JPS61249927A - 血管拡張作用物質およびその製造方法 - Google Patents
血管拡張作用物質およびその製造方法Info
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- JPS61249927A JPS61249927A JP60091717A JP9171785A JPS61249927A JP S61249927 A JPS61249927 A JP S61249927A JP 60091717 A JP60091717 A JP 60091717A JP 9171785 A JP9171785 A JP 9171785A JP S61249927 A JPS61249927 A JP S61249927A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、コブラ科動物から得られ９人などの哺乳動物
に対して血管拡張作用を有する物質および該物質を抽出
・精製する方法に関する。
に対して血管拡張作用を有する物質および該物質を抽出
・精製する方法に関する。
（従来の技術）
コブラ科（Ｅｌａｐｉｄａｅ）動物は４３属に分類され
。
。
アジア、アフリカ、アメリカ、オーストラリア。
ニューギニアなどに広く分布している。アジアでは、こ
れらのうち特にコブラ属（Ｎａｊａ） ＋ 雨傘蛇属（
Ｂｕｎｇａｒｕｓ）およびキングコブラ属（Ｏｐｈｉｏ
ｐｈａｇｕｓ）動物が多く生息する。古来よりコブラ科
動物の内臓を除去した乾燥物は無毒で、高血圧の治療薬
として用いられている。しかし、これらの動物に含まれ
る血圧降下作用を有する物質については、その物質が血
管を直接拡張して血圧降下を起こすこと以外２例えばそ
の活性成分や抽出方法についても全く知られていない。
れらのうち特にコブラ属（Ｎａｊａ） ＋ 雨傘蛇属（
Ｂｕｎｇａｒｕｓ）およびキングコブラ属（Ｏｐｈｉｏ
ｐｈａｇｕｓ）動物が多く生息する。古来よりコブラ科
動物の内臓を除去した乾燥物は無毒で、高血圧の治療薬
として用いられている。しかし、これらの動物に含まれ
る血圧降下作用を有する物質については、その物質が血
管を直接拡張して血圧降下を起こすこと以外２例えばそ
の活性成分や抽出方法についても全く知られていない。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明は上記従来の欠点を解決するものであり。
その目的とするところは、コブラ科動物から得られる血
管拡張作用物質を提供することにある。本発明の他の目
的は、コブラ科動物から上記血管拡張作用を有する物質
を抽出・精製する方法を提供することにある。
管拡張作用物質を提供することにある。本発明の他の目
的は、コブラ科動物から上記血管拡張作用を有する物質
を抽出・精製する方法を提供することにある。
（問題点を解決するための手段）
本発明の血管拡張作用物質は、コブラ科動物の水溶性画
分を分画処理に付して得られ、そのことにより上記目的
が達成される。さらに本発明の血管拡張作用物質の製造
方法は、コブラ科動物を水および／もしくは親水性有機
溶剤、または酸を含有する水および／もしくは親水性有
機溶剤で抽出する工程、および該抽出物を分画処理に付
す工程。
分を分画処理に付して得られ、そのことにより上記目的
が達成される。さらに本発明の血管拡張作用物質の製造
方法は、コブラ科動物を水および／もしくは親水性有機
溶剤、または酸を含有する水および／もしくは親水性有
機溶剤で抽出する工程、および該抽出物を分画処理に付
す工程。
を包含し、そのことにより上記目的が達成される。
本発明に用いられるコブラ科動物としてはＮａｊａｎａ
ｊａ ｋａｏｕｔｈｉａ Ｌｌｌ！５ＳＯＮ （シャミ
ズコブラ） 、 Ｎ、ｎ。
ｊａ ｋａｏｕｔｈｉａ Ｌｌｌ！５ＳＯＮ （シャミ
ズコブラ） 、 Ｎ、ｎ。
ａｒｔａ ＣＡＮＴＯＲ（タイワンコブラ） 、 Ｎ、
ｎ、５ｐｕｔａｔｒｉｘＢＯＩＥ、 Ｎ、ｎ、１ｓａｎ
ｅｎｓｉｓ ＮＵＴＰＨＡＮＤなどのコブラ属（Ｎａｊ
ａ）動物： Ｂｕｎｇａｒｕｓ ｍｕｌｔｉｃｉｎｃｔ
ｕｓ ＢＬＹＴＨ（アマガサヘビ）などの雨傘蛇属（Ｂ
