JPS6214797A - ドリグリセライドの定量方法 - Google Patents
ドリグリセライドの定量方法Info
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- JPS6214797A JPS6214797A JP15135085A JP15135085A JPS6214797A JP S6214797 A JPS6214797 A JP S6214797A JP 15135085 A JP15135085 A JP 15135085A JP 15135085 A JP15135085 A JP 15135085A JP S6214797 A JPS6214797 A JP S6214797A
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- triglyceride
- nadh
- atp
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はピルビン酸を反応生成物とするトリグリセラ・
Ｃドの定量方法に関するものである。
Ｃドの定量方法に関するものである。
一般に、血液などの検体中のトリグリセライドを測定す
るには最終段階でピルビン酸を生成させ、生成したピル
ビン酸をＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）によって乳酸に変換
し、この際ＮＡＤＨ−）ＮＡＤ＋の共役反応によって減
少するＮＡＤｌｌの量を３４０ｎｍで測定し定量してい
た。
るには最終段階でピルビン酸を生成させ、生成したピル
ビン酸をＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）によって乳酸に変換
し、この際ＮＡＤＨ−）ＮＡＤ＋の共役反応によって減
少するＮＡＤｌｌの量を３４０ｎｍで測定し定量してい
た。
しかし、この反応系では必ずピルビン酸を生成するため
に、そもそも検体中に存在するピルビン酸や遊離のグリ
セロールが測定値に含まれてしまって、正確な定量を困
難にしていた。
に、そもそも検体中に存在するピルビン酸や遊離のグリ
セロールが測定値に含まれてしまって、正確な定量を困
難にしていた。
そこで、検体中に存在するピルビン酸や遊離のグリセロ
ールを前処理で、ＬＤＨによって乳酸に変換させてしま
えば問題はなくなるのである。しかしながらＮＡＤ＋→
ＮＡＤＨの逆反応でＮＡＤＨに戻す必要があり、この際
イソクエン酸を基質としてｉＣＤＨ（インクエン酸脱水
素酵素）とマグネシウムイオン又はマンガンイオンなど
の金属イオンによって共役反応を生起させることができ
る。この反応系は、次の式（夏）に示される。
ールを前処理で、ＬＤＨによって乳酸に変換させてしま
えば問題はなくなるのである。しかしながらＮＡＤ＋→
ＮＡＤＨの逆反応でＮＡＤＨに戻す必要があり、この際
イソクエン酸を基質としてｉＣＤＨ（インクエン酸脱水
素酵素）とマグネシウムイオン又はマンガンイオンなど
の金属イオンによって共役反応を生起させることができ
る。この反応系は、次の式（夏）に示される。
トリグリセライド
式（１）に示されるように、検体中の遊離のピルビン酸
やグリセロールの消費とトリグリセライドからもたらさ
れたピルビン酸の測定は同じ共役反応によって行うこと
ができるのであるが、検体中のピルビン酸や遊離グリセ
ロールの消費が完了し、ＮＡＤ＋→ＮＡＤＨの反応が完
全に停止されてはじめてトリグリセライドからもたらさ
れたピルビン酸の正確な定量が行なえるのである。
やグリセロールの消費とトリグリセライドからもたらさ
れたピルビン酸の測定は同じ共役反応によって行うこと
ができるのであるが、検体中のピルビン酸や遊離グリセ
ロールの消費が完了し、ＮＡＤ＋→ＮＡＤＨの反応が完
全に停止されてはじめてトリグリセライドからもたらさ
れたピルビン酸の正確な定量が行なえるのである。
そこで、問題となるのは、式（１）におけるＮ Ａ Ｄ
ＩＩｇＮＡＤ＋においてＮＡＤ＋→ＮＡＤ１１の反応
をいかにして完全に停止させるかである。従来ＮＡＤ＋
