JPS61217762A - 高感度免疫測定法 - Google Patents
高感度免疫測定法Info
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- JPS61217762A JPS61217762A JP5823085A JP5823085A JPS61217762A JP S61217762 A JPS61217762 A JP S61217762A JP 5823085 A JP5823085 A JP 5823085A JP 5823085 A JP5823085 A JP 5823085A JP S61217762 A JPS61217762 A JP S61217762A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は免疫測定法、更に詳細には高感度固相免疫測定
法に関する。
法に関する。
従来、生物由来の物質を検出するためには多数の方法が
知られている。方法論的に１つの大きな群をなすのは免
疫測定法である。免疫測定法の極めて重要な一方法は固
相免疫測定法である。固相免疫測定法としては、アッセ
イ構成上からサンドウィッチ法、直接免疫測定法、間接
免疫測定法があり、標識物質からは、ラジオイムノアッ
セイ、エンザイムイムノアツセイ、蛍光イムノアッセイ
が既に知られている。また、その高感度化について、色
々な試みが特に標識抗体の作製法からなされてきた。例
えば、本発明者２らは、抗体をペプシン分解して得られ
るＦａｂ’ のヒンジ部のチオーμ基を利用して酵素
標識を行う方法（ヒンジ法）を開発しく特開昭５８−１
４９７００号）この製造方法が従来より行われてきた抗
体のアミノ基を利用する方法（ノンヒンジ法）より優れ
ており、高感度な測定を可能にすることを示した。
知られている。方法論的に１つの大きな群をなすのは免
疫測定法である。免疫測定法の極めて重要な一方法は固
相免疫測定法である。固相免疫測定法としては、アッセ
イ構成上からサンドウィッチ法、直接免疫測定法、間接
免疫測定法があり、標識物質からは、ラジオイムノアッ
セイ、エンザイムイムノアツセイ、蛍光イムノアッセイ
が既に知られている。また、その高感度化について、色
々な試みが特に標識抗体の作製法からなされてきた。例
えば、本発明者２らは、抗体をペプシン分解して得られ
るＦａｂ’ のヒンジ部のチオーμ基を利用して酵素
標識を行う方法（ヒンジ法）を開発しく特開昭５８−１
４９７００号）この製造方法が従来より行われてきた抗
体のアミノ基を利用する方法（ノンヒンジ法）より優れ
ており、高感度な測定を可能にすることを示した。
しかしながら、固相免疫測定法で最も問題となるのは、
抗体及び／又は標識抗体の固相への非特異吸着であり、
これによってパックグランドが高くなシ、高感度化の大
きな障害となっていた〔デイペロプメンタル イムノロ
ジー（Ｄｅｖｅｌｏｐ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ）第１８
巻、第２１９頁（１９８５））。従来よシこの非特異吸
着を防ぐためにウシ血清アμプミンで固相をコーティン
グする方法が用いられてきたが十分ではなかった。
抗体及び／又は標識抗体の固相への非特異吸着であり、
これによってパックグランドが高くなシ、高感度化の大
きな障害となっていた〔デイペロプメンタル イムノロ
ジー（Ｄｅｖｅｌｏｐ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ）第１８
巻、第２１９頁（１９８５））。従来よシこの非特異吸
着を防ぐためにウシ血清アμプミンで固相をコーティン
グする方法が用いられてきたが十分ではなかった。
本発明の目的は、パックグランドの低下により、感度よ
く被分析体を測定するための高感度固相免疫測定法を提
供することにある。
く被分析体を測定するための高感度固相免疫測定法を提
供することにある。
本発明を概説すれば、本発明は高感度免疫測定法に関す
る発明であって、被分析体を固相免疫測定法を用いて測
定するに際して、抗体及び／又は標識抗体による処理と
同時又は処理前に非特異抗体及び／又はその修飾タンパ
クによる処理を行うことを特徴とする。
る発明であって、被分析体を固相免疫測定法を用いて測
定するに際して、抗体及び／又は標識抗体による処理と
同時又は処理前に非特異抗体及び／又はその修飾タンパ
クによる処理を行うことを特徴とする。
本発明者らは前記した従来の技術の問題点にかんがみ、
よシ優れた感度で測定する方法について、特に標識抗体
の固相への非特異吸着を防ぐ方向から鋭意研究を重ねた
。
よシ優れた感度で測定する方法について、特に標識抗体
の固相への非特異吸着を防ぐ方向から鋭意研究を重ねた
。
そして本発明者らは、非特異抗体及び／又はその修飾タ
ンパク（以下ブロッカ−と称す）が抗体及び／又は標識
抗体の固相上での非特異吸着部位を覆い抗体及び／又は
標識抗体の非特異吸着を減少させ、パックグランドを低
下させ、ひいては高い測定感度を得ることを見出し本発
明を完成した。
ンパク（以下ブロッカ−と称す）が抗体及び／又は標識
抗体の固相上での非特異吸着部位を覆い抗体及び／又は
標識抗体の非特異吸着を減少させ、パックグランドを低
下させ、ひいては高い測定感度を得ることを見出し本発
明を完成した。
本発明で用いるブロッカ−としては、各種動物又はヒト
由来のあるいはそれらの細胞を培養して得られる非特異
的イムノグロブリン及びその化学的、酵素的修飾生成物
が用いられる。
由来のあるいはそれらの細胞を培養して得られる非特異
的イムノグロブリン及びその化学的、酵素的修飾生成物
が用いられる。
ブロッカ−は具体的には以下の様にして提供される。正
常動物血清より、硫安分画、ＤＥＡＲ−七ｐロースクロ
マトグフフィーによす非特ＡＩｇＧ が提供される。
常動物血清より、硫安分画、ＤＥＡＲ−七ｐロースクロ
マトグフフィーによす非特ＡＩｇＧ が提供される。
このＩｇＧ をペプシンで処理することで非特異’？（
＆ｂ’）ｘ が提供される。
＆ｂ’）ｘ が提供される。
このＦ（ａｂ’）ｔを２−メ〜カプトエタノー〃アミン
で還元した後、Ｎ−エチ〜マＶイミド、若しくはモノヨ
