JPS6212795A - 新規なプソラレン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規なプンラレン誘導体に関する。更に詳細に
は、本発明は、４′位の炭素原子上に有機官能性置換基
を有する　４．５′，８−トリメチルプソラレン（一般
にトリオキサレンと呼ばれる］の誘導体に関する。明確
には、該新規なプソラレン誘導体は、一般式 式中、Ｘはたとえばハロゲン化アルキル、アルコール、
エーテル、アミノアルキルなどのような任意の所望とす
る置換基であることができる、 を有する。 本明ｍ譬において用いる「アルキル」なる語は、たとえ
ばメチル、エチル、プロピルなどのような７個までの炭
素原子を有する低級アルキル基を意味することが好まし
く、メチル基が特に好適である。アルコール置換基は１
個もしくはそｎ以上の水酸基を有する脂肪族炭化水素、
たとえばヒドロことか好ましい。 本発明のプソラレン誘導体の特定的な例は次のものであ
る： ４′−クロロメチル−４，５′，８−トリメチループソ
ラレン； ４′−ヒドロキシメチル−４，５′，　　ｇ　−）リメ
チループソラレン； ４′−メトキシメチル−４，５′，８−トリメチループ
ンラレン； ４′−フタルイミドメチル−４ｊ５’−３−）リメチル
ープソラレン： ４′−アミノメチル−４，５′，８−トリメチルーグソ
ラレン塩酸塩。 他の局面において、本発明は、少なくとも１つの結合部
位において共有結合さｔた４　　、５′，　８−トリメ
チルプソラレンの４′−誘導体を有するデオキシ−リボ
核酸またはリボ核酸に関する。 更に他の局面において、本発明は、核＋１２を４゜５′
，８−）リメチループソラレンの４’−誘４体と接触せ
しめることから成る、核酸の応答＜ｆｉ、ｒｅｐＬｉｃ
ａｔｉｏｎ　）の妨害方法に関する。 更に別の局面にあ・いて、本発明は、９イルスを４．５
′，　８−トリメチルプソラレンの４′−誘導体と接触
せしめセしてそｎらを放射エネルギーに暴露するこ、と
から成る、ウィルスの不活性化方法に関する。 プン之１／／頌はフロクマリン（ｆｕτｏｃｏｕｍα−
ｒｉｎ）族の線状異性体であり且つそれらはある種の果
実および種子、たとえばアンミ・マジュス（Ａｍｍ１　
　ｍαｊｕｓ）およびプソラレア・コリリボリア（Ｐｓ
ｏｒａｌｅａ　　ｃｏｒｙｌｉｆｏｌｉａ）中に天然に
産する。これらγ）果実お工び種子の抽出物は、古い時
代から、白斑（υｉｔｉｌｉｇｏ　）の措置における皮
膚感作剤（ｄｅｒｍａｌ　　５ｅｎｓｉｔ　ｉｔ　ｉｎ
ｇｔＬｇｅ％ｔ）として用いられている。プソラレ／抽
出物の局所的な塗牟およびその後の光１ｃＪ：る照射は
、メラニン生産の刺激をもたらし、かくして皮膚の「日
焼け」効果を与える。 近年、プソラレ７類は乾癖（ｐｓｏｒｉα５ｉｓ）の光
化学療法において使用さｎている。このような措

【ｄに
おいては、プソラレンー頒を経口旧にまたは局部的に患
者に投与する。引続いて、皮膚を紫外線に暴す。 分子生物学の研究および興味の増大に伴ない、プソラレ
ン類は、核酸と共有結合を形成するその能力に関して研
究されている。その平面的構造によって、グソラレン頑
は、核誠の二重らせん状分子構造中の塩基対の間に挿入
する（　１ｎｔｅｒｃα−ｌαｔｇ）　　ことができる
。適当な波長の光で照射すると、プンラレン類は、核酸
ストランド（ｓｔｒαｎｄ　＞の一体の構成’ｉＦＰ＋
とじて存在するピリミジンヌクレオチドと共に共有結合
を形成することができる。核酸ストランドの二重らせん
間において共有結合したプソラレン架橋の生成は、生体
内での核酸の二次構造の研究において使用するための別
の手段を提供する。加うるに、プソラレン類は、ワクチ
ンの製造のために、そしてまた可能性のある化学療法剤
として、ウィルスを不活性化するための手段を提供する
つ共有結合したプソラレン類は、ＤＮＡ応答の阻止剤と
して働らき、かくして応答工程を遅くシ、または停止さ
