JPS62111997A - ポリペプチド - Google Patents
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- JPS62111997A JPS62111997A JP60252315A JP25231585A JPS62111997A JP S62111997 A JPS62111997 A JP S62111997A JP 60252315 A JP60252315 A JP 60252315A JP 25231585 A JP25231585 A JP 25231585A JP S62111997 A JPS62111997 A JP S62111997A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
〔産業上の利用分野〕
零発1す口。■、医薬として優れた作用を有する新規な
ポリペプチドに関する。更に詳しく述べれば、次の−・
般式 (式中、Pl及びR2は同−又は相異なる水素原子、低
級アルキル、低級アルノy゛ニル基を意味する。 式中、^及びBは、1)又はI、の塩基性アミノ酸又は
それらのα−N−アルキル誘導体を意味する;Cはα−
アミノ酸、β−アラニン、T−アミノ酪酸又はそれらの
α−N−アルキル誘導体;Dは式−0R3(式中、R3
は11又は低級アルキル基を意味する)で示される基、
式−1仁0R4(式中、Eは中性又は酸性アミノ酸を意
味し、l? ’ &;l″■又は低級アルキル基を意味
する)で示される基、式−Δrg−F−0−R5(式中
、FはD−アミノ酸を意味し、R5はH又は低級アルキ
ル恭を意味する)で示される基を意味する。 但し、上記構造式で表わされるポリペプチドの個々の構
成アミノ酸のすべてが一般式N1h−C1l−COOH
(式中、Rばアミノ酸の構造式から式 −CH−C0O
Hで表わされる基を除いた基を示す)で表わされる1、
−アミノ酸である場合し、1除く) で表わされるポリペブチ1゛又はその薬理的に許容でき
る塩及びその製造方法;並びにそれを含イ1する医薬に
関する。 本明細書においては、ペプチドを構成するアミノ酸は一
般にD一体、1.一体が存在するが、特にロ一体と指示
しないかぎりはl、一体である。 また本明細書においては、ペプチド化学の分野で111
1常用いられている略号を用いるが、念の為列記すれば
次のimすである。 Tyr ;チロシン Gly;グリシン Sar iザルコシン (:ys ;システィン P h Lシ ;フェニルアラニン 八rg;アルギニン 1、elf iロイシン 11θ ;イソロイシン 旧θ ;ノルロイシン Met ;メチオニン Ser ;セリン Val ;バリン homo−Arg iホモアルギニン Orn iオルニチン Glu ;グルタミン酸 Trp ; トリプトファン ^S[):アスパラギン酸 Ala ;アラニン β−^la;β−アラニン Pro ;プロリン Gin iグルタミン AiBH2−−アミノイソ酪酸 Boc i第3ブトキシカルボニル Z ;ヘンシルオキシカルボニル C1□Bzl;2.6−ジクロルヘンシルTos ;
パラトルエンスルホニル Bzl iヘンシル Rut;第3ブチル 〔従来の技術〕 モルフインの鎮痛作用メカニズムの研究から、生体内に
は痛覚をはじめ種々の生体感覚や精神作用を調節するい
わゆる内因性モルヒネ様物質が存在することが推定され
、この一連の研究からオピオイドペプチドとして、エン
ケファリン、エンドルフィンが争乱され、構造が確認さ
れた。 その後、この分野での研究が精力的になされ、β−Ne
oendorphin、 β−Casomorphin
XDermor−phin、 Dynorphinな
ど次々と新しいオピオイドペプチドが発見されてきた。 ごれらのうち、ダイノルフィン(Dynorphin)
は、木発明者の一部の者が発見した下記の構造式を有す
るオピオイドペプチドである。 11−Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−Ar
g−Arg−11e−八rg−Pro−1,ys−Le
u−1,ys−Trp−八sp−^5n−Gln−01
1このダイノルフィンは、K−レセプターに特異的な天
然由来のオピオイドペプチドであるため、耐性、依存性
等の副作用のない鎮痛薬としての可能性が期待されてい
る。 〔発明が解決しようとする問題点〕 しかしながら、ダイノルフィンは血中で不安定なため、
そのままでは静注で鎮痛作用を示さないという欠点があ
る。 またダイノルフィンは比較的長鎖のペプチドであるため
、更に短鎖のペプチ1゛で活性の高いペプチドが求めら
れている。 〔発明の開示〕 そこで、本発明者等は、ダイノルフィンより短い鎖のペ
プチドで、しかも静注、皮下性でも鎮痛作用を示す誘導
体について長年鋭意検討を重ねてきたが、漸くアミノ酸
7〜10個からなる次の構造式(T)を有する新規ペプ
チドが所間の目的を達することを見出した。 即ち次の一般式 (式中、R1及びR2は同−又は相異なる水素原子、低
級アルキル、低級アルケニル基を意味する。 式中、A及びBは、D又はI、の塩基性アミノ酸又はそ
れらのα−N−アルキル誘導体を意味する;Cはα−ア
ミノ酸、β−アラニン、T−アミノ酪酸又はそれらのα
−N−アルキル誘導体;Dは武−0R3(式中、R3は
■又は低級アルキル基を意味する)で示される基、弐〜
E−OR’ (式中、Hは中性又は酸性アミノ酸を意味
し、R4は11又は低級アルキル基を意味する)で示さ
れる基、式−Arg−F−0−R’ (式中、FはD
−アミノ酸を意味し、R5ば11又は低級アルキル基を
意味する)で示される基を意味する。 但し、上記構造式で表わされるポリペプチドの個々の構
成アミノ酸のすべてが−・般式Nll□−CIl−CO
OII (式中、Rはアミノ酸の構造式から式 −C
H−C0OHで表わされる基を除いた基を示IIZ ず)で表わされるl、−アミノ酸である場合は除く) で表わされるポリペプチド又は薬理的に許容できる塩で
ある。 本発明において、薬理的に許容できる塩とは、塩酸、硫
酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などの無機酸、及びマレ
イン酸、フマール酸、コハクI 酸、酢酸、マロン酸、クエン酸、安息香酸などの有機酸
を挙げることができる。 従って、本発明の目的は、医薬、鎮痛剤とし゛ζ有用な
新規ペプチドを提供するにある。 更に本発明の目的は、医薬として有用な新規ペプチドを
製造する方法を提供するにある。 更に本発明の目的は、新規な鎮痛剤を提供するにある。 上記のRI、 R5の定義にみられる低級アルキルとは
、炭素数1〜6の直鎖、分校状、環状若しくは環状を含
むアルキル、例えばメチル、エチル、n−プロピル、イ
ソプロピル、n−ブチル、イソブチル、1−メチルプロ
ピル、tert−ブチル、シクロプロピルメチル、n−
ペンチル、I−エチルプロピル、イソアミル、n−ヘキ
シル基などのアルキル基を意味する。またRlyRZの
定義にみられる低級アルケニル基とは、上記のアルキル
基の炭素鎖のいずれかに2重粘合を有するものを意味す
る。更に、アミノ酸の定義における「α−N−アルキル
誘導体」の[アルキルI 4;lニー1−記の低級アル
キルと同様の意味を有する。 本発明化合物(+)の構造り特徴とするとこ7)は、定
義に示した如く、すべての構成アミノ■ 酸のいずれもが一般式 〇J−CI−COOH(式中、
Rtitアミノ酸の構造式から式−CII −COOI
Iで表わ噸 Nil□ される基を除いた基を示す)で表わされるL−アミノ酸
である場合は除かれ、構成アミノ酸のいずれか一つ以上
がα−N−アルキルアミノ酸若しくはl)−アミノ酸で
あるポリペプチドであるということである。 本発明化合物は、このように構成アミノ酸のいずれか−
・つ以上をα−N−アルギルアミノ酸若しくはD−アミ
ノ酸としたことにより、構成アミノ酸のすべてが1.−
アミノ酸であるダイノルフィン若しくはその関連誘導体
が血中で不安定なためそのままでは静注で鎮痛作用を示
さないという大きな欠点を解決したもので、本発明化合
物は、生体内で極めて安定であり、鎮痛剤として実用に
供しうる価値の高い化合物である。 本発明化合物(1)において、Δ及びBの定義に見られ
る塩基性アミノ酸として具体例をあげれば、R7−若し
くはD−Arg 、 L−若しくはD−1,ys。 L−若しくはD−homo−Arg 、若しくはL−若
しくはD−Ornなどをあげることができるが、ごれら
の中ではL一体が好ましい。Bについては、特に塩基性
のアミノ酸のα−N−アルキル誘導体が好ましい。 Cの定義にみられるα−アミノ酸とは、いかなるアミノ
酸でもよいが、構造中に不斉炭素を有する場合はl、又
はDいずれの形でもよい。これらのうち好ましい例を挙
げれば、L−11e、 L−Leu+ L−Ala+
l−一νal+ L−Asp、 L−Pro、 L−t
ert−1,eu+D−Ala、 D−Val+ D−
Leu、 D−Glu、 D−Pro、 2−−アミノ
イソ酪酸、 Gay、α−メチル1.euなどを挙げる
ことができる。 Eの定義にみられる中性又は酸性アミノ酸とは、いかな
るアミノ酸でもよいが好ましい例を挙げれば、Gly、
Sar、 L−又はD−Ala、 Phe、 Asp
などがある。 Fの定義にみられるD−アミノ酸とは、いかなるアミノ
酸でもよいが好ましい例を挙げれば、11−I’ro、
り−Ala、 1l−Gluなどがある。 次に本発明に含まれる代表的化合物を具体的にtUげろ
が、目的とするところは、本発明の理解を助けるためで
あって、本発明がこれらのみに限定されることがないこ
とはいうまでもない。 ・C!1.Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−
Arg−C)13Arg−Pro−OH・CIl、、T
yr−Gly−Gly−Phe−1、eu−1,ys−
C113Arg−CI3Tle−OH・ CIl*T
yr−Gly−Gly−Phe−Leu−へrg−C1
13八rg−AiB−O1l・C113Tyr−Gly
−Gly−Phe−1,eu−^rg−Ct131.y
s−D−Ala−OH−C11zTC11zTyr−G
ly−Gly−Phe−Leu−Ar、Arg−NCt
l、CH,C00t+■ CI3 ・Ct13Tyr−Gly−Gly−Phe−1,eu
−Lys−CToLys−CI−13νal−Off・
C113Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−A
rC113Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−
Ar!・C113Tyr−Gly−Gly−PhCll
3Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−Ar□ ・ CHzTyr−Gly−GIy−Phe−1eu−
Arg−CtlaArg−CII3Leu−OCztl
s・ C1,CHzTyr−Gly−Gly−Phe−
Leu−^rg−Ct13Arg−D−Pro−Ala
−011 −C11zTyr−Gly−Gly−Phe−1、eu