ードアセテート等でチオール基をブロックすることでＦ
ａｂ’が提供される。またこれらを牛血清アルブミン、
不活性化酵素などの他のタンパクと結合させた複合体と
して提供される。
で還元した後、Ｎ−エチ〜マＶイミド、若しくはモノヨ
ードアセテート等でチオール基をブロックすることでＦ
ａｂ’が提供される。またこれらを牛血清アルブミン、
不活性化酵素などの他のタンパクと結合させた複合体と
して提供される。
ブロッカ−の起源はいずれでもよいが中でも標識抗体Ｆ
ａｂ’の場合は、それを作成した種と同じ種から得られ
る非特異的イムノグロブリンＧを化学的及び酵素的処理
して作成されるＦａｂ’あるいはＦ（ａｂ’）２が最も
適している。
ａｂ’の場合は、それを作成した種と同じ種から得られ
る非特異的イムノグロブリンＧを化学的及び酵素的処理
して作成されるＦａｂ’あるいはＦ（ａｂ’）２が最も
適している。
またブロッカ−処理工程は標識抗体処理工程と同時又は
処理前いずれでも良いが簡便さの点から同時処理が望ま
しい。
処理前いずれでも良いが簡便さの点から同時処理が望ま
しい。
なお、標識抗体とは、抗体又は抗体を化学的あるいは酵
素的処理によって限定分解して生ずる分解物に、放射活
性物質、蛍光色素、酵素、又はそれらを二次的に結合さ
せるための構造を含む基（例えばビオチン）あるいは二
次的に活性化させるための構造を含む基（例えば補酵素
）を化学的に結合させた生成物である。
素的処理によって限定分解して生ずる分解物に、放射活
性物質、蛍光色素、酵素、又はそれらを二次的に結合さ
せるための構造を含む基（例えばビオチン）あるいは二
次的に活性化させるための構造を含む基（例えば補酵素
）を化学的に結合させた生成物である。
本発明の方法は、多数の固相免疫測定法で実施される。
以下にこれらの可能な固相免疫測定法のいくつかにつき
説明する。
説明する。
液体試料中の被分析体である抗原を測定するためのサン
ドウィッチ型アッセイにおいては、被分析体と反応する
抗体を固相に付着させることができる。得られた固相を
被分析体と反応させ、次いで、この成績体を被分析体に
反応する標識抗体と、ブロッカ−とからなる混合物と処
理し、得られた標識抗体サンドウィッチを、該標識物質
に特異的な方法で測定することを特徴とする被分析体の
パックグランドの低い高感度測定法に使用される。もち
ろん、標識抗体サンドウィッチは、公知の２ステツプ法
でも、１ステツプ法でも得られる。特ｌｃ１ステップサ
ンドウィッチ型アッセイには認識部位の異なるモノクロ
ーナμ抗体が適している。
ドウィッチ型アッセイにおいては、被分析体と反応する
抗体を固相に付着させることができる。得られた固相を
被分析体と反応させ、次いで、この成績体を被分析体に
反応する標識抗体と、ブロッカ−とからなる混合物と処
理し、得られた標識抗体サンドウィッチを、該標識物質
に特異的な方法で測定することを特徴とする被分析体の
パックグランドの低い高感度測定法に使用される。もち
ろん、標識抗体サンドウィッチは、公知の２ステツプ法
でも、１ステツプ法でも得られる。特ｌｃ１ステップサ
ンドウィッチ型アッセイには認識部位の異なるモノクロ
ーナμ抗体が適している。
他の方法として直接免疫測定法においては被分析体を固
相に付着させることができる。得られた固相を被分析体
と反応する標識抗体とブロッカ−とからなる混合物で処
理し、標識物質に特異的な方法で測定することを特徴と
する特許折体の高感度測定法が提供される。
相に付着させることができる。得られた固相を被分析体
と反応する標識抗体とブロッカ−とからなる混合物で処
理し、標識物質に特異的な方法で測定することを特徴と
する特許折体の高感度測定法が提供される。
上述したサンドウィッチ型アッセイ及び直接免疫測定法
において標識抗体による処理の前にブロッカ−処理を行
ってもよい。
において標識抗体による処理の前にブロッカ−処理を行
ってもよい。
更に、間接免疫測定法においては、固相化された被分析
体と反応する第１の抗体と、この第１の抗体と反応する
標識された第２の抗体が用いられる。この場合被分析体
と反応する第１の抗体をブロッカ−処理後あるいはブロ
ッカ−存在下に結合させることを特徴とする高感度測定
法が提供される。この時、第１の抗体と異なる動物種由
来のブロッカ−を用いなければならず、特に標識された
第２の抗体と同一の動物種由来のブロッカ−が最も適し
ている。
体と反応する第１の抗体と、この第１の抗体と反応する
標識された第２の抗体が用いられる。この場合被分析体
と反応する第１の抗体をブロッカ−処理後あるいはブロ
ッカ−存在下に結合させることを特徴とする高感度測定
法が提供される。この時、第１の抗体と異なる動物種由
来のブロッカ−を用いなければならず、特に標識された
第２の抗体と同一の動物種由来のブロッカ−が最も適し
ている。
なお、直接又は間接免疫測定法は、免疫組織化学染色、
ニトロセμロース膜上での被分析体の検出、免疫電顕に
応用される。
ニトロセμロース膜上での被分析体の検出、免疫電顕に
応用される。
以下本発明を更に詳細に実施例をもって説明するが本発
明はこれら実施例により限定されるものではない。
明はこれら実施例により限定されるものではない。
実施例−１と）ＩｇＥの高感度固相免疫測定法（ヤギ抗
ヒトＩｇＥ ） ＩｇＧ−固相及びアフイニテイ精製（
ヤギ抗ヒトＩｇｇ ） Ｆａｂ’−β−Ｄ−ガヲクトシ
ダーゼ複合体を用いたヒトＩｇＥのサンドウィッチ酵素
免疫測定法の測定感度に対するヤギあるいはウサギ非特
異Ｉｇ（）、 Ｆ（ａｂ’）２． Ｆａｂ’の効果につ
いて検討した。抗原である標準ヒトＩｇＥ血清はベーリ
ングウエρケ社（西独国、マー〜プμグ）より購入した
。ＩｇＫの算出には２．４ ｎｇ／ＩＵ （ジャーナ
ル オプ アレμギーアンドクリニカμ イムノロジー
（Ｊ、 ＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、
）第４９巻、第１８９頁、（１９７２））分子量２０
Ｑ、ＯＯＯを用いた。
ヒトＩｇＥ ） ＩｇＧ−固相及びアフイニテイ精製（
ヤギ抗ヒトＩｇｇ ） Ｆａｂ’−β−Ｄ−ガヲクトシ
ダーゼ複合体を用いたヒトＩｇＥのサンドウィッチ酵素
免疫測定法の測定感度に対するヤギあるいはウサギ非特
