JPS615781A - ホスホトランスアセチラ−ゼ - Google Patents
ホスホトランスアセチラ−ゼInfo
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- JPS615781A JPS615781A JP12572484A JP12572484A JPS615781A JP S615781 A JPS615781 A JP S615781A JP 12572484 A JP12572484 A JP 12572484A JP 12572484 A JP12572484 A JP 12572484A JP S615781 A JPS615781 A JP S615781A
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- JP
- Japan
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- culture
- pta
- activity
- phosphotransacetylase
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、耐熱性のホスホトランスアセチラーゼ（ｐｈ
ｏｓｐｈｏｔｒａｎｓａｃｅｔｙｌａｓｅ ’＋酵素番
号２．３． Ｌ、８゜系統名Ａｃｅｔｙｌ−Ｃｏ＾：ｏ
ｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｃ
ｆｅｒａｓｅ）に関するものである。
ｏｓｐｈｏｔｒａｎｓａｃｅｔｙｌａｓｅ ’＋酵素番
号２．３． Ｌ、８゜系統名Ａｃｅｔｙｌ−Ｃｏ＾：ｏ
ｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｃ
ｆｅｒａｓｅ）に関するものである。
ボスポト〜ノンスアセチラーセ（１ソ下１’Ｔ八と■ニ
ドず。）は次式の反応を触媒する酵素として知られてい
る。
ドず。）は次式の反応を触媒する酵素として知られてい
る。
アセチルトリン酸十へｏ八
＃アセチルＣ〇へ ＋リン酸
（、（’、ｏＡ ；コエンザイムへ、 ｃｏｅｎｚｙｍ
ｅ Ａ ）この反応を利用して、 （：ｏＡやアセチル
リン酸の定量、酢酸キナーセを共役さ七ることによる酢
酸の定量、さ゛らには種々のアセチル化反応のアセチル
ＣｏΔ供与体として広く利用が可能である。
ｅ Ａ ）この反応を利用して、 （：ｏＡやアセチル
リン酸の定量、酢酸キナーセを共役さ七ることによる酢
酸の定量、さ゛らには種々のアセチル化反応のアセチル
ＣｏΔ供与体として広く利用が可能である。
しかしながら、従来知られているＰＴＡはニジエリシア
・コリ （Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）由来の酵
素（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
、 １８八 Ｓ、 ３１４ 頁。
・コリ （Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）由来の酵
素（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
、 １８八 Ｓ、 ３１４ 頁。
１９７０年）１ クロストリディウム・クルイヘリ（Ｃ
ｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ Ｋｌｕｙｖｅｒｊ）由来の酵素
（Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ＋ １
３巻、 ３８１ 頁、 １９６９年）などがあるが、こ
のＰＴＡはきわめて不安定なものであった。このことが
、前記したごと＜ ＰＴ／ｌを利用した種々の測定を実
用化するに当たっての大きな障害となっていたのである
。
ｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ Ｋｌｕｙｖｅｒｊ）由来の酵素
（Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ＋ １
３巻、 ３８１ 頁、 １９６９年）などがあるが、こ
のＰＴＡはきわめて不安定なものであった。このことが
、前記したごと＜ ＰＴ／ｌを利用した種々の測定を実
用化するに当たっての大きな障害となっていたのである
。
そこで、木発明廿らは、熱に安定であり、しかも室温に
おいて長期間活性を失わない性質を有するＰＴＡを求め
て鋭意研究した結果１特定の微生物菌体に上記の性質を
有するＰＴ＾が存在することを見い出し、しかもこのＰ
ＴＡは容易に純粋に精製し得、かつ往来のクロストリデ
ィウムなどに存在するＰＴＡに比較し、驚くほどその安
定性に優れた新規酵素であることを見い出し１本発明を
完成した。
おいて長期間活性を失わない性質を有するＰＴＡを求め
て鋭意研究した結果１特定の微生物菌体に上記の性質を
有するＰＴ＾が存在することを見い出し、しかもこのＰ
ＴＡは容易に純粋に精製し得、かつ往来のクロストリデ
ィウムなどに存在するＰＴＡに比較し、驚くほどその安
定性に優れた新規酵素であることを見い出し１本発明を
完成した。
すなわち１本発明は約５０°Ｃの緩衝液中で約１５分間
処理したのらの活性が、処理前の活性の約８０％以上の
値を保持している性質を有する（耐熱性）ＰＴ八である
う 本発明のＰＴＡは、約５０℃の緩衝液中で約１５分間処
理することにより、 ＰＴＡの残存活性がもとの活性の
約８０％以上、好ましくは約９０％以上、最適には約１
００％の値を保持している優秀な性質を有している（以
