JPS61282065A - 酵素の製造方法 - Google Patents
酵素の製造方法Info
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- JPS61282065A JPS61282065A JP12395685A JP12395685A JPS61282065A JP S61282065 A JPS61282065 A JP S61282065A JP 12395685 A JP12395685 A JP 12395685A JP 12395685 A JP12395685 A JP 12395685A JP S61282065 A JPS61282065 A JP S61282065A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、微生物の培養方法に関し、更に詳細には、グ
リシン誘導体、生理的不活性アミノ酸及びその誘導体及
びアミノ酸類縁物質及びその誘導体からなる群から選ば
れる少なくとも１種の化合物を培地に加えるか、あるい
は、これらの化合物とマンガン化合物を培地に加えて微
生物を培養し、微生物が生産する生理活性物質の生産量
を増加させ、特に該生理活性物質の菌体外への排出を促
進する方法に関する。
リシン誘導体、生理的不活性アミノ酸及びその誘導体及
びアミノ酸類縁物質及びその誘導体からなる群から選ば
れる少なくとも１種の化合物を培地に加えるか、あるい
は、これらの化合物とマンガン化合物を培地に加えて微
生物を培養し、微生物が生産する生理活性物質の生産量
を増加させ、特に該生理活性物質の菌体外への排出を促
進する方法に関する。
一般に、細菌１や酵母等の微生物を培養して、酵素等の
高分子生理活性物質を°製造する方法は周知である。こ
のような高分子生理活性物質は、微生物の菌体内で生産
され、通常は、菌体外ＶｃＦ＃出（分泌）されることな
く、はとんど菌体内に蓄積される。このため高分子生理
活性物質を取り出すためには、集菌した一体を超音波処
理等によシ破砕し１遠心分離等により目的物を分ｍ、ｍ
ｍする必要がある。このような機械的破砕操作は、時間
や労力の損失となるばかりでなく、生産物を変質させる
おそれもあシ、好ましくない。
高分子生理活性物質を°製造する方法は周知である。こ
のような高分子生理活性物質は、微生物の菌体内で生産
され、通常は、菌体外ＶｃＦ＃出（分泌）されることな
く、はとんど菌体内に蓄積される。このため高分子生理
活性物質を取り出すためには、集菌した一体を超音波処
理等によシ破砕し１遠心分離等により目的物を分ｍ、ｍ
ｍする必要がある。このような機械的破砕操作は、時間
や労力の損失となるばかりでなく、生産物を変質させる
おそれもあシ、好ましくない。
ところで菌体内に生産物が一定量蓄積されると、その生
産は当然停止する。しかし、これが菌体内Ｋｇ檀される
ことなく、菌体外に排出（分泌）されれば、その生産は
継続して行われるはずである。
産は当然停止する。しかし、これが菌体内Ｋｇ檀される
ことなく、菌体外に排出（分泌）されれば、その生産は
継続して行われるはずである。
このため、菌体内で生産された生産物を菌体外に排出（
分泌）させ、菌体内生産を継続させ、菌体外に著量の生
産物を蓄積させようとする試みがなされている。たとえ
ば、掘越らは、（ニシリナーゼ、中７ラナーゼ等の高分
子物質の菌体外生産に関与する遺伝情報を担うバチルス
属微生物の染色体ＤＮＡ断片を組み込んだプラスミドを
含傳する前記高分子物質の菌体外生産能を有するエシェ
リヒア属の微生物をＮａ塩又はに塩含有培地で培養して
、前記高分子物質を菌体外に分泌させることに成功して
いる（特願昭ｊ♂−３♂Ｏ♂７号及び同！？−、２ｊ、
、２Ｊ−０７号明細書参照）。
分泌）させ、菌体内生産を継続させ、菌体外に著量の生
産物を蓄積させようとする試みがなされている。たとえ
ば、掘越らは、（ニシリナーゼ、中７ラナーゼ等の高分
子物質の菌体外生産に関与する遺伝情報を担うバチルス
