JPS61227591A - 核酸塩基配列の分析方法、その方法を行うための担体、および担体の製造方法 - Google Patents
核酸塩基配列の分析方法、その方法を行うための担体、および担体の製造方法Info
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- JPS61227591A JPS61227591A JP61041356A JP4135686A JPS61227591A JP S61227591 A JPS61227591 A JP S61227591A JP 61041356 A JP61041356 A JP 61041356A JP 4135686 A JP4135686 A JP 4135686A JP S61227591 A JPS61227591 A JP S61227591A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）は４種類のヌクレオチド塩
基、アデニン、シトシン、グアニンおよびチミンから成
る２本の相補鎖を有する２本鎖分子である。２本のこの
ＤＮＡ鎖は特定の塩基対、すなわちアデニン−チミンお
よびシトシン−グアニンが水素結合により会合すること
によって一緒に結合される。ＤＮＡと関連するＲＮＡは
デオキシリボースの代わりにリボースを、モしてチミン
基の代わりにウラシルを含有する。２本の相補鎖を形成
する特異的なりＮＡ結合は、全ての生存細胞←特に染色
体）の遺伝情報を表わすＤＮＡ遺伝暗号へと導く。塩基
配列が知られているＤＮＡまたはＲＮＡは未知の遺伝物
質の塩基配列を決定するために、またはウィルスや細菌
から成る遺伝物目 質を固定する診断目的のために、バイオテクノロジーの
分野において使用される。ＤＮＡ−またはＲＮＡ−ハイ
ブリダイゼータ１ンを測定する一般方法は、放射性同位
体または酵素で標識したＤＮＡ−またはＲＮＡ−塩基配
列を相′補的な１本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡに結合させ、
その後その標識を検出することに基づいている。多くの
場合、セルロースまたは他の多糖類がＤＮＡを固定化す
るための固相として使用され、且つ標識ＤＮＡプローブ
のりセブタ−（受容体）として作用している。
基、アデニン、シトシン、グアニンおよびチミンから成
る２本の相補鎖を有する２本鎖分子である。２本のこの
ＤＮＡ鎖は特定の塩基対、すなわちアデニン−チミンお
よびシトシン−グアニンが水素結合により会合すること
によって一緒に結合される。ＤＮＡと関連するＲＮＡは
デオキシリボースの代わりにリボースを、モしてチミン
基の代わりにウラシルを含有する。２本の相補鎖を形成
する特異的なりＮＡ結合は、全ての生存細胞←特に染色
体）の遺伝情報を表わすＤＮＡ遺伝暗号へと導く。塩基
配列が知られているＤＮＡまたはＲＮＡは未知の遺伝物
質の塩基配列を決定するために、またはウィルスや細菌
から成る遺伝物目 質を固定する診断目的のために、バイオテクノロジーの
分野において使用される。ＤＮＡ−またはＲＮＡ−ハイ
ブリダイゼータ１ンを測定する一般方法は、放射性同位
体または酵素で標識したＤＮＡ−またはＲＮＡ−塩基配
列を相′補的な１本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡに結合させ、
その後その標識を検出することに基づいている。多くの
場合、セルロースまたは他の多糖類がＤＮＡを固定化す
るための固相として使用され、且つ標識ＤＮＡプローブ
のりセブタ−（受容体）として作用している。
こうして、例えばアガロースゲルによる電気泳動を使っ
てＤＮＡ断片を分離し、分離した断片を変性して１本鎖
となし、それらを拡散によって二トロセルースデ紙へ移
行させることが知られている（Ｅ、Ｍ、サザ７ （５ｏ
ｕｔｈｅｒｎ ）のジャーナル。
てＤＮＡ断片を分離し、分離した断片を変性して１本鎖
となし、それらを拡散によって二トロセルースデ紙へ移
行させることが知られている（Ｅ、Ｍ、サザ７ （５ｏ
ｕｔｈｅｒｎ ）のジャーナル。
オプ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ、 Ｍｏｌ。
Ｂｉｏ、）ｙ９ム５０３（１９７５）を参照されたい〕
。その後、分離した塩基配列は放射性同位体で標識した
相補的塩基配列（これらの標的に結合する）と共にイン
キユベートすることにより固定される。放射性同位体は
写真乳剤を活性化することによりその分布を記録される
。さらに、同じ目的のために、変性したＤＮＡまたはま
たはＲＮＡをジアゾベンジル基によってセルロースへ共