下これらの性質を耐熱性という。）。
処理したのらの活性が、処理前の活性の約８０％以上の
値を保持している性質を有する（耐熱性）ＰＴ八である
う 本発明のＰＴＡは、約５０℃の緩衝液中で約１５分間処
理することにより、 ＰＴＡの残存活性がもとの活性の
約８０％以上、好ましくは約９０％以上、最適には約１
００％の値を保持している優秀な性質を有している（以
下これらの性質を耐熱性という。）。
緩衝液の濃度及びｐＨは特に限定されないが、一般には
濃度は５ｍＭないし５００ｍＭであり、 ｐｔｔば７な
いし１１である。特に本発明においては、 ５０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ’ ７．５）を用いることが好ましい
。
濃度は５ｍＭないし５００ｍＭであり、 ｐｔｔば７な
いし１１である。特に本発明においては、 ５０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ’ ７．５）を用いることが好ましい
。
次に１本発明のＰＴＡの理化学的性質を示すか。
そのＰＴ八はバチルス・ステアロサ−モフィルスから得
られたものである。
られたものである。
（１）作 用：次の反応を触媒する。
アセチル−リン酸＋へｏ八
＃アセチルＣｏＡ ＋リン６変
（２）基質特異性ニアセチルリン酸及びＣＯ＾に対すミ
カエリス定数（Ｋｍ値）は、おのおの１．１１及び０．
４ｍＭである。
カエリス定数（Ｋｍ値）は、おのおの１．１１及び０．
４ｍＭである。
（３）至適ｐ１１：約ｐＨ７，５（ｌＡ度３０°Ｃ）（
４）安定ｐ＋１範囲：ｐＨ７，０〜１１で４℃、２４時
間の処理でほとんど失活が起こらない。
４）安定ｐ＋１範囲：ｐＨ７，０〜１１で４℃、２４時
間の処理でほとんど失活が起こらない。
（５）作用適温の範囲 ｐｔｔ７．５で２０℃より６５
°Ｃまでの温度の上昇とともに活性は増大する。通常は
、３０°Ｃにおいて反応を行わしめる。
°Ｃまでの温度の上昇とともに活性は増大する。通常は
、３０°Ｃにおいて反応を行わしめる。
（６）耐熱性＝５５°Ｃ３１５分間の加熱に対して安定
である。
である。
（７）分子量：約７０，０００ ＣセファデックスＧ−
１００（商品名、ファルマシア社製）ζこよるゲル濾過
クロマトグラフィーにて測定〕。
１００（商品名、ファルマシア社製）ζこよるゲル濾過
クロマトグラフィーにて測定〕。
約３５，０００ （５０５−ポリアクリルアミド電気泳
動法にて測定〕。
動法にて測定〕。
これらの結果より２本酵素は２量体からなるものと推定
される。
される。
（８）力価の測定法： ｐＨ７，５，８５ｍＭのトリス
−塩酸緩衝襖中、 ０．４３ｍＭのＣｏＡ、 ７．３ｍ
Ｍのアセチルリン酸、 ３３ｍＭの硫酸アンモニウムを
含む混合溶液を調製し、その混合液にホスホトランスア
セチラーゼを加えて、 ２３３ｎｍの吸光度の単位時間
あたりの増加値より力価を測定した。アセチルＣｏＡの
２３３ｉｎｍにおけるモル吸光係数は、 Ｃｏ、Ａのモ
ル吸光係数と比較し、 ４．４４Ｘ］、０３ β／ｍｏ
ｌｅ−ｃｍ大きい値であること利用し、１分間あたり１
マイクロモルのアセチルＣｏＡを生成せしめる酵素量を
求め、この量を酵素活性の１単位とした（Ｍｏｔｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ＋ １３巻、３８１
頁。
−塩酸緩衝襖中、 ０．４３ｍＭのＣｏＡ、 ７．３ｍ
Ｍのアセチルリン酸、 ３３ｍＭの硫酸アンモニウムを
含む混合溶液を調製し、その混合液にホスホトランスア
セチラーゼを加えて、 ２３３ｎｍの吸光度の単位時間
あたりの増加値より力価を測定した。アセチルＣｏＡの
２３３ｉｎｍにおけるモル吸光係数は、 Ｃｏ、Ａのモ
ル吸光係数と比較し、 ４．４４Ｘ］、０３ β／ｍｏ
ｌｅ−ｃｍ大きい値であること利用し、１分間あたり１
マイクロモルのアセチルＣｏＡを生成せしめる酵素量を
求め、この量を酵素活性の１単位とした（Ｍｏｔｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ＋ １３巻、３８１
頁。
１９６９年を参照）。
（９）単一性：精製標品は、アクリルアミドディスク電
気泳動法により陽極側に移動し、単一なハントを与えた
。
気泳動法により陽極側に移動し、単一なハントを与えた
。
本発明のＰＴＡを製造するは１次のごとき方法を採用す
ることができる。すなわち２最適生育温度が５０°Ｃな
いし８５°Ｃである微生物を培養し、その培養物から本
発明のＰＴＡを採取することによって得ることができる
。
ることができる。すなわち２最適生育温度が５０°Ｃな
いし８５°Ｃである微生物を培養し、その培養物から本
発明のＰＴＡを採取することによって得ることができる
。
本発明に使用する微生物は１本発明のｌ０ＴＡを産生じ
うるちのであればいかなるものでもよく２例えばバチル
ス・ステアロサーモフィルス、バチルス・サーモプロテ
オリティクス、バチルス・アシドカルダリウスなどのバ
チルス属、サーモアクチノマイセス属、サーマス属、サ
ーモミクロビウム属、カルデリア属などの微生物があげ
られ、特にバチルス属の細菌が好ましい。これらの中で
も特にバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒ敷−吐旦■）が好ましく、
ステアロサーモフィルスとしての具体例としては、
ＡＴＣＣ７９５３゜７９５４、８００５．１０１４９．
１２９８０． ＮＧＡ １５０３及び［ＩＫ−７８８゜
５６３（微工研菌第５４１１号、第７２７５号）などが
ある。
うるちのであればいかなるものでもよく２例えばバチル
ス・ステアロサーモフィルス、バチルス・サーモプロテ