ｕｎｇａｒｕｓ）動物；Ｃａ１ｌｉｏｐｈｉｓ ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｓ ｂｏｅｔｔｇｅｒｉ ＰＲＩＴＺｔ！
（Ａイ）などのカリオフィス属（Ｃａｌｌｉｏｐｈｉ
ｓ）動物；Ｍａｔｉｃｏｒａ ｂｉｖｉｒｇａｔａ Ｂ
ＯＩＥなどのマチコラ属（Ｍａｔｉｃｏｒａ）動物；
Ｏｐｈｉｏｐｈａｇｕｓ ｈａｎｎａｈ ＣＡＮＴＯＲ
（キングコブラ）などのキングコブラ属（Ｏｐｈｉｏｐ
ｈａｇｕｓ）動物などが用いられる。特に、コブラ属動
物が好適である。
ｎ、５ｐｕｔａｔｒｉｘＢＯＩＥ、 Ｎ、ｎ、１ｓａｎ
ｅｎｓｉｓ ＮＵＴＰＨＡＮＤなどのコブラ属（Ｎａｊ
ａ）動物： Ｂｕｎｇａｒｕｓ ｍｕｌｔｉｃｉｎｃｔ
ｕｓ ＢＬＹＴＨ（アマガサヘビ）などの雨傘蛇属（Ｂ
ｕｎｇａｒｕｓ）動物；Ｃａ１ｌｉｏｐｈｉｓ ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｓ ｂｏｅｔｔｇｅｒｉ ＰＲＩＴＺｔ！
（Ａイ）などのカリオフィス属（Ｃａｌｌｉｏｐｈｉ
ｓ）動物；Ｍａｔｉｃｏｒａ ｂｉｖｉｒｇａｔａ Ｂ
ＯＩＥなどのマチコラ属（Ｍａｔｉｃｏｒａ）動物；
Ｏｐｈｉｏｐｈａｇｕｓ ｈａｎｎａｈ ＣＡＮＴＯＲ
（キングコブラ）などのキングコブラ属（Ｏｐｈｉｏｐ
ｈａｇｕｓ）動物などが用いられる。特に、コブラ属動
物が好適である。
本発明の血管拡張作用物質を得るには、まず。
これら原料動物を８通常、乾燥させた後細砕し。
ヘキサン、エーテルなどの脂溶性有機溶剤を用いて常法
により脱脂する。原料動物は乾燥せずに。
により脱脂する。原料動物は乾燥せずに。
生のままホモジェネートしたものも用いられうる。
脱脂処理に先たち、酵素分解、自家分解などの生物学的
処理を行うことも可能である。脱脂後の原料は水および
／もしくは親水性有機溶剤、または酸を含有する水およ
び／もしくは親水性有機溶剤を用いて抽出される。酸と
しては９例えば、塩酸や酢酸が、親水性有機溶剤として
は２例えば、メタノール、エタノールなどのアルコール
系溶媒やアセトンが利用されうる。特に、塩酸を含む希
酢酸水溶液が好適に用いられる。
処理を行うことも可能である。脱脂後の原料は水および
／もしくは親水性有機溶剤、または酸を含有する水およ
び／もしくは親水性有機溶剤を用いて抽出される。酸と
しては９例えば、塩酸や酢酸が、親水性有機溶剤として
は２例えば、メタノール、エタノールなどのアルコール
系溶媒やアセトンが利用されうる。特に、塩酸を含む希
酢酸水溶液が好適に用いられる。
得られた抽出液を凍結乾燥に付すか減圧下で溶媒を留去
して乾燥すると不定形の粉末が得られる。
して乾燥すると不定形の粉末が得られる。
この粉末を水溶液とし自然発症高血圧ラフ） （ＳＨＲ
）に体重１ｋｇにつき１０■の割合で静脈内注射により
投与すると約２０ｓ＋ｓ＋Ｈｇの血圧降下が認められる
。このように原料動物の水溶性画分は血管拡張作用物質
を含有する。この水溶性画分は、さらに。
）に体重１ｋｇにつき１０■の割合で静脈内注射により
投与すると約２０ｓ＋ｓ＋Ｈｇの血圧降下が認められる
。このように原料動物の水溶性画分は血管拡張作用物質
を含有する。この水溶性画分は、さらに。
分画処理に付して本発明の血管拡張作用物質が得られる
。ここでいう血管拡張作用物質とは、必ずしも単一の化
合物からなるのではなく、活性成分を高含量で含有する
画分を指す。分画処理は９例えば、セファデックスＧ２
５（商品名）などを用いたゲル濾過処理；イオン交換セ
ルロースやイオン交換樹脂を用いるイオン交換処理；吸
着剤による処理により行われる。これらの分画処理は単
独であるいは２種以上組み合わせて行われうる。例えば
、セファデックスＧ２５を充填したカラム（溶媒＝０、
ＩＮ酢酸溶液）を用いて分画を行うと、第１図に示すよ
うに１分集画分Ｉ（Ｆｒ−Ｉ）〜分集画分Ｖ（Ｆｒ−Ｖ
）が得られる。このうちＦｒ−ＩＩＩが特に強い血管拡
張作用を有する。このＦｒ−ｍが本発明の血管拡張作用
物質に相当する。Ｆｒ−ＩＩＩは、そのまま、濃縮した
浸水を加えて水溶液とし、または。
。ここでいう血管拡張作用物質とは、必ずしも単一の化
合物からなるのではなく、活性成分を高含量で含有する
画分を指す。分画処理は９例えば、セファデックスＧ２
