JPS61277062A - 免疫分析方法およびそれに用いる試薬 - Google Patents
免疫分析方法およびそれに用いる試薬Info
- Publication number
- JPS61277062A JPS61277062A JP11922985A JP11922985A JPS61277062A JP S61277062 A JPS61277062 A JP S61277062A JP 11922985 A JP11922985 A JP 11922985A JP 11922985 A JP11922985 A JP 11922985A JP S61277062 A JPS61277062 A JP S61277062A
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- JP
- Japan
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- substance
- microcapsule
- antibody
- antigen
- reaction
- Prior art date
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、免疫分析方法およびそれに用いる試薬に係り
、特に抗原抗体反応を利用してマイクロカプセルを損傷
し反応液を測光する免疫分析方法およびそれに用いる試
薬に関する。
、特に抗原抗体反応を利用してマイクロカプセルを損傷
し反応液を測光する免疫分析方法およびそれに用いる試
薬に関する。
従来、マイクロカプセルを用いた分析法では、表面に抗
原あるいは抗体の結合したマイクロカプセルと、試料中
の抗体あるいは抗原を混合し、生じた抗原抗体反応によ
り活性化された補体の膜溶解作用によるマイクロカプセ
ルの破壊により流出した物質量から試料中の目的物質を
定量している。
原あるいは抗体の結合したマイクロカプセルと、試料中
の抗体あるいは抗原を混合し、生じた抗原抗体反応によ
り活性化された補体の膜溶解作用によるマイクロカプセ
ルの破壊により流出した物質量から試料中の目的物質を
定量している。
膜の溶解作用に用いる補体は、十数個の成分からなる蛋
白質の複合体で、化学的に完全に明らかになっていない
。現在市阪品となっている補体は血清ベースで供給され
ているため高価なものである。
白質の複合体で、化学的に完全に明らかになっていない
。現在市阪品となっている補体は血清ベースで供給され
ているため高価なものである。
精製もされていないので、不純物も含まれロット差があ
る。また補体は蛋白質であるため常温では保存できない
。この様な補体で試薬を調製した場合ロット差が生じ品
質の安定したものが得難い。
る。また補体は蛋白質であるため常温では保存できない
。この様な補体で試薬を調製した場合ロット差が生じ品
質の安定したものが得難い。
本発明の目的は、再現性の優れた測定結果が得られる免
疫分析方法を提供することにあり、品質が一定しており
保存容易な免疫分析試薬を提供することにある。
疫分析方法を提供することにあり、品質が一定しており
保存容易な免疫分析試薬を提供することにある。
第１の発明は、表面に抗原又は抗体を結合したマイクロ
カプセル内に被検液中に流出すると光学的変化をもたら
す物質を封入しておき、そのマイクロカプセルと二価以
上の金属イオンを上記被検液と共に共存せしめ、抗原抗
体反応にともなってマイクロカプセルを損傷せしめ１反
応液を測光し２て抗原又は抗体を測定することを特徴と
する免疫分析方法である。
カプセル内に被検液中に流出すると光学的変化をもたら
す物質を封入しておき、そのマイクロカプセルと二価以
上の金属イオンを上記被検液と共に共存せしめ、抗原抗
体反応にともなってマイクロカプセルを損傷せしめ１反
応液を測光し２て抗原又は抗体を測定することを特徴と
する免疫分析方法である。
第２の発明は、被検液中に流出すると光学的変化をもた
らし得る物質を封入しており表面に抗原又は抗体を結合
したマイクロカプセルと、二価以上の金属イオンを生じ
得る金属塩又は二価以上の金属イオンを含む免疫分析用
試薬である。
らし得る物質を封入しており表面に抗原又は抗体を結合
したマイクロカプセルと、二価以上の金属イオンを生じ
得る金属塩又は二価以上の金属イオンを含む免疫分析用
試薬である。
マイクロカプセル内に封入された物質は、それ自身が特
定の光学的特性を有する物質であったり、特定の光学的
特性を有する物質の前駆体であったり、又は他の物質を
光学的特性を生ずる物質に変換する物質である。免疫用
試薬は、マイクロカプセルと金属塩の固体混合物でもよ