異Ｉｇ（）、 Ｆ（ａｂ’）２． Ｆａｂ’の効果につ
いて検討した。抗原である標準ヒトＩｇＥ血清はベーリ
ングウエρケ社（西独国、マー〜プμグ）より購入した
。ＩｇＫの算出には２．４ ｎｇ／ＩＵ （ジャーナ
ル オプ アレμギーアンドクリニカμ イムノロジー
（Ｊ、 ＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、
）第４９巻、第１８９頁、（１９７２））分子量２０
Ｑ、ＯＯＯを用いた。
抗体としてヤギ抗ヒトＩｇｇ血清は医学生物学研究所（
名古屋）よシ購入した。この血清をＮ ａ２ Ｓ ０４
で塩析した後、ＤＥＡＥ−七μロースカフム及びアフ
ィニティーカラムを用いＩｇＧを得、このＩｇＧをペプ
シン消化してＦ（ａｂ’）２を得、とのＦ（ａｂ’）ｔ
を還元した後、Ｆａｂ’ を得た〔ジャーす〜 オプ
イムノアッセイ（Ｊ 、 Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
）第４巻、第２０９頁（１９８３））０ 抗体（ＩｇＧ ）の結合した固相はポリスチレンボーμ
〔直径五２ｍ プＶシジョン プラスチック ポール
社（イリノイ州シカゴ）！１ｉｔ）の表面上に抗体（Ｉ
ｇＧ ）を物理的吸着によって不溶化することで得られ
た〔スカンジナビアン ジャーナμ オブ イムノロシ
イ（５ｃａｎｄ、 Ｊ。
名古屋）よシ購入した。この血清をＮ ａ２ Ｓ ０４
で塩析した後、ＤＥＡＥ−七μロースカフム及びアフ
ィニティーカラムを用いＩｇＧを得、このＩｇＧをペプ
シン消化してＦ（ａｂ’）２を得、とのＦ（ａｂ’）ｔ
を還元した後、Ｆａｂ’ を得た〔ジャーす〜 オプ
イムノアッセイ（Ｊ 、 Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
）第４巻、第２０９頁（１９８３））０ 抗体（ＩｇＧ ）の結合した固相はポリスチレンボーμ
〔直径五２ｍ プＶシジョン プラスチック ポール
社（イリノイ州シカゴ）！１ｉｔ）の表面上に抗体（Ｉ
ｇＧ ）を物理的吸着によって不溶化することで得られ
た〔スカンジナビアン ジャーナμ オブ イムノロシ
イ（５ｃａｎｄ、 Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ ）第８巻、第４５頁（１９７Ｂ））。
β−Ｄ−ガラクトシダーゼーＦａｂ’複合体は大腸菌由
来のβ−Ｄ−ガフクトシダーゼとＦａｂ’ｔ Ｎ ｔ
Ｎ’ −０−フェニレンシマレイミドを用いジャーナル
オプ イムノアッセイ、第４巻、第２０９頁（１９８
３）記載の方法で結合させた。β−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ１分子に対するＦａｔ）’の結合数は１．７−２．９
であった。複合体の量の算定にはβ−Ｄ−ガフクトシダ
ーゼ活性を用いた〔ジャーナμ オプ イムノアッセイ
、第４巻、第２０９頁（１９８３））。
来のβ−Ｄ−ガフクトシダーゼとＦａｂ’ｔ Ｎ ｔ
Ｎ’ −０−フェニレンシマレイミドを用いジャーナル
オプ イムノアッセイ、第４巻、第２０９頁（１９８
３）記載の方法で結合させた。β−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ１分子に対するＦａｔ）’の結合数は１．７−２．９
であった。複合体の量の算定にはβ−Ｄ−ガフクトシダ
ーゼ活性を用いた〔ジャーナμ オプ イムノアッセイ
、第４巻、第２０９頁（１９８３））。
サンドウィッチ酵素免疫測定法は以下の様に行った。す
なわち、抗体−ポリスチレンボーｐを抗原と５７℃で４
時間インキュベートした後、４℃で一夜放置した。抗原
はＮａＣ１１：Ｌ Ｉ Ｍ。
なわち、抗体−ポリスチレンボーｐを抗原と５７℃で４
時間インキュベートした後、４℃で一夜放置した。抗原
はＮａＣ１１：Ｌ Ｉ Ｍ。
ＭｇＣｌ２ １煙Ｍ、ウシ血清アμプミン１ ｆ／を及
びＮａＮ３１ｆ ／ Ｌを含むリン酸ソーダバッファー
（１０νｎＭ 、 ｐＨ７，０）からなるバッファーＡ
によって希釈し、総容量ｏ、１５−とじた。
びＮａＮ３１ｆ ／ Ｌを含むリン酸ソーダバッファー
（１０νｎＭ 、 ｐＨ７，０）からなるバッファーＡ
によって希釈し、総容量ｏ、１５−とじた。
その後ポリスチレンボーμをバッファーＡ２−で２回洗
浄した。このポリスチレンボーｐをアフイニテイ精製Ｆ
ａｂ’ −７１−Ｄ−ガフクトシダーゼ複合体〔１０ｆ
モＡｚ（６，３ｎｇ）／チューブ〕と２０℃４時間イン
キュベートした。この時、ブロッカ−すなわちヤギある
いはウサギの非特異ＩｇＧ、 Ｆ（ａｂ’ ）２ 、
Ｆａｂ’を共存させ、総容量［１，１５−とした。イン
キュベーション後、一系列は２−のバッファーＡを加え
吸引し２回洗浄した（イ法）。また、他の系列では２−
のバッファーＡを加え５０℃１０分インキュベートし、
吸引して取去り、もう一度同じ操作を繰返して洗浄した
（口広）。以上の操作後、ポリスチＶンボーμに吸着し
た酵素活性を測定した。
浄した。このポリスチレンボーｐをアフイニテイ精製Ｆ
ａｂ’ −７１−Ｄ−ガフクトシダーゼ複合体〔１０ｆ
モＡｚ（６，３ｎｇ）／チューブ〕と２０℃４時間イン
キュベートした。この時、ブロッカ−すなわちヤギある
いはウサギの非特異ＩｇＧ、 Ｆ（ａｂ’ ）２ 、
Ｆａｂ’を共存させ、総容量［１，１５−とした。イン
キュベーション後、一系列は２−のバッファーＡを加え
吸引し２回洗浄した（イ法）。また、他の系列では２−
のバッファーＡを加え５０℃１０分インキュベートし、
吸引して取去り、もう一度同じ操作を繰返して洗浄した
（口広）。以上の操作後、ポリスチＶンボーμに吸着し
た酵素活性を測定した。
β−Ｄ−ガフクトシダーゼ活性は４−メチルウンベリフ
エリμβ−Ｄ−ガフクトシドを用いて３０℃−ｃｂａ分
反応１．、ｌＸ１０−”Ｍ ４−、Ｉ’チルウンベリ
フェロンを標準として測定した〔アンナｙス クリニカ
μ バイオケミストリー （Ａｎｎ、 Ｃ１１ｎ、 Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、 ）第２１巻、第３１０頁（１９８４）
）。なお、ブロッカ−は以下の様に製造される。すなわ
ちヤギあるいはウサギの正常血清をＮａ２ＳＯ４で塩析
