JPS61291540A - 長鎖高度不飽和脂肪酸またはその低級アルキルエステルの分離精製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明は、長鎖高度不飽和脂肪酸Ｃ以下、ＰＵＦＡとい
う）を含有する脂肪酸混合物から特定のＰｔＪＦＡを、
マタはＰＵＦ’Ａの低級アルキルエステルを含有する脂
肪酸の低級アルキルエステル混合物から特定のＰＵＦＡ
の低級アルキルエステルを分離筒精製する方法に関する
。 〔従来の技術〕 動物油、植物油を構成している脂肪酸の中にはエイコサ
ペンタエン酸％　Ｖコサヘキサエン酸、γ−リルイン酸
のようにプロスタグランジン（ＰＧ）を始めとする多様
な生理活性物質の前駆体であるＰＵＦＡが含まれており
、これらのＰＵＦＡを上記の油から得られる脂肪酸混合
物から、またはＰＵＦＡの低級アルキルエステルをその
低級アルキルエステル混合物から分離、精製する方法と
して次のような方法が知られている。 ■尿素付加法〔油化学／ｊ、２４ｔり、（／９乙４ｔ）
〕■分別結晶法〔油化学ヨ、夕、ｇ　／　（／９４３Ｎ
）■向流分配抽出法〔昭和３３年！月／日南江堂発行「
カウンターｅカーレン トＪ／６７頁〜／ｊ９頁〕 ■分別蒸留　〔特開昭３９−／　／ｒ７４ｔθ号公報〕 ■分子蒸留　〔昭和３♂年１０月３０日日刊工業新聞社
発行「油脂化学製品便覧」 ３／／頁〜３１グ頁〕 ■硝Ｒ銀−ケイ酸カラムクロマトグラフィーＣＡＮＡＩ
、、ＣＨＥＭ、ジ　２０　／　７　（／９４Ｊ’））〔
発明が解決しようとする問題点〕 上記したようにＰＵＦＡを含有する脂肪酸混合物から特
定のＰ　Ｕ　Ｆ　Ａ？：、またはＰＵＦＡの低級アルキ
ルエステルを含有する脂肪酸の低級アルキルエステル混
合物から特定のＰＵＦＡの低級アルキルエステルを分離
、精製する方法としては、各種の方法が知られているが
、ＰＵＦＡの物性、構造が類似しており、またＰＵＦＡ
は二重結合の数が多いため、光、酸素、熱や、酸、塩基
の存在下で不安定であることから、これらの方法により
。 特定のＰＵＦＡまたは特定のＰＵＦＡの低級アルキルエ
ステルを効果的に容易に分離、精製することは困難であ
った。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、上記の問題を解決する方法につき種々研
究した結果１本発明を完成するに到った。 即ち１本発明は炭素数がｌ♂〜コグで、二重結合数が３
〜６である長鎖高度不飽和脂肪酸を含有する脂肪酸混合
物、または上記長鎖高度不飽和脂肪酸の低級アルキルエ
ステルを含有する脂肪酸の低級アルキルエステル混合物
を、スチレンとジビニルベンゼンの共重合物である非極
性多孔性ポリマーを素材とする吸着樹脂な担体として充
填したクロマトグラフィーのカラムに負荷し、水を／−
Ｊ−０％含有する親水性極性溶媒、またはこの親水性極
性溶媒を非極性溶媒で飽和させたものを溶離液として上
記カラムに通液し、脂肪酸混合物から特定の長鎖高度不
飽和脂肪酸を、または脂肪酸の低級アルキルエステル混
合物から特定の長鎖高度不飽和脂肪酸の低級アルキルエ
ステルな溶離１分画することを特徴とする。長鎖高度不
飽和脂肪酸またはその低級アルキルエステルの分離精製
方法であるＯ 本発明で分離精製するＰＵＦＡ、またはＰＵＦＡの低級
アルキルエステルＣ以下、ＰＵＦＡエステルという）を
溝底するＰＵＦＡは、炭素数が／ｒ〜２４ｔで、二重結
合数が３〜乙の範囲にあるもので１例えばリルイン酸、
ｒ−リルイン酸、アラキト０ン酸、エイコサペンタエン
酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸など・が
あり、このよりなＰＵＦＡを含む油脂は、植物類、動物
