JPS6170463A - リウマチ特異蛋白質の精製方法 - Google Patents
リウマチ特異蛋白質の精製方法Info
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- JPS6170463A JPS6170463A JP59191753A JP19175384A JPS6170463A JP S6170463 A JPS6170463 A JP S6170463A JP 59191753 A JP59191753 A JP 59191753A JP 19175384 A JP19175384 A JP 19175384A JP S6170463 A JPS6170463 A JP S6170463A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、慢性関節リウマチ等のリウマチ血漿中からＲ
ＬＨしたリウマチ特異蛋白質の精製方法に関するもので
ある。
ＬＨしたリウマチ特異蛋白質の精製方法に関するもので
ある。
（従来の技術）
慢性関節リウマチ疾患は１．ｅ者数が多く〔後述のアメ
リカ・リウマチ協会の診断基準によれば、我が国では人
口の０．３％が古典的な（ｃｌａｓｓｉｃａｌ）あるい
１仁明確な（ｄｅｆｉｎｉｔｅ ）慢性関節リウマチ患
者であるとされている。さらにおそら（（ｐｒｏｂａｂ
ｌｅ）あるいは起こシうる（ｐｏｓｓｉｂｌｅ）慢性関
節リウマチ恵８は、人口の１〜３％にものぼるといわれ
ている。〕、プた、身体障害に進み、ときには重い臓器
病変を伴う疾患である。その病態は、滑脱を有する関節
を主病変部とすることが特徴的ではあるが、ひろく全身
の結合組織に系統的に炎症性病変を伴う全身病としてと
らえられている。臓器病変のうちでは心病変（心嚢炎、
心筋炎）が最も重く、シばしば死因となる。これについ
−で肺病変（胸膜炎、肺臓炎）、さらに、多発性？？’
経炎、皮膚潰瘍、上強膜炎など多くの全身症状がみられ
る。これらのことなどより、慢性関節リウマチ疾患は医
学的にも、社会的にも重要な疾患である。
リカ・リウマチ協会の診断基準によれば、我が国では人
口の０．３％が古典的な（ｃｌａｓｓｉｃａｌ）あるい
１仁明確な（ｄｅｆｉｎｉｔｅ ）慢性関節リウマチ患
者であるとされている。さらにおそら（（ｐｒｏｂａｂ
ｌｅ）あるいは起こシうる（ｐｏｓｓｉｂｌｅ）慢性関
節リウマチ恵８は、人口の１〜３％にものぼるといわれ
ている。〕、プた、身体障害に進み、ときには重い臓器
病変を伴う疾患である。その病態は、滑脱を有する関節
を主病変部とすることが特徴的ではあるが、ひろく全身
の結合組織に系統的に炎症性病変を伴う全身病としてと
らえられている。臓器病変のうちでは心病変（心嚢炎、
心筋炎）が最も重く、シばしば死因となる。これについ
−で肺病変（胸膜炎、肺臓炎）、さらに、多発性？？’
経炎、皮膚潰瘍、上強膜炎など多くの全身症状がみられ
る。これらのことなどより、慢性関節リウマチ疾患は医
学的にも、社会的にも重要な疾患である。
ところが、慢性関節リウマチ疾、τの医学的研究は遅れ
ており、発病については免役学的異常が関与することが
明らかではあるが、病因についてはほとんど解明されて
おらず、その治療方法はようやく最近になって発展しだ
したところである。
ており、発病については免役学的異常が関与することが
明らかではあるが、病因についてはほとんど解明されて
おらず、その治療方法はようやく最近になって発展しだ
したところである。
慢性関節リウマチ疾患の診断は、一般にアメリカ・リウ
マチ協会の診断基準によって行なわれている。このアメ
リカ・リウマチ協会の診断基準が確立されたことによっ
て、慢性関節リウマチ疾想の診断は統一されるようにな
ってはきた。アメ１ツカ、１ノウツケ協会ノ診断基単は
１１項目から成り、七〇うち何項目を清たすかによって
慢性関節リウマチの診断を行なうものであるが、（１１
関筒液検査は関節液が採取できるとは限らず、また、病
理組織学的検査は医家で簡単に行なえるものではなく、
よって、これらの項目の診断における利用価値は少ない
、（２ｊリウマトイド結節やリウマチ因子、あるいは骨
関節レントゲン写真上の変化は、初めから陽性にでると
は限らず、早期診断の上で決め手とはなりにくい、（３
）よって、上記１．２を除いた全くの臨床症状からなる
項目が重要となるわけであるが、これらはいずれも慢性
関節リウマチに特徴的ではない等の多くの問題点がある
。したがって、現在アメリカ・リウマチ協会の診断基準
が広く用いられてはいるが、必ずしも診＠は容易ではな
く、慢性関節リウマチ診断のための新たなパラメーター
に対する期待は大きい。
マチ協会の診断基準によって行なわれている。このアメ
リカ・リウマチ協会の診断基準が確立されたことによっ
て、慢性関節リウマチ疾想の診断は統一されるようにな
ってはきた。アメ１ツカ、１ノウツケ協会ノ診断基単は
１１項目から成り、七〇うち何項目を清たすかによって
慢性関節リウマチの診断を行なうものであるが、（１１
関筒液検査は関節液が採取できるとは限らず、また、病
理組織学的検査は医家で簡単に行なえるものではなく、
よって、これらの項目の診断における利用価値は少ない
、（２ｊリウマトイド結節やリウマチ因子、あるいは骨
関節レントゲン写真上の変化は、初めから陽性にでると
は限らず、早期診断の上で決め手とはなりにくい、（３
）よって、上記１．２を除いた全くの臨床症状からなる
項目が重要となるわけであるが、これらはいずれも慢性
関節リウマチに特徴的ではない等の多くの問題点がある
。したがって、現在アメリカ・リウマチ協会の診断基準
が広く用いられてはいるが、必ずしも診＠は容易ではな
く、慢性関節リウマチ診断のための新たなパラメーター
に対する期待は大きい。
リウマチ特異上白ａｈ、慢性関節リウマチ恵者血漿中よ
プ小出ら（昭、ｔｏ５８年９月、第５６回日本生化学会
）が最初に発見した蛋白質であり１．［う性関節リウマ
チ診断におけるその重要性が指摘きれた。小出らによる
と、リウマチ特異蛋白質は分子１１１５０，０００〜１
７０，０００、等電点７．３〜７．８、移動度（蛋白変
性剤を用いない２？′に元逍気泳動法において、アルブ
ミン最先端部の移ｗＪ変を１．０として） ０．５０〜