した後、ＤＥＡＲ−セルロースカラムを用いＩｇＧを得
、このＩｇＧをペプシン消化してＦ（ａｂ’）２を得、
このＦ（ａｂ’）２を還元した後Ｎ−エチルマレイミド
（あるいはモノヨードアセテート〕でチオーμ基をブロ
ックしてＦａｂ’が各々調整される。
エリμβ−Ｄ−ガフクトシドを用いて３０℃−ｃｂａ分
反応１．、ｌＸ１０−”Ｍ ４−、Ｉ’チルウンベリ
フェロンを標準として測定した〔アンナｙス クリニカ
μ バイオケミストリー （Ａｎｎ、 Ｃ１１ｎ、 Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、 ）第２１巻、第３１０頁（１９８４）
）。なお、ブロッカ−は以下の様に製造される。すなわ
ちヤギあるいはウサギの正常血清をＮａ２ＳＯ４で塩析
した後、ＤＥＡＲ−セルロースカラムを用いＩｇＧを得
、このＩｇＧをペプシン消化してＦ（ａｂ’）２を得、
このＦ（ａｂ’）２を還元した後Ｎ−エチルマレイミド
（あるいはモノヨードアセテート〕でチオーμ基をブロ
ックしてＦａｂ’が各々調整される。
結果を第１図に示す。すなわち第１図は、と）ＩｇＥの
固相免疫測定法におけるブロッカ−による非特異吸着の
低下を固相へ吸着した酵素量（％、縦軸）とブロッカ−
量（−２／チユーブ、横軸）の関係で示すグラフである
。
固相免疫測定法におけるブロッカ−による非特異吸着の
低下を固相へ吸着した酵素量（％、縦軸）とブロッカ−
量（−２／チユーブ、横軸）の関係で示すグラフである
。
第１図中、白丸はバッファーＡでイ法により洗浄］７た
時の（ヤギ抗ヒトＩｇＥ） Ｆａｂ’−β−Ｄ−ガフク
トシダーゼ複合体の固相への特異吸着を、白玉角はバッ
ファーＡでイ法により洗浄した時の同複合体の固相への
非特異吸着を、黒丸はバッファーＡで２法により洗浄し
た時の同複合体の固相への特異吸着を、黒三角は′バッ
ファーＡで２法により洗浄した時の同複合体の固相への
非特異吸着を各々示す。ＩｇＥはｌ１ｌＬ０３ＩＵ／チ
ユーブで用いた。また、Ｆａｂ’−酵素複合体の特異吸
着量の算定は抗原存在下で固相に吸着した複合体量から
、抗原非存在下で固相に吸着した複合体量を差し引くこ
とで求めた。
時の（ヤギ抗ヒトＩｇＥ） Ｆａｂ’−β−Ｄ−ガフク
トシダーゼ複合体の固相への特異吸着を、白玉角はバッ
ファーＡでイ法により洗浄した時の同複合体の固相への
非特異吸着を、黒丸はバッファーＡで２法により洗浄し
た時の同複合体の固相への特異吸着を、黒三角は′バッ
ファーＡで２法により洗浄した時の同複合体の固相への
非特異吸着を各々示す。ＩｇＥはｌ１ｌＬ０３ＩＵ／チ
ユーブで用いた。また、Ｆａｂ’−酵素複合体の特異吸
着量の算定は抗原存在下で固相に吸着した複合体量から
、抗原非存在下で固相に吸着した複合体量を差し引くこ
とで求めた。
複合体量は、β−Ｄ−ガフクトシダーゼ活性會り算出１
７た。 □ 固相を標識抗体と反応させる際に、ヤギ非特異ＩｇＧ
、 Ｆ（ａｂ’ ）２あるいはＦａｂ’１００．ｃｓ
＆／チューブを加えることＫよシ、加えたＦａｂ’ −
酵素複合体の固相への非特異吸着量がα００５５導から
０．０００７〜ａｏ Ｏ１０ｃ６へ減少した。
７た。 □ 固相を標識抗体と反応させる際に、ヤギ非特異ＩｇＧ
、 Ｆ（ａｂ’ ）２あるいはＦａｂ’１００．ｃｓ
＆／チューブを加えることＫよシ、加えたＦａｂ’ −
酵素複合体の固相への非特異吸着量がα００５５導から
０．０００７〜ａｏ Ｏ１０ｃ６へ減少した。
ウサギ非特異Ｉ ｇＧ、 Ｆ （ａｂ’）ｚ ＋ ｔａ
ｂ’はヤギ非特異ＩｇＧ、 Ｆ（ａｂ’）２ 、 Ｆａ
ｂ’に比べ効果が少なかった。
ｂ’はヤギ非特異ＩｇＧ、 Ｆ（ａｂ’）２ 、 Ｆａ
ｂ’に比べ効果が少なかった。
他方、上記の方法で工ｇＨの測定感度について検討した
。結果を第２図に示す。すなわち第２図は、ブロッカ−
によるパックグツ２ンドの低下と高感度化を蛍光強度（
縦軸プとＩｇＥ ＊ （溝工υ／チューブ、横軸）の関
係で示すグラフである。
。結果を第２図に示す。すなわち第２図は、ブロッカ−
によるパックグツ２ンドの低下と高感度化を蛍光強度（
縦軸プとＩｇＥ ＊ （溝工υ／チューブ、横軸）の関
係で示すグラフである。
第２図中、白丸は複合体とインキュベートしバッファー
Ａでイ法で洗浄した場合、白玉角は、複合体をヤギの非
特異Ｋ（ａｂ’）２（１００ｆｉ？ ／チューブ）存在
下でインキュベートし、口広テパツファ−Ａを用いて洗
浄した場合の標準曲線を各々示す。測定感度は抗原存在
下、及び非存在下でポリスチレンボーμに吸着したβ−
Ｄ−ガラクトシダーゼ活性の差からｔ−検定を用いて決
定した。複合体をヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）２存在下でイ
ンキュベートすることで、測定感度は（Ｌ １ ｍ Ｕ
（１ａ−ｆ−ＩＷ ） ／チューブからα０１フルＵ
（α１ａモ／Ｉ／）／チューブへ１０倍改善された。
Ａでイ法で洗浄した場合、白玉角は、複合体をヤギの非
特異Ｋ（ａｂ’）２（１００ｆｉ？ ／チューブ）存在
下でインキュベートし、口広テパツファ−Ａを用いて洗
浄した場合の標準曲線を各々示す。測定感度は抗原存在
下、及び非存在下でポリスチレンボーμに吸着したβ−
Ｄ−ガラクトシダーゼ活性の差からｔ−検定を用いて決
定した。複合体をヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）２存在下でイ
ンキュベートすることで、測定感度は（Ｌ １ ｍ Ｕ
（１ａ−ｆ−ＩＷ ） ／チューブからα０１フルＵ
（α１ａモ／Ｉ／）／チューブへ１０倍改善された。
実施例−２ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の高感
度固相免疫測定法 （ウサギ抗ｈＣＧ ） ＩｇＧ−固相及びアフイニテイ
精製（ウサギ抗ｈＣＧ ） Ｆａｂ’ −β−Ｄ−ガフ
クトシダーゼ又はアフイニテイ精製（ウサギ抗ｈｃＧ）
Ｆａｂ’−西洋ワサビベルオキシダーゼ複合体を用いた
ｈＣＧのサンドウィッチ酵素免疫測定法の測定感度に対
するウサギ非特異Ｆ（ａｂ’）ｚ＋Ｆａｂ’の効果につ
いて検討した。抗原であるｈｃｏ バカ！ビオヘム ベ
ーリング社（カリフォルニア州すンジエゴ）よシ購入し