オリティクス、バチルス・アシドカルダリウスなどのバ
チルス属、サーモアクチノマイセス属、サーマス属、サ
ーモミクロビウム属、カルデリア属などの微生物があげ
られ、特にバチルス属の細菌が好ましい。これらの中で
も特にバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｓｔｅａｒｏｔｈｅｒ敷−吐旦■）が好ましく、
ステアロサーモフィルスとしての具体例としては、
ＡＴＣＣ７９５３゜７９５４、８００５．１０１４９．
１２９８０． ＮＧＡ １５０３及び［ＩＫ−７８８゜
５６３（微工研菌第５４１１号、第７２７５号）などが
ある。
本発明における微生物を培養するに際して用いられる栄
養培養地において、炭素源として２例えばグルコース、
・シュークロース、フルクトース。
養培養地において、炭素源として２例えばグルコース、
・シュークロース、フルクトース。
澱粉加水分解物、 ｔｉ蜜、亜硫酸パルプ廃液の糖類。
酢酸、乳酸などの有機酸類、さうには使用する細菌が資
化しうるアルコール類、油脂、脂肪酸及びグリセリンな
どが使用でき、窒素源として２例えよ硫酸アンモニウム
、塩化アンモニウム、リン酸ｒンモニウム、アンモニア
、アミノ酸、ペプトン。
化しうるアルコール類、油脂、脂肪酸及びグリセリンな
どが使用でき、窒素源として２例えよ硫酸アンモニウム
、塩化アンモニウム、リン酸ｒンモニウム、アンモニア
、アミノ酸、ペプトン。
肉エキス、酵母エキスなどの無機又は有機物が使用でき
る。さらに、無機塩類として１例えばカリウム、ナトリ
ウム、リン酸、亜鉛、鉄、マグネソウム、マンガン、銅
、カルシウム、コバルトなどの各塩類、必要に応して微
量金属塩、コーン・ステイープ・リカー、ビタミン類、
核酸などを使用してもよく、細菌の一般的栄養培地が使
用できる。
る。さらに、無機塩類として１例えばカリウム、ナトリ
ウム、リン酸、亜鉛、鉄、マグネソウム、マンガン、銅
、カルシウム、コバルトなどの各塩類、必要に応して微
量金属塩、コーン・ステイープ・リカー、ビタミン類、
核酸などを使用してもよく、細菌の一般的栄養培地が使
用できる。
これらの培地を用いて、上記の微生物を２０℃〜８０℃
、好ましくは４０℃〜７０℃、最適には６０℃で約２〜
６時間好気的に培養すればよい。また、工業的には希釈
率を９本発明に使用する微生物のμｍａｙの０．９以上
に制御して連続培養することが好ましい。ずなわら、Ｄ
を本発明に使用する微生物のμｍａｘの０．９以上に保
って連続培養して得た微生物菌体のＰＴＡ含有量は１回
分法で得られた単位菌体あたりのＰＴＡの最大値をしの
ぎ、かつ微生物菌体の生産性も高まり、特にＤ ：ｌ！
−ｐ ｍａｘ付近に保った場合、微生物菌体中のＰＴＡ
含有量は実に四分法の１．３５倍に向上する。一方、Ｄ
を０．９μｍａｘ未猫に保９て連続培養した菌体のＰＴ
Ａ含有量は回分法より低下する。
、好ましくは４０℃〜７０℃、最適には６０℃で約２〜
６時間好気的に培養すればよい。また、工業的には希釈
率を９本発明に使用する微生物のμｍａｙの０．９以上
に制御して連続培養することが好ましい。ずなわら、Ｄ
を本発明に使用する微生物のμｍａｘの０．９以上に保
って連続培養して得た微生物菌体のＰＴＡ含有量は１回
分法で得られた単位菌体あたりのＰＴＡの最大値をしの
ぎ、かつ微生物菌体の生産性も高まり、特にＤ ：ｌ！
−ｐ ｍａｘ付近に保った場合、微生物菌体中のＰＴＡ
含有量は実に四分法の１．３５倍に向上する。一方、Ｄ
を０．９μｍａｘ未猫に保９て連続培養した菌体のＰＴ
Ａ含有量は回分法より低下する。
本発明における希釈率〔グイリュウンヨンレイト（ｄｉ
ｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｏ ） 、以下りという。〕とは
。
ｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｏ ） 、以下りという。〕とは
。
下記の式（１）
％式％）
Ｆ；発酵槽に原料液を供給する速度及び同時に発酵槽よ
り抜出す速度 （Ｌ／！１ｒ）Ｖ；発酵槽中の液量、
（１） によって表されるものである。
り抜出す速度 （Ｌ／！１ｒ）Ｖ；発酵槽中の液量、
（１） によって表されるものである。
本発明におけるμｍａｘとは、微生物を連続培養する際
のその連続培養条件における微生物の最大比増殖速度（
１／ｌ１ｒ）をいい、物質環境型連続培養（ケモスタッ
ト；ハルヘルド、エルスワース、テリング、ジャーナル
・オブ・ジェネラル・ミクロ。
のその連続培養条件における微生物の最大比増殖速度（
１／ｌ１ｒ）をいい、物質環境型連続培養（ケモスタッ
ト；ハルヘルド、エルスワース、テリング、ジャーナル
・オブ・ジェネラル・ミクロ。
バイオロジー、１４巻、８号、６０１〜６２２頁、 １
９５６年）でＤを高め、菌濃度が定常値を保てなくなっ
た時、すなわちいわゆるウォッシュ・アウト時に測定さ
れる比増殖速度をいう。本発明における好熱性細菌を使
ってμｍａｘを求めるには９例えば２〜３０ｎ容発酵槽
に栄養培地を１．５〜２０７！仕込み。
９５６年）でＤを高め、菌濃度が定常値を保てなくなっ
た時、すなわちいわゆるウォッシュ・アウト時に測定さ
れる比増殖速度をいう。本発明における好熱性細菌を使
ってμｍａｘを求めるには９例えば２〜３０ｎ容発酵槽
に栄養培地を１．５〜２０７！仕込み。
４０〜７５℃、好ましくは４８〜６１℃、 ｐＨ４，５
〜９．０゜好ましくはｐｌ＋ ６．０〜８．０に保ちな
がらこの細菌を接種し３回分培養を行い、菌の生育が始
まり、培養液中の炭素源が０．０１重量％以下になった
時１発酵槽に仕込んだものと同組成の栄養培地を用いて
生育制限因子が炭素源のみである連続培養を開始する。