−八rg−CHJrg−1)−1,eu−5ar−Of
t・ CH2=C!1−CHzTyr−Gly−Gl
y−Phe−1,eu−Arg−C11341g−CH
311e−D−八Ia−OH −〉−CHg−Tyr−Gly−Gly−Phe−Le
u−Arg−CI−13^rg−D4.eu−Arg−
D−Pro−OH ・ CH3Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−
Arg−C113Arg−D−Ala−Otl−CHa
Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−へrg−C
HaArg−CHaへIa−011・ C113Tyr
−Gly−Gly−Phe−[、eu−Arg−CH3
Arg−11e−OH・ Ct13Tyr−Gly−
Gly−Phe−Leu−Arg−CH3Arg−八5
p−011−CH3Tyr−Gly−Gly−Phe−
Leu−Arg−CI3八rへ−D−Leu−Off・
CH3Tyr−Gly−Gly−Phe−1,eu−
Arg−C)IJrg−D−Glu−011・ CHz
Tyr−Gly−Gly−Phe−!、eu−Arg−
CH3Arg−CI+3[1e−OH・ CH3Tyr
−Gly−Gly−Phe−1,eu−Arg−CHJ
rg−Sar−OH・ CHaTyr−Gly−Gly
−Phe−Leu−Arg−C113^rg−β−八へ
a−O11・ CllaTyr−Gly−Gly−Ph
e−LeCllaTyr−Gly−Gly−Phe−L
eu−Ar・ C11aTC11aTyr−Gly−G
ly−Phe−Leu−Ar^rg−D−1,eu−P
he−OH−C11=Tyr−GIy−GIy−Phe
−1,eu−Arg”C13^rg−D−1、eu−A
rg−11−G I u −OIt 本発明のペプチドは任意の好都合な方法で合成すること
ができる。保護ペプチドの合成は通常の液相法、固相法
のいずれの方法によっても可能である。一般にアミノ酸
の側鎖官能基は保護されている方が好ましく、最終工程
で全保護基の除去が行われる。アミノ酸の側鎖官能基の
保護基としては今までに報告されているすべての保護基
を利用することができるが、代表的なものを例示すると
トシル(Tos)基、ニトロ(NOZ)基、ベンジル(
Bzl)基、第3ブチル(BuL)基、ヘンシルオキシ
カルボニル(Z)基、第3ブトキシカルボニル(Roc
)基などがある。 アミノ酸のα−アミノ保護基としては、今までに報告さ
れているすべての保護基を利用することができるが、側
鎖官能基の保護基に影響をり、えず、α−アミノ保護基
だけを選択的に除去できるように組み合わせることが望
ましい。例えば、α−アミノ保護基として第3ブトキシ
カルボニル基を用いた場合は側鎖官能基の保護基にはベ
ンジル基やベンジルオキシカルボニル基などが都合がよ
く、α−アミノ保護基としてベンジルオキシカルボニル
基を用いた場合には側鎖官能基の保護基には第3ブチル
基や第3ブI・キシカルボニル基などの組み合わせが好
都合である。N末端のTyrのアミノ基がジアルキル化
されている時はこのアミノ基を保護しないで用いること
ができる。保護ペプチドの合成経路としては、合成中の
ラセミ化を抑えるため、全アミノ酸をC末端から1個ず
つつないでいくステンプワイズ法かGlyの位置でフラ
グメント縮合を行う方法が好ましいが、フラグメント縮
合を任意の位置で行うことも可能である。 本発明のペプチドは、固相法、液相法のいずれの場合で
もまず次の一般式で示される反応を繰り返すことにより
得られた保護ペプチドを脱保護、精製することにより合
成される。そこで、液相法の場合を例にして各工程を次
に説明ずろ。 X” YZ X’ Y’ 11 II R”−N−C肛ON −CIICOR’X2 YZ
XI Yl 11N −CI!(:ON −CIICO11’(−1
−記構造式において、xl、x2ば)I又はアルキル基
を、yl、yZ番31アミノ酸側鎖を、R’、R”は保
護基又はペプチド結合をそれぞれ意味する)(1)ペプ
チド結合の形成反応 ペプチド結合の形成方法吉しては今までに報告されてい
るすべての縮合方法を利用することができる。通常は、
一般式 2 vz 1f” −、N −CIICooH で示される酸コンポーネントのカルボニル基を常法によ
り、例えばアジド法、ジシクロへキシルカルポジイミF
(IIcc)法、混合酸無水物法、活性エステル法など
に、(、り活性化して、一般式 %式% で示されるアミン、:IンボーインI・と)シ“応さ・
Uる方法がとられる。この際の反応条件(例えば反応溶
媒や反応温度等)はカルボキシル基の活性化法によって
異なる。次に代表的な縮合法の−・つである混合酸無水
物法の操作を一つの例として示す。まず−・般式 2 YZ 11″−N−CIICOOII で示される酸コンポーネントをジメチルボルムアミド、
テトラヒドロフラン、酢酸エチル等の非プロ1−ン性溶
媒に溶解し、約−20℃に冷却後、等モルのN−メチル
モルホリンとクロル炭酸エチルを順次カーえる。5分後
に−・般式 %式% −(示されるアミンコンボーネン]−を等モル加λ、−
15〜0℃で2〜5時間攪拌し、常法に従い処理すると
一般式 %式% で示される保護ペプチドが得られる。 (2) α−アミノ保a!基の除去 、二の反応は接触還元法、酸を使用する方法、塩基を用
いる方法、ヒドラジンを用いる方法等のim常の方法を
適用して行われる。これらのJJ法のうち、好ましい方
法はα−アミノ保護ノλの種類によって選択される。代
表的なもの、としては、ヘンシルオキシカルボニル基の
接触還元による除去、第3ブトキシカルボニル基のトリ
フルオロ酢酸による除去等が挙げられる。次にトリフル
オロ酢酸による第3ブトキシカルボニル基の除去法の例
を示す。 一般式 %式% で示されるα−間 −ブトギシ力ルポニルベブチド1g
に水冷下アニソール0.25m1と1リフルオロ酢酸5
mlを加えて60分間攪拌後エーテルを加えて処理する
と、一般式 %式% で示されるペプチドの[リフルオロ酢酸塩が得られる。 これを溶媒に溶かして、トリエチルアミン等のアミンで
中和すると次の反応に使用することができる。 (3)全保8!基の除去 一■−記の縮合、α−アミノ保護基の除去を繰り返して
、ペプチドの鎖長を延ばした後全保護基を除去すると目
的とするペプチドの組成物が得られる。保護基の脱離は
、接触還元法、液体アンモニア−アルカリ金属を用いる
方法、酸を使用する方法、塩基を用いる方法、ヒドラジ
ンを用いる方法等の通常の方法を適用して行われる。こ
れらの方法の・うち、好ましい方法は保護基の種類によ
って選択される。通常、)、く使われる方法の一つの例
としてフン化水素(11肋による脱離反応操作を次4.
Z示ず。 保護ペプ千1′1gをアニソール0.5mlml存在術
閉系の11ド反応装置内で−15〜(1℃にて約30m
+の111カに溶かし、60分撹拌後肝を反応系より
留去する。残渣をエーテルで洗浄後水に溶解し2、アン
バーライトIRA−93(酢酸型)で処理し7凍結乾燥
を行うと保護基が除去されたベプチドネ11成物が得ら
れる。 (4) ペブチドネII成物の精製 ペプチドネII成物の精製は、イオン交換クロマ[・グ
ラフィー、ゲル濾過、分配クロマトグラフィー、向流分
配、高速液体クロマトグラソイ−等、通常の方法で行わ
れる。次に精製法の・つの例として高速液体りl771
−クラフィーによる精製法を示す。Nucleosil
5C]8を打」体とした20φX 250mmのカラ
J、に、ぺブチ[゛′粗成物100mgをチャージし、
0.05%IICI(11□[1−CIl:ICN)で
溶出する。LI V 210 n mで検出しながら、
L1的物ピーク部分を集め、凍結乾燥すると、目的とす
る高純度のベブチl−が得られる。 次に、本発明化合物の医薬とL7ての効果を詳細に説明
するために、動物実験の結果を示す。 一大・・鵠一一例・」・ [痛・大・験 1’Jt性ddy系マウス(体重20〜・27g)を用
い、1群8匹前後とし、生理食塩水に溶解した試験化合
物を静注或いは皮下注し、経時的に鎮痛作用をtail
pinch法により測定した。 tail pinch法(注1)と14マウスの尾根j
’l、11を動脈クレンメ (300g定圧)で挟んだ
峙に誘発されるかめつき反応(bitingrespo
nse)を指標として反応潜時を測定した。この検定法
においては、あらかじめ潜時が3秒lu内の動物のみを
選び、薬物投与後に潜時が6秒1ソト延びた動物を鎮痛
陽性と判定した。 +40 、、値(50%鎮痛作用量)をli tcbf
1eld−Wi 1coxonの方法(注2)により
算出した。結果を表1及び表2に示す。表1ば静注、表
2は皮A 士汀C,二お+Jる結果を示す。 表1及び表2において、試験化合物の欄に記載されてい
る数字は、本明細書で後記するそれぞれの実施例におい
て製造される最終化合物を示す。 表 1 (注1)次の文献記載の方法に従った。 Takagi li、、 et alHJap、 J、
Pharmacol。 Vol、 16.287〜294 (1966)(注2
)次の文献記載の方法に従った。 1.1tcl+field 、1.T、 and F、
Wilcoxon;J、Pharmacol、Exp
、Ther、、Vol、96゜99〜113(1949
) 実・験・例・・?・ オー〈オイドー活1i 岡らのうザギ輸精管(I?V11)法(T、 Oka、
K。 Negishi、 M、 5uda、 T、 Mats
umiya、 T、 Inaza。 M、 1JekiHEurop、 J、 Pharma
col、Vol、 73.2.15(1980))を用
いて、本発明化合物のオピオイド活性を調べた。成熟し
た雄ウサギを耳静脈より空気を注入して致死さ−(J、
直らに開腹し、左41輪精管を摘出した。リンゲル液中
で管内につまっている精液を押し出し、前立腺側端より
2.5(+IIIずつ、左右釜2本切り取った。これら
の摘出輸精管の両端に糸をつけて、内容量6mlの恒温
ガラスセルに入れ懸垂した。白金電極を装置して電気刺
激装置を用いて、0.]Hz、 1ms、 90Vol
tの条件で電気刺激した。電気刺激により収縮ばトラ
ンスデューサーを介して記録した。 電気刺激による収縮に対する抑制を指標にオピオイド活
性を測定した。 G 得られた結果を表2に、50%抑制濃度(ICso)と
して示す。 表 2 なお、本発明化合物は、モルモット回陽縦走筋成いばマ
ウス輸精管の電気刺激による収縮に刑しても強い抑制活
性を示す。 以−1−の薬理実験結果から、本発明によって得られる
ペプチド化合物は、ダイノルフィンと同質のオピオイド
活性を有し、その効力は極めて強力であり、且つ静注、
皮下性で著しい鎮痛作用を有することが明らかとなった
。 ダイノルフィン及びその関連誘導体が血中で不安定なた
め、静注で鎮痛作用を殆ど示さないのに対し、本発明化
合物が静注や皮士注など全身投与によって強力な鎮痛効
果を丞ずことば、極めて価値の高いものである。 また、本発明で得られるペプチド化合物のマウス皮下注
での毒性(最小致死頃)と有効量の関係について、実施
例1、実施例2及び実施例7の化合物について述べれば