０．４５の範囲内にある蛋白質である。さらに、リウマ
チ特異蛋白質は、先に２−メルカプトエタノール等の還
元剤で還元した後に、ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳
動法によって分子ｔを測定する時、２５，０００〜５０
，０００および５５，０００〜６０，０００の２種の分
子９ｒを示す、このリウマチ特異蛋白質来は、慢性関節
リウマチ患者の約８０％で見い出さ几るが、健常人や他
の疾患患者では見られないことより（小円ら）、慢性関
節リウマチ疾患の診断における新たな診断方法としての
期待が高まっている、 リウマチ特異蛋白質の精製は、従来広のよ５な方法によ
って行なわれていた。まず検体に硫酸アンモニウム等を
加えて塩析した後、ＤＥＡＥ−セファデックス（ファル
マンア社、スウェーデン）等のイオン交換ゲルによって
イオン交換クロマトグラフィー全行ない、次に、例えば
セファクリル＄−３００（７アルマ７ア社、スウェーデ
ン）等のゲルによってゲルクロマトグラフィー、その後
再度イオン交換クロマトグラフィー全行ない、２゛〜゛
次元道気泳動法によりリウマチ特異蛋白質が認めら几た
分画を回収することによってなされてきた。
プ小出ら（昭、ｔｏ５８年９月、第５６回日本生化学会
）が最初に発見した蛋白質であり１．［う性関節リウマ
チ診断におけるその重要性が指摘きれた。小出らによる
と、リウマチ特異蛋白質は分子１１１５０，０００〜１
７０，０００、等電点７．３〜７．８、移動度（蛋白変
性剤を用いない２？′に元逍気泳動法において、アルブ
ミン最先端部の移ｗＪ変を１．０として） ０．５０〜
０．４５の範囲内にある蛋白質である。さらに、リウマ
チ特異蛋白質は、先に２−メルカプトエタノール等の還
元剤で還元した後に、ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳
動法によって分子ｔを測定する時、２５，０００〜５０
，０００および５５，０００〜６０，０００の２種の分
子９ｒを示す、このリウマチ特異蛋白質来は、慢性関節
リウマチ患者の約８０％で見い出さ几るが、健常人や他
の疾患患者では見られないことより（小円ら）、慢性関
節リウマチ疾患の診断における新たな診断方法としての
期待が高まっている、 リウマチ特異蛋白質の精製は、従来広のよ５な方法によ
って行なわれていた。まず検体に硫酸アンモニウム等を
加えて塩析した後、ＤＥＡＥ−セファデックス（ファル
マンア社、スウェーデン）等のイオン交換ゲルによって
イオン交換クロマトグラフィー全行ない、次に、例えば
セファクリル＄−３００（７アルマ７ア社、スウェーデ
ン）等のゲルによってゲルクロマトグラフィー、その後
再度イオン交換クロマトグラフィー全行ない、２゛〜゛
次元道気泳動法によりリウマチ特異蛋白質が認めら几た
分画を回収することによってなされてきた。
（発明が解決しようとする問題点）
しかしながら、上記方法では、実際には各ステップ毎に
透析および濃縮操作が必要であるため非常１ｃ！雑で、
かつ全ステップを行なうには長時間（本発明者らの任験
によればおよそ２週間）を要する。さらに、最終的に得
られたリウマチ特異蛋白質の純度は５０〜６０％程度と
低く、リウマチ特異蛋白質の精製法として工業的に行な
える方法とは言えない。
透析および濃縮操作が必要であるため非常１ｃ！雑で、
かつ全ステップを行なうには長時間（本発明者らの任験
によればおよそ２週間）を要する。さらに、最終的に得
られたリウマチ特異蛋白質の純度は５０〜６０％程度と
低く、リウマチ特異蛋白質の精製法として工業的に行な
える方法とは言えない。
（問題点を解決するための手段）
リウマチ特異蛋白質は、本発明者らの研究によってヒト
免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ ）と一部免疫学的共通抗
原性をもつＩｇＧと類似した性質を示す蛋白質であるこ
とが解明された。本発明者らは、これらの研究結果をも
とにさらに鋭意研究しｆｃ結果、上記方法より優れた高
純度のリウマチ特異蛋白質を簡便に、しかも短時間で得
ることができる工業的に有用な精製方法の確立に成功し
ｆｃ。
免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ ）と一部免疫学的共通抗
原性をもつＩｇＧと類似した性質を示す蛋白質であるこ
とが解明された。本発明者らは、これらの研究結果をも
とにさらに鋭意研究しｆｃ結果、上記方法より優れた高
純度のリウマチ特異蛋白質を簡便に、しかも短時間で得
ることができる工業的に有用な精製方法の確立に成功し
ｆｃ。
すなわち、リウマチ特異蛋白質を含む原料（二乗、血清
等蛋白質の混液）について、電気法４ｔ！ｌあるいはイ
オン交換クロマトグラフィーを行ない、γグロブリン、
特にＩｇＧを除去する。γグロブリンを除去した分画に
ついて、例えば抗ヒトＩｇＧ抗体おるいはスタフィロコ
ッカス由来の丑白貿である、ヒトＩｇＧとの結合性を有
するプロティンＡとの反応性を有する分画を回収するこ
とによって、リウマチ特異蛋白質の精製全行なうもので
ある。
等蛋白質の混液）について、電気法４ｔ！ｌあるいはイ
オン交換クロマトグラフィーを行ない、γグロブリン、
特にＩｇＧを除去する。γグロブリンを除去した分画に
ついて、例えば抗ヒトＩｇＧ抗体おるいはスタフィロコ
ッカス由来の丑白貿である、ヒトＩｇＧとの結合性を有
するプロティンＡとの反応性を有する分画を回収するこ
とによって、リウマチ特異蛋白質の精製全行なうもので
ある。
より具体的に述べると、リウマチ、り者血漿等の原料を
、ポリアクリルアミド等全支持体として厩気泳動し、β
位に相当する分画を回収する。矢に、例えばリン酸緩衝
液等の溶液で、回収した分画よシ蛋白質成分を抽出する
。あるいは、例えばＤＥ、＝〜Ｅ−セファデックスＡ−
５０（ファルマシア社、スウェーデン）等のようなイオ
ン交換ゲルによるイオン交換クロマトグラフィーを行な
い、例えば塩化ナトリウム等の堰ａ度０．３ Ｍ以下の
低塩濃度で溶出される分画を除去した後、例えば塩化ナ
トリウム等の塩濃度０．５Ｍで溶出される分画を回収す