〜９．０゜好ましくはｐｌ＋ ６．０〜８．０に保ちな
がらこの細菌を接種し３回分培養を行い、菌の生育が始
まり、培養液中の炭素源が０．０１重量％以下になった
時１発酵槽に仕込んだものと同組成の栄養培地を用いて
生育制限因子が炭素源のみである連続培養を開始する。
こうすることによって、物質環境型連続培養法くケモス
タット）が設定できる。連続培養が定常になった後、Ｄ
を段階的に順次高めていき。
タット）が設定できる。連続培養が定常になった後、Ｄ
を段階的に順次高めていき。
発酵液中の菌濃度と、残存炭素原料とを経時的に測定し
、さらにＤを次第に高め、菌の比増殖速度を超えた時、
定常値を保っていた菌濃度が滅失しはしめ、それに反し
炭素源濃度が上昇しるまじめ。
、さらにＤを次第に高め、菌の比増殖速度を超えた時、
定常値を保っていた菌濃度が滅失しはしめ、それに反し
炭素源濃度が上昇しるまじめ。
もはやこれ以Ｊ−のＤでは連続培養の定常性が保゛なく
なった時、これをウォノソユ・アウトと言いこの時の比
増殖速度がμｍａｘになる。
なった時、これをウォノソユ・アウトと言いこの時の比
増殖速度がμｍａｘになる。
このμｍａｘは使用する栄養培地の種類や培養条件によ
って同一菌株でもさまざまに変化するが。
って同一菌株でもさまざまに変化するが。
これらの絹合せが変わらなければ一定値を示すので、一
度測定すれば長期にわたって信頼できる数値となる。
度測定すれば長期にわたって信頼できる数値となる。
本発明において１通常の前培養及び回分培養で希望の菌
濃度まで培養した後、連続培養に移し、Ｄの制限を実施
することができる。その時期は培養期間中の何れの時期
でもよいが、望ましくはハツチ培養時の対数増殖末期に
連続培養に移し、速やかに所定のＤに固定するのが有利
である。
濃度まで培養した後、連続培養に移し、Ｄの制限を実施
することができる。その時期は培養期間中の何れの時期
でもよいが、望ましくはハツチ培養時の対数増殖末期に
連続培養に移し、速やかに所定のＤに固定するのが有利
である。
次に２本発明の一実施態様をバチルス・スラブロサーモ
フィルス・ＮＣＡ １５０３の例をあげて説明すると、
グルコースを炭素源とした栄養培地を用い最ａ？Ｌ度（
５７°Ｃ）、最適ｐＨ（６，８） 、 ’ ３０ ｉ！
容発酵槽（２０ρ仕込め）で物質環境型連続培養を行っ
て。
フィルス・ＮＣＡ １５０３の例をあげて説明すると、
グルコースを炭素源とした栄養培地を用い最ａ？Ｌ度（
５７°Ｃ）、最適ｐＨ（６，８） 、 ’ ３０ ｉ！
容発酵槽（２０ρ仕込め）で物質環境型連続培養を行っ
て。
μｍａｘを測定したところ、 μｍａｘ ＝１．１
（１／１ｌｒ）であった。したがって、同組成の新しい
栄養培地を１時間あたり２発酵槽仕込み液量の１．１倍
、すなわち前記式（Ｉ）より２２４！ ／Ｈｒの速度で
連続的に定量ポンプなどを用いて発酵槽中に供給し、同
時に同速度で培養液を抜出せばよい。
（１／１ｌｒ）であった。したがって、同組成の新しい
栄養培地を１時間あたり２発酵槽仕込み液量の１．１倍
、すなわち前記式（Ｉ）より２２４！ ／Ｈｒの速度で
連続的に定量ポンプなどを用いて発酵槽中に供給し、同
時に同速度で培養液を抜出せばよい。
次に、得られた培養物から本発明のＰＴＡが採取される
が、培養物５分離生菌体１分離菌体の処理力、粗製酵素
、精製酵素などのあらゆる段階で採取できる。精製法と
しては、′ａ常の酵素精製法を用いることができる。す
なわち、遠心分離などにより菌体を得た後、菌体をマン
トンゴーリン、ダイノミル、フレンチプレス、超音波処
理などにより細胞破砕後、遠心分離により細胞片を除去
し。
が、培養物５分離生菌体１分離菌体の処理力、粗製酵素
、精製酵素などのあらゆる段階で採取できる。精製法と
しては、′ａ常の酵素精製法を用いることができる。す
なわち、遠心分離などにより菌体を得た後、菌体をマン
トンゴーリン、ダイノミル、フレンチプレス、超音波処
理などにより細胞破砕後、遠心分離により細胞片を除去
し。
細胞抽出液を得、これに硫酸ストレプトマイシン又は硫
酸プロタミン処理を行い、さらには硫酸アンモニア沈澱
、アセトン沈澱、加熱処理などを行い、精製するために
ＤＥＡＥ−セルロースカラムなどのイオン交換クロマト
グラフィー、ヒトロキシアパタイトカラトなどの吸着ク
ロマトグラフィー。
酸プロタミン処理を行い、さらには硫酸アンモニア沈澱
、アセトン沈澱、加熱処理などを行い、精製するために
ＤＥＡＥ−セルロースカラムなどのイオン交換クロマト
グラフィー、ヒトロキシアパタイトカラトなどの吸着ク
ロマトグラフィー。
フェニルセファロースＣＬ−４８（商品名＋ ファルマ
シア社製）のような疎水性クロマトグラフィー。
シア社製）のような疎水性クロマトグラフィー。
架橋デキストランあるいは架橋ポリアクリルアミドなど
のゲル濾過クロマトグラフィーを組合せて行うことがで
きる。このようにして９本発明のＰＴＡを単離、精製す
ることができる。
のゲル濾過クロマトグラフィーを組合せて行うことがで
きる。このようにして９本発明のＰＴＡを単離、精製す
ることができる。
本発明のＰＴＡは、熱に対して非常に安定であり。
しかも従来のＰＴＡと比較して酵素単離後これを室温で
長期間保存することができる。
長期間保存することができる。
次に、木発明を実施例により具体的に説明する。
実施例１．比較例１
ポリペプトン０．５ ｇ／ｄ Ｉ！ 、酵母エキス０．
５ ｇ／ｄ １． 。
５ ｇ／ｄ １． 。
シュークロース１．０ ｇ／ｄβ、硫酸カリウム０．１
３ｇ／ｄρ、リン酸二ナトリウム０．６４４ ｇ／ｄ
１２ 、硫酸マグネシラｌ、０．０２７ ｇ／ｄ ｅ
、 クエン酸０．０３２ ｇ／ｄ Ａ 。