せる能力を有する。共有結合ζ、第一にプソラレｙ類を
核酸のらせん中に挿入し、そして第二にそれらの部位を
電磁線照射に暴すことによって、２段階の工程でのみ生
ぜしめることができる。このように、共有結合は時間的
および空間的の両方で制御することができるということ
は自明である。 架喬が正しい場所で正しい時間において存在するプソラ
レン分子に対・してのみ生ずるということ、すなわち、
プソラレ７分子が正しい位置に挿入し且つ正確な時期に
放射エネルギーがその部位に到達しなければならないと
いうこともまた明らかであろう。適当な位置におけるプ
ソラレン分子の存在は、水溶液中におけるグソラレ／の
溶解度お工びプソラレンの核酸への非共有的結合に対す
る解離定数に依存する。すなわち、溶解度が高いほど、
多数の分子が、取り巻いている液体媒質中で、結合部位
に近付くことができる。同様に、解離定数が低いほど、
多くの数のプソラレンが任意の、４点において可能な結
合部位を占有することができる。 グノラレンの核ぽに対する非共有的な結合に対する解離
定数、ＫＤ％は下式によって定義さｎる：上式にふ・い
て、（Ｐ）は遊離ブソラレ／の濃度であり、（Ｓ）は核
酸上の各塩基対が結合部位であると考える場合の非占有
結合部位の濃度であり、そしてＩＰＳ）はプソラレン結
合部位の濃度である。 新規なプソラレン誘導体は、公昶のプソラレン類と実質
的に同様に、すなわち、たとえば白斑お工び乾赫の治療
における皮膚感作剤として：ならびにウィルスの不活性
化のための手段として使用することができる。 上記の新規なプンラレ／誘導体は、核ばへのモ・ノー付
加に関して、従来から公知のプソラレン類よりも優れて
いる。この意味における優位とは、通常の結合部位の初
期濃度および全プソラレン濃度において、試剤の補充な
しに、生ずる核酸上に共有結合したプソラレンの濃度に
関するものである。 新規ナグンラレン類は二つの利点を有している。 ナなわら、これらは水中における改善された溶解度を有
し、そして／またはＤＮＡお工び／またはＲＮＡからの
低い解離定数を有している。 プノラレン頑、４′−クロロメチル−４，５′、８−ト
リメチルプソラレンｈ・よび４′−Ｎ−フタルイミド−
メチル−４，５′，８−１−リメチル７”ｙＬｙ７ゆ、
オー。１゜７・ツウツー。ヨ　　　　１ト 造における中間物としての用途を見出することが　　　
　　　ｉし できる。これらのプソラレン類は、その也のプソ　　　
　　　ｊラレン類と同じ領域におけるいくつかの用途を
有することができるということにはいくつかの証拠ｒ） がある。４′−クロロメチルプソラレンの場合において
は、クロロメチ、ルを換基は水溶液中で容易に加水分解
し、それ故、ＤＮＡまたはＲＮＡ結合に関する特異的な
活性を確かめることは困難である。何１にしても、両化
合物の役割は以下の説明から明白となるであろう。 グソラレン類、４′−ヒドロキシメチル−４゜５′，８
−トリメチルプソラレン；４′−メトキシメチル−４，
５′，８−トリメチルプソラレン；および４′−アミノ
メチル−４，５′，　８−１置本 メチルプソラレンはすべて、以下に記載すように、ＤＮ
Ａとの優ｎた反応性を示す◎ 都合の好いことに、本発明の全プンラレｙ類は、４．５
′，８−トリメチルプソラレン（トリオキサレン）から
合成することができるけ几ども、その他の公知の合成方
法を用いることもできる。 本発明のプソラレン類は、ハロメチル化反応あるいはフ
リーデル−クラフッ反応において、トリオキサレ／をハ
ロゲン化アルキル、アルコール、エーテルまたはアミノ
アルキルと反応させることによって製造することができ
る。たとえば、トリオキサレンをノ・ロゲン化（好まし
くは塩化）メチルアルキルエーテルマタハメチルベンジ
ルエーテルと、室温において、トリオキサシン分子上の
４′−炭素原子に結合したハロメチル官能性置換基を与
えるのに充分な時間反応させ、然るのち、反応混合物を