→Ｎ Ａ Ｄ Ｈの反応。
ＩＩｇＮＡＤ＋においてＮＡＤ＋→ＮＡＤ１１の反応
をいかにして完全に停止させるかである。従来ＮＡＤ＋
→Ｎ Ａ Ｄ Ｈの反応。
のみを完全に停止させることは知られていなかった。
本発明者らは、上述の式（１）におけるイソクエン酸→
αＫＧの反応のみを完全に停止させる方法ｃＤＩｌ を求めて鋭意研究したところ、高濃度のＡＴＰの添加に
よって、インクエン酸→ α−ＫＧの反応を完ｉ Ｃｌ
）Ｈ 全に停止させることに成功し、そして、トリグリセライ
ドの正確な測定を可能としたのである。
αＫＧの反応のみを完全に停止させる方法ｃＤＩｌ を求めて鋭意研究したところ、高濃度のＡＴＰの添加に
よって、インクエン酸→ α−ＫＧの反応を完ｉ Ｃｌ
）Ｈ 全に停止させることに成功し、そして、トリグリセライ
ドの正確な測定を可能としたのである。
本発明は、検体にＬＤＩＩ、ＮＡＤＩＩ、ＡＴＰ、 Ｐ
Ｅ［’、グリセロキナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、イン
クエン酸、マグネシウムイオンまたはマンガンイオンな
どの金属イオンおよび１ｃＤＩＩを添加混合し、混合液
中にすでに存在するピルビン酸や遊離のグリセロールを
消費せしめ１次いでさらにＡＴＰを添加し、ｉ ＣＤ
ｌ（反応を停止し、これと同時もしくはしかる後リパー
ゼを添加して、生成するピルビン酸を定量することを特
徴とするトリグリセライドの定祉方法である。
Ｅ［’、グリセロキナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、イン
クエン酸、マグネシウムイオンまたはマンガンイオンな
どの金属イオンおよび１ｃＤＩＩを添加混合し、混合液
中にすでに存在するピルビン酸や遊離のグリセロールを
消費せしめ１次いでさらにＡＴＰを添加し、ｉ ＣＤ
ｌ（反応を停止し、これと同時もしくはしかる後リパー
ゼを添加して、生成するピルビン酸を定量することを特
徴とするトリグリセライドの定祉方法である。
ここで、金属イオンとはマグネシウムイオン、マンガン
イオン、鉄イオン、銅イオン、亜鉛イオン、スズイオン
、カルシウムイオンなどを云うが。
イオン、鉄イオン、銅イオン、亜鉛イオン、スズイオン
、カルシウムイオンなどを云うが。
これらのイオン種に制限されることはない。
α−ＫＧ
↑
ＡＴＰ又Ｉシ及びキレート剤
本発明は高濃度のＡＴＰの添加によって上記式（！■）
→式（［１）への変化を行なわせるものである。
→式（［１）への変化を行なわせるものである。
即ち、検体中のピルビン酸又は／及び遊離のグリセロー
ルの完全消費を式（ｎ）で行わせ、完全消費ののち反応
系にさらにＡＴＰを添加し、ＮＡＤ＋→ＮＡＤＩ＋の反
応を停止させるものである。
ルの完全消費を式（ｎ）で行わせ、完全消費ののち反応
系にさらにＡＴＰを添加し、ＮＡＤ＋→ＮＡＤＩ＋の反
応を停止させるものである。
ｉＣＤＨの反応を停止させた後は、ＡＴＰ又は／及びキ
レ−１〜剤の添加と同時もしくはその後リパーゼを添加
し、生成したピルビン酸から乳酸への共役反応としてＮ
ＡＤＨ→ＮＡＤ＋の反応にともなう３４０ｎｍ吸光度の
減少によって物質を定量するものである。
レ−１〜剤の添加と同時もしくはその後リパーゼを添加
し、生成したピルビン酸から乳酸への共役反応としてＮ
ＡＤＨ→ＮＡＤ＋の反応にともなう３４０ｎｍ吸光度の
減少によって物質を定量するものである。
トリグリセライドからピルビン酸を生成せしめる反応は
次の式（ＩＶ ）に示される。
次の式（ＩＶ ）に示される。
即ち、リパーゼ、グリセロールキナーゼ、ＡＴＰ。
ＮＡＤＩＩ、ＬＤＨ，ホスホエノールピルビン酸及びピ
ルビン酸キナーゼの添加によってトリグリセライドが測
定できるものである。
ルビン酸キナーゼの添加によってトリグリセライドが測
定できるものである。
本発明においては、検体中のトリグリセライドを分解し
、ＮＡＤＩＩ→ＮＡＤ＋の反応によってＮＡＤ）ｌを消
費して正確な被検物の定量を行うものである。
、ＮＡＤＩＩ→ＮＡＤ＋の反応によってＮＡＤ）ｌを消
費して正確な被検物の定量を行うものである。