３ｇ／ｄρ、リン酸二ナトリウム０．６４４ ｇ／ｄ
１２ 、硫酸マグネシラｌ、０．０２７ ｇ／ｄ ｅ
、 クエン酸０．０３２ ｇ／ｄ Ａ 。
硫酸第一鉄０．０００７ ｔｔ／ｄ １１ 、硫酸マン
ガン０．０１５ ｇ／ｄｊｌ’、 ｐＨ７，００に調整
した培地２５０βを１１５℃。
ガン０．０１５ ｇ／ｄｊｌ’、 ｐＨ７，００に調整
した培地２５０βを１１５℃。
１０分間加熱殺菌した後、バチルス・ステアロサーモフ
ィルスＮＣＡ １５０３株を接種し、６０℃で３時間内
圧０．５ ｋｇ／ｒｎ’で通気培養した。
ィルスＮＣＡ １５０３株を接種し、６０℃で３時間内
圧０．５ ｋｇ／ｒｎ’で通気培養した。
培養後、水で冷却しながら直ちにデラバル型遠心分離機
で菌体を採取し、 ７００ ｇの菌体を得た。
で菌体を採取し、 ７００ ｇの菌体を得た。
得られた菌体を凍結状態で保持したのち、凍結菌体３０
０ｇを２倍量の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）に
）ド、濁し、フレンチプレスを用い゛て細胞を十分に破
壊後、遠心分離により細胞片を除去し、 ＰＴＡを含む
粗抽出液を得た。この粗抽出液６００ｍ１当たり１％の
硫酸プロタミン溶液３００ｍ ｌを添加し、十分攪拌し
た後、生じた沈澱を遠心分離で除去し、プロタミン上清
を得た。この上清に固形硫酸アンモニウムを徐々に加え
て６０％飽和（４℃）とした。
０ｇを２倍量の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）に
）ド、濁し、フレンチプレスを用い゛て細胞を十分に破
壊後、遠心分離により細胞片を除去し、 ＰＴＡを含む
粗抽出液を得た。この粗抽出液６００ｍ１当たり１％の
硫酸プロタミン溶液３００ｍ ｌを添加し、十分攪拌し
た後、生じた沈澱を遠心分離で除去し、プロタミン上清
を得た。この上清に固形硫酸アンモニウムを徐々に加え
て６０％飽和（４℃）とした。
生成した沈澱を遠心分離により集め、再び０．１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７，５）にとかし、ついで２０倍量の２
０ｍＭリン＃緩衝液（ｐｌｆ ７．５）に対して透析、
脱塩した。
酸緩衝液（ｐＨ７，５）にとかし、ついで２０倍量の２
０ｍＭリン＃緩衝液（ｐｌｆ ７．５）に対して透析、
脱塩した。
あらかしめ ２ｍＭメルカプトエタノール、２ｍＭエチ
レンジアミン四酢酸ナトリウムを含む２０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐｌｆ ７．５）で平衡化したＤ［ＥＡＥ−セル
ロースカラ１．ｔ：： Ｊ−記の粗酵素液を通し、塩化
カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で溶出せしめると。
レンジアミン四酢酸ナトリウムを含む２０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐｌｆ ７．５）で平衡化したＤ［ＥＡＥ−セル
ロースカラ１．ｔ：： Ｊ−記の粗酵素液を通し、塩化
カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で溶出せしめると。
塩化カリウム濃度０．０６Ｍの近くで目的のＰＴＡが溶
出した。、二の区分を集め＋ Ｏ−８ＭｆＨ度となるに
必要な固形硫酸アンモニウムを加えた後、あらかしめ２
ｍＭメルカプトエタノール、２ｍＭエチレンジアミン四
酢酸ナトリウム、 ０．８ Ｍ硫酸アンモニウムを含む
２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐｌｆ ７．５）で平衡化した
フェニルセファロースＣＬ−４Ｂカラムに通し、上記の
硫酸アンモニウムを含む緩衝液から硫酸アンモニラを含
まない緩衝液への流度勾配溶出を行った。
出した。、二の区分を集め＋ Ｏ−８ＭｆＨ度となるに
必要な固形硫酸アンモニウムを加えた後、あらかしめ２
ｍＭメルカプトエタノール、２ｍＭエチレンジアミン四
酢酸ナトリウム、 ０．８ Ｍ硫酸アンモニウムを含む
２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐｌｆ ７．５）で平衡化した
フェニルセファロースＣＬ−４Ｂカラムに通し、上記の
硫酸アンモニウムを含む緩衝液から硫酸アンモニラを含
まない緩衝液への流度勾配溶出を行った。
これにより、目的のＰＴＡは硫酸アンモニウム濃度０．
２Ｍ付近で溶出した。この活性Ｂ分を、濃縮後。
２Ｍ付近で溶出した。この活性Ｂ分を、濃縮後。
０．１Ｍ塩化ナトリウムを含むトリス−塩酸緩衝液を溶
出液に用いてウルトロゲル胱へ（商品名、 ＬＫＢ社製
）クロマトグラフィーワ行い、 ＰＴＡ活性区分を集め
た。
出液に用いてウルトロゲル胱へ（商品名、 ＬＫＢ社製
）クロマトグラフィーワ行い、 ＰＴＡ活性区分を集め
た。
このようにして得たＰＴ八は、アクリルアミドディスク
電気泳動で陽極側に移動し、単一なハンドを与え、さら
にセファデックスＧ−１００クロマトグラフイーにおい
ても３分子量約７０，０００のところに単一のピークを
与えた。
電気泳動で陽極側に移動し、単一なハンドを与え、さら
にセファデックスＧ−１００クロマトグラフイーにおい
ても３分子量約７０，０００のところに単一のピークを
与えた。
その収量は約５ｍｇで、酵素１ｍｇあたり約１５，００
０単位の力価をしめした。
０単位の力価をしめした。
次に、このようにして得たＰＴＡ と比較のため１クロ
ストリデイウムから得られたＰＴＡ （比較例１）の安
定性を調べた。
ストリデイウムから得られたＰＴＡ （比較例１）の安