冷却し、そして４′−置換トリオキサレンを沈殿させる
ことによって混合物から４′−置換トリオキサレンを分
離する。本発明の方法の好適な局面においては、・・ロ
メチル化段階の前にまたはその間に、トリオキサレンを
濃酢酸中に溶解する。 しかしながら、トリオキサシン分子上の４′−炭素原子
に結合したハロメチル官能性置換基は、４′−ハロメチ
ルトリオキサレンを水または適当なアルコールと共に還
流することによって、ハロメチル官能基上のハロゲンの
代りにヒドロキシまたはオキシ−アルキル置換基を与え
ることにより修飾することができる。 ハロメチル官能基は、４′−ハロメチルトリオキサレン
を、たとえばジメチルホルムアミドのような有機溶剤の
存在下に、７タルイミドのアルカリ金属塩と共に加熱し
、そｎによって４７−フタルイミドメチル置換したトリ
オキサレンを与え、そして所望に応じ、４′フタルイミ
ドメチルートリオキサレンを、ヒドラジン水化物および
アルコールと共に還流し、然るのち還流混合物から４′
−アミノメチルトリオキサレ／を回収することによって
もまた修飾することができる。 実施例１ プソラレン トリオキサレン＋６５９Ｗ）’ｋ、７５ａ＋７の氷酢酸
中に、穏やかな加熱によって溶解させたのち、室温まで
冷却した。５ｄのクロロメチル−メチルエーテルを加え
そして混合物ｔ？２４時間放置したのち、再び５ａのエ
ーテルを添加した。４８時間後に、反応フラスコを氷上
に１置き、１２時間後に豊富な白色沈殿を収集した。ア
セトニトリルからの再結晶は、４３５ｍｇの純粋な生成
物を与えた。 Ｅ液から第二の生成物を単離して、全体で４９９ηの生
成物金得た。生成物の分析は下記の結果を与えた： 融点２１５〜２１７℃：ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）δＺ６〜
λ７　（９Ｈ，ｍ）４．８　（２Ｈ，ｓ）６．３（１ｊ
７．５）、７．６　　［ＩＨ，ｓ）；賞蓋スペクトルｍ
／ｅ（相対強度＋２７６）？７Ｌ＋、４８）、２７８（
ｍ　　２，１５）。 実施例■ ４−ヒドロキシメチル−４，５′，８−）リメチルプノ
ラレン 先の合成からの４′−クロロメチル−４，５′、８−ト
リメチルプソラレン（ｓ３１Ｎｉ、０．１９２ミリモル
）を、５０ａｔの蒸留水中で７時間還流させたのち、氷
上で２Ｖｆ間冷却した。生成物を一過によって分離およ
び収集したのち、乾燥して、２５■の生成物を得た。収
率は５０．５％であった。 生成物の分析は次の結果を与えた： 融点２２１〜２２４℃ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）δＺ
５〜１７　（９Ｈ，ｍ）、４．５〜４．７＋２Ｈ。 ｍ）、５．０〜５．２　＋　ｌＨ、ｂ８　）、６．８＋
ＬＨ。 Ｓ】、７．８　＋　ＩＨ，８）；質゛盪スペクトルｒｎ
　／　ｇ（相対強度）２５８　ＣＭ　　、１００）、２
４１（１７）。 実施例■ ４′−メトキシメチル−４，５′，８−トリメチルプソ
ラレン ルプソラレン（７８′Ｉｑ、０．２８ミリモル）を、３
０■のメタノール中で５時間還流させた。蒸留による溶
剤の除去は、７４ｑの生成物を与えた。 収率は９７．２％であった。生成物の分析は次の結果を
示した： 融点１７１〜１７４℃；ＮＭＲ＜ＣＤＣ１，）δλ４〜
Ｚ　６　（９Ｈ、ｍ　）　、３．４　［３Ｈ、ｓ　）、
４Ｊ（２Ｈ，Ｓ）６．３（ｔｆｆ、ｓ）：度量スペクト
ル′ｒｒＬ／ｅ（相対強度）２７２（Ｍ　　、９３）、
２４１　（１００）。 実施例■ 実施例ｉにおいて取得し＊　４　／−クロロメチル−４
，５′，　８−トリメチルプソラレン（２００■、０．
７８ミリモル）、カリウムフタルイミド（１６５ａＦ、
０．８９ミリモル、アセト／中で２時間還流することに
より精製）お工び２０ｄのＮ。 Ｎ′−ジメチルホルムアばドを、定常的な攪拌下に、１
００℃に６時間加熱した。水浴中で加熱することにエリ