た。ｈＣ（） 量の算出には１２．０００ ＩＵ／Ｗ、
分子量３スフ００を用いた〔ジャーナμ オプ バイオ
ロジカルケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
）第２４４巻、第５６７頁（１９６？））。抗体として
（ウサギ抗ｈＣＧ ） ＩｇＧはダコ バッッ社（デン
マーク国グロストフツブ〕より購入した。この抗体Ｉｇ
Ｇから実施例−１と同様にＦ（ａｂ’ ）２ 、 Ｆａ
ｂ’を得た。抗体ＩｇＧの結合した固相は実施例−１と
同様にして製造した。β−Ｄ−ガラクトシダーゼーＦａ
ｂ’複合体の製造は実施例−１と同様に行った。他方、
べμオキＶダーゼーＦａｂ’複合体はスクシンイミジＩ
Ｖ −４−（Ｎ−マレイミドメチＩｖ）シクロヘキサン
−１−力μボキシレート〔ジーペン ケミカル社（東京
）製〕を用い、ジャーナμ オプ イムノアッセイ第４
巻、第２０９頁（１９８３）記載の方法で結合させた。
度固相免疫測定法 （ウサギ抗ｈＣＧ ） ＩｇＧ−固相及びアフイニテイ
精製（ウサギ抗ｈＣＧ ） Ｆａｂ’ −β−Ｄ−ガフ
クトシダーゼ又はアフイニテイ精製（ウサギ抗ｈｃＧ）
Ｆａｂ’−西洋ワサビベルオキシダーゼ複合体を用いた
ｈＣＧのサンドウィッチ酵素免疫測定法の測定感度に対
するウサギ非特異Ｆ（ａｂ’）ｚ＋Ｆａｂ’の効果につ
いて検討した。抗原であるｈｃｏ バカ！ビオヘム ベ
ーリング社（カリフォルニア州すンジエゴ）よシ購入し
た。ｈＣ（） 量の算出には１２．０００ ＩＵ／Ｗ、
分子量３スフ００を用いた〔ジャーナμ オプ バイオ
ロジカルケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
）第２４４巻、第５６７頁（１９６？））。抗体として
（ウサギ抗ｈＣＧ ） ＩｇＧはダコ バッッ社（デン
マーク国グロストフツブ〕より購入した。この抗体Ｉｇ
Ｇから実施例−１と同様にＦ（ａｂ’ ）２ 、 Ｆａ
ｂ’を得た。抗体ＩｇＧの結合した固相は実施例−１と
同様にして製造した。β−Ｄ−ガラクトシダーゼーＦａ
ｂ’複合体の製造は実施例−１と同様に行った。他方、
べμオキＶダーゼーＦａｂ’複合体はスクシンイミジＩ
Ｖ −４−（Ｎ−マレイミドメチＩｖ）シクロヘキサン
−１−力μボキシレート〔ジーペン ケミカル社（東京
）製〕を用い、ジャーナμ オプ イムノアッセイ第４
巻、第２０９頁（１９８３）記載の方法で結合させた。
べμオキシダーゼーＦａｂ’複合体の量の算定には４０
３ ｎｍの吸収を用い、β−Ｄ−ガフクトシダーゼーＦ
ａｂ’複合体の量の算定は実施例−１と同様に行った〔
ジャーナ！ オプ イムノアッセイ第４巻、第２０９頁
（１９１５）］。
３ ｎｍの吸収を用い、β−Ｄ−ガフクトシダーゼーＦ
ａｂ’複合体の量の算定は実施例−１と同様に行った〔
ジャーナ！ オプ イムノアッセイ第４巻、第２０９頁
（１９１５）］。
サンドウィッチ酵素免疫測定法は実施例−１と同様に行
った。ただし、べμオキシダーゼーＦａｂ’ 複合体の
場合は、バッファーにはＱ、１ＭＮａＣ１ヲ含むリン酸
ソーダバッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７，０）（パ”／７
７−Ｂ）を用いた。また、ぺｐオキシダーゼ−Ｆａｂ’
は５８０ｆ七ｐ（ｓｏｎｇ）／チューブとなる様に加え
た。酵Ｘ活性は３− （ｐ−ヒドロキシフエニｌＬ／）
プロピオネートを用いて３０℃１００分アッセイし、１
２′ｑ／Ｌキニンを標準として測定した〔アナリテイカ
μレターズ（Ａｎａｌ、 Ｌｅｔ、ｔ、 ）第１６巻、
第１５０９頁（１９８５））。
った。ただし、べμオキシダーゼーＦａｂ’ 複合体の
場合は、バッファーにはＱ、１ＭＮａＣ１ヲ含むリン酸
ソーダバッファー（１０ｍＭ、ｐＨ７，０）（パ”／７
７−Ｂ）を用いた。また、ぺｐオキシダーゼ−Ｆａｂ’
は５８０ｆ七ｐ（ｓｏｎｇ）／チューブとなる様に加え
た。酵Ｘ活性は３− （ｐ−ヒドロキシフエニｌＬ／）
プロピオネートを用いて３０℃１００分アッセイし、１
２′ｑ／Ｌキニンを標準として測定した〔アナリテイカ
μレターズ（Ａｎａｌ、 Ｌｅｔ、ｔ、 ）第１６巻、
第１５０９頁（１９８５））。
結果を第５図に示す。すなわち第３図は、ｈＣＧの固相
免疫測定法におけるブロッカ−による非特異吸着の低下
を固相へ吸着した酵素量（チ、縦軸）とブロッカ−量（
ｔｓ？／チューブ、酵素−Ｆａｔ）’複合体の固相への
特異吸着を、黒丸は口広で洗浄を行った時の複合体の固
相への特異吸着を、白玉角はイ法で洗浄を行った時の、
複合体の固相への非特異吸着を、黒三角は口広で洗浄を
行った時の複合体の固相への非特異吸着を各々示す。
免疫測定法におけるブロッカ−による非特異吸着の低下
を固相へ吸着した酵素量（チ、縦軸）とブロッカ−量（
ｔｓ？／チューブ、酵素−Ｆａｔ）’複合体の固相への
特異吸着を、黒丸は口広で洗浄を行った時の複合体の固
相への特異吸着を、白玉角はイ法で洗浄を行った時の、
複合体の固相への非特異吸着を、黒三角は口広で洗浄を
行った時の複合体の固相への非特異吸着を各々示す。
なお、ｈＣＧは１１ ｍＵ／チューブとなるように添加
した。
した。
ウサギ非特異Ｆ（ａｂ’）２及びＦａｂ’ １００
ｔｓｆ／チューブを加えることによりβ−Ｄ−ガヲクト
シダーゼーＦａｂ’複合体の固相への非特異吸着はＱ、
０４０係から０．００２６−Ｑ、００５５チへ減少した
。一方、べμオキシダーゼーＦａｂ’複合体の固相への
非特異吸着もブロッカ−の添加によｆｉ（ＬＯ０１８’
ｌから０００１チへ減少した。他方、上記の方法でｈｃ
ｃ）の測定感度について検討した。
ｔｓｆ／チューブを加えることによりβ−Ｄ−ガヲクト
シダーゼーＦａｂ’複合体の固相への非特異吸着はＱ、
０４０係から０．００２６−Ｑ、００５５チへ減少した
。一方、べμオキシダーゼーＦａｂ’複合体の固相への
非特異吸着もブロッカ−の添加によｆｉ（ＬＯ０１８’
ｌから０００１チへ減少した。他方、上記の方法でｈｃ
ｃ）の測定感度について検討した。
結果を第４図に示す。すなわち第４図は、ブロッカ−に
よるパツクグフ〆ンドの低下と高感度化を、蛍光強度（
縦軸）とｈＣＧ量（μＵ、横軸）の関係で示すグラフで
ある。第４図中白丸は、べμオキシダーゼＦａｂ’複合