以下の表3の如くである。 表3 マウス皮下注での有効量と最小致死量本発明によ
って得られたペプチド化合物は、著しい鎮痛効果を有し
、あらゆる医薬としての鎮痛分野に有用である。 本発明化合物を鎮痛剤として使用する場合は、経
ポリペプチドに関する。更に詳しく述べれば、次の−・
般式 (式中、Pl及びR2は同−又は相異なる水素原子、低
級アルキル、低級アルノy゛ニル基を意味する。 式中、^及びBは、1)又はI、の塩基性アミノ酸又は
それらのα−N−アルキル誘導体を意味する;Cはα−
アミノ酸、β−アラニン、T−アミノ酪酸又はそれらの
α−N−アルキル誘導体;Dは式−0R3(式中、R3
は11又は低級アルキル基を意味する)で示される基、
式−1仁0R4(式中、Eは中性又は酸性アミノ酸を意
味し、l? ’ &;l″■又は低級アルキル基を意味
する)で示される基、式−Δrg−F−0−R5(式中
、FはD−アミノ酸を意味し、R5はH又は低級アルキ
ル恭を意味する)で示される基を意味する。 但し、上記構造式で表わされるポリペプチドの個々の構
成アミノ酸のすべてが一般式N1h−C1l−COOH
(式中、Rばアミノ酸の構造式から式 −CH−C0O
Hで表わされる基を除いた基を示す)で表わされる1、
−アミノ酸である場合し、1除く) で表わされるポリペブチ1゛又はその薬理的に許容でき
る塩及びその製造方法;並びにそれを含イ1する医薬に
関する。 本明細書においては、ペプチドを構成するアミノ酸は一
般にD一体、1.一体が存在するが、特にロ一体と指示
しないかぎりはl、一体である。 また本明細書においては、ペプチド化学の分野で111
1常用いられている略号を用いるが、念の為列記すれば
次のimすである。 Tyr ;チロシン Gly;グリシン Sar iザルコシン (:ys ;システィン P h Lシ ;フェニルアラニン 八rg;アルギニン 1、elf iロイシン 11θ ;イソロイシン 旧θ ;ノルロイシン Met ;メチオニン Ser ;セリン Val ;バリン homo−Arg iホモアルギニン Orn iオルニチン Glu ;グルタミン酸 Trp ; トリプトファン ^S[):アスパラギン酸 Ala ;アラニン β−^la;β−アラニン Pro ;プロリン Gin iグルタミン AiBH2−−アミノイソ酪酸 Boc i第3ブトキシカルボニル Z ;ヘンシルオキシカルボニル C1□Bzl;2.6−ジクロルヘンシルTos ;
パラトルエンスルホニル Bzl iヘンシル Rut;第3ブチル 〔従来の技術〕 モルフインの鎮痛作用メカニズムの研究から、生体内に
は痛覚をはじめ種々の生体感覚や精神作用を調節するい
わゆる内因性モルヒネ様物質が存在することが推定され
、この一連の研究からオピオイドペプチドとして、エン
ケファリン、エンドルフィンが争乱され、構造が確認さ
れた。 その後、この分野での研究が精力的になされ、β−Ne
oendorphin、 β−Casomorphin
XDermor−phin、 Dynorphinな
ど次々と新しいオピオイドペプチドが発見されてきた。 ごれらのうち、ダイノルフィン(Dynorphin)
は、木発明者の一部の者が発見した下記の構造式を有す
るオピオイドペプチドである。 11−Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−Ar
g−Arg−11e−八rg−Pro−1,ys−Le
u−1,ys−Trp−八sp−^5n−Gln−01
1このダイノルフィンは、K−レセプターに特異的な天
然由来のオピオイドペプチドであるため、耐性、依存性
等の副作用のない鎮痛薬としての可能性が期待されてい
る。 〔発明が解決しようとする問題点〕 しかしながら、ダイノルフィンは血中で不安定なため、
そのままでは静注で鎮痛作用を示さないという欠点があ
る。 またダイノルフィンは比較的長鎖のペプチドであるため
、更に短鎖のペプチ1゛で活性の高いペプチドが求めら
れている。 〔発明の開示〕 そこで、本発明者等は、ダイノルフィンより短い鎖のペ
プチドで、しかも静注、皮下性でも鎮痛作用を示す誘導
体について長年鋭意検討を重ねてきたが、漸くアミノ酸
7〜10個からなる次の構造式(T)を有する新規ペプ
チドが所間の目的を達することを見出した。 即ち次の一般式 (式中、R1及びR2は同−又は相異なる水素原子、低
級アルキル、低級アルケニル基を意味する。 式中、A及びBは、D又はI、の塩基性アミノ酸又はそ
れらのα−N−アルキル誘導体を意味する;Cはα−ア
ミノ酸、β−アラニン、T−アミノ酪酸又はそれらのα
−N−アルキル誘導体;Dは武−0R3(式中、R3は
■又は低級アルキル基を意味する)で示される基、弐〜
E−OR’ (式中、Hは中性又は酸性アミノ酸を意味
し、R4は11又は低級アルキル基を意味する)で示さ
れる基、式−Arg−F−0−R’ (式中、FはD
−アミノ酸を意味し、R5ば11又は低級アルキル基を
意味する)で示される基を意味する。 但し、上記構造式で表わされるポリペプチドの個々の構
成アミノ酸のすべてが−・般式Nll□−CIl−CO
OII (式中、Rはアミノ酸の構造式から式 −C
H−C0OHで表わされる基を除いた基を示IIZ ず)で表わされるl、−アミノ酸である場合は除く) で表わされるポリペプチド又は薬理的に許容できる塩で
ある。 本発明において、薬理的に許容できる塩とは、塩酸、硫
酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などの無機酸、及びマレ
イン酸、フマール酸、コハクI 酸、酢酸、マロン酸、クエン酸、安息香酸などの有機酸
を挙げることができる。 従って、本発明の目的は、医薬、鎮痛剤とし゛ζ有用な
新規ペプチドを提供するにある。 更に本発明の目的は、医薬として有用な新規ペプチドを
製造する方法を提供するにある。 更に本発明の目的は、新規な鎮痛剤を提供するにある。 上記のRI、 R5の定義にみられる低級アルキルとは
、炭素数1〜6の直鎖、分校状、環状若しくは環状を含
むアルキル、例えばメチル、エチル、n−プロピル、イ
ソプロピル、n−ブチル、イソブチル、1−メチルプロ
ピル、tert−ブチル、シクロプロピルメチル、n−
ペンチル、I−エチルプロピル、イソアミル、n−ヘキ
シル基などのアルキル基を意味する。またRlyRZの
定義にみられる低級アルケニル基とは、上記のアルキル
基の炭素鎖のいずれかに2重粘合を有するものを意味す
る。更に、アミノ酸の定義における「α−N−アルキル
誘導体」の[アルキルI 4;lニー1−記の低級アル
キルと同様の意味を有する。 本発明化合物(+)の構造り特徴とするとこ7)は、定
義に示した如く、すべての構成アミノ■ 酸のいずれもが一般式 〇J−CI−COOH(式中、
Rtitアミノ酸の構造式から式−CII −COOI
Iで表わ噸 Nil□ される基を除いた基を示す)で表わされるL−アミノ酸
である場合は除かれ、構成アミノ酸のいずれか一つ以上
がα−N−アルキルアミノ酸若しくはl)−アミノ酸で
あるポリペプチドであるということである。 本発明化合物は、このように構成アミノ酸のいずれか−
・つ以上をα−N−アルギルアミノ酸若しくはD−アミ
ノ酸としたことにより、構成アミノ酸のすべてが1.−
アミノ酸であるダイノルフィン若しくはその関連誘導体
が血中で不安定なためそのままでは静注で鎮痛作用を示
さないという大きな欠点を解決したもので、本発明化合
物は、生体内で極めて安定であり、鎮痛剤として実用に
供しうる価値の高い化合物である。 本発明化合物(1)において、Δ及びBの定義に見られ
る塩基性アミノ酸として具体例をあげれば、R7−若し
くはD−Arg 、 L−若しくはD−1,ys。 L−若しくはD−homo−Arg 、若しくはL−若
しくはD−Ornなどをあげることができるが、ごれら
の中ではL一体が好ましい。Bについては、特に塩基性
のアミノ酸のα−N−アルキル誘導体が好ましい。 Cの定義にみられるα−アミノ酸とは、いかなるアミノ
酸でもよいが、構造中に不斉炭素を有する場合はl、又
はDいずれの形でもよい。これらのうち好ましい例を挙
げれば、L−11e、 L−Leu+ L−Ala+
l−一νal+ L−Asp、 L−Pro、 L−t
ert−1,eu+D−Ala、 D−Val+ D−
Leu、 D−Glu、 D−Pro、 2−−アミノ
イソ酪酸、 Gay、α−メチル1.euなどを挙げる
ことができる。 Eの定義にみられる中性又は酸性アミノ酸とは、いかな
るアミノ酸でもよいが好ましい例を挙げれば、Gly、
Sar、 L−又はD−Ala、 Phe、 Asp
などがある。 Fの定義にみられるD−アミノ酸とは、いかなるアミノ
酸でもよいが好ましい例を挙げれば、11−I’ro、
り−Ala、 1l−Gluなどがある。 次に本発明に含まれる代表的化合物を具体的にtUげろ
が、目的とするところは、本発明の理解を助けるためで
あって、本発明がこれらのみに限定されることがないこ
とはいうまでもない。 ・C!1.Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−
Arg−C)13Arg−Pro−OH・CIl、、T
yr−Gly−Gly−Phe−1、eu−1,ys−
C113Arg−CI3Tle−OH・ CIl*T
yr−Gly−Gly−Phe−Leu−へrg−C1
13八rg−AiB−O1l・C113Tyr−Gly
−Gly−Phe−1,eu−^rg−Ct131.y
s−D−Ala−OH−C11zTC11zTyr−G
ly−Gly−Phe−Leu−Ar、Arg−NCt
l、CH,C00t+■ CI3 ・Ct13Tyr−Gly−Gly−Phe−1,eu
−Lys−CToLys−CI−13νal−Off・
C113Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−A
rC113Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−
Ar!・C113Tyr−Gly−Gly−PhCll
3Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−Ar□ ・ CHzTyr−Gly−GIy−Phe−1eu−
Arg−CtlaArg−CII3Leu−OCztl
s・ C1,CHzTyr−Gly−Gly−Phe−
Leu−^rg−Ct13Arg−D−Pro−Ala
−011 −C11zTyr−Gly−Gly−Phe−1、eu
−八rg−CHJrg−1)−1,eu−5ar−Of
t・ CH2=C!1−CHzTyr−Gly−Gl
y−Phe−1,eu−Arg−C11341g−CH
311e−D−八Ia−OH −〉−CHg−Tyr−Gly−Gly−Phe−Le
u−Arg−CI−13^rg−D4.eu−Arg−
D−Pro−OH ・ CH3Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−
Arg−C113Arg−D−Ala−Otl−CHa
Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−へrg−C
HaArg−CHaへIa−011・ C113Tyr
