JPS62122599A - 酵素活性測定用ペプチド誘導体及びその使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は酵素、とりわけプロテアーゼの活性７１１ｉｊ
定用ベグチド誘導体ならひに該酵素活性６１Ｉｌ定法に
関する。

更に詳しくは、プロテアーゼとして分類される酵素、籍
にＥ、Ｃ，３，４，２１に分拳されるアルギニン、リジ
ンのペプチド類のカルブキシル部位を加水分解するタイ
プ、例えばトロンビン、トリプシン、グラヌミン、カリ
クレイン等の酵素活性測定に適したベグチド誘導体に関
するものである。

〔従来の技術〕

従来、血液凝固線溶反応における凝固因子定量用合成基
質として、プロテアーゼによるエステル加水分解反応及
びアミド加水分解反応を定量する二つの系統、すなわち
アルギニン又はリジンのエステル型基質及び７ミド型基
質が使用されている。

当初はプロテアーゼによる分解性の速さからエステル壓
基質か主流であったが、これらセリンプロテアーゼのエ
ステラーゼ活性は天然基質による凝血活性と必すしも一
致しないという問題かあった。

そこで最近はプロテアーゼ本来の活性を足首分析出来る
アミド型基質の使用が中心となり、分光光度計又は螢光
光度計で測定できるように発色基を持りた合成基質の研
究がなされてきている。

アきド型合成発色（螢光）基質の従来の代表的な発色基
としてはバラニトロアニリン（ｐＮＡ）がめげられる。

ｐＮＡを使用した合成発色基質のうちＢｚ−Ｌ−Ａｒｇ
−ｐＮＡ−Ｈｃノ（ＢＡＰＮＡ）はトリプシン様の発色
基質として開発され庭ものでるる。プロテアーゼがＢＡ
ＰＮＡを加水分解１することにより遊離された黄色のｐ
ＮＡを分光光度計で定量することによシブロチアーゼを
定量分析するのである。しかしながら、ＢＡＰＮＡはト
リプシン様のセリンプロテアーゼ例えばトロンビン、！
ラスミン、カリクレイン等のプロテアーゼにも容易に加
水分解されるため、特異性の高い基質ではなかった。そ
こで各セリンプロテアーゼに特異的に加水分解される合
成基′Ｒを得る為、天然基質の加水分解点周辺のアミノ
酸配列の研究が行なわれた結果、−ｅゾチドーｐＮＡ＠
尋体か開発された。例えはトロンビン用として開発され
たＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒ（−ｐＮＡ＠Ｈｃ）（
商品名ｃｍｏｙｔ＞ｚＹＭＴＨペンタファーム（Ｐ＠ｎ
ｔａｐｈａｒｍ）社）、）ｉ−Ｄ−Ｐｈ＊−Ｐｉｐ−Ａ
ｒｇ−ｐＮＡ・２ＨＣノ（商品名Ｓ　−２２３８カビ（
Ｋａｂｉ）社）などがある。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ところが、これらの合成基質を実際に臨床検査の分！Ｏ
Ｋ於いて使用しｆｃ場合、幾つかの問題があることかわ
かった。

すなわちｐＮＡを発色基とする合成基質はプロテアーゼ
にて加水分解され３８０　ｎｍに最大吸収を持つｐＮＡ
を遊離するか、これは通常未分解基質の影響をほとんど
受けない４０５　ｎｍで測定される。しかしながら臨床
検査に於ける一般的検体として考えられる血漿中に含１
れるビリルビンは、最大吸収を４００　ｎｍ前後に持つ
ためｐＮＡの吸収に重なりそのためプロテアーゼによる
加水分解により遊離されたｐＮＡの測定を妨害する。最
も簡易な測定法でるるエンド・ポイント法を冥施する際
は各検体の血漿のブランク値を測定し、反応するｐＮＡ
元色液から差し引かなけれはならないという欠点を有し
ていた。

同じことは血漿にヘモグロビンが混入した場合にも起る
。ヘモグロビンは４１５　ｎｍ前後と５５０ｎｍ前後に
吸収を持つため、この場合もｐＮＡの測定を妨害するこ
とにな９、ビリルビンの場合と同様の問題がある。史に
ｐＮＡの吸光係数は４０５　ｎｍで８＝９９５０　と低
値なため、測定感度が低いという問題がある。血漿中に
は測定すべきゾロテ了−ゼ以外にも多種多様な反応阻害
物が混在しており、測定Ｉへ度が低いとそれたけ多くの
検体扉か必要となり、反応に関与する反応阻害物の針も
増加して足せに影響を与える結果となる。従ってこのよ
うな臨床偵査分野に使用される合成基質は、測定感度が
高いことが′Ｍ要である。

一方２−す７チルアミン（／ＮＡ）、７−了ミノー４−
メチルクＶリン（ＭＣＡ）を代表とするアミド型螢光基
質もｐＮＡを代表とする発色基質と同様、容置のセリン
プロテアーゼに特異性を持たせる為、ペグチド部分が研
究され、檀々の構造式のものが開発さｎてきた。

しかしながら、合成螢光基質の場合、セリンプロテアー
ゼによって遊離したＭＣＡなどの螢光基質は非常に感度
良く測定できる利点ｉｊるるか、測定には螢光光度計か
必要であり、螢光光度計は一般に間両でおり、自動分析
装置にも組込まれていないことから病院等各励設に普及
しているとは言えず、その適用が制限されるという間曙
があった。

したがって本発明の目的は、高感度で特異性が高く、か
つ測定時に検体の吸収に影響さ扛ることなく分光光度計
で画定できる合成基質を提供することである。

本発明のもう１つの目的は、上記合成基質を用いてル素
活性を測定する方法を提供することである。

〔問題点を解決するだめの手段〕

上記目的は発色基として、ｐＮＡや螢光物質に代えて、
４−モルホリノアニリン（以下［ＭＡＪという）をカル
ゲキシル末端に結合してなるペプチド誘導体により達成
される。本発明のペプチド誘導体は、酵素とりわけプロ
テアーゼの活性測定用基質として特異性が高く、更に酵
素とりわけプロテアーゼの作用によって遊離したＭＡが
力ゾシー（力グラーとは、別の化合物と縮合反応し、色
素を生成せしめる化合物を意味する。）と縮合反応する
と、可視部長波長細１に最大吸収を有する色素を形成す
ることから、これを分光光度計で吸光度を測ることＫよ
ってビリルビンやヘモグロビン等の検体成分に影響され
ることなく非常に高感度で、広範囲に穫って上記酵素の
測定が可能である。

本発明は下記の一般式で表わされるペプチド誘導体およ
びその酸付加塩（以下、単に「ペプチド誘導体」と呼ぶ
）を提供するものである。

式中Ｒ￥′ｉ、Ｈまたはアミノ保膚基を衣わし、Ａ１は
フェニルアラニル基、ロイシル基、インロイシル基、バ
リル基、グルタミル基、リジル基、ｔａｒｔ−ロイシル
基のＬ体もしくは０体を表わし、Ａ２はフェニルアラニ
ル基、バリル基、グロジル基、ピベコリノイル基、ロイ
シル基、スレオニル基、アラニル基、リジル基のＬ体も
しくは０体を表わし、Ａ３はアルギニル基またはリジル
基・のＬ体をぺわす。

Ａ１、Ａ２またはＡ３がリジル基を表わすとき、そのε
−ＮＨ２基は保護基によって保ｊされていてもよく、保
膿さｎていなくてもよい。ｍｓ　ｎｔ１独立に、０また
は１を表わす。

上記Ｒで訳わされる７ミノ保護基の具体例としては、ウ
レタン型保ｊ基、たとえばベンジルオキシカルボニル基
（以下、ｆＺＪで表わす〕、ｐ−メトキシペンジルオキ
シ力ルゴニル４’、ｐ−クロロペンジルオキシ力ルゲニ
ル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカル？ニル基、ｐ−７
工ニルアグペンノルオキシカルデニルｇ％　ｔ−プトキ
シ力ルゴニル基、を−アミロキシカルボニル基、ｐ−ビ
フェニルイソグロビルオキシカルゴニル伏、ジイソグロ
ビルメチルオキシカルゴニル基、シクロペンチルオキシ
カル−ニル基などニアシル型保護基、たとえはホルミル
基、トリフルオロアセチル基、フタリル基、トシル−ｉ
、Ｏ−ニトロフェニルヌルフェニル基、アセチル基、ベ
ンゾイル基ナト；およびアルキル型保釉基、たとえばト
リチル基、ノニトロフェニル基などがあけられる。引付
加塩としては、酵素反応を阻害しない咳との塩、例えば
塩酸、硫酸等の鉱限、酢Ｉ設、ｐ−トルエンスルホン酸
等の有機酸の塩かあけられる。本発明のペプチド誘導体
は酸付加塩の形か安定であるか、その遊離形を得るには
上記酸付加塩をアルカリで中和すｎはよい。

本／Ａ明のペプチド誘導体の具体例としては、次のよう
な化合物かメヲフられる。

Ｚ−Ａｒｇ−ＭＡ−ＨｃＩ Ｈ−Ａｒｇ−ＭＡ轢２ＨＣＪ Ｚ−Ｄ−Ｐｈａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡＩＩＨｃノＨ−
Ｄ−Ｐｈａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡ・２ＨＣノＺ−Ｄ−
Ｖａミノ−Ｐｒ−Ａｒｇ−ＭＡ・ＨＣノＨ−Ｄ−Ｖａｎ
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡｓ２ＨＣノＺ−ｔｅｒｔ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡＩＩＨＣノＨ−ｔａｒｔ−Ｌ
ａｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡ・３ＨＣノＺ−Ｄ−ｔａｒ
ｔ−Ｌａｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡ−ＨＣノＨ−Ｄ−ｔ
ｅｒｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡ・３ＨＣノＨ−
Ｄ−ＶａノーＬ＠ｕ−Ｌｙｓ−ＭＡ・３）１Ｃノｇ−Ｔ
ｆａ−Ｌｙｍ−Ｐｈｓ−Ｌｙｅ−ＭＡ・２ＨＣｊＨ−Ｄ
−Ｌｙｓ−Ｐｂ＋−Ｌｙｓ−ＭＡ・３Ｈｃノ）１−Ｌｙ
ｅ−Ｐｈａ−Ｌｙｓ−Ａ４Ａ・３ＨＣＪ（又は４ＨＣ１
））１−Ｄ−ｔｅｒｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｅ−１１
ｒＬＡ＋＋３ＨＣノＤ−Ｌｅｕ−Ｐｈｓ−Ｌｙｓ−ＭＡ
・３１１Ｃ１Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｌｅ−１’ｈｅ−Ｌｙｓ−
ＭＡＤ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＭＡ・３ＨＣノＨ−
Ｄ−ＶａノーＬｙｌＩ−Ｌｙｓ−ＭＡ・３ＨＣノＢｏｃ
−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙａ−ＭＡ−）（Ｃ）・２Ａ
ｃＯＨＨ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙａ−ＭＡ・３ＨＣ
ノＨｏｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙａ−ＭＡ・２ＡｃＯＨ
Ｈｏｅ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｐｈ＠−Ｌｙｓ−ＬｆＡ・２Ａｃ
ＯＨＨ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｐｈ＠−Ｌｙｓ−ＭＡ・２１（Ｃ
）Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−Ｐｈａ−Ｌｙｅ−ＭＡ・２ＡｃＯＨ
本願明細書において別に記載のない場合には、アミノ酸
はすべてＬ−配位を有するものであり、略語はそれぞれ
次の意味を衣わす。

ＡＩＪＬ＝アラニン Ａｒｇ　＝アルギニン ＩＩｓ　＝イソロイシン Ｌｅｕ　＝ロイシン ｔｅｒｔ−Ｌｅｕ　＝　ｔｅｒｔ−ロイシンＬ７易＝リ
ジン Ｐｈｅ　＝フェニルアラニン Ｐｉｐ　＝ピペコリン酸 Ｐｒｏ　＝プロリン Ｔｈｒ　”スレオニン ■、ノ＝バリン Ｇｌｕ＝グルタミン酸 本発明のペプチド誘導体はたとえば次の方法によって合
成することができる。

前述の一般式 においてまず、発色基４−モルホリノアニリン（ＭＡ）
とアミノ酸Ａ３とを縮合し、次いでこれに別途合成した
Ｎ末端ベゾチドフラグメントＲ−ｔＡ、％云Ａ２）。を
縮合するか、または目的のペプチド構造を段階的にイ４
成して、使用した保鋤基を最後に除去するステツブワイ
ズ法も採用できる。

