JPS62115279A - ネコ鼻腔気管炎ウイルスの大量生産方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、ネコのウィルス性鼻腔気管炎（ｆｅｌｉｎｅ
ｖｉｒａｌ　　ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ　）生
ワクチンの製造に適したネコ鼻腔気管炎ウィルスの大量
生産方法に・関する。 ネコのウィルス性鼻腔気管炎（以下、ＥＶＲという）は
クランデルおよびマウラー［ＣｒａｎｄｅｌｌおよびＭ
ａｕｒｅｒ　、　　Ｐｒｏｃ　、　Ｓｏｃ　、　Ｅｘｐ
ｔｌ　、　Ｂｉｏｌ　、＆Ｍｅｄ、、９７巻、４８７〜
４９０頁（１９５８年）〕により最初に記載されている
。このウィルスはヘルペスウィルスの１種で、ネコの上
気道感染症の原因の約４０％を占めている。 ＦＶＲに対するワクチンはビトルおよびルビク［ＢｉＬ
ｔｌｅ　およびＲｕｂｉｃ　、　Ａｍ、Ｊ　、Ｖａｔ　
、　Ｒｅｓ　、。 ３６巻、８９〜９１頁（１９７５年）〕およびスコツト
［５ｃｏｔｔ、Ｆｅｌ　ｉｎｅ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　、
　Ｊａｎ　、　−Ｆｅｂ　６．１７〜２２頁（１９７５
年）］により記載されている。このワクチンはビルレン
トＦＶＲウィルスを一次不コ腎臓組織培養中で８１回継
代代し、ついで、ネコ二倍体舌細胞系中で１７回継代し
て得られる。ドイツ国公開明細書第２．５１２．９０３
号にも、ネコの組織培養中でビルラントＦＶＲウィルス
を継代して得られたＦＶＲワクチンが開示されている。 これら、の従来のワクチンは誌コの正常な体温（３９℃
）において筋肉内に投与されるが、この温度では該ウィ
ルスは増殖できず、実質的に死菌ワクチンとして作用す
る。また、ワクチンの注射の間、ネコの」二気道を該ウ
ィルスの感染から保護しなければならない。さらに、従
来のワクチンの他の不利な点は免疫付与のため複数回の
投与が必要とされＪ１汰した１１１［の動物にはワクチ
ン接種をひかえなければならないことである。 本発明は、ネコ属に属する動物のビルレントト’■に感
染に対する予防ハ」の安全かつ有効なワクチンの製造に
適したネコ鼻腔気管□炎ウィルスの大晴生産方法を提供
するもので、該ワクチンは、その適当な溶液を鼻内に滴
下もしくは噴霧するような鼻腔内経路、該ワクチンのｉ
；つ当な溶液の点眼により、涙鼻管を介して鼻、咽喉な
どの感染しやすい組織にワクチンを吸

【■させる眼内径
路または該ワクチンの適当な溶液の注射により投与でき
る。鼻腔内経路および鼻腔内−眼内経路の組合せ（両眼
に１滴づつ、残りを鼻内に）の投与が好ましい。 １回の用量は約１０〜約Ｉ　Ｑ　”ＯＴＣＩ　Ｄ５．０ が好ましい。該ワクチンはまた１妊娠した雌の動物に投
与しても、流産や奇形発生因子作用は何らない。 本発明においては、あらかじめ変異誘発物質で化学的に
処理したＦＶＲウィルスを紫外線にさらす。好ましくは
、あらかじめ、５−フルオロウラシル、５−フルオロデ
オキシウリジンおよびブロモデオキシウリジンで化学的
変異を起させ、３０±２℃ではよく増殖するが、３７℃
ではあまり増殖しないようにしたＦＶＲウィルスを紫外
線にさらす。 化学的変異誘発物質の処理にはいずれのビルレントＦＶ