５（商品名）などを用いたゲル濾過処理；イオン交換セ
ルロースやイオン交換樹脂を用いるイオン交換処理；吸
着剤による処理により行われる。これらの分画処理は単
独であるいは２種以上組み合わせて行われうる。例えば
、セファデックスＧ２５を充填したカラム（溶媒＝０、
ＩＮ酢酸溶液）を用いて分画を行うと、第１図に示すよ
うに１分集画分Ｉ（Ｆｒ−Ｉ）〜分集画分Ｖ（Ｆｒ−Ｖ
）が得られる。このうちＦｒ−ＩＩＩが特に強い血管拡
張作用を有する。このＦｒ−ｍが本発明の血管拡張作用
物質に相当する。Ｆｒ−ＩＩＩは、そのまま、濃縮した
浸水を加えて水溶液とし、または。
濃縮物を凍結乾燥や減圧下での乾燥により粉末状とし、
薬剤として利用されうる。この血管拡張作用物質は静脈
注射をはじめ、経口投与、内臓や皮膚への塗擦などによ
っても顕著な血管拡張作用を示すことが動物実験および
人体実験により明らかになった。この血管拡張作用はア
シカ科動物より得られ、現在市販されているカロペブタ
イドよりもはるかに強い。
薬剤として利用されうる。この血管拡張作用物質は静脈
注射をはじめ、経口投与、内臓や皮膚への塗擦などによ
っても顕著な血管拡張作用を示すことが動物実験および
人体実験により明らかになった。この血管拡張作用はア
シカ科動物より得られ、現在市販されているカロペブタ
イドよりもはるかに強い。
第１図において、破線はコブラ科動物に含有されると報
告されているアンセリン（Ａｎｓｅｒｉｎｅ）およびカ
ルノシン（Ｃａｒｎｏｓｉｎｅ ）の溶出パターンを示
す。Ｆｒ−ｍはＡｎｓｅｒｉｎｅおよびＣａｒｎｏｓｉ
ｎｅのピークに近いことがらＦｒ−ｍに含有される活性
成分はその分子量が５００以下であることがわかる。Ｐ
ｒ −■をアビセルＳＦプレート（商品名）を用いた薄
層クロマトグラフィー（溶媒；ｎ−ブタノール：ピリジ
ン：酢酸：水＝１５ ： １０ ： ３ ： １２）に
かけると、第２図に示すように、ニンヒドリン陽性のス
ポットが２個得られる。カルノシン（Ｃａｒｎｏｓｉｎ
ｅ）。
告されているアンセリン（Ａｎｓｅｒｉｎｅ）およびカ
ルノシン（Ｃａｒｎｏｓｉｎｅ ）の溶出パターンを示
す。Ｆｒ−ｍはＡｎｓｅｒｉｎｅおよびＣａｒｎｏｓｉ
ｎｅのピークに近いことがらＦｒ−ｍに含有される活性
成分はその分子量が５００以下であることがわかる。Ｐ
ｒ −■をアビセルＳＦプレート（商品名）を用いた薄
層クロマトグラフィー（溶媒；ｎ−ブタノール：ピリジ
ン：酢酸：水＝１５ ： １０ ： ３ ： １２）に
かけると、第２図に示すように、ニンヒドリン陽性のス
ポットが２個得られる。カルノシン（Ｃａｒｎｏｓｉｎ
ｅ）。
アンセリン（Ａｎｓｅｒｉｎｅ） ＋ スペルミン（Ｓ
ｐｅｒ＋５ｉｎｅ） ＋セロトニン（５ｅｒｏｔｏｎｉ
ｎ）およびヒスタミン（ｌｉｓｔａｍｉｎｓ）を標品と
し同時に展開すると、Ｆｒ−Ｈの２個のスポットはこれ
ら化合物のいずれのＲｆ値とも異なり、全く別の化合物
であることがわかる。上記の化合物のうち５ｐｅｒｓｉ
ｎｅはコブラ科動物に含有されると報告されている化合
物であり。
ｐｅｒ＋５ｉｎｅ） ＋セロトニン（５ｅｒｏｔｏｎｉ
ｎ）およびヒスタミン（ｌｉｓｔａｍｉｎｓ）を標品と
し同時に展開すると、Ｆｒ−Ｈの２個のスポットはこれ
ら化合物のいずれのＲｆ値とも異なり、全く別の化合物
であることがわかる。上記の化合物のうち５ｐｅｒｓｉ
ｎｅはコブラ科動物に含有されると報告されている化合
物であり。
５ｅｒｏ ｔｏｎ ｉ ｎおよび旧５ｔａｓ＋ｉｎｓは
ともに血管の収縮・拡張に関与する生体物質であり、後
者は特に衆知の血管拡張作用物質である。
ともに血管の収縮・拡張に関与する生体物質であり、後
者は特に衆知の血管拡張作用物質である。
Ｆｒ−ｍを、さらに、オクタデシルシリル化したシリカ
ゲルを担体として高速液体クロマトグラフィーにかける
と第４図に示されるチャートが得られる。Ａ、Ｂ、Ｃお
よびＤのピークに相当する分集画分（それぞれＦｒ−Ａ
、 Ｆｒ−Ｂ、 Ｆｒ−ＣおよびＦｒ−Ｄ）のうち、
Ｆｒ−Ｂ、 Ｐｒ−ＣおよびＦｒ−Ｄが血管拡張作用を
有する。Ｆｒ−Ｃを凍結乾燥し再結晶を行うと、融点２
１８℃（分解）を有する針状結晶（無水分）が得られる
。この結晶は各機器データおよびその生物活性から下記