体とインキュベートしバッファーＢでイ法で洗浄した場
合、白玉角は、べμオキシダーゼーＦａｂ’複合体をウ
サギ非特異ＦＣａｂ’）ｚ（１００μ２／チユーブ）存
在下でインキュベートし、口広でバッファーＢを用いて
洗浄した場合の標準曲線を各々示す。
よるパツクグフ〆ンドの低下と高感度化を、蛍光強度（
縦軸）とｈＣＧ量（μＵ、横軸）の関係で示すグラフで
ある。第４図中白丸は、べμオキシダーゼＦａｂ’複合
体とインキュベートしバッファーＢでイ法で洗浄した場
合、白玉角は、べμオキシダーゼーＦａｂ’複合体をウ
サギ非特異ＦＣａｂ’）ｚ（１００μ２／チユーブ）存
在下でインキュベートし、口広でバッファーＢを用いて
洗浄した場合の標準曲線を各々示す。
測定感度は、複合体をウサギ非特異Ｆ（ａｂ’）２存在
下でインキュベートすることで、１μＵ（２６−ｆ：／
Ｌ／ ） ／チューブから［Ｌ３μＵ（Ｑ、 ７ ａ−
ｆ：Ａ／）／チューブへ３倍改善され丸。
下でインキュベートすることで、１μＵ（２６−ｆ：／
Ｌ／ ） ／チューブから［Ｌ３μＵ（Ｑ、 ７ ａ−
ｆ：Ａ／）／チューブへ３倍改善され丸。
実施例−５ヒトーα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）の高
感度固相免疫測定法 （ヤギ抗ヒト−ＡＦＰ）ＩｇＧ−固相及び、アブイニテ
イ精製（ヤギ抗ヒトＡＦＰ）Ｆａｂ’−β−Ｄ−ガフク
トシダーゼ複合体を用いた。ヒトＡＦＰのサンドウィッ
チ酵素免疫測定法の測定感度に対するヤギ非特異Ｆ（ａ
ｂ’）２の効果について検討した。抗原であると）ＡＦ
Ｐはベーリングウエμヶ社より購入した。ＡＦ’Ｐ量の
算出には分子量７０． ＯＯＯを用いた〔クリ二カμキ
ミカ アクタ（Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｉｎ、 Ａｃｔａ）第
８９巻、第１７３頁（１９７８））。抗体としてヤギ抗
ヒトＡＦＰ血清は医学生物学研究所（名古屋〕より購入
した。このヤギ抗ヒトＡＦＰ血清を実施例−１と同様の
方法で精製し、ヤギ抗ヒトＡ Ｆ Ｐ ＩｇＧ、 Ｆ（
ａｂ’）２． Ｆａｂ’ を各々得た。抗体ＩｇＧの結
合した固相、β−Ｄ−ガラク）ｙダ−ゼーＦａｂ’ 複
合体の製造は実施例−１と同様の方法で行った。サンド
ウィッチ酵素免疫測定法は実施例−１と同様に行った。
感度固相免疫測定法 （ヤギ抗ヒト−ＡＦＰ）ＩｇＧ−固相及び、アブイニテ
イ精製（ヤギ抗ヒトＡＦＰ）Ｆａｂ’−β−Ｄ−ガフク
トシダーゼ複合体を用いた。ヒトＡＦＰのサンドウィッ
チ酵素免疫測定法の測定感度に対するヤギ非特異Ｆ（ａ
ｂ’）２の効果について検討した。抗原であると）ＡＦ
Ｐはベーリングウエμヶ社より購入した。ＡＦ’Ｐ量の
算出には分子量７０． ＯＯＯを用いた〔クリ二カμキ
ミカ アクタ（Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｉｎ、 Ａｃｔａ）第
８９巻、第１７３頁（１９７８））。抗体としてヤギ抗
ヒトＡＦＰ血清は医学生物学研究所（名古屋〕より購入
した。このヤギ抗ヒトＡＦＰ血清を実施例−１と同様の
方法で精製し、ヤギ抗ヒトＡ Ｆ Ｐ ＩｇＧ、 Ｆ（
ａｂ’）２． Ｆａｂ’ を各々得た。抗体ＩｇＧの結
合した固相、β−Ｄ−ガラク）ｙダ−ゼーＦａｂ’ 複
合体の製造は実施例−１と同様の方法で行った。サンド
ウィッチ酵素免疫測定法は実施例−１と同様に行った。
結果を第５図に示す。すなわち第５図は、ヒ）ＡＦＰの
固相免疫測定法におけるブロッカ−によるパックグラン
ドの低下と高感度化を蛍光強度（縦軸）と人ＦＰ量（ａ
モ／／／チューブ、横軸）の関係で示すグラフである。
固相免疫測定法におけるブロッカ−によるパックグラン
ドの低下と高感度化を蛍光強度（縦軸）と人ＦＰ量（ａ
モ／／／チューブ、横軸）の関係で示すグラフである。
第５図中白丸は、β−Ｄ−ガフクトシダーゼＦａｂ’複
合体とインキュベートし、バッファーＡを用いイ法で洗
浄した場合、白玉角はβ−ｐ−ガラクトシダーゼ−Ｆａ
ｂ’複合体をヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）１（１００μｆ／
チユーブ）存在下でインキュベートし、バッファーＡを
用い口広で洗浄した場合の標準曲線を各々示す。
合体とインキュベートし、バッファーＡを用いイ法で洗
浄した場合、白玉角はβ−ｐ−ガラクトシダーゼ−Ｆａ
ｂ’複合体をヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）１（１００μｆ／
チユーブ）存在下でインキュベートし、バッファーＡを
用い口広で洗浄した場合の標準曲線を各々示す。
測定感度は、複合体をヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）１存在下
でインキュベートすることで７０ ｆｆ （１ａモｆｉ
／）／チューブから２１ｆｆ（（Ｌ３ａモｆｉ／）／チ
ューブへ３倍改善された。
でインキュベートすることで７０ ｆｆ （１ａモｆｉ
／）／チューブから２１ｆｆ（（Ｌ３ａモｆｉ／）／チ
ューブへ３倍改善された。
実施例−４ヒト・α−フ二トプロテイン（ＡＦＰ ）の
高感度固相免疫測定法 （ヤギ抗ヒトＡＦＰ）ＩｇＧ−固相及びアフイニテイ精
製（ヤギ抗ヒトＡＦＰ）Ｆａｂ’−ぺμオキシダーゼ複
合体を用いたヒトＡＦＰのサンドウィッチ酵素免疫測定
法の測定感度に対するヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）１の効果
について実施例−３と同様の方法で検討した。ただし、
ペルオキシダーゼ−Ｆａｂ’複合体は実施例−２の方法
で、またバッファーにはバッファーＢを用いた。
高感度固相免疫測定法 （ヤギ抗ヒトＡＦＰ）ＩｇＧ−固相及びアフイニテイ精
製（ヤギ抗ヒトＡＦＰ）Ｆａｂ’−ぺμオキシダーゼ複
合体を用いたヒトＡＦＰのサンドウィッチ酵素免疫測定
法の測定感度に対するヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）１の効果
について実施例−３と同様の方法で検討した。ただし、
ペルオキシダーゼ−Ｆａｂ’複合体は実施例−２の方法