本発明において用いる、高濃度のＡＴＰによるｉＣＤＨ
反応の停止は一反応を停止したそのままの媒質でＮＡＤ
Ｈ−＋ＮＡＤ“の反応を用いトリグリセライドの定量が
行える点できわめて有用である。
反応の停止は一反応を停止したそのままの媒質でＮＡＤ
Ｈ−＋ＮＡＤ“の反応を用いトリグリセライドの定量が
行える点できわめて有用である。
反応系に対するＡＴＰの添加量は１５１以上であればよ
い。第１図はｉＣ叶活性におよぼすＡＴＰ濃度の影響を
みた図であるが、 ＡＴＰｅ度が１５ｍＭ以上で１ｃＤ
ｌｌは完全に活性を失っているのが分る。
い。第１図はｉＣ叶活性におよぼすＡＴＰ濃度の影響を
みた図であるが、 ＡＴＰｅ度が１５ｍＭ以上で１ｃＤ
ｌｌは完全に活性を失っているのが分る。
次に本発明の実施例を示す。
実施例ｌ
ＫＣｌ １００ ｍＭＭ
ｇＳＯ４３ｍｇ ＡＴＰ １ ｍＭホス
ホエノールピルビン酸 １ 、５ｍＭインクエン酸
５ ｍＭＮＡＤＩＩ
０．２ｍＭＬＤＩＩ
６ｕ／ｍｌピルビン酸キナーゼ
３０ｕ／ｍｌグリセロキナーゼ ２ｕ
／ｍ１ｉｃＤＨ２ｕ／ｍｌ を含有する０、ＩＭ トリエタノールアミン塩酸（ｐＨ
７，５）２．９ｍｌに５０ｍＭグリセロールを含む様々
な濃度に調整したトリグリセライド（ＴＧ）含有検体（
Ａ ＝ ５０ｍｇ／ｄ１、Ｂ＝１００ｎ＋ｇ／ｄｉ、Ｃ
＝３００ｍｇ／ｄｌ、Ｄ＝５００ｍｇ／ｄｌ、Ｅ＝７５
０ｍｇ／ｄｉ） ２０７ｚｌ添加した。それぞれ３７℃
で１０分間保温した後、ＡＴＰ、リパーゼ濃度がそれぞ
れ２０ｍＭ、５，０００ｕ／ｍｌになるように、 ＡＴ
Ｐ、リパーゼ混液を１００μｍ添加し、分光光度計によ
り３７°Ｃでの３４０ｎｍにおける吸光度の減少を測定
した。
ｇＳＯ４３ｍｇ ＡＴＰ １ ｍＭホス
ホエノールピルビン酸 １ 、５ｍＭインクエン酸
５ ｍＭＮＡＤＩＩ
０．２ｍＭＬＤＩＩ
６ｕ／ｍｌピルビン酸キナーゼ
３０ｕ／ｍｌグリセロキナーゼ ２ｕ
／ｍ１ｉｃＤＨ２ｕ／ｍｌ を含有する０、ＩＭ トリエタノールアミン塩酸（ｐＨ
７，５）２．９ｍｌに５０ｍＭグリセロールを含む様々
な濃度に調整したトリグリセライド（ＴＧ）含有検体（
Ａ ＝ ５０ｍｇ／ｄ１、Ｂ＝１００ｎ＋ｇ／ｄｉ、Ｃ
＝３００ｍｇ／ｄｌ、Ｄ＝５００ｍｇ／ｄｌ、Ｅ＝７５
０ｍｇ／ｄｉ） ２０７ｚｌ添加した。それぞれ３７℃
で１０分間保温した後、ＡＴＰ、リパーゼ濃度がそれぞ
れ２０ｍＭ、５，０００ｕ／ｍｌになるように、 ＡＴ
Ｐ、リパーゼ混液を１００μｍ添加し、分光光度計によ
り３７°Ｃでの３４０ｎｍにおける吸光度の減少を測定
した。
ΔＥ；八＝へ、０２３、Ｂ＝Ｏ，Ｏ／１Ｇ、Ｃ＝０．１
３９、Ｄ＝０．２３５、Ｅ＝０．３５１．であった。
３９、Ｄ＝０．２３５、Ｅ＝０．３５１．であった。
これを次式により計算した結果、検体中にすでに存在し
ていたグリセロールは完全に消去され、引きつづき測定
されるトリグリセライドの定量に影響なく、検体中のト
リグリセライド含址が定量された。
ていたグリセロールは完全に消去され、引きつづき測定
されるトリグリセライドの定量に影響なく、検体中のト
リグリセライド含址が定量された。
トリグリセライド量
ΔＥ ＝ＮＡＤＨの減少による吸光度変化６．２ ＝Ｎ
ＡＤ１１の１ｍＭの吸光度３．０２＝全反応液量（ｍｌ
） ０．０２＝検体量（ｍｌ） ８８５＝トリオレインの分子量
ＡＤ１１の１ｍＭの吸光度３．０２＝全反応液量（ｍｌ
） ０．０２＝検体量（ｍｌ） ８８５＝トリオレインの分子量
第１図はｉＣＤＨ活性におよぼすＡＴＰ濃度の影響をみ
た図である。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 第 １ 図 ＡＴＰ漬度ｍＭ
た図である。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 第 １ 図 ＡＴＰ漬度ｍＭ
Claims (1)
- （１）トリグリセライド含有検体にＬＤＨ、ＮＡＤＨ、
ＡＴＰ、ＰＥＰ、グリセロキナーゼ、ピルビン酸キナー
ゼ、イソクエン酸、マグネシウムイオンまたはマンガン
イオンなどの金属イオンおよびｉＣＤＭを添加混合し、