Ｒウィルスをも用いることができる。該細胞培養には、
腎臓、舌、気管、鼻甲介、扁桃、肺などのネコ属からの
あらゆる細胞培養が包含される。ネコ腎臓細胞が好沫し
い。ついで、該ウィルスを、基質細胞の前処理後、５−
フルオロウラシル、５−フルオロデオキシウリジン、ブ
ロモデオキシウリジンまたは他の公知のいずれかのＤＮ
Ａ阻止物質で化学的な変異誘発処理（Ｄ　Ｎ　Ａ　１１
１［、＋１＝　）する。５−フルオロウラシル、５−フ
ルオロデオキシウリジンおよびブロモデオキシウリジン
の混合物が該ウィルスの変異誘発に好ましい。このウィ
ルス培養を、３０±２℃、好ましくは、３１’Ｃでクロ
ーンしてウィルスを精製し、この温度でよく増殖するウ
ィルスを用いてこの処理をくり返す。 この変異誘発処理は１２〜３６時間、好ましくは、２４
時間くり返して行なう。 変異誘発処理で得られたウィルス（ＡＴＣＣＶＲ８１４
）を、約９０〜９９係、好ましくは約９５〜９９％、有
利には９９％のウィルス粒子が死滅するまで紫外線にさ
らす。ネコに投与する前に、紫外線処理で生き残ったウ
ィルスを３１’Ｃでクローンする。有利には、クローン
したウィルスを、３０±２℃で、１〜約１２回、好まし
くは】Ｏ〜１２回継代継代。ウィルスのいずれのクロー
ンもくり返して紫外線処理しく好ましくは１回）、最終
継代および／または使用前にクローンすることができる
。 ウィルスの増殖（化学的変異誘発ウィルスおよび紫外線
処理ウィルス共に〕は３１℃が最適であるが、該ウィル
スは、３７℃を含め、それ以上の温度でも増殖できる。 このウィルスの増殖は、当然、３９℃で抑制される。該
ウィルスの増殖は３０±２℃が好ましい。 本発明の方法をさらに具体的に説明する。 ウィルスを生後３ケ月のネコから採取した。該ウィルス
は上気道感染の日常の試験の間に、何ら上気道疾患の臨
床徴候のないネコの咽喉から単離した。ウィルスのネコ
に対する伝染性の有無を調べるため、ネコ腎臓細胞（Ｎ
ＬＫＦ−１）中で１同経代し、２匹のＳＰＦネコの鼻内
に接種した。 接種３〜８日後、食欲不振、発熱、呼吸困難および緩徐
が観察された。すなわち、該ウィルスはネコに対して伝
染性を有し、天然に生ずる非病原性変種でないことが判
明した。 単離および以後の全工程では宿主細胞としてＮＬＦＫ−
１と称せられる安定な連続的に移植できるネコ腎臓細胞
系を用いた。ハンクス（ｆｌａｎｋｓ　）平衡塩溶液に
ラクトアルブミンを加えた培養液（ＨＡＬ液〕をウィル
スの増殖および維持培養液として用いた。該培養液はウ
シ胎児血清を増殖用には１０％、維持用には２％補足し
た。 ＦＶＲウィルスの化学的変異誘発処理はプリンゲルら［
Ｐｒｉｎｇｌｅ　　ｅｔ　ａｌ、、　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
、　　５５巻、４９５〜５０５頁（１９７３年）］によ
り概説されている方法に従って行なった。ウィルス接種
前に、ＮＬＦＫ−］細胞の単層を血清無添加１１ＡＬ液
中、５−フルオロウラシル１０μｇ／肩ｌに１８時間接
触させた。１８時間後、この単層を血清無流加Ｉ４　Ａ
　Ｌ液で洗浄し、３７℃で１時間、１０　個のウィルス
を吸１■させた。ついで、この細胞に、５−フルオロウ
ラシル１０μｇ／ｍｌｓ　　５−フルオロデオキシウリ
ジン】Ｏμｇ／１ｔｔｌおよびブロモデオキシウリジン