類に広（分布しており、植物油、動物油として入手する
ことができる。例えば動物油である魚油は、その魚の種
類に応じて、イワシ油、タラ肝油といった名称で入手可
能である。 これらの油脂は１分離、精製する目的のｐＵＦＡに応じ
て選ばれる０例えばエイコサペンタエン酸。 ドコサヘキサエン酸といったＰＵＦＡを目的とする場合
は、これらのＰＵＦＡを豊富に含む魚油が用いられる。 通常、これらの油脂はグリセリド°として脂肪酸を含ん
でおり、これらの油脂から脂肪酸混合物あルイは脂肪酸
低級アルキルエステルｃ以下、脂肪酸エステルという）
混合物を得るために、加水分解あるいはエステル化が行
なわれるｏ２１０水分解では１例えば油脂をケン化して
脂肪酸セッケンとした後、酸分解して脂肪酸混合物が得
られ、またエステル化では、例えば油脂を低級アルコー
ル中。 水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリを
触媒として、アルコリシスして脂肪酸エステル混合物を
得るか、または加水分解して得られた脂肪酸混合物と低
級アルコールを、硫酸や塩酸を触媒として反応させて脂
肪酸エステル混合物を得ることができる。脂肪酸エステ
ルを得るためのエステル化反応では、低級アルコールと
して、メタノール、エタノール、プロパツール、ブタノ
ールが使用される。 このようにして得られた脂肪酸混合物または脂肪酸エス
テル混合物は、そのまま力ラムクロマトグラフィーの原
料として負荷されるか、または尿素付加法などによって
、不飽和脂肪酸混合物または不飽和脂肪酸エステル混合
物だけを、脂肪酸混合物または脂肪酸エステル混合物か
ら取り出して。 カラムクロマトグラフィーの原料として負荷する。 本発明において、カラムクロマトグラフィーのカラム（
以下、カラムという］の充填剤として使用する、スチレ
ンとジビニルベンゼンの共重合物である非極性多孔性ポ
リマーを素材とする吸着樹脂は、非極性であるために、
極性の強い溶媒中では、極性の弱い物質は・ど強（吸着
樹脂表面に吸着する。このため、脂肪酸混合物または脂
肪酸エステル混合物を上記の吸着樹脂を充填したカラム
に負荷して、水を／〜ｓｏ％含有する親水性極性溶媒、
またはこの親水性極性溶媒を非極性溶媒で飽和させたも
のを溶離液としてカラムクロマトグラフィーな行なうと
、極性の強い物質、即ち炭素鎖が短か（、かつ同炭素数
の場合には二重結合数の多い脂肪酸または脂肪酸エステ
ルから順次溶離し。 分画することができる。 上記した吸着樹脂の具体例としては１例えば三菱化成工
業Ｃ株）製のダイヤイオンＨＰ−／　０゜ダイヤイオン
ＨＰ　−２０，ダイヤイオンＨＰ−２ｔ。 ダイヤイオンＨＰ　−Ｊ　ｏ、ダイヤイオンＨＰ−ｇｏ
。 ダイヤイオンＨＰ　−ｊｏ、ＭＣＩ　　ＧＥＬ　　ＣＨ
Ｐ　−コθＰ、セパビーズＳＰ−コ０１．セパビーズ５
Ｐ−２０７，セパビーズ５ｐ−ｒｏｏ、−ｔ＝パヒース
５Ｐ−９００，ダイヤモンド゛寺ジャムロック社製のデ
ュオライトＳ−Ｊ’ｊ　／、デュオライトＳ−♂６コ。 デュオライ）ＥＳ−ｒ６３．デュオライ）ＥＳ−♂６！
、デュオライトＥＳ−♂６≦、デュオライ）ＥＳ−＃４
１０．ロームφ了ント０・ハース社製のアンバーライト
ＸＡＤ−２，アンバーライトんリーグなどの市販製品が
挙げられる。 本発明では、スチレンとジビニルベンゼンの共重合物で
ある非極性多孔性ポリマーを素材とする吸着樹脂Ｃ以下
、非極性吸着樹脂という）であれば、どのような樹脂で
も使用できるが、それぞれ脂肪酸または脂肪酸エステル
の吸着力、吸着量に差があり、中でもダイオイオンＨＰ
−コσ、セパビーズ５Ｐ−２０６，セパビーズ５Ｐ−２
０７゜セパビーズｓｐ−，ｒｏｏ、セパビーズ５Ｐ−９