−Gly−Gly−Phe−[、eu−Arg−CH3
Arg−11e−OH・ Ct13Tyr−Gly−
Gly−Phe−Leu−Arg−CH3Arg−八5
p−011−CH3Tyr−Gly−Gly−Phe−
Leu−Arg−CI3八rへ−D−Leu−Off・
CH3Tyr−Gly−Gly−Phe−1,eu−
Arg−C)IJrg−D−Glu−011・ CHz
Tyr−Gly−Gly−Phe−!、eu−Arg−
CH3Arg−CI+3[1e−OH・ CH3Tyr
−Gly−Gly−Phe−1,eu−Arg−CHJ
rg−Sar−OH・ CHaTyr−Gly−Gly
−Phe−Leu−Arg−C113^rg−β−八へ
a−O11・ CllaTyr−Gly−Gly−Ph
e−LeCllaTyr−Gly−Gly−Phe−L
eu−Ar・ C11aTC11aTyr−Gly−G
ly−Phe−Leu−Ar^rg−D−1,eu−P
he−OH−C11=Tyr−GIy−GIy−Phe
−1,eu−Arg”C13^rg−D−1、eu−A
rg−11−G I u −OIt 本発明のペプチドは任意の好都合な方法で合成すること
ができる。保護ペプチドの合成は通常の液相法、固相法
のいずれの方法によっても可能である。一般にアミノ酸
の側鎖官能基は保護されている方が好ましく、最終工程
で全保護基の除去が行われる。アミノ酸の側鎖官能基の
保護基としては今までに報告されているすべての保護基
を利用することができるが、代表的なものを例示すると
トシル(Tos)基、ニトロ(NOZ)基、ベンジル(
Bzl)基、第3ブチル(BuL)基、ヘンシルオキシ
カルボニル(Z)基、第3ブトキシカルボニル(Roc
)基などがある。 アミノ酸のα−アミノ保護基としては、今までに報告さ
れているすべての保護基を利用することができるが、側
鎖官能基の保護基に影響をり、えず、α−アミノ保護基
だけを選択的に除去できるように組み合わせることが望
ましい。例えば、α−アミノ保護基として第3ブトキシ
カルボニル基を用いた場合は側鎖官能基の保護基にはベ
ンジル基やベンジルオキシカルボニル基などが都合がよ
く、α−アミノ保護基としてベンジルオキシカルボニル
基を用いた場合には側鎖官能基の保護基には第3ブチル
基や第3ブI・キシカルボニル基などの組み合わせが好
都合である。N末端のTyrのアミノ基がジアルキル化
されている時はこのアミノ基を保護しないで用いること
ができる。保護ペプチドの合成経路としては、合成中の
ラセミ化を抑えるため、全アミノ酸をC末端から1個ず
つつないでいくステンプワイズ法かGlyの位置でフラ
グメント縮合を行う方法が好ましいが、フラグメント縮
合を任意の位置で行うことも可能である。 本発明のペプチドは、固相法、液相法のいずれの場合で
もまず次の一般式で示される反応を繰り返すことにより
得られた保護ペプチドを脱保護、精製することにより合
成される。そこで、液相法の場合を例にして各工程を次
に説明ずろ。 X” YZ X’ Y’ 11 II R”−N−C肛ON −CIICOR’X2 YZ
XI Yl 11N −CI!(:ON −CIICO11’(−1
−記構造式において、xl、x2ば)I又はアルキル基
を、yl、yZ番31アミノ酸側鎖を、R’、R”は保
護基又はペプチド結合をそれぞれ意味する)(1)ペプ
チド結合の形成反応 ペプチド結合の形成方法吉しては今までに報告されてい
るすべての縮合方法を利用することができる。通常は、
一般式 2 vz 1f” −、N −CIICooH で示される酸コンポーネントのカルボニル基を常法によ
り、例えばアジド法、ジシクロへキシルカルポジイミF
(IIcc)法、混合酸無水物法、活性エステル法など
に、(、り活性化して、一般式 %式% で示されるアミン、:IンボーインI・と)シ“応さ・
Uる方法がとられる。この際の反応条件(例えば反応溶
媒や反応温度等)はカルボキシル基の活性化法によって
異なる。次に代表的な縮合法の−・つである混合酸無水
物法の操作を一つの例として示す。まず−・般式 2 YZ 11″−N−CIICOOII で示される酸コンポーネントをジメチルボルムアミド、
テトラヒドロフラン、酢酸エチル等の非プロ1−ン性溶
媒に溶解し、約−20℃に冷却後、等モルのN−メチル
モルホリンとクロル炭酸エチルを順次カーえる。5分後
に−・般式 %式% −(示されるアミンコンボーネン]−を等モル加λ、−
15〜0℃で2〜5時間攪拌し、常法に従い処理すると
一般式 %式% で示される保護ペプチドが得られる。 (2) α−アミノ保a!基の除去 、二の反応は接触還元法、酸を使用する方法、塩基を用
いる方法、ヒドラジンを用いる方法等のim常の方法を
適用して行われる。これらのJJ法のうち、好ましい方
法はα−アミノ保護ノλの種類によって選択される。代
表的なもの、としては、ヘンシルオキシカルボニル基の
接触還元による除去、第3ブトキシカルボニル基のトリ
フルオロ酢酸による除去等が挙げられる。次にトリフル
オロ酢酸による第3ブトキシカルボニル基の除去法の例
を示す。 一般式 %式% で示されるα−間 −ブトギシ力ルポニルベブチド1g
に水冷下アニソール0.25m1と1リフルオロ酢酸5
mlを加えて60分間攪拌後エーテルを加えて処理する
と、一般式 %式% で示されるペプチドの[リフルオロ酢酸塩が得られる。 これを溶媒に溶かして、トリエチルアミン等のアミンで
中和すると次の反応に使用することができる。 (3)全保8!基の除去 一■−記の縮合、α−アミノ保護基の除去を繰り返して
、ペプチドの鎖長を延ばした後全保護基を除去すると目
的とするペプチドの組成物が得られる。保護基の脱離は
、接触還元法、液体アンモニア−アルカリ金属を用いる
方法、酸を使用する方法、塩基を用いる方法、ヒドラジ
ンを用いる方法等の通常の方法を適用して行われる。こ
れらの方法の・うち、好ましい方法は保護基の種類によ
って選択される。通常、)、く使われる方法の一つの例
としてフン化水素(11肋による脱離反応操作を次4.
Z示ず。 保護ペプ千1′1gをアニソール0.5mlml存在術
閉系の11ド反応装置内で−15〜(1℃にて約30m
+の111カに溶かし、60分撹拌後肝を反応系より
留去する。残渣をエーテルで洗浄後水に溶解し2、アン
バーライトIRA−93(酢酸型)で処理し7凍結乾燥
を行うと保護基が除去されたベプチドネ11成物が得ら
れる。 (4) ペブチドネII成物の精製 ペプチドネII成物の精製は、イオン交換クロマ[・グ
ラフィー、ゲル濾過、分配クロマトグラフィー、向流分
配、高速液体クロマトグラソイ−等、通常の方法で行わ
れる。次に精製法の・つの例として高速液体りl771
−クラフィーによる精製法を示す。Nucleosil
5C]8を打」体とした20φX 250mmのカラ
J、に、ぺブチ[゛′粗成物100mgをチャージし、
0.05%IICI(11□[1−CIl:ICN)で
溶出する。LI V 210 n mで検出しながら、
L1的物ピーク部分を集め、凍結乾燥すると、目的とす
る高純度のベブチl−が得られる。 次に、本発明化合物の医薬とL7ての効果を詳細に説明
するために、動物実験の結果を示す。 一大・・鵠一一例・」・ [痛・大・験 1’Jt性ddy系マウス(体重20〜・27g)を用
い、1群8匹前後とし、生理食塩水に溶解した試験化合
物を静注或いは皮下注し、経時的に鎮痛作用をtail
pinch法により測定した。 tail pinch法(注1)と14マウスの尾根j
’l、11を動脈クレンメ (300g定圧)で挟んだ
峙に誘発されるかめつき反応(bitingrespo
nse)を指標として反応潜時を測定した。この検定法
においては、あらかじめ潜時が3秒lu内の動物のみを
選び、薬物投与後に潜時が6秒1ソト延びた動物を鎮痛
陽性と判定した。 +40 、、値(50%鎮痛作用量)をli tcbf
1eld−Wi 1coxonの方法(注2)により
算出した。結果を表1及び表2に示す。表1ば静注、表
2は皮A 士汀C,二お+Jる結果を示す。 表1及び表2において、試験化合物の欄に記載されてい
る数字は、本明細書で後記するそれぞれの実施例におい
て製造される最終化合物を示す。 表 1 (注1)次の文献記載の方法に従った。 Takagi li、、 et alHJap、 J、
Pharmacol。 Vol、 16.287〜294 (1966)(注2
)次の文献記載の方法に従った。 1.1tcl+field 、1.T、 and F、
Wilcoxon;J、Pharmacol、Exp
、Ther、、Vol、96゜99〜113(1949
) 実・験・例・・?・ オー〈オイドー活1i 岡らのうザギ輸精管(I?V11)法(T、 Oka、
K。 Negishi、 M、 5uda、 T、 Mats
umiya、 T、 Inaza。 M、 1JekiHEurop、 J、 Pharma
col、Vol、 73.2.15(1980))を用
いて、本発明化合物のオピオイド活性を調べた。成熟し
た雄ウサギを耳静脈より空気を注入して致死さ−(J、
直らに開腹し、左41輪精管を摘出した。リンゲル液中
で管内につまっている精液を押し出し、前立腺側端より
2.5(+IIIずつ、左右釜2本切り取った。これら
の摘出輸精管の両端に糸をつけて、内容量6mlの恒温
ガラスセルに入れ懸垂した。白金電極を装置して電気刺
激装置を用いて、0.]Hz、 1ms、 90Vol
tの条件で電気刺激した。電気刺激により収縮ばトラ
ンスデューサーを介して記録した。 電気刺激による収縮に対する抑制を指標にオピオイド活
性を測定した。 G 得られた結果を表2に、50%抑制濃度(ICso)と
して示す。 表 2 なお、本発明化合物は、モルモット回陽縦走筋成いばマ
ウス輸精管の電気刺激による収縮に刑しても強い抑制活
性を示す。 以−1−の薬理実験結果から、本発明によって得られる
ペプチド化合物は、ダイノルフィンと同質のオピオイド
活性を有し、その効力は極めて強力であり、且つ静注、
皮下性で著しい鎮痛作用を有することが明らかとなった
。 ダイノルフィン及びその関連誘導体が血中で不安定なた
め、静注で鎮痛作用を殆ど示さないのに対し、本発明化
合物が静注や皮士注など全身投与によって強力な鎮痛効
果を丞ずことば、極めて価値の高いものである。 また、本発明で得られるペプチド化合物のマウス皮下注
での毒性(最小致死頃)と有効量の関係について、実施
例1、実施例2及び実施例7の化合物について述べれば
以下の表3の如くである。 表3 マウス皮下注での有効量と最小致死量本発明によ
って得られたペプチド化合物は、著しい鎮痛効果を有し
、あらゆる医薬としての鎮痛分野に有用である。 本発明化合物を鎮痛剤として使用する場合は、経
【1投
与若しくは非経「】投与により投与されるが、通常は静
脈内、皮下、筋肉内など注射剤、生薬若しくは舌下錠な
ど非経口投与により投与される。投与量は、症状の程度
;患者の年令、性別、体重、感受性差;投与方法;投与
の時期・間隔、医薬製剤の性質・調剤・種類;有効成分
の種類などによって異なり、特に限定されないが、通常
成人111あたり約0.1〜1,000mg 、好まし
くは約1〜300mgである。 本発明化合物を製剤化するためには、製剤の技術分野に