溶剤を蒸発させたのちに残留した黄色のペースト状物を
、クロロホルム中に溶解して、３回水洗した。 クロロホルムーブソラレンに、Ｍｒｔ　Ｓ’　４　上で
乾保し、次いで濾過したのち、溶剤を蒸発させて、２２
２７＋９＋７９．３％）の生成物を得た。生成物の分析
は次の結果を示した：融点２６７〜２７４°：ＮＭＲ（
ＣＤＣＩ、）δｌ　５　ｍｌ　８　（９Ｉｆ　、　ｍ　
）、５．０１２Ｈ，Ｓ）、６．ａ（ｔＨ，ａ）、７．７
〜７．８ｔ７Ｈ，ｄ）、８．０（Ｉｆｆ、５）、質量ス
ペクトルｍ／ｅ（相対強度）３８７　（常　、８０）、
２４１　（２０）、２４０　（７５）。 実施例Ｖ ４′−Ｎ−フタルイミドメチル−４，５′，８−トリメ
チルグソラレン（■、８４８’ｆ　、Ｌ２ミリモル）、
ヒドラジン水化物（８５％水溶液としてｏ、　ｓ　ａｊ
　）および９５％エタノール（１００ａｔ）を４時間還
流させたのち、第二のＱ、５　ｍｌのヒドラジン水化物
溶ｌＦ１．全添加した。還流を更に２時間行なったのち
に、薄層クロマトグラフィー（ジエチルエーテル）によ
って分析したところ、出発物質は全く残存していなかっ
た。エタノールｆｉＩ：留云し、１残渣を２００ｄのａ
、ＩＮｔＪａＯＨ中に取ったの　　　　　　、）［ｉ ち、５０ａｔずつのクロロホルムによって３回抽出　　
　　　・ｉして、１９８）Ｗ（８４％）の粗製アミンを
得た。　　　　　　、１塩畷塩を調製するために、この
アミンを１ＱＱａｊの１．ｚＮＨｃｔ中に取り、それを
ａｏｍずつのクロロホルムに工って３回抽出して、不純
物を除いた。酸性の溶液の真空′ａｘａによって得た粗
塩酸項を、ｌ’１５ｍ１の無水エタノール中に溶解した
のち、等量のジエチルエーテルの添加によって沈殿させ
た。終良の冷却（７℃クン後、１６１〜の純生成物を収
集した；融点２６０〜２６９℃；ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）
アばンとじてδ１．４〜１．６（２Ｍ、ｓ）、Ｚ６〜Ｚ
７　（９／（、ｍ）、４．１（２Ｈ。 Ｓ）、６．３１１Ｈ，ｓ　）、７．’１（ｌＨ，８）７
．質量スペクトルｍ／ｇ（相対強度）２５？（Ａ／”。 ３６）、２４０１１００） 既に先に詳細に記載したものに関する付加物は、同一の
製造手ｌ１ｆｔを用いてｉＡ４１ｍすることができる。 しかしながら、本発明の目的に対しては、かかる付加物
の重要な性質は、水溶液中における高い溶解度、ならび
にＤＮＡおよび／またはＲＮＡがらの低い解離定数であ
る。 溶解度および解離定数について調べるためには、プソラ
レン化合物のトリチウムｌ導体を調製することがもつと
も便利である。それにより公知の放射線計数方法を用い
て、溶液中または核酸中のプソラレンの存在を監視する
ことができる。 トリチ９ムで標識付けしたプンラレン類は、トリチウム
を含有するトリオキサレンから調製する。 更に詳細には、トリチワム化し足木を通常のトリオキサ
レンと共に還流させることによって、トリオキサシン上
の水累のトリチ９ムによる交換ヲ行なわせる。トリチク
ム化したトリオキサレンを回収して、前記の実施例に従
がう本発明のプソラレン類の調製に使用する。 次の実施例はトリチウム化トリオキサレンの調製のため
の一つの特定方法を示す。 実施例■ トリチワム化−４，５′，８−トリメチルグソラ正二乙 ４．５′，８−トリメチルプソラレン（１１５８岬）、
Ｔｗｏ（水溶液、４ｄ中に１００キユリー八ジオキサン
（６７，５腐ｌ）および発煙Ｈ，Ｓｏ。 （３０％ＳＱ３．７．５ｍｇ）を、定常的な攪拌と共に
２時間還流させたのち、室温まで冷却した。 １２５ｍｇの氷水を加え、そして混合物を氷上で１時間
冷却した。−過によって沈殿を集め、風花して、９００
ＭＦ（７８％）の粗生成物を得た。質量スペクトル分析
はｍ／ｅ（相対強度）２２８１ノ、１αＯ）を示した。 少量の物質（３（ＩＩＦンｉ？　５ａｊの１００Ｘエタ
ノール中に溶解し且つ２２の活性炭を加えた。混合物ｔ