属微生物の染色体ＤＮＡ断片を組み込んだプラスミドを
含傳する前記高分子物質の菌体外生産能を有するエシェ
リヒア属の微生物をＮａ塩又はに塩含有培地で培養して
、前記高分子物質を菌体外に分泌させることに成功して
いる（特願昭ｊ♂−３♂Ｏ♂７号及び同！？−、２ｊ、
、２Ｊ−０７号明細書参照）。
本発明の目的は、微生物が生産する有用な生理活性物質
の生産量を増大させる方法を提供することである。さら
に本発明の目的は、微生物の菌体内で生産される有用な
生理活性物質を、菌体外に排出（分泌）させ、それによ
って培地中に著量の生産物を蓄積させる方法を提供する
ことである。
の生産量を増大させる方法を提供することである。さら
に本発明の目的は、微生物の菌体内で生産される有用な
生理活性物質を、菌体外に排出（分泌）させ、それによ
って培地中に著量の生産物を蓄積させる方法を提供する
ことである。
本発明の目的は、グ＋）−７７ｆｓ導体、生理的不活性
アミノ酸及びその誘導体及びアミノ＃類縁物質及びその
誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物
を培地に加えるか、あるいは、これらの化せ物とマンガ
ン化合物を培地に加えて微生物を培養することにより達
成される。
アミノ酸及びその誘導体及びアミノ＃類縁物質及びその
誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物
を培地に加えるか、あるいは、これらの化せ物とマンガ
ン化合物を培地に加えて微生物を培養することにより達
成される。
本発明に使用される微生物として特に好ましいものは、
細菌及び酵母である。
細菌及び酵母である。
細菌としては、たとえば、ダラム陽性菌として、バチル
ス属に：ｌＩする微生物が挙げられる。例えば、好アル
カリ性細菌であるバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ）ＡＡ
−夕Ｐ（ＡＴＣＣコ／ｊり／）（アルカリアミ２−ゼ生
産菌として分離された。アゲリカｖ ｆ ｘラル・バイ
オロジカル・ケミストリイ（Ａｇｒｌｃ。
ス属に：ｌＩする微生物が挙げられる。例えば、好アル
カリ性細菌であるバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ）ＡＡ
−夕Ｐ（ＡＴＣＣコ／ｊり／）（アルカリアミ２−ゼ生
産菌として分離された。アゲリカｖ ｆ ｘラル・バイ
オロジカル・ケミストリイ（Ａｇｒｌｃ。
Ｂｌｏｌ、 Ｃｈｅｍ、） Ｖａｔ、 ３ Ａ、／／
ｒ／り頁、／り７２年）、同パチルｘ（Ｂａｃｌ＋＋ｕ
ｓ ）ＡＣ−／、２ｊ（−ＦＥＲＭＢＰ−１乙り）（β
−ガククトシダーゼ生／ｊｔ菌、Ａｇｒｌｃ、 Ｂｌ
ｏｆ、 ＣＭｍ、 Ｖｏｌ、 ｌＡ３ 、♂５頁およ
び／３り２頁、／り７７年）、同バチルス（Ｂａｃｌｌ
ｌｕＢ ）＆、２．２／ （ＡＴＣＣ２／夕２２）、同
／４チルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ） ＆Ａ−’ＡＯ−２
（Ａ ＴＣＣ，２／ｊ″２．２）カ、又、バチルス・
ズブチリス・２−パーク（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔ
ｌｌｌｓ Ｍａｒｂｕｒｇ ） ／ ６ ｆＧＳＹ１０
コｌ、ＣＡＴ、ＣＣ３／３３り）が挙げられる。
ｒ／り頁、／り７２年）、同パチルｘ（Ｂａｃｌ＋＋ｕ
ｓ ）ＡＣ−／、２ｊ（−ＦＥＲＭＢＰ−１乙り）（β
−ガククトシダーゼ生／ｊｔ菌、Ａｇｒｌｃ、 Ｂｌ
ｏｆ、 ＣＭｍ、 Ｖｏｌ、 ｌＡ３ 、♂５頁およ
び／３り２頁、／り７７年）、同バチルス（Ｂａｃｌｌ
ｌｕＢ ）＆、２．２／ （ＡＴＣＣ２／夕２２）、同
／４チルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ） ＆Ａ−’ＡＯ−２
（Ａ ＴＣＣ，２／ｊ″２．２）カ、又、バチルス・
ズブチリス・２−パーク（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔ
ｌｌｌｓ Ｍａｒｂｕｒｇ ） ／ ６ ｆＧＳＹ１０
コｌ、ＣＡＴ、ＣＣ３／３３り）が挙げられる。
グラム陰性菌として、アエロモナス・リクエファシエン
ス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ口ｑｕｅｆａｃｌｅｎｓ ）
（ｌ Ａ Ｍ／、２３３７）、シェードモナス・アエル
ギノーデ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｌｎ
ｏｓａ ） （ｌ Ａ Ｍ ／２７ｊ）、アグロバク
テリウム・ラジオバクター （Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｌｕｍ ｒａｄｌｏｂａｃｔ
ｏｒ ） （ｌ Ａ Ｍ ／２０３１）が挙げられる。
ス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ口ｑｕｅｆａｃｌｅｎｓ ）
（ｌ Ａ Ｍ／、２３３７）、シェードモナス・アエル
ギノーデ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｌｎ
ｏｓａ ） （ｌ Ａ Ｍ ／２７ｊ）、アグロバク
テリウム・ラジオバクター （Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｌｕｍ ｒａｄｌｏｂａｃｔ
ｏｒ ） （ｌ Ａ Ｍ ／２０３１）が挙げられる。
又、腸内細菌としては、例えば、クレブシエラ・二！
−％ ニアｚ（Ｋｌｅｂｓｌｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎ
ｌａｅ ） ＣＩ Ａ Ｍ１０１ｐ３）、エンテロ
バクタ−・アエロモナス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ
ａｅｒｏｇｅｎｅｓ ）（ｌ Ａ Ｍ ／ ７？！ ）
−１セクチア・マルセツセ／ス（Ｓｅｒｒａｔｌａｍ
ａｒｃｅｓｃｅｎｓ ） （ＨＡ Ｍ ／、２／４’
、２ ） 、ｘルヒ＝ア・ヘルピコーラ（Ｅｒｗｌｎ
ｌａ ｈｅｒｂｌｃｏｌａ ）（ｌ ＡＭ ／ｊｌｓ
２） ズブチリス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕ
ｌｇａｒｌｓ ） （ｌ Ａ Ｍ １０２！； ） 、
が挙げられ、又、遺伝子工学によく用いられているニジ
エリチア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｌａ ｃｏ＋ｉ
） ＨＢ１０／Ｃモレキュラー・クローニング・ア・
ラゲクトリー・マニユアル： Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｃ
ｌｏｎｌｎｇ ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ
ＣＳ ＨＬａｂ、 ／り♂、２゜９ ｊ ０１Ａ 、
１Ｌｅｕ 、 Ｐｒｏ 、 Ｔｈ ｌａｍｌｎｅ
要求性）も用いることができる。
−％ ニアｚ（Ｋｌｅｂｓｌｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎ
ｌａｅ ） ＣＩ Ａ Ｍ１０１ｐ３）、エンテロ
バクタ−・アエロモナス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ
ａｅｒｏｇｅｎｅｓ ）（ｌ Ａ Ｍ ／ ７？！ ）
−１セクチア・マルセツセ／ス（Ｓｅｒｒａｔｌａｍ
ａｒｃｅｓｃｅｎｓ ） （ＨＡ Ｍ ／、２／４’
、２ ） 、ｘルヒ＝ア・ヘルピコーラ（Ｅｒｗｌｎ
ｌａ ｈｅｒｂｌｃｏｌａ ）（ｌ ＡＭ ／ｊｌｓ
２） ズブチリス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕ
ｌｇａｒｌｓ ） （ｌ Ａ Ｍ １０２！； ） 、