おける通常の方法で注射剤、生薬、舌下錠、錠剤、カプ
セル剤などの割型とする。 注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりpl+調
整剤、緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、安定化剤、等張
化剤、保存剤などを添加し、常法により静脈、皮下、筋
肉内注射剤とする。その際必要により常法により凍結乾
燥物とすることも可能である。 懸濁剤としての例を挙げれば、例えばメチルセルロース
、ポリソルベート80、ヒドロキシエチルセルロース、
アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレートなどを挙げることができる。 溶解補助剤としては、例えばポリオキシエチレン硬化し
マシ油、ポリソルベート80、ニコチン酸アミド、ボリ
オシキエチレンソルビタンモノラウレ−1・、マグロゴ
ール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステルなどを挙げること
ができる。 また安定化剤としては、例えば、亜硫酸ナトリウム、メ
タ亜硫酸ナトリウム、エーテル等が、保存剤としては、
例えばパラオキシ安息香酸メチル、バラオキシ安息香酸
エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロ
クレゾールなどを挙げることができる。 次に本発明の代表的な実施例を掲げるが、本発明がこれ
らのみに限定されることがないことはいうまでもない。 1) Z−CH3^す刃ros、)−D−Ala−O
Buとp−令爪Z−CHJrg(Tos)OR3,33
6gをテトラヒドロフラン20m lに溶解し、−30
℃に冷却後、N−メチルモルホリン0.77m1とクロ
ル炭酸エチル0 、669m l を加える。5分後、
IIcI ・H−D−Δ1a−OHut1.272gと
N−メチルモルホリン1.16m1のテトラヒドロフラ
ン(20ml)溶液を加えて約−5℃で2時間攪拌する
。濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、NaHCO3水
、水で順次洗浄し、濃縮乾固するとガラス状のZ−CH
3Arg(Tos)D−^1a−OBuL4.16gが
得られる。 TLC:Iif値0.69 <メタノール:クロロホル
ム、1ニア)旋光度:〔α) o” 15.5 ’
(c=1、メタノール)元素分析値: CzJ14.N
5O7SとしてCII N 理論値(χ) 57.70 6.85 11.60実
測値(χ) 57.54 6.59 11.312)
7−−、Ijrg、(Tos>二Ctl−s^r
、g−(、’joS2− p4.I a 二(jBu’
(Q @成 Z−(:II、^rg(Tos)−rl−Ala−OB
utをPd−Cの存在下接触還元して得たCtlJrg
(Tos)−D−Ala−0[1ut2.87g 、、
Z−Arg(Tos)−0H3,392gXN −ヒド
ロキシヘンソ薯・リアヅール1.188gをジメチルホ
ルムアミド10n+1に溶解する。水冷下ジシクロへキ
シルカルボジイミド1.662gを加え、冷蔵室で2目
間攪拌する。沈澱を濾別後f14縮し、残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー(メタノール/クロロホル
ム−1/20で溶出)で精製することにより、ガラス状
のZ、^rg (Tos)−CH3Arg(Tos)−
D−八1a−OBut2.04gが得られる。 7LC:Rf値0.57 (メタノール:クロロホルム
、1ニア)旋光度:〔α) n−31,6°(C−1、
メタノール)元素分析(l!:C4□HsJ、0+。S
2・%H20としてCHN 理論値(χ) 54.65 6.62 13.66実
測値(χ) 54.64 6.48 13.723)
7ニリ19隻二ΔLれ工9旦y二】ンリ、Ar、B
−(工9ジ)」−二M旦二叫叩−1−−p府−底 Z−1,eu−OH0,629gをジメチルホルムアミ
ド15m1に溶解し、−20℃に冷却後N−メチルモル
ホリン0.261m1 とクロル炭酸エチル0.227
m1を加える。5分後、IIcI−H−Arg(Tos
)−Cl1Arg(Tos)−11−Ala−ORu’
(Z−Arg(Tos)−Cl13Arg(Tos
)−D−八l a −OIt u tをPd−Cの存在
下接触還元して合成したもの〕1.76gとN−メチル
モルホリン0.356m1のジメチルホルムアミド(1
5ml)溶液を加えて約−5℃で2時間攪拌する。濃縮
後、残渣を酢酸エチルに溶解し、NaHCO,、水、水
で順次洗浄し、濃縮乾固するとガラス状のZ−1,eu
−Arg(Tos)−Cl13Arg(Tos)−D−
八1a−OBuL2.11g が得られる。 TIC:訂値0.57 (メタノール:クロロホルム、
1ニア)旋光度:(α) n = 36.26(c=
1、メタノール)元素分析値: C45t17oN+o
O++Sz ・%C1l+C00CJsとして CI(N 理論値(χ) 56.06 6.96 13.07実
測値(χ) 56.02 6.85 13.084)
Z−P、j!e−Leu−jr、g(工os)
二(1!、=イエ9乏)−、DzAIa−一90虻p育
戒 Z−P)+e−011595mgをジメチルボルムアミ
ド151に溶解し、−20℃に冷却後N−メチルモルホ
リン0.219m1 とクロル炭酸エチル0.190m
1を加える。5背後11cI ・ILI、eu−Arg
(Tos) −CIL+Arg(Tos)−D−Ala
−OBut(Z−1,eu−Arg(Tos)−Cl1
3Arg(Tos)−11−Ala−OButをPd−
C存在下接触還元して合成したもの) 1.68gとN
−メチルモルホリン0.299m1 のジメチルボルム
アミド(15ml)溶液を加えて約−5℃で2時間攪拌
する。濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、NaHCO
3水、水で順次洗浄する。溶媒を留去後エーテルを加え
てデカントし、濃縮乾固するとガラス状のZ−Phe−
Leu−Arg(Tos)−CI3八rへ(Tos)−
D−Ala−OButl、87gが得られる。 TLC:Rf値0.61 (メタノール:クロロポルム
、1ニア)旋光度:〔α) 、−−34,7°(c=1
、メタノール)元素分析値: Cs、H7qN+ +0
+□S2・CztlsOCzHsとしてCHN 理論値(χ) 58.68 7.19 12.34実
測値(χ)58.66 6.83 12.425)
Boc二CH3Tyr(CIJzl)−Gjy−Gl
y−Phe二1.eu−Arg(Tos)zcl13八
rH(jos)−D−A−1a−0旧r−ニー−q)合
成f1oe−C113Tyr(CI。Bzl)−Gly
−Gly−OR969mgをユ゛ノメチルホル1、アミ
ド12m1に溶解し、−20℃に冷J、n t&、N−
メチルモルホリンO,I8Rml とり1−1ル炭酸エ
チル0.163m1を加える。5分後、flcI −
II−Phe−1、eu−Arg(Tos)−CI 3
Ar g(Tos)−11−八Ia4111ut C
Z−Phe−1,eu−Ar(((Tos)−C)1.
八rg(Tos)−D−A I a −Ofl u L
をPd−Cの存在下接触還元して合成t7だもの) 1
.67g 、L N−メチルモルボリン0.256m1
のジメチルボルムアミド(15ml)溶液を加え、約
−5℃で2時間攪拌する。濃縮後、残渣を11酸エチル
に溶解し、Na1lCO3水、水で順次洗浄する6溶媒
を減圧留去後、残渣をメタノール−エーテルで固化させ
ると、B o c、 −C11aTyr(C12Bzl
)−Gly−Gly−Phe−1,eu−Arg(To
s) −C11a^rg(Tos)−11−八Ia−O
RuL2.196gが得られる。 融点:130〜135°c (dec)1’LC:Rf
値0.61 (メタノール:クロロポルム、lニア)旋
光度:〔α)、=−40,7°(CI、メタノール)元
素分析値: C75H102N+4011.32CI2
・2CI+30HとしてCII N 理論値(χ)55.89 6.70 11.85実測値
(χ) 55.95 6.42 1.1.786)
[;jjd、yr−、Gjy−Gly−Pt+e二
leuニヘrLCij:+−j’1r(H−IF−Aj
a−=Oj鼾−へ合力! Roc−CII3Tyr(CI2RZl)−Gly−G
ly l’t+e−1,eu−八rg(Tos)−C
LArg(Tos)−11−Ala−ORuL200m
gを−メニソール0.2ml存在下密閉系のフン化水素
(IIF)反応装置内で一5°Cにて肝10m1に溶か
し、1時間撹拌後11Fを反X15糸より留去する。 残渣をエーテルで洗浄した後、水に溶解し、アンバーラ
イトIRA−93(酢酸型)で処理、凍結乾燥する。凍
結乾燥した相ベブチt”120mgを高速液体クロマト
グラフィー[Nucleosi15C18,2φ×25
吐、0.05%肛1(11□0−C1hCN 、。 92:8)で溶出〕で精製し7、凍結乾燥するとCH3
Tyr−Gly−Gly−円+e−Leu−へrg−C
H3八rg41−八1a−01160mgが得られる。 TIC:Rf(1! 0.54 (ブタノール:耐酸:
ビリジン:水=15:5:5:8) Q 旋光度:〔α〕、2°=−35.1°(c=0.4.0
.01NIIC+)′Cf1T1分析(1稍B): 9
67(rMll!:1” )メミ2ノ酸分析: 旧y 1.95(2)、 I、eu 1.00(1)、
jutejute 1.00(])。 八へg 0.99(1)、 ΔIs 1.01(
])(ζ:II:+Tyr、 C11,、八rgのヒ′
−りはil算していない) 実−施−例−−2− Cj+!Tyr−GIS’zGly−4’je11.e
u−Arg−CjlHAr((−Cj13−へla二〇
jl−の合tr’2 1) 4二CIIJrB(T卯y則片lへ坤二p咋
とq)合力!Z−C1laArg(Tos)OH4,5
08g、 HCl−C11,Ala−OButl、68
3g、 N−−ヒドロキシベンゾトリアゾール1.5
3独とN−メチルモルホリン1.04m1をジメチルホ
ルノ、了ミド10m1に溶解する。氷冷下ジャク11ヘ
キシルカルボジイミド2.144gを加え冷蔵室で−・
夜撹拌する。沈澱を濾別後濃縮し、残渣を耐酸エチルに
溶解し、クエン酸水、Na1lC03水、水で順次洗浄
する。濃縮乾固するとガラス状のZ−CIl、Arg(
Tos)−CII3AIa−OBu’、10 4.24gが得られる。 T1.、C:Rf値0.61 (メタノール:クロロホ
ルム、1ニア)旋光度:(α)D=−57,8°(c:
=1、メタノール)元素分析値: (、+oH4JsO
□SとしてCII N 理論値(X) 5B、33 7.02 1+、、33
実測値(χ)58.11 6.88 11.、旧2)
Z−Arg−(Tos)−、、CIj、jlrg
(Tos)−C1(z^Ia□01(u’q入伍−−戊 Z−CI+3八rgへTos)−Cll:1AIa−O
ButをPd−Cの存在下、接触還元し−r 18たC
HlArg(Tos)−CIL+八IaへOBut2.