−ｔｏ分間還流したのち、直ちに細いガラスフィルター
を通して濾過（熱時）して、活性炭を除いた。Ｆ液を蒸
発させて、残置をメタノール／水（約９０：１０）から
６結晶した。生成物の薄層クロマトグラフィー分析（Ｃ
ＨＣｔ　、７０Ｈ１Ｏｆｆ　　９　ｇ　：　２１は、ト
リメチルプソラレン中の計数の９５％よりも多くを認め
た。この化合物の比活性を、トルエン−金粉（ｏｍｎｉ
ｆｌｏｕｒ）中で既知の濃度の無水エタノール溶液の部
分試料の計数によって測定した。比活性は６．７ｘ１０
’ｃｐｍであることが（められた。 多くの本発明のプノラレン類の実施例１−Ｖにおけると
同様にして製造して、トリチ９ム化生成物を得た。 次いでトリチクム化したプソラレ／類ヲ用いて、−ｆ：
ｔ′Ｌらの核酸との結合効率を調べた。こｎらの研究は
、溶解度およびＤＮＡとＲＮＡの両者からの解離定数に
ついてのデータを確かめることを目的とした。その上、
ＤＮＡおよびＲＮＡと共有結合するブソラレン類の能力
をも調べた。 こｎらの研究およびその結果は次の如くでるった： ｆＨＶＡお工びＲＮＡからの解離定数を確立するために
、非共有結合を確かめた。非共有結合は核酸のらせん内
でのプソラレンの存在を決定スる。 その存在は、すべての放射エネルギーの不在下に測定さ
れる。前記のように、放射エネルギーは、核酸塩基対と
のプンラレンの共有結合反応を活性化するために必要で
るる。 非共有結合を定量するために、子牛の胸腺ＤＮＡＣシグ
マ−タイプＩＳｉｇｍａ　　Ｔｙ’ｌ）ｅ　）ｒｅｏ、
ｏ　１Ｍ）リス−０，００１ＭＥＤＴＡｐＨ８，５緩衝
液中に、２５μｔ／ＩＩｇの濃度で溶解した。所定量の
このＤＩ’ＪＡ溶液を、透析袋（ＮａＨＣＯ，中で煮沸
することにより前処理した］中に入ｎ、各種のトリチワ
ム化誘導体を、半分の場合に対しては袋の内側に入ｎ、
他の半分の場合には袋の外側に加えた。プノラレン分子
の塩基対に対するモルた。その後に、袋の内側および外
側の両方で放射能を測定した。この情報および各誘導体
の比活性から、ＤＮＡに非共有的に結合した薬品の世を
定量した。キイロショクジョクバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉ
ｌαｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）のリボソーム（ｒｉｂ
ｏｓｏ　−惧αｌ　）ＲＮＡに対するこれらの誘導体の
結合を、同様にして、正確に測定した。 平衡透析測定の結果を次の第１表に示す。解離定数の単
位はモル／リットルである。溶解度お工びモル吸光率（
ε）は純米−中で、平・画定数ｖｉｏ、０１Ｍトリス中
で求めた。 第１表中の２〜７欄中の８−メトキシプソラレンに対す
るデータは、文献中にある結果から計算した。その他の
全データは本発明者によって求めら７’したものである
。 ８−メトキシプソラレンおよび４．５′，８−トリメチ
ルプソラレンは、本発明のプソラレ／頑との比較として
第１表中に含めた。 プソラレン頌のＤＮＡお工びＲＮＡに対する共有結合性
を調べた。共有結合を連成するためには、結付部位に放
射エネルギー（光）を供給することが必要である。こｎ
らの研究は次のようにして行な゛りた　： 共有結合の研究において用いたＤＮＡお工び１１！ＮＡ
は、先に記載したものである。谷核酸の試料を、０．０
１Ｍトリス−ｏ、ｏｏｔＭ　ＥＤＴＡ緩衝液中で、２５
μ９７ａｔの濃度で調製した。放射性プソラレ／誘導体
を、３塩基対ごとに対して１のグソラレンの比率で加え
た。照射は下記の２つ■装置の中の一つを用いて行なっ
た。 低強度の照射は、４００ワツトのジェオ２ルエレクトリ
ツクＣＧｅｎｅｒａｌ　　Ｅｌｅｃｔｒｉｃ　）水銀灯
（Ｈ４００Ａ８３−１／Ｔ１６１を備えた改変スライド
映写ａｔ用いて行なった。アークの像を硝酸第一コバル
ト溶液で囲んだ同一セル上に焦点を結ばせたつ硝酸第一