定性を調べた。
その結果を第１図及び第２図に示す。なお、第１図はｐ
Ｈ７，５の５０ｍＭリン酸緩衝液中の各温度で１５分間
加熱したとき−の残存活性を示したもので１曲線Ａが実
施例１１曲線Ｂが比較例１である。第２回はｐｏ ７．
５の５０ｍＭリン酸緩衝液中３０℃で保存したときの残
存活性の経口変化を示したもので２曲線Ｃが実施例１２
曲線りが比較例１である。これらの結果からあきらかな
ように、クロストリディウムから得られたＰＴ＾は５０
℃で１５分間処理することにより、はぼ完全にその活性
を不可逆的に失うのに対し１本発明のＰＴＡは５０°Ｃ
では全く活性を失わなかった。さらに、３０℃ではクロ
ストリディウムから得られたＰＴへは１０−１５日間で
ほぼ活性を失うのに対し１本発明のＰＴＡは５０日経過
した時点でも活性の低下はまったく認められなかった。
Ｈ７，５の５０ｍＭリン酸緩衝液中の各温度で１５分間
加熱したとき−の残存活性を示したもので１曲線Ａが実
施例１１曲線Ｂが比較例１である。第２回はｐｏ ７．
５の５０ｍＭリン酸緩衝液中３０℃で保存したときの残
存活性の経口変化を示したもので２曲線Ｃが実施例１２
曲線りが比較例１である。これらの結果からあきらかな
ように、クロストリディウムから得られたＰＴ＾は５０
℃で１５分間処理することにより、はぼ完全にその活性
を不可逆的に失うのに対し１本発明のＰＴＡは５０°Ｃ
では全く活性を失わなかった。さらに、３０℃ではクロ
ストリディウムから得られたＰＴへは１０−１５日間で
ほぼ活性を失うのに対し１本発明のＰＴＡは５０日経過
した時点でも活性の低下はまったく認められなかった。
ごのように９本発明のＰＴＡが驚くほど熱に対して安定
であり、これを長期間保存することができる１クニ質を
有している。この性質は、いままでのＰＴＡにはないも
のである。
であり、これを長期間保存することができる１クニ質を
有している。この性質は、いままでのＰＴＡにはないも
のである。
実施例２〜５
（１［ｉ体；バチルス・ステアロサーモフィルスＮＣＡ
１５０３゜ 栄養培地組成；グルコースを炭素源として他の組成を次
のごとくのちのを用いた。
１５０３゜ 栄養培地組成；グルコースを炭素源として他の組成を次
のごとくのちのを用いた。
グルコース］、３ ｇ 、酵母エキス（オリエンタル酵
母社製） １．０ ｇ 、ペプトン（ディフィコ製）
０．５ｇ。
母社製） １．０ ｇ 、ペプトン（ディフィコ製）
０．５ｇ。
Ｋｌ（２ＰＯ４０，５ｇ 、 Ｎａ２Ｈｐｏ、 ’ １
２１１ｚＯ０，５ｇ 、 Ｍｇ５Ｏｎ７Ｈ２００，１ｇ
、 Ｚｎ５Ｏ，’ ７Ｈｚ００．ＯＩｇ 、 Ｍｎ５
０ｇ ’ ７１１２００．０１ｇ、ＣｌｌＳＯ４・５ｔ
ｈ００．０１ｇ、’ＣｏＣＩｚ・６１１２００．０１ｇ
以上のものを水道水１βに溶解した。
２１１ｚＯ０，５ｇ 、 Ｍｇ５Ｏｎ７Ｈ２００，１ｇ
、 Ｚｎ５Ｏ，’ ７Ｈｚ００．ＯＩｇ 、 Ｍｎ５
０ｇ ’ ７１１２００．０１ｇ、ＣｌｌＳＯ４・５ｔ
ｈ００．０１ｇ、’ＣｏＣＩｚ・６１１２００．０１ｇ
以上のものを水道水１βに溶解した。
前培養；」二記組成の栄養培地を１００ｍ１容三角フラ
スコに２０ ｍｌ −＋ ５００ ｍｌ容三角フラスコ
に１００ｍ１ずつ分注し、綿栓後１２１℃、 １ ｋ
ｇ／ｃｍ２．１０分間加圧蒸気殺菌した。冷却後、 １
００ｍ１容三角フラスコにアメリカン・タイプ・カルチ
ャー・コレクシヨー ンより入手した凍結乾燥菌体を約
５ｍｌ無菌的に接種した。ロータリー・シェイカー（高
崎製作所型）を用いて５５℃で一昼夜回転振盪培養（１
６０ｒｐｍ ）したところ、菌体の生育が見られ、濁度
が高まり６６０ ｎｍ吸光度（日立製作所製１０１型分
光光度計で測定、以後００６６０． ｎｍと称す。）が
０．８〜１．０に達したので、これを次に５００ｍ１容
三角フラスコに約５ｍｌ接種した。同条件で数時間５０
０ｍ ｌ容三角フラスコを回転振盪培養したところ、
００６６０ ｎｍが１．０程度に達したので回転振盪培
養を中止し７ これを前培養物として本培養への接種に
用いた。
スコに２０ ｍｌ −＋ ５００ ｍｌ容三角フラスコ
に１００ｍ１ずつ分注し、綿栓後１２１℃、 １ ｋ
ｇ／ｃｍ２．１０分間加圧蒸気殺菌した。冷却後、 １
００ｍ１容三角フラスコにアメリカン・タイプ・カルチ
ャー・コレクシヨー ンより入手した凍結乾燥菌体を約
５ｍｌ無菌的に接種した。ロータリー・シェイカー（高
崎製作所型）を用いて５５℃で一昼夜回転振盪培養（１
６０ｒｐｍ ）したところ、菌体の生育が見られ、濁度
が高まり６６０ ｎｍ吸光度（日立製作所製１０１型分
光光度計で測定、以後００６６０． ｎｍと称す。）が
０．８〜１．０に達したので、これを次に５００ｍ１容
三角フラスコに約５ｍｌ接種した。同条件で数時間５０
０ｍ ｌ容三角フラスコを回転振盪培養したところ、
００６６０ ｎｍが１．０程度に達したので回転振盪培
養を中止し７ これを前培養物として本培養への接種に
用いた。
本培養；３０１容発酵槽を用い、上記栄養培地を２０Ｒ
張り込み殺菌を行った（１２１℃＋ １ ｋｇ／ｃｍ”
＋１５分）。培養条件を５５±１℃、 ｐＨ６，５〜
７．０ （４ＮＮａＯＨで調整）１通気！２０ｊ！／
分（空気）、攪拌数９０Ｏｒｐｍに設定後、前培養物を
約１４接種し。
張り込み殺菌を行った（１２１℃＋ １ ｋｇ／ｃｍ”
＋１５分）。培養条件を５５±１℃、 ｐＨ６，５〜
７．０ （４ＮＮａＯＨで調整）１通気！２０ｊ！／
分（空気）、攪拌数９０Ｏｒｐｍに設定後、前培養物を
約１４接種し。
ハツチ培養を開始した。培養に伴い発泡したので消泡剤
（信越化学ＫＭ−７０）を少量添加した。培養開始後約
２ 、５１１’＋間でＯｆ） ６６０ ｎｍが１．２
（０，５６ｇ乾燥菌体／ｐ）に至り、培養液中のグルコ