る。（本イオン交換クロマトグラフィーによる絹製ステ
ップは、γグロブリン、特にＩｇＧ分画の除去を目的と
している。リウマチ特異蛋白質とγグロブリン、特にＩ
ｇＧとはイオン交換クロマトグラフィーでの挙動が異な
るため、本ステップの目的のためには、稲々のイオン交
換ゲルを用いることが可能であるし、溶出方法も数多く
選択できる。
、ポリアクリルアミド等全支持体として厩気泳動し、β
位に相当する分画を回収する。矢に、例えばリン酸緩衝
液等の溶液で、回収した分画よシ蛋白質成分を抽出する
。あるいは、例えばＤＥ、＝〜Ｅ−セファデックスＡ−
５０（ファルマシア社、スウェーデン）等のようなイオ
ン交換ゲルによるイオン交換クロマトグラフィーを行な
い、例えば塩化ナトリウム等の堰ａ度０．３ Ｍ以下の
低塩濃度で溶出される分画を除去した後、例えば塩化ナ
トリウム等の塩濃度０．５Ｍで溶出される分画を回収す
る。（本イオン交換クロマトグラフィーによる絹製ステ
ップは、γグロブリン、特にＩｇＧ分画の除去を目的と
している。リウマチ特異蛋白質とγグロブリン、特にＩ
ｇＧとはイオン交換クロマトグラフィーでの挙動が異な
るため、本ステップの目的のためには、稲々のイオン交
換ゲルを用いることが可能であるし、溶出方法も数多く
選択できる。
したがって、本項記載のイオン交換ゲルの稽類や、イオ
ン交換クロマトグラフィー条件に必ずしも限定されない
。） 一万、電気泳動あるいはイオン交換クロマトグラフィー
に先だって、リウマチ患者血漿等を先に；析等によって
分画して、イオン交換クロマトグラフィーに供する蛋白
址を減らしておくことは、通常の蛋白質の精製において
用いられているとおり有効である、すなわち、リウマチ
患者血漿等に硫酸アンモニウムを加えて、２５〜３５％
飽和硫酸アンモニウムで塩析される沈澱を回収する。
ン交換クロマトグラフィー条件に必ずしも限定されない
。） 一万、電気泳動あるいはイオン交換クロマトグラフィー
に先だって、リウマチ患者血漿等を先に；析等によって
分画して、イオン交換クロマトグラフィーに供する蛋白
址を減らしておくことは、通常の蛋白質の精製において
用いられているとおり有効である、すなわち、リウマチ
患者血漿等に硫酸アンモニウムを加えて、２５〜３５％
飽和硫酸アンモニウムで塩析される沈澱を回収する。
（本ステップはイオン交換クロマトグラフィーに供する
蛋白ｔを減らすことが第一の目的であるから、塩析され
る飽和硫酸アンモニウム濃度は、上記２５〜３５％に限
定されない。例えば５０％飽和硫酸アンモニウムで塩析
される沈澱を回収してもよい。さらに同様に、ここでは
他に硫酸ナトＩＪウム等通常塩析に使用される堰を用い
ることができる。あるいは一般に行なわれているエチル
アルコールやアセトン等の有機溶媒等を用いた溶媒沈澱
法を用いること本可能である。） 次に、別に例えば抗ヒトＩｇＧ抗体、ありいはスタフイ
ロフツカス由来の蛋白質である、と） ＩｇＧとの結合
性を有するプロテインＡを、臭化／アン等のリガンドに
よってセファロースａＢ（ファルマシア社、スウェーデ
ン）等のようなゲルに結合させる。そのゲル（抗ヒトＩ
ｇＧ抗体、あるいはスタフィロコッカス由来プロティン
Ａを結合したセファロース４Ｂ等のゲル二アフイニテイ
ーゲル）をつめたカラム（アフィニティーカラム）に、
先のＤＥＡＥ−セファデックス人−５０等のような婆イ
オン交換ゲルによるイオン交換クロマトグラフィーによ
って粗精製したリウマチ特異蛋白質を通す。アフィニテ
ィーゲル非結合成分を除去した後、グリ７ン緩衝液等に
よってｐＨを変える方法、あるいｔ′ｉ尿素等を用いる
穏やかな蛋白変性作用による７３法等、通常アフィニテ
ィークロマトグラフィーにおいて用いられる、アフィニ
ティーゲルからの蛋白質溶出に用いられる方法によって
、アフィニティーゲルからリウマチ特異蛋白質を分離し
、そｆ″ＬＬヲ回収ことによってリウマチ特異蛋白質を
精製することができる。
蛋白ｔを減らすことが第一の目的であるから、塩析され
る飽和硫酸アンモニウム濃度は、上記２５〜３５％に限
定されない。例えば５０％飽和硫酸アンモニウムで塩析
される沈澱を回収してもよい。さらに同様に、ここでは
他に硫酸ナトＩＪウム等通常塩析に使用される堰を用い
ることができる。あるいは一般に行なわれているエチル
アルコールやアセトン等の有機溶媒等を用いた溶媒沈澱
法を用いること本可能である。） 次に、別に例えば抗ヒトＩｇＧ抗体、ありいはスタフイ
ロフツカス由来の蛋白質である、と） ＩｇＧとの結合
性を有するプロテインＡを、臭化／アン等のリガンドに
よってセファロースａＢ（ファルマシア社、スウェーデ
ン）等のようなゲルに結合させる。そのゲル（抗ヒトＩ
ｇＧ抗体、あるいはスタフィロコッカス由来プロティン
Ａを結合したセファロース４Ｂ等のゲル二アフイニテイ
ーゲル）をつめたカラム（アフィニティーカラム）に、
先のＤＥＡＥ−セファデックス人−５０等のような婆イ
オン交換ゲルによるイオン交換クロマトグラフィーによ
って粗精製したリウマチ特異蛋白質を通す。アフィニテ
ィーゲル非結合成分を除去した後、グリ７ン緩衝液等に
よってｐＨを変える方法、あるいｔ′ｉ尿素等を用いる
穏やかな蛋白変性作用による７３法等、通常アフィニテ
ィークロマトグラフィーにおいて用いられる、アフィニ
ティーゲルからの蛋白質溶出に用いられる方法によって
、アフィニティーゲルからリウマチ特異蛋白質を分離し
、そｆ″ＬＬヲ回収ことによってリウマチ特異蛋白質を
精製することができる。
（発明の効果）
この時得たリウマチ特異蛋白質は、例えばポリアクリル
アミドゲル等の電気泳動用支持体を用いて電気＃＠Ｉ、
、その後、；マシー・ブｌ） ＩＪアント・ブルー（Ｃ
ｏｏｍｅｒｓｉｅ Ｂｒ１ｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ
−２５０）等の蛋白染色剤によって染色し、脱色した支
持体をデンシトメーター等によって測定する時、純度は
９０チ以上である。さらに、本リウマチ特異蛋白質は、
２次元電気泳動する時、等電点（ｐｌ：蛋白の泳動位置
に相当するｐＨｆ、その蛋白の等電点とする）７．３〜
７．８、移動度（アルブミン最先端部の移動度を１．０
として） ０．３０〜０゜４５の範囲の単一のスポット