が挙げられ、又、遺伝子工学によく用いられているニジ
エリチア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｌａ ｃｏ＋ｉ
） ＨＢ１０／Ｃモレキュラー・クローニング・ア・
ラゲクトリー・マニユアル： Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｃ
ｌｏｎｌｎｇ ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ
ＣＳ ＨＬａｂ、 ／り♂、２゜９ ｊ ０１Ａ 、
１Ｌｅｕ 、 Ｐｒｏ 、 Ｔｈ ｌａｍｌｎｅ
要求性）も用いることができる。
酵母としては、ノクン酵母が挙げられる。
本発明に使用することができる微生物は、と記具体例に
限定されることなく、前記グリシン誘導体生理的不活性
アミノ酸及びその誘導体及び７２ノ酸類縁物質及びその
誘導体からなる群から遺ばれる少なくとも１種の化合物
を培地に加えるか、あるいは、これらの化合物とマンガ
ン化合物を加えた培地中で培養することにより、一体生
産物の総生産量を増加し、菌体生産物を菌体外に排出し
、著量に蓄積するものであれば、既存の培養菌株、自然
界から新たに分離された菌株、あるいはこれらの菌株の
変異株、さらに、遺伝子組換や細胞融合によって新たに
酵素等の有用生理活性物質生産能力を獲得するに至った
微生物など、いずれも使用することができる。
限定されることなく、前記グリシン誘導体生理的不活性
アミノ酸及びその誘導体及び７２ノ酸類縁物質及びその
誘導体からなる群から遺ばれる少なくとも１種の化合物
を培地に加えるか、あるいは、これらの化合物とマンガ
ン化合物を加えた培地中で培養することにより、一体生
産物の総生産量を増加し、菌体生産物を菌体外に排出し
、著量に蓄積するものであれば、既存の培養菌株、自然
界から新たに分離された菌株、あるいはこれらの菌株の
変異株、さらに、遺伝子組換や細胞融合によって新たに
酵素等の有用生理活性物質生産能力を獲得するに至った
微生物など、いずれも使用することができる。
本発明に使用されるグリツノ誘導体、生理的不活性アミ
ノ酸及びその誘導体及びアミノ酸類縁物質及びその誘導
体としては、例えば、グリシルグリシン、グリシルグリ
シルグリタ／、グリシンメチルエステル、グリシンメチ
ルエステル、ＤＬ−１ｘＡ５４ｙ＠、ＤＬ−７う＝ｙ、
ＯＬ−リゾ／。
ノ酸及びその誘導体及びアミノ酸類縁物質及びその誘導
体としては、例えば、グリシルグリシン、グリシルグリ
シルグリタ／、グリシンメチルエステル、グリシンメチ
ルエステル、ＤＬ−１ｘＡ５４ｙ＠、ＤＬ−７う＝ｙ、
ＯＬ−リゾ／。
Ｑ −スＶオニン、ＯＬ−メチオニン、クリシル−し−
アラニン、ＤＬ−α−アミノノルｉル酪酸。
アラニン、ＤＬ−α−アミノノルｉル酪酸。
γ−アミノノルマル酪酸、ＯＬ−ノルノ櫂リン。
β−アラニン、 Ｄ−トリフ’ドアアンメチルエステル
、ＤＬ−アラニルグリノア、Ｄ−メチオニンメチルエス
テル、ＯＬ−メチオニンメチルエステル。
、ＤＬ−アラニルグリノア、Ｄ−メチオニンメチルエス
テル、ＯＬ−メチオニンメチルエステル。
β−アラニンペンノルエステル、ＤＬ−α−アミノノル
マル酪酸メチルエステル、γ−アミノノルマルグチリル
ーし一ヒスチゾン、ＤＬ−ノルａイン／メチルエステル
、−４ラアミノ安息香酸ブチルエステル等が挙げられる
。
マル酪酸メチルエステル、γ−アミノノルマルグチリル
ーし一ヒスチゾン、ＤＬ−ノルａイン／メチルエステル
、−４ラアミノ安息香酸ブチルエステル等が挙げられる
。
本発明に使用されるマンガン化合物としては、九とえば
、硫薯マ／ヂン、塩化マンガン、硝酸マンゴ／、炭酸マ
ンガン、ケイ酸マンガン、ピロリン醗マンガン、リン酸
水素マンが７等の無機酸塩、酢醜マンガン、酒石酸マン
ガン、シェラ嘴マンプン、クエ／咳マンガン等の有機＃
Ｉ塩などが挙げられる。
、硫薯マ／ヂン、塩化マンガン、硝酸マンゴ／、炭酸マ
ンガン、ケイ酸マンガン、ピロリン醗マンガン、リン酸