コバルト溶液は高純度照射においても使用した。この装
置中で試料に与えらｎる光の強度は４〜６　ＭＬ　１１
）　／　ｃＪであったつ高強度照射は、４．０ｍの中心
間の距離で二屯壁試料室の両側に取付けた同一の２不の
４００７ツトジエネラル・エレクトリック水銀灯を有す
る装置中で行なった。試料室は、硝ば第一コバルトの温
度制御 御した溶液（４０％重量／重量）の連続的な循環　　　
　　　：によって１０℃に冷却した。コバルト溶液は、
３６３．へ、）ヵ。Ｊｔ＊Ｊ：ｉＭ＄　’＜、ｎｆ工、
フイ７，１ターエ・よび約３４０〜３ＢＯｎｍの窓とし
て働らく。内部試料室の表面における光の強度は約１０
０ｍ　ｗ　／　ｃａであった。核酸−プソラレン混合物
を内室中に入ｎ１そこで照虫の間中、混合物を連続的に
攪拌した。各溶液の部分試料（誘導体プラス核酸）を、
２０．４０お工び６０分に採取した。次いで、各部分試
料をクロロホルム／イソ−アミルアルコール＋２４：１
）に工って２回抽出して未反応のプソラレンを除いたの
ち、０．０１ｌｌトリス、ｏ、ｏｌＭ　　ＥＤＴＡ緩衝
液に対する徹底的な透析を行なった。クロロホルム−イ
ソアミルアルコールによる未結合プソラレンの効果的な
抽出は、水相が少なくとも０．１５ＭのＮαＣ１ｆ含有
することを必要とした。最後に、核酸−プソラレン混合
物の光学密度を求め且つ放射能を測定することによって
、ＤＮＡ−＆たはＲＮＡに共有結合した誘導体の量を求
めたつ時間を置いて試料を採取することによって、共有
結合の速度論の評価もまた可能　　　　　　　１であっ
た。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１下記第ｎ表はＤＮＡに関するこれらの研究の結果を
示す。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１第１表に示したデータから、４′−アミノメチルトリ
オキサレンはトリオキサレンよりも遥かに速（ＤＮＡと
反応すること、また一方、トリオキサレンは４′−ヒド
ロキシメチルトリオキサレンよりも大きな光化学結合の
初期速度を有していることが明らかである。９０分の照
射時間において、塩基対１モル当りに結合したプンラレ
ンのモル数は、アミノメチル化合物に対しては０．１８
であるのに対して、トリオキサレンおよびヒドロキシメ
チル化合物に対しては、そｒＬぞｆｌ、０．０９および
０．０６である。また第１表は９０分の照射後に、ｍＷ
中の４′−アミンメチルトリオキサレンの分子の半分以
上がＤＮＡに共有する９に対して、４′−ヒドロキシメ
チルトリオキサレンの場合は８０％よりも多くが溶液中
に遊離のまま残留することをも示している。これらの相
違は、異なるプソラレン類の分子構造が、そｎらの溶解
度、光化学的反応性、およびそれらの化合物自体の光分
解に対して与える影響によって生ずるものと考えること
がもつとも妥当であろう。 下記の第ｍ表はＤＮＡへのプソラレンの共有結合に対す
る高強度照射の結果を示す： 第■表はプンラレンとＲＮＡとの共有結合の達成におけ
る高強度照射の結果を示す：第１．ｎ、ＩＩＩおよび■
表中に示したデータがら、次の結論を引き出すことがで
きる： ＤＩ’ＪＡへの平衡結合　　　　　−゛　に対する解離
定数を表わす第１表は、４′−アミノメチル−４，５′
，８−トリメチルプソラレンがトリオキサレンよりも約
８倍も強（ＤＮＡに結合することを示している。トリオ
キサレ／の結合は４′−ヒドロキシメチルプソラレンよ
りも５倍強く、また４′−メトキシメチルトリオキプレ
／エリも２倍も強い。しかしながら、こｒＬらの両新規
訝導体は、なお、メトキサレンおよびその他の一般的に
市販品を入手することができるプソラレンエリも１０倍
も強（ＤＮＡに対して結合する。 更に、その後の研究は、ブソラレン類の相対的な溶解度
が、４′−アミンメチルトリオキサレン、４′−ヒドロ
