体の
表面部の高分子膜（繊維同志を接着している）を剥離さ
せることになる、それによって高分子膜中の抗体が表面
に露出される。このように、本発明のポイントは層状担
体を重ねて重合させ、それをはがすことによる抗体の表
面露出固定化にある。
本発明において、用いられる多孔性担体は紙、綿布など
のセルロース博識１１を織布、合成繊ＭＨ布、不織布、
高分子膜等がある。単量体としてはヒドロキシニブルメ
タクリレート、ヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロ
キシプロピルメタクリレート、ビニールピロリドン、ア
クリルアミドなどのメタクリレート、アクリレートなど
を含む親水性ビニール単ｍ体を主成分とするが、これら
親水性ビニール単量体にジエチレングリコールジアクリ
レート、ジエチレングリコールジメタクリレート、トリ
メチロールトリアクリレート、グリシジルメタクリレー
トなどのジアクリレート、ジメタクリレート、トリアク
リレート、トリメタクリレート、などの疎水性ビニール
単量体を少量添加し共重合させることにより固定化物の
固定化効率を増大させることができる。これらの単量体
は水に溶かした水溶液（５〜８０％）として用いる。固
定化に用いる生物活性体はいろいろなタンパク質の抗体
、モノクロナール抗体、および抗原、ホルモン、微生物
、寄生虫などがある。照射温度は室温から低温まで可能
であるが、低温度（０〜−１００℃）が好ましい。放射
線はα線、電子線、Ｘ線、γ線などであり線昂は１０５
〜５ Ｘ １０６ ｒａｄの範囲が適当である。
のセルロース博識１１を織布、合成繊ＭＨ布、不織布、
高分子膜等がある。単量体としてはヒドロキシニブルメ
タクリレート、ヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロ
キシプロピルメタクリレート、ビニールピロリドン、ア
クリルアミドなどのメタクリレート、アクリレートなど
を含む親水性ビニール単ｍ体を主成分とするが、これら
親水性ビニール単量体にジエチレングリコールジアクリ
レート、ジエチレングリコールジメタクリレート、トリ
メチロールトリアクリレート、グリシジルメタクリレー
トなどのジアクリレート、ジメタクリレート、トリアク
リレート、トリメタクリレート、などの疎水性ビニール
単量体を少量添加し共重合させることにより固定化物の
固定化効率を増大させることができる。これらの単量体
は水に溶かした水溶液（５〜８０％）として用いる。固
定化に用いる生物活性体はいろいろなタンパク質の抗体
、モノクロナール抗体、および抗原、ホルモン、微生物
、寄生虫などがある。照射温度は室温から低温まで可能
であるが、低温度（０〜−１００℃）が好ましい。放射
線はα線、電子線、Ｘ線、γ線などであり線昂は１０５
〜５ Ｘ １０６ ｒａｄの範囲が適当である。
［実施例］
以下に、本発明を実施例によって説明する。
実施例 （１）
抗α−フェトプロティン１ ｘ １０−３部、ヒト血清
を含むリン酸緩衝液（０，０５Ｍ ） ５０部、とドロ
キシエチルメタクリレート５０部を混合したｂのを２４
ｃｃ。
を含むリン酸緩衝液（０，０５Ｍ ） ５０部、とドロ
キシエチルメタクリレート５０部を混合したｂのを２４
ｃｃ。
口紙（１１ｃａ＋φ）を１０枚ｍねたものに含浸吸収さ
せる。これをＮ２ガス雰囲気にした容器に入れ一７８℃
に冷却してコバルト６０からのγ線を照用（ｌ ｘ １
０６ ｒａｄ）した。月割後、各々の口紙を一枚づつは
がして、凍結乾燥を行った。ついで、これを５ ｍｍφ
の大きさに切り出してディスク状固定化物どした。つい
で、あらかじめ希釈して調整したα−フェトプロティン
標準液（５、２０，８０，２００。
せる。これをＮ２ガス雰囲気にした容器に入れ一７８℃
に冷却してコバルト６０からのγ線を照用（ｌ ｘ １
０６ ｒａｄ）した。月割後、各々の口紙を一枚づつは
がして、凍結乾燥を行った。ついで、これを５ ｍｍφ
の大きさに切り出してディスク状固定化物どした。つい
で、あらかじめ希釈して調整したα−フェトプロティン
標準液（５、２０，８０，２００。
３００ｎ（１／ｄ）をそれぞれ０．１ｄを試験管にとり
、これにディスクを１枚づつ入れ、２５℃で１時間反応
させた。反応後、ディスクを２回洗浄し、ついでパーオ
キシダーゼで標識した抗α−フェトプロティン（０，２
ｍ）と３７℃で１時間反応させた。反応後リン酸Ｍ ｔ
ｔＥ液で２回洗浄した。次に過酸化水素０．１％と０−
フェニレンジアミン塩酸塩６％との混合液にディスクを
入れ２５℃で３０分間反応させた１景１ Ｎ塩ｌＳｍ
（３ｄ＞で反応を停止させ比色分析を行った。これによ
りα−フェトプロティンの検ｍ線を作成した結果５％以
下の誤差内で良い直線性のある検量線がえられた。肝癌
の患者の血清中のα−）上ドブロチインの濃度をこの検
量線を用い前述の方法により測定した結果４５０ｍ９／
ｍＲと求められた。
、これにディスクを１枚づつ入れ、２５℃で１時間反応
させた。反応後、ディスクを２回洗浄し、ついでパーオ
キシダーゼで標識した抗α−フェトプロティン（０，２
ｍ）と３７℃で１時間反応させた。反応後リン酸Ｍ ｔ
ｔＥ液で２回洗浄した。次に過酸化水素０．１％と０−