水素マンが７等の無機酸塩、酢醜マンガン、酒石酸マン
ガン、シェラ嘴マンプン、クエ／咳マンガン等の有機＃
Ｉ塩などが挙げられる。
本発明において、グリシン誘導体、生理的不活性アミノ
酸及びその誘導体及びアミノ酸類縁物質及びその誘導体
の添加量は、培地に対して０． ／〜１０重量％、好ま
しくは、０．２〜７０重ｉチが適当である。これより少
いと目的とする効果の発現が不十分であり、又、これよ
り多いと逆に微生物の生育阻害が顕著になり、好ｆＬ＜
ない。
酸及びその誘導体及びアミノ酸類縁物質及びその誘導体
の添加量は、培地に対して０． ／〜１０重量％、好ま
しくは、０．２〜７０重ｉチが適当である。これより少
いと目的とする効果の発現が不十分であり、又、これよ
り多いと逆に微生物の生育阻害が顕著になり、好ｆＬ＜
ない。
一方、マンガン化合物の添加量は、培地に対して０．！
μＭ以上であればよい。これよシルないと目的とする効
果の発現が不十分である。なおマンガン化合物の毒性は
低いため、かなりの濃度（例えば１００ｍＭ）ＶＣ増加
させても生育阻害は認められない。
μＭ以上であればよい。これよシルないと目的とする効
果の発現が不十分である。なおマンガン化合物の毒性は
低いため、かなりの濃度（例えば１００ｍＭ）ＶＣ増加
させても生育阻害は認められない。
本発明に使用する微生物の培養培地としては、通常、微
生物の培養Ｋｆ’！！用される培地に、グリシン誘導体
、生理的不活性アミノ酸及びその誘導体及びアミノ酸類
縁物質及びその誘導体あるいは、これらにマンがン化合
物を添加したものが使用される。
生物の培養Ｋｆ’！！用される培地に、グリシン誘導体
、生理的不活性アミノ酸及びその誘導体及びアミノ酸類
縁物質及びその誘導体あるいは、これらにマンがン化合
物を添加したものが使用される。
すなわち、炭素源、窒素源、無機物、その池栄養物を程
良く含有する培地であれば、合成培地、天然培地のいず
れもが使用できる。炭素源、窒素源は、使用菌が利用可
能なものであればいずれの種類を用いてもよい。無機塩
、ビタミン類等についても、微生物の培地に通常使用さ
れるもので使用することができる。
良く含有する培地であれば、合成培地、天然培地のいず
れもが使用できる。炭素源、窒素源は、使用菌が利用可
能なものであればいずれの種類を用いてもよい。無機塩
、ビタミン類等についても、微生物の培地に通常使用さ
れるもので使用することができる。
以下、実施例を示し、本発明をさらに詳細に説明するが
、本発明はこれらの実施例の記載に限定されるものでは
ない。
、本発明はこれらの実施例の記載に限定されるものでは
ない。
実施例 ／
好アルカリ性バチルスＡＣ−７２４−（ＦＥＲＭＢＰ−
≠乙り）を使用し・β−がラクトシダーゼ活性について
調べた。
≠乙り）を使用し・β−がラクトシダーゼ活性について
調べた。
９００−の井戸水に、乳糖／タｇ１ポリベグトンｊｇ１
イーストエキス（ディフコ社製）ｊｇ。
イーストエキス（ディフコ社製）ｊｇ。
リン酸二カリウム７ｇ１硫酸マグネクウム・７水和物ｏ
、、２ｇおよび所定量のグリシン誘導体等及びマンガン
化合物を加えた培地、および炭酸ナトリクム水溶液Ｃｌ
００ｇ／ｌ）を別々に調製し、殺菌した。植菌時／／１
０量の炭酸ナトリウムｍ液を前記培地に無菌的に加えて
、種培地および本培地とする。
、、２ｇおよび所定量のグリシン誘導体等及びマンガン
化合物を加えた培地、および炭酸ナトリクム水溶液Ｃｌ
００ｇ／ｌ）を別々に調製し、殺菌した。植菌時／／１
０量の炭酸ナトリウムｍ液を前記培地に無菌的に加えて
、種培地および本培地とする。
３００ｇＬｔの≠個ひだ付三角フラスコに培地ｊＯ−を
入れ、これに、あらかじめ７晩培養したちの０、 Ｊ
ｇＬｔを植菌して、３７℃で所定時間、振とう培養（ロ
ータリーシェーカー、２０ＯＲＰＭ）Ｉ、、ＪｇＬｔず
つ無菌的にサンブリングする。サングルの一部をそのま
！！１０〜３０倍に希釈して全酵氷活性を測定する。サ
ングルの残部は遠心分離し、上澄液を５〜３０倍して、
培地中に排出（分泌）された酵素の活性を測定する。