で、またバッファーにはバッファーＢを用いた。
結果を第６図に示す。すなわち、第６図は、第５図と同
様なグラフである。第６図中白丸は、べμオキシダーゼ
Ｆａｂ’複合体とインキュベートシ、バッファーＢを用
いイ法で洗浄した場合、白玉角は、ベルオキＶダーゼー
ｔａｂ’複合体をヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）ｚ （１００
Ｑ ｆｉｆ／チューブ）存在下でインキュベートし、バ
ッファーＢを用い口広で洗浄した場合の標準曲線を各々
示す。
様なグラフである。第６図中白丸は、べμオキシダーゼ
Ｆａｂ’複合体とインキュベートシ、バッファーＢを用
いイ法で洗浄した場合、白玉角は、ベルオキＶダーゼー
ｔａｂ’複合体をヤギ非特異Ｆ（ａｂ’）ｚ （１００
Ｑ ｆｉｆ／チューブ）存在下でインキュベートし、バ
ッファーＢを用い口広で洗浄した場合の標準曲線を各々
示す。
測定感度は複合体をヤギ非特異Ｆ（ａｂ・）、存在下で
インキュベートすることで１４０ ｆｆ （２ａモ／Ｌ
’）／チューブから５６ｆｔＣ１８ａモ／Ｌ／）／チュ
ーブへ２．５倍改倍された。
インキュベートすることで１４０ ｆｆ （２ａモ／Ｌ
’）／チューブから５６ｆｔＣ１８ａモ／Ｌ／）／チュ
ーブへ２．５倍改倍された。
実施例−５ヒト・インスリンの高感度固相免疫測定法
（モルモット抗ブタ・インスリン）Ｉｇ（）−固相及び
アフイニテイ精製（モルモット抗ブタ・インスリン）
Ｆａｂ’ −べμオキシダーゼ複合体を用いた。ヒト
−インスリンのサンドウィッチ酵素免疫測定法の測定感
度に対するモルモット非特異Ｆ（ａｂ’）２の効果につ
いて検討した。抗原であるヒト・インスリンはＷ ＨＯ
（１ｓｔ、 １．Ｒ。
アフイニテイ精製（モルモット抗ブタ・インスリン）
Ｆａｂ’ −べμオキシダーゼ複合体を用いた。ヒト
−インスリンのサンドウィッチ酵素免疫測定法の測定感
度に対するモルモット非特異Ｆ（ａｂ’）２の効果につ
いて検討した。抗原であるヒト・インスリンはＷ ＨＯ
（１ｓｔ、 １．Ｒ。
Ｐ、インスリン、ヒト免疫測定用６６／３０４ ）よシ
供与されたものを用いた。インスリンの量の算定には２
Ｎ５ Ｉ Ｕ７１ＭＩＣＷＨＯｆクニカｌＶリポート
シリーズ（Ｗ ＨＯＴｅｃｈｎｉｃａｌＲｅｐｏｒｔ
５ｅｒｉｅｓ ） Ａ ５６５ （１９７５） ）分
子量５８０８（ダイアビーチス ケア（Ｄｉａｂｅｔｅ
ｓＣａｒｅ ）第４巻、第１４７頁（１９８１））を
用いた。抗体として、モルモット抗ブタインスリン血清
は医学生物学研究所（名古屋〕より購入した。このモル
モット抗ブタインスリン血清を実施例−１と同様の方法
で精製し、モルモット抗ブタインスリンＩｇＧ 、
Ｆ（ａｂ’）１ 、 Ｆａｂ’ を各々得た。抗体Ｉ
ｇＧの結合した固相は実施例−１と、ぺ〃オキシダーゼ
ーＦａｂ’ 複合体は実施例−２と同様に製造した。サ
ンドウィッチ酵素免疫測定法は実施例−４と同様に行っ
た。
供与されたものを用いた。インスリンの量の算定には２
Ｎ５ Ｉ Ｕ７１ＭＩＣＷＨＯｆクニカｌＶリポート
シリーズ（Ｗ ＨＯＴｅｃｈｎｉｃａｌＲｅｐｏｒｔ
５ｅｒｉｅｓ ） Ａ ５６５ （１９７５） ）分
子量５８０８（ダイアビーチス ケア（Ｄｉａｂｅｔｅ
ｓＣａｒｅ ）第４巻、第１４７頁（１９８１））を
用いた。抗体として、モルモット抗ブタインスリン血清
は医学生物学研究所（名古屋〕より購入した。このモル
モット抗ブタインスリン血清を実施例−１と同様の方法
で精製し、モルモット抗ブタインスリンＩｇＧ 、
Ｆ（ａｂ’）１ 、 Ｆａｂ’ を各々得た。抗体Ｉ
ｇＧの結合した固相は実施例−１と、ぺ〃オキシダーゼ
ーＦａｂ’ 複合体は実施例−２と同様に製造した。サ
ンドウィッチ酵素免疫測定法は実施例−４と同様に行っ
た。
結果を第７図に示す。すなわち第７図は、ヒトインスリ
ンの固相免疫測定法におけるブロッカ−によるパックグ
ランドの低下と高感度化を、蛍光強度（縦軸）とインス
リン量（ｎＵ／チューブ、横軸）の関係で示すグラフで
ある。第７図中白丸は、バッファーＢを用いイ法で洗浄
した場合、白玉角はぺμオキＶダーゼーＦａｂ’複合体
をモルモット非特異Ｆ（ａｂ’）４ （１ｏ ｏ ｐｒ
／チューブ）存在下でインキュベートし、バッファーＢ
を用い口広で洗浄した場合の標準曲線を各々示す。測定
感度は、モルモット非特異Ｆ（ａｂ’）２存在下で複合
体を固相とインキュベートすることで１ｎＵ（７ａモμ
）／チューブから（Ｌ ６ ｎＵ（４ａモ／ｌ／）／チ
ューブへ１．７倍改善された。
ンの固相免疫測定法におけるブロッカ−によるパックグ
ランドの低下と高感度化を、蛍光強度（縦軸）とインス
リン量（ｎＵ／チューブ、横軸）の関係で示すグラフで
ある。第７図中白丸は、バッファーＢを用いイ法で洗浄
した場合、白玉角はぺμオキＶダーゼーＦａｂ’複合体
をモルモット非特異Ｆ（ａｂ’）４ （１ｏ ｏ ｐｒ
／チューブ）存在下でインキュベートし、バッファーＢ
を用い口広で洗浄した場合の標準曲線を各々示す。測定
感度は、モルモット非特異Ｆ（ａｂ’）２存在下で複合
体を固相とインキュベートすることで１ｎＵ（７ａモμ
）／チューブから（Ｌ ６ ｎＵ（４ａモ／ｌ／）／チ
ューブへ１．７倍改善された。
以上詳細に説明した様に、本発明により抗体及び／又は
標識抗体の固相への非特異吸着が減少し、その結果、固
相免疫測定法における超微量分析が可能となった。
標識抗体の固相への非特異吸着が減少し、その結果、固
相免疫測定法における超微量分析が可能となった。
第１図は、と）ＩｇＦ：の固相免疫測定法におけるブロ
ッカ−による非特異吸着の低下を示すグラフ、第２図は
、と）ＩｇＥの固相免疫測定法におけるブロッカ−によ
るパックグラ！ンドの低下と高感度化を示すグラフ、第
５図は、ｈＣＧの固相免疫測定法におけるブロッカ−に
よる非特異吸着の低下を示すグラフ、第４図は、ｈＣＧ
の固相免疫測定法におけるブロッカ−によるバックグラ
ンドの低下と高感度化を示すグラフ、第５図及び第６図
は、と）ＡＦＰの固相免疫測定法におけるブロッカ−に
よるバックグランドの低下と高感度化を示すグラフ、第
７図は、ヒトインスリンの固相免疫測定法におけるブロ
ッカ−によるバックグランドの低下と高感度化を示すグ
ラフである。