５　ｔｘｇ／ｌｌｌを含有する血清無添加ＨＡ　Ｌ液を
加え、３７℃で２４時間培養した。この細胞単層を、速
かに凍結、解凍させて崩壊させ、これまでの全工程をく
り返した。ＤＮＡ阻止物質で処理した後、２４個のプレ
ート（ｗｅｌｌ　　Ｌｉｎｂｒ。 Ｐｌａｓｔｉｃ　　ｃｕｌｔｕｒｅ　　Ｐｌａｔｅ　）
中、３１℃でクローンし、３１℃でよく増殖したクロー
ンのみを用いてこの処理をくり返した。７日培養後、１
つのクローンのみに著しい増殖が観察され、そのウィル
スを収集した。クローンはいずれも、ミルク希釈瓶中で
増殖させたＮＬＦＫ−１細胞中、３１１：で培養した。 温度感受性（ｔｓ性）を検査するため、３１’Ｃおよび
３７℃で力価を測定した。最初の変異誘発処理では【Ｓ
性が生じなかったので、さらに変異誘発処理とクローン
をくり返した。４つのクローンから非常にわずかのｔｓ
差を示すクローンを選び、さらに処理を行なった。第１
回の処理で３０クローン、第２回の処理で２５クローン
、第３回の処理で５０クローン、第４回の処理で１５ク
ローンを行なった。 第４回の変異誘発処理からクローンしたウィルスをＳＰ
Ｆネコで検査した。各ネコには約０．２５π／（１０５
°０〜１０８°０ＴＣＩＤ　　／投与〕づつののウィル
スを各鼻孔に、また、ウィルス懸濁液の１滴を目に投与
した。投与３日後に採取した咽喉ぬぐい液はＦＶＲ陽性
であった。このウィルスはアメリカン・タイプ・カルチ
ャー・コレクション（ＡＴＣＣ）にＶＲ８］４の番号で
寄託してあや・ 第４回の処理の１５番目のクローンから得られたウィル
スを標準的な実験室用紫外線ランプにさらした。ウィル
スは光源から１５Ｇ＋の距離で、液深５Ｈのプレート中
でさらした。紫外線処理の間、液はスターラーで攪拌し
く約７５　ｒｐｍ、　）、３分間隔で試料をぬきとった
。紫外線はＦＶＲウィルスを致死させ、８分間でウィル
ス力価を約９９係減少させた。９９％のウィルスが死滅
した後、３１℃で増殖する紫外線処理ウィルスのクロー
ンを調製した。これらのウィルスはいずれも適当なもの
７．５０ であったが、３１℃の力価１０　　ＴＣＩＤ５０１３７
℃の力価１０６°６３ＴＣＩ　Ｄ　　　のウィルスをさ
らに紫外線処理し、３１℃でクローンした。 Ｄ ３１℃の力価が１０　　ＴＣＩＤ５ｏ、３７℃の力価ｆ
３８ が１０　　ＴＣＩＤ５ｏ　のクローン（他のクローンも
用いることができる〕を選び、投与前に３１℃で継代し
た。 このようにして得られたウィルスは直接ネコに接種でき
、また、好ましくは、凍結乾燥物（有利には公知の適当
な安定化剤を添加して）とする。 この凍結乾燥物は投与前に滅菌水または他の適当な稀釈
剤と混合して再水和させる。 前記のように変位させたＦＶＲウィルス（以下、ＦｖＲ
ｍウィルスという〕はいずれの試験においても３１℃で
培養させた。定常培養にはルー（Ｒｏｕりおよびポビッ
キ４　（Ｐｏｖｉｔｓｋｙ）瓶を、また、増殖用には１
０７２回転瓶回転−た。ＮＬＦＫ−１細胞の単層は、Ｆ
ｖＲｍウィルス接種前に全ての培養容器中で形成させた
。増殖用には１０％のウシ胎児血清（あらかじめ、ＢＶ
Ｄ汚染を検査したもの）を用いたが、ＮＬＦＫ−４細胞
系は血清濃度を低くしても、また、約１０％以下の同種
または異種血清中でもよく増殖する。ＦＶＲウィルスは
ウシ胎児血清２％の存在下、ＮＬＦＫ−１細胞系でよく