キシメチルトリオキサレン、４′−メトキシメチルトリ
オキサレン、メトキサレン、およびトリオキサレンの順
序で約ｔｏ、ｏｏｏ：６８：１７：８０：１であること
を示している。 モルｄ解度を解離定数で除すことによって、−それぞｎ
のプソラレ／で飽和した溶液中での平衡に工・いて、Ｄ
ＮＡ結合部位を、トリオキサレンまたはの塩基対当り約
１のプソラレンである。第１表の第５ａは、適当なプン
ラレンで飽和させｆＣ，ＤＮＡ溶液中の粘合部位の遊離
部位に対する比を示している。４′−ヒドロキシメチル
トリオキサレンおよび４′−メトキシメチルトリオキサ
レンは３塩基対当りに１つのブソラレンが結合する〔（
ＰＳ）／（Ｓ）＝０．５）ことにより、ＤＮＡ部位の飽
和がほとんど達成されることを予測できるのに対して、
４′−アミノエチルオリオキサレンは、この部位飽和の
状態の到達において１０’倍も有効であるものと計算す
ることができる・（４′−アミノエチルトリオキサレン
は４′−ヒドロキシメチルトリオキサレンよりも１５０
４も多く浴解し且つ約１００倍も強く結合する］。 本発明のプソラレン類は、ＡＮＡワイルスの不活性化に
おいても有用である。この点において、本発明のプンラ
レン類は、他の公知のプソラレン類の何ｒＬよりも、著
るしく高い活性を有している。 高い投与率、たとえば３０μｔ／ｍｅ、にＳ・いて、４
１−ヒドロキシメチル−４，５′，８−トリメチルプソ
ラレン、４′−メトキシメチル−４，５′，８−トリメ
チルプソラレン、および４′−アばツメチル−４，５′
，８−）リメチルプンラレンは何れも、ＲＮＡ動物クィ
りス、小水庖性口内炎りイルス（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ　
　ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ　　ｖｉｒｒｂｓ　）の不活性
化に除し、一般に市販品を入手することができる４、５
′，８−トリメチルプソラレ／よりも、はとんど１００
０倍も効果的である。 この卓越した有効性を第１図に示すが、この図中で、曲
線は小水庖性口内炎りイルスの斑形成（ｐｌａｑｗｅ　
　ｆｏｒｍｉｎｇ）単位の生存率を、各記載プソラレン
頑の存在下における長波長紫外線照射時、＃ｒＩの関数
として示している。指示した投与率（約２０〜３０μｆ
　／　ｍｅ　ｌにおいて、本発明のプソラレン類のトリ
オキサレンに対する著るしい優越性は明白である。本発
明の３種のプンラレン類は何ｎも、このような高投与量
においては本質的に同等である。こｎらの高投与量にお
けるそれらの同等性は、前記の第１表中に示した、そｎ
らの解離定数ＫＤにより、且つ既にｅ及した七ｎらの高
い水溶性（４′−メトキシメチルトリオキサレンの場合
においては、溶液は過飽和である）により、本質的に予
想できることである。指示した投与率において、ＡＮＡ
は非共有的に結合した挿入グンラレン類によってほとん
ど飽和している。 かくして、３種のプソラレン類はすべて、活性において
同等であると思われる。しかしながら、トリオキサレン
は０．６μ９／ｓｔｇの程度まで溶解するのみであり、
それ故、その濃度を１０μ９７　ｅｒｇ（０点）から３
０μＳ’　／　ａｌ　ｌ各点）−！で増大させても、ウ
ィルスを不活性化させるべきその能力に対して何の効果
もない。 第２図は、第１図のものと同様な曲線を示しているが、
但しこの場合は、遥かに低いプンラレン類の濃度、すな
わち、１〜３μ９７ｍｅにより得た結果に基づいている
。第２図もまた、本発明のものおよび市販のプソラレン
、トリオキサレンを含めたその他すべてのプソラレン類
に対する４′−アミノメチル−４，５′，８−トリメチ
ルプソラレンの疑いの余地のない優越性を示している。 ４′−アミノメチル誘導体のこの優越性は、同じく第１
表中に示した＃＃定数、ＫＤ、を参照すｎば明らかなよ
うに、核酸に対するそのエリ強い結合性に基づいている