前記のペプチド誘導体の段階的合成においてはベグチド
化学において周知であるカッ！リング方法が採用され得
る。α−７ミノ基の株ｉ基としてはベゾチド化学におい
て周知の前記保ｊ基が採用でれる。−力、α−カル？キ
シル基の保ｄ基とじては、ベグチド化学において周知の
メトキシ基、エトキシ基またはベンジルオキシ基、ある
いは発色基の４−モルホリノ７二すノ基を採用すること
ができる。脱保穫されたα−カルデキシル幕は、Ｎ−ヒ
ドロキシサクシイミド（ＨＯ８ｕ）エステル等の活性エ
ステル、酸アジド、混合酸無水物による方法等で活性化
させることにより縮合反応に供することが出来る。更に
Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカル？ジイミド（ＤＣＣ）
や水溶性カルゴノイミドによっても活性化され、こｎら
カル？ジイミド共存下Ｎ−ヒドロキシサクシイミド（Ｈ
Ｏ８ｕ）や１−オキシベンゾトリ了ゾール（ＨＯＢｔ）
を添加しラセミ化を抑制させるＥｌｎｔｏｐｆ法も採用
され得る。アルギニンのグアニジノ基及びリジンのｅ−
７ミノ基の保諌ハベプチド化学において周知の保祿基’
ｔ−ｉ用し得る。例えはアルギニンのグアニジノ基に関
しては、２基（ベンジルオキシカルがニルｉ　）　７ｏ
ｓ　％　（）シル基〕、ＮＯ□基にトロ基〕が使用でき
るし、又グロトン化し保護することも出来る。リジンの
ε−７ミノ基に関しては、２基（ペンノルオキシカル？
ニル７５）、ＺＣノ基（２−クロロペンノルオキシカル
？ニル基）、Ｔｏｓ基（トシル基〕、Ｂｏａ基−（第三
プトキシカルゴニル基）、ＦＯｒ基（ホルミルｇ　）　
、Ｔｆａ基（トリフルオロアセチル基）が使用し得る。

次に上記本発明のペプチド誘導体を基質として用いて酵
素活性を測定する方法について説明する。

本発明の酸素活性１ｌｌｌｊ定法において、酵素とりわ
けプロテアーゼの活性測定用基質としては、上記一般式
で衣わされるペプチド誘導体のなかから、Ｋｍ値が低く
かつ反応最大速度（ｖＩＴ１１ｘ値）の大きい％異性の
高いものを選択することが泣ましい。

本発明のペプチド誘導体に酊バとりわけプロテアーゼを
作用させることｒ（よって遊＃ＩＩしたＭＡにカプラー
を縮合反応てせると、可視部長波長側に最大吸収を有す
る色素が生成する。

このようなカプラーとしては、アニリン系化合物、トル
イノン系化合物、アニリン系化合物、フェノール系化合
物、ナフトール系化合物、安息香酸系化合物等、ＭＡと
縮合反応して可視部長波長Ｍ　Ｋ最大吸収を有する色素
を形成するものはすべて用いることが出来る。とりわけ
アニリン系化合物には７００　ｎｍ以上の可視部に最大
吸収を有する色素を形成するものが多く、たとえばＮ−
エチル−Ｎ−スルホエチル−アニリン及ＵＮ−−ｒ−ｆ
ルーＮ−スルホプロピル−アニリンは７３５　ｎｍに最
大吸収を有する色素を形成する。

ＭＡとカプラーとの縮合反応は、通常、酸化剤の存在下
で進行する。このような酸化剤の具体例としてはメタ過
ヨウ素酸をめげることができる。

またこのような酸化剤に代えて、この縮合反応をすすめ
ることかできる酸化酵素を用いることもできる。このよ
うな酸化酵素の具体例としてはチロシナーゼがあげられ
る。

ＭＡとの反応によって生成したこのような可視部長波長
側に最大吸収を有する色素を分光光度計で吸光度を測る
ことによって、検体中の成分、例、ｔＨビリルビンやヘ
モグロビンの吸収の影！＃を受けることなく、かつ検体
のブランク値をｍ＋ｊ定することなく、エンドポイント
法により、検体中の特定の酵素の活性を測定することが
できる。

更に本発明のペプチド誘導体を基質として用いた場合の
測定感度は、ｐＮＡを発色基として有する基質を用いた
場合より数倍高く、たとえばＮ−工ｆ　ルーＮ−スルホ
エチル−アニリン１　ｆｃ　ハＮ　−エチル−Ｎ−スル
ホグロピルーアニリンをカプラーに用いた場合ε：５０
．０００となりｐＮＡ含有基質の場合にくらべ５倍も高
い。従って反応阻害物の影響も従来のｐＮＡの場合にく
らべ大きく低減できる。

上記カプラーは、酵素とりわけプロテアーゼの作用によ
って遊離したＭＡとのみ反応し、基質すなわち上記ペプ
チド誘導体そのものとは反応しないため、試楽ブランク
値が上昇する心配は全くない。またＭＡと力グラーの縮
合反応で形成された色素の一度とト素活性は非常に広範
囲に渡って比例関係にあるため、本発明のペプチド誘導
体を用いた１！！？素活性測定における倹ｔｉは、非常
に広範囲に渡って直線性を示す。

〔う６門の効果〕 本発明のペプチド誘導体は、これ１＆：酵木副定用基質
として作用したばあい、高感度で持具性が高く、測定時
、検体成分による妨害を受けることなく分光光度計で測
定かでき、しかも非常に広範囲の酵素活性に対して直線
性を示す。

〔実施例〕

以下実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発
明はこれら実施例によって駆足されるものではない。

実１１例によって得られた溶出液及び生成りの分析はシ
リカゲルで被へされたガラス板（Ｍａｒｃｋ社Ｆ２５４
）を用いて薄層クロマトグラフィーによって行った。薄
層クロマトグラムは次の溶剤系によって展開した。

Ａ：クロロホルム／メタノール（９：１）Ｂ：ｎ−グロ
ノ臂ノール／酢酸エチル／水（７：１：２）Ｃ：ｎ−ブ
タノール／酢酸／水（６：３：２）Ｄ：クロロホルム／
メタノール／酢酸（１０：１０：１）Ｅ：ブタノール／
酢ｒＲ／水／ピリジン（４：１：２：１）史にクリ中の
次の略胎はそれぞれ以下の意味をｋわす。

ＡｃＯＨ＝酢酸 Ｂｏダ；第三ブチルオキシカルボニル基ＤＣＣ＝ジシク
ロへキシルヵルゲノイミドＤＣＵ　＝　ジシクロへキシ
ルウレア ＤＭＦ　＝ジメチルホルムアミド Ｅｔ３Ｎ＝）リエチルアミン ＥｔＯＨ＝エタノール ＭｅＯＨ＝メタノール ＯＥｔ　＝エチルオキシ基 ０Ｈ＊　＝メチルオキシ基 ＴＬＣ＝　４　ｍクロマトグラフィー ＷｓｃＩ　＝　Ｎ−エチル−Ｎ′−３−ノメチルアミノ
グロピル力ルゲジイミド ２＝ペンジルオキシカル〆ニル ＺＣノ＝２−クロロペンノルオキシカルざニル風＝４−
モルホリノアニリド ＨＯＢｔ　＝　１−オキシベングトリ７クールＴＨＦ＝
テトラヒドロフラン ’Ａ　’ＭＪ＋例　Ｉ　　　　Ｚ−Ａｒｇ−ＭＡ−ＨＣ
ｊ　　（Ｊ　）９．６６り（５４，３ミリモル）の４−
モルホリノアニリンと１６．７４Ｆ（５４，３ミリモル
）のＺ−Ａｒｇ−ＯＨをＴＨＦ　１６０ｍｌ及び水１２
０ｍ／のｒｘ合液に溶博し、ｌ規定塩酸にてｐＨ４，８
に調整する。これに０〜５℃にてＷＳＣＩ塩酸塩１１．
４３２（５９，７ミリモル）のＴＨＦ　１００　ｍｌ溶
液を滴下反応させ、その間１親定塩酸もしくは４％炭酸
水素す）　ＩＪクム溶液にて−４，７〜５．０の範囲と
なるようにコントロールする。３時間室温にて反応後（
２０〜２５℃）、ＴＨＦを減圧留去すると粗Ｚ−Ａｒｇ
−ｋｌＡ　２６．８９　（９７，８％）が得られる。こ
の粗Ｚ−Ａｒｇ−ＭＡをＴＬＣ展開液Ｂ２００１ｔ／に
溶解し、シリカゲルカラムにかけ、展開液Ｂで展開し精
製した。ｍ、ｐ、１５３〜１５５℃を有する（１）１８
．２２　Ｐ　Ｃ６６，５％）か得られ、このものはＴＬ
Ｃで単一スポットを与えた。（Ｒｆ＝０．６７（展開液
Ｂ）、Ｒｆ＝０．７６（展開液Ｄン〕。

−ｒ、ｉ（ｓスペクトル　：　（Ｍ＋Ｈ）ａｔｒｒＶ′
ｚ　４６９（分子１４６８）１．３０（ｍ、４Ｈ＊　Ａ
ｒｇのβ、　ｒ−ＣＨ２−）実施＠２　　　　Ｈ−Ａｒ
ｇ−ＭＡ・２ＨＣノ　（ＩＩ）（１）７．Ｏｊｌ　（１
３，８ミリモル）をＭｅＯＨ：　ＡｃＯＨ：水（８：２
：１）　　の混合浴１１５０−に浴解し１０チノｅラジ
ウム炭素５ノを加え、水素気流中室温で３時間接触還元
を行なう。反応液を濾過し得られた濾液を減圧乾固し、
１規定塩ｃｌｊｔ５０ゴを加え、減圧乾固する。残渣に
水を加え再び減圧乾固し、この仲作を４回繰返し完全に
塩酸を蒸発させると、無’Ｒ形ｏ（ｍ）５．５１！　（
９７，８％　）　カＱラレタ。コノものはＴＬＣ（展開
液Ｃ）で羊−ヌボットを与えた（Ｒｆ　＝　０．２５　
）。

マス・スペクトル：　（Ｍ＋Ｈ）”ａｔ即４３３５（分
子贋、３３４）２、１０〜１．３２（ｍ、　４Ｌ　Ａｒ
ｇのβｏｒ−ｃｎ２）。

実施例３−　（ａ）　　Ｚ−Ｄ−Ｐｈ＠−Ｐｒｏ−０）
１　（ＩＩｌｍ）Ｚ−Ｄ−Ｐｈ＊−ＯＨ２，９９Ｆ　（
１０ミリモル）　、Ｈ−Ｐｒｏ−ＯＭ・・ＨＣｊ　　１
．８２ｊｌ（１１ミリモル）１クロロホルム２０−に加
え、次にＥｔ、Ｎ　　１．１１Ｐ（１１ミリモル）、Ｈ
ＯＢｔｌ、３５Ｐ（１１ミリモル）を加え溶解する。こ
れに０〜５℃にてＤＣＣ２，０６５’（１０ミリモル）
クロロホルム溶液ＩＱｍ／を加え０〜５℃にて３時間反
応後、更に室温（２０〜２５℃）で１８時間反応させる
。生成したＤＣＵを濾別し、両液を水５０ＩＩＬｌ１次
いで５％炭酸水素す）　ＩＪウム水浴液５０１で洗浄し
た後クロロホルムｔＭ圧首去し、残渣をＭ・ＯＨ１８，
５紅にさかし、次いで水８．５セ、１規定水酸化す）　
ＩＪウム１０ｍ１を加え室温（２０〜２５℃）で３時間
反応させた後、１規走塩酸に−て−を２．５にしクロロ
ホルム１００ｒＲｉを加え抽出する。クロロホルム層を
水１００　ｔｔｌにて洗浄の後、クロロホルムを減圧留
去し、無定形の（ｎｌａ）３．６５５’（９２，１チ）
を得た。このものはＴＬＣ（Ｗ開成Ｃ）で単一スポット
を与えた（Ｒｆ　＝　０．８５　）。

実施例３−　（ｂ）　　Ｚ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ−ＭＡ・ＨＣｊ（Ｉ［ｌｂ　）（Ｉｔ）　２．２３９
　（６ミリモル）と（ｎｌａ）２．１ＯＦ（８ミリモル
）を水２０Ｒ／、ＴＨＦ　３０　ｍ混合液に加え溶解し
、４ｑｂ炭酸水素ナトリウム水溶液で−１を６．０に調
整し、これに０〜５℃にてＷＳＣＩ塩酸塩１．６１ｊｌ
（１０ミリモル）の水浴液１０３１１７を加え０〜５℃
にて３時間、次いで室温（２０〜２５℃〕にて２００時
間反応せる。反応中−を５．８〜６．２の範囲にコント
ロールする。反応液を減圧乾固し残液にクロロホルム５
０１１１７を加え溶解し、４嗟炭峡水素ナトリウム水ｔ
６液２００１１／、次いで水２００ｎ／で洗浄後クロロ
ホルムを減圧留去する。残渣にＴＬＣ展開＆ＢをｌＱｍ
／加えて溶解しシリカゲルカラムにかけ、展開液Ｂ、次
いで１％ＨＣノを含んだ展開液Ｂで展開して精製し、更
にアンバーライトＸＡＤ　−７（登録商標ロームアンド
ハーフ社）疎水クロマトグラフィーで精製の後に凍１話
乾燥すると、不足形の＜ｍｂ）　２．４５’　（５８チ
）か得られた。このものはＴＬＣ（展開液Ｄ）で章−ス
ポットを与えた（Ｒｆ＝０．８４）。