有結合させることが知られているＣ Ｂ、 Ｅ、ノイズ
（Ｎｏ−ｙｅｓ ）およびＧ、 Ｒ，スターク（５ｔａ
ｒｋ ）の細胞（Ｃｅｌｌ）、５，３０１（１９７５）
を参照されたい〕。
。その後、分離した塩基配列は放射性同位体で標識した
相補的塩基配列（これらの標的に結合する）と共にイン
キユベートすることにより固定される。放射性同位体は
写真乳剤を活性化することによりその分布を記録される
。さらに、同じ目的のために、変性したＤＮＡまたはま
たはＲＮＡをジアゾベンジル基によってセルロースへ共
有結合させることが知られているＣ Ｂ、 Ｅ、ノイズ
（Ｎｏ−ｙｅｓ ）およびＧ、 Ｒ，スターク（５ｔａ
ｒｋ ）の細胞（Ｃｅｌｌ）、５，３０１（１９７５）
を参照されたい〕。
伝染性微生物からのＤＮＡの塩基配列は、血清、骨髄ま
たは糞便などの試料中に存在しうる相補的ＤＮＡを測定
するためのプロー／として診断目的に使用することがで
きる。今日に至るまで、放射性同位体または酵素で標識
した既知核酸配列のプローブがこの目的のために使用さ
れている。
たは糞便などの試料中に存在しうる相補的ＤＮＡを測定
するためのプロー／として診断目的に使用することがで
きる。今日に至るまで、放射性同位体または酵素で標識
した既知核酸配列のプローブがこの目的のために使用さ
れている。
それに対して本発明の課題は、核酸の分析方法およびこ
れに利用できる検出用担体ならびに該担体の製造方法を
提供することであり、これによって核酸の分析、’１ｆ
ＦＫ配列の分析を未標識プローブを用いて行うことがで
きる。
れに利用できる検出用担体ならびに該担体の製造方法を
提供することであり、これによって核酸の分析、’１ｆ
ＦＫ配列の分析を未標識プローブを用いて行うことがで
きる。
？
これらの課題は特許請求の範囲第１．１および１２項で
特徴付けられた特色によって解決することができ、本発
明の更に詳しい特徴は他の請求項に記載されている。
特徴付けられた特色によって解決することができ、本発
明の更に詳しい特徴は他の請求項に記載されている。
本発明によると、光反射性の担体表面上に変性１本％Ｄ
ＮＡまたはＲＮＡが共有結合され、この担体が検出媒体
として、分析しようとする配列を有する変性核酸を含む
被検試料と接触される。試料中の変性した相補的核酸は
担体上に存在する特定の塩基配列の１本鎖核酸に結合し
、それにより形成される有機層の厚みの増加が反射担体
表面の反射特性を著しく変えるために光学測定によって
検出可能になる。この検出は担体表面での反射後の偏光
の変化、または干渉色の変化を測定することにより行わ
れる。偏光状態を監視する場合、欧州特許第１９０８８
号または米国特許第４３３２４７６号の各明細書に記載
される偏光解析法、および同じく前記特許に記載される
偏光解析装貧が試料表面の物理的性質を調べるために有
利に使用される。担体表面で反射した光の干渉色の変化
（有機層の厚みの増加により起こる）を検出する場合、
担体はその反射面上に二重層、すなわち反射−非反射層
を有するものが適しており、この二重層の上に既知塩基
配列の核酸鎖が固定化される。この稲の特に適した担体
はＤＥ−Ｏ８第３２１５４８４号に開示されている。
ＮＡまたはＲＮＡが共有結合され、この担体が検出媒体
として、分析しようとする配列を有する変性核酸を含む
被検試料と接触される。試料中の変性した相補的核酸は
担体上に存在する特定の塩基配列の１本鎖核酸に結合し
、それにより形成される有機層の厚みの増加が反射担体
表面の反射特性を著しく変えるために光学測定によって
検出可能になる。この検出は担体表面での反射後の偏光
の変化、または干渉色の変化を測定することにより行わ
れる。偏光状態を監視する場合、欧州特許第１９０８８
号または米国特許第４３３２４７６号の各明細書に記載
される偏光解析法、および同じく前記特許に記載される
偏光解析装貧が試料表面の物理的性質を調べるために有
利に使用される。担体表面で反射した光の干渉色の変化
（有機層の厚みの増加により起こる）を検出する場合、
担体はその反射面上に二重層、すなわち反射−非反射層
を有するものが適しており、この二重層の上に既知塩基
配列の核酸鎖が固定化される。この稲の特に適した担体
はＤＥ−Ｏ８第３２１５４８４号に開示されている。
分析期間中に試験すべき試料と接触する検出媒体として
の適当な担体は好ましくは珪素表面またはアルミニウム
表面を有し、その上に官能基を有する水素化珪素の１つ
の層が施される。その後、この水素化珪素の層上に既知
のまたは決定済みの塩基配列を有する核酸鎖を化学的結
合、特に共有結合により固定化する。核酸を固定化する
ためには、多糖類（特にデキストラン）から成る中間層