90g 、 Z−Arg(Tos)0113.329g
、、 N−ヒドロキシベンゾトリアゾール1.166
gをジメチルホルムアミドl0m1に溶解する。水冷士
−ジシクロへキシルカルボジイミド1.359gを加え
、冷蔵室で2日間攪拌する。沈澱を濾別後濃縮し、残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィ(MeOH/CI
ICIa=1/15で溶出)で精製するごとにより、ガ
ラス状のZ−Arg(Tos)−CII3Arg(To
s)−C)13AIa−OBut2.1gが得られる。 且0=訂イ+N O,46(メタノール:クロロホル1
1.1ニア)1iK尤度: [cx〕、−−57,1°
(c−1、メタノール)元素分析値: CaJl161
NqO+oSz ・耳112o としてCII
N 理論イ直(χ) 54.07 6.75
13.20実測値(χ) 54.10 6.35
13.183) 7zle4+−Ar−g(Tos
、)−CHaへrg−(T−os)−C,ll qfj
−1−a−−OBu −!の合1菌 Z Leu−Oft 247mgをジメチルポルムアミ
110m1に溶解し、−20℃に冷却後N−メチルモル
ボリン0.102m1 とクロル炭酸エチル0 、 O
R11m lを加える。5分後、tlcl ・II−A
rg(Tos)−C113Arg(Tos)−Cl13
八1a−OBuL (Z−八rg(Tos)−CHz
Arg(Tos)−CI+3IIa−OButをPd−
C存在−ド接触還元して合成し、たちの) 700mg
とN−メチルモルホリン0.139m1 のジメチルホ
ルムアミド(10ml)溶液を加えて約−5°Cで2時
間攪拌する。濃縮後、り(渣を酢酸エチルに溶解し、N
a1lCO3水、水で+nl′を次洗浄する。溶媒を留
去後エーテルを加えてデカン]・シ、濃縮乾固するとガ
ラス状のZ−Leu−Arg(Tos)−C113Δr
g(Tos)−C113八1a−Otluto、86g
が得られる。 TLC:Rf値0.48 (メタノール:りDOホルム
、1ニア)旋光度:〔α) 、=−60,3°(c−1
、メタノール)元素分析値: C4911?2NI00
11s2 ・CztlsOCzHsとし7てCHN 理論値(χ)57.(+7 7.41 12.55実泪
II(直(χ) 56.83 7.02
[2,644) 7.−Phe−I、eu−A
rg(Tos)二Cl13ArB(T−o−−s)−1
Cjj−*AI−a90吋−の合成 Z−Phe−OH224mgをジメチルホルムアミド7
mlに溶解し、−20℃に冷却後N−メチルモルボリン
0.082m1 とクロル炭酸エチル0.071m1を
加える。5分後、llCl ・ll4eu−Arg(T
os)−C113Arg(Tos)−CH3AIa−O
ButrZ−1,eu−Arg(Tos)−Ctl:+
Arg (Tos) −CI13A Ia−OButを
Pd−C存在下接触還元して合成したもの) 640m
gとN−メチルモルボリン0゜]]2ml のジメチル
ポルムアミド(7ml)溶液を加えて、約−5°Cで2
時間撹拌する。ンa縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、
Na1lCO,水、水で順次洗浄する。 溶媒を留去後エーテルを加えてデカントし、f1441
’i乾固するとガラス状のZ−Phe−Leu−Arg
(1’os)−C113Arg(Tos)−CH3AI
a−OBut770mgが/!tられる。 且(: : Rf値0.54 (メタノール:クロロホ
ルム、1ニア)旋光度:〔α〕。−−59,66(c=
1、メタノール)元素分析値: C5atl++lNz
0+zSz・CzllsOCzllsとしてCII
N 理論値(χ) 58.98 7.26 12.20実
測値(χ)58.68 6.91 12.245)
、BoCi−CtlaT−yr(C−1zRz土と−
Gly−IG↓y」肋二即す−ニ^rg(Tc平)−−
cH3,llr匹−(、Tcとジ)」用達1a、O棒C
−ψ−令成 11oc−Cl13Tyr(ClJzl)−Gly−G
ly−OH350mgをジメチルホルムアミド5mlに
熔解し、−20℃に冷却後N−メチルモルホリン0 、
068m lとクロル炭酸エチル0.059m1を加え
る。5背後11CI −11−円+e−1,eu−^r
g(Tos)−CIIJrg(Tos)−CIl、Al
a−OFluL(Z−Phe−Leu−Arg(Tos
)−C13Arg(Tos)−CII3Ala−OBu
tをPd−C存在下接触還元して合成したもの) 61
0mgとN−メチルモルホリン0.092m1 のジメ
チルポルムアミド(6ml)溶液を加えて約−5℃で2
時間攪拌する。濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、N
a1lC03水、水で順次洗浄する。濃縮後メタノール
−エーテルで固化させるとBoc−Cl13Tyr(C
I2BZI)−Gly−Gly−Phe−Leu−Ar
g (Tos)−CIL+八rgへTos)−CH3八
lへ−ORuL760mgが得られる。 融点:125〜133℃(dec) TLC:Rf4a0.55 (メタ/−ル、クロn ホ
/Lz11.1ニア)旋光度:〔α) n=−56,4
’ (c=]、メタノール)元素分析値:C,ll、。 4N+40+6S2C1□・%C21150C2115
として CII N 理論値(χ) 57.06 6.69 11.94実
測値(χ)56.71 6.46 11.496)
」且−T y 7−吋y−−9+yニy扛q二Le慧二
へ一叶−qjhヘリニc、、H,,ハL(倶〕生存戊 Boc−CH3Tyr(C1zBzl)−Gly−Gl
y−Phe−1、旧1−八rg(Tos)−CHJrg
(Tos)−CIIzAIa−OBut 210mgを
アニソール0.2mlの存在下密閉系のフ・ノ化水素(
I什)反応装置内で一5°CにてIIFlomlに溶か
し、1時間攪拌後11Fを反応系より留去する。残渣を
エーテルで洗浄した後、水に溶解し、アンバーライトI
RA−93(酢酸型)で処理、凍結乾燥する。凍結乾燥
した粗ペプチド130mgを高速液体クロマトグラフィ
ー CNucleosil 5C18,2φX 25c
m、0.05%11CI(II□0−CtL+CN 、
91 :9)で溶i1口で精製し、凍結乾燥するとCH
3Tyr−Gly−GIy−Phe−Leu−Arg−
C11aArg−Cl13^1a−01150mgが得
られる。 TLC:Rf値0.54 (ブタノール:酢酸:ビリジ
ン:水=15:5:5:8) 旋光度;〔α) D”=−64,7°(c=0.4.0
.01N−HCI)買置分析(FAB): 981([
M+Il’]” )アミノ酸分析: Gly 1.92(2)、 1.eu 1.04(1)
、 Phe 1.00(1)。 Arg O,986(1) (Ct13Tyr、 CH:+Arg、 CH3^1a
のピークは計算していない) 尤−施−−秒1−3ご−V2一 実施例1.2と同様に通常の液相法で表4の化合物を合
成した。即ち、ダイノルフィ〉′のl−3位(Tyr−
Gly−GIV)の誘導体、4−8位(Phe−Leu
−Arg−Arg−Tle)の誘導体、4−9位(Ph
e−1、eu−Arg−Arg−1ie−Arg)の誘
導体、4−10位(Phe−Leu−ArH−へrg−
11e−八rg−Pro) の8秀導体をまず各ペプ
チドのC末端から順にステップワイズ法で合成し、次に
1−3位の誘導体と4−8.4−9.4−10位の誘導
体をncc−110Rt法又は混合酸無水物法で縮合し
た後、フン化水素(IIF)で全保護基を除去し、逆相
系の担体を用いたプレパラティブ高速液体クロマトグラ
フィーで精製した。各保護ペプチドの合成経路の概要を
図式1〜3に示す。 得られた目的物質であるペプチドの旋光度〔α〕。′。 、TLCRf値及びアミノ酸分析結果を表5に示す。 J 表 4 図三へ−1−−実一施−−例−3〜 則CH3Tyr(
CI2Bzl) Gly Gly
Phe l、eu Arg(T
os) Cl13ArC113Ar RR:II
e、 Asp(OBut)、 D−Leu、 D
−Glu(OBu’)、 CH3TIe、 Sar
+ β−八la図式−針−大−廁−−例−しQ工」−
1−CIIJyr(C1zl(zl) 1dly
Gly Phe Le
u 八rg(Tos) (]I3Arg(Tos
) D−Leu RR: Asp(Ollu
t) + Phe表 5 アミノ酸分析では、Gly+ Leu、 Phe+ A
rg、 IIe+ Asp、 Gluのアを分析した。 〔α〕、′。の測定、 C=0.4.0.01N−11
cITLC−Rf値の測定;ブタノール:酢酸:ビリジ
ン:水−15:5:5:出願人代理人 古 谷
馨
与若しくは非経「】投与により投与されるが、通常は静
脈内、皮下、筋肉内など注射剤、生薬若しくは舌下錠な
ど非経口投与により投与される。投与量は、症状の程度
;患者の年令、性別、体重、感受性差;投与方法;投与
の時期・間隔、医薬製剤の性質・調剤・種類;有効成分
の種類などによって異なり、特に限定されないが、通常
成人111あたり約0.1〜1,000mg 、好まし
くは約1〜300mgである。 本発明化合物を製剤化するためには、製剤の技術分野に
おける通常の方法で注射剤、生薬、舌下錠、錠剤、カプ
セル剤などの割型とする。 注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりpl+調
整剤、緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、安定化剤、等張
化剤、保存剤などを添加し、常法により静脈、皮下、筋
肉内注射剤とする。その際必要により常法により凍結乾
燥物とすることも可能である。 懸濁剤としての例を挙げれば、例えばメチルセルロース
、ポリソルベート80、ヒドロキシエチルセルロース、
アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレートなどを挙げることができる。 溶解補助剤としては、例えばポリオキシエチレン硬化し
マシ油、ポリソルベート80、ニコチン酸アミド、ボリ
オシキエチレンソルビタンモノラウレ−1・、マグロゴ