入れ、これに、あらかじめ７晩培養したちの０、 Ｊ
ｇＬｔを植菌して、３７℃で所定時間、振とう培養（ロ
ータリーシェーカー、２０ＯＲＰＭ）Ｉ、、ＪｇＬｔず
つ無菌的にサンブリングする。サングルの一部をそのま
！！１０〜３０倍に希釈して全酵氷活性を測定する。サ
ングルの残部は遠心分離し、上澄液を５〜３０倍して、
培地中に排出（分泌）された酵素の活性を測定する。
酵素活性は、次のように測定する。まず、〇−二）ａフ
ェニルβ−Ｄ−がラクトシト−２ｍＭｓ ｐ’Ｚｊのリ
ン酸緩衝液１Ｉｔ（７ｍＭ ｓ酵素液０．０ ｊ 〜０
、 ／−を含む総量０．５艷の液に、基質を加えて反応
を開始し、恒温槽中、≠θ℃、１０分間往復振とう・後
、７Ｍ炭酸ナトリウム０． ／−を加えて反応を停止す
る。これに蒸留水３ｇＬｔを加えて希釈攪拌し、≠２０
ｎｍの吸収を測定し、あらかじめ作成しておいた標準
曲線から、酵素活性を求める。／分子１４に／マイクロ
モルの０−ニトロフェノールを生産する酵素量を／単位
とする。
ェニルβ−Ｄ−がラクトシト−２ｍＭｓ ｐ’Ｚｊのリ
ン酸緩衝液１Ｉｔ（７ｍＭ ｓ酵素液０．０ ｊ 〜０
、 ／−を含む総量０．５艷の液に、基質を加えて反応
を開始し、恒温槽中、≠θ℃、１０分間往復振とう・後
、７Ｍ炭酸ナトリウム０． ／−を加えて反応を停止す
る。これに蒸留水３ｇＬｔを加えて希釈攪拌し、≠２０
ｎｍの吸収を測定し、あらかじめ作成しておいた標準
曲線から、酵素活性を求める。／分子１４に／マイクロ
モルの０−ニトロフェノールを生産する酵素量を／単位
とする。
この結果を第１表に示す。
実施例 コ
エシェリヒア・コリＨ８１０１株を使用し、β−プクク
トシダーゼ活性を測定した。培地は、実施例／で用いた
培地より炭酸ナトリウムを除いたものを用い、本培養は
、！Ｏ−の培地で、３００ｔの≠個ひだ付三角フラスコ
を使用した。活性測定法は、実施例／と同じである。各
種グリシン誘導体等を添加した場合の結果を第２表に示
す。
トシダーゼ活性を測定した。培地は、実施例／で用いた
培地より炭酸ナトリウムを除いたものを用い、本培養は
、！Ｏ−の培地で、３００ｔの≠個ひだ付三角フラスコ
を使用した。活性測定法は、実施例／と同じである。各
種グリシン誘導体等を添加した場合の結果を第２表に示
す。
実施例 ３
アエロモナス・リクエ７アシエンス（Ａｅｒｏｍｏｎａ
ｓｌｌｑｕｅｆａｃｌｅｎｓ ） （Ｉ Ａ Ｍ ／
、２３３７ ）を用いて、グルタミ／オ中ゾロ酢酸アミ
ノ転移酵素（ＧＯＴ）活性を測定した。
ｓｌｌｑｕｅｆａｃｌｅｎｓ ） （Ｉ Ａ Ｍ ／
、２３３７ ）を用いて、グルタミ／オ中ゾロ酢酸アミ
ノ転移酵素（ＧＯＴ）活性を測定した。
漂準培地としてｌｌ中に次の成分を含むものを使用した
。グルコース又は可溶性でんぷん又は乳ＩＩ ／ ｔ、
８ 、ポリベグトン５ｇ１イースト・エキスタｇ１
リン酸二カリウム／、 Ｏｇ 、硫酸マグネシラＡ ・
７ Ｈ２Ｏ０，−？ ｇ ｓ硫ｍ−’ンがン−ｔ１．〜
Ｊ’Ｈ２゜Ｏ，０，２ｇｔ用いた。エルレンマイヤーフ
ラスコに、前記培地ｊＯ−を加え、前培養液００ｊ−を
植菌し、３０〜３２℃で回転振とう培養（、！（７０Ｒ
ＰＭ）を行った（ｖＪ発ＰＨ７，／）。ＧＯＴ活性は、
和光純薬工業（株）の測定試薬を用いた。
。グルコース又は可溶性でんぷん又は乳ＩＩ ／ ｔ、
８ 、ポリベグトン５ｇ１イースト・エキスタｇ１
リン酸二カリウム／、 Ｏｇ 、硫酸マグネシラＡ ・
７ Ｈ２Ｏ０，−？ ｇ ｓ硫ｍ−’ンがン−ｔ１．〜
Ｊ’Ｈ２゜Ｏ，０，２ｇｔ用いた。エルレンマイヤーフ
ラスコに、前記培地ｊＯ−を加え、前培養液００ｊ−を
植菌し、３０〜３２℃で回転振とう培養（、！（７０Ｒ
ＰＭ）を行った（ｖＪ発ＰＨ７，／）。ＧＯＴ活性は、
和光純薬工業（株）の測定試薬を用いた。
すなわち、ＧＯＴ測定は、０．２−の基質液（ｔ／Ｌｍ
Ｍα−ケトゲルタール酸、２００ｍＭのＬ−アスｌ々２
ギン酸、０．７Ｍのリン酸緩衝液を含む（ｐＨ７：ｌ／
Ｌ））と０．０！−の酵素液（培養後の遠心上澄液）を
≠Ｏ℃、７５分又は３０分反応させ、０．７−の発色液