増殖する。ウィルスの収集は細胞変性により最大の増殖
が示されたときに行なった。かくして得られたウィルス
はＡＴＣＣにＶＲ８１５の番号で寄託しである。このウ
ィルスを用いて後記のとおりネコにワクチン接種した。 該ウィルスの同一性を確認するため、ネコ組織培養にお
けるＡ型封入在を伴なう典型的な細胞変性効果を示す増
殖、他種細胞における増殖欠除（宿主特異性〕、螢光抗
体染色、有機溶媒不活性化、ＤＮＡ合成阻止物質による
増殖抑制および特異抗血清による中和を試験した。 ＦＶＲウィルスの宿生特異性はアンドリュウスら［Ａｎ
ｄｒｅｗｓ　　ｅｔ、ａｌ、　、Ｖｉｒｕｓｅｓ　ｏｆ
　Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ。 ３４８〜３４９頁（１９７２年ン〕によって明らかにさ
れている。同様に、ＦｖＲｍウィルスも種々のウサギ、
イヌ、ウシ、ウマ、ネズミ、サルおよびヒトの細胞と比
較して、ネコの細胞に対する宿主特異性を有する。ＦＶ
ＲウィルスをＦｖＲｍウィルスに変異させることは、宿
主特異性を変えるのではなく、通常の感染経路で動物が
感染した場合のウィルスの毒力を変えることである。全
くのビルレン）ＦＶＲウィルスは筋肉８菫たは静脈内経
路でネコに感染させても何の疾患も起さない。 しかし、接種中、上気道は適宜に保護しなければならな
い。ビルレントＦＶＲウィルス１０７゛５ＴＣＩＤ５ｏ
の静脈内接種は疾患を起さないが、１回の注射で体液抗
体の力価を高くする。同じウィルスを筋肉注射すると、
１回の注射でわずかに体液反応を生じさせるだけである
。 ＦＶＲｍウィルスの同定には螢光抗体（Ｎａｔｉｏｎａ
ｌＡｎｉｍａｌ　　Ｄｉｓｅａｓｅ　　Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙがら得たもの〕を用いた。ＦＶＲｍウィルスを感
染させた細胞では特異的な染色が観察されたが、カリシ
ウィルスの感染では認められなかった。 濃度２０％のエチルエーテルは１８時間でＦＶＲｍウィ
ルスを不活性化した。対照としてビルレントＦｖＲウィ
ルスを用いた。濃度５０％のクロロホルムは約３０分で
ＦＶＲｍウィルスを不活性化した。これらの実験から、
ＦＶＲｍウィルスは（］υ 本質的に脂質で、有機溶媒により抽出され、この点は非
変岑のＦＶＲウィルスと同じであることを示した。 ＤＮＡ合成阻止物質として知られるデシキシコレートは
ＦｖＲＴｎウィルスおよびＦＶＲウィルスを同程度に、
特異的に抑制する。 よく仰られたＦＶＲウィルス株に対するウサギ中で調製
された抗血清はＦｖＲｍウィルスを特異的に抑制する。 この抗血清はよく知られたネコの病原体、カリシウィル
ス株は抑制しない。 ＦｖＲｒｒ１ウィルスと安定化液を合し、凍結乾燥した
試料を３７℃で１．２および３週間保存して安定性を試
験した。安定化液の組成はつぎのとおりである。 溶液Ａ パンクレアチン消化カゼイン（Ｍ型）　　４０ｇゼラチ
７（Ｋｎｏｘ　　２５０Ａ）　　　　　　　　４０ｇ蒸
留水（ｑ、ｓ、）　　　　　　　　　　　１０００ｇ／
溶液Ｂ ショ糖　　　　　　　　　　　　　　　１５０ｆ蒸留水
（ｑ、ｓ、）　　　　　　　　　　　１０００ｍｌｍｌ
溶液上びＢを１：１の比率で合し、ウィルス溶液に加え