マス・ス（クトル：　（Ｍ＋　Ｈ）　”ａｔ　ｒｒｙ’
ｚ　７１３（分子贅ゴ１２）実施例４　　Ｈ−Ｄ−Ｐｈ
ｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｋｔＡ・２１（Ｃ１（ＩＶ）（Ｉ
［Ｉｂ）　１．１６ｊｌ　（１，５５ミリモル）をＭｅ
ａｌ　：　ＡｃＯＨ：水（８：２：１）の混合液４０１
７に溶解し、１０％パラノウム炭素１．５９を加え、水
素気流中常温（２０〜２５℃）で６時間接触還元を行な
う。反応液を癖遇し、揶液を減圧乾固し、１ｇ４．定塩
酸３０１１Ｌｌを加え減圧乾固する。残漬に水を加え再
び減圧乾固し、この操作金４回繰返し完全に塩酸を蒸発
させる。残渣にＴＬＣ展開液りをｌＯｍ加えて醪解しシ
リカゲルカラムにかけ、展開ｇＤで展開し１４ＷＬ、更
にアンバーライトＸＡＤ　−２（登録商標、ロームアン
ドハーフ社〕疎水クロマトグラフィーで精製の後、凍結
乾燥し無定形の（ＩＶ）　０．７４９（７３係）を得た
。これはＴＬＣで単一スポ、トヲ与えたＣＲｆ　＝　０
．４０（展開液Ｃ）、Ｒｆ＝０．２７（展開ｇＤ））。

マス・スペクトル：　　ＣＭ十Ｍ　）　”ａｔ　ｒｎ７
’ｚ　５７９（分子ｉ゛５７８）■ヌベクトル：　（Ｄ
Ｍｓｏ−ｄ６） ＡｒｇのＣＯＱ　）−７，７２（ｍ−２Ｈ−Ｎ１３）−
７，５６（ｄ−２Ｈ−４，３２（ｍ　＊　Ｉ　Ｈｅ　Ａ
　ｒ　ｇのα−ＣＨ）、　　４．２３（ｍ、　ＩＨ，Ｐ
ｒ。

のα−Ｃ１ｌ）、　　４．０２（ｍ、　ＩＨ，Ｐｈｅの
α−ＣＨ）。

−ＯＭ２）　、　　１．９０−１．５０（ｍ、　８Ｈ，
Ａｒｇのβ、ｒ−ｃＨ２＋Ｐｒｏのβ、ｒ−ＣＨ２） 実施例５−　（ａ）　　Ｚ−Ｄ−Ｖａｎ−Ｐｒｏ−ＯＨ
（Ｖ−ａ）Ｚ−Ｄ−ＶａノーＯＨ１，ＯＰ　　（３，９
８ミ　リモル　）と　Ｈ−Ｐｒ。

−ＯＭ・・ＨＣｊ　Ｏ，７３ＰＣ４，３８ミリモル）を
使用し実施例３−（ａ）の操作にしたがって無定形の（
Ｖａ　）１．０３Ｆ（７４，３１）を得た。このものは
ＴＬＣ（展開液Ｃンで単一７４．トを与えた（Ｒｆ＝０
．７８）。

実施例５−　（ｂ）　　Ｚ−Ｄ−Ｖａｊ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ−凧−ＨＣｊ（ｖｂ）（ＩＩ）　１．２２９　（３，
３ミリモル）と（Ｖａ）１．０３５’（２，９６ミリモ
ル）を使用し実施例３−　（ｂ）の操作にしたかって無
定形の（Ｖｂ）　９２０ダ（４４，５％）を得た。この
ものはＴＬＣ（展開液Ｃ）で琳−のスポットを与えた（
Ｒｆ＝０．６７）。

マス・スペクトル：　（Ｍ＋　Ｈ）　”ａｔ　ｒｖ’ｚ
　６６５（分子ｆｉ−６６４）実施例６　　ｎ−ｏ−ｖ
ａミノ−Ｐｒ−Ａｒｇ−ｂ／ｉｋ＊２Ｈｃノ（Ｖｌ）（
ｖｂ）　９２０１１９（１，２５ミリ％ル）　’に使Ｐ
ＡＬ、実施例４の操作にしたがって無定形の（Ｍ）６３
０Ｉｎ９（８３，５％）を得た。このものはＴＬＣで皐
−のスポットを与えた（Ｒｆ　＝　０．２０　（展開液
Ｃ）、Ｒｆ＝Ｏ，ＳＯ（展開液ＤＪ）。

マス・スペクトル：　（Ｍ＋　Ｈ）　”ａｔ　ｍ／ｚ　
５３１（分子１ｉ５３０）ＮＭＲヌ４クトル：　（ＤＭ
ＳＯ−ｄ６）３Ｈ，Ｖａノのα−ＣＨ＋Ｐｒｏのα−Ｃ
Ｈ＋Ａｒｇのα−ＣＨ）。

串 ３．１５（ｍ、　２Ｈ，Ａｒｇのｄ−Ｃ）１２）、　　
２．２２〜１．４３（ｍ、　８Ｈ，Ｐｒｏのβｓ　７”
　−ＣＨ２＋　Ａｒｇのβ、ｒ−ＣＨ２）。

１．００（ｄ、６Ｈ，Ｖａ）の−（ＣＨ，）２）。

４７　ｉＨＪ　７−　（ａ）　　Ｚ−ｔａｒｔ−Ｌａｕ
−Ｐｒｏ−ＯＨ（■ａ）Ｚ−ｔａｒｔ−Ｌｅｕ−ＯＨ４
，６８ｊ’　（１７，６ミリモル）とＨ−Ｐｒｏ−ＯＭ
ａ・ＨＣＪ　３．２１　Ｐ　（１９，４ミリモル）を使
用し、実り例３−（ａ）の操作にしたがって無定形のい
１ｌａ）　２．７４９　（４３，０％）を得た。このも
のはＴＬＣ（展開液Ａ）で単一スポットを与えた（Ｒｆ
＝０．４３）。

マス・スペクトル：　ＣＭ　＋　Ｈ）　”ａｔ　ｍ／ｚ
　３６３（分子５３６２）！１！施例　７　−　　（ｂ
）　　　Ｚ−ｔａｒｔ−Ｌａｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡ
−ＨＣＪ（Ｖｌ−ｂ）（ＩＩ）２．２３９　（５，５ミ
リモル）と（■ａ）１．８１Ｐ（５，０ミリモル）を使
用し、実施例３−（ｂ）の操作にしたがって無定形の（
■ｂ）２．６５ノ（７８，３％）を得た。このものはＴ
ＬＣで単一のスＩヮトを与えたＣＲｆ　＝　０．７７　
（展開液Ｃ）、Ｒｆ＝０．８８（展開液Ｄン〕。

マス・スペクトル：　（Ｍ＋　Ｈ）　＋＆ｔ　ｒＶ′ｚ
　６７９（分子ｖ６７８）実施例８　　Ｚ−ｔ＠ｒｔ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡ＊３ＨＣノ（■）（■ｂ
）　２．０　？　（２，８ミリモル）を使用し、実施例
４の操作にしたがって無定形の（ｔｉｌ）　１．４０　
ｊｉ（７６，４％）を得た。このものはＴＬＣで単一の
スポットを与えた（Ｒｆ　＝　０．３４　（展開液Ｃ）
、ａｔ＝０．４８（展開液Ｄ））。

マス・スペクトｐｖ　：　ＣＭ　＋　Ｈ）　”ａｔ　ｎ
７ｚ　５４５（分子１５４４）即スペクトル：　（ｐＭ
ｓｏ−ｄ６） ４．５０（ｔ、　ＩＨ，Ｐｒｏのα−ＣＨ）、　　４．
４２（ｒｎ、　ＩＨ，Ａｒｇα−（Ｊυ＊　　３．８２
〜３．４８（ｍ、　２Ｈ＋　Ｐｒｏのδ−ＣＨ２）。

δ−ＣＨ２）、　　２．１５〜１．５０（ｍ、　８）１
．　Ｐｒｏの！、γ−ＣＨ２＋　Ａｒｇのβｌ　ｒ−Ｃ
Ｈ２）Ｎ　１．０４（ａ、　９Ｈ，ｔ＠ｒｔ−Ｌａｕの
−（Ｃｋ１３）３） ’４６１Ｍ　？ｊｌ　９−　（ａ）　　Ｚ−Ｄ−ｔｅｒ
ｔル＊ｕ−Ｐｒｏ−ＯＲ（ＩＸａ）Ｚ−Ｄ−ｔｅｒｔ−
Ｌｓｕ−ＯＨ４，４２Ｆ　（１６，７ミリモル〕とＨ−
Ｐｒｏ−ＯＭｅ・ＨＣｊ　３．０３　ｊｉ　（１８，３
ミリモル〕を１史用し、実施例３−（ａ）の操作にした
がって無定形の（ｌＸａ）　４．０１５’　（６６，３
％）を得た。このものはＴＬＣ（展開ｆｉＡ）で単一の
スポットｆ与えた（Ｒｆ　＝　０．４８　）。

マス・スペクトル：　（Ｍ　＋　Ｈ）　＋ｍｔ　ｍ／ｚ
　３６３（分子Ｌｉ−３６２）実施例９−　（ｂ）　　
Ｚ−Ｄ−ｔ＠ｒｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｌｒ−ＭＩＨ
Ｃノ（ｌＸｂ）（■）２．２３９　（５，５ミリモル）
と（１）（ａ）　１．８１２（５，０ミリモル）を使用
し、実施例３−　（ｂ）の操作にしたがって無定形の（
ＩＸｂ）　２．９４　Ｐ　（７８，３％〕を得た。この
ものはＴＬＣにて琳−のスポットを与えた（Ｒｆ＝０．
７７（展開液Ｃ）、Ｒｆ＝０．８６（展開液Ｄ）〕。

マス・スペクトル：　（Ｍ＋　Ｈ）　”ａｔ　ｍ７’ｚ
　６７９（分子ｉ　６７８）！Ｋｉ由例　１０　　　　
Ｈ−Ｄ−ｔａｒｔ−Ｌｓｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＦＭ・３
ＨＣＪ　　（Ｘ）（ＩＸｂ）　　１．９４１！　（２，
７ミリモル）を使用し、実施例４の操作にしたかって無
定形の（Ｘ）　１．４０　Ｆ（７９，３チ）を得た。こ
のものはＴＬＣで単一のスポットを与えた（Ｒｆ　＝　
０．３９　（展開ＫＣ）、Ｒｆ＝０．６４（展開液Ｄ）
〕。

−ｑスａスペクトル：　（Ｍ＋　Ｈ）　”ａｔ　ｒｒＶ
ｚ　５４５（分子ｆｇ　５４４）（ｍ＋　２Ｈ＋　Ｐｒ
ｏのα−ＣＨ＋Ａｒｇのα−ＣＨ）、　４．００（ｍ。

３．１２（ｍ、　２Ｈ，Ａｒｇのｄ−ＣＨ２）−２，２
２〜１．４２（ｍ。

８Ｈ，Ｐｒｏのβ、ｒ−ｃＨ２＋　Ａｒｇのβ、　ｒ−
ＣＨ２）。

１、０５（ｓ＋　９１Ｌ　ｔ＠ｒｔ−Ｌ＠ｕの（ＣＨ３
）５）実２１！Ｉｉ例１１　　　ｇ−Ｚ−Ｌｙｓ−ＭＡ
＊２ＨＣｊ　　（ＸＩ　）２．６７７（１５ミリモル〕
の４−モルホリノアニリンと、７，１６ノ（１５ミリモ
ル）のα−Ｂｏｅ−ｇ−Ｚ−Ｌｙａ−Ｏ８ｕ　ｆ　ＣＨ
Ｃｊ、２００ｍに溶解し、室温で３時間攪拌し反応させ
る。反応後、１０％Ｎ１□ｃｏ３水２００敗と水８００
ｍＪ、次いで、１０％クエン酸水２Ｏ０Ｍと水６０ＯＮ
ｌｉｒ洗浄し、ＣＨＣＪＩ、　ｆ減圧餉去した後、残渣
をエーテル３００　ａｔで洗浄する。乾床して、α−Ｂ
ｅｅ−ｇ−Ｚ−Ｌｙｅ−ＭＡ　５．７５　ＰＣｌｏ、６
４ｍＭ、収率７１．３％）ヲ得た。さらに、とのα−Ｂ
ｏｃ−ｇ−Ｚ−Ｌｙｅ−ＭＡ　５．４１２（１０ミリモ
ル）に、水冷下、４ｇＬ定−ＨＣＪソオキサン５０ｍを
加え、３０分間攪拌後、ジエチルエーテル１００ｄを加
え、析出した固体を一取し、乾燥し無足形の（ＸＩ）４
．７９Ｆ（９３，３係〕を得た。このものはＴＬＣ（０
ムＣ１３：ＭｅＯＨ：　Ｈ２Ｏ”　６　：　１　：　０
．１　）　　で単一スポットを与えた（Ｒｆ　＝　０．
３３　）。

