JPS6215463A - イムノアツセイにおいて利用される抗体 - Google Patents
イムノアツセイにおいて利用される抗体Info
- Publication number
- JPS6215463A JPS6215463A JP15490685A JP15490685A JPS6215463A JP S6215463 A JPS6215463 A JP S6215463A JP 15490685 A JP15490685 A JP 15490685A JP 15490685 A JP15490685 A JP 15490685A JP S6215463 A JPS6215463 A JP S6215463A
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- Japan
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- antibody
- ige
- igg
- iga
- igd
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- Pending
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は酵素免疫測定法、ラジオイムノアッセイ、間接
凝集反応などにおいて抗原又は抗体の測定に使用される
抗体に関するものである。
凝集反応などにおいて抗原又は抗体の測定に使用される
抗体に関するものである。
イムノアッセイにおいて、抗原を測定する場合にはこの
抗原に対する抗体が利用されており、抗体を測定する場
合にも抗原に対して当該抗体と抑制反応させるために抗
体が利用される。
抗原に対する抗体が利用されており、抗体を測定する場
合にも抗原に対して当該抗体と抑制反応させるために抗
体が利用される。
温血動物尋に免疫して得られる免疫グロブリンの大部分
がＩｇＧであるところから従来この抗体には専らＩｇＧ
が用いられており、ＩｇＭが用いられた例は知られてい
るがその他の免疫グロブリンを用いた例は々い。
がＩｇＧであるところから従来この抗体には専らＩｇＧ
が用いられており、ＩｇＭが用いられた例は知られてい
るがその他の免疫グロブリンを用いた例は々い。
イムノアッセイにおいては一般に非特異反応を生じて測
定対象物が存在しないにもかかわらず陽性にあられれて
しまうことがある。そこで、この非特異反応が起こらな
いようにする手段が種々研究され、免疫動物と同種動物
の血清あるいは、変性ＩｇＧなどが非特異反応吸収剤と
して利用されている。
定対象物が存在しないにもかかわらず陽性にあられれて
しまうことがある。そこで、この非特異反応が起こらな
いようにする手段が種々研究され、免疫動物と同種動物
の血清あるいは、変性ＩｇＧなどが非特異反応吸収剤と
して利用されている。
しかしながら、非特異反応を起こらなくするよシ簡便な
手段の開発が望まれていた。 ４〔問題点を解決す
るための手段〕 本発明はこのような問題点を解決するべくなされたもの
であり、抗体としてＩｇＡ 、 ＩｇＥ又はＩｇＤを用
いれば非特異反応がほとんど起こらないという知見に基
いている。
手段の開発が望まれていた。 ４〔問題点を解決す
るための手段〕 本発明はこのような問題点を解決するべくなされたもの
であり、抗体としてＩｇＡ 、 ＩｇＥ又はＩｇＤを用
いれば非特異反応がほとんど起こらないという知見に基
いている。
す々わち、本発明は、測定対象物と直接反応しあるいは
抑制反応する、ＩｇＡ 、 ＩｇＥ又はＩｇＤより彦る
イムノアッセイにおいて利用される抗体に関するもので
ある。
抑制反応する、ＩｇＡ 、 ＩｇＥ又はＩｇＤより彦る