として検出でき、ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動法
によって測定するとき、分子量１５０，０００〜１７０
，０００を示す。また、本リウマチ特異蛋白質を°先に
２−メルカグトエタノール等の還元剤で還元した後に、
ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動法によって分子量全
測定する時、２ ｓ、ｏ ｏ ｏ〜３０，０００および
５５，０００〜ｂ ａ、ｏ ｏ ｏの２種の分子量を示
す。
アミドゲル等の電気泳動用支持体を用いて電気＃＠Ｉ、
、その後、；マシー・ブｌ） ＩＪアント・ブルー（Ｃ
ｏｏｍｅｒｓｉｅ Ｂｒ１ｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ
−２５０）等の蛋白染色剤によって染色し、脱色した支
持体をデンシトメーター等によって測定する時、純度は
９０チ以上である。さらに、本リウマチ特異蛋白質は、
２次元電気泳動する時、等電点（ｐｌ：蛋白の泳動位置
に相当するｐＨｆ、その蛋白の等電点とする）７．３〜
７．８、移動度（アルブミン最先端部の移動度を１．０
として） ０．３０〜０゜４５の範囲の単一のスポット
として検出でき、ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動法
によって測定するとき、分子量１５０，０００〜１７０
，０００を示す。また、本リウマチ特異蛋白質を°先に
２−メルカグトエタノール等の還元剤で還元した後に、
ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動法によって分子量全
測定する時、２ ｓ、ｏ ｏ ｏ〜３０，０００および
５５，０００〜ｂ ａ、ｏ ｏ ｏの２種の分子量を示
す。
（実施例）
実施例１
リウマチ％異蛋白質を有する慢性関節リウマチ思考にお
ける血漿交換によって生じた排血漿１ｔに、硫酸アンモ
ニウ゛ム１４４ｇを加えて２５％飽ａ（ｉｉｆＥｆｆ７
ンモニウム市餞とした。２５％飽和硫陵アンモニウムに
よつ−Ｃ４１千出した沈澱を８，０００ Ｘｇ、２０分
の遠心分離（冷却遠心機 ５ＣＲ２０ＢＡ、日立社）に
よって除去した後、上清（はぼ１を回収Ｘさらに硫酸ア
ンモニウム６１ｇを加えて、３５％飽和硫酸アンモニウ
ム溶液とした。析出した沈澱を８，０００ Ｘ ｇ 、
２０分の遠心分離により回収した。回収した沈澱に０
．０５ Ｍ塩化す） ＩＪウムを含む０．０２ Ｍリン
酸緩衝液（ｐ Ｈ７−２）を加えて溶解し、セロファン
膜（ビスキングカンパニー社製。
ける血漿交換によって生じた排血漿１ｔに、硫酸アンモ
ニウ゛ム１４４ｇを加えて２５％飽ａ（ｉｉｆＥｆｆ７
ンモニウム市餞とした。２５％飽和硫陵アンモニウムに
よつ−Ｃ４１千出した沈澱を８，０００ Ｘｇ、２０分
の遠心分離（冷却遠心機 ５ＣＲ２０ＢＡ、日立社）に
よって除去した後、上清（はぼ１を回収Ｘさらに硫酸ア
ンモニウム６１ｇを加えて、３５％飽和硫酸アンモニウ
ム溶液とした。析出した沈澱を８，０００ Ｘ ｇ 、
２０分の遠心分離により回収した。回収した沈澱に０
．０５ Ｍ塩化す） ＩＪウムを含む０．０２ Ｍリン
酸緩衝液（ｐ Ｈ７−２）を加えて溶解し、セロファン
膜（ビスキングカンパニー社製。
米国）によって、０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．
０２ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で−晩透析して硫
酸アンモニウムを除去した（回収景二波長２８０ｎｍに
おける吸光度？５．２、液［９（ｌｔ／）。
０２ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で−晩透析して硫
酸アンモニウムを除去した（回収景二波長２８０ｎｍに
おける吸光度？５．２、液［９（ｌｔ／）。
次に、あらかじめｏ、ｏｓＨｔｚ化ナトリツナトリウム
、０２ Ｍリン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，２）で平衡化した
ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−５０（ＤＥＡＥ−３ｅｐ
ｈａｄｅｘ Ａ −５０ファルマシア社製、スウェーデ
ン）ヲ用いてイオン交換クロマトグラフィーを行なった
。０．０２ Ｍリン酸緩衝液（ｐ Ｉ（７，２）におけ
る塩化ナトリウム一度ｔ１ステップワイズに上げて、蛋
白質を溶出させた。塩化ナトリウム濃度０．３Ｍの０．
０２ Ｍす／酸緩衝液（ｐ Ｈ７，２）で溶出した後、
塩化ナトリウム濃度０．５ Ｍの０．０２ Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，２）によって溶出される分画を回収し念
（回収量：波長２８０ ｎｍにおける吸光度０．３５、
液量１００−）。
、０２ Ｍリン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，２）で平衡化した
ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−５０（ＤＥＡＥ−３ｅｐ
ｈａｄｅｘ Ａ −５０ファルマシア社製、スウェーデ
ン）ヲ用いてイオン交換クロマトグラフィーを行なった
。０．０２ Ｍリン酸緩衝液（ｐ Ｉ（７，２）におけ
る塩化ナトリウム一度ｔ１ステップワイズに上げて、蛋
白質を溶出させた。塩化ナトリウム濃度０．３Ｍの０．
０２ Ｍす／酸緩衝液（ｐ Ｈ７，２）で溶出した後、
塩化ナトリウム濃度０．５ Ｍの０．０２ Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，２）によって溶出される分画を回収し念
（回収量：波長２８０ ｎｍにおける吸光度０．３５、
液量１００−）。
別に、臭化シアン活性化上７７０−ス４Ｂ（ＣＮＢｒ
−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ５ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ
、ファルマシア社製、スウエーデ／）２ｇに、抗ヒト１
ｇＧ抗体（ヤギ血清ＩｇＧ分画、マイルス社製、米国、
製造元能書によれば蛋白量およそ９．６ｍｇ、内特異仇
体２．９ ｍｇ ）を反応させて、抗体結合ゲルを作成
した。この抗体結合ゲルをカラムにつめ、０．０５Ｍ塩
化ナトリウムを含む０．０２ＭＩＪｙ酸緩＠１（ｐＨ７
，２）で洗浄した後、先にイオン交換クロマトグラフィ
ーによって回収しｆｃｆ＋画を抗体結合ゲルに吸着させ
た。０．０５Ｍ塩化す） ＩＪウムを含む０．０２Ｍ
＋）ン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，２）で抗体結合ゲルを十分
に洗浄した後、ｐＨ２，５のグリシノ緩衝液（０，１７
Ｍ ）で溶出した。溶出された蛋白質分画を回収１．、
−ｄ’ＬＫ直ちに１／１０量のｐ）ｉｉｌ、５のグリシ
ノ緩衝液（１Ｍ）を加えて中和した。この時得られたリ
ウマチ特異蛋白質はマイクロビウレット二によって蛋白
ｔ ２−７ ｍｇと測定できた、実施例２ 実冷例１と同様の手技に工って、堰折、イオン交換クロ
マトグラフィーを行ない、得られたリウマチ峙Ａ雀白質
分画を用いた。すｉわち、慢性関節リウマチ思考におけ
る血漿交換によって生じた、リウマチ特異蛋白質を有す
る排二乗１ｔについて、２５毛飽和硫酸アンモニウムに
よって析出した沈澱を除去した後、上清にさらＶｃｇ！
Ｌ酸アンモニウムを加えて、３５％飽和伝タアンモニウ
上溶液とし、析出した沈澱を回収した。回収した沈＄ｉ
を０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２ Ｍ ＩＪ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で溶解し、透析して硫酸アン
モニウムを除去した（回収量：ｒｉ、長２ Ｂ Ｏｎｍ
における吸光度？３．６、液量８５−）。この蛋白液と
、０、ＣＩ’５Ｍｉ化ナトリウムを含む０．０２ＭＩＪ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で平衡化したＤＥＡＥ−七７
７デノクスＡ −５０（ＤＥＡＥ−３ｃｐｈａｄｅｘ
Ａ−５０７アルマンア社製、スウェーデン）カラムに流
して、イオン交換クロマト２ラフイ一全行なった。
Ｄ、Ｄ２Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，２）における
塩化ナトリウム濃度を、ステンプワイズに上げて、蛋白
質全溶出逼せ、順化ナトリウム！＃度０．３Ｍ以下の０
．０２Ｍ ’Ｊン酸援Ｓ液（ｐ Ｈ７，２）で溶出され
る分画を除去し、塩化ナトリウムｐ変０．５ Ｍ７）
０．０２ Ｍリン酸緩＠液（ｐ Ｈ７−２）によって溶
出される分画を回収した（回収肴：波゛長２８ Ｄ ｎ
ｍにおける吸光ｉｏ、３２．１−３１０Ｑｄ）。
−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ５ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ
、ファルマシア社製、スウエーデ／）２ｇに、抗ヒト１
ｇＧ抗体（ヤギ血清ＩｇＧ分画、マイルス社製、米国、
製造元能書によれば蛋白量およそ９．６ｍｇ、内特異仇
体２．９ ｍｇ ）を反応させて、抗体結合ゲルを作成
した。この抗体結合ゲルをカラムにつめ、０．０５Ｍ塩
化ナトリウムを含む０．０２ＭＩＪｙ酸緩＠１（ｐＨ７
，２）で洗浄した後、先にイオン交換クロマトグラフィ
ーによって回収しｆｃｆ＋画を抗体結合ゲルに吸着させ
た。０．０５Ｍ塩化す） ＩＪウムを含む０．０２Ｍ
＋）ン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，２）で抗体結合ゲルを十分
に洗浄した後、ｐＨ２，５のグリシノ緩衝液（０，１７
Ｍ ）で溶出した。溶出された蛋白質分画を回収１．、
−ｄ’ＬＫ直ちに１／１０量のｐ）ｉｉｌ、５のグリシ
ノ緩衝液（１Ｍ）を加えて中和した。この時得られたリ
ウマチ特異蛋白質はマイクロビウレット二によって蛋白
ｔ ２−７ ｍｇと測定できた、実施例２ 実冷例１と同様の手技に工って、堰折、イオン交換クロ
マトグラフィーを行ない、得られたリウマチ峙Ａ雀白質
分画を用いた。すｉわち、慢性関節リウマチ思考におけ
る血漿交換によって生じた、リウマチ特異蛋白質を有す
る排二乗１ｔについて、２５毛飽和硫酸アンモニウムに
よって析出した沈澱を除去した後、上清にさらＶｃｇ！
Ｌ酸アンモニウムを加えて、３５％飽和伝タアンモニウ
上溶液とし、析出した沈澱を回収した。回収した沈＄ｉ
を０．０５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０２ Ｍ ＩＪ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で溶解し、透析して硫酸アン
モニウムを除去した（回収量：ｒｉ、長２ Ｂ Ｏｎｍ
における吸光度？３．６、液量８５−）。この蛋白液と
、０、ＣＩ’５Ｍｉ化ナトリウムを含む０．０２ＭＩＪ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で平衡化したＤＥＡＥ−七７
７デノクスＡ −５０（ＤＥＡＥ−３ｃｐｈａｄｅｘ
Ａ−５０７アルマンア社製、スウェーデン）カラムに流
して、イオン交換クロマト２ラフイ一全行なった。
Ｄ、Ｄ２Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，２）における
塩化ナトリウム濃度を、ステンプワイズに上げて、蛋白
質全溶出逼せ、順化ナトリウム！＃度０．３Ｍ以下の０
．０２Ｍ ’Ｊン酸援Ｓ液（ｐ Ｈ７，２）で溶出され
る分画を除去し、塩化ナトリウムｐ変０．５ Ｍ７）
０．０２ Ｍリン酸緩＠液（ｐ Ｈ７−２）によって溶
出される分画を回収した（回収肴：波゛長２８ Ｄ ｎ
ｍにおける吸光ｉｏ、３２．１−３１０Ｑｄ）。
上記方法にて得られた分画全、仄のようにして精製した