ｏｏ。 ＭＣＩ　　ＧＥＬ　　ＣＨＰ−コθＰ、アンバーライト
ＸＡＤ−ｇなどを用いるのが好ましい。 上記の非極性吸着樹脂を充填するカラムの材質は、ガラ
ス、鉄、ステンレス、ポリエチレンなどのポリマーなど
があるが、中でもガラス、ステンレスのカラムを使用す
ることが好ましく、光の影響を防ぐため遮光できるもの
が好ましい。 つぎ忙カラムへの非極性吸着樹脂の充填量は。 分離、精製の目的のＰＵＦＡまたはＰＵＦＡエステルの
種類や、カラムに負荷する脂肪酸混合物中に含°まれる
目的とするＰＵＦＡの含有量、脂肪酸エステル混合物中
に含まれる目的とするＰＵＦＡエステルの含有量、ある
いはカラムへの負荷量などによって変化させる必要があ
るが、目的とするＰＵＦＡまたはそのエステルの分離、
精製を効果的に行なうためのカラムへの非極性吸着樹脂
の充填高さは。 カラム直径の２倍（Ｌ／Ｄ＝２）以上は必要で。 好ましくはカラム直径の５倍（Ｌ／Ｄ＝３）以上である
。またカラムへの吸着樹脂の充填高さは、直径が同じカ
ラムであれば、原料の負荷量が一定で、溶離液がカラム
から流出する速度が一定であれば、高（なればなるほど
、即ち段数が高（なればなるほど、目的とするＰＵＦＡ
またはそのエステルの分離、精製の効果は高（なる。 本発明で使用する溶離液は、水を／−３０％含有する。 親水性極性溶媒Ｃ以下、極性溶離液といつ）、マたはこ
のものに非極性溶媒を飽和させたものｃ以下、非極性溶
媒飽和極性溶離液という）である。 極性溶離液を構成する成分は１分離、精製の目的である
ＰＵＰＡまたはそのエステルに変性、劣化といった影響
を与えるような不純物を含有していないことが好ましく
、このため特に水としては。 イオン交換水、蒸留水、または純水を使用することが好
ましい。また、極性溶離液を構成する親水性極性溶媒と
しては１例えばメタノール、エタノール、プロパツール
、アセトン、了セトニトリル。 ジオキサン、メチルエチルケトン、ホルムアミドなどの
他、親水性極性溶媒はすべて使用できるが。 溶離液は分画後、溶質を回収・する目的で蒸留、濃縮す
るため、沸点が低い方が好ましく、さらに極性が強いこ
とが好ましいため、溶離液を構成する親水性極性溶媒を
７種類とする場合には、メタノールを使用することが好
ましいＯこの他、７種類の親水性極性溶媒と水で構成さ
れる極性溶離液を使用してのカラムクロマトグラフィー
では１分離が不十分で、目的とするＰＵＦＡまたはその
エステルの分離、精製が十分に行なわれず、ＰＵＦＡま
たはそのエステルの濃度が上がらない場合には。 コ種類以上の親水性極性溶媒を混合して極性溶離液を調
製し１分離、精製を行なうこともできるが、蒸留濃縮し
た溶離液を回収し、再使用する場合には、溶離液を構成
する２種類以上つ親水性極性溶媒の混合比率が変化しや
す（、このため分離、精製の再現性が非常に低くな条ｏ
それ故に、溶離液を構成する親水性極性溶媒は１種類で
あることが好ましい。 非極性溶媒飽和極性溶離液を構成する親水性極性溶媒に
は、上記の極性溶離液と同様の溶媒が使用できる。 非極性溶媒飽和極性溶離液を構成する非極性溶媒は、■
分離、精製時間の短縮、■目的とするＰＵＦＡまたはそ
のエステルの分離、精製の効果の改善という２つの目的
のために、極性溶離液に飽和させて使用する。即ち、非
極性溶媒を飽和させた極性溶離液を用いてクロマトグラ
フィーな行なった場合には、極性溶離液のみでクロマト
グラフィーを行なった場合と比較して、目的とするＰＵ
ＦＡまたはそのエステルの溶離速度が早（なり、また目
的とするＰＵＦＡまたはそのエステルの画分の前後の両
分に含まれる脂肪酸またはそのエステルとの分離が向上
するため、目的とするＰＵＦＡまたはそのエステルの純
度が上がり、また回収率も上がる。 このような目的で、極性溶離液に飽和させて使用できる