る（総容量の］／３）。 安定試験の結果をつぎの第１表に示す。 この結果、ＦＶＲｍウィルスは安定化液と合すると少な
くとも３週間その能力（ウィルス力価か示すように）を
保持することが明らかであり、これは冷蔵庫温度の約２
年に対応する。Ｆ　Ｖ　Ｒｍウィルスと安定化液の混合
比率はウィルス力価約１０　〜約１０８・０　ＴＣＩＤ
　　の範囲で種々変５．０ えることができる。 Ｆ　Ｖ　ＲｍウィルスをＳＰＦ無疾患（ｍｉｎｉｍａｌ
ｄｉｓｅａｓｅ　）　　ネコに投与し、ついでこのネコ
にビルレントウイルスを感染させて試験した。いずれの
ネコにも約０．２５　ｖｔｌのウィルス含有液（１０５
・０〜１０８”　Ｔ　Ｃ”　ｎ　ｓ　□、／　１夕＋　
、’ｉ−）　　を各鼻孔Ｋ　投与Ｌ　７’、：。 このワクチンの投与は、ネコの頭をまっすぐにおさえ、
鼻をできるだ°け上に向かせて鼻内に滴下して行なった
。別法として、ワクチンの１滴づつを両眼に滴下し、残
りを鼻内に滴下してもよい。 抗体力価は、各々、接種前および接種後に採血し、マイ
クロタイター法により測定した。血清稀釈は倍数稀釈で
調製し、５０ＴＣＩＤ５ｏのビルレントウイルスと混合
し、１時間培養し、充分量のＮＬＦＫ−１細胞と混合し
、９６ウエル・マイクロタイター・プレート（ｗｅｌｌ
　　ｍ１ｃｒｏｔｉｔｅｒ　ｐｌａｔｅ）の８個のウェ
ルに移植する。この細胞−抗体−ウィルスの力価は、３
７℃で６日間培養し、ライフ（Ｌｅｉｔｚ　）倒立顕微
鏡で毎日観察して測定した。 ウィルス学の分野で公知の他の力価測定法を用いてもよ
い。 ワクチン接種・３週間後、該ネコにビルラウンウィルス
のエアゾルを噴霧した。このエアゾルはデビルビｎ　（
Ｄｅｖｉ　ｌ　ｂｉ　ｓリアトマイザーで圧縮空気を（
］５） ７．３ ビヒクルとして噴霧した。噴霧は１０　　ＴＣＩＤ５゜
のビルレントウイルスを直接ネコの顔に対して行なった
。ワクチン非接種の対照動物も同様の処理を行なった。 毎日臨床徴候を観察した。感染３日後、咽喉ぬぐい液か
らウィルスを単離した。 前記の紫外線による第２回目の処理で得られたＦＶＲｍ
ウィルスを継代する前に２匹のＳＰＦネコの鼻内に接種
した。これらのネコは１〜４日間発熱したが、他のＦＶ
Ｒの徴候は見られなかった。 第１Ｏ代の継代のウィルスを４匹の生後３週間の子ネコ
に鼻内経路で接種した。９週間の観察期間中、いずれの
ネコにも臨床疾患は見当らな力）た。 ４匹の子ネコは本質的に抗体力価を有しているが（多分
、母親由来のもの）、この力価は鼻内接種後２〜４倍に
上昇する。 第１Ｏ代の継代のウィルスの鼻内接種に対する反応をテ
ストするためファウナ・ラボラドリース［Ｆａｕｎａ　
　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｈｕｄｓｏｎ、　Ｍａ
ｓｓ、　Ｕ、Ｓ、Ａ。 （現在Ｌｉｂｅｒｔｙ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　
　Ｌｉｂｅｒｔｙ　Ｃｏｒｎｅｒ。 Ｎｅｗ　　Ｊｅｒｓｅｙ　）　）から無疾患ネコを入手
した。こ（１６］ れらのネコは入手時、生後１２週間のもので、血清抗体
力価はく１／２であった。ＦｖＲｍウィルスを各鼻孔内
に０．２５　ｍｌ、眼に１滴づつ投与した。 投与後の血清抗体力価は１１５〜１／２５の範囲であっ
た。ワクチン接種後または感染後にも何ら臨床疾患の徴