ースがほぼ消費され、 ０．０１重量％以下になったの
で、ずみやかに連続培養を開始した。前もって測定した
木■■のｐｍａｘが１．４ （１／ｈｒ ）であったの
で、前記した殺菌済みの栄養培地を２８．０７！／ｈｒ
の速度で連続的に供給、同速度で発酵槽より培養液を抜
出すことでμを１．００μｍａｙ （実施例２）に設
定し２発酵槽液量の５倍量の栄養培地を用いて連続培養
して菌体を得た。
（信越化学ＫＭ−７０）を少量添加した。培養開始後約
２ 、５１１’＋間でＯｆ） ６６０ ｎｍが１．２
（０，５６ｇ乾燥菌体／ｐ）に至り、培養液中のグルコ
ースがほぼ消費され、 ０．０１重量％以下になったの
で、ずみやかに連続培養を開始した。前もって測定した
木■■のｐｍａｘが１．４ （１／ｈｒ ）であったの
で、前記した殺菌済みの栄養培地を２８．０７！／ｈｒ
の速度で連続的に供給、同速度で発酵槽より培養液を抜
出すことでμを１．００μｍａｙ （実施例２）に設
定し２発酵槽液量の５倍量の栄養培地を用いて連続培養
して菌体を得た。
次に＋’ Ｉ）を段階的にｐｍａｘの０．９ Ｃ（供給
抜出速度２５．２７！／ｈｒ）実施例３ ） 、 ０．
７５ ’（（２１，ＯＬ／ｈｒ）実施例４〕に変更し、
連続培養を行って菌体を得た。
抜出速度２５．２７！／ｈｒ）実施例３ ） 、 ０．
７５ ’（（２１，ＯＬ／ｈｒ）実施例４〕に変更し、
連続培養を行って菌体を得た。
このようにして得た菌体中のＰＴＡ含有量を測定して、
その結果を表１に示す。なお１表１に回分培養で得た値
（実施例５）も併記したが、これは連続樟養に移行する
前の回分培養時に得た菌体の値である。
その結果を表１に示す。なお１表１に回分培養で得た値
（実施例５）も併記したが、これは連続樟養に移行する
前の回分培養時に得た菌体の値である。
表１
表１の結果からあきらかなように、Ｄが０．９μｍａｘ
以上において生産した菌体は９回分法をしの＜ＰＴＡ含
有量を示している。
以上において生産した菌体は９回分法をしの＜ＰＴＡ含
有量を示している。
実施例６
３０１容酩酵槽にグルコース１．３ｇ 、硫酸アンモニ
ウム１．０ｇ 、酵母エキス０．５ｇ 、 リン酸−
カリウム０．５ｇ 、 リン酸ニナトリウム０．５ｇ
、硫酸マグネシウム０．１ｇを水道水ｌＩｌに溶解し
て得た培地を２０！張り込み、１２１℃＋ Ｉｋｇ／
ｃｍ２で１５分間加圧蒸気殺菌した。培養条件を５７℃
、 ｐｕ ６．５〜７．０（４Ｎ−ＮａＯＨで調整した
。）１通気量を２０１／分（空気）、攪拌数９０Ｏｒｐ
ｍに設定した後、これにバチルス・ステアロサーモフィ
ルスＡＴＣＣ１２９８０株を上記培地であらかしめ前培
地して得た。６６０ｎｍでの吸光度が約１．０に達した
？８液を１ｇ接種した。まず、約２．５時間パッチ培養
を行い、 ６６０ ｎｍの吸光度がＩＯに至ったときに
、前記組成の殺菌済み栄養培地を２４．Ｏｊ！ ／ｈｒ
の速度で定量ポンプを用いて連続的に供給し、同速度で
発酵槽より培養液を抜出すことにより、 １００ Ｑ、
の栄養培地を用いて連続培養して培養液を得た。培養液
を水で冷却しながら直ぢにデラハル型遠心分１１ｊｆｔ
ｎで菌体を採取し、 ４００ ｇの菌体を得た。
ウム１．０ｇ 、酵母エキス０．５ｇ 、 リン酸−
カリウム０．５ｇ 、 リン酸ニナトリウム０．５ｇ
、硫酸マグネシウム０．１ｇを水道水ｌＩｌに溶解し
て得た培地を２０！張り込み、１２１℃＋ Ｉｋｇ／
ｃｍ２で１５分間加圧蒸気殺菌した。培養条件を５７℃
、 ｐｕ ６．５〜７．０（４Ｎ−ＮａＯＨで調整した
。）１通気量を２０１／分（空気）、攪拌数９０Ｏｒｐ
ｍに設定した後、これにバチルス・ステアロサーモフィ
ルスＡＴＣＣ１２９８０株を上記培地であらかしめ前培
地して得た。６６０ｎｍでの吸光度が約１．０に達した
？８液を１ｇ接種した。まず、約２．５時間パッチ培養
を行い、 ６６０ ｎｍの吸光度がＩＯに至ったときに
、前記組成の殺菌済み栄養培地を２４．Ｏｊ！ ／ｈｒ
の速度で定量ポンプを用いて連続的に供給し、同速度で
発酵槽より培養液を抜出すことにより、 １００ Ｑ、
の栄養培地を用いて連続培養して培養液を得た。培養液
を水で冷却しながら直ぢにデラハル型遠心分１１ｊｆｔ
ｎで菌体を採取し、 ４００ ｇの菌体を得た。
この菌体を１．５倍量の０．１Ｍリン酸緩衝液に１ｕ濁
し、ダイノミルを用いて細胞を破砕後、遠心分離により
不溶物を除去し、 ＰＴＡを含む粗抽出液を得た。この
粗抽出液４００ｍ１当たり１０％の硫酸ストレプトマイ
シン溶液２００ｍ ｌを添加後、生した沈澱を遠心分離
で除去し、ストレプトマイシン」二清を得た。この上清
に硫酸アンモニウム分割を施し。
し、ダイノミルを用いて細胞を破砕後、遠心分離により
不溶物を除去し、 ＰＴＡを含む粗抽出液を得た。この
粗抽出液４００ｍ１当たり１０％の硫酸ストレプトマイ
シン溶液２００ｍ ｌを添加後、生した沈澱を遠心分離
で除去し、ストレプトマイシン」二清を得た。この上清
に硫酸アンモニウム分割を施し。
３０％飽和（４℃）から、６０％飽和（４°Ｃ）の間の
分画部を得た。この分画部を５０ｍＭ ）リス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８，０）にとかした後、あらかじめ上記緩衝
液で平（ａｉ化したＤＥＡＩＥ−セファデックス（商品
名ファルマシア社製）カラムに通し、塩化ナトリウムを
上記緩衝液に加えた溶液で溶出せしめると。
分画部を得た。この分画部を５０ｍＭ ）リス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８，０）にとかした後、あらかじめ上記緩衝
液で平（ａｉ化したＤＥＡＩＥ−セファデックス（商品