イムノアッセイにおいて利用される抗体に関するもので
ある。
ＩｇＡ 、 ＩｇＥ及びＩｇＤは測定対象が抗原の場合
には尚該抗原の抗体であり、測定対象が抗体の場合には
、測定対象の抗体とともに同一の抗原に対して抑制反応
しうるものである。測定系においてはイムノアッセイの
種類に応じ異なる抗体を組みあわせて使用することがあ
るがこれらの抗体にもＩｇＡ 、 ＩｇＥ又はＩｇＤを
用いなければなら々い。またこれらの抗体にＩｇＧを用
いる場合は、これを酵素処理し、Ｆａｂ、あるいはＦ（
ａｂす２にして使用する必要があるＩｇＡ 、 ＩｇＥ
及びＩｇＤは単独で用いてもよく、併用することもでき
る。
には尚該抗原の抗体であり、測定対象が抗体の場合には
、測定対象の抗体とともに同一の抗原に対して抑制反応
しうるものである。測定系においてはイムノアッセイの
種類に応じ異なる抗体を組みあわせて使用することがあ
るがこれらの抗体にもＩｇＡ 、 ＩｇＥ又はＩｇＤを
用いなければなら々い。またこれらの抗体にＩｇＧを用
いる場合は、これを酵素処理し、Ｆａｂ、あるいはＦ（
ａｂす２にして使用する必要があるＩｇＡ 、 ＩｇＥ
及びＩｇＤは単独で用いてもよく、併用することもでき
る。
これらの抗体は常法により取得することができる。しか
しながら、旧来のポリクローナル抗体の場合にはＩｇＧ
に対してこれらの産生量が少々いためコスト高になるば
かりでなく、分離精製工程が煩雑になりその間の変性も
問題になる。一方、モノクローナル抗体はハイブリドー
マ式え確立すれば容易に純度の高いＩｇＡ 、 ＩｇＥ
又はＩｇＤが得られるのでモノクローナル抗体を用いる
ことが好ましい。モノクローナル抗体は常法によシ取得
すればよく、例えばマウスに抗原をアジュバントととも
に数回腹腔等に注射し、肺臓細胞を取り出してポリエチ
レングリコール等ヲ用いてマウスミエローマ細胞と融合
させる。そして、この融合細胞の々かから当該抗体を産
生ずるものをクローニングによってモノクローン細胞と
して増殖させ、マウス腹腔中で増殖させることによって
単一抗体、す々わちモノクローナル抗体を大量に製造す
ることができる。
しながら、旧来のポリクローナル抗体の場合にはＩｇＧ
に対してこれらの産生量が少々いためコスト高になるば
かりでなく、分離精製工程が煩雑になりその間の変性も
問題になる。一方、モノクローナル抗体はハイブリドー
マ式え確立すれば容易に純度の高いＩｇＡ 、 ＩｇＥ
又はＩｇＤが得られるのでモノクローナル抗体を用いる
ことが好ましい。モノクローナル抗体は常法によシ取得
すればよく、例えばマウスに抗原をアジュバントととも
に数回腹腔等に注射し、肺臓細胞を取り出してポリエチ
レングリコール等ヲ用いてマウスミエローマ細胞と融合
させる。そして、この融合細胞の々かから当該抗体を産
生ずるものをクローニングによってモノクローン細胞と
して増殖させ、マウス腹腔中で増殖させることによって
単一抗体、す々わちモノクローナル抗体を大量に製造す
ることができる。
ＩｇＡ 、 ＩｇＥ及びＩｇＤの使用方法は従来のＩｇ
Ｇと同様でよく、使用量あるいは担体等への結合方法も
従来と同様でよい。
Ｇと同様でよく、使用量あるいは担体等への結合方法も
従来と同様でよい。
このようが抗体を用いた測定キットは非特異反応吸収剤
が不要に彦るかあるいはその量を大巾に節減できる点で
従来のキットと大きく異々る。
が不要に彦るかあるいはその量を大巾に節減できる点で
従来のキットと大きく異々る。
ＩｇＧ Ｋ ＦｉＦｉｂフラクシ、ンとＦｃフラクシ、
ンが存在し、このＦａフラクシ、ンにリューマチ因子々
どの非特異反応原因の因子が結合して非特異反応をひき
起こしているものと考えられている。これに対してＩｇ
