JPS6120861A - 反応液体クロマトグラフ - Google Patents
反応液体クロマトグラフInfo
- Publication number
- JPS6120861A JPS6120861A JP14053284A JP14053284A JPS6120861A JP S6120861 A JPS6120861 A JP S6120861A JP 14053284 A JP14053284 A JP 14053284A JP 14053284 A JP14053284 A JP 14053284A JP S6120861 A JPS6120861 A JP S6120861A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- reaction
- sample
- fluorescence
- reaction reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/84—Preparation of the fraction to be distributed
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
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- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は反応液体クロマトグラフに係り、特に反応試薬
の寿命を長くして高精度で試料、例えばアミノ酸を分析
するのに好適な蛍光分析法を採用した反応液体クロマト
グラフに関するものである。
の寿命を長くして高精度で試料、例えばアミノ酸を分析
するのに好適な蛍光分析法を採用した反応液体クロマト
グラフに関するものである。
第１図は従来のアミノ酸反応液体クロマトグラフの流路
系統図である。アミノ酸をカラムに分離展開するための
溶出液１は、バルブ２を介してバルブ２が開放した溶出
液１のみがポンプ３によって吸引、吐出され、サンプリ
ングバルブ４に達する。ここで、あらかじめ試料を添加
したサンプリングバルブ４を切り換えることによって、
試料は溶出液１とともにカラム５に達し、カラム５内の
カラム充てん剤の上床部に吸着される。カラム５を通過
した溶出液１および試料はミキサー６に達する。
系統図である。アミノ酸をカラムに分離展開するための
溶出液１は、バルブ２を介してバルブ２が開放した溶出
液１のみがポンプ３によって吸引、吐出され、サンプリ
ングバルブ４に達する。ここで、あらかじめ試料を添加
したサンプリングバルブ４を切り換えることによって、
試料は溶出液１とともにカラム５に達し、カラム５内の
カラム充てん剤の上床部に吸着される。カラム５を通過
した溶出液１および試料はミキサー６に達する。
一方、試料であるアミノ酸は、ボストラベル法（アミノ
酸を蛍光性物質に変換するため１分離した溶液に蛍光試
薬を加えて、それを発蛍光物質とすφ方法）を適用する
ため、反応試薬を加える必要があり、第１表のＲに示し
た全試薬を混合した反応試薬７がポンプ８によって吸引
、吐出され、ミキサー６に達し、カラム５より溶出した
試料（アミノ酸）の各成分と混合され、反応を促進する
ため所定の温度に調節された反応管９に達する。
酸を蛍光性物質に変換するため１分離した溶液に蛍光試
薬を加えて、それを発蛍光物質とすφ方法）を適用する
ため、反応試薬を加える必要があり、第１表のＲに示し
た全試薬を混合した反応試薬７がポンプ８によって吸引
、吐出され、ミキサー６に達し、カラム５より溶出した
試料（アミノ酸）の各成分と混合され、反応を促進する
ため所定の温度に調節された反応管９に達する。
第１表
反応管９内で反応試薬７と反応して発蛍光物質に変換さ
れたアミノ酸の各成分は、蛍光検出器１０に達し、蛍光
強度が測定される。アミノ酸の量が多いものは蛍光強度
が強く、少ないものは弱い。
れたアミノ酸の各成分は、蛍光検出器１０に達し、蛍光
強度が測定される。アミノ酸の量が多いものは蛍光強度
が強く、少ないものは弱い。
これらの蛍光強度は電気量に変換され、記録計１１によ
って記録され、溶出時間差で成分の同定が行われる。蛍
光強度測定後の廃液は容器１２に捨てられる。以上が測
定のパターンである。
って記録され、溶出時間差で成分の同定が行われる。蛍
光強度測定後の廃液は容器１２に捨てられる。以上が測
定のパターンである。
ところで、反応試薬７として第１表の反応試薬Ｒを用い
ており、この場合、オルトフタルアルデヒドのほかに水