候は観察されなかった。無疾患ネコはＦＶＲ感染にきわ
めて敏感で、ＦＶＲｍウィルスの鼻内接種により保護で
きた。結果を第２表にまとめる。 ２回目の鼻内投与による追加抗原刺激効果（ｂｏｏｓｔ
ｅｒｉｎｇ　　ｅｆｆｅｃｔ　）をテストするため、５
匹のネコに１回目の投与１力月後に、さらに１回投与し
た。２回目の鼻内投与後、明らかな追加抗原刺違（効果
が認められた。結果を第３表に示す。 生後約１２週間の１４匹の無疾患子ネコをリバティ・ラ
ボラドリースから入手し、第１１代納代のＦｖＲｍウィ
ルスを鼻内に投与した。全でのネコは血清抗体力価く１
／２であり、２ＦｖＲＴｎウイルスは１０５“０ＴＣＩ
Ｄ５ｏ／ネコに調整した。接種後、全てのネコの血清抗
体力価は１７８〜１／２４となり、臨床徴候はみられな
かった。 生後６週間の３匹の子ネコとその母親にも第１１代納代
のＦＶＲｍウィルスを鼻内に投与した。 子ネコも母親もＦＶＲには敏感であった（血清抗体力価
＜１／２　）。ワクチン接種３週間後、血清抗体力価は
ｌ／２０またはそれ以上となった。この母親は血清陰性
動物としては選択しなかったが、ＦｖＲｒ１１ウィルス
は生後６週間の子ネコ全てに免疫を付与し、何の副作用
もないことが明らかとなった。 第１１代納代のＦＶＲｍウィルスの５代のもどし継代（
ｂａｃｋ−ｐａｓｓａｇｅ　）　　はいずれも無疾患ネ
コにおいて何ら毒力の復帰を示さなかった。ネコには約
１０６°５ＴＣＩＤ　／ネコの各もどし継代を投与した
。臨床疾患はなく、発熱もみられなかった。各継代につ
き、２匹のネコの鼻内および眼に投与した。 このＦｖＲｍウィルスは免疫を作る天然の変異カリシウ
ィルスと混合してワクチンとすることもできる。 用いるカリシウィルスは生後６力月のネコの鼻咽頭から
採取した、公知の方法により、ネコに対して何の疾患を
起さないことが示されたものである。このウィルスの同
一性を確認するため、染色試料における封入体の不存在
と典型的な細胞変性効果を伴なうネコ組織培養中での急
速な増殖、有機溶媒による非不活性化および特異的抗血
清による中和を試験した。 ＦｖＲｍウィルスとカリシウィルスはつぎの組成に従っ
て混合した。 Ｆ　Ｖ　Ｒｒｆ、ウィルス　　　　　　　　　　　０．
２５　ｍｌカリシウィルス　　　　　　　　　　　　０
．２５　ｍｌ安定化液　　　　　　　　　　　　　　０
．５０ｇ／各０．２５　ｍｌのウィルスの力価は１０６
・５ＴＣＩＤ５０以上であった。 安定化液の組成はつぎのとおりである。 溶液Ａ パンクレアチン消化カゼイン（Ａ型）　　　　４．０ｇ
ゼラチ７（Ｋｎｏｘ　２５０Ａ）　　　　　　　　　４
．０ｇ蒸留水（ｑ、ｓ、）　　　　　　　　　　　　１
００．Ｏｊｌ／溶液Ｂ ショ糖　　　　　　　　　　　　　　　１５．０ｇ蒸留
水（ｑ、ｓ、）　　　　　　　　　　　１００．Ｏｇｊ
ｍｌ安定化液液ＡおよびＢを等量混合し、ｐＨを７．０
に調整して得た。 この混合ワクチンの凍結乾燥した試料を３７℃で１〜２
週間保存して安定性を検討した。保存期間後、試料を再
水和し、ＮＬＦＫ−１細胞中で力価を測定した。ＦｖＲ
ｍウィルス、カリシウィルスおよび安定化液の混合割合
はウィルスの力価約５．０ １０　〜約１０８°０ＴＣＩＤ　の範囲で種々選択でき
る。 凍結乾燥ワクチンは０．５　ｍｌの滅菌水で再水和し、
このウィルス含有液をネコの各鼻孔に約０．２５　ｔｘ