マス・スペクトル：　（Ｍ＋　Ｈ）　”ａｔ　ｒＱ／１
＝４４１　（分子Ｑ４４０）実施例１２　　Ｈ−Ｄ−Ｖ
ａＪｔ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＭＡ・３ＨＣＪ　（ＸＪＪ）
０．５１３ｉ＋（１はリモル）の（ＸＩ）と０．３６ノ
（１ミ　リ　モル〕　のＺ−Ｄ−ＶａノーＬｅｕ、　　
０．２　６　９　　（２ミ　リ　モル）のＥｔ　ＮをＣ
ＨＣｊ、２０ｊｔ／に＠附し、氷冷下で０、１４１１　
（１ミリモル）のＨＯＢｔ、　０．２０　Ｆ（１ミリモ
ル）のＤＣＣを加え、０〜５℃で３時間、次いで室温（
２０〜２５℃・〕にて２２０時間反させる。

生成したＤＣＵ　ｉ　Ｉｌｌ別し、帥液’ｚ　ｌ　Ｏｆ
ｂ　Ｎａ２ＣＯ３水２０−で洗浄する。析出したグルを
槽別し、熱ＭｅＯＨ３５ａｔから丹結晶する。階数した
結晶？、ＭｅＯＨ１０ｍｌ、水１１１ｕ！、ＡｅＯＨ２
ｍの混合液にａｍし、１０％／４’ラノクム炭素０．２
５１を加え、水射気流下中、室温で１時間接触還元を行
なう。反応液を間過し、得られた泗液を減圧乾固する。

残渣にＣＨＣｊ。

ｌ　ｍｌ、ｋｉａＯＨＯ，４Ｉｌｌ　、　ＡｅＯＨＯ，
（１２ｍｌ　＆合液を加えて溶解し、同組成の展開液を
用いて、シリカグルクロマトにより精製する。侍らｆし
た画分を減圧乾固し、ＩＮＨＣ）ＩＭを加え減圧乾固す
る。残渣に水を加えて、再ひ餓圧乾固し、この操作を３
Ｉ１ｇｌ繰返し、凍結乾燥して１，１．Ｉ！ｌｉ足形の
（罵）０．１２ノ（１８条）？得た。このものはＴＬＣ
で単一のスポットを与えた（Ｒｆ＝０．６０（展開液Ｃ
）、Ｒｆ＝０．６７（展開液Ｄ　）） マス・スペクトル：　ＣＭ＋　）ｌ　）　ａｔ　ｒｒ７
ｚ　５１９（分子銚５１８）ＮＭＲスペクトル：　（Ｄ
Ｍｓｏ−ａ６）Ｖａｎ−Ｌｅｕ　＞るいはＬｅｕ−Ｌｙ
ｓのＣ０ＮＨ）　、　　８．３５６１　　Ｌｅｕ−Ｌｙ
ＩＩ　のＣ０ＮＨ）、　　　８．０５（ＩＴＩ、　　３
）ｉ、ＶａＪ　めるいはＬｙａの−ＮＨ３）、　　７．
６５（ｄ、　２Ｈ９Ｌｙｓの−ＮＨ２）、　　４．３５
（ｒｎ、　２Ｈ，ＬｅｕとＬｙｍの２．１（ｍ、　　Ｉ
Ｈ，ＶａＪのα−ＣＭ）、　　　１．８（ｑ、　　２Ｈ
，Ｌｓｕのβ−ＣＨ２）　ｅ　　１−８〜１．３（ｍ、
　６ｎ、　Ｌｙｓの１．ｒ。

６−　ＣＨ２）　ｅ　　Ｏ，９５（ｄ　−ｄ　−６Ｈ−
Ｖａｎ　）−（ＣＨｓ　）２　）　−０、９３〜０．８
３（ｄ−ｄ、　６Ｈ，Ｌｅｕのδ−（Ｃ）１．）２）実
施例１３−（ａ）　　ε−ＺＣｚ−Ｌ−Ｌｙｍ−ＭＡ・
２ＨＣ４（ＸＩＩ［ａ）α−Ｂｏａ−ｅ−ＺＣＩ−Ｌ−
ＬｙｔＩ−ＯＨ２０，７ｇ（５０ミリモル）をクロロホ
ルム５００ｆｆｌ／Ｋ”浴解し、ＨＯＢＴ　６．７６ｇ
（５０ミリモル）、４−モルホリニノアニリン８．９１
ｇ（５０ミリモル）を加え、水冷下で、クロロホルムに
溶解したＤＣＣＩ　０．３　ｇ（５０ミ１７　モル）を
少しずつ滴下した。室温で３時間反応させた後、１０４
　ＮＩＬＣＯ３水５００１１１２回、１０ｑｂク工ン酸
水５００＋７２回、水５００ｆｆ１回で洗浄、クロロホ
ルム／Ｉ　’ｋ　２８０　ｍｌ程度まで濃縮した。冷却
して析出し＆　ＤＣＵを戸別し、クロロホルム層を濃縮
乾固した。再びクロロホルム８Ｑｔｘｌｆ加エテ加温溶
解し、エーテル８００ｍ１に１時間かけて滴下し、３０
分攪拌後析出したｒルを戸数した。乾燥後、クロロホル
ム１００ｄで加温溶解し前と同様にエーテル８０（１１
／に滴下、析出したｒルを戸数した。もう一度クロロホ
ルムーエーテルでの再結を行なった後、水冷下で４　Ｎ
　ＨＣＬ　／ジオキサン１２０１１１／（４８０ミリモ
ル）を加え、そのままで３０分間攪拌した。エーテル３
５０１１Ｑ−加えて析出物を戸数した。乾燥して無定形
の（ｘｍａ）１９．１．９　（７０，１係）を得±。こ
のものは、ＴＬＣ（展開液Ａ）で単一スポットを与えた
。（Ｒｔ　＝　０．２３　）実施例１３−（ｂ）　　Ｈ
−Ｌ−Ｐｈｅ−ｇ−ＺＣ２−Ｌ−Ｌｙｓ−凧・ＨＣｌ（
ＸＩ［［ｂ） （Ｘｌｌｌａ）　８．１７　ＩＩ（１５ミリモル）　幕
Ｅｔ５Ｎ　４．０８１１７（３０ミリモル）ヲ、クロロ
ホルム３００　ｍｌに溶解し、α−Ｂｏｅ−Ｌ−Ｐｈａ
−ＯＲ３，９８、！ｉ’　（１５ミリモル）、ＨＯＢＴ
２．０３ｇ（１５ミリモル）を加えた。クロロホルム少
ｉ１に溶かしたＤＣＣ３，０９ｇ（１５ミリモル）を水
冷下で少しずつ滴下し、室温で一夜反応させた。１０　
Ｔｏ　ＮａＣＯ５水２５０　ｖｉｌで２回、１０チクエ
ン酸水２５０ｄで２回、水２５０　ｆｌｉｔで１回洗浄
した。クロロホルム層を１００ｄ程度まで濃縮し、　Ａ
ｃＯεｔ　１００１１！ｊを加えて冷却した。析出物を
Ｐ取し、水冷下で４　Ｎ　ＨＣＬ　／ゾオキサン６０ｍ
１（２３７ミリモル）を加え、水冷下で２０分間攪拌し
た。エーテル１７８ｍ／を加え、水冷のまま、４０分間
攪拌して析出物を戸数した。これをシリカダルクロマト
（展開液クロロホルム：メタノール＝２０：３）で清書
した。濃縮乾固して、無定形の（ＸＩＩｂ）　４．１　
ｇ（４１，９優）を得た。このものは、ＴＬＣ（展開液
Ａ）で単一のスポットを与えた。

（Ｘ［ｅ） （ＸＩ［Ｉｂ）　１．８１　、！７　（２，８ミリモル
）　トＥｔ、Ｎ　０１２８ｄｆｔクロロホルム８０１１
１７に溶解し、ＨＯＢＴ　０１３８ｇ、α−２−ε−Ｔ
ｆａ−Ｄ−Ｌｙｓ−ＯＨ１，０５！　（２，８ミ　リモ
ル）を加え、少量のクロロホルムに溶かし九ＤＣＣＯ，
５８，９（２，８ミリモル）を、水冷下で少しずつ滴下
した。−夜室温で攪拌後、析出したｒルをメタノール２
０−を加えて溶解し、エーテル１５０ｄを加え攪拌した
。析出物を戸数して乾燥後、メタノール３０Ｉｎ１．！
：クロロホルム１００ＩＲ１を加え、加温溶解し、エー
テル１５０ｄを加え、氷冷した。析出物を水１０　ｍｌ
、　ＭｅＯＨ８０ｒｔｔ、　ＡｅＯＨ２０ｄの混液に俗
かし、少量の水で湿した１　０　＊　ｄｒｙ　ｐｄ／ｃ
２、２４　ｇを加え、水素を吹き込んで（２００＃Ｉｌ
／ｍｉｎ　）　ｓ室温で６時間還元した。触媒をミＩＪ
　ｙｌア濾過し死後、６　Ｎ　ＨＣｌ　３　ｄを加え、
濃縮乾固した。

水を加えて、濃縮乾固することを３回繰返した後、凍乾
して無定形の（Ｘｌｌｌｃ）　１．５８９　（７１，８
チ）を得た。このものはＴＬＣで単一のスＩットを与え
た（　Ｒｆ　＝　０．５０　（展開液Ｃ）、Ｒｆ＝０．
７３（展開液Ｅ））。

マス・ス４クトルＣＭ＋Ｈ］”ａｔ　ｒｒｖ／ｚ＝６７
８　（分子量６７７．８）旙侃・スペクトル（ＤＭＳＯ
−ｄ６） Ｌｙｓ”ＰｈｅあるいはＰｈｅ−ＬｙｓのＣ０ＮＨ）　
、　８．５８（ａ　、　ＩＨ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅあるいは
Ｐｈｅ−ＬｙｓのＣ０ＮＨ）＋　− ８，３１（ｍ　、　３Ｈ、Ｌｙｓあるいはｇ−Ｔｆａ−
ＬｙｓのＮＨ３）８．１６　（ｍ　ｓ　５Ｈｒ　ｇ−Ｔ
ｆａ−ＬｙｓあるいはＬｙｅの４．６８　（ｍ　、　Ｉ
Ｈ、ＬｙｓあるいはＰｈｅのα−ＣＨ）。

４．３８（ｍ、ＩＨ，ＬｙｓあるいはＰｈｅのα−ＣＨ
）。

３．８２〜３．７２　（ｍ　、　５Ｈ、ε−Ｔｆａ−Ｌ
ｙｓのα−ＣＨ＋３．２３　（ｍ　、　ＩＨ、Ｐｈｅの
β−ＣＨＨ）　、　３．０３　（ｍ　、　４Ｈ。

ｇ　−ＣＨ２＋　Ｐｈｅのβ−ＣＨＨ）　、　１．８２
〜０．７３　（ｍ　、　１２Ｈ。

−Ｌｙｅ−及びｇ−Ｔｆａ−Ｌｙａのβｕｒｎδ−（Ｃ
Ｈ２）３）実施例１４　　Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｓ
−Ｌ−Ｌｙｓ−ＭＡ・４ＨＣｊ（ＸＩＶ）（ＸＩＩ［ｃ
）　０．２９１１　（０，３７ミリモル）を水５ａＪ。

メタノール６ｄ混液に溶かし、Ｉ　ＮＮａＯＨ３，７Ｗ
ｒｌ　ｆ加えて声１２前後とした。３０分反応させた後
、ＸＡＤ　−２樹脂にフィードし、水１００ｍ１を流し
た後、メタノール：水＋４二６を１１と同じく８二２１
００ｒｎｌで溶離した。得られた両分をｌ　Ｎ　ＨＣＡ
でＰｌ（３〜４に中和後、濃縮乾固した。水を加えて速
乾し、無定形の（ＸＩＶ）　０．１６．９　（５３％）
ｆ、得た。