ッカ−による非特異吸着の低下を示すグラフ、第２図は
、と）ＩｇＥの固相免疫測定法におけるブロッカ−によ
るパックグラ！ンドの低下と高感度化を示すグラフ、第
５図は、ｈＣＧの固相免疫測定法におけるブロッカ−に
よる非特異吸着の低下を示すグラフ、第４図は、ｈＣＧ
の固相免疫測定法におけるブロッカ−によるバックグラ
ンドの低下と高感度化を示すグラフ、第５図及び第６図
は、と）ＡＦＰの固相免疫測定法におけるブロッカ−に
よるバックグランドの低下と高感度化を示すグラフ、第
７図は、ヒトインスリンの固相免疫測定法におけるブロ
ッカ−によるバックグランドの低下と高感度化を示すグ
ラフである。
Claims (1)
- １、被分析体を固相免疫測定法を用いて測定するに際し
て、抗体及び／又は標識抗体による処理と同時又は処理
前に非特異抗体及び／又はその修飾タンパクによる処理
を行うことを特徴とする被分析体の高感度免疫測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60058230A JPH0634013B2 (ja) | 1985-03-25 | 1985-03-25 | 高感度免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60058230A JPH0634013B2 (ja) | 1985-03-25 | 1985-03-25 | 高感度免疫測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61217762A true JPS61217762A (ja) | 1986-09-27 |
| JPH0634013B2 JPH0634013B2 (ja) | 1994-05-02 |
Family
ID=13078281
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60058230A Expired - Lifetime JPH0634013B2 (ja) | 1985-03-25 | 1985-03-25 | 高感度免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0634013B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08505220A (ja) * | 1992-07-14 | 1996-06-04 | パチョルニック，アブラハム | 万能標準試薬と、その調製及び使用方法 |
| JPH0968531A (ja) * | 1995-08-31 | 1997-03-11 | Sanyo Chem Ind Ltd | 免疫測定法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5570742A (en) * | 1978-11-22 | 1980-05-28 | Kyorin Pharmaceut Co Ltd | Measuring method of engyme immunity of hito placenta lactogen with sandwich method and kit used for it |
| JPS579723A (en) * | 1980-06-20 | 1982-01-19 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Stabilizing agent for immunological reaction and measuring method of antigen-antibody reaction |
| JPS57124253A (en) * | 1981-01-26 | 1982-08-03 | Toyobo Co Ltd | Immunological measuring method for adrenocorticotropic hormone precursor |
-
1985
- 1985-03-25 JP JP60058230A patent/JPH0634013B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5570742A (en) * | 1978-11-22 | 1980-05-28 | Kyorin Pharmaceut Co Ltd | Measuring method of engyme immunity of hito placenta lactogen with sandwich method and kit used for it |
| JPS579723A (en) * | 1980-06-20 | 1982-01-19 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Stabilizing agent for immunological reaction and measuring method of antigen-antibody reaction |
| JPS57124253A (en) * | 1981-01-26 | 1982-08-03 | Toyobo Co Ltd | Immunological measuring method for adrenocorticotropic hormone precursor |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08505220A (ja) * | 1992-07-14 | 1996-06-04 | パチョルニック，アブラハム | 万能標準試薬と、その調製及び使用方法 |
| JPH0968531A (ja) * | 1995-08-31 | 1997-03-11 | Sanyo Chem Ind Ltd | 免疫測定法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0634013B2 (ja) | 1994-05-02 |
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