の構造式を有するヒポキサンチン９−β−リボフラビノ
サイド〔（Ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ ９−β−ｒｉ
ｂｏｆｕｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ ；イノシン（Ｉｎｏｓ
ｉｎｅ）〕であることが確認された。
ゲルを担体として高速液体クロマトグラフィーにかける
と第４図に示されるチャートが得られる。Ａ、Ｂ、Ｃお
よびＤのピークに相当する分集画分（それぞれＦｒ−Ａ
、 Ｆｒ−Ｂ、 Ｆｒ−ＣおよびＦｒ−Ｄ）のうち、
Ｆｒ−Ｂ、 Ｐｒ−ＣおよびＦｒ−Ｄが血管拡張作用を
有する。Ｆｒ−Ｃを凍結乾燥し再結晶を行うと、融点２
１８℃（分解）を有する針状結晶（無水分）が得られる
。この結晶は各機器データおよびその生物活性から下記
の構造式を有するヒポキサンチン９−β−リボフラビノ
サイド〔（Ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ ９−β−ｒｉ
ｂｏｆｕｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ ；イノシン（Ｉｎｏｓ
ｉｎｅ）〕であることが確認された。
Ｒ
ＩＯＩＯ
イノシンは医薬品などに使用されている既知化合物であ
り、もっばら放射線曝射や薬物による白血球減少症に用
いられている。イノシンの血管に対する作用については
現在のところ明らかではない。今までに報告されている
ところでは１例えば。
り、もっばら放射線曝射や薬物による白血球減少症に用
いられている。イノシンの血管に対する作用については
現在のところ明らかではない。今までに報告されている
ところでは１例えば。
プロシーデインダス・オブ・ザ・ソサイエテイ・フォー
・エクスベリメンタル・バイオロジー・アンド・メディ
スン（Ｐｒｏｃ、 Ｓｏｃ、 Ｅｘｐ、 Ｒｉｏｔ、
Ｍｅｄ、） 。
・エクスベリメンタル・バイオロジー・アンド・メディ
スン（Ｐｒｏｃ、 Ｓｏｃ、 Ｅｘｐ、 Ｒｉｏｔ、
Ｍｅｄ、） 。
皿、 ８５−８８ （１９７４）があり、そこには一過
性の血圧上昇作用を有すると報告されている。他方、ジ
ャーナル・オブ・アプライド・バイオケミストリー （
Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ）、 ３ （５）、 ４
１１−４２４ （１９８１）にもイノシンの作用が記載
されている。それによれば、自然発症高血圧ラッ） （
ＳＨＲ）に体重１ ｋｇにつき１抛ｇ以上もの多量のイ
ノシンを投与すると持続性のある血圧降下作用を示す。
性の血圧上昇作用を有すると報告されている。他方、ジ
ャーナル・オブ・アプライド・バイオケミストリー （
Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ）、 ３ （５）、 ４
１１−４２４ （１９８１）にもイノシンの作用が記載
されている。それによれば、自然発症高血圧ラッ） （
ＳＨＲ）に体重１ ｋｇにつき１抛ｇ以上もの多量のイ
ノシンを投与すると持続性のある血圧降下作用を示す。
このイノシンはあくまでも微生物由来および合成による
イノシンである。このようにイノシンの血管に対する作
用としては、血圧上昇作用と血圧降下作用という相矛盾
する報告がなされており、血管に対する真の作用は全く
不明である。これに対し、コブラ科動物由来の本発明物
質はイノシンを含有し、そこから単離されたイノシンを
ＳＨＲに体重１ ｋｇに対して３■という上記従来の知
見に比べて極端に少ない割合で投与したところ９０分間
という長時間にわたって血圧の降下が観察された。この
ように。
イノシンである。このようにイノシンの血管に対する作
用としては、血圧上昇作用と血圧降下作用という相矛盾
する報告がなされており、血管に対する真の作用は全く
不明である。これに対し、コブラ科動物由来の本発明物
質はイノシンを含有し、そこから単離されたイノシンを
ＳＨＲに体重１ ｋｇに対して３■という上記従来の知
見に比べて極端に少ない割合で投与したところ９０分間
という長時間にわたって血圧の降下が観察された。この
ように。
コブラ科動物由来の本発明の物質は優れた血圧降下作用