。 第１および第２の両図に示したデータは、以下の手順を
用いて得たものである： ５Ｘ１０’のウィルス斑形成単位を含有する５００μｔ
の燐酸塩緩衝塩水を、直径３．５Ｃｒｎのペトリ皿中に
入れて、プンラレンの存在または不在下において、ピー
・ダブリュー・アレンカンパニー、ロンドア　（／′，
Ｗ、Ａ１１ｅｎ　　Ｃｏ、ｊＬｏ？Ｌｄｏｎ　）のＡ４
０５型長波長紫外線灯を用いて照射した。 いくつかの時間間隔において、５０μｔの部、分試料を
皿から採取して、ウィルス斑形成単位の量を滴定した。 紛試料の希釈物は調節可能なピペットヲ用いて調製し、
そｎｌプラスチック盆中で生長させた鶏の原発注線徴維
芽細胞（ｐｒｉｔｎａｒｙｃｈｉｃｋｅｎ　ｆｉｂｒｏ
ｂｌａｓｔ　）の単一層上にのせた。ワイルスの吸着後
に、培養物１に２０％の子牛の血清および３％のメチル
セルロースを含有スる培養基でおおった。３５℃におい
て２〜４日間培養したのち、ニュトラル・レッドをガロ
えた。９イルスは小水庖性ロ内炎インジアナ菌株（Ｖｅ
ｓｉｃｗｌａｒ　　ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ　　ｖｉｒｌ
ＬｓＩｎｄｉａｎａ　　５ｔｒａｉｎ）でめった。

【図面の簡単な説明】

Ｑ１図は小水崩性口内炎ウィルスの比較的高濃度の各種
プソラレン類の存在における長波長系外線の照射後の生
存率を、照射時間の関数として表わした曲線を示す。こ
の図中で、黒丸（・］＝光のみ：白丸（０）＝ａｏμｙ
７ａｔのトリオキサレン；黒四角（■）＝３０μ２／＠
ｌの４′−ヒドロキシメチルトルオキサレン；白三角（
Δ）＝３０μ９　／　ｐ、ｌの４′−トリオキサレン；
黒三角（ム）＝２０μｍ／１の４′−アミノメチルトリ
オキサレン。 ■ 第２図は著るしく低い濃度のプソラレン類の存　　　　
　　：□ 布下における第１図と同様な曲線を示す。この図　　　
　　　　１゜□ 中で、黒丸（・）＝光のみ：白丸（○）＝１０μ　　　
　　　１ｆ／ｄのトリオキサレン；黒四角（−）＝１μ
２１／　ｍｅの累■Ｑ蛯双４　’−ヒドロキシメチルト
リオ　　　　　　　ｉキサシン：白玉１ＡＴΔ）　＝３
　／！ｊ　ｒ／ｄノ４　’−メトキシメチルトリオキサ
レン、黒三角（ム）＝２１μｆ　／　ｍｌの４′−アミ
ノメチルトリオキサレン。 特許出願人　　ザ・リージエンツ・オプ・ザ・ユニバー
シティ・オプ・カリフォルニア　　　　　　　　　　　
　ｌ・第１図 叶射叫間（介） 第２図 ＩＱ　　　　　２０　　　　３０ 餡射時間（切

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、少なくとも１つの結合部位上において共有結合せし
   められた４′−置換４，５′，８−トリメチルプソラレ
   ンを有するデオキシリボ核酸。 ２、該プソラレンが４′−ヒドロキシメチル−４，５′
   ，８−トリメチルプソラレンである特許請求の範囲第１
   項記載のデオキシリボ核酸。 ３、該プソラレンが４′−メトキシメチル−４，５′，
   ８−トリメチルプソラレンである特許請求の範囲第１項
   記載のデオキシリボ核酸。 ４、該プソラレンが４′−アミノメチル−４，５′，８
   −トリメチルプソラレンである特許請求の範囲第１項記
   載のデオキシリボ核酸。 ５、少なくとも１つの結合部位上において共有結合せし
   められた４′−置換４，５′，８−トリメチルプソラレ
   ンを有するリボ核酸。 ６、該プソラレンが４′−ヒドロキシメチル−４，５′
   ，８−トリメチルプソラレンである特許請求の範囲第５
   項記載核酸。 ７、該プソラレンが４′−メトキシメチル−４，５′，
   ８−トリメチルプソラレンである特許請求の範囲第５項
   記載の核酸。 ８、該プソラレンが４′−アミノメチル−４，５′，８
   −トリメチルプソラレンである特許請求の範囲第５項記
   載の核酸。