非極性溶媒には、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、ｎ−へ
ブタン、ｎ−オクタン、イソ−オクタン、シクロペンタ
ン、シクロヘキサン、メチルエーテル、エチルエーテル
、トルエン、ベンゼンなどがあるが、成分分離を改善す
る効果が高いこと、また沸点が低（、蒸留濃縮が容易で
あるという点から、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサンが好ま
しい。 なお、蒸留、濃縮して回収した非極性溶媒飽和極性溶離
液を再び溶離液として再使用する場合に。 脂肪酸または脂肪酸エステルなカラムから溶離する以前
の溶離液と、成分比率が変わってしまう場合があるが、
この場合は、含水率を測定した俵。 この測定結果に基づいて、極性溶媒を添加するか。 あるいは水を添加して含水率を蒸留、濃縮する以前の成
分比率と同じにしたのち、このものに非極性溶媒をあら
ためて飽和させれば良いため１回収した溶離液の再生は
容易に行なわれる。 上記した理由から、溶離液は、非極性溶媒飽和極性溶離
液が好ましく、中でもｎ−ペンタンまたはｎ−ヘキサン
を飽和したメタノール水が好ましいＯ 非極性溶媒飽和極性溶離液は、極性溶媒に水を添加、混
合した後、これを例えば分液ロートまたは向流抽出装置
を使用して非極性溶媒と分配することによって調製する
ことができる０また溶離液中の溶存酸素の影響で目的と
するＰＵＦＡまたはそのエステルが変性、劣化すること
を防ぐために溶離液を加熱還流して溶存酸素を除去した
り、またこのものに窒素ガス、炭酸ガスを吹き込み、溶
解させて使用してもよい。 上記のようにして調製した溶離液を、非極性吸着樹脂を
いわゆる乾式充填法で充填したカラムに気泡が樹脂層に
残らないように注意しなからカラムの下から上向き方向
’　ＵＰ　ｆｌｏｗ　）に流して樹脂層を溶離液で満た
すか、カラムの上から下向き方向（Ｄｏｗｎ　ｆｌｏｗ
　）に流して樹脂層を溶離液で満たした後、カラムを震
動させて樹脂層に残った気泡を除く０また。樹脂層に気
泡を残さないようにするために、非極性吸着樹脂な溶離
液とともにカラムに流し込んで充填する。いわゆる湿式
充填法で充填を行なってもよいが、非極性吸着樹脂を充
填したカラムは、非極性吸着樹脂の分離、精製の効果が
低下してしまうまで再生して使用することができ、それ
までの間非極性吸着樹脂なカラムから取り出す必要がな
ど、また樹脂層の気泡を最も効果的に取り除（ことがで
きるという理由から、乾式充填法で非極性吸着樹脂を充
填したカラムＫＵｐｆｌｏｗで溶離液を流して気泡を取
り除き、いわゆるカラムのコンディショニングを行なう
方法が最も好ましい〇 コンディショニングを終えたカラムは、原料である脂肪
酸混合物または脂肪酸エステル混合物の負荷に備え、樹
脂層最上面が溶離液１面から完全に露出するようにＤｏ
ｗｎ　ｆｌｏｗで溶離液を流出させる。 この際、溶離液を流出させすぎて樹脂層内に気泡が入ら
ないように注意することが必要である〇カラムへの原料
の負荷量は、目的とするＰＵＦＡまたはそのエステルの
分離、精製の効果を妨げるような量であることは好まし
くない０すなわち。 同サイズで非極性吸着樹脂の充填量が同じであるカラム
を用いて同じ溶離液同じ流速でクロマトグラフィーを行
なう場合、原料の負荷量が多（なるほどカラムの分離段
数は低（なるため、目的とするＰＵＦＡまたはそのエス
テルの分離、精製の効果が低下する。目的とするＰＵＦ
Ａまたはそのエステルの分離、精製を効果的に行なうた
めのカラムへの原料の負荷は、充填樹脂容量に対して夕
０％

【重量）以下の負荷率であればよいが、２θ％（重