を示す。
を示す。
（作用）
本発明によれば、このようにコブラ科動物の水溶性画分
を分画処理に付して、イノシンを一活性成分として含有
する血管拡張作用を有する物質が得られる。その活性は
例えば、市販のカロペプタイドよりも高い。この血管拡
張作用物質は静脈注射のみならず、経口投与や皮膚へ塗
擦することによってもその効果が得られる。塗擦での効
果はイノシンの細胞膜透過性に基因するものと考えられ
る。連続投与しても副作用は認められず、気分をされや
かにし、皮膚の色つやを良くシ、肌をなめらかにする効
果を有する。本発明の血管拡張作用物質は注射剤や軟膏
剤などの各種形態の薬剤として利用されるほか、美容ク
リーム、口紅などの化粧品；食品、飲料用などにも利用
されうる。
を分画処理に付して、イノシンを一活性成分として含有
する血管拡張作用を有する物質が得られる。その活性は
例えば、市販のカロペプタイドよりも高い。この血管拡
張作用物質は静脈注射のみならず、経口投与や皮膚へ塗
擦することによってもその効果が得られる。塗擦での効
果はイノシンの細胞膜透過性に基因するものと考えられ
る。連続投与しても副作用は認められず、気分をされや
かにし、皮膚の色つやを良くシ、肌をなめらかにする効
果を有する。本発明の血管拡張作用物質は注射剤や軟膏
剤などの各種形態の薬剤として利用されるほか、美容ク
リーム、口紅などの化粧品；食品、飲料用などにも利用
されうる。
（実験例）
以下に本発明を実験例により説明する。
去狂■土
（Ａ）コブラ科動物からの有効成分の抽出： Ｎａｊａ
ｎａｊａ ｋａｏｕｔｈｉａ ＬＢＳＳＯＮ （シャミ
ズコブラ）の腹部を切開し、内臓を取り除いた後、開い
たまま乾燥した。これを細砕して得た原料束２０ｇにヘ
キサン３００ｎ＋ １を加えて室温で１時間攪拌した。
ｎａｊａ ｋａｏｕｔｈｉａ ＬＢＳＳＯＮ （シャミ
ズコブラ）の腹部を切開し、内臓を取り除いた後、開い
たまま乾燥した。これを細砕して得た原料束２０ｇにヘ
キサン３００ｎ＋ １を加えて室温で１時間攪拌した。
これを遠心分離し、沈澱部とヘキサン可溶部とを分離し
た。
た。
沈澱部にエーテル３０Ｑ＋＋／！を加え、室温で１時間
攪拌した後遠心分離し、沈澱部とエーテル可溶部とを分
離した。この沈澱部に２０ａ＋Ｈの塩酸を含む１Ｎの酢
酸溶液２００ｍｊ！を加え、 １００℃で１０分間攪
拌した後、遠心分離を行った。沈澱部には、新たに２０
ｍＭの塩酸を含むＩＭの酢酸溶液２００ｍ１を加えて同
様にして抽出を行った。このようにして抽出操作を３回
繰り返した後、各抽出液を合わせて凍結乾燥し、 ２．
４ ｇの不定形粉末（抽出粗粉末）を得た。この粉末を
体重１ ｋｇあたり１０ｍｇの割合で下記の方法で自然
発症高血圧ラットに投与し血圧を測定したところ１８ｍ
ｍＨｇの血圧低下を示した。
攪拌した後遠心分離し、沈澱部とエーテル可溶部とを分
離した。この沈澱部に２０ａ＋Ｈの塩酸を含む１Ｎの酢
酸溶液２００ｍｊ！を加え、 １００℃で１０分間攪
拌した後、遠心分離を行った。沈澱部には、新たに２０
ｍＭの塩酸を含むＩＭの酢酸溶液２００ｍ１を加えて同
様にして抽出を行った。このようにして抽出操作を３回
繰り返した後、各抽出液を合わせて凍結乾燥し、 ２．
４ ｇの不定形粉末（抽出粗粉末）を得た。この粉末を
体重１ ｋｇあたり１０ｍｇの割合で下記の方法で自然
発症高血圧ラットに投与し血圧を測定したところ１８ｍ
ｍＨｇの血圧低下を示した。
血圧測定法二体重約２６０ｇの自然発症高血圧ラット（
Ｓ）（Ｒ）の腹腔内にベントパルビタールナトリウムを
溶液にして体重１ｋｇにつき４０ｍｇを注射した。１０
分後にラットを固定し、被検試料を水溶液にして静脈内
注射した。頚部の総頚動脈部で圧トランスデユーサ−（
ＮＩＨＯＮ ＫＯＩＩＤＥＮ社製）により血圧を測定し
た。
Ｓ）（Ｒ）の腹腔内にベントパルビタールナトリウムを
溶液にして体重１ｋｇにつき４０ｍｇを注射した。１０
分後にラットを固定し、被検試料を水溶液にして静脈内
注射した。頚部の総頚動脈部で圧トランスデユーサ−（
ＮＩＨＯＮ ＫＯＩＩＤＥＮ社製）により血圧を測定し
た。
（Ｂ）水溶性画分の分画： （Ａ）項で得られた抽出粗
粉末には血圧を降下させる活性成分が含有されているこ