このものは、ＴＬＣ（展開？ｆｆ１Ｅ）で単一のスポッ
ト（Ｒｆ　＝　０．３０　）を与えた。

マス・スペクトルＣＭ＋Ｈ）”　ａｔ　ｒｒ／ｚ　＝　
５８２　（分子［５８１）ＮＭＲ−スーＱトｈ　（Ｄｘ
ｓｏ−ｄ６）Ｐｈｅ−ＬｙｅのＣ０ＮＨ）　、　８．６
１　（ｄ　、　ＩＨ、Ｌｙｅ−ＰｈｅあるｈはＰｈｅ−
ＬｙｓのＣ０ＮＨ）　、　８．２８　（ｍ　、　３Ｈ、
Ｌｙｓのｈずれかの−ＮＨ５）　、　８．１５　（ｍ　
、　３Ｈ、Ｌｙｓのい７．４７（ｍ、２Ｈ，Ｌｙｓのい
ずれかの−ＮＨ２＞　。

あるいはＰｈｅのα−ＣＨ）　、　４．４０（ｍ、　Ｉ
Ｈ，−Ｌ−Ｌｙａ３．７８　（ｍ　、　ＩＨ、Ｈ−Ｌｙ
ｍのα−ＣＨ）、３．３５（ｍ、４Ｈ。

３．０２（ｍ、２Ｈ，いずれかのＬｙｓのｇ−ＣＨ２）
　。

２．９８〜２．７０　（ｍ　、　３Ｈ、いずれかのＬｙ
ｓのｅ　−ＣＨ２＋　Ｐ　ｈ　ｅのβ−ＣＨＨ）　、　
２．７６〜０．６８　（ｍ　、　１２Ｈ、２つのＬｙｅ
のβ、γ、δ−（ＣＨ２）３Ｘ　２　’）実施例１５−
（ａ）　　α、　ｇ　−ｄ　１Ｚ−Ｄ−Ｌｙｅ　−ＯＨ
（ＸＶａ）Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ−ＯＨ’ＨＣ２５，０、！ｉ
’　（２７，３ミリモル）に水を加え、室温で１晩造拌
した。水を４Ｑｍｌを加え、酢酸エチル５９ｕｌで２回
洗浄した。水ＩＩｊを氷冷しながら冷５　Ｎ　ＨＣｌを
加えｐＨ２，０に調贅した。次に酢酸エチル４０ｒＲ１
で３回抽出し酢酸エチル層を冷５１　ＨＣｌ　６０　ｍ
ｊで３回、飽和ＮａＣ６水１００１ｄで２回洗浄した。

酢酸エチル層に無水Ｎａ２ＳＯ４１０，９、活性炭２．
０！Ｉを加え室温で１時間攪拌した。ｍ刷上 後、ａハ液を減圧留去し、残ったシロンｆにクロロ１２
０１１１７）Ｋかけ、クロロホルム２４０ｍ１で展開し
た後、更に展開溶媒Ａ、３００１ｄで展開し、ＴＬＣ（
Ａ）でモノスポットの両分を回収した。回収画分をまと
め減圧乾固し、残渣にＥＤＣ１００ｍｌを加え減圧乾固
し、この操作を繰返してシロップ状の（ＸＶａ）　８．
８１　、！ｉ’　（７７，８％）を得た。このものはＴ
ＬＣ（展開液Ｄ）で単一のスポット（Ｒｔ　＝　０．８
０　）を与えた。

実施例１５−（ｂ）　　Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−
Ｌ−Ｌｙｓ−ＭＡ・３ＨＣ２（ＸＶｂ）（Ｘｌｌｂ）　
０．９７　ｇ（１，５ミリモル）と（ｘｖａ）　０．５
９攪拌しながらＷＳｌｉｌ　０．２１　、！ｉ’　（１
，３７ｍｍｏｌ　）を滴下し、同温度で１時間、次いで
室温で一夜攪拌した。

反応液を冷水３００−に攪拌しながら滴下すると、ビー
ズ状のｒルが生成した。これを濾取し、冷水５００ｍで
スラリー洗浄後、濾取した。これを凍結乾燥しＡｅＯＨ
３５１！Ｌｌ　１ＭｅＯＨ１５ｍｌ　、水５　ｍｌを加
え室温で３０分間攪拌し溶解させた。２係パラジウム炭
素を加え、水素気流下室温で４時’ｒ＠Ｉｍ拌し接触還
元した。濾別後濾液を減圧乾固し残渣にＩ　Ｎ　ＨＣｔ
ｌ　０　ｍｌを加え、減圧乾固した。残渣に水２０Ｍを
加え減圧乾固し、この操作を繰返した。

にかけ、水６００１１Ｌ／ズ流後、ステップワイズにＭ
ｅＯＨ濃度をあげることにより溶出、情実し、凍結Ｅｍ
ｕて、無定形ノ（ＸＶｂ）　０．３８．９　（４３，３
俤）を得た。このものはＴＬＣ（展開？［Ｅ）で単一の
スポット（Ｒｆ＝０．３０）を与えた。

マス・スペクトルＣＭ＋Ｈ］”　ａｔ　ｒＱ／ｚ　＝　
５８２　（分子ｔ５８１）実施例１６−（ａ）　　Ｂｏ
ａ−Ｄ−１１ｓ−ＯＨ□（Ｖｌｍ）Ｄ−１１ｅ−ＯＨ２
，６３、！ｉ’　（２０，０ミリモル）に水１１ｄ、　
ＮＥｔ、　４．２　ｄ　（３０ミリモル）、Ｂｅｅ−８
試粱５．２８ｇ（２２，０ミリモル）のノオキサ７１１
！／’溶液を加え１時間攪拌したが、一部溶けなかった
ので水３ＱｒｎＪを更に加えたところ完全に溶解した。

室温で１ｖ？、［拌した後、酢酸エチル４０ｄで２回洗
浄した。水層を氷冷下冷５　Ｎ　ＨＣｌでｐＨ２，Ｏに
副整し、酢酸エチル１００ｒＩＬｌで２回抽出した。酢
酸エチル層を冷Ｉ　Ｎ　ＨＣｌ　１００　ｍｌで２回、
飽和食塩水１００ｄで２回洗浄し、無水Ｎａ２５ｏ４１
　ｏ　ｆｊ、活性炭２ｇを加え室温で１時間攪拌した。

濾別後濾液を減圧乾固し、ＥＤＣ５０ｒｎｌを加えてＥ
ＤＣを減圧留去し、この操作を更に２回繰返したところ
シロップ状の（ＸＶＩｍ）　３．８０　ｇ（８２，１チ
）を得た。このものはＴＬＣ（展開ｅ、ｃ＞で単一のス
ポラ）　（Ｒｆ＝０．８８）を与えた。

実施例１６−（ｂ）　　Ｂｏａ−Ｄ−１１ｅ−Ｌ−Ｐｈ
ｅ−ＯＨ（ＸＶｌｂ）（ＸＶＩａ）　３．８０１　（１
６，４ミリモル）、Ｈ−Ｌ−Ｐｈｅ−ｊ）Ｂｚｌ−Ｔｏ
ｓ　ｓ、　４１　、ｌｉｌ　（１９，７ミリモル）にり
ｏｏホルム２０ｍ１．　ＮＥｔ、　１．９９．９　（１
９，７ミリモル）、ＨＯＢｔ　２．２０　ｇ（１６，４
ミリモル）？加え室温で３０分間攪拌し溶解した。溶解
液を氷冷下ＤＣＣ４，０６、Ｆ　（１９，７ミリモル）
のクロロホルム１０Ｆ！ｌｌ溶液を滴下し同温度で３時
間、室温で１晩攪拌した。生成したＤＣＵ　１に濾別後
、クロロホルム溶液を４　％　ＮａＨＣＯ３ｆＪ液ＩＱ
Ｑｍで３回、１０チクエン酸溶液１００１ｄで３回洗浄
した。クロロホルム層を減圧乾固した。ＡｃＯＨ１４０
ｍｌ、水３０す、ＭａＯＨ１０胛ｌを加え室温で３０分
間攪拌し、２％パラジウム炭素１０Ｉを加え、水素気流
下室温で２時間攪拌した後、パラジウム炭素を濾別した
。濾液を減圧乾固した。ＴＬＣ（ＣＨＣＬ３：　ＭｅＯ
Ｈ：　Ａｃｔ）（＝１０：１０：１）でニンヒドリン反
応■の不純物があったので、残渣にクロロホルム１０（
１／を加えて溶解し、１０チクエン酸溶液２００１ｄで
２回、水２００　Ｉｌｌで１回洗浄し、クロロホルム層
を減圧乾固し残渣にＥＤＣ１００ｒｎｌを加え、減圧乾
固し、この操作を２回繰返した。アメ状の（ＸＶＩｂ）
　６．５５　ｇ（１０５，３ｃＩＩ溶媒含む）を得た。

このものはＴ’ＬＣ（展開液Ｄ）で単一のスポット（Ｒ
ｔ　＝　０．８２　）を与えた。

実施例１６＝（ｅ）　Ｂｏｃ−Ｄ−１１ｓ−Ｌ−Ｐｈｅ
−Ｌ−Ｌｙｓ−ＭＡ　（ＸＶＩ（り（ＸＶＩら）２．２
７．９（６ミリモル）と０（［ｌａ）　２．５９ｇ（５
ミリモル）にＤＭＦ　３０　ｍｌを加え、さらにＮＥｔ
５０．７ｄ（５ミリモル）、ＨＯＢＴ　Ｏ，６８，５１
（５ミリモル）　、ＷＳＣＩ　１．０７　ｒｎｌ　（６
ミリモル）を氷冷下で加え、室温で一夜反応させた。反
応液を水２００　ｍｌに添加しくｐｉ−１４，４）、不
溶物を戸数した。

２．５１クエン酸水１００ｄ、５　％　ＮａＨＣＯ３水
１００ゴ水氷００ゴ１７で順次スラリー洗浄した後、ク
ロロホルム５０ｄ１メタノールｌＱｍ／を加えて溶解し
、分層して水層を除いた後、クロロホルム層にエーテル
５０ｍ１を加えて冷却晶析し、Ｐ取、乾燥してＢｏａ−
Ｄ−１１ｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙ８（ＺＣｔ）７ＭＡ
　２．６７　ｇ（収率６６チ）を得た。

ｔｎｌ、２１Ｐｄ／Ｃ（ｗａｔ５０％）１．５．！ｉ’
ｅ加え、水素を吹込み室温で３．５時間還元し次。さら
に２％Ｐｄ／Ｃ（ｗｅｔ　５０　％　）　１．　Ｏｉを
追加して６時間還元し、触媒ｔ−Ｆ別した。Ｐｇを濃縮
後、エーテル５９ｄを加え冷却、晶析し、戸数、乾燥し
て無定形の（ＸＶＩｅ）　０．６８　ｇ（３３％　）を
得た。このものはＴＬＣ（展開液Ｅ）で単一のスポット
（Ｒｆ＝０．７５）を与えた。

マス・スペクトル（Ｍ＋Ｈ）＋ａｔ　ｍｌｚ　＝　６６
７　（分子なｓ６６　）曳・スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ
６） １１ｅ−ＰｈｅあるいはＰｈｅ−ＬｙｓのＣ０ＮＨ）　
、　８．１６（ｄ。

ＩＨ、ｌｌ５−ＰｈｅあるいはＰｈｅ−ＬｙｓのｃｏＮ
Ｔ（）。

７．９６　（ｍ　、　３Ｈ、ＬｙｓのＮＨ３）　、７．
５４（ｄ、２Ｈ。

１）１　、　Ｂｏａ−ＩＩｓのＣ０ＮＨ）　、　４．５
４　（ｍ　、　ＩＨ、ＰｈｅあるいはＬｙ＠のα−ＣＨ
）、４．３６（ｍ、　ＩＨ，ＰｈｅあるいはＬｙｓのα
−ＣＨ）　、　３．７８　（ｍ　、　５Ｈ、ＩＩｓのの
β−ＣＩ（Ｈ）　、　２．７８　（ｍ　、　３Ｈ、Ｌｙ
ｓのｅ−ＣＨ２＋Ｐｈｅのβ−ＣＨＨ）　、　１．８８
〜０．７８　（ｍ　、　１８Ｈ、ＩＩｓのβ−ＣＩ（。

ｒ−ｃＨ２Ｌｙｅのβ、γ、δ−（ＣＨ２）５ＢｏＣの
−（ＣＨ，）３）０．６４　（ｔ　、　３Ｈ、Ｉｌｅの
−ＣＨ２−ＣＨ，）　、　０．４９　（ｄ　。

３Ｈ，ＩＩｓの−Ｃ−ＣＨ，） 実施例１７　　Ｄ−１１ｅ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ−
八ｔｈ・３Ｈｃｔ　（Ｘ！１１）（ＸＶｒ）　０．５５
９　（０，８３ミリモル）にＴＨＦ　２０　ｍｌ、３．
３Ｎ″ＨＣ１／ジオキサンｌ　ｒｎｌを氷冷下で加え、
２．５時間水冷下で反応させた。さらに３．３　Ｎ　Ｈ
Ｃ１／ジオキサン３ｄを追加し、水冷下で２．５時間反
応させた。不溶物′ｆｒ：Ｆ取して乾燥し、水を加えて
溶解した。ミリテア濾過して速乾し、無定形の（ＸνＩ
ｆ）　０．３５９　（６３チ）を得た。このものはＴＬ
Ｃ（展開液Ｅ）で単一のスポット（ａｔ　＝　０．５４
　）を与えた。