量）以下であれば好ましい。 溶離液面から完全に露出させた非極性吸着樹脂層最上面
に原料である脂肪酸混合物または脂肪酸エステル混合物
を負荷し、負荷した原料が樹脂層に浸透し、樹脂層最上
面が完全罠露出するまで　　　　Ｄｏｗｎ　ｆｌｏｗで
溶離液を流出させる。次に、原料が浸透した後の樹脂層
上に、樹脂層最上面が乱れないように、カラム内壁をつ
たわらせてゆつ（りと溶離液を注ぎ入れるか、または緩
衝材として樹脂層最上面上にろ紙や脱脂綿またはグラス
ウールなどを敷き、その上に溶離液を注いでもよい。樹
脂層上へ溶離液を補給し、カラム下部からＤｏｗｎ　ｆ
ｌｏｗ例えば送液ポンプなどを用いて自動的に行なうこ
とも可能であるし、また手動で注ぎ入れることもできる
。 カラム中を通過する溶離液の温度ならびに樹脂層内の温
度は０℃以上であれば、目的とするＰｔＪＦＡまたはそ
のエステルの分離、精製を行なうことができるが、効果
的に分離、精製を行なうためには。 ２０℃以上であることが好ましく、温度が高いほど目的
とするＰＵＦＡまたはそのエステルの分離。 精製効果は高（なるが、溶離液の沸点以下で使用するこ
とが好ましい。しかし、溶離液を沸点以上の温度で使用
する場合や、流速をコントロールする目的でカラム内を
高圧にして溶離を行なうことも可能である。ただし、溶
離液と樹脂層内の温度が非極性吸着樹脂の耐熱温度以上
の場合には、この限りではない。 ″−−−睦カラム下部から脂肪酸またはそのエステルな
溶離して流出する溶離液は適当量ずつで分画し、それぞ
れ蒸留、濃縮してガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）や
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣｌなどによって
分析を行ない、目的とするＰＵＦＡまたはそのエステル
画分を得ることができる。 目的とするＰＵＦＡまたはそのエステルを得た後のカラ
ムは、溶離液に変わり、アセトン、トルエン、酢酸エチ
ルなどの溶媒を流して再生することができるが、カラム
中に残留した脂肪酸または脂肪酸エステルや、原料に含
まれていたその他の取分１例えばグリセリド、ステリン
などを最も効果的に流出させ、再生することができるア
セトンを使用するのが好ましい。 再生のために流す溶媒の量は、例えばアセトンでは、充
填樹脂容量の／、５倍からコ倍程度で。 それだけの量を流し終えたら、カラムからアセトンを排
出させ、その後Ｕｌ）ｆｌｏｗで溶離液を注入してカラ
ム中の気泡を取り除き、カラム上部から溶離液を注ぎ入
れ、　Ｄｏｗｎ　ｆｌｏｗで充填樹脂容量の７〜２倍の
溶離液を流してカラム中を溶離液と置き換えれば、再生
は終了である。 上記した本発明方法によるＰＵＦＡまたはＰＵＦＡエス
テルの分離精製では、熱や光、酸、塩基等による変性を
起こさせることな（、目的とするＰＵＦＡまたはＰＵＦ
Ａエステルを短時間に高濃度に濃縮することができる。 〔発明の効果〕 本発明によれば、ＰＵＦＡを含む脂肪酸混合物からの特
定のＰＵＦＡの分離精製、またはＰＵＦＡの低級アルキ
ルエステルを含む脂肪酸の低級アルキルエステル混合物
からの特定のＰＵＦＡの低級アルキルエステルの分離精
製を効果的に容易に行なうことができる。すなわち、本
発明によれば。 短時間に高回収率で、特定のＰＵＦＡまたはその低級、
アルキルエステルを、熱、醗、塩基等の影響による変性
を起こさせることな（分離精製し、しかも使用するカラ
ムは再生することによって分離精製の効果が低下するこ
とな（再使用が可能であるＯ 〔実施例〕 以下に本発明の実施例を示すが１本発明はこれにより制
限されるものではない０ なお、実施例中のＧＬＣ分析は、下記の条件で行ない１