をさらに施すことが有利である。
の適当な担体は好ましくは珪素表面またはアルミニウム
表面を有し、その上に官能基を有する水素化珪素の１つ
の層が施される。その後、この水素化珪素の層上に既知
のまたは決定済みの塩基配列を有する核酸鎖を化学的結
合、特に共有結合により固定化する。核酸を固定化する
ためには、多糖類（特にデキストラン）から成る中間層
をさらに施すことが有利である。
本発明は、核酸プローブ（性状、特に塩基配列が知られ
た核酸を含む）をその後の検出のためにもはや標識する
必要がないという利点を提供する。
た核酸を含む）をその後の検出のためにもはや標識する
必要がないという利点を提供する。
従って、本発明によれば、既知試料を未標識プローブを
使って試験することができる。このために必要な担体は
簡単に作ることができ且つ単純な構造をしている。検出
反応は例えば欧州特許第１９０８８号または米国特許第
４３３２４７６号に示されるような比較偏光解析装置（
エリプソメーター）を使って簡単な方法で行われる。こ
の装置では、担体上に置かれたヌクレイン鎖の上に形成
された相補的塩基配列を視覚化することができ、こうし
て検出および測定が可能である。このために、担体が既
知の偏光解析装置内に試料として挿入される。既知方法
の場合に対して、本発明の場合は比較的単純な構造の装
置が必要とされる。
使って試験することができる。このために必要な担体は
簡単に作ることができ且つ単純な構造をしている。検出
反応は例えば欧州特許第１９０８８号または米国特許第
４３３２４７６号に示されるような比較偏光解析装置（
エリプソメーター）を使って簡単な方法で行われる。こ
の装置では、担体上に置かれたヌクレイン鎖の上に形成
された相補的塩基配列を視覚化することができ、こうし
て検出および測定が可能である。このために、担体が既
知の偏光解析装置内に試料として挿入される。既知方法
の場合に対して、本発明の場合は比較的単純な構造の装
置が必要とされる。
担体の反射面は好ましくは二酸化珪素または酸化アルミ
ニウムから成る。この上に官能性末端基を有する水素化
珪素の１つの層が施される。このために特に適する基は
アミノ基（ＮＨ，−）または層の反射面への結合はシラ
ノール基またはアルミニウムヒドロキシル基により自然
に起こる。特定の既知結合塩基配列を有する変性核酸（
ＤＮＡまたはＲＮＡ）は、直接にジアゾベンジル基を介
してまたは多糖類（例えばデキストラン）から成る中間
層を介して、水素化珪素層へ化学的に、特に共有結合に
より結合される。
ニウムから成る。この上に官能性末端基を有する水素化
珪素の１つの層が施される。このために特に適する基は
アミノ基（ＮＨ，−）または層の反射面への結合はシラ
ノール基またはアルミニウムヒドロキシル基により自然
に起こる。特定の既知結合塩基配列を有する変性核酸（
ＤＮＡまたはＲＮＡ）は、直接にジアゾベンジル基を介
してまたは多糖類（例えばデキストラン）から成る中間
層を介して、水素化珪素層へ化学的に、特に共有結合に
より結合される。
分析を行う前に、試料を例えば０．５Ｍ水酸化ナトリウ
ムまたは類似の試薬を用いて変性し、続いて中和し、そ
の後相補的核酸鎖（特にＤＮＡ鎖またはＲＮＡ鎖）を徐
々に結合さ騒る組成のノ・イブリダイゼーション緩衝液
を加える。この緩衝液は例えば５０％ホルムアミド、０
．０５Ｍクエン酸ナトリウム、０．１％硫酸ドデシル、
１ｍＭＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはその
ナトリウム塩、０．０２％アルブミンおよび２％デキス
トラン硫酸から成る。担体上に共有結合で固定化された
ヌクレイン鎖に試料中の相補的核酸が結合すると、その
担体表面上に形成される有機層の厚みが増加する。通常
の塩溶液および水で洗い、続いて乾燥した後、増加した
有機層の厚みを、すでに述べたように比較偏光解析法（
米国特許第４３３２４７６号または欧州特許第１９０８
８号参照）によって、あるいは例えばＤＥ−０８３２１
５４８４に示されるように反射担体上の珪素酸化物から
成る二重層の干渉色の変化を測定することによって決定
または測定する。
ムまたは類似の試薬を用いて変性し、続いて中和し、そ
の後相補的核酸鎖（特にＤＮＡ鎖またはＲＮＡ鎖）を徐
々に結合さ騒る組成のノ・イブリダイゼーション緩衝液
を加える。この緩衝液は例えば５０％ホルムアミド、０
．０５Ｍクエン酸ナトリウム、０．１％硫酸ドデシル、
１ｍＭＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはその
ナトリウム塩、０．０２％アルブミンおよび２％デキス
トラン硫酸から成る。担体上に共有結合で固定化された