。プロテインＡ七ファロースＣＬ−４Ｂ（Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ａ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ−４Ｂ 、ファルマ
シア社、スウェーデン） ０．６ ｇをｉｆｌさせ（ゲ
ルおよそ２−に１膨潤）てカラムにつめ、プロティンＡ
カラムとした。プロティンＡカラムを０．１Ｍす７８
ｆ’ｌ ’９ｒ液（ｐＨａ、ｏ）で十分に洗浄した後、
上記分画をプロティンＡカラムに流して、プロティ／Ａ
Ｋ吸看させた。プロティンＡＫ吸着したリウマチ特異蛋
白質を０１ Ｍグリノン堰板緩ｔｉ液（ｐＨ３，０）で
溶出させ、直ちに１／Ｉ Ｄｉの０．２ Ｍ炭酸水素ナ
トリウム液を加えて中和した。この時得られたリウマチ
特異蛋白質は、マイクロビウレット法によって、蛋白量
２．１ｍｇとｆｆ１ｌｌ定できた。
。プロテインＡ七ファロースＣＬ−４Ｂ（Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ａ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ−４Ｂ 、ファルマ
シア社、スウェーデン） ０．６ ｇをｉｆｌさせ（ゲ
ルおよそ２−に１膨潤）てカラムにつめ、プロティンＡ
カラムとした。プロティンＡカラムを０．１Ｍす７８
ｆ’ｌ ’９ｒ液（ｐＨａ、ｏ）で十分に洗浄した後、
上記分画をプロティンＡカラムに流して、プロティ／Ａ
Ｋ吸看させた。プロティンＡＫ吸着したリウマチ特異蛋
白質を０１ Ｍグリノン堰板緩ｔｉ液（ｐＨ３，０）で
溶出させ、直ちに１／Ｉ Ｄｉの０．２ Ｍ炭酸水素ナ
トリウム液を加えて中和した。この時得られたリウマチ
特異蛋白質は、マイクロビウレット法によって、蛋白量
２．１ｍｇとｆｆ１ｌｌ定できた。
実施例３
慢性関節リウマチ患者における血漿交換によって生じた
リウマチ特異蛋白質を有する排血漿２０〇−ｐ、０．０
５ Ｍ 塩化ナトリウムを含む０．０２ Ｍリン酸緩−
１ｔｉ液（ｐＨ７，２）で平衡化したＤＥＡＥ−セファ
デツクスＡ −５０（Ｄ Ｅ Ａ Ｅ −５ｅｐｈａｄ
ｅｘ Ａ−５０ファルマ／ア社製、スウェーデン）カラ
ムに流して、イオン交換クロマトグラフィーを行なった
。塩化ナトリウム′ａｆ０．３Ｍ以下の０．０２ＭＩＪ
ン酸緩’１ａ（ｐａ７．、）で溶出される分画を除去し
、塩化ナトリウム＠度０．５ Ｍの０．０２ Ｍリン酸
緩衝液（ｐ Ｈ７，２）によって溶出される分画を回収
した（回収量二波長２８０ｎｍにおける吸光度０．１２
、液ｉ５０ｇＬｔ）。
リウマチ特異蛋白質を有する排血漿２０〇−ｐ、０．０
５ Ｍ 塩化ナトリウムを含む０．０２ Ｍリン酸緩−
１ｔｉ液（ｐＨ７，２）で平衡化したＤＥＡＥ−セファ
デツクスＡ −５０（Ｄ Ｅ Ａ Ｅ −５ｅｐｈａｄ
ｅｘ Ａ−５０ファルマ／ア社製、スウェーデン）カラ
ムに流して、イオン交換クロマトグラフィーを行なった
。塩化ナトリウム′ａｆ０．３Ｍ以下の０．０２ＭＩＪ
ン酸緩’１ａ（ｐａ７．、）で溶出される分画を除去し
、塩化ナトリウム＠度０．５ Ｍの０．０２ Ｍリン酸
緩衝液（ｐ Ｈ７，２）によって溶出される分画を回収
した（回収量二波長２８０ｎｍにおける吸光度０．１２
、液ｉ５０ｇＬｔ）。
上記方法にて得られたリウマチ特異蛋白質分画を、矢の
ようにして精製した。まず上記分画をセロファン膜（ビ
スキングカ／バニー社、１ｉｔ）を用いて、０．１Ｍリ
ン酸緩％液（ｐ）（８，０）で−晩透析した。実施例２
で用いたプロティンＡカラムを０・ｊ Ｍ ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨ８，０）で十分に洗浄した後、先に一晩透析
した分画をプロティンＡカラムに流して、プロティンＡ
に吸着させた。プロティンＡに吸着したリウマチ特異蛋
白質を０．１ Ｍグリンン塩酸緩衝液（ｐＨ１Ｏ）で溶
出させ、直ちｉ／（１／１０量の０．２Ｍ炭酸水素ナト
リウム液を加えて中和した。この時得られたリウマチ特
異蛋白５；ｔＦｉ、マイクロビウレット法によって、蛋
白量０．２２ｍｇ、″［気泳動法で純度９０チと測定で
きた。
ようにして精製した。まず上記分画をセロファン膜（ビ
スキングカ／バニー社、１ｉｔ）を用いて、０．１Ｍリ
ン酸緩％液（ｐ）（８，０）で−晩透析した。実施例２
で用いたプロティンＡカラムを０・ｊ Ｍ ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨ８，０）で十分に洗浄した後、先に一晩透析
した分画をプロティンＡカラムに流して、プロティンＡ
に吸着させた。プロティンＡに吸着したリウマチ特異蛋
白質を０．１ Ｍグリンン塩酸緩衝液（ｐＨ１Ｏ）で溶
出させ、直ちｉ／（１／１０量の０．２Ｍ炭酸水素ナト
リウム液を加えて中和した。この時得られたリウマチ特
異蛋白５；ｔＦｉ、マイクロビウレット法によって、蛋
白量０．２２ｍｇ、″［気泳動法で純度９０チと測定で
きた。
実施例４
実施例１および実施例２で得られたリウマチ特異蛋白質
をそれぞれ検体として、以下のように２次元電気泳動を
行なった（実施例１で得られたリウマチ特異蛋白質をリ
ウマチ特異蛋白質１、実施すｊ２で得られたリウマチ特
Ａ蛋Ｅ１貫全すウマチ特具蛋巳質２とする）。
をそれぞれ検体として、以下のように２次元電気泳動を
行なった（実施例１で得られたリウマチ特異蛋白質をリ
ウマチ特異蛋白質１、実施すｊ２で得られたリウマチ特
Ａ蛋Ｅ１貫全すウマチ特具蛋巳質２とする）。
１シしたリウマチ特異蛋白質６０ぶベリ外す特異上白質
１の蛋白３度０．４０ ｍｇ／ＩＩ＋４リウマチ特異蛋
白質２の蛋白濃度０．３４ ｍｇ／ＷＬｔ）をそれぞれ
、アンフオライン（ＡｒｒＩｐｈｏｌｉｎｅ 、ファル
マシア社製、 ６．２５ ｗ／ｖ壬（ｐ？（３，５−１
０： ｐＨ３，５−５−４：１） ］を含むポリアクリ
ルアミドゲル上で、０．ＣＭＭＩＪンｉぽと０．０４
Ｎ水浜化アトリウム液を用いて、はじめ一定電流（２献
）で泳動し、電圧が２２０“；ｒ ；（達した陵、２２
０Ｖの一定電圧で２０時間な動じた。、久に、こ１らの
原動ゲルを４％から１７壬のｊ度勾配をもつポリアクリ
ルアミド・スラブゲル上にＡいて、一定電流（２７ｍＡ
）で２０時間泳動した。泳動液には、０．０５’Ｍ