面積百分率で含量を表示した。 ＧＬＣ分析条件 充填剤：液相　ＤＥＧＳ−８Ｔ（ガスクロ工業Ｃ株１製
〕ｔｏＯｉ。 担体　Ｕｎｉｐｏｒｔ　ＨＰ　（ガスクロ工業（株］製
〕乙Ｏ〜♂Ｏメツシュ カラム：３ｎφＸコｍ　ガラスカラム カラム温度：コ０００Ｃ 実施例　１ イワシ油脂、０９を５ノの三角フラスコに入れ。 これに７％水酸化ナトリウム・メタノール溶液ｌ！を加
え、窒素気流中＜１０℃で３０分間激しく攪拌後、−％
硫酸・メタノール溶液！ワｒ　ｍＡを添加して中和した
後、蒸留、濃縮してメタノールを留去した。濃縮物を９
０〜ｊθ℃の温水ｌ！ずつで一回洗浄した後、再び濃縮
してコ、ｌコ９のイワシ油脂肪酸メチルエステルを得た
。このもののガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）による
分析の結果。 イワシ？ｄ［Ｗ肪酸メチルエステルを槽底する脂肪酸メ
チルエステルは、コＱ種類程度あり、この中でエイコサ
ペンタエン酸メチルｃ以下、ＭＥＰという］はＩ？−乙
係、ト°コサヘキサエン酸メチル（′以下、ＭＴ）Ｉ−
Ｉという】は７．２％含まれていた。 また、クロロホルムを展開溶媒としたイワシ油脂肪酸メ
チルエステルの薄層クロマトグラフィーでは、ステリン
、エステル化されなかった脂肪酸などもわずかに含まれ
ていることが確認された。 次に、尿素−９をメタノール！！に添加し、ｊθ℃に加
熱し、攪拌、溶解したものに、上記のようにして得られ
たコ、／２印のイワシ油脂肪酸メチルエステルのうちの
７．０砂を加え、攪拌しなから液温を３θ℃まで下げ、
その後、庫内温度ｔ　’Ｃの冷蔵庫に７２時間静置し、
析出した尿素付加体の結晶をろ過し、ろ液を蒸留、濃縮
してメタノールを留去した。この濃縮物を２００ｍ１の
温水で２回洗浄し、再び蒸留、濃縮して＜ｔ０３９の尿
素非付加のイワシ油脂肪酸メチルエステルヲ得た。。Ｇ
ＬＣの分析の結果、このものはＭＥＰをグ３−２％。 ＭＤＨを７２．６％含んでいた。 ！０φ×！θＯＩｌｌのクロマトグラフィー用ガラスカ
ラムに三菱化成（株）製の非極性吸着樹脂ダイヤイオン
ＨＰ−コＯを高さ３ｊ−０酊まで充填した（　Ｌ／Ｄ＝
り］。 コ！℃でｎ−へキサンを飽和した２０％メタノール水を
３に調製し、これに５分間窒素ガスを吹き込み、溶解し
、これを溶離液とした。 この溶離液を上記のダイヤイオンＨＰ−２０を゛充填し
た！Ｏφ×ｊθｏ　ｉｎのカラムにＵｐ　ｆｌｏｗで通
液し、樹脂層最上面に溶離液が達してから通液を止めた
。そして樹脂層最上面が完全に露出するまで、カラム下
部からＤｏｗｎ　ｆｌｏｗで溶離液を流出させ、露出し
た樹脂層最上面に上記の４ｔｏｓｉＰの尿素非付加のイ
ワシ油脂肪酸メチルエステルのうチ４１９９−を負荷し
、このメチルエステルが樹脂層に完全に浸透し、樹脂層
最上面が完全に露出するまでＤｏｗｎ　ｆｌｏｗで溶離
液を流出させて止めた。この樹脂層最上面上にグラスウ
ールを１ｃｒｎの厚さに敷き、この上からポンプで連続
的に溶離液を注ぎながらＤｏｗｎ　ｆｌｏｗで毎分子Ｏ
ｍｌずつ溶離液を流出させ、ｌフラクション２ｊずつで
分割し、フラクション１−２２までを得た。 分割したフラクションは、それぞれ蒸留、濃縮して溶離
液を留去したのち、ＧＬＣにより分析を行なった。か（
してフラクションｉｔと７６からＭＥＰ？４　、ｊ係の
油状物／７，４ｔ２９を得た〇またフラクション１９と
２０からＭＤＨ／コ、１％の油状物／４ｔ、θＺＩＰを
得た０　　゛実施例　２ 夕０φ×１１００＝Ｏｔのクロマトグラフィー用ガラス
カラムに三菱化成（株）製の非極性吸着樹脂セパピーズ
ＳＰ−コＯりを高さ６００ｗａａまで充填した（Ｌ／Ｄ
＝／コ）０ ２ｊ℃でｎ−ヘキサンを飽和した／！係メタノールな溶