検体中にすでに存在するグリセロールを消費せしめ、次
いでさらにＡＴＰを添加し、ｉＣＤＨ反応を停止し、こ
れと同時もしくはしかる後リパーゼを添加して、生成す
るピルビン酸を測定することを特徴とするトリグリセラ
イドの定量方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60151350A JPH06102040B2 (ja) | 1985-07-11 | 1985-07-11 | ドリグリセライドの定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60151350A JPH06102040B2 (ja) | 1985-07-11 | 1985-07-11 | ドリグリセライドの定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6214797A true JPS6214797A (ja) | 1987-01-23 |
| JPH06102040B2 JPH06102040B2 (ja) | 1994-12-14 |
Family
ID=15516637
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60151350A Expired - Fee Related JPH06102040B2 (ja) | 1985-07-11 | 1985-07-11 | ドリグリセライドの定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06102040B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6410846B1 (en) | 1998-12-15 | 2002-06-25 | Vanguard Products Corporation | Electromagnetic interference shielding device |
| US6613976B1 (en) | 1998-12-15 | 2003-09-02 | Vanguard Products Corporation | Electromagnetic interference shielding gasket |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61247968A (ja) * | 1985-04-26 | 1986-11-05 | Oriental Yeast Co Ltd | ピルビン酸を反応生成物とする生体物質の定量方法 |
-
1985
- 1985-07-11 JP JP60151350A patent/JPH06102040B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61247968A (ja) * | 1985-04-26 | 1986-11-05 | Oriental Yeast Co Ltd | ピルビン酸を反応生成物とする生体物質の定量方法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6410846B1 (en) | 1998-12-15 | 2002-06-25 | Vanguard Products Corporation | Electromagnetic interference shielding device |
| US6613976B1 (en) | 1998-12-15 | 2003-09-02 | Vanguard Products Corporation | Electromagnetic interference shielding gasket |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06102040B2 (ja) | 1994-12-14 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |