JPS62127056A - 創傷カバ−材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はゼラチンにフィブロネクチンを固定化させてな
る新規な創傷カバー材に関し、更に詳しくは特に組織へ
のと着性に優れこれによって創傷治癒効果が著しく促進
される創傷カバー材に関する。

（従来の技術〕 熱ｉなどの火傷や外傷′注皮膚欠損による創傷に対する
治癒法として、軟膏、リバノールガーゼがすで゛に実用
化され、広く用いられている。最近になって滅菌凍結乾
燥豚皮、ソフラチュールガーセなどが用いられるように
なってきた。しかしながらこれらにはなお一長一短かあ
つ、必ずしも満足できるものにはなっていない。

一方、ゼラチンに止血効果があることは古くから知られ
、ゼラチンを基材とした創傷治癒用物質も数多く知られ
ている。例えば、特公昭３＋−４６４４号公報及び特公
昭４０−９４３１号公報には未変性ゼラチンまたはこれ
とメチルセルロースを混合したものを主材とし発泡促進
助Ｍｌを添加して発泡、脱水する海綿状止血用ゼラチン
の製造法も開示されでいるが、ゼラチンは血液や体液に
溶解し易いため創傷面に適用したときに出血血液や体液
の浸潤を受けで溶解しでしまう欠点かあった。

このようなゼラチンの溶解性の問題を解決する方法とし
て適宜の量のアルデヒド類を作用させてゼラチン分子の
架橋と共に発泡操作を行いゼラチンの溶解性を抑制して
抜歯孔充填物として用いる方法も提供されでいる。この
方法による場合は出血した血液が発泡体の多孔１毛細管
に吸収され、血液成分中の凝固因子が遊離して止血を促
し、発泡体に含有された薬剤が損傷面に徐々に放出され
る。しかし乍ら、これらのゼラチン発泡体は直ちに溶解
損失することないが血液や体液にすぐには溶解しないた
めゼラチン特有の粘着力の発現か遅く結果としで！１１
　（８面や組織との癌着か遅れで早期の治庖功果か達成
されない。

一方、比較的新しい生理活性物質としてフィブロネクチ
ンの存在か知られ、新規な王理活゛注の探索とその応用
か注目されている。従来、熱傷および外傷などの創傷に
おけるフィブロネクチンの役割は、損傷組織の修復と損
傷組織から血中に流出するコロイド状細胞残骸や細菌の
除去にあると考えられ、創傷によつ血漿中のフィブロネ
クチン濃度が減少し、その後正常値に回復することが知
られでいる。このような現象との関連で外因性のフィブ
ロネクチンを投与することで血中の濃度ヲ正常化するこ
とも試みられでいるが血中濃度を正常化しでも網内系機
能は改善されず創傷が早期に治癒されるには至っていな
い。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明者らは、創傷カバー材分野にあける前記した問題
点、即ち架橋ゼラチンを利用するｆｉｌ傷カバー材の組
織への圧着性の改善による早期治癒効果の達成を目的と
して検討を進めた結果、ゼラチン粒子の選択的架橋法の
採用によつ且つ架橋度をＪ度に抑制すると共にフィブロ
ネクチンを共用することによってこの目的か達成される
ことを見出しで本発明に到達した。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明の第］および第２は、ゼラチンの架橋方法におい
て異なり、夫々、ゼラチンをアルデヒド類で架橋しフィ
ブロネクチンで固定化してなる創傷カバー材であり、ま
たゼラチンを紫外線照射法で架橋しフィブロネクチンを
固定化してなる創傷カバー材である。また、本発明の第
３は最も実用的であり且つ熱傷および外傷の治癒に好適
なゼラチン層と合成高分子材料層とからなる複合体のゼ
ラチン層にフィブロネクチンを固定化してなる創傷カバ
ー材に関する。

上記した本発明の創傷カバー材の製造においで、ゼラチ
ン層にフィブロネクチンを固定化すると同時に感染防止
９カ果のある薬剤を固定化して本発明の創傷カバー材の
適応性を更に高めることができる。

本発明で利用し得るゼラチンとしては、医用としで用い
得る一般的なゼラチンかそのまま利用可能であり、ゼリ
ー強度１００ブルーム以上、特に１５０〜３００のもの
が好適にｆり用でき、また酸処理法およびアルカリ処理
法の何れの処理法によるゼラチンも利用可能であるかア
ルカリ処理法によるものの利用が好ましい。

本発明においでは、医用として利用可能な市販のフィブ
ロネクチンを利用することも出来るが、例えば細胞成長
因子（日本組織培養学会編）１８１〜１８８頁朝倉書店
１９８４記戦の方法により′＄を菌、凍結乾燥しで調製
することかでき、ヒト血漿よつゼラチンとの親和性を利
用しで精製したものが好ましいものとして利用される。

本発明の創傷カバー材としでは、前記した如く、ゼラチ
ン層と合成高分子材料層とからなる複合体のゼラチン層
にフィブロネクチンを固定化して成るものが一般的に利
用されるが、複合体を形成しないゼラチン乾燥粉末、セ
ラチシ発泡体乾燥粉末或いはフィルムも利用可能である
。

而で本発明にあいでは架橋ゼラチンとして利用され、特
にアルデヒド類または紫外線照射法により架橋されたち
か利用される。もともとゼラチンの架橋法としでは、熱
、紫外線、γ線、クロム、アルミ、鉄の金属塩等の無機
硬化剤、アルデヒド類、ケトン類、キノン類、エステル
類等の有機の硬化剤等により不溶化されることが知られ
でいるか、本発明で利用するフィブロネクチンとの組合
せにおいては上記方法の採用が必要である。

ゼラチンのアルデヒド類による架橋方法としでは、採用
するアルデヒド類、例えばホルムアルデヒド、グリオキ
ザール、グルタルアルデヒド等によってその反応条件か
著しく相異するので一般的す範囲としで示すことは出来
ないが、例えばホルムアルデヒドを使用する場合は、ゼ
ラチン水溶液または乾燥もしくは発泡乾燥ゼラチンを例
えば硫酸ナトリウム、ｉｆＡ酸水素ナトリウムおよび炭
酸ナトリウム等の中性塩の存在下にホルムアルデヒド濃
度例えば００１〜０．２重量％の水溶液とを接触せしめ
ることにより行なわれる。またグリオキザールを使用す
る場合は、ゼラチンの発泡時に比較的高濃度のグリオキ
ザールそ添加して変性強化し凍結乾燥したのち熱風下に
グリオキザールを除去することによつ利用される。更に
グルタルアルデヒドを使用する場合は、ゼラチン層と硫
酸ナトリウム等の中′注塩の存在下にグリタルアルデヒ
ドＪ度例えば０．０１〜０．１重量％濃度の水溶液とを
接触せしめることにより行なわれる。

上記したゼラチンとアルデヒド類との架橋反応温度は通
常２５〜３０℃であり反応時間は通常２〜２０時間の範
囲である。而して上記した方法による架橋の程度は架橋
度が高過ぎでもまた低過ぎでも好ましくなく、採用する
アルデヒド類の種類および本発明の創傷カバー材の使用
形態によっても異なるが、架橋ゼラチンを３７°Ｃで１
００倍量の水と２４時間接触させた時の溶解量が２０重
量％以下、好ましくは１０重量％以下となるような架橋
度に調節することが好ましい。

この様な架橋度を示す手段として例えばアルデヒド類の
ゼラチンへの結合！で示すこともでき、例えばホルムア
ルデヒド量として０．２〜２重量％、グルタルアルデヒ
ド量として０．２〜５重量％とすることもできるか、こ
れらの数値よりも上記溶解量への調節か優先して行なわ
れることは当然である。

本発明の創傷カバー材においで、使用するアルデヒド層
毎に調節される架橋度の調製は重要である。即ち、架橋
ゼラチンとフィブロネクチンとの共用においでも充分そ
の目的を達成し得ない場合かあるからであり、たとえフ
ィブロネクチンの利用によってゼラチン層の損傷組織と
の接着か著しく改善されるとは言え、架橋度か著しく過
度である場合には接着力の発現か十分でなく、また過小
である場合にはゼラチンの血液への溶解か著しく初期の
目的か達成されないからである。

本発明においで特゛に採用されるもう一つの架橋法であ
る紫外線照射法は慣用法を使用することができる。即ち
、例えば三共電気製の３０Ｗで波長２５３７人に鋭く強
い、３１３０人に弱いそして２９６５Ａに非富に弱い放
射極大を有するランプが使用される。この方法による場
合においても得られる架橋ゼラチンの溶解量が２０重量
％以下、好ましくは１０重量％以下の範囲になる様に調
節することが好ましい。

前記説明においでゼラチンは発泡体としで調製され、ま
た後述する合成高分子材料層と複合体を形成するゼラチ
ン層としでも場合によりゼラチン層は発泡体として調製
されるが、この様な゛場合のゼラチン発泡体の製造方法
自体は従来公知の方法がそのまま利用できる。即ち、例
えば２〜２０重量％′Ｊ！４度のゼラチン水溶液に例え
ばミリスチール硫酸ナトリウムの適量を加えて滅菌処理
を行い、次に前記の様にグリオキザールを加えてホモゾ
ナイザー等の撹拌機により発泡固化させ次いで凍結−融
解を繰り返しで発泡体または発泡体層を形成させること
ができる。

前記した粒子状、フィルム状または発泡体状ゼラチン若
しくは複合体ゼラチン層にフィブロネクチンを固定化す
る方法としでは、乾燥前のゼラチンまたはゼラチン層形
成時に混合す、ることも可能であるか、通寓は形成した
ゼラチンまたはぜラチン層を乾燥しでのち適宜の濃度、
例えば０、　Ｉ−２００ｕ　ｑ／＋ｒ１好ましくは０．
５−１ＯＬＪ　ｇ／ｎ４程度のフィブロネクチンを含有
する水溶液と接触せしめで吸袴ぜしめたの５、これを再
び凍結乾燥することによって容易に固定化できる。

本発明の１６１１１８カバー材においては、フィブロネ
クチンを利用することによる効果と同時に適応性を更に
高めるために感染防止効果のある薬剤を同時に添加吸収
させることもできる。使用しつる薬剤としではフィブロ
ネクチンの作用１８阻害しないものであれば何れも用い
ることができるが、例えばリゾチームなどの加水分解酵
素やプラジオマイシン、ゲンタマイシン、ポリミキシン
８９どの抗菌１抗性物貢が好適に利用できる。これらの
薬剤はフィブロネクチンと同時に加えることも可能であ
るが、たとえばリゾチームはフィブロネクチンよりもゼ
ラチンに対して、高い親和牲を有しているため好ましく
はフィブロネクチンを固定化した後に加えるのが良い。

上記した方法により調製して得られる本発明の０１傷カ
バー材は粉末状、発泡体粉末状、フィルム状或いは合成
高分子材料層とからなる複合体としｒ得られるが、複合
体以外の場合には０り傷部位に適宜の方法によつ被着す
る様に被着させ、他の材料、例えばガーゼ等の使用によ
外面１８覆うことによって利用することができる。しか
し乍ら本発明の創傷カバー材は一般的には複合体としで
利用するのが特に有利である。

複合体の形成に用いられる合成高分子材料としでは、創
傷面をカバーし、適度の水蒸気透過性と酸素透過性、例
えば０．３−１　ｍｑ／ｃｒ４／ｈｒ程度の水分透過速
度のものであれば利用可能であり、また外部からの細菌
の侵入を防止する感染防止効果を有するものであり、ま
た体液の流出防止効果があればどのようなものでも良い
が、比較的多孔牲のポリエチレン、ポリプロピレン等の
合成高分子材料の使用が好適であり、これらはフィルム
状またはメツシュ状として用いられる。

好適な複合体使用の一例を示せば、厚み０．０５〜Ｃ１
，５ｍｍ、水分透過速Ｍ　Ｏ，３〜Ｉ　ｎｖｑ／ｃｒｒ
ｒ／ｈｒのポリオレフィン膜の片面に、例えば０．１〜
ｌ０ｍｇ／ｃｒｒ？のフィブロネクチンの場合により同
程度の感染防止Ｊｉｊ剤を含有する厚み００５〜０．２
ｍｍのゼラチンフィルム層または厚み０．５〜２ｍｍの
発泡ゼラチン層が形成され、例えば５　ｘ　ｌ０ｃｍ〜
２０Ｘ　３０ｃｍ程度の適宜の形状に裁断されたものか
利用可能である。

（作　用） 本発明の創傷カバー材は特定の架橋法によって架橋され
、好ましくは適度の架橋度に調節された架橋ゼラチンま
たは架橋ゼラチン層を主材とし、これにフィブロネクチ
ン、場合により感染防止効果を有する薬剤か固定化され
ているので、皮膚の熱傷、擦過側、挫剤などの創傷面組
織への密着性に優れこれによって創傷面の早期治醗効果
が達成される。而してゼラチン層と創傷面の組繊細胞と
の癌着においでは、適度の架橋によって流失することな
く溶出されたフィブロネクチンがゼラチン層と組繊細胞
との間に介在して両者の糧着を助長し溶解生分解された
ゼラチン層によって新皮膚が生成するものと考えられる
。

更に本発明の創傷カバー材は場合によつポリエチレン等
の合成高分子材料層の片面にフィブロネクチンを固定化
した発泡ゼラチン層と複合化しでいるので更に細菌によ
る感染防止および体液の過剰の流出を防止し得るので上
記効果と相俟つで則傷治伶幼果が著しく促進される。

〔実施例） フィブロネクチンの分離精製・ 成人男子より採取した血液＠　３０００ｒｐｍで５分間
遠心分離し、血漿１００＋ｒＩｌｔセフアロース４Ｂカ
ラムを通しで非選択的成分を除去した。通過分画をセフ
ァロース−ゼラチンカラムに通し、結合分画ｔ４Ｍ尿素
で溶出させてフィブロネクチン１５ｍ９ｖ！得た。精製
したフィブロネクチンは５ＤＳ−ポリアクリルアミド電
気泳動法を用いて分子量を確認し、等電点電気泳動法を
用いて等電点を確認し、フィブロネクチンと同定した。

実施例１ ゼラチンへのフィブロネクチンの細胞接着活性を下記の
方法で評価した。

親水化処理した３５ｍｍ径のボｌノスチレンシャーレ（
ファルコン３００＋）に０．０１％のゼラチン溶液２＋
ｎ２を注入した。２０分間イン主ユヘーションの凌、リ
ン（１１衝液にで３回リンスし、　＋５０Ｌ１９／艷の
フィブロネクチン０．５ｍＱ、！Ａ油注入た。３０分間
インキュヘーションの後、マウスＭＩＡ維芽細胞由来の
し一細胞懸濁液（４，５Ｘ　１０′個の細胞含有）をシ
ャーレに注入し、炭酸ガス培！！装置にてそれぞれ１５
分、３０分、６０分インキユヘーションした後、非接着
細胞を血液計算板で測定した。また位相差顕做鏡で細胞
の形態を観察した。フィブロネクチンを全く便用しなか
った場合の結果と合せてその接着率および細胞形態変化
を表−１に示した。

上表の結果は、フィブロネクチンを固定化したねり傷カ
バー材は細胞接着活゛江か非常に向上し、ｅ＋＋　ｉ治
も効果か優れ℃いることを示している。なお、細胞の形
態変化においで、球形から偏平化への進行とは、フィブ
ロネクチンか細胞−基ｖ４接着に関与し形態変化させて
いることを示し、球形保持とはゼラチンのみでは細胞形
態変化していないことを示す。

実施例２ 蒸留水１００艷にゼラチン５９を加え溶解した債、ガラ
ス板上に一様に流し、風乾させた。得られたゼラチンフ
ィルムを以下に示す慣用法により架橋を行った。中件塙
として硫酸ナトリウム２０％を含有するグルタルアルデ
ヒド０．０４％水溶液に浸し、２時間架橋処理した。次
にフィブロネクチン浸漬液に浸しく濃度５ｕ９／ｎｆｆ
１）、そののち凍結乾燥しでフィブロネクチン担持フィ
ルムを得た。

このものの以下の試験法による場合の水溶解性は３重量
％であった。

水溶解性試験法： 架橋ゼラチンｔ５Ｘ５ｃｍに切断し３７℃で１００００
倍量と２４時間接触させ水中に溶解したゼラチン量を測
定しで求めた。

上記フィブロネクチン固定化フィルムを用いて実施例１
と同様に試験した結果、マウス繊維芽細胞由来のし細胞
（以下し細胞と略記する）の接着率は６０分で７８％で
あり、熱（ａなどの創傷の治股に有効であることを示し
た。

実施例３ 蒸留水５００ｍ１にゼラチン７５９とミリスチル硫酸ナ
トリウム２，５９を加え４時間室温で放置した。

次に４０℃に加温し、強く撹拌して１０倍量に発泡させ
、発泡時に４０％のグワオキザール液１．３Ｉｎ！ｌｉ
加えてゼラチンを変性強化した。凍結乾燥した後、１０
０°Ｃの熱風下に２時間Ｆｌ装置してグリオキザールを
除去し、スポンジ様の乾燥ゼラチン発泡体を得た。得ら
れたゼラチン発泡体を実施例２と同様のフィブロネクチ
ン溶液に浸し、そののち凍結乾燥して医療発泡体８？！
！た。

このものの水澄解°注は２重量％であった。

上記フィンＯネクチン固定化ゼラチン発泡体を用いて実
施例１と同様に試験した結果、マウス繊維芽細胞由来の
し細胞の按＠率は７９％であり、熱傷などの創傷の治癒
に有効であることを示した。

実施例４ 蒸留水５００艷にゼラチン７５９とラウリル酸ナトリウ
ム３９を加え４時間室温で放置した０次に４０℃に加温
し、強く撹拌して１０倍量に発泡させた。

凍結乾燥してスポンジ用の乾燥ゼラチン発泡体を得た０
次に、中性塩として硫酸ナトリウム１２％、炭酸水素ナ
トリウム０．５％、炭酸ナトリウム０．１％を含有する
ホルムアルデヒド０．１％水溶液に浸し２時間架橋処理
した。架橋物を実施例２と同様のフィブロネクチン浸漬
液に浸し、そののち凍結乾燥して創傷カバー材を得た。

評価の結果、このものは細胞接着溝″注が高く、しかも
実施例３のものよりも体液などによる溶解が少なく創傷
の治癒に有効であることを示した。

実施例５ 架橋時にゼラチン発泡体の上下に３０Ｗの紫タト線ラン
プを置き、紫外線照射による架橋処理を行っ全以外は実
施例２と同様にして創傷カバー材を得た。評価の結果、
このものは実施例２と同様の創傷治た９力果を有するも
のであることを認めた。

実施例６ 実施例２と同様のフィブロネクチン浸漬液に浸した後、
引続き１０ｍｇ／＋ｎＱの濃度を有するポリミキシンＢ
浸漬液に浸した以外は、実施例２と同様にしてフィブロ
ネクチン−ポリミキシンＢ担持フィルムを得た。Ｌ−細
胞の接着率は実施例２と同等であり、感染防止効果があ
り熱傷などの創傷の治癒に有効であることが認められた
。

実施例７ 実施例２と同様のフィブロネクチン浸漬液に浸した後、
引続き５ｍｇ／ｒｎＱの濃度を有するリゾチーム浸漬液
に浸した以外は実施例３と同様にしてフィブロネクチン
−リゾチーム担持ゼラチン発泡体を得た。６０分後のし
一細胞の接着率は８０％であった。評価の結果、このも
のは感染防止効果があり、しかも細胞接着活゛注が高く
、熱傷などの創傷の治癒に有効であることが認められた
。

実施例８ 実施例２と同様のフィブロネクチン溶液に浸漬した後、
引続きｌ０ｍｇ／ｎρの濃度を有するプラジオマイシン
浸漬液に浸した以外は実施例７と同様にして医療用発泡
体を得た。評価の結果、このものは実施例７とほぼ同様
の創傷治癒効果を有するものであることが認められた。