マス・スペクトル（Ｍ＋Ｈ］　　ａｔ！ｖ／ｚ＝５６７
（分子、ｉｉ　５６６　）陥侃・スペクトル　（ＤＭＳ
Ｏ−ｄ６）Ｉ　ｌ　ｅ−ＰｈｅあるいはＰｈｅ−Ｌｙａ
のＣ０ＮＨ）　、　８．５７（ｄ　、　ＩＨ、ｌ１ｅ−
ＰｈｅあるいはＰｈｅ−ＬｙｓのＣ０ＮＨ）８．２３　
（ｍ　、　３Ｈ、ＩＩｓあるいはＬｙｓのＮＨ，）、　
８．０９十　　　　− （ｍ　＊　３Ｈ＊　Ｉ　ｌｅあるいはＬｙｓのＮＨ，）
　、　７．６７（ｄ。

ＰｈｅあるいはＬｙｅのα−ＣＨ）　、　４．３８（ｍ
、　ＩＨ。

ＰｈｅあるいはＬｙｓのα−ＣＨ）　、　３．８９（ｍ
、　４Ｈ。

（ｍ　、　３Ｈ、Ｌｙ＠のｇ−ＣＨ２＋　Ｐｈｅのβ−
ＣＨＨ）　。

１．８２〜１．０１（ｍ、９Ｈ，Ｌｙｓのβ、γ、δ−
（ＣＨ２）！　＋Ｌｅｕのβ−ＣＨ，ｒ−ｃＨ２）　、
０．６１　（ｔ　、　３Ｈ，Ｉｌｅの−ＣＨ２−ＣＨ，
）　、　０．５６　（ｄ　、　３Ｈ，ＩＩｓ　（７）　
ＣｃＨ−ｃＨｊ）実施例１８−（ａ）　　Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＸＭｌｌａ）Ｂｏａ　−Ｌ
−Ｖａ　ｌ　−ＯＨ１０，８５＆　（５０ミリモル）と
Ｈ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＭｅ−ＨＣｌ２．０９　ｇ（５０ミ
リモル）にＥＤＣ２００ｄ’を加、ｔ、さらにＮＥｔ３
７．Ｏｒｎｌ　（５０ミリモル）、ＨＯＢＴ　Ｏ，６８
、！ｉ＋　（５ミリモル）、ＤＣＣ′１０、３　ｇ（５
０ミＩＪモル）ｆ：氷冷下で加えて室温で一夜反応させ
た。析出したＤＣＵ　ｕｒｅａを戸別除去し、５優ク工
ン％水１００ｍＡ！で２回、５　％　ＮａＨＣＯｓ木１
００ｄで２回、水１０（１／−’Ｃ’１回洗浄した。

ＩＤＣ層ｔ−Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、濃縮し０ｉ１（α
−Ｂｏ　ｅ　−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＭｅ　　１
　６．　２　８　１１　　（４７，３ミ　リ　モ　ル　
］　）を得た。これにメタノール１００ｄ、水２０ｍｔ
ｅ加え、Ｉ　Ｎ−ＮａＯＨ５２プを氷冷下１５分で滴下
した。さらに室温で４時間反応させた後、水３Ｑｒｎｌ
を加え、１００ｄまで濃縮した。ＡｅＯＥｔ　１００　
ｒｆＬｌで洗浄後、さらＩｃ　Ａｃ０Ｅｔ　１５０　Ｉ
ｌｌ　ｋ加え、５ｑｂクエン酸水でｐ）１３とした。分
層後、水層にＡｃ０Ｅｔ１００Ｗ１１を加えてさらに抽
出し、元のＡｃ０Ｅｔ　ＮＪと合わせて水洗後、Ｎａ２
ＳＯ４乾燥、濃縮した。Ａｃ０Ｅｔ−石油エーテル系で
晶析し、無定形の（Ｘ′４ａ）　７．５２ｇ（４６％）
を得た。このものはＴＬＣ（展開液Ｄ）で単一のス４ッ
ト（Ｒｔ　＝　０．４４　）を与えた。

実施例１８−（ｂ）　　１３１−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｅ
ｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−ＭＡ（ＸＭｌｌｂ）（ＸＷａ）　１．
０９９　（３，３ミリモル）と（Ｘ［［ａ）　１．５５
ｇ（３ミＩ７モル）を使用し、実施例１６の操作に従っ
て、無定形の（Ｘｌｌｌｂ）　０．４０　ｇ（２０，９
係）を得た。このものはＴＬＣ（展開液Ｃ）で単一のス
ポット（Ｒｆ　＝　０．５２　）を与えた。

マス・スペクトルＣＭ−［１“＝６１９　（分子量６１
８）即・スペクトル（ｏＭｓｏ−ａ６） Ｖａｌ−ＬｅｕあるいはＬａｕ−ＬｙｓのＣ０ＮＨ）　
、　７．８７（ｄ。

ＩＨ、Ｖａｌ−ＬｅｕあるいはＬｅｕ−ＬｙｓのＣ０Ｎ
Ｈ）　。

７．８０　（ｍ　、　２Ｈ、Ｌｙｓの−ＮＨ２）、７．
４６（ｄ、２Ｈ。

６．７７　（ｄ　、　ＩＨ、Ｂｏａ−ｖａｌのＣ０ＮＨ
）　、　４．３４　（ｍ　。

２Ｈ、Ｌｅｕのα−ＣＨ＋Ｌｙｓのα−ＣＨ）　、　３
．７２　（ｍ、　５Ｈ。

１．９２　（ｍ　、　ＩＨ、Ｖａｌのβ−ＣＨ）　、　
１．５７〜１．３８　（ｍ。

１８Ｈ、Ｌｅｕのβ−ＣＨ２，γ−ＣＨ＋Ｌｙｓのβ、
γ、δ−（ＣＨ２）３＋Ｂｏａの−（ＣＨ５）５　）　
、０．８９〜０．８０　（ｍ−、１２Ｈ、Ｖａｌの−（
ＣＨ３）２　＋　Ｌｅｕの−（ＣＨ，）２）実施例１９
　（ａ）　　Ｚ−Ｄ−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＸＩＫｍ）Ｄ−Ｌ
＋ｕ−ＯＨ９，１７９（７０，０ミリモル）に水４０ｍ
１．　ＮＥｔ３１４．６　ｍ／　（、１０５，０ミリモ
ル）、ｚ−ｓ試薬２１、１．９　（７７，０ミリモル）
のジオキサン溶液を加え、室温で１晩攪拌し九。水１０
０ｒＲ１を加え酢酸エチル１５０１１７２回で洗浄した
。水層を氷冷下２　Ｎ　−ＨＣｌを用いてｐｉ−１２に
調整し酢酸エチル１００ｄで２回抽出した。酢酸エチル
層をＩ　Ｎ　ＨＣｔｌｏｏｄで３回、飽和食塩水２００
ばて２回ｆｃ浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４５１、活性炭１ｇ
を加え室温で１時間攪拌し九。濾別後濾液を減圧乾固し
、オイル状の（ＸＩＫｍ）　１４．１８　、ｌｉ’　（
７６’１　）　ｔ”得た。コノモノハＴＬＣ（展開液Ｅ
）で単一ノスーット（Ｒｆ　＝　０．４９）を与えた。

実施例１９−（ｂ）　　Ｚ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｐｈｅ−
ＯＨ（ＸＩＸｂ）ＣＸｌｌｌｎ＆）　５．３　ｇ（２０
ミリモル）　、Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ・ＨＣｌ　４．３１
９　（２０ミリモル）を使用し、実施例３−　（ａ）の
操作に従って、無定形の（Ｘ［ｂ）　６．１５　ｇ（７
４，ＩＪ）ｔ−得た。コノものはＴＩ、Ｃ（ｋ開成Ａ）
で単一のスポット（Ｒｆ　＝　０．２７　’）を与えた
。

実施例１９−（ｃ）　　Ｈ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｐｈｅ−
Ｌ−Ｌｙｅ−ＭＡ・３ＨＣｔ（′１Ｘｃ）（ＸＩＩ［Ｊ
ｋ）　２．１９　、！ｉ’　（４，０ｉリモル）と（Ｘ
Ｄ（ｂ）　１．８２．９（４，４ミリモル）を使用し、
実施例１３−　（ｅ）の操作に従って、無定形の（ＸＷ
ｅ）　ｏ、　５２９　（、２５，！ｌ）を得九。このも
のは、ＴＬＣ（展開液Ｅ）で単一のスポット（Ｒｆ　＝
　０．５９　）を与えた。

−ｙス−スペクトル［：　Ｍ＋Ｈ］”　ａｔ　ｍＨｚ　
＝　５６７　（分子［５６６）ＮＭＲ・スペクトル（ｒ
ｗｔｓｏ−ｄ６）Ｌｓｕ−ＰｈｅあるいはＰｈｅ−Ｌｙ
ｓのＣ０ＮＨ）　、　Ｂ、５６（ｄ　、　ＩＨ、Ｌａｕ
−ＰｈｅあるいはＰｈｅ−ＬｙｅのＣ０ＮＨ）８．２６
　（ｍ　＋　３Ｈ、ＬｅａあるいはＬｙｓの−ＮＨ，）
８．０４　（ｍ　＋　３Ｈ＋　Ｌｅ　ｕあるｔｎＦｉＬ
ｙｓの−ＮＨ３）Ｌｙｅのα−ＣＨ）　、　４．４０　
（ｍ　、　ＩＨ、Ｐｈｅあるいは３．２０　（ｍ　、　
ＩＨ、Ｌｅｕのα−ＣＨ）　、　３．０６（ｔ　、　４
Ｈ。

Ｌｙｓのε−ＣＨ２）　、　１．８５〜１．０４　（ｍ
　、　８Ｈ、Ｌａｕのβ−ＣＨ２−ｒ　−ＣＨ＋　Ｌｙ
　ｓのβ、γ、δ−（Ｃ’Ｈ２）３）　、　０．７０（
ｄ　＊　６Ｈｅ　Ｌｅｕの−（ＣＨ，）２）実施例２Ｏ
−（ａ）　　α−Ｈ−ｇ　−Ｚ−Ｌｙａ　−５−Ｚ−Ｌ
ｙｓ　−ＭＡ・ＨＣｔ（ＸＸａ）（ＸＩ）　２．５７．
９　（５，０ミリモル）とα−Ｂｏｃ−＆−Ｚ−Ｌ７畠
−ＯＨ１，４７ＩＩＣ６，０ミリモル）を使用し、実施
例１３−ｃの操作に従って、無定形の００（ａ）　２．
０６、！１ｒ（５３，３％）を得た。コｔＤ　モノｌｒ
ｉ　ＴＬＣ（Ｈ開ｆ＆人）で単一のスポット（ｐ、ｔ　
＝　０．２５　）　’ｒ：与えた。

実施例２Ｏ−（ｂ）　　α−Ｂｏ　ｅ　−Ｄ−Ｇｌ　ｕ
−Ｌ−Ｌｙｓ　−Ｌ−Ｌｙｓ　−ＭＡ・ＨＣＡ・２Ａｅ
ＯＨ（ＸＸｂ） （ＸＸａ）　２．０６１　（２，６６ミリモル）にα−
Ｂｏａ−Ｄ−Ｇｌｕ−ＯＨ−ｒ−０８％　１．０２１　
（３，０ミリモル）に、ＤＭＦ　２０Ｍ、クロロホルム
５０　ｍｌ、　Ｅｔ、Ｎ　Ｏ，５１（５，０ｍｍｏｌ　
）、ＨＯＢｔ　Ｏ，４１１（３，０ｍｍｏｌ　）を加え
、０〜５℃に冷却し、ＤＣＣ０，６２１（３，０ｍｍｏ
ｌ　）のクロロホルム５ｄ溶液を滴下した。同温度で２
時間攪拌後、室温で一晩攪拌した。水１００ｇｔｌで１
回、４％ＮａＨＣＯ３１００ＩＩＩで３回、１０％クエ
ン酸溶液で１００ｒＬｌで３回洗浄した。クロロホルム
層を減圧乾固し、残渣に酢酸エチル１００　ｌ１１１を
加えたところ、黄色の沈殿が生じ、濾取した。沈殿を再
びクロロホルム５０１１！ｊＩＣ溶解後、酢酸エチル１
００ゴを加え再沈殿させ、沈殿を濾取し、真空乾燥し、
メタノールＡｃＯＨ、水（８：２：１”）の混合液３Ｑ
ｍ／を加え、１時間室温で攪拌しｌ　Ｑ　ｑ４　／量う
ジウム炭素２．０ｇを加え、水素気流下室温で４時間攪
拌し接触還元した。触媒を濾別後、濾液を減圧乾固し、
残渣にＩＤＣ５０ｍＡ！を加え減圧乾固した。更にＥＤ
Ｃ５０１ｄｔ−加え減圧乾固し、得られた残渣を真空乾
燥し、無定形の（ＸＸｂ）　１．２２９　（５６，３チ
）を得た。このものはＴＬＣ（展開ｆｉＥ）で単一のス
ポット（ａｆ＝　０．３７　）を与えた。