とが明らかになったため、これを下記の方法により分画
処理に付した。
粉末には血圧を降下させる活性成分が含有されているこ
とが明らかになったため、これを下記の方法により分画
処理に付した。
（Ａ）項で得られた粉末２００ｍｇをセファデックスＧ
−２５のカラムクロマトグラフィー（カラム径り、Ｓ
ｃｍ、長さ９６ｃｍ＞にかけて毎分０．３４ｍｊ！の流
速で、 ０．ＩＮ酢酸溶液で溶出し、フラクシ日ンコレ
クターで４ＩＩｌｌずつ分取した。各フラクションの波
長２８０ｍｍにおける吸光度を測定したところ第１図に
示す曲線が得られた。分集画分１（Ｆｒ−１）〜分集画
分Ｖ（Ｆｒ−５）をそれぞれ凍結乾燥した。
−２５のカラムクロマトグラフィー（カラム径り、Ｓ
ｃｍ、長さ９６ｃｍ＞にかけて毎分０．３４ｍｊ！の流
速で、 ０．ＩＮ酢酸溶液で溶出し、フラクシ日ンコレ
クターで４ＩＩｌｌずつ分取した。各フラクションの波
長２８０ｍｍにおける吸光度を測定したところ第１図に
示す曲線が得られた。分集画分１（Ｆｒ−１）〜分集画
分Ｖ（Ｆｒ−５）をそれぞれ凍結乾燥した。
得られたそれぞれの粉末について（Ａ）項の血圧測定法
により活性を調べた。抽出粗粉末およびＦｒ−■〜Ｆｒ
−ｍを用いた試験を行った結果を下表に示す。Ｃａｒｎ
ｏｓｉｎｅおよびＡｎｓｅｒｉｎｅを用いて試験を行っ
た結果も下表に示す。この表から明らかなようにＦｒ−
ＩＩＩ（溶出量２３０〜２８０＋＋ｌｌ）から得られる
粉末は最も活性が高＜ 、 ９０ｍｍＨｇの血圧降下を
示した。この粉末は淡黄色不定形であり、Ｆｒ−ＩＩＩ
から３■得られた。この量は原料末から換算すると０．
１８重量％である。この粉末が本発明の血管拡張作用物
質にあたる。この血管拡張作用物質中の活性成分の分子
量はセファデックスＧ−２５の溶出パターンから５００
以下と推定される。Ｆｒ−１〜Ｆｒ−Ｖ、 Ｃａｒｎｏ
ｓｉｎｅ、 Ａｎｓｅｒｉｎｅ＋ Ｓｐｅｒｍｉｎｅ＊
５ｅｒｏｔｏｎｉｎおよびＨｉｓｔａ＋ｎ１ｎｅの薄
層クロマトグラムを第３図に示す。薄層板はアビセルＳ
Ｆ（フナコシ−）。
により活性を調べた。抽出粗粉末およびＦｒ−■〜Ｆｒ
−ｍを用いた試験を行った結果を下表に示す。Ｃａｒｎ
ｏｓｉｎｅおよびＡｎｓｅｒｉｎｅを用いて試験を行っ
た結果も下表に示す。この表から明らかなようにＦｒ−
ＩＩＩ（溶出量２３０〜２８０＋＋ｌｌ）から得られる
粉末は最も活性が高＜ 、 ９０ｍｍＨｇの血圧降下を
示した。この粉末は淡黄色不定形であり、Ｆｒ−ＩＩＩ
から３■得られた。この量は原料末から換算すると０．
１８重量％である。この粉末が本発明の血管拡張作用物
質にあたる。この血管拡張作用物質中の活性成分の分子
量はセファデックスＧ−２５の溶出パターンから５００
以下と推定される。Ｆｒ−１〜Ｆｒ−Ｖ、 Ｃａｒｎｏ
ｓｉｎｅ、 Ａｎｓｅｒｉｎｅ＋ Ｓｐｅｒｍｉｎｅ＊
５ｅｒｏｔｏｎｉｎおよびＨｉｓｔａ＋ｎ１ｎｅの薄
層クロマトグラムを第３図に示す。薄層板はアビセルＳ
Ｆ（フナコシ−）。
展開溶媒はｎ−ブタノール・ピリジン・酢酸・水混液（
容量比１５ ： １０ ： ３ ： １２ ＞を使用し
ニンヒドリンで発色させた。Ｆｒ−ｍの２個のスポット
のＲｆ値はＣａｒｎｏｓｉｎｅ、 Ａｎｓｅｒｉｎｅ＋
Ｓｐｅｒｍｉｎｅよりも高い・また９本物質は５ｅｒ
ｏｔｏｎｉｎもＨｉｓｔａｎ＋ｉｎｅも含んでいないこ
とがわかる。
容量比１５ ： １０ ： ３ ： １２ ＞を使用し
ニンヒドリンで発色させた。Ｆｒ−ｍの２個のスポット
のＲｆ値はＣａｒｎｏｓｉｎｅ、 Ａｎｓｅｒｉｎｅ＋
Ｓｐｅｒｍｉｎｅよりも高い・また９本物質は５ｅｒ
ｏｔｏｎｉｎもＨｉｓｔａｎ＋ｉｎｅも含んでいないこ
とがわかる。
去簾■１
実験例１で得られた血管拡張作用を有する物質をさらに
精査した。
精査した。
Ｆｒ−ｍを凍結乾燥して得られた淡黄色の不定形粉末３
６ｍｇを径２．５ｃ＋ｗ、長さ２５ｃ＋ｗのＹＭＣ−Ｐ
ａｃｋ−３４３ｏｐｓカラム（商品名）を用いて分取高
速液体クロマトグラフィーにかけた。検出波長は２１５
ｎｍであり、？８離液としては０．０５％トリフルオロ
酢酸緩衝液を用い、これを毎分３ｍｌの流速で溶出させ
た。
６ｍｇを径２．５ｃ＋ｗ、長さ２５ｃ＋ｗのＹＭＣ−Ｐ
ａｃｋ−３４３ｏｐｓカラム（商品名）を用いて分取高