実施例９ 蒸留水５００ｄにゼラチン７５９とミリスチル硫酸ナト
リウム２．５ｃ＋＠加え４時間室温で放置した。

次に４０℃に加温し、強く撹拌して５〜１０倍量に発泡
させた。凍結乾燥してスポンジ用の乾燥ゼラチン発泡体
を得た。次に、中性塩として硫酸ナトリウム２０％を含
有するクルクルアルデヒド０．４％水溶液に浸し２時間
架橋処理した０次に実施例２と同様のフィブロネクチン
浸漬液に浸し、引続き５ｍｇ／ｍＱ濃度のりゾチーム浸
漬液に浸した。評価の結果、凍結乾燥しで得られたもの
のし一細胞の接着率は３０分後日５％、６０分後日２％
であった。このものは体液などによる溶解が少なく、し
かも創傷治癒効果の優れた創傷カバー材であることが認
められた。

実施例１０ ボ１ノプロピレンを　１９０℃で融解押出し、次に急速
に延伸して１２５℃で１時間熱処理し、室温に冷却した
０次いで室温で再度延伸し、　１２５℃、５分間延伸し
た状態で熱セットしでポリプロピレンフィルムを得た。

０〜−５℃の環境下にその片面１２ｃｍ’当りにゼラチ
ン液を２．５ｍｌ！ずつ均一に薄く塗布した。このゼラ
チン液は１ｍｌ当り４０ｍ９のゼラチンを含んでおり、
蒸留水４８０９にゼラチン２０９を加えて４時間室温で
放置し、　１２１℃で２０分間加熱滅菌したものを用い
た。風乾ののち慣用法により架橋処理を行った。中性塩
として硫酸ナトリウム２０％を含有するグルタルアルデ
ヒド０．０４％溶液に浸し２時間架橋させた。次いで、
フィブロネクチンを１２ｃｍ’当つ３Ｌ１９担持させた
。凍結乾燥後３　ｃｍｘ　３　ｃｍに切断しエチレンオ
キサイドガスにで滅菌処理したものをラット背部の１１
度の熱傷部に直接貼り付は治ね状況を観察した。２日経
過後に滲出液と一体化した剤皮形成かみられ、２週間後
はぼ治わが完了した。

実施例１１ 実施例１０においでフィブロネクチンを固定化させた後
に加水分解酵素であるリゾチームを同様にして固定化さ
せた以外は同様にして医用複合材料を得た。実施例１０
と同様にしてラットに対する治癒効果を検討したが実施
例１０のものよりも一般と感染防止効果が優れていた。

実施例１２ 実施例２においでフィブロネクチンを固定化した後、次
のようにして抗菌性抗性物質であるポリミキシンＢを固
定化させた。即ち、フィブロネクチン担持ゼラチン−ポ
リプロピレン複合体を浸漬した蒸留水中にＮ−オキシコ
ハク酸イミドを加え、ざらに１−エチル−３−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を添加し
、水酸化ナトリウムでｐＨを５に保ちながら１２時間反
応させた。蒸留水で洗浄液、ポリミキシンＢのリン酸緩
衝液と２時間４〜５°Ｃて反応ざぜポリミキシンＢを固
定化した。

実施例１１のものと同等の治疼効果であった。

実施例１３ ボワエチレン膜を使用した以外は実施例１０と同様にし
て医用複合材料を得た。実施例１０とほぼ同等の治癌効
果であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ゼラチンをアルデヒド類で架橋しフィブロネクチン
   を固定化してなる創傷カバー材。 ２）ゼラチンを紫外線照射法で架橋しフィブロネクチン
   を固定化してなる創傷カバー材。 ３）ゼラチン層と合成高分子材料層とからなる複合体の
   ゼラチン層にフィブロネクチンを固定化してなる創傷カ
   バー材。 ４）感染防止効果のある薬材を固定化してなる特許請求
   の範囲第１項乃至第３項の創傷カバー材。 ５）ゼラチン層はアルデヒド類または紫外線照射法によ
   り架橋してなる特許請求の範囲第３項記載の創傷カバー
   材。 ６）合成高分子材料がポリプロピレンまたはポリエチレ
   ンである特許請求の範囲第３項記載の創傷カバー材。 ７）感染防止効果のある薬剤がリゾチーム、ポリミキシ
   ンＢ、プラジオマイシンおよびゲンタマイシンからなる
   群から選ばれた薬剤である特許請求の範囲第４項記載の
   創傷カバー材。