ール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステルなどを挙げること
ができる。 また安定化剤としては、例えば、亜硫酸ナトリウム、メ
タ亜硫酸ナトリウム、エーテル等が、保存剤としては、
例えばパラオキシ安息香酸メチル、バラオキシ安息香酸
エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロ
クレゾールなどを挙げることができる。 次に本発明の代表的な実施例を掲げるが、本発明がこれ
らのみに限定されることがないことはいうまでもない。 1) Z−CH3^す刃ros、)−D−Ala−O
Buとp−令爪Z−CHJrg(Tos)OR3,33
6gをテトラヒドロフラン20m lに溶解し、−30
℃に冷却後、N−メチルモルホリン0.77m1とクロ
ル炭酸エチル0 、669m l を加える。5分後、
IIcI ・H−D−Δ1a−OHut1.272gと
N−メチルモルホリン1.16m1のテトラヒドロフラ
ン(20ml)溶液を加えて約−5℃で2時間攪拌する
。濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、NaHCO3水
、水で順次洗浄し、濃縮乾固するとガラス状のZ−CH
3Arg(Tos)D−^1a−OBuL4.16gが
得られる。 TLC:Iif値0.69 <メタノール:クロロホル
ム、1ニア)旋光度:〔α) o” 15.5 ’
(c=1、メタノール)元素分析値: CzJ14.N
5O7SとしてCII N 理論値(χ) 57.70 6.85 11.60実
測値(χ) 57.54 6.59 11.312)
7−−、Ijrg、(Tos>二Ctl−s^r
、g−(、’joS2− p4.I a 二(jBu’
(Q @成 Z−(:II、^rg(Tos)−rl−Ala−OB
utをPd−Cの存在下接触還元して得たCtlJrg
(Tos)−D−Ala−0[1ut2.87g 、、
Z−Arg(Tos)−0H3,392gXN −ヒド
ロキシヘンソ薯・リアヅール1.188gをジメチルホ
ルムアミド10n+1に溶解する。水冷下ジシクロへキ
シルカルボジイミド1.662gを加え、冷蔵室で2目
間攪拌する。沈澱を濾別後f14縮し、残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー(メタノール/クロロホル
ム−1/20で溶出)で精製することにより、ガラス状
のZ、^rg (Tos)−CH3Arg(Tos)−
D−八1a−OBut2.04gが得られる。 7LC:Rf値0.57 (メタノール:クロロホルム
、1ニア)旋光度:〔α) n−31,6°(C−1、
メタノール)元素分析(l!:C4□HsJ、0+。S
2・%H20としてCHN 理論値(χ) 54.65 6.62 13.66実
測値(χ) 54.64 6.48 13.723)
7ニリ19隻二ΔLれ工9旦y二】ンリ、Ar、B
−(工9ジ)」−二M旦二叫叩−1−−p府−底 Z−1,eu−OH0,629gをジメチルホルムアミ
ド15m1に溶解し、−20℃に冷却後N−メチルモル
ホリン0.261m1 とクロル炭酸エチル0.227
m1を加える。5分後、IIcI−H−Arg(Tos
)−Cl1Arg(Tos)−11−Ala−ORu’
(Z−Arg(Tos)−Cl13Arg(Tos
)−D−八l a −OIt u tをPd−Cの存在
下接触還元して合成したもの〕1.76gとN−メチル
モルホリン0.356m1のジメチルホルムアミド(1
5ml)溶液を加えて約−5℃で2時間攪拌する。濃縮
後、残渣を酢酸エチルに溶解し、NaHCO,、水、水
で順次洗浄し、濃縮乾固するとガラス状のZ−1,eu
−Arg(Tos)−Cl13Arg(Tos)−D−
八1a−OBuL2.11g が得られる。 TIC:訂値0.57 (メタノール:クロロホルム、
1ニア)旋光度:(α) n = 36.26(c=
1、メタノール)元素分析値: C45t17oN+o
O++Sz ・%C1l+C00CJsとして CI(N 理論値(χ) 56.06 6.96 13.07実
測値(χ) 56.02 6.85 13.084)
Z−P、j!e−Leu−jr、g(工os)
二(1!、=イエ9乏)−、DzAIa−一90虻p育
戒 Z−P)+e−011595mgをジメチルボルムアミ
ド151に溶解し、−20℃に冷却後N−メチルモルホ
リン0.219m1 とクロル炭酸エチル0.190m
1を加える。5背後11cI ・ILI、eu−Arg
(Tos) −CIL+Arg(Tos)−D−Ala
−OBut(Z−1,eu−Arg(Tos)−Cl1
3Arg(Tos)−11−Ala−OButをPd−
C存在下接触還元して合成したもの) 1.68gとN
−メチルモルホリン0.299m1 のジメチルボルム
アミド(15ml)溶液を加えて約−5℃で2時間攪拌
する。濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、NaHCO
3水、水で順次洗浄する。溶媒を留去後エーテルを加え
てデカントし、濃縮乾固するとガラス状のZ−Phe−
Leu−Arg(Tos)−CI3八rへ(Tos)−
D−Ala−OButl、87gが得られる。 TLC:Rf値0.61 (メタノール:クロロポルム
、1ニア)旋光度:〔α) 、−−34,7°(c=1
、メタノール)元素分析値: Cs、H7qN+ +0
+□S2・CztlsOCzHsとしてCHN 理論値(χ) 58.68 7.19 12.34実
測値(χ)58.66 6.83 12.425)
Boc二CH3Tyr(CIJzl)−Gjy−Gl
y−Phe二1.eu−Arg(Tos)zcl13八
rH(jos)−D−A−1a−0旧r−ニー−q)合
成f1oe−C113Tyr(CI。Bzl)−Gly
−Gly−OR969mgをユ゛ノメチルホル1、アミ
ド12m1に溶解し、−20℃に冷J、n t&、N−
メチルモルホリンO,I8Rml とり1−1ル炭酸エ
チル0.163m1を加える。5分後、flcI −
II−Phe−1、eu−Arg(Tos)−CI 3
Ar g(Tos)−11−八Ia4111ut C
Z−Phe−1,eu−Ar(((Tos)−C)1.
八rg(Tos)−D−A I a −Ofl u L
をPd−Cの存在下接触還元して合成t7だもの) 1
.67g 、L N−メチルモルボリン0.256m1
のジメチルボルムアミド(15ml)溶液を加え、約
−5℃で2時間攪拌する。濃縮後、残渣を11酸エチル
に溶解し、Na1lCO3水、水で順次洗浄する6溶媒
を減圧留去後、残渣をメタノール−エーテルで固化させ
ると、B o c、 −C11aTyr(C12Bzl
)−Gly−Gly−Phe−1,eu−Arg(To
s) −C11a^rg(Tos)−11−八Ia−O
RuL2.196gが得られる。 融点:130〜135°c (dec)1’LC:Rf
値0.61 (メタノール:クロロポルム、lニア)旋
光度:〔α)、=−40,7°(CI、メタノール)元
素分析値: C75H102N+4011.32CI2
・2CI+30HとしてCII N 理論値(χ)55.89 6.70 11.85実測値
(χ) 55.95 6.42 1.1.786)
[;jjd、yr−、Gjy−Gly−Pt+e二
leuニヘrLCij:+−j’1r(H−IF−Aj
a−=Oj鼾−へ合力! Roc−CII3Tyr(CI2RZl)−Gly−G
ly l’t+e−1,eu−八rg(Tos)−C
LArg(Tos)−11−Ala−ORuL200m
gを−メニソール0.2ml存在下密閉系のフン化水素
(IIF)反応装置内で一5°Cにて肝10m1に溶か
し、1時間撹拌後11Fを反X15糸より留去する。 残渣をエーテルで洗浄した後、水に溶解し、アンバーラ
イトIRA−93(酢酸型)で処理、凍結乾燥する。凍
結乾燥した相ベブチt”120mgを高速液体クロマト
グラフィー[Nucleosi15C18,2φ×25
吐、0.05%肛1(11□0−C1hCN 、。 92:8)で溶出〕で精製し7、凍結乾燥するとCH3
Tyr−Gly−Gly−円+e−Leu−へrg−C
H3八rg41−八1a−01160mgが得られる。 TIC:Rf(1! 0.54 (ブタノール:耐酸:
ビリジン:水=15:5:5:8) Q 旋光度:〔α〕、2°=−35.1°(c=0.4.0
.01NIIC+)′Cf1T1分析(1稍B): 9
67(rMll!:1” )メミ2ノ酸分析: 旧y 1.95(2)、 I、eu 1.00(1)、
jutejute 1.00(])。 八へg 0.99(1)、 ΔIs 1.01(
])(ζ:II:+Tyr、 C11,、八rgのヒ′
−りはil算していない) 実−施−例−−2− Cj+!Tyr−GIS’zGly−4’je11.e
u−Arg−CjlHAr((−Cj13−へla二〇
jl−の合tr’2 1) 4二CIIJrB(T卯y則片lへ坤二p咋
とq)合力!Z−C1laArg(Tos)OH4,5
08g、 HCl−C11,Ala−OButl、68
3g、 N−−ヒドロキシベンゾトリアゾール1.5
3独とN−メチルモルホリン1.04m1をジメチルホ
ルノ、了ミド10m1に溶解する。氷冷下ジャク11ヘ
キシルカルボジイミド2.144gを加え冷蔵室で−・
夜撹拌する。沈澱を濾別後濃縮し、残渣を耐酸エチルに
溶解し、クエン酸水、Na1lC03水、水で順次洗浄
する。濃縮乾固するとガラス状のZ−CIl、Arg(
Tos)−CII3AIa−OBu’、10 4.24gが得られる。 T1.、C:Rf値0.61 (メタノール:クロロホ
ルム、1ニア)旋光度:(α)D=−57,8°(c:
=1、メタノール)元素分析値: (、+oH4JsO
□SとしてCII N 理論値(X) 5B、33 7.02 1+、、33
実測値(χ)58.11 6.88 11.、旧2)
Z−Arg−(Tos)−、、CIj、jlrg
(Tos)−C1(z^Ia□01(u’q入伍−−戊 Z−CI+3八rgへTos)−Cll:1AIa−O
ButをPd−Cの存在下、接触還元し−r 18たC
HlArg(Tos)−CIL+八IaへOBut2.