離液として用意し、この溶離液をカラム下部よりＵｐ　
ｆｌｏｗで通液し、樹脂層最上部忙溶離液が達してから
通液な止めた。そして樹脂層最上部が完全に露出するま
で、カラム下部からＤｏｗｎ　ｆで溶離液を流出させ、
露出した樹脂層最上部に実施例１で調製したイワシ油脂
肪僅メチルエステルｊｊ、３４ｔＰを負荷し、このメチ
ルエステルが樹脂層に完全に浸透し、樹脂層最上部が完
全に露出するまでＤｏｗｎ　ｆｌｏｗで溶離液を流出さ
せて止めた０ついでカラム最上部から溶離液を注ぎ、　
Ｄｏｗｎ　ｆ　ｌｏｗで毎分ｔｒｍｈずつ溶離液を流出
させｌフラクションｊ　、ｊＪずつでフラクションｌ〜
コ３まで分割した。 得られたフラクションは、それぞれ蒸留、濃縮３．０２
ノが得られ、またフラクション１９からＭＤＨ？　４ｔ
、ｚ係の油状物１．コロｉＰが得られた。 実施例　３ と同様のカラムクロマトグラフィー操作を行なった０ク
ロマトグラフイーの条件およびその結果を第１表に示す
０なおｉ＠１表中、Ｆｒ−Ｎｏ、はフラｌｏｗクション
・ナンバーを示ス。 実施例　４ 助宗タラ肝油５ｏｏｙを３１．の三ツロフラスコに入れ
、これに３０係水酸化ナトリウム水溶液ｔｏｏｍｔとメ
タノール／−ｊｌ、を加え、フラスコ中の空間部分を窒
素ガスで置換した後、フラスコ中に窒素ガスを導入しつ
つグ０℃で３時間攪拌してケン化した０ケン化反応物を
１０Ｊのガラス製容器に移し、これに７０％硫酸水コ、
ＪＪを加えて攪拌、靜置後、上層に浮上した助宗タラ肝
油脂肪酸を分液ロートで回収し、＜ｔｏ℃〜！０℃の温
ｙｊ＜　ｓ　ｏ　ｏ　ｔｎｔでグ回洗浄してｇｊ♂ｔの
助宗タラ肝油廟肪酸を得た。ＧＬＣ分析を行なうため、
このもの２００１１ＱをｊＯｍｔのナスフラスコに量り
採り。 １０ｈ硫酸−メタノール１ｏａｔを加えて１時間卯熱還
流し、メチルエステル化した後、冷却し１分液ロートに
移して、水コ０罰を加え、ｎ−ヘキサン／ＱｒＩＩｌず
つでコ回抽出した。抽出したｎ−ヘキサン溶液は水コｏ
ｒｎｔで３回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムコｔを加
えて乾燥させ、ＧＬＣ分析を行なった０ＧＬＣ分析の結
果、上記の助宗タラ肝油を構成する脂肪酸は２０種類は
どあり、ＰＵＦＡテハエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）
　がｔ　ｔ　、ｓ％。 ト°コサヘキサエン酸（ＤＭＡ）が６．ｔ％含まれてい
たＯ ｊノのガラス製反応容器にメタノール２Ｊと尿素♂θＯ
Ｐ！−入れ、ｊ！〜６０℃に加熱し、攪拌して尿素を完
全に溶解させた。この尿素のメタノール溶液に上記の助
宗タラ肝油脂肪酸＜１００？を添加し、攪拌しながら反
応液を室温まで冷却後。 さらに液温をｊ　’Ｃまで冷却し、５℃でｌ晩放置後ろ
過した０このろ液を減圧下で蒸留１濃縮してメタノール
を留去した後、濃縮物を３θθａｔの温水で２回洗浄し
、再び蒸留、濃縮して１４ｔ２．４ｔノの尿素非付加の
助宗タラ肝油脂肪酸を得たｏＧＬＣ分析を行なうため、
このもの２０θ９を量り採り。 上記と同様の方法でメチルエステル化を行ないＧＬＣ分
析を行なったところ、ＥＰＡが４１／−３％、ＤＨＡが
／ｊ、ｔ％含まれていた。 ｊ０φｘｉｏθθｎの保温筒付カラムに、三菱化底（株
）製の非極性吸着樹脂七ノ（ビーズＳＰ−コ０２を高さ
６１０１１１まで充填した０３／℃でｎ−へキサンを飽
和した２０％メタノール水を溶離液として用意したＯ 保温筒に３！℃の温水を循環させなから溶離液をカラム
下部よりＵｐｆｌｏｗで通液し、樹脂層最上部に溶離液
が達してから通液な止めたＯ樹脂層最上部が完全に露出
するまで、カラム下部からＤｏｗｎｆｌｏｗで溶離液を