Ａ 、 ＩｇＥ及びＩｇＤのＦａフラクションにはリュ
ーマチ因子等が結合せず、非特異反応を生じ１〜従って
、本発明においてはＩｇＧを使用し々いところに特徴が
あり、免疫グロブリンの混合物を利用する場合にもＩｇ
Ｇは極力除去してから使用する。
ンが存在し、このＦａフラクシ、ンにリューマチ因子々
どの非特異反応原因の因子が結合して非特異反応をひき
起こしているものと考えられている。これに対してＩｇ
Ａ 、 ＩｇＥ及びＩｇＤのＦａフラクションにはリュ
ーマチ因子等が結合せず、非特異反応を生じ１〜従って
、本発明においてはＩｇＧを使用し々いところに特徴が
あり、免疫グロブリンの混合物を利用する場合にもＩｇ
Ｇは極力除去してから使用する。
実施例１
公知の細胞融合法によシヒ）ＩｇＥｆｒマウスに免疫し
、得られたリンノ譬球と腫瘍細胞とをポリエチレングリ
コール等で細胞融合して抗ヒトＩｇＥマウスＩｇＡモノ
クローナル抗体を産生ずるハイブリドーマを得た。
、得られたリンノ譬球と腫瘍細胞とをポリエチレングリ
コール等で細胞融合して抗ヒトＩｇＥマウスＩｇＡモノ
クローナル抗体を産生ずるハイブリドーマを得た。
このハイブリドーマをマウス腹腔内で増殖させて常法に
より抗ヒトＩｇＥマウスＩｇＡモノクローナル抗体を取
得し、これをタンニン酸法でニワトリ赤血球に感作して
抗ヒトＩｇＥマウスＩｇＡモノクローナル抗体感作血球
を作製した。
より抗ヒトＩｇＥマウスＩｇＡモノクローナル抗体を取
得し、これをタンニン酸法でニワトリ赤血球に感作して
抗ヒトＩｇＥマウスＩｇＡモノクローナル抗体感作血球
を作製した。
この感作血球を用いてリューマチ患者血清のヒ） Ｉｇ
Ｅを測定した。希釈用液には下記の組成のものを用い、
希釈操作は下記の手順で行かつた。
Ｅを測定した。希釈用液には下記の組成のものを用い、
希釈操作は下記の手順で行かつた。
希釈用液
リン酸２ナトリウム１２水塩 １９．２０５３
ＩＩリン酸１カリウム ２．９０８９
ＩＩＮａＣｔ ４．３８３
ｊ’健康家兎血清 １０１ ＮａＮｓ
１．５１蒸留水 １０
００ Ｉ１１希釈操作 希釈操作後室源にて３０分間放置した。
ＩＩリン酸１カリウム ２．９０８９
ＩＩＮａＣｔ ４．３８３
ｊ’健康家兎血清 １０１ ＮａＮｓ
１．５１蒸留水 １０
００ Ｉ１１希釈操作 希釈操作後室源にて３０分間放置した。
前述の感作血球に希釈用液を加えて０．６％セル濃度に
浮遊させ、これを２５μｔづつ各ウェルに入れた。振盪
攪拌後室源で１時間半静置し凝集像を判定し九。
浮遊させ、これを２５μｔづつ各ウェルに入れた。振盪
攪拌後室源で１時間半静置し凝集像を判定し九。
結果を下表に示す。
使用した被検血清についてリューマチ価及び他方でＩｇ
Ｅ濃度を測定し九結果を下表に示す。
Ｅ濃度を測定し九結果を下表に示す。
ＡＩ ＋ 廿 廿 廿 廿 廿 十
−一一一一扁２ 廿 廿 丑 廿 廿 廿
士 −−一−−慮３ 廿 廿 廿 廿 廿
＋−一−−−−Ａ４ 廿 廿 廿 廿 十
−ｍ−−−−−Ａ５ ＋ 丑 廿 廿 廿
廿 十 −一−−−Ａ６ 丑 廿 廿
廿 廿 廿 廿 十 −−一−この様にＲＡ
）ＩＡ価の高いり、−マチ血清に対してもＩｇＥの値は
ＲＩＡ値と高い相関を示した。
−一一一一扁２ 廿 廿 丑 廿 廿 廿
士 −−一−−慮３ 廿 廿 廿 廿 廿
＋−一−−−−Ａ４ 廿 廿 廿 廿 十
−ｍ−−−−−Ａ５ ＋ 丑 廿 廿 廿
廿 十 −一−−−Ａ６ 丑 廿 廿
廿 廿 廿 廿 十 −−一−この様にＲＡ
）ＩＡ価の高いり、−マチ血清に対してもＩｇＥの値は
ＲＩＡ値と高い相関を示した。
実施例２
リューマチ患者血清について１ステツプサントイ、チＥ
ＩＡ法でヒトＩｇＥを測定した。
ＩＡ法でヒトＩｇＥを測定した。
表面を界面活性剤で洗浄したポリスチレンビーズを実施