−ｑ　ス−、；１．ベクトルＣＭ＋Ｈ］”　ａｔｍ／′
ｚ＝６６４　（分子量６６３）懇・スペクトル（ＤＭＳ
Ｏ−ｄ６　） Ｇｌｕ−ＬｙｓあるいはＬｙｓ−ＬｙＩＩのＣ０ＮＨ）
　、　８．０１（ｄ　、　ＩＨ、Ｇｌｕ−Ｌｙａあるい
はＬｙｓ−ＬｙｅのＣ０ＮＨ）４．２９　（ｍ　、　Ｉ
Ｈ、Ｇｌｕあるいはい、ずれかのＬｙｓのα−ＣＨ）　
、　４．１７　（ｍ　、　ＩＨ、Ｇｌｕあるいはいずれ
かのＬｙｓのα−ＣＨ）　、　３．９８　（ｍ　、　Ｉ
Ｈ、ＧｌｕあるいはいずれかのＬ７−のα−ＣＨ）　、
　３．７４　（ｍ　、　４Ｈ。

４Ｈ９２つのＬｙｓのε−〇Ｈ２）　＝　２．５５　（
ｍ　、２Ｈ、Ｇｌｕのα−ＣＨ２）　＝　２．０７　（
ｍ　、　２Ｈ、Ｇｌｕのβ−Ｃ’Ｈ２）　。

１．８６〜１．１６　（ｍ　、　２１Ｈ、２つのＬｙａ
のβ、ｒ＋δ−（ＣＨ２）３＋Ｂｏｅの−（ＣＨ，）、
） 実施例２１　　Ｈ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ｌｙｍ−Ｌ−Ｌｙ
ｓ−ＭＡ・５ＨＣｔ（ＸＸＩ）（ＸＸｂ）　０．８６９
　（１，０５ミリモル）Ｋ水冷下ＴＦＡ１０ゴを加え２
０分間攪拌した後室温で２０分間攪拌した。反応液にジ
エチルエーテル２０ｍ１’？：加え固化したＨ−Ｄ−Ｇ
ｌｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｌｙｓ−ＭＡを濾取した。

これに水２０ｗ１１を加え溶解し、減圧乾固した。残渣
にＩＮＨＣ４ｌＯｒＲ１を加え減圧乾固した後、水を１
０Ｊ加え減圧乾固し、この操作を３回繰返した後、凍結
乾燥し無定形の（ＸＸＩ）　０．７２９　（９１慢）を
得た。このものはＴＬＣ（展開液Ｅ）で単一のスポット
（Ｒｆ　＝　０．１４　）を与えた。

マス・スペクトルＣＭ＋Ｈ］　ａｔ　ｍ／ｚ　＝　５６
４　（分子量５６３）即・スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６
） Ｇｌｕ−ＬｙｅあるいはＬｙｓ−ＬｙｅのＣ０ＮＨ）　
、　Ｂ、５３（ｍ　＋　３Ｈ＋いずれかのＬｙｓの−Ｎ
Ｈ５＞　、　８．４７（ｄ。

ＩＨ、Ｇｌｕ−ＬｙｓあるいはＬｙａ−Ｌｙ８のＣ０Ｎ
Ｈ）　。

十　− ８，１４（ｍ、５Ｈ，いずれかのＬｙｓの−ＮＨ，＋７
．５９　（ｍ　、　２Ｈ、Ｇｌｕの−ＮＨ２）　、　４
．４０〜４．２５　（ｍ　。

２Ｈ１２つのＬｙｓのα−ＣＨ）　、　４．００　（ｍ
　、　５Ｈ、Ｇｌｕ２．７５（ｍ　、　４Ｈ、２つのＬ
ｙｓのｇ−ＣＨ２）　、　２．３６　（ｔ　。

２Ｈ、Ｇｌｕのｒ　−ＣＨ２）　、２．０２　（ｍ　、
　２Ｈ、Ｇｌｕのβ−ＣＨ２）　、２．８８〜１．２７
　（ｍ　、　１２Ｈ、２つのＬｙｓのβ、γ、δ−（Ｃ
Ｈ２）３） 実施例２２　α−Ｈ−ε−Ｔｆ　ａ−Ｌ−Ｌｙｅ　−Ｌ
−Ｐｈａ−Ｌ−Ｌｙｓ−ｈＩＡ・３Ｈｃｔ　（ＸＸＩＩ
） ０（Ｉｂ）　１．２９．９　（２ミリモル）とα−Ｚ−
ｇ−Ｔｆａ−Ｌ−Ｌｙｓ−ＯＨＯ，９０ｊｉ　（２，４
ミリモル）を使用し、実施例１３−　（ｃ）の操作に従
って、無定形の（ＸＸＩＩ）０．５６ｇ（３４，３係）
を得た。このものはＴＬＣ（展開液Ｄ）で単一のスポッ
ト（Ｒｆ　＝　０．６９　）を得た。

マス・スペクトル（Ｍ＋Ｈ）　ａｔ　ｒＱ／ｚ　＝　６
７８　（分子−１６７７）曳・スペクトル（ＤＭｓｏ−
ｄ６） Ｐｈａ−ＬｙｓのＣ０ＮＨ）　、　８．４０（ｄ、ＩＨ
，Ｌｙｓ−ＰｈｅあるいはＰｈｅ−ＬｙｓのＣ０ＮＨ）
　、　８．２９（ｍ、　３Ｈ，いずれかのＬｙｌＩの−
ＮＨ５）　、８．０９（ｍ、３Ｈ１いずれかの７．４３
〜７．２８　（ｍＨ，３Ｈμ−Ｔｆａ−ＬｙｅのＣ０Ｎ
Ｈ＋４．６１　（ｍ＋　ＩＨ、−Ｌｙｓ−あるいはＰｈ
ｅのα−ＣＨ）。

４．４２　（ｍ　、　ＩＨ、−Ｌｙｓあるいはｐｈｅの
α−ＣＨ）　。

３．２０〜３．０２（ｍ＋３Ｈ＋　ｇ−Ｔｆａ−Ｌｙ８
のε−ＣＨ２＋　Ｐｈｅのβ−ＣＨＩ　）　、　２．９
０〜２．７２　（ｍ　、　３Ｂ　、　−Ｌｙｓ−のβ−
ＣＨ２＋　Ｐｈｅのβ−ＣＨＨ）　、１．８５〜１．２
０（ｒｎ、１２Ｈ，２つ）Ｌｙｅノ、＃、ｒ、δ−（Ｃ
Ｈ２）３）’ｉ％Ｍ例２３　　　Ｈ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−
Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ−ＭＡ・３ＨＣｔ□α０１）（ＸＸ
口）　０．２８　ｇ（０，３４ミリモル）を用い、実施
例１４の操作に従って、無定杉の（ＸＸＩＩＩ）　０．
１３．９（５６％）を得た。このものはＴＬＣ（展開液
Ｅ）で単一のスポラ）　（Ｒｆ＝０．３９）を与えた。

マス・スペクトル［Ｍ＋）（］”ａｔ　ｒｒｖ／ｚ　＝
　５８２　（分子鋸５８１　）ＮＭＲ・ス４クトル　（
ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：　９．９９（ｓ、ＩＨ，−Ｎ枢◇
）　、８．７７（ｄ　、　ＩＨ，Ｌｙｓ−Ｐｈｓ　’ｌ
）るいｕ　Ｐｈｅ−ＬｙｓのＣ０ＮＨ）　、　８．４４
　（ｄ　。

ＩＨ，Ｌｙｅ−ＰｂｓｓあるいＶｉＰｈｅ−ＬｙｅのＣ
０ＮＨ）　。

８．２５〜７．７５（ｍ、９Ｈ，Ｌｙｓの３ケの口）。

４−６２　（ｍ　ｅ　１８　ｅ−Ｌｙｍ−＊あるいはＰ
ｈｅのα−Ｃ）Ｉ）　。

４．４１（ｍ、　１Ｂ、−Ｌｙｓ−あるいはＰｈｅのα
−ＣＨ）。

Ｈ−Ｌｙｓのα−ＣＨ）　２．９４〜２．６７（ｒｎ、
６Ｈ，２つのＬｙｓのｇ−（ＣＨ２）２＋　Ｐｈｅのβ
−ＣＨ２）　、　１．８１〜１．２７（ｍ、１２Ｈ，２
つのＬｙｅのＩ、ｒ、δ−（ＣＨ２）３）実施例２４ 実施例３−（ｂｌ、４により製造したペプチド訪導体を
基質として用い、各ね酵素に対する特異性を調べ念。ま
ず２５μＭから１ｍＭの各種ム度になるように基１ｉを
５０　ｒｎＭ　）リスー塩酸緩ｉ欣（−８，６）Ｋ溶解
したもの４５０μｔに下記それぞれの酵素溶成２０μｔ
２加え３７′Ｃで５分間反応後、５０チ酢酸２５μｔを
加えて反応停止し、メタ過ヨウ素酸５ｍＭ　とＮ−エチ
ル−Ｎ−スルホプロピル−アニリン０．２ｍＭを宮む０
．ＩＮ酢淑溶液２００μｔを加えて室温に１０分間放置
後、波長７３５ｎｍで吸光度を測定し、にｍ値および反
応最大速度＜　”ｍａ工）を算出した。

この結果、下記の表のように、本発明のこの構造の基質
はトロンビンに対して特異性が高いことがわかる。

実施例２５ 実施ｆｌ１４により製造したＨ−Ｄ−Ｐｈｓ　−Ｐｒ　
ｏ−Ａｒｇ　−ＭＡｔ−４質として用いてトロンビンの
酵素活性を測定した。まず５０ｍＭ）リスー塩酸緩ｔｈ
液（Ｐ１１８．６）１００μｔに、トロンビンを生理食
塩水に溶解したもの２００μｔを加え之あと、上記基質
２ｍＭを含む５０ｍＭトリス−塩酸緩ｔＲｇ　（ｐＨ８
，６）’ｋ　２００ｘｔ加えて３７℃で５分間反応侵、
メタ過ヨウ紫ｒ１１５ｍＭとＮ−エチル−Ｎ−スルホプ
ロピル−アニリン０．２ｍＭを含む０．ＩＮ酢１１！！
浴液２ｄ？加え、室温に１０分間放Ｒｆ＆、波長７３５
ｎｍで吸光度を測定し、トロンビンの濃度に対して吸光
度をプロットし検シ線を作成した。その結果１に第１図
に示す。

この結果、本発明のこの構造の基質を用いることによっ
てトロンビンが鳥感度に、かつ足紮性よく測定できるこ
とがわかる。

実施例２６ Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡ　ｆ基質として
用いてアンチトロンビン−１（ＡＴ−Ｉｎ）を６１１１
定した。まず試料としてＡＴ−１ｌｌを含むヒト血漿を
ヘパリン２ＩＵ／ｄを含む５ＱｍＭト’Ｊスー塩酸板価
准（−８，６）で希釈したもの１００μｔに、トロンビ
ン０．８　ＮＩＨＵ／ゴを含む生理食塩水２００μｔを
加えて３７′Ｃで５分間反応侯、上記恭Ｉｆ　１　ｍＭ
を言む５０ｍＭトリス−塙酸緩債液（ｐｉ（８，６）を
２００μＬ加えて更に３７℃で５分間反応後、メタ過ヨ
ウ素ｒｌ１５ｍＭとＮ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−
アニリン０．２ｍＭを、富む０．Ｉ　Ｎ酢！１！溶液２
Ｍ金加え、室温に１０分間放置後、波長７３５　ｎｍで
吸光度を測定し、試料の希釈倍数に対して吸光度をプロ
ットし、恢友巌全作成した。その結果を第２図に示す。