トリス−０，５８４Ｎ１グリノン緩−２ｉ液を用いた。
１の蛋白３度０．４０ ｍｇ／ＩＩ＋４リウマチ特異蛋
白質２の蛋白濃度０．３４ ｍｇ／ＷＬｔ）をそれぞれ
、アンフオライン（ＡｒｒＩｐｈｏｌｉｎｅ 、ファル
マシア社製、 ６．２５ ｗ／ｖ壬（ｐ？（３，５−１
０： ｐＨ３，５−５−４：１） ］を含むポリアクリ
ルアミドゲル上で、０．ＣＭＭＩＪンｉぽと０．０４
Ｎ水浜化アトリウム液を用いて、はじめ一定電流（２献
）で泳動し、電圧が２２０“；ｒ ；（達した陵、２２
０Ｖの一定電圧で２０時間な動じた。、久に、こ１らの
原動ゲルを４％から１７壬のｊ度勾配をもつポリアクリ
ルアミド・スラブゲル上にＡいて、一定電流（２７ｍＡ
）で２０時間泳動した。泳動液には、０．０５’Ｍ
トリス−０，５８４Ｎ１グリノン緩−２ｉ液を用いた。
２次元に気泳動した後、ゲルは、０．０２５％コマノー
・ブリリアント１ブルー（Ｃｏｏｍｅｒｓｉｅ Ｂｒ１
ｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ−２５０） 。
・ブリリアント１ブルー（Ｃｏｏｍｅｒｓｉｅ Ｂｒ１
ｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ−２５０） 。
５０ｖ／ ｖ％メタノール、 ７ ｖ／ｖ％酢竣液で８
時間采色し、７ｖ／ｖ壬酢酸、１０ ｖ／ｖチメタノー
ル柾で５日間脱色して観察した。（リウマチ特ｙ４蛋白
質１の泳動像を第１図に示す。リウマチ特異蛋白質２の
泳動像も同様であった。） リウマチ特異蛋白質１およびリウマチ特異蛋白質２の泳
動傷兵、等遊点（蛋白の泳動佇立に相当するｐＨ全その
蛋白の等電点とした）７．３〜７．８１、移動度（アル
ブミン最先端部の移動度を１．０として） ０．３０〜
０．４５の範囲内に、単一のスポットとして得られ（第
１図においては破線で囲んだ部分に見らする）、このこ
とエリリウマチ特異よ白質であることを確♂した！この
時、いずれにおいても、２次元電気泳動ゲル上には、上
記頭囲外に蛋白のスポットは認められなかった、なお、
第２図に精製前のリウマチ、氾者血漿の２次元１こヌ泳
拗図を示したが、等電点７．３〜７．８、移動度０．３
０〜０，４５の範囲内にリウマチ特異蛋白質のスポット
がみられる（破線で囲んだ部分）。
時間采色し、７ｖ／ｖ壬酢酸、１０ ｖ／ｖチメタノー
ル柾で５日間脱色して観察した。（リウマチ特ｙ４蛋白
質１の泳動像を第１図に示す。リウマチ特異蛋白質２の
泳動像も同様であった。） リウマチ特異蛋白質１およびリウマチ特異蛋白質２の泳
動傷兵、等遊点（蛋白の泳動佇立に相当するｐＨ全その
蛋白の等電点とした）７．３〜７．８１、移動度（アル
ブミン最先端部の移動度を１．０として） ０．３０〜
０．４５の範囲内に、単一のスポットとして得られ（第
１図においては破線で囲んだ部分に見らする）、このこ
とエリリウマチ特異よ白質であることを確♂した！この
時、いずれにおいても、２次元電気泳動ゲル上には、上
記頭囲外に蛋白のスポットは認められなかった、なお、
第２図に精製前のリウマチ、氾者血漿の２次元１こヌ泳
拗図を示したが、等電点７．３〜７．８、移動度０．３
０〜０，４５の範囲内にリウマチ特異蛋白質のスポット
がみられる（破線で囲んだ部分）。
次に、リウマチ特異蛋白質１（０，４０ｍｇ／ゴ）およ
びリウマチ特異蛋白質２ （０，３４ｍｇ／ｍｌ ）１
０μｌを、それぞれ４〜１７％の８度勾配をもつホリア
クリ／Ｉ−ア（ドスラ７゛ゲルによって電気泳動した。
びリウマチ特異蛋白質２ （０，３４ｍｇ／ｍｌ ）１
０μｌを、それぞれ４〜１７％の８度勾配をもつホリア
クリ／Ｉ−ア（ドスラ７゛ゲルによって電気泳動した。
次に、絶ｇケルｆ ０．０２５％・＝シー・ブｙ １
） ７ ７ ） ７’ 、ｎ （ＣＯ
ＯｍｅｒＳｌｅ Ｂｒ１ｌｌ １ａｎｔ Ｂｌ
ｕｅＲ−２５０） 、 ５０ ｖ／ｖ％メタノ−Ａ／
、 ７ ｖ／ｖ％酢酸液で８時間染色し、７ｖ／ｖ％酢
酸、１０ ｖ／ｖチメタノール液で３日間腕色した。そ
れぞれの泳動ゲルをデンシトメーター（ＤＥＮＳＩＴＲ
ＯＮ ＩＭ、常光社製、日本）によって測定した結果、
リウマチ特異蛋白質１の純度は９２チ、リウマチ特異蛋
白質２の純度は９４チと測定できた、 また、リウマチ特異蛋白質１では、ｓＤｓポリアクリル
アミドゲル峨気泳動で分子量約ｉ ６０．Ｇ ００゜２
−メルカプトエタノールによって還元した後に行なった
ＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動で分子量約ｚｓ
、ｏｏｏ＞よび約６０，０００の２９ブユニツトと測定
でき、リウマチ特異蛋白質２で１’ｊ、ＳＤＳポリアク
リルアミドゲル電気泳動で分子ｍ約１５５．００ ｏ、
２−メルカプトエタノールによって還元した後に行
なったＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動で分子量
約２５，０００および約５５，０００の２サブユニツト
と測定でき念。
） ７ ７ ） ７’ 、ｎ （ＣＯ
ＯｍｅｒＳｌｅ Ｂｒ１ｌｌ １ａｎｔ Ｂｌ
ｕｅＲ−２５０） 、 ５０ ｖ／ｖ％メタノ−Ａ／
、 ７ ｖ／ｖ％酢酸液で８時間染色し、７ｖ／ｖ％酢
酸、１０ ｖ／ｖチメタノール液で３日間腕色した。そ
れぞれの泳動ゲルをデンシトメーター（ＤＥＮＳＩＴＲ
ＯＮ ＩＭ、常光社製、日本）によって測定した結果、
リウマチ特異蛋白質１の純度は９２チ、リウマチ特異蛋
白質２の純度は９４チと測定できた、 また、リウマチ特異蛋白質１では、ｓＤｓポリアクリル
アミドゲル峨気泳動で分子量約ｉ ６０．Ｇ ００゜２
−メルカプトエタノールによって還元した後に行なった
ＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動で分子量約ｚｓ
、ｏｏｏ＞よび約６０，０００の２９ブユニツトと測定
でき、リウマチ特異蛋白質２で１’ｊ、ＳＤＳポリアク
リルアミドゲル電気泳動で分子ｍ約１５５．００ ｏ、
２−メルカプトエタノールによって還元した後に行
なったＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動で分子量