（♂ｍＭの２．≠−ジニトロフエニＶとドラジン、ｊ％
酢酸、Ｌ？ｊｑＩｂツメチルホルムアミドを含む）を加
えて４ｔθ℃、１０分発色させ、０、４ｔａ！！の０．
Ｊ″Ｎ −ＮａＯＨを加え、気に、ｌＡ０℃、７０分
後に：タ、２０ｎｍの吸収を測定し喪。／分間Ｖｃ／μ
モルのビリピノ酸を生じる酵素量を／単位とじた。
Ｍα−ケトゲルタール酸、２００ｍＭのＬ−アスｌ々２
ギン酸、０．７Ｍのリン酸緩衝液を含む（ｐＨ７：ｌ／
Ｌ））と０．０！−の酵素液（培養後の遠心上澄液）を
≠Ｏ℃、７５分又は３０分反応させ、０．７−の発色液
（♂ｍＭの２．≠−ジニトロフエニＶとドラジン、ｊ％
酢酸、Ｌ？ｊｑＩｂツメチルホルムアミドを含む）を加
えて４ｔθ℃、１０分発色させ、０、４ｔａ！！の０．
Ｊ″Ｎ −ＮａＯＨを加え、気に、ｌＡ０℃、７０分
後に：タ、２０ｎｍの吸収を測定し喪。／分間Ｖｃ／μ
モルのビリピノ酸を生じる酵素量を／単位とじた。
種々のグリシン誘導体等と加えた場合の結果を、〔発明
の効果〕 本発明に従い、グリシン誘導体、生理的不活性アｔノ酸
及びその誘導体及びアミノｆ！！１類縁物質及びその誘
導体からなる群から選ばれる化合物か、あるいは、これ
らとマンがン化合物を培地ＫｆＡ加して微生物を培養す
ることによシ、微生物が生産する＃素などの宵月な生理
活性物質の全生産量（菌体内と菌体外の総和）を大巾（
増大させ、しかも、菌体外に排出される生産物質の比率
を著しく回とすることができる。
の効果〕 本発明に従い、グリシン誘導体、生理的不活性アｔノ酸
及びその誘導体及びアミノｆ！！１類縁物質及びその誘
導体からなる群から選ばれる化合物か、あるいは、これ
らとマンがン化合物を培地ＫｆＡ加して微生物を培養す
ることによシ、微生物が生産する＃素などの宵月な生理
活性物質の全生産量（菌体内と菌体外の総和）を大巾（
増大させ、しかも、菌体外に排出される生産物質の比率
を著しく回とすることができる。
Claims (2)
- （１）グリシン誘導体、生理的不活性アミノ酸及びその
誘導体及びアミノ酸類縁物質及びその誘導体からなる群
から選ばれる少なくとも１種の化合物を培地に加えて微
生物を培養することを特徴とする微生物の培養方法。 - （２）グリシン誘導体、生理的不活性アミノ酸及びその
誘導体及びアミノ酸類縁物質及びその一導体からなる群
から選ばれる少なくとも１種の化合物とマンガン化合物
を培地に加えて微生物を培養することを特徴とする微生
物の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60123956A JP2572567B2 (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | 酵素の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60123956A JP2572567B2 (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | 酵素の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61282065A true JPS61282065A (ja) | 1986-12-12 |
| JP2572567B2 JP2572567B2 (ja) | 1997-01-16 |
Family
ID=14873504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60123956A Expired - Lifetime JP2572567B2 (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | 酵素の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2572567B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2611743A1 (fr) * | 1986-02-04 | 1988-09-09 | Ajinomoto Kk | Procede pour la production de l-aminoacides ou d'acide 5'-inosinique par fermentation |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5048190A (ja) * | 1973-07-16 | 1975-04-30 | ||