ヌクレイン鎖に試料中の相補的核酸が結合すると、その
担体表面上に形成される有機層の厚みが増加する。通常
の塩溶液および水で洗い、続いて乾燥した後、増加した
有機層の厚みを、すでに述べたように比較偏光解析法（
米国特許第４３３２４７６号または欧州特許第１９０８
８号参照）によって、あるいは例えばＤＥ−０８３２１
５４８４に示されるように反射担体上の珪素酸化物から
成る二重層の干渉色の変化を測定することによって決定
または測定する。
核酸の塩基配列を分析する際に１検出媒体として使用さ
れる担体の製造法を、以下の実施例により詳細に説明す
る。これらの担体は光反射性表面を有し、この表面上に
変性ＤＡＮまたはＲＮＡの被膜が共有結合される。
れる担体の製造法を、以下の実施例により詳細に説明す
る。これらの担体は光反射性表面を有し、この表面上に
変性ＤＡＮまたはＲＮＡの被膜が共有結合される。
実施例 １
入口栓および出口栓を備えた乾燥器内に、例えば蒸着に
よって表面に珪素またはアルミニウムを被覆した珪素小
板、ガラス小板またはウェーファー （Ｗａｆｅｒ ）
を配置した。乾燥器内の圧力を約１０ｔｓ＋Ｈ，９に下
げ、温度を８０°Ｃに保った。エポキシ水素化珪素を含
有するフラスコを乾燥器の入口に接続し、そして入口栓
を開放した。これＫより珪素またはアルミニウムを被覆
した珪素小板またはガラス小板の表面に蒸留によって水
素化珪素を付着させ、約２時間以内にエポキシ−活性化
表面を形成した。次に、被覆基体を１２％２−アミノ−
チオフェノール／アセトン溶液中に浸漬し、長時間すな
わち約１０時間インキエベーター内に保持した。その後
、この被覆基体を洗浄し、使用するまで水の中で保存し
た。次に、核種基体を亜硝酸す、リウｊ、 ２５０ 局
ｙ〜を含有する１Ｍ塩酸中よ、４°Ｃで１時間浸漬し、
洗浄して湿った室内で保存した。単離した純粋なりＮＡ
は２５ ｍＭ燐酸緩衝液に溶解して９０°Ｃに加熱し、
この溶液の容量の４倍量のジメチルスルホキシドを加え
、そしてこの溶液を層状基体の表面に約１０時間滴下し
てインキュベートした。その後、小板形の層状基体を再
度洗浄し、アルブミン溶液（１０ＭＥ／１１４ ）中で
インキュベートして非特異的吸着に対してこの表面を不
活性化することにより後処理を行った。
よって表面に珪素またはアルミニウムを被覆した珪素小
板、ガラス小板またはウェーファー （Ｗａｆｅｒ ）
を配置した。乾燥器内の圧力を約１０ｔｓ＋Ｈ，９に下
げ、温度を８０°Ｃに保った。エポキシ水素化珪素を含
有するフラスコを乾燥器の入口に接続し、そして入口栓
を開放した。これＫより珪素またはアルミニウムを被覆
した珪素小板またはガラス小板の表面に蒸留によって水
素化珪素を付着させ、約２時間以内にエポキシ−活性化
表面を形成した。次に、被覆基体を１２％２−アミノ−
チオフェノール／アセトン溶液中に浸漬し、長時間すな
わち約１０時間インキエベーター内に保持した。その後
、この被覆基体を洗浄し、使用するまで水の中で保存し
た。次に、核種基体を亜硝酸す、リウｊ、 ２５０ 局
ｙ〜を含有する１Ｍ塩酸中よ、４°Ｃで１時間浸漬し、
洗浄して湿った室内で保存した。単離した純粋なりＮＡ
は２５ ｍＭ燐酸緩衝液に溶解して９０°Ｃに加熱し、
この溶液の容量の４倍量のジメチルスルホキシドを加え
、そしてこの溶液を層状基体の表面に約１０時間滴下し
てインキュベートした。その後、小板形の層状基体を再
度洗浄し、アルブミン溶液（１０ＭＥ／１１４ ）中で
インキュベートして非特異的吸着に対してこの表面を不
活性化することにより後処理を行った。
実施例 ２
実施例１のようにして、小板状担体をエポキシ水素化珪
素またはアミノ水素化珪素で処理した。
素またはアミノ水素化珪素で処理した。
次に、２０％デキストラン水溶液中でインキュベートす
るととＫより、エポキシ−またはアミノ−活性表面にデ
キストランを結合させた。これは前記表面上に厚さが２
０〜４０Ａのデキストラン被膜を形成させた。また別の
方法として、セファデックス０２５カラムで脱塩したｐ
Ｈ８，０の０．０１％過沃素酸ナトリウムと共にインキ
、ベートすることにより、約１０時間かけてアミノ水素
化珪素を被覆した表面上にデキストランを被覆すること
ができる。その後、ｐＨ５，０の０．１Ｍ酢酸緩衝液中
で０．１％水素化硼素ナトリウム溶液と共にインキュび
１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（１ｄ）
を約１０時間の間小板状担体に被覆し、続いて１２％２
−アミノ−チオフェノール／アセトン溶液をさらに約１
０時間の間この小板状担体に加えた。その後、小板状担