酸化ナトリウムが含まれているため、反応試薬の劣化が
早く、バックグランドが大とい、う現象を生ずる。これ
らの現象は１２時間位で発生し、１検体の分析所要時間
は約２時間であるから、５検体分析櫨には精度が著しく
低下することになる。
ており、この場合、オルトフタルアルデヒドのほかに水
酸化ナトリウムが含まれているため、反応試薬の劣化が
早く、バックグランドが大とい、う現象を生ずる。これ
らの現象は１２時間位で発生し、１検体の分析所要時間
は約２時間であるから、５検体分析櫨には精度が著しく
低下することになる。
（発明の目的〕
本発明は上記に鑑みてなされたもので、その目的とする
ところは、カラム分離された試料の各成分を蛍光性物質
に変換する反応試薬の寿命を延ばすことができ、調製回
数の低減と、高精度の試料分析とを可能とすることがで
きる反応液体クロマトグラフを提供することにある。
ところは、カラム分離された試料の各成分を蛍光性物質
に変換する反応試薬の寿命を延ばすことができ、調製回
数の低減と、高精度の試料分析とを可能とすることがで
きる反応液体クロマトグラフを提供することにある。
本発明は、反応試薬を作る場合、秤量誤差を小さくする
ため通常最低５００ｍＮ位作るが、分析検体数が２〜３
検体（標準物質の測定と未知試料の測定の検体の合計）
の場合は大部分の反応試薬が残存することになり１反応
試薬の寿命が短かいと使用できなくなる反応試薬が多く
なり、また、標準物質の測定のための検体と未知試料の
測定のための検体との合計が５検体以上と多く、例えば
、反応試薬の寿命が１２時間と短かい場合には、途中で
分析精度が著しく低下するという問題を生じ、しかも、
反応試薬の寿命は、反応試薬中にアルカリ試薬が共存す
ると短かくなることに着目してなされたもので、反応試
薬中のアルカリ試薬を分離した第１の反応試薬と、上記
アルカリ試薬よりなる第２の反応試薬とを用意し、カラ
ムから溶出した試料の各成分に混合する直前で上記第１
の反応試薬と上記第２の反応試薬とを混合して前記試料
の各成分に混合する混合手段を具備させたことを特徴と
している。
ため通常最低５００ｍＮ位作るが、分析検体数が２〜３
検体（標準物質の測定と未知試料の測定の検体の合計）
の場合は大部分の反応試薬が残存することになり１反応
試薬の寿命が短かいと使用できなくなる反応試薬が多く
なり、また、標準物質の測定のための検体と未知試料の
測定のための検体との合計が５検体以上と多く、例えば
、反応試薬の寿命が１２時間と短かい場合には、途中で
分析精度が著しく低下するという問題を生じ、しかも、
反応試薬の寿命は、反応試薬中にアルカリ試薬が共存す
ると短かくなることに着目してなされたもので、反応試
薬中のアルカリ試薬を分離した第１の反応試薬と、上記
アルカリ試薬よりなる第２の反応試薬とを用意し、カラ
ムから溶出した試料の各成分に混合する直前で上記第１
の反応試薬と上記第２の反応試薬とを混合して前記試料
の各成分に混合する混合手段を具備させたことを特徴と
している。
以下本発明を第２図、第３図に示した実施例および第４
図を用い１詳細に説明する。
図を用い１詳細に説明する。
第２図は本発明の反応液体クロマトグラフの一実施例を
示す流路系統図で、アミノ酸用のものを例示してあり、
第′１図と同一部分は同じ符号で示し、ここでは説明を
省略する。第３図においては、第１図の第１表のＲに示
した全試薬を混合した反応試薬７を、第１表のＲ１に示
した水酸化ナトリウムを含まない反応試薬７ａと第１表
のＲ２に示した水酸化ナトリウムのみの反応試薬７ｂと
に２分割してあり、そのため、それぞれを吸引、吐出す
るポンプ８ａ、８ｂが設けである。ただし、実際には１
台のポンプで２液（製品は３第）を同時に送液可能のポ
ンプを用いである。１３．１４はそれぞれ切換バルブで
ある。水酸゛化ナトリウムを含まない反応試薬７ａはポ
ンプ８ａによって吸引。
示す流路系統図で、アミノ酸用のものを例示してあり、
第′１図と同一部分は同じ符号で示し、ここでは説明を
省略する。第３図においては、第１図の第１表のＲに示
した全試薬を混合した反応試薬７を、第１表のＲ１に示
した水酸化ナトリウムを含まない反応試薬７ａと第１表
のＲ２に示した水酸化ナトリウムのみの反応試薬７ｂと
に２分割してあり、そのため、それぞれを吸引、吐出す
るポンプ８ａ、８ｂが設けである。ただし、実際には１
台のポンプで２液（製品は３第）を同時に送液可能のポ
ンプを用いである。１３．１４はそれぞれ切換バルブで
ある。水酸゛化ナトリウムを含まない反応試薬７ａはポ