速液体クロマトグラフィーにかけた。検出波長は２１５
ｎｍであり、？８離液としては０．０５％トリフルオロ
酢酸緩衝液を用い、これを毎分３ｍｌの流速で溶出させ
た。
得られたチャートを第４図に示す。分集画分Ａ（Ｆｒ−
Ａ３〜分集画分Ｄ （Ｆｒ−Ｄ）をそれぞれ凍結乾燥し
、その活性を調べた。その結果を下表に示す、Ｆｒ−Ｃ
からの凍結乾燥品が最も高い活性を示し１体重１ ｋｇ
あたり３■の投与で９０分間にわたり１０Ｑａ＋ｍＨｇ
の血圧低下が認められた。Ｆｒ−Ｃについて投与後の時
間と血圧との関係を第５図に示す。
Ａ３〜分集画分Ｄ （Ｆｒ−Ｄ）をそれぞれ凍結乾燥し
、その活性を調べた。その結果を下表に示す、Ｆｒ−Ｃ
からの凍結乾燥品が最も高い活性を示し１体重１ ｋｇ
あたり３■の投与で９０分間にわたり１０Ｑａ＋ｍＨｇ
の血圧低下が認められた。Ｆｒ−Ｃについて投与後の時
間と血圧との関係を第５図に示す。
第５図において矢印は投与時を示す。Ｆｒ−Ｃの凍結乾
燥品を８０％エタノールから再結晶すると、４ｍｇの針
状結晶（無水分）が得られた。この結晶は２１８℃（分
解）の融点を示し、紫外線吸収スペクトル、赤外線吸収
スペクトル、核磁気共鳴スペクトルなどの機器分析なら
びに薄層クロマトグラフィー、生物活性などを標品と比
較し、下記構造式のイノシンであることが判明した。
燥品を８０％エタノールから再結晶すると、４ｍｇの針
状結晶（無水分）が得られた。この結晶は２１８℃（分
解）の融点を示し、紫外線吸収スペクトル、赤外線吸収
スペクトル、核磁気共鳴スペクトルなどの機器分析なら
びに薄層クロマトグラフィー、生物活性などを標品と比
較し、下記構造式のイノシンであることが判明した。
Ｈ
８０ＨＯ
（発明の効果）
本発明によれば、このように、コブラ科動物から血管拡
張作用を有する物質が得られる。この血管拡張作用物質
は、活性成分のひとつとしてイノシンを含有し、高い活
性を有する。そのため、血圧降下剤として注射剤、軟膏
剤など各種製剤形態で利用されうる。薬剤以外にも美容
クリーム、口紅などの化粧品や食品、飲料用などとして
各種方面での利用価値が高い。
張作用を有する物質が得られる。この血管拡張作用物質
は、活性成分のひとつとしてイノシンを含有し、高い活
性を有する。そのため、血圧降下剤として注射剤、軟膏
剤など各種製剤形態で利用されうる。薬剤以外にも美容
クリーム、口紅などの化粧品や食品、飲料用などとして
各種方面での利用価値が高い。
第１図は本発明方法によりコブラ科動物から得られた水
溶性画分をゲル濾過カラムにかけたときの溶出パターン
を示すグラフ、第２図および第３図は本発明の血管拡張
作用物質の薄層り・ロマトグラム、第４図は本発明の血
管拡張作用物質をさらに高速液体クロマトグラフィーに
より分画した溶出パターンを示すグラフ、そして第５図
は本発明の血管拡張作用物質から単離されたイノシンを
ラットに投与したときの血圧の変化を示すグラフである
。 以上
溶性画分をゲル濾過カラムにかけたときの溶出パターン
を示すグラフ、第２図および第３図は本発明の血管拡張
作用物質の薄層り・ロマトグラム、第４図は本発明の血
管拡張作用物質をさらに高速液体クロマトグラフィーに
より分画した溶出パターンを示すグラフ、そして第５図
は本発明の血管拡張作用物質から単離されたイノシンを
ラットに投与したときの血圧の変化を示すグラフである
。 以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、コブラ科動物の水溶性画分を分画処理に付して得ら
れる血管拡張作用物質。 ２、前記分画処理がゲル濾過処理、イオン交換処理およ
び吸着剤処理の少なくとも１種である特許請求の範囲第
１項に記載の血管拡張作用物質。 ３、前記分画処理により得られる画分が分子量５００以
下の活性成分を含有する特許請求の範囲第１項に記載の
血管拡張作用物質。 ４、前記活性成分のうちの１種が下記式で示されるヒポ
キサンチン９−β−リボフラビノサイド〔（Ｈｙｐｏｘ
ａｎｔｈｉｎｅ ９−β−ｒｉｂｏｆｕｒａｂｉｎｏｓ
ｉｄｅ）イノシン（Ｉｎｏｓｉｎｅ）〕である特許請求
の範囲第３項に記載の血管拡張作用物質。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ５、前記コブラ科動物がコブラ属（Ｎａｊａ）動物、雨