体は水の中で保存した。単離した純粋なりＮＡまたはＲ
ＮＡは、実施例１のようにして亜硝酸処理後の小板状担
体へ固定化させた。
るととＫより、エポキシ−またはアミノ−活性表面にデ
キストランを結合させた。これは前記表面上に厚さが２
０〜４０Ａのデキストラン被膜を形成させた。また別の
方法として、セファデックス０２５カラムで脱塩したｐ
Ｈ８，０の０．０１％過沃素酸ナトリウムと共にインキ
、ベートすることにより、約１０時間かけてアミノ水素
化珪素を被覆した表面上にデキストランを被覆すること
ができる。その後、ｐＨ５，０の０．１Ｍ酢酸緩衝液中
で０．１％水素化硼素ナトリウム溶液と共にインキュび
１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（１ｄ）
を約１０時間の間小板状担体に被覆し、続いて１２％２
−アミノ−チオフェノール／アセトン溶液をさらに約１
０時間の間この小板状担体に加えた。その後、小板状担
体は水の中で保存した。単離した純粋なりＮＡまたはＲ
ＮＡは、実施例１のようにして亜硝酸処理後の小板状担
体へ固定化させた。
実施例 ３
次に、小板状担体は水（１０ｍ／）中の酢酸ナトリウム
０．２ｇおよび塩化１−［（ｍ−ニトロペンジルオキシ
）メチル〕ピリジニウム１ｇ含有溶液と共にインキュベ
ートするために処理し、続いてオーブン内７０”Ｃで、
次に１４０°Ｃで約１時間乾燥した。その後、２０％０
％亜二チオントリウム溶液中でこの担体をインキュベー
トし、そして水で洗浄した。さらに、２５０◇９／ｍｌ
の亜硝酸ナトリウムを含有する１Ｍ塩酸に４″Ｃで約１
時間浸漬し、洗浄し、そして湿った室内で保存した。最
後に、単離した純粋なりＮＡまたはＲＮＡを溶解し、実
施例１のようにしてインキエベニシ１ンすることにより
上記の処理担体へ固定化させた。
０．２ｇおよび塩化１−［（ｍ−ニトロペンジルオキシ
）メチル〕ピリジニウム１ｇ含有溶液と共にインキュベ
ートするために処理し、続いてオーブン内７０”Ｃで、
次に１４０°Ｃで約１時間乾燥した。その後、２０％０
％亜二チオントリウム溶液中でこの担体をインキュベー
トし、そして水で洗浄した。さらに、２５０◇９／ｍｌ
の亜硝酸ナトリウムを含有する１Ｍ塩酸に４″Ｃで約１
時間浸漬し、洗浄し、そして湿った室内で保存した。最
後に、単離した純粋なりＮＡまたはＲＮＡを溶解し、実
施例１のようにしてインキエベニシ１ンすることにより
上記の処理担体へ固定化させた。
第１〜３図は小板の形をした担体の具体例を示す略図で
ある。ここでは基体上のそれぞれの層の配列順位のみを
示し、図示される層の厚さの関係は実際に使用するスケ
ールに一致していない。
ある。ここでは基体上のそれぞれの層の配列順位のみを
示し、図示される層の厚さの関係は実際に使用するスケ
ールに一致していない。
第１図において、例えば珪素またはガラスから成る基体
１の上に１反射面として作用する二酸化珪素層２（この
層は酸化アルミニウム層であってもよい）が配置される
。この層２の上に官能性エポキシ基またはアミノ基を有
する水素化珪素層３が存在する。この上面に層４が存在
し、層４には１本鎖核酸（例えばＤＮＡ）が担体上に固
定化されて存在する。
１の上に１反射面として作用する二酸化珪素層２（この
層は酸化アルミニウム層であってもよい）が配置される
。この層２の上に官能性エポキシ基またはアミノ基を有
する水素化珪素層３が存在する。この上面に層４が存在
し、層４には１本鎖核酸（例えばＤＮＡ）が担体上に固
定化されて存在する。
第２図に示す担体の具体例は実質的に第１図と同じであ
るが、水素化珪素層３と固定化した変性１本鎖核酸を有
する層４との間に多糖類層５（Ｉ＃にデキストラン層）
が配置されるという点で異なっている。
るが、水素化珪素層３と固定化した変性１本鎖核酸を有
する層４との間に多糖類層５（Ｉ＃にデキストラン層）
が配置されるという点で異なっている。
第３図に示す具体例では、反射面が二重層となるように
形成され、基体１の上に存在する第一の層２１は一酸化
珪素から成り、そして第二の層２は二酸化珪素から成っ
ている。この二重層の機能はＤＥ−Ｏ８第３２１５４８
４号に詳しく記載されている。
形成され、基体１の上に存在する第一の層２１は一酸化
珪素から成り、そして第二の層２は二酸化珪素から成っ
ている。この二重層の機能はＤＥ−Ｏ８第３２１５４８
４号に詳しく記載されている。
第１図乃至第３図は小板の形をした本発明担体の具体例
を示す略図である。 に基体 ２：二酸化珪素層または２１ニ一酸
化珪素層 酸化アルミニウム層３：水素化珪素層