く、あるいは金属塩を溶解した溶液にマイクロカプセル
を分散させたものであってもよい。
定の光学的特性を有する物質であったり、特定の光学的
特性を有する物質の前駆体であったり、又は他の物質を
光学的特性を生ずる物質に変換する物質である。免疫用
試薬は、マイクロカプセルと金属塩の固体混合物でもよ
く、あるいは金属塩を溶解した溶液にマイクロカプセル
を分散させたものであってもよい。
二価以上の金属イオンとしては、例えばマグネシウムイ
オンやマンガンイオンやカルシウムイオンが好適に用い
られるが、これら以外の二価の金属イオンあるいは三価
の金属イオンも用い得る。
オンやマンガンイオンやカルシウムイオンが好適に用い
られるが、これら以外の二価の金属イオンあるいは三価
の金属イオンも用い得る。
反応時における金属イオンの濃度は、３ｍＭ〜２０ｍＭ
が適当であるが、マイクロカプセルの種類あるいは金属
イオンの種類に応じて適正な濃度が選択される。
が適当であるが、マイクロカプセルの種類あるいは金属
イオンの種類に応じて適正な濃度が選択される。
本発明者らは、膜の表面に抗原あるいは抗体を結合した
マイクロカプセルと試料中の抗体あるいは抗原が反応し
た時、つまり抗原抗体反応した時、例えば二価の金属イ
オンが抗原抗体反応に特異的に作用して、マイクロカプ
セルを損傷せしめるという現象を見いだしたことに基づ
いて本発明を生み出した。二価以上の金属イオンは従来
の補体にとって代わるものである。
マイクロカプセルと試料中の抗体あるいは抗原が反応し
た時、つまり抗原抗体反応した時、例えば二価の金属イ
オンが抗原抗体反応に特異的に作用して、マイクロカプ
セルを損傷せしめるという現象を見いだしたことに基づ
いて本発明を生み出した。二価以上の金属イオンは従来
の補体にとって代わるものである。
本発明の望ましい実施例では、二価の金属イオンにより
膜溶解作用を受けるマイクロカプセル膜に抗原または抗
体を結合するマイクロカプセルと二価の金属イオンとを
少なくとも含有する試薬を用いる。抗原または抗体と抗
原抗体反応を生ずる対応する抗体または抗原を有する試
料とを混合し、生ずる抗原抗体反応によりうながされた
二価の金属イオンの膜溶解作用によるマイクロカプセル
の破壊によりマイクロカプセル内容物を流出もしくは放
出させる。生じた反応液を未反応のマイクロカプセルを
含有した状態で測光する事により、試料中の抗原又は抗
体を定量する。測光は、吸光度測定、けい光測定９発光
測定などによって実行される。試薬中のマイクロカプセ
ル外部に、特定の光学特性の有する物質の前駆体が含有
され、マイクロカプセル内には、前駆体を光学特性のあ
る物質に何段階かの反応の後に変換せしめる成分を封入
することもできる。また、試薬中のマイクロカプセル内
にアポ酵素を含有させ、マイクロカプセル外に補酵素を
含有させることもできる。マイクロカプセル内にはそれ
自体が酵素活性を有する酵素あるいはキレート剤を含有
させることもできる。
膜溶解作用を受けるマイクロカプセル膜に抗原または抗
体を結合するマイクロカプセルと二価の金属イオンとを
少なくとも含有する試薬を用いる。抗原または抗体と抗
原抗体反応を生ずる対応する抗体または抗原を有する試
料とを混合し、生ずる抗原抗体反応によりうながされた
二価の金属イオンの膜溶解作用によるマイクロカプセル
の破壊によりマイクロカプセル内容物を流出もしくは放
出させる。生じた反応液を未反応のマイクロカプセルを
含有した状態で測光する事により、試料中の抗原又は抗
体を定量する。測光は、吸光度測定、けい光測定９発光
測定などによって実行される。試薬中のマイクロカプセ
ル外部に、特定の光学特性の有する物質の前駆体が含有
され、マイクロカプセル内には、前駆体を光学特性のあ
る物質に何段階かの反応の後に変換せしめる成分を封入
することもできる。また、試薬中のマイクロカプセル内
にアポ酵素を含有させ、マイクロカプセル外に補酵素を
含有させることもできる。マイクロカプセル内にはそれ
自体が酵素活性を有する酵素あるいはキレート剤を含有
させることもできる。
（実験例１）
マイクロカプセルとして羊赤血球を用い、マイクロカプ
セル内包物としてけい光を発光し得るエオシンを用いた
。マイクロカプセルの表面には、常法によってあらかじ
め抗Ｔ４抗体を結合した。
セル内包物としてけい光を発光し得るエオシンを用いた
。マイクロカプセルの表面には、常法によってあらかじ
め抗Ｔ４抗体を結合した。
マイクロカプセルを分散させており、濃度５００ｍＭと
なるようにマグネシウムイオンを含む試薬液をあらかじ
め塩化マグネシウムを溶解して調製しておいた。
なるようにマグネシウムイオンを含む試薬液をあらかじ