この結果、不発明のこの構造の鯖′鼾を用いることによ
ってＡＴ−１ｌｌが高感度に、かつ定貨性よ〈測定でき
ることがわかる。

実施例２７ 実施？ＩＪ１５−ｂにより！９遺したＨ−Ｄ−Ｌｙｓ−
Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−犠を茫誓として用いてプラスミンの酵
素活性を測定した。実施例２５のＨ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒ
ｏ−Ａｒｇ−ＭＡのかつりに上記ＭＷ金、トロンビンの
かわりにプラスミンを、また５０／ＩＭトリスー塩Ｃ１
緩価液（１）を囁７．４）を用いた以外は、同様に行な
い、プラスミンの一度に対して吸光度をプロットし、慣
１線を作成した。その結果を第３図に示す。

この結果１本発明のこの構造の基質を剛いることによっ
て、プラスミノが高感度にかつ足ｉ性よく測足できるこ
とがわかる。

実施例２８ Ｈ−Ｄ−Ｌｙ　５−Ｐｈ＠−Ｌｙ　ｓ−ＭＡを基質とし
て用いてα２−７’ラスミンインヒビター（α２−ＰＩ
　）　一度を測足し友。

まず試料としてα２−ＰＩ　ｉ含むヒト血漿を５０ｍＭ
トリス−塩酸緩衝液（ｐｉ’１７．４）で希釈したもの
１００μＡに、シラスミｙｏ、ｓｃｕ／−を含む５０９
６グリセリン、　２　ｍＭ　Ｋｅｌｌ／８？１１２００
　ａｌ　ｔ−加えて３７℃で１０分間反応後、上記基質
２ｍＭｔ″宮む５０ｍＭトリス−塩酸緩衝准（ｐｄ７．
４）を２００μを加えて更に３７℃で１０分間反応後、
メタ過ヨウ素酸５ｍ　Ｍ　トＮ　−エチル−Ｎ−スルホ
グロビルーアニリン０．２ｒｎＭを含む０．Ｉ　Ｎ酢酸
溶液２ｄを加え、室温に１０分間放置後、波長７３５ｎ
ｍで吸光度を測定し。

試料の希釈倍数に対して吸光度をプロットし、慣蓋線を
作成した。その結果を第４図に示す。

この結果、本発明のこの構造の基質を用いることによっ
てα２−ＰＩが高感度に、かつ定量性よく測定できるこ
とがわかる。

実施例２９−ａ Ｈ−Ｄ−Ｌ７ｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｅ−ＨＡは、プラスミノ
−ダンに過剰量のストレプトキナーゼ（ＳＫ）を加えた
時に生ずるグラスミノーグンーＳＫ複合体によって分解
されることを利用して、試料中のプラスミノ−ダン濃度
を測定した。

まず試料としてプラスミノーゲンを含むヒト血漿を５０
ｒＩＩＬＭトリスー塩酸緩衝液（ｐｉ（７，４）で希釈
したもの１００μノに、５Ｋ５０００Ｕ／ＴＲｔを含む
５０　ｍＭ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，４）２００
μｌを加えて３７℃で１０分間反応後、上記基質２　ｍ
Ｍを含む５０　ｍＭ　）リス−塩酸緩衝液（−７，４）
ｋ２００μ！加えて更に３７℃で１０分間反応後、メタ
過ヨウ素酸５　ｍＭ　？！：　Ｎ−エチル−Ｎ−スルホ
プロビルーアニリ７０．２　ｍＭを含む０．ＩＮ酢ｃＲ
浴液２−を加え、室温に１０分間放置後、波長７３５ｎ
ｍで吸光度を測定し、試料の希釈倍数に対して吸光度を
プロットし、検量線を作成した。その結果を第５図に示
す。

実施例２９−ｂ 試料中のプラスミノーゲン濃度の測定例として例２９−
１と同様に操作して試料中のプラスミノーゲン濃度を測
定し、検量線を作成した。その結果を第合図に示す。

実施例２９−ｃ 試料中のプラスミノ−ダン濃度の測定例として実施例２
９−ａと同様に操作して試料中のプラスミノーゲン濃度
を測定し、検量線を作成した。その結果を第ｉ＃凶に示
す。

実施例２９−ｄ 試料中のプラスミノ−グアａＦＫの測定例として更に前
の実施例２９−ａにおけるＨ−Ｄ−Ｌｙａ−Ｐｈｅ−Ｌ
ｙｓ−鬼の代りにＨ−Ｄ−Ｉ　ｌ・−ｐｈ・−Ｌｙａを
用いて実施例２９−ａと同様に操作して試料中のプラス
ミノーゲン濃度を測定し、検量線を作成した。その結果
を第８図に示す。

以上の実施例２９−ａｍｂｌｅｅｄの結果より、本発明
のこれらの構造の基質を用いることによりてプラスミノ
−ダンが高感度に、かつ定量性よく測定できることがわ
かる。

実施例３０ トロンビン用基質として既に使用されているＴｏｍ　−
Ｇｌｙ　−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ　−ｐＮＡ　［％開昭５７
−２２５３参照。

ペンタファルム社製］と本発明による基質Ｈ−Ｄ−Ｐｈ
ｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡを用いて、トロンビンを作用
させたときの側基質に対するＫｍ値を、各種酵素のうち
トロンビンのみを用いる以外は実施例２４と同様な方法
で測定し、比較した。

この結果、下記の表に示すごとく、本発明のこの構造の
基質はＴｏｓ　−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ　−ｐＮＡ
よりもＫｍ値が８倍以上も小さく、トロンビンに対して
親和性が高いことがわかった。

実施例３１ 本発明によるＨ−Ｄ−Ｐｈｅ　−Ｐｒ　ｏ　−Ａｒｇ　
−ＭＡおよびＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡ
をトロンビン基質として用いることによってアンチトロ
ンビン−１［［（ＡＴ−ＩＩＩ）を測定し、得られる検
量線についてその傾きを比較した。

ｒｏｍ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡは市販のＡＴ
−ＩＩＩ測定用キットクロモレイトＡＴ−Ｉ［［セット
を用い、添付の使用説明薔に従って操作した。一方、）
ｌ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒ。

−Ａｒｇ−ＭＡは、実施例２６に於いて、トロンビン濃
度を０．１５　ＮＩＨＵ／ｍＪ　、基質濃度を２ｍＭ、
さらに反応時間を各１０分とした以外は同様の方法で実
施した。検量線作成用の標臨物質として正常ヒトゾール
血漿を実施例１５と同様の緩衝液で５０倍希釈したもの
−ｑＡＴ−ｍ活性値２００％として順次同上の緩衝欣で
希釈することによってＡＴ−ｎ［の各活性値を含む試料
を調製したものを２０μｌずつ用いた。このようにして
各ＡＴ−ｆｉｔ活性値とそのときに得られた７　３５　
ｎｍもしくは４０５　ｎｍでの吸光度（Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ
　−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ−ＭＡは７３５ｎｍｓ　Ｔｏｓ−
Ｇｌｙ　−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ　−ｐＮＡは４０５ｎｍ　
）との関係をプロットすることによりて検量線を作成し
た。その結果を第９図に示した。

この結果、本発明のＨ−Ｄ−Ｐｈｅ　−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−ＭＡを基質として用いた場合にはＡＴ−ＩＩＩ活性値
の０％とｉｏｏ％の吸光度の差が約０．５５となり、Ｔ
ｏｓ　−Ｇｌｙ　−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ　−ｐＮＡを用い
た場合の吸光度の差約０．２よりも２．５倍以上高感度
にＡＴ−Ｉ［１の活性値を測定できることがわかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明のＨ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−
ＭＡを基質として使用し、トロンビンの酵素活性を測定
した場合の検ｉｓであり、縦軸は測定波長７３５　ｎｍ
での吸光度、横軸はトロンビン濃度全あられす。 第２図はＨ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＭＡを基質
として使用し、アンチトロンビン−１（ＡＴ−１１１）
を測定した場合の検量線であり、縦軸は測定波長７３５
ｎｍでの吸光度、横軸はＡＴ−［１を含む試料の希釈倍
数をあられす。 第３図は、本発明のＨ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ　−Ｌｙｓ
−ＭＡを基質として使用し、プラスミノの酵素活性を測
定した場合の検量線であり、縦軸は測定波長７３５ｎｍ
での吸光度、横軸はプラスミン濃度をあられす。 第４図はＨ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙ８−ＭＡを基質
として使用し、α２−プラスミンインヒビタ−（α２−
ＰＩ）濃度を測定した場合の検４ｉ線であり、縦軸は測
定波長７３５ｎｍでの吸光度、横軸はα２−ＰＩを含む
試料の希釈倍数全あられす。 第５図はＨ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＭＡを基質
として使用し、プラスミノ−ｒン濃度を測定した場合の
検量線であり、縦軸は測定成長７３５　ｎｍでの吸光度
、横軸はプラスミノーゲンを含む試料の希釈倍数を用し
、プラスミノーゲン濃度を測定した場合の検量線であり
、縦軸は測定波長７３５ｎｍでの吸光度、横軸はプラス
ミノーゲンを含む試料の希釈倍数をあられす。 第７図はＤ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｔｆａ）−Ｐｈｓ−Ｌｙｓ−
ＭＡを基質として使用し、プラスミノーゲン濃度を測定
した場合の検量線であり、縦軸は測定波長７３５ｎｍで
の吸光度、横軸はプラスミノ−ｒンを含む試料の希釈倍
数全あられす。 第８図はＨ−Ｄ−１１ｅ　−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ　−ＭＡを
基質として使用し、プラスミノ−ｒン濃度を測定した場
合の検量線であり、縦軸は測定波長７３５　ｉｍでの吸
光度、横軸はプラスミノーゲンを含む試料の希釈倍数を
あられす。 第９図はＨ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ　−ＭＡおよ
びＴｏｎ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡ　ｆｊｒ：
）　ｏンビンの基質として使用し、アンチトロンビン−
１（ＡＴ−１）を測定した場合の検量線であり、縦軸は
測定波長７３５　ｎｍもしくは４０５　ｎｍでの吸光度
、横軸はＡＴ−Ｉ［［の活性値をあられす。 第１図 トロンビン濃度＋ｕ／ｍｉ１ 第２図 第３図 プラスミンｓＭ（Ｕ／ｍｉ） 第４図 血漿希釈束 第５図 ０．０　　　　　　　　　　　　０．５　　　　　　　
　　　　　　１．０第６図 第７図 血漿希釈率 第８図 ０　　　　　　　　　　　　０５　　　　　　　　　　
　　１、。 血漿希釈率

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒは、Ｈまたはアミノ保護基を表わし、Ａ＿１は
   フェニルアラニル基、ロイシル基、イソロイシル基、バ
   リル基、グルタミル基、リジル基、ｔｅｒｔ−ロイシル
   基のＬ体もしくはＤ体を表わし、Ａ＿２はフェニルアラ
   ニル基、バリル基、プロリル基、ピペコリノイル基、ロ
   イシル基、スレオニル基、アラニル基、リジル基のＬ体
   もしくはＤ体を表わし、Ａ＿３はアルギニル基またはリ
   ジル基のＬ体を表わす。Ａ＿１、Ａ＿２またはＡ＿３が
   リジル基を表わすとき、そのε−ＮＨ＿２基は保護基に
   よって保護されていてもよく、保護されていなくてもよ
   い。ｍ、ｎは独立に、０または１を表わす。〕で表わさ
   れるペプチド誘導体またはその酸付加塩。
2. （２）酵素含有試料に 一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒは、Ｈまたはアミノ保護基を表わし、Ａ＿１は
   フェニルアラニル基、ロイシル基、イソロイシル基、バ
   リル基、グルタミル基、リジル基、ｔｅｒｔ−ロイシル
   基のＬ体もしくはＤ体を表わし、Ａ＿２はフェニルアラ
   ニル基、バリル基、プロリル基、ピペコリノイル基、ロ
   イシル基、スレオニル基、アラニル基、リジル基のＬ体
   もしくはＤ体を表わし、Ａ＿３はアルギニル基またはリ
   ジル基のＬ体を表わす。Ａ＿１、Ａ＿２またはＡ＿３か
   リジル基を表わすとき、そのε−ＮＨ＿２基は保護基に
   よって保護されていてもよく、保護されていなくてもよ
   い。ｍ、ｎは独立に、０または１を表わす。〕で表わさ
   れるペプチド誘導体またはその酸付加塩を作用させ、生
   成したモルホリノアニリンにカプラーを作用させ、生成
   した色素を定量することを特徴とする試料中の酵素活性
   測定法。
3. （３）酵素がプロテアーゼである特許請求の範囲第（２
   ）項記載の方法。
4. （４）プロテアーゼがトロンビン、トリプシン、プラス
   ミン、カリクレイン、ウロキナーゼまたはＦＸａである
   特許請求の範囲第（３）項記載の方法。
5. （５）カプラーがアニリン系化合物、トルイジン系化合
   物、アニシジン系化合物、フェノール系化合物、ナフト
   ール系化合物または安息香酸系化合物である特許請求の
   範囲第（２）項記載の方法。