フェニレンジアミン塩酸塩６％との混合液にディスクを
入れ２５℃で３０分間反応させた１景１ Ｎ塩ｌＳｍ
（３ｄ＞で反応を停止させ比色分析を行った。これによ
りα−フェトプロティンの検ｍ線を作成した結果５％以
下の誤差内で良い直線性のある検量線がえられた。肝癌
の患者の血清中のα−）上ドブロチインの濃度をこの検
量線を用い前述の方法により測定した結果４５０ｍ９／
ｍＲと求められた。
実施例 （２）
抗癌胎児性抗原（抗ＣＥへ）１Ｘ１０’部、牛アルブミ
ンを含むＩリンｌ！ｉ緩衝液（０，１Ｍ ） ４０部、
ヒドロキシプロピルメタクリレート６０部を混合し、こ
れを２２ＣＣ，合成紙（１１ｃｍφ）を１０枚重ねたも
のに含浸吸収させた。これをＮ２ガス雰囲気にした容器
に入れ、−７８℃に全体を冷却してγ線照射（１×１０
０ ｒａｄ）シた。照射後、実施例（１）と同じ操作に
よってディスク状固定化物を調整した。このようにして
得られたディスクを用い、５ｎ（］／ｄ〜３００ｎｇ／
雇の濃度範囲のＣＥＡの検量線を作成し、良い直線性が
得られた。肺癌の患者の血清中のＣ［への濃度をこの検
ｍ線を用い測定した結果１４０ｎ（１／ａｍ２と求める
ことができた。
ンを含むＩリンｌ！ｉ緩衝液（０，１Ｍ ） ４０部、
ヒドロキシプロピルメタクリレート６０部を混合し、こ
れを２２ＣＣ，合成紙（１１ｃｍφ）を１０枚重ねたも
のに含浸吸収させた。これをＮ２ガス雰囲気にした容器
に入れ、−７８℃に全体を冷却してγ線照射（１×１０
０ ｒａｄ）シた。照射後、実施例（１）と同じ操作に
よってディスク状固定化物を調整した。このようにして
得られたディスクを用い、５ｎ（］／ｄ〜３００ｎｇ／
雇の濃度範囲のＣＥＡの検量線を作成し、良い直線性が
得られた。肺癌の患者の血清中のＣ［への濃度をこの検
ｍ線を用い測定した結果１４０ｎ（１／ａｍ２と求める
ことができた。
［発明の効果］
本発明においては、重合性単量体を放射線照射によって
重合する際に、生物活性体を層状担体に固定化した後に
、この層状担体を剥離するので、重合高分子膜中に埋設
された生物活性体が表面に露出することになり、生物活
性体の表面露出率が増大する。
重合する際に、生物活性体を層状担体に固定化した後に
、この層状担体を剥離するので、重合高分子膜中に埋設
された生物活性体が表面に露出することになり、生物活
性体の表面露出率が増大する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）抗原、抗体などの生物活性体、重合性単量体および
多孔性担体からなる層状複合物に電離性放射線を照射し
て重合処理した後に前記層状複合物を剥離して得られる
薄膜状固定化ディスクの製造方法。 ２）使用する多孔性担体はセルロース性織布、合成繊維
織布、などの薄膜状多孔体である特許請求の範囲第１項
記載の薄膜状固定化ディスクの製造方法。 ３）電離性放射線の照射温度は０〜１００℃の低温で行
う特許請求の範囲第１項に記載の薄膜状固定化ディスク
の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP477686A JPS62162964A (ja) | 1986-01-13 | 1986-01-13 | 臨床測定用の生物活性体固定化デイスクの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP477686A JPS62162964A (ja) | 1986-01-13 | 1986-01-13 | 臨床測定用の生物活性体固定化デイスクの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62162964A true JPS62162964A (ja) | 1987-07-18 |
Family
ID=11593234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP477686A Pending JPS62162964A (ja) | 1986-01-13 | 1986-01-13 | 臨床測定用の生物活性体固定化デイスクの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62162964A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01202663A (ja) * | 1987-12-18 | 1989-08-15 | Eastman Kodak Co | 固定化したビオチン化受容体を用いるリガンド測定のための試験装置，キットおよび方法 |
-
1986
- 1986-01-13 JP JP477686A patent/JPS62162964A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01202663A (ja) * | 1987-12-18 | 1989-08-15 | Eastman Kodak Co | 固定化したビオチン化受容体を用いるリガンド測定のための試験装置，キットおよび方法 |
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