め塩化マグネシウムを溶解して調製しておいた。
自動分析計の反応セルにＴ４を含む試料を１０μΩ分注
し、次いで反応セルを試薬供給位置まで移送し、そこで
上述の試薬液を２０μΩ添加するとともに、５０ ｍ
Ｍ ＫＨ，ＰＯ，緩衝液（ｐ ｈ ７．４）を９７０
μ２加えた。この反応セル列を順次移送しながら２０分
間インキュベートした。けい光光度計の測光位置に到達
した反応セルに波長５２２ｎｍの励起光を照射し、けい
光取出波長５６０ｎｍにおける光強度を測定した。あら
かじめ求めておいた第１図の如きＴ４の検量線に基づい
て、自動分析計の演算処理部で演算させ、試料中のＴ。
し、次いで反応セルを試薬供給位置まで移送し、そこで
上述の試薬液を２０μΩ添加するとともに、５０ ｍ
Ｍ ＫＨ，ＰＯ，緩衝液（ｐ ｈ ７．４）を９７０
μ２加えた。この反応セル列を順次移送しながら２０分
間インキュベートした。けい光光度計の測光位置に到達
した反応セルに波長５２２ｎｍの励起光を照射し、けい
光取出波長５６０ｎｍにおける光強度を測定した。あら
かじめ求めておいた第１図の如きＴ４の検量線に基づい
て、自動分析計の演算処理部で演算させ、試料中のＴ。
濃度をプリントアウトさせた。
（実験例２）
マイクロカプセルの溶解性について実験した。
実験例・１と同様のマイクロカプセルを用い、塩化マグ
ネシウム濃度の異なる各種の金属イオン溶液によるマイ
クロカプセルの損傷状況を検討した。
ネシウム濃度の異なる各種の金属イオン溶液によるマイ
クロカプセルの損傷状況を検討した。
結果を第２図に示す。実験に用いたＴ４の濃度は２０μ
ｇ／ｄＱであり、希釈液として５０ｍＭのＫＨ，ＰＯ４
緩衝液（ｐ ｈ ７．４）を用いた。反応開始２０分後
のけい光強度を測定した。
ｇ／ｄＱであり、希釈液として５０ｍＭのＫＨ，ＰＯ４
緩衝液（ｐ ｈ ７．４）を用いた。反応開始２０分後
のけい光強度を測定した。
第２図の結果では、反応液中のマグネシウムイオン濃度
が３ｍＭ以上でマイクロカプセルが安定して溶解するこ
とが理解される。マグネシウムイオン濃度が１ｍＭ以上
ならマイクロカプセルの溶解に顕著な効果を示す。マグ
ネシウムイオンは。
が３ｍＭ以上でマイクロカプセルが安定して溶解するこ
とが理解される。マグネシウムイオン濃度が１ｍＭ以上
ならマイクロカプセルの溶解に顕著な効果を示す。マグ
ネシウムイオンは。
反応時の濃度が２０ｍＭでもマイクロカプセルの溶解性
を示すが、これ以上の濃度も用い得る。
を示すが、これ以上の濃度も用い得る。
本発明によれば、従来の補体に代えて品質の安定した金
属イオンを用いることができるので、高い再現性の測定
結果が得られる。また試薬の保存も容易となる。
属イオンを用いることができるので、高い再現性の測定
結果が得られる。また試薬の保存も容易となる。
第１図はＴ４の検量線例を示す図、第２図はマグネシウ
ムイオンによるマイクロカプセルの破損確認実験例を示
す図である。
ムイオンによるマイクロカプセルの破損確認実験例を示
す図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、表面に抗原又は抗体を結合したマイクロカプセル内
に被検液中に流出すると光学的変化をもたらす物質を封
入しておき、上記マイクロカプセルと二価以上の金属イ
オンを上記被検液と共に共存せしめ、抗原抗体反応にと
もなつて上記マイクロカプセルを損傷せしめ、反応液を
測光して抗原又は抗体を測定することを特徴とする免疫
分析方法。 ２、特許請求の範囲第１項において、上記測光は、吸光
度、蛍光強度又は発光強度を測定するものであることを
特徴とする免疫分析方法。 ３、被検液中に流出すると光学的変化をもたらし得る物
質を封入しており表面に抗原又は抗体を結合したマイク
ロカプセルと、二価以上の金属イオンを生じ得る金属塩
又は二価以上の金属イオンを含む免疫分析用試薬。 ４、特許請求の範囲第３項において、上記マイクロカプ
セル内に封入された物質は、それ自身が特定の光学的特
性を有する物質、又は特定の光学的特性を有する物質の
前駆体、又は他の物質を光学的特性を生ずる物質に変換
せしめる物質であることを特徴とする免疫分析用試薬。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11922985A JPS61277062A (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | 免疫分析方法およびそれに用いる試薬 |