４：固定化核酸を含む層５：多糖類層 （外５名） 図面の浄書（内容に蜜更なし） Ｆｉｇ、Ｉ Ｆｉｇ、２Ｆｉｇ、３ 手続補正書 昭和（１年３月Ｊ／日 ２、発明の名称 を叛りｔ宅Ｌｉｔ万と多すのタオ乍オニＬ くジオ！
戚１ｑデラη杓っ史イネ、 ｔ 、） ｔ”π住う１＜
ａ第１６、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 名 ４足 ヅカ°クス・インスト１し／シト・アクチ
ェホラ−２゛。 ４、代理人
を示す略図である。 に基体 ２：二酸化珪素層または２１ニ一酸
化珪素層 酸化アルミニウム層３：水素化珪素層
４：固定化核酸を含む層５：多糖類層 （外５名） 図面の浄書（内容に蜜更なし） Ｆｉｇ、Ｉ Ｆｉｇ、２Ｆｉｇ、３ 手続補正書 昭和（１年３月Ｊ／日 ２、発明の名称 を叛りｔ宅Ｌｉｔ万と多すのタオ乍オニＬ くジオ！
戚１ｑデラη杓っ史イネ、 ｔ 、） ｔ”π住う１＜
ａ第１６、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 名 ４足 ヅカ°クス・インスト１し／シト・アクチ
ェホラ−２゛。 ４、代理人
Claims (14)
- （１）試験すべき核酸が分析の間中固体担体に固定化さ
れる核酸、特にデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ
核酸（ＲＮＡ）の塩基配列の分析方法であって、変性核
酸を含む試験すべき液体試料を、特定の塩基配列を有す
る核酸鎖を化学的に結合させた担体の光反射表面と、接
触させることから成り、その際試料中に存在する変性核
酸の相補的塩基配列が担体表面に存在する核酸鎖とのハ
イブリダイゼーションによって結合され、それにより形
成された担体表面上の有機層の厚みの増加を光学的に測
定することから成る分析方法。 - （２）反射担体表面の反射特性の変化から厚みの増加を
測定する、特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （３）偏光の解析により厚みの増加を測定する、特許請
求の範囲第１項記載の方法。 - （４）干渉の測定により厚みの増加を測定する、特許請
求の範囲第２項記載の方法。 - （５）比較偏光の解析により厚みの増加を測定する、特
許請求の範囲第３項記載の方法。 - （６）一酸化珪素および二酸化珪素から成る二重層を有
する反射表面における光の反射中の干渉の変化から厚み
の増加を測定する、特許請求の範囲第４項記載の方法。 - （７）担体表面が光を反射するように形成されており、
その担体表面に特定の塩基配列を有する核酸鎖が化学的
に結合している、特許請求の範囲第１〜６項のいずれか
１項に記載の方法を行うための担体。 - （８）核酸鎖が共有結合によって担体表面に結合してい
る、特許請求の範囲第７項記載の担体。 - （９）担体の基体が珪素またはガラスから成る、特許請
求の範囲第７または８項記載の担体。 - （１０）担体基体がその光反射表面上に二酸化珪素層ま
たは酸化アルミニウム層を有し、前記層の上に官能性基
を有する水素化珪素の層が配置され、この水素化珪素層
に核酸鎖が共有結合している、特許請求の範囲第７〜９
項のいずれか１項に記載の担体。 - （１１）核酸鎖が多糖類から成る中間層を介して反射担
体表面に共有結合している、特許請求の範囲第７〜１０
項のいずれか１項に記載の担体。 - （１２）水素化珪素が官能基としてアミノ基またはエポ
キシ基を有する、特許請求の範囲第１０項記載の担体。 - （１３）官能基を有する水素化珪素を担体の反射表面上
に蒸留して付着させ、続いて純粋な核酸を溶解している
緩衝液からその上にインキュベーションによって核酸鎖
を固定化することから成る、特許請求の範囲第７項記載
の担体の製造方法。 - （１４）活性化された水素化珪素の層上にインキュベー
ションによって核酸鎖を固定化する前に、多糖類の層を
水溶液から付着させる、特許請求の範囲第１３項記載の
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3506703.9 | 1985-02-26 | ||
| DE3506703A DE3506703C1 (de) | 1985-02-26 | 1985-02-26 | Verfahren zur Sequenzanalyse von Nucleinsaeuren,insbesondere der Desoxyribonucleinsaeure (DNA) und der Ribonucleinsaeure (RNA),sowie Traeger zur Durchfuehrung des Verfahrens und Verfahren zur Herstellung des Traegers |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61227591A true JPS61227591A (ja) | 1986-10-09 |