流出させ、露出した樹脂層最上部に、上記尿素非付加の
助宗タラ肝油脂肪酸３０．０ｓＰを負荷し、この助宗タ
ラ肝油脂肪酸が樹脂層に完全に浸透し、樹脂層最上部が
完全に露出するまでＤｏｗｎ　ｆｌｏｗで溶離液を流出
させて止め、クロマトグラフィーを行なっている間、樹
脂層に光が当たらないようにカラムをアルミホイルで包
んで遮光した０ついでカラム最上部から溶離液を注ぎ入
れながらＤｏｗｎ　ｆｌｏｗで毎分子０ｔｎｌずつ溶離
液を流出させ、ｌフラクションにつき３！ずつでフラク
ション／−コＯまで分割した。 分割したフラクションは、それぞれ蒸留、濃縮して溶離
液を留去し、油状物を得た。ＧＬＣ分析を行なうため、
得られた油状物から、それぞれ２００ｍ９ずつ採取し、
上記と同様にしてメチルエステル化し、ＧＬＣにより分
析を行なった。か（してフラクション９と／θからＥＰ
Ａ９　＆　、ｔ％の油状物／、？が得られ、またフラク
ション１６からＤＨＡ／４，２係の油状物２．６ｇ−が
得られた０ 実施例　５ つきみ草油１０θｔにｔｏｍｂの／％水酸化カリウム・
エタノールを添加し、窒素雰囲気下３０℃で３θ分間激
しく攪拌後、−係硫酸エタノールで中和して濃縮した。 濃縮物をグ０〜！θ℃の温水ｊＯｒｌＬＢで２回洗浄し
、再び濃縮してｌθ３？のつきみ草油エチルエステルを
得たｏ　Ｇ　Ｌ　Ｃの分析の結果、オレイン酸エチル／
／、９０に、リノール酸エチル２０．３％、ｒ−リルイ
ン酸エチル９．／係、α−リルイン酸エチル０．５係を
含んでいた。このうち、ｒ−リノール酸エチルを目的〕
成分として分離精製を行なった。 ｊθφ×１０００１１１のクロマトグラフィー用ガラス
カラムに三菱化成Ｃ株）製の吸着樹脂ＨＰ−３０を高さ
ｊｌｏｍまで充填した０ ’Ｍ　温テｎ−へキサンを飽和した乙！％メタノール水
に窒素ガスを吹き込み、溶解させたものを溶離液として
、カラム下部よりＵｐｆｌｏｗで通液し。 樹脂層最上部に溶離液が達してから通液な止めた。 樹脂層最上部が完全に露出するまで、カラム下部からＤ
ｏｗｎ　ｆｌｏｗで溶離液を流出させ、露出した樹脂層
最上部処上記のようにして調製したつきみ草油エチルエ
ステル７０３ｇ−のうち／ｊ９−を負荷し。 このエチルエステルが樹脂層に完全に浸透し、樹脂層最
上部が完全に露出するまでＤｏｗｎ　ｆｌｏｗで溶離液
を流出させて止めた。ついでカラム最上部から溶離液を
注ぎ、　Ｄｏｗｎ　ｆｌｏｗで毎分５ｏｒｎｔずつ溶離
液を流出させ、／フラクション３！ずつでフラクション
ｌ〜ｌＯまで分割した。 ６番目のフラクションを蒸留、濃縮して溶離液を留去し
、油状物を得、ＧＬＣ分析を行なった。 カぐシてγ−リルイン酸エチルエステルタフ、２係の油
状物０．７１Ｐを得た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 炭素数が１８〜２４で、二重結合数が３〜６である長鎖
   高度不飽和脂肪酸を含有する脂肪酸混合物、または上記
   長鎖高度不飽和脂肪酸の低級アルキルエステルを含有す
   る脂肪酸の低級アルキルエステル混合物を、スチレンと
   ジビニルベンゼンの共重合物である非極性多孔性ポリマ
   ーを素材とする吸着樹脂を担体として充填したクロマト
   グラフイーのカラムに負荷し、水を１〜５０％含有する
   親水性極性溶媒、またはこの親水性極性溶媒を非極性溶
   媒で飽和させたものを溶離液として上記カラムに通液し
   、脂肪酸混合物から特定の長鎖高度不飽和脂肪酸を、ま
   たは脂肪酸の低級アルキルエステル混合物から特定の長
   鎖高度不飽和脂肪酸の低級アルキルエステルを溶離、分
   画することを特徴とする、長鎖高度不飽和脂肪酸または
   その低級アルキルエステルの分離精製方法。