90g 、 Z−Arg(Tos)0113.329g
、、 N−ヒドロキシベンゾトリアゾール1.166
gをジメチルホルムアミドl0m1に溶解する。水冷士
−ジシクロへキシルカルボジイミド1.359gを加え
、冷蔵室で2日間攪拌する。沈澱を濾別後濃縮し、残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィ(MeOH/CI
ICIa=1/15で溶出)で精製するごとにより、ガ
ラス状のZ−Arg(Tos)−CII3Arg(To
s)−C)13AIa−OBut2.1gが得られる。 且0=訂イ+N O,46(メタノール:クロロホル1
1.1ニア)1iK尤度: [cx〕、−−57,1°
(c−1、メタノール)元素分析値: CaJl161
NqO+oSz ・耳112o としてCII
N 理論イ直(χ) 54.07 6.75
13.20実測値(χ) 54.10 6.35
13.183) 7zle4+−Ar−g(Tos
、)−CHaへrg−(T−os)−C,ll qfj
−1−a−−OBu −!の合1菌 Z Leu−Oft 247mgをジメチルポルムアミ
110m1に溶解し、−20℃に冷却後N−メチルモル
ボリン0.102m1 とクロル炭酸エチル0 、 O
R11m lを加える。5分後、tlcl ・II−A
rg(Tos)−C113Arg(Tos)−Cl13
八1a−OBuL (Z−八rg(Tos)−CHz
Arg(Tos)−CI+3IIa−OButをPd−
C存在−ド接触還元して合成し、たちの) 700mg
とN−メチルモルホリン0.139m1 のジメチルホ
ルムアミド(10ml)溶液を加えて約−5°Cで2時
間攪拌する。濃縮後、り(渣を酢酸エチルに溶解し、N
a1lCO3水、水で+nl′を次洗浄する。溶媒を留
去後エーテルを加えてデカン]・シ、濃縮乾固するとガ
ラス状のZ−Leu−Arg(Tos)−C113Δr
g(Tos)−C113八1a−Otluto、86g
が得られる。 TLC:Rf値0.48 (メタノール:りDOホルム
、1ニア)旋光度:〔α) 、=−60,3°(c−1
、メタノール)元素分析値: C4911?2NI00
11s2 ・CztlsOCzHsとし7てCHN 理論値(χ)57.(+7 7.41 12.55実泪
II(直(χ) 56.83 7.02
[2,644) 7.−Phe−I、eu−A
rg(Tos)二Cl13ArB(T−o−−s)−1
Cjj−*AI−a90吋−の合成 Z−Phe−OH224mgをジメチルホルムアミド7
mlに溶解し、−20℃に冷却後N−メチルモルボリン
0.082m1 とクロル炭酸エチル0.071m1を
加える。5分後、llCl ・ll4eu−Arg(T
os)−C113Arg(Tos)−CH3AIa−O
ButrZ−1,eu−Arg(Tos)−Ctl:+
Arg (Tos) −CI13A Ia−OButを
Pd−C存在下接触還元して合成したもの) 640m
gとN−メチルモルボリン0゜]]2ml のジメチル
ポルムアミド(7ml)溶液を加えて、約−5°Cで2
時間撹拌する。ンa縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、
Na1lCO,水、水で順次洗浄する。 溶媒を留去後エーテルを加えてデカントし、f1441
’i乾固するとガラス状のZ−Phe−Leu−Arg
(1’os)−C113Arg(Tos)−CH3AI
a−OBut770mgが/!tられる。 且(: : Rf値0.54 (メタノール:クロロホ
ルム、1ニア)旋光度:〔α〕。−−59,66(c=
1、メタノール)元素分析値: C5atl++lNz
0+zSz・CzllsOCzllsとしてCII
N 理論値(χ) 58.98 7.26 12.20実
測値(χ)58.68 6.91 12.245)
、BoCi−CtlaT−yr(C−1zRz土と−
Gly−IG↓y」肋二即す−ニ^rg(Tc平)−−
cH3,llr匹−(、Tcとジ)」用達1a、O棒C
−ψ−令成 11oc−Cl13Tyr(ClJzl)−Gly−G
ly−OH350mgをジメチルホルムアミド5mlに
熔解し、−20℃に冷却後N−メチルモルホリン0 、
068m lとクロル炭酸エチル0.059m1を加え
る。5背後11CI −11−円+e−1,eu−^r
g(Tos)−CIIJrg(Tos)−CIl、Al
a−OFluL(Z−Phe−Leu−Arg(Tos
)−C13Arg(Tos)−CII3Ala−OBu
tをPd−C存在下接触還元して合成したもの) 61
0mgとN−メチルモルホリン0.092m1 のジメ
チルポルムアミド(6ml)溶液を加えて約−5℃で2
時間攪拌する。濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、N
a1lC03水、水で順次洗浄する。濃縮後メタノール
−エーテルで固化させるとBoc−Cl13Tyr(C
I2BZI)−Gly−Gly−Phe−Leu−Ar
g (Tos)−CIL+八rgへTos)−CH3八
lへ−ORuL760mgが得られる。 融点:125〜133℃(dec) TLC:Rf4a0.55 (メタ/−ル、クロn ホ
/Lz11.1ニア)旋光度:〔α) n=−56,4
’ (c=]、メタノール)元素分析値:C,ll、。 4N+40+6S2C1□・%C21150C2115
として CII N 理論値(χ) 57.06 6.69 11.94実
測値(χ)56.71 6.46 11.496)
」且−T y 7−吋y−−9+yニy扛q二Le慧二
へ一叶−qjhヘリニc、、H,,ハL(倶〕生存戊 Boc−CH3Tyr(C1zBzl)−Gly−Gl
y−Phe−1、旧1−八rg(Tos)−CHJrg
(Tos)−CIIzAIa−OBut 210mgを
アニソール0.2mlの存在下密閉系のフ・ノ化水素(
I什)反応装置内で一5°CにてIIFlomlに溶か
し、1時間攪拌後11Fを反応系より留去する。残渣を
エーテルで洗浄した後、水に溶解し、アンバーライトI
RA−93(酢酸型)で処理、凍結乾燥する。凍結乾燥
した粗ペプチド130mgを高速液体クロマトグラフィ
ー CNucleosil 5C18,2φX 25c
m、0.05%11CI(II□0−CtL+CN 、
91 :9)で溶i1口で精製し、凍結乾燥するとCH
3Tyr−Gly−GIy−Phe−Leu−Arg−
C11aArg−Cl13^1a−01150mgが得
られる。 TLC:Rf値0.54 (ブタノール:酢酸:ビリジ
ン:水=15:5:5:8) 旋光度;〔α) D”=−64,7°(c=0.4.0
.01N−HCI)買置分析(FAB): 981([
M+Il’]” )アミノ酸分析: Gly 1.92(2)、 1.eu 1.04(1)
、 Phe 1.00(1)。 Arg O,986(1) (Ct13Tyr、 CH:+Arg、 CH3^1a
のピークは計算していない) 尤−施−−秒1−3ご−V2一 実施例1.2と同様に通常の液相法で表4の化合物を合
成した。即ち、ダイノルフィ〉′のl−3位(Tyr−
Gly−GIV)の誘導体、4−8位(Phe−Leu
−Arg−Arg−Tle)の誘導体、4−9位(Ph
e−1、eu−Arg−Arg−1ie−Arg)の誘
導体、4−10位(Phe−Leu−ArH−へrg−
11e−八rg−Pro) の8秀導体をまず各ペプ
チドのC末端から順にステップワイズ法で合成し、次に
1−3位の誘導体と4−8.4−9.4−10位の誘導
体をncc−110Rt法又は混合酸無水物法で縮合し
た後、フン化水素(IIF)で全保護基を除去し、逆相
系の担体を用いたプレパラティブ高速液体クロマトグラ
フィーで精製した。各保護ペプチドの合成経路の概要を
図式1〜3に示す。 得られた目的物質であるペプチドの旋光度〔α〕。′。 、TLCRf値及びアミノ酸分析結果を表5に示す。 J 表 4 図三へ−1−−実一施−−例−3〜 則CH3Tyr(
CI2Bzl) Gly Gly
Phe l、eu Arg(T
os) Cl13ArC113Ar RR:II
e、 Asp(OBut)、 D−Leu、 D
−Glu(OBu’)、 CH3TIe、 Sar
+ β−八la図式−針−大−廁−−例−しQ工」−
1−CIIJyr(C1zl(zl) 1dly
Gly Phe Le
u 八rg(Tos) (]I3Arg(Tos
) D−Leu RR: Asp(Ollu
t) + Phe表 5 アミノ酸分析では、Gly+ Leu、 Phe+ A
rg、 IIe+ Asp、 Gluのアを分析した。 〔α〕、′。の測定、 C=0.4.0.01N−11
cITLC−Rf値の測定;ブタノール:酢酸:ビリジ
ン:水−15:5:5:出願人代理人 古 谷
馨
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 次の一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ {式中、R^1及びR^2は同一又は相異なる水素原子
、低級アルキル、低級アルケニル基を意味する。 式中、A及びBは、n又はLの塩基性アミノ酸又はそれ
らのα−N−アルキル誘導体を意味する;Cはα−アミ
ノ酸、β−アラニン、γ−アミノ酪酸又はそれらのα−
N−アルキル誘導体;Dは式−OR^3(式中、R^3
はH又は低級アルキル基を意味する)で示される基、式
−E−OR^4(式中、Eは中性又は酸性アミノ酸を意
味し、R^4はH又は低級アルキル基を意味する)で示
される基、式−Arg−F−O−R^5(式中、FはD
−アミノ酸を意味し、R^5はH又は低級アルキル基を
意味する)で示される基を意味する。 但し、上記構造式で表わされるポリペプチドの個々の構
成アミノ酸のすべてが一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼(式中、Rはアミノ
酸の構造式から式▲数式、化学式、表等があります▼で
表わされる基を除いた基を示す)で表わされるL−アミ
ノ酸である場合は除く} で表わされるポリペプチド又は薬理的に許容できる塩。 2 次の一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ {式中、R^1及びR^2は同一又は相異なる水素原子
、低級アルキル、低級アルケニル基を意味する。 式中、A及びBは、D又はLの塩基性アミノ酸又はそれ
らのα−N−アルキル誘導体を意味する;Cはα−アミ
ノ酸、β−アラニン、γ−アミノ酪酸又はそれらのα−
N−アルキル誘導体;Dは式−OR^3(式中、R^3
はH又は低級アルキル基を意味する)で示される基、式
−E−OR^4(式中、Eは中性又は酸性アミノ酸を意
味し、R^4はH又は低級アルキル基を意味する)で示
される基、式−Arg−F−O−R^5(式中、FはD
−アミノ酸を意味し、R^5はH又は低級アルキル基を
意味する)で示される基を意味する。 但し、上記構造式で表わされるポリペプチドの個々の構
成アミノ酸のすべてが一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼(式中、Rはアミノ
酸の構造式から式▲数式、化学式、表等があります▼で
表わされる基を除いた基を示す)で表わされるL−アミ
ノ酸である場合は除く} で表わされるポリペプチドの保護体を製造し、次いでこ
れを脱保護し、上記の構造式で示されるポリペプチドを
得、必要により常法により薬理的に許容できる塩とする
ことを特徴とする上記構造を有するポリペプチド又はそ
の薬理的に許容できる塩の製造方法。 3 次の一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ {式中、R^1及びR^2は同一又は相異なる水素原子
、低級アルキル、低級アルケニル基を意味する。 式中、A及びBは、D又はLの塩基性アミノ酸又はそれ
らのα−N−アルキル誘導体を意味する;Cはα−アミ
ノ酸、β−アラニン、γ−アミノ酪酸又はそれらのα−
N−アルキル誘導体;Dは式−OR^3(式中、R^3
はH又は低級アルキル基を意味する)で示される基、式
−E−OR^4(式中、Eは中性又は酸性アミノ酸を意
味し、R^4はH又は低級アルキル基を意味する)で示
される基、式−Arg−F−O−R^5(式中、FはD
−アミノ酸を意味し、R^5はH又は低級アルキル基を
意味する)で示される基を意味する。 但し、上記構造式で表わされるポリペプチドの個々の構
成アミノ酸のすべてが一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼(式中、Rはアミノ
酸の構造式から式▲数式、化学式、表等があります▼で
表わされる基を除いた基を示す)で表わされるL−アミ
ノ酸である場合は除く} で表わされるポリペプチド又は薬理的に許容できる塩を
有効成分とする鎮痛剤。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60252315A JP2553506B2 (ja) | 1985-11-11 | 1985-11-11 | ポリペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60252315A JP2553506B2 (ja) | 1985-11-11 | 1985-11-11 | ポリペプチド |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62111997A true JPS62111997A (ja) | 1987-05-22 |
JP2553506B2 JP2553506B2 (ja) | 1996-11-13 |
Family
ID=17235540
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60252315A Expired - Lifetime JP2553506B2 (ja) | 1985-11-11 | 1985-11-11 | ポリペプチド |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2553506B2 (ja) |
-
1985
- 1985-11-11 JP JP60252315A patent/JP2553506B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2553506B2 (ja) | 1996-11-13 |
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