| JPH0732720B2 JPH0732720B2 (ja) | 1995-04-12 |
Family
ID=6263575
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP61041356A Expired - Lifetime JPH0732720B2 (ja) | 1985-02-26 | 1986-02-26 | 核酸塩基配列の分析方法、その方法を行うための担体、および担体の製造方法 |
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| JP (1) | JPH0732720B2 (ja) |
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| US6270961B1 (en) * | 1987-04-01 | 2001-08-07 | Hyseq, Inc. | Methods and apparatus for DNA sequencing and DNA identification |
| US5202231A (en) * | 1987-04-01 | 1993-04-13 | Drmanac Radoje T | Method of sequencing of genomes by hybridization of oligonucleotide probes |
| US5525464A (en) * | 1987-04-01 | 1996-06-11 | Hyseq, Inc. | Method of sequencing by hybridization of oligonucleotide probes |
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| DE69232692T2 (de) * | 1991-02-11 | 2002-11-21 | Thermo Biostar Inc | Ellipsometrisches immuntestsystem und -methode mit einer dünnschicht-nachweisvorrichtung |
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| WO1995003401A1 (en) * | 1993-07-23 | 1995-02-02 | Hyseq, Inc. | Method for screening unknown organisms |
| DE19629243A1 (de) * | 1996-07-19 | 1998-01-29 | Udo Dr Ris | Verfahren zur quantitativen und/oder qualitativen Bestimmung von Atomen oder Molekülen |
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| US20020042048A1 (en) | 1997-01-16 | 2002-04-11 | Radoje Drmanac | Methods and compositions for detection or quantification of nucleic acid species |
| US6309824B1 (en) | 1997-01-16 | 2001-10-30 | Hyseq, Inc. | Methods for analyzing a target nucleic acid using immobilized heterogeneous mixtures of oligonucleotide probes |
| US6355419B1 (en) | 1998-04-27 | 2002-03-12 | Hyseq, Inc. | Preparation of pools of nucleic acids based on representation in a sample |
| JP3978153B2 (ja) | 2003-06-12 | 2007-09-19 | 富士フイルム株式会社 | 光干渉基材、標的検出用基材、並びに、標的検出装置及び標的検出方法 |