| JPS5699351A (en) * | 1980-01-09 | 1981-08-10 | Ricoh Co Ltd | Electrophotographic apparatus suspending method |
| JPS5816691A (ja) * | 1981-07-23 | 1983-01-31 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Ｌ−リジンの製造法 |
| JPS5871892A (ja) * | 1981-10-20 | 1983-04-28 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Ｎ−アセチル−ｌ−メチオニンの製造法 |
| JPS58216691A (ja) * | 1982-06-10 | 1983-12-16 | Denki Kagaku Kogyo Kk | Ｌ−スレオニンの取得法 |
| JPS59120093A (ja) * | 1982-12-27 | 1984-07-11 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
-
1985
- 1985-06-07 JP JP60123956A patent/JP2572567B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5048190A (ja) * | 1973-07-16 | 1975-04-30 | ||
| JPS5699351A (en) * | 1980-01-09 | 1981-08-10 | Ricoh Co Ltd | Electrophotographic apparatus suspending method |
| JPS5816691A (ja) * | 1981-07-23 | 1983-01-31 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Ｌ−リジンの製造法 |
| JPS5871892A (ja) * | 1981-10-20 | 1983-04-28 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Ｎ−アセチル−ｌ−メチオニンの製造法 |
| JPS58216691A (ja) * | 1982-06-10 | 1983-12-16 | Denki Kagaku Kogyo Kk | Ｌ−スレオニンの取得法 |
| JPS59120093A (ja) * | 1982-12-27 | 1984-07-11 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2611743A1 (fr) * | 1986-02-04 | 1988-09-09 | Ajinomoto Kk | Procede pour la production de l-aminoacides ou d'acide 5'-inosinique par fermentation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2572567B2 (ja) | 1997-01-16 |
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