例１で得られた抗ヒ） ＩｇＥマウスＩｇＡモノクロー
ナル抗体０．０１５ｍｇ／ａｄを含むｐＨ６，５の緩衝
液に一夜浸漬して抗体を吸着させた。
例１で得られた抗ヒ） ＩｇＥマウスＩｇＡモノクロー
ナル抗体０．０１５ｍｇ／ａｄを含むｐＨ６，５の緩衝
液に一夜浸漬して抗体を吸着させた。
抗ヒトＩｇＥマウスＩｇＧ抗体を酵素消化によりＦａｂ
’７ラグメントに分解してこれを分離取得した。
’７ラグメントに分解してこれを分離取得した。
このフラグメントをＩｓｈｉｋａｗａらの方法によりマ
レイミド基を導入したペルオキシダーゼと結合させ酵素
標識抗体を作製した。
レイミド基を導入したペルオキシダーゼと結合させ酵素
標識抗体を作製した。
被検血清２０μｌに５０ ｎＩＩ／−酵素標識抗体５０
０μ！及び抗体不溶化ビーズ１個を加え、３７℃で１時
間反応させた。ビーズを生理食塩水２−で３回洗浄して
から、発色剤として２，２′−アジノビス（３−ニチル
ベンゾチアゾリン−６−スルホン酸を含みかつ０．００
３４％過酸化水素を含むリン酸−クエン酸緩衝液（−４
，５）２ｇｔを加えて３７℃で３０分間インキュベート
した。０．６５ ％シ、つ酸２−を加えて反応を停止さ
せ、４２０ ｎｍにおける吸光度を測定し、これを検量
線と照合してヒ） ＩｇＥ濃度を求めた。
０μ！及び抗体不溶化ビーズ１個を加え、３７℃で１時
間反応させた。ビーズを生理食塩水２−で３回洗浄して
から、発色剤として２，２′−アジノビス（３−ニチル
ベンゾチアゾリン−６−スルホン酸を含みかつ０．００
３４％過酸化水素を含むリン酸−クエン酸緩衝液（−４
，５）２ｇｔを加えて３７℃で３０分間インキュベート
した。０．６５ ％シ、つ酸２−を加えて反応を停止さ
せ、４２０ ｎｍにおける吸光度を測定し、これを検量
線と照合してヒ） ＩｇＥ濃度を求めた。
得られた結果を下記に示す。
ｌ ＮＤ ａ十２
３＋ ３ ２十 ４ １９５ ３＋ ５ ＮＤ ２＋ ６ ７１ ３＋ ７ ７２０ １＋ ８３９ ３＋ ９ ２９０ ３十ＩＱ
１１００ − １１ ＮＤ
−１２１４５３＋ １３ １２００ ３＋ １４ ２６２ ３＋ １５ １８０ ３十実施例３ リューマチ患者血清について１ステツゾザンドイツチＥ
ＩＡ法でヒ） ＩｇＥを測定し、その際非特異反応吸収
剤としてマウスＩｇＧ （Ｍ２９Ｈ６）を加えたもの及
び加えなかったものを比較した。
３＋ ３ ２十 ４ １９５ ３＋ ５ ＮＤ ２＋ ６ ７１ ３＋ ７ ７２０ １＋ ８３９ ３＋ ９ ２９０ ３十ＩＱ
１１００ − １１ ＮＤ
−１２１４５３＋ １３ １２００ ３＋ １４ ２６２ ３＋ １５ １８０ ３十実施例３ リューマチ患者血清について１ステツゾザンドイツチＥ
ＩＡ法でヒ） ＩｇＥを測定し、その際非特異反応吸収
剤としてマウスＩｇＧ （Ｍ２９Ｈ６）を加えたもの及
び加えなかったものを比較した。
測定方法はすべて実施例２と同様に行ない、マウスｘｇ
ａ（Ｍｚｃ＋ｎ６）は反応溶液中に０．０１５■／−を
加えた。
ａ（Ｍｚｃ＋ｎ６）は反応溶液中に０．０１５■／−を
加えた。
得られた結果を下表に示す。
実施例４
実施例３において比較的差のあった血清についてマウス
ＩｇＧの種類と量を変えて、実施例２と同様の方法でヒ
トＩｇＥｌｉ１度を測定した。
ＩｇＧの種類と量を変えて、実施例２と同様の方法でヒ
トＩｇＥｌｉ１度を測定した。
得られた結果を下表に示す。
実施例５
実施例４で用いた２つの被検血清及び健常人１血清につ
いて、希釈倍率を変えて実施例２と同様の方法でヒ）Ｉ
ｇｌ漉度を測定した。反応溶液にはマウスＩ ｇＧ （
４Ｈ４Ｃ３） ０． Ｉ Ｗ／ｍｌを加えたものと加え
ないものとを比較した。
いて、希釈倍率を変えて実施例２と同様の方法でヒ）Ｉ