傘蛇属（Ｂｕｎｇａｒｕｓ）動物、カリオフィス属（Ｃ
ａｌｌｉｏｐｈｉｓ）動物、マチコラ属（Ｍａｔｉｃｏ
ｒａ）動物およびキングコブラ属（０ｐｈｉｏｐｈａｇ
ｕｓ）動物でなる群から選択される少なくとも１種であ
る特許請求の範囲第１項に記載の血管拡張作用物質。 ６、コブラ科動物を水および／もしくは親水性有機溶剤
、または酸を含有する水および／もしくは親水性有機溶
剤で抽出する工程、および該抽出物を分画処理に付す工
程、 を包含する血管拡張作用物質の製造方法。 ７、前記分画処理がゲル濾過処理、イオン交換処理およ
び吸着剤処理の少なくとも１種である特許請求の範囲第
６項に記載の血管拡張作用物質の製造方法。 ８、前記分画処理により得られる画分が分子量５００以
下の活性成分を含有する特許請求の範囲第６項に記載の
血管拡張作用物質の製造方法。 ９、前記活性成分のうちの１種が下記式で示されるヒポ
キサンチン９−β−リボフラビノサイド〔（Ｈｙｐｏｘ
ａｎｔｈｉｎｅ ９−β−ｒｉｂｏｆｕｒａｂｉｎｏｓ
ｉｄｅ）；イノシン（Ｉｎｏｓｉｎｅ）〕である特許請
求の範囲第８項に記載の血管拡張作用物質の製造方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ １０、前記コブラ科動物がコブラ属（Ｎａｊａ）動物、
雨傘蛇属（Ｂｕｎｇａｒｕｓ）動物、カリオフィス属（
Ｃａｌｌｉｏｐｈｉｓ）動物、マチコラ属（Ｍａｔｉｃ
ｏｒａ）動物およびキングコブラ属（Ｏｐｈｉｏｐｈａ
ｇｕｓ）動物でなる群から選択される少なくとも１種で
ある特許請求の範囲第６項に記載の血管拡張作用物質の
製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60091717A JPS61249927A (ja) | 1985-04-26 | 1985-04-26 | 血管拡張作用物質およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60091717A JPS61249927A (ja) | 1985-04-26 | 1985-04-26 | 血管拡張作用物質およびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61249927A true JPS61249927A (ja) | 1986-11-07 |
Family
ID=14034257
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60091717A Pending JPS61249927A (ja) | 1985-04-26 | 1985-04-26 | 血管拡張作用物質およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61249927A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008062852A1 (fr) * | 2006-11-22 | 2008-05-29 | Shunsuke Imai | Composition neutralisant l'exotoxine d'e. coli entérohémorragique |
-
1985
- 1985-04-26 JP JP60091717A patent/JPS61249927A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008062852A1 (fr) * | 2006-11-22 | 2008-05-29 | Shunsuke Imai | Composition neutralisant l'exotoxine d'e. coli entérohémorragique |
| JPWO2008062852A1 (ja) * | 2006-11-22 | 2010-03-04 | 俊介 今井 | 腸管出血性大腸菌の菌体外毒素を中和する組成物 |
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