名ファルマシア社製）カラムに通し、塩化ナトリウムを
上記緩衝液に加えた溶液で溶出せしめると。
塩化ナトリウム濃度０．０８Ｍの近くで、目的とするＰ
ＴＡが溶出した。この溶出部分を実施例１と同様な条件
下にフヱニルセファロースＣＬ−４Ｂカラムクロマトグ
ラフィーを行ったのち、セファデックスＧ−１５０カラ
ムに通じ０．１Ｍ塩化ナトリウムを含む３０ｍＭ ）リ
スー塩緩衝液（ｐｔｌ ８．０）で溶出して。
ＴＡが溶出した。この溶出部分を実施例１と同様な条件
下にフヱニルセファロースＣＬ−４Ｂカラムクロマトグ
ラフィーを行ったのち、セファデックスＧ−１５０カラ
ムに通じ０．１Ｍ塩化ナトリウムを含む３０ｍＭ ）リ
スー塩緩衝液（ｐｔｌ ８．０）で溶出して。
実施例１と同様にアクリルアミドディスク電気泳動で単
一・なハンドを与えるＰＴＡ標品を得た。さらに、実施
例１と同様にセファデックスＧ１００クロマトグラフイ
ーにおいても１分子量約７０，０００のところに単一の
ピークを与えた。
一・なハンドを与えるＰＴＡ標品を得た。さらに、実施
例１と同様にセファデックスＧ１００クロマトグラフイ
ーにおいても１分子量約７０，０００のところに単一の
ピークを与えた。
収量は約９’ｍｇであった。その力価は酵素１ｍｇ当た
り約１５，０００単位であった。
り約１５，０００単位であった。
第１図は本発明のＰＴＡ （曲線Ａ）及びクロストリ
ディウムから得られたＰＴＡ （曲線Ｂ）の各温度に
おける１５分間加熱後の残存活性を示す図で、第２図は
本発明のＩＩＴＡ （曲線Ｃ）及びクロストリディウ
ムから得られたＰＴＡ （曲線Ｄ）を３Ｑ℃で放置し
た後の残存活性を示す図である。
ディウムから得られたＰＴＡ （曲線Ｂ）の各温度に
おける１５分間加熱後の残存活性を示す図で、第２図は
本発明のＩＩＴＡ （曲線Ｃ）及びクロストリディウ
ムから得られたＰＴＡ （曲線Ｄ）を３Ｑ℃で放置し
た後の残存活性を示す図である。
Claims (3)
- （１）約５０℃の緩衝液中て約１５分間処理したのちの
活性が処理前の活性の約８０％以上の値を保持している
性質を有するホスホトランスアセチラーゼ。 - （２）約８０％以上の値が、約９０％以上の値である特
許請求の範囲第１項記載のホスホトランスアセチラーゼ
。 - （３）約９０％以上の値が、約１００％の値である特許
請求の範囲第２項記載のホスホトランスアセチラーゼ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12572484A JPS615781A (ja) | 1984-06-19 | 1984-06-19 | ホスホトランスアセチラ−ゼ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12572484A JPS615781A (ja) | 1984-06-19 | 1984-06-19 | ホスホトランスアセチラ−ゼ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS615781A true JPS615781A (ja) | 1986-01-11 |
| JPH0478274B2 JPH0478274B2 (ja) | 1992-12-10 |
Family
ID=14917197
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12572484A Granted JPS615781A (ja) | 1984-06-19 | 1984-06-19 | ホスホトランスアセチラ−ゼ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS615781A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10470629B2 (en) | 2005-02-18 | 2019-11-12 | Irobot Corporation | Autonomous surface cleaning robot for dry cleaning |
| US10524629B2 (en) | 2005-12-02 | 2020-01-07 | Irobot Corporation | Modular Robot |
| US11058271B2 (en) | 2010-02-16 | 2021-07-13 | Irobot Corporation | Vacuum brush |
-
1984
- 1984-06-19 JP JP12572484A patent/JPS615781A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10470629B2 (en) | 2005-02-18 | 2019-11-12 | Irobot Corporation | Autonomous surface cleaning robot for dry cleaning |
| US10524629B2 (en) | 2005-12-02 | 2020-01-07 | Irobot Corporation | Modular Robot |
| US11058271B2 (en) | 2010-02-16 | 2021-07-13 | Irobot Corporation | Vacuum brush |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0478274B2 (ja) | 1992-12-10 |
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