約２５，０００および約５５，０００の２サブユニツト
と測定でき念。
測定誤差を考えると、両すウマチ特！！４蛋白π間の測
定値にＦｉ差がないといえる。
定値にＦｉ差がないといえる。
第１図は実施例１で精製したリウマチ特異上白質の２次
元電気泳動図、第２図Ｆｉ楕灸前のリウマチ患者血漿の
２？：に元電気泳動図である。 第１図 Ｈ 第２図 Ｈ
元電気泳動図、第２図Ｆｉ楕灸前のリウマチ患者血漿の
２？：に元電気泳動図である。 第１図 Ｈ 第２図 Ｈ
Claims (1)
- 抗ヒトＩｇＧ抗体又はスタフイロコツカス由来のプロテ
インＡを用いることを特徴とするリウマチ特異蛋白質の
精製方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59191753A JPS6170463A (ja) | 1984-09-14 | 1984-09-14 | リウマチ特異蛋白質の精製方法 |
| EP85111630A EP0175310B1 (en) | 1984-09-14 | 1985-09-13 | A substantially pure rheumatoid arthritis specific protein and an antibody against the same |
| DE8585111630T DE3580882D1 (de) | 1984-09-14 | 1985-09-13 | Ein im wesentlichen reines fuer rheumatoide arthritis spezifisches protein und ein antikoerper dagegen. |
| US06/776,022 US4742157A (en) | 1984-09-14 | 1985-09-13 | Substantially pure rheumatoid arthritis specific protein and an antibody against the same |
| US07/155,872 US4950741A (en) | 1984-09-14 | 1988-02-16 | Antibody against rheumatoid arthritis specific protein |
| US07/155,972 US4863850A (en) | 1984-09-14 | 1988-02-16 | Method for diagnosis of rheumatoid arthritis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59191753A JPS6170463A (ja) | 1984-09-14 | 1984-09-14 | リウマチ特異蛋白質の精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6170463A true JPS6170463A (ja) | 1986-04-11 |
| JPH0582399B2 JPH0582399B2 (ja) | 1993-11-18 |
Family
ID=16279928
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59191753A Granted JPS6170463A (ja) | 1984-09-14 | 1984-09-14 | リウマチ特異蛋白質の精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6170463A (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5444009A (en) * | 1977-07-15 | 1979-04-07 | Behringwerke Ag | Immune globulin decomposed substance bound to carrier and use thereof in immunological analytic method |
| JPS5990055A (ja) * | 1982-08-21 | 1984-05-24 | ベ−リンガ−・インゲルハイム・ダイアグノステイカ・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツンク | 抗体、その製造方法およびその定量方法 |
| JPS5995460A (ja) * | 1982-10-29 | 1984-06-01 | リサ−チ・コ−ポレ−シヨン | リューマチ性疾病の検査方法および試験キット |
-
1984
- 1984-09-14 JP JP59191753A patent/JPS6170463A/ja active Granted
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5444009A (en) * | 1977-07-15 | 1979-04-07 | Behringwerke Ag | Immune globulin decomposed substance bound to carrier and use thereof in immunological analytic method |
| JPS5990055A (ja) * | 1982-08-21 | 1984-05-24 | ベ−リンガ−・インゲルハイム・ダイアグノステイカ・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツンク | 抗体、その製造方法およびその定量方法 |
| JPS5995460A (ja) * | 1982-10-29 | 1984-06-01 | リサ−チ・コ−ポレ−シヨン | リューマチ性疾病の検査方法および試験キット |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0582399B2 (ja) | 1993-11-18 |
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