ｇｌ漉度を測定した。反応溶液にはマウスＩ ｇＧ （
４Ｈ４Ｃ３） ０． Ｉ Ｗ／ｍｌを加えたものと加え
ないものとを比較した。
得られた結果を第１図に示すが、同図に示すようにマウ
スＩｇＧ添加の有無によらず希釈倍率との間によい直線
関係が得られた。
スＩｇＧ添加の有無によらず希釈倍率との間によい直線
関係が得られた。
本発明の抗体を利用することにより非特異反♂をなくす
ことができ、その結果分析精度を高めるとともに非特異
反応吸収剤も不要になる。このような本発明はＩｇＡ、
ＩｇＥ及びＩｇＤのような少攪免疫グロブリンを高純度
で量産できるモノクローナル抗体の手法の開発により実
施が容易になるものである。
ことができ、その結果分析精度を高めるとともに非特異
反応吸収剤も不要になる。このような本発明はＩｇＡ、
ＩｇＥ及びＩｇＤのような少攪免疫グロブリンを高純度
で量産できるモノクローナル抗体の手法の開発により実
施が容易になるものである。
第１図は被検血清の希釈倍率とＴｇｌ濃度を測定した結
果との関係を示すものである。
果との関係を示すものである。
Claims (1)
- 測定対象物と直接反応しあるいは抑制反応させる、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＥ又はＩｇＤよりなるイムノアッセイにおいて
利用される抗体
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15490685A JPS6215463A (ja) | 1985-07-13 | 1985-07-13 | イムノアツセイにおいて利用される抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15490685A JPS6215463A (ja) | 1985-07-13 | 1985-07-13 | イムノアツセイにおいて利用される抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6215463A true JPS6215463A (ja) | 1987-01-23 |
Family
ID=15594543
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15490685A Pending JPS6215463A (ja) | 1985-07-13 | 1985-07-13 | イムノアツセイにおいて利用される抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6215463A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6447951A (en) * | 1987-06-25 | 1989-02-22 | Fisher Scientific Co | Immunoassay method and kit for hapten detection by agglutination |
-
1985
- 1985-07-13 JP JP15490685A patent/JPS6215463A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6447951A (en) * | 1987-06-25 | 1989-02-22 | Fisher Scientific Co | Immunoassay method and kit for hapten detection by agglutination |
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