| EP1584914A1 (en) * | 2004-04-08 | 2005-10-12 | Sony Deutschland GmbH | A method of detecting a hybrid, formed of at least two species, on a substrate using ellipsometry |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59141599A (ja) * | 1983-01-27 | 1984-08-14 | エンゾー バイオケム，インコーポレイテッド | 非放射性の化学的にラベルされているポリヌクレオチドプロ−ブ |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1025772A (en) * | 1972-06-26 | 1978-02-07 | Ivar Giaever | Method and apparatus for detection and purification of proteins and antibodies |
| US4054646A (en) * | 1973-07-30 | 1977-10-18 | General Electric | Method and apparatus for detection of antibodies and antigens |
| US4129781A (en) * | 1976-05-17 | 1978-12-12 | Doyle W | Film thickness measuring apparatus and method |
| US4446237A (en) * | 1981-03-27 | 1984-05-01 | Life Technologies, Inc. | Method for detection of a suspect viral deoxyribonucleic acid in an acellular biological fluid |
| ATE30780T1 (de) * | 1981-06-22 | 1987-11-15 | Battelle Memorial Institute | Verfahren zum bestimmen bioaktiver substanzen. |
| CA1180647A (en) * | 1981-07-17 | 1985-01-08 | Cavit Akin | Light-emitting polynucleotide hybridization diagnostic method |
| DE3215484A1 (de) * | 1982-04-26 | 1983-11-03 | Sagax Instrument AB, 18302 Täby | Aus mehreren schichten bestehender schichtkoerper und verfahren zum nachweis und/oder messen der konzentration einer chemischen substanz, insbesondere biologischer herkunft |
-
1985
- 1985-02-26 DE DE3506703A patent/DE3506703C1/de not_active Expired
-
1986
- 1986-02-19 EP EP86102108A patent/EP0197266B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-02-26 JP JP61041356A patent/JPH0732720B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59141599A (ja) * | 1983-01-27 | 1984-08-14 | エンゾー バイオケム，インコーポレイテッド | 非放射性の化学的にラベルされているポリヌクレオチドプロ−ブ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0732720B2 (ja) | 1995-04-12 |
| EP0197266A3 (en) | 1987-01-21 |
| EP0197266B1 (de) | 1991-07-24 |
| EP0197266A2 (de) | 1986-10-15 |
| DE3506703C1 (de) | 1986-04-30 |
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