ｌづつ投与した。ウィルス含有液の１滴を時々、眼に滴
下し、ワクチンの安全性と粘膜に対する刺激をテストし
た。このワクチンはネコの頭をまっすぐにおさえ、鼻を
できるだけ上に向かせて鼻内に滴下した。 この混合ワクチンの鼻内投与効果を測定するため、Ｆｖ
Ｒｍおよびカリシウィルスの１＝１混合ワクチンをネコ
の４Ｆ’３に０．５　ｍ１滴下した。ウィルスの力価は
ＦｖＲｍ　ウィルスが１０　”５Ｔ　ＣＩ　Ｄ　ｓ。 およびカリシウィルスが１０８“６ＴＣＩＤ　　であつ
た。全てのネコはあらかじめ採血し、檻−ごとに血清を
ためた。各種、には少なくとも５匹のネコを入れた。つ
ぎの第４表に血清中和試験の結果を示す。 この２種のウィルスを混合したワクチンは、鼻内投与に
何の支障もなく血清中和力価に大きな影響を示した。ワ
クチン接種後、全てのネコの上気道感染の徴候を注意深
く観察したが、何の徴候も見られなかった。通路をはさ
んで置いた檻中の対照群のネコはこの間−上気道感染は
なかった。 ３１匹の子ネコ（生後２週間から６力月のもの６．０ 〕に１投与当り、各々、１０　ＴＣＩＤ５ｏのウィルス
を含有した該混合ワクチンを接種した。１例を除き、い
ずれも著しい血清中和力価の増加が見られた。 ４匹のＳ　Ｐ　１ｆ−１ｉ雌ネコにこの混合ワクチンを
投与して流産発生の影響をテストした。これらの酸ネコ
は、ワクチンを鼻内投与したとき（各ウィルスｌｏ６・
５ＴＣＩＤ５ｏ）、懐１Ｌ、ｒカラ約３０　Ｅｌであっ
た。酸ネコは接種前、いずれのウィルスに対しても抗体
を有しなかったが、全ての酸ネコは出産前、この混合ワ
クチンにより著しい抗体力価の上昇を示した。各酸ネコ
からは正常な子ネコが生まれ、この実験中も正常であっ
た。このことから、この混合ワクチンはｔ＋ｔＨした酸
ネコにも安全に投与でき、流産や新生児への影響は何ら
ないことが明らかである。 非ワクチン接種ＳＰＦ母親から生れた生後２週間の４匹
の子ネコに混合ワクチンを接種した。これらの子ネコは
ワクチン接種前はいずれのウィルスに対しても力価は有
してなかったが、ワクチン接種３週間後に両方のウィル
スに対する力価が生じた。すなわち、この混合ワクチン
は非常に若い子ネコにも安全に鼻内投与できる。 混合ワクチンは前記のＦＶＲワクチンと同様に処方され
、投与することができる。凍結乾燥ワクチンを再水和し
、鼻内または鼻内と眼の両方の経路で投与することが好
ましい。 特許出願人　ノルデン・ラボラドリース・インコーホレ
イテッド

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）ネコ鼻腔気管炎ウィルスを化学的変異誘発処理に
   より３０±２℃ではよく増殖するが、３９℃では増殖が
   抑制されるウィルスに変え、ついで、紫外線処理により
   約９０〜約９９％のウィルス粒子を死滅させ、これをネ
   コ腎臓細胞中、３０±２℃で大量のウィルスが増殖する
   に充分な時間培養し、得られたウィルスを収集すること
   を特徴とするネコ鼻腔気管炎ウィルスの大量生産方法。
2. （２）該ウィルスがＡＴＣＣ　ＶＲ＿８＿１＿５である
   特許請求の範囲第（１）項の方法。
3. （３）ウシ胎児血清約２〜約１０％含有するネコ腎臓細
   胞中、３１℃で培養する特許請求の範囲第（１）項の方
   法。