| DE19863618100 DE3618100A1 (de) | 1985-05-31 | 1986-05-30 | Immunoassayverfahren und reagens zu seiner durchfuehrung |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11922985A JPS61277062A (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | 免疫分析方法およびそれに用いる試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61277062A true JPS61277062A (ja) | 1986-12-08 |
Family
ID=14756152
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11922985A Pending JPS61277062A (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | 免疫分析方法およびそれに用いる試薬 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61277062A (ja) |
| DE (1) | DE3618100A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5128241A (en) * | 1987-02-06 | 1992-07-07 | Hitachi, Ltd. | Microcapsule immunoassay and reagents therefor |
| JPH04303770A (ja) * | 1991-03-30 | 1992-10-27 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | 抗原の免疫分析法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10042023C2 (de) * | 2000-08-08 | 2003-04-10 | Biognostic Ag | Kapseln, die feste Teilchen signalerzeugender Substanzen einkapseln, und deren Verwendung bei Bioassays zum Nachweis von Zielmolekülen in einer Probe |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4372745A (en) * | 1979-12-19 | 1983-02-08 | Electro-Nucleonics, Inc. | Chemical luminescence amplification substrate system for immunochemistry involving microencapsulated fluorescer |
| US4483929A (en) * | 1982-05-03 | 1984-11-20 | Liposome Technology Incorporated | Liposomes with glycolipid-linked antibodies |
-
1985
- 1985-05-31 JP JP11922985A patent/JPS61277062A/ja active Pending
-
1986
- 1986-05-30 DE DE19863618100 patent/DE3618100A1/de active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5128241A (en) * | 1987-02-06 | 1992-07-07 | Hitachi, Ltd. | Microcapsule immunoassay and reagents therefor |
| JPH04303770A (ja) * | 1991-03-30 | 1992-10-27 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | 抗原の免疫分析法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3618100A1 (de) | 1986-12-04 |
| DE3618100C2 (ja) | 1989-04-20 |
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