ンプ８ａによって吸引。
吐出され、切換バルブ１３の接続部１５に達する。
また、水酸化ナトリウムのみの反応試薬７ｂは、ポンプ
８ｂによって吸引、吐出され、切換バルブ１３の接続部
１６に達する。ここで、反応試薬７ａと７ｂとが混合し
、第１表のＲに示す反応試薬７と同じ東こなる。この反
応試薬は接続部１７を通過し、切換バルブ１４の接続部
２０に達する。
８ｂによって吸引、吐出され、切換バルブ１３の接続部
１６に達する。ここで、反応試薬７ａと７ｂとが混合し
、第１表のＲに示す反応試薬７と同じ東こなる。この反
応試薬は接続部１７を通過し、切換バルブ１４の接続部
２０に達する。
一方、溶出液１はカラム５を通過し、分離されたアミノ
酸の各成分と一緒に切換バルブ１４の接続部１９に達し
、接続部２０への反応試薬と混合し、接続部２１を通っ
て反応管９に達して反°応することになる。反応管９以
降の流れについては第１図の場合と同様である。
酸の各成分と一緒に切換バルブ１４の接続部１９に達し
、接続部２０への反応試薬と混合し、接続部２１を通っ
て反応管９に達して反°応することになる。反応管９以
降の流れについては第１図の場合と同様である。
なお、液体クロマトグラフにおいては、それぞれのポン
プによって吐出された流量を正確に知る必要があるが１
本発明では全ポンプが稼動していても個別に流量を測定
することができるようにしである。第３図は第２図の切
換バルブ１３．１４はドレイン側に切り換えた状態を示
す図で、例えば、第３図に示すように切換バルブ１３．
１４を切り換えると、カラム溶出液は接続部２２で、反
応試薬７ａは接続部１８で、さらに反応試薬７ｂは容器
１２に捨てられる廃液から測定を行うことができる。
プによって吐出された流量を正確に知る必要があるが１
本発明では全ポンプが稼動していても個別に流量を測定
することができるようにしである。第３図は第２図の切
換バルブ１３．１４はドレイン側に切り換えた状態を示
す図で、例えば、第３図に示すように切換バルブ１３．
１４を切り換えると、カラム溶出液は接続部２２で、反
応試薬７ａは接続部１８で、さらに反応試薬７ｂは容器
１２に捨てられる廃液から測定を行うことができる。
第４図は反応試薬調製経過時間と蛍光強度との関係を示
す線図で、アモノ酸成分をパラメータとして示しである
。ただし、アミノ酸成分１７成分中、グラフを見易くす
るため６成分をとって示しである。第４図、（ａ）は比
較のため示した従来法による場合で、第４図（ｂ）は本
発明に係る場合で、本発明においては、第３図に示した
実施例のように、反応試薬を２つに分離し、使用直前に
おいて混合するようにしたので、反応試薬の寿命が従来
の約４倍の長さとなり、第４図（ｂ）に示すように良好
な結果が得られた。
す線図で、アモノ酸成分をパラメータとして示しである
。ただし、アミノ酸成分１７成分中、グラフを見易くす
るため６成分をとって示しである。第４図、（ａ）は比
較のため示した従来法による場合で、第４図（ｂ）は本
発明に係る場合で、本発明においては、第３図に示した
実施例のように、反応試薬を２つに分離し、使用直前に
おいて混合するようにしたので、反応試薬の寿命が従来
の約４倍の長さとなり、第４図（ｂ）に示すように良好
な結果が得られた。
以上説明したように、本発明によれば、反応試薬の寿命
が著しく延びるので、調製回数の低減と高精度の試料分
析が可能になるという効果がある。
が著しく延びるので、調製回数の低減と高精度の試料分
析が可能になるという効果がある。
第１図は従来のアミノ酸反応液体クロマトグラフの流路
系統図、第２図は本発明の反応液体クロマトグラフの一
実施例を示す流路系統図、第３図は第２図の２つの切換
バルブをドレン側に切り換、えた状態を示す図、第４図
は本発明の詳細な説明すａ丸めの反応試薬調製経過時間
と蛍光強度との関係を示す線図である。 １・・・溶出液、２・・・バルブ、３，８ａ、８ｂ・・
・ポンプ、４・・・サンプリングバルブ、５・・・カラ
ム、７ａ。 ７ｂ・・・反応試薬、９・・・反応管、１０・・・蛍光
検出器、１１・・・記録計、１２・・・廃液容器、１３
．１４・・・切換バルブ、１５〜２２・・・接続部。
系統図、第２図は本発明の反応液体クロマトグラフの一
実施例を示す流路系統図、第３図は第２図の２つの切換
バルブをドレン側に切り換、えた状態を示す図、第４図
は本発明の詳細な説明すａ丸めの反応試薬調製経過時間
と蛍光強度との関係を示す線図である。 １・・・溶出液、２・・・バルブ、３，８ａ、８ｂ・・
・ポンプ、４・・・サンプリングバルブ、５・・・カラ
ム、７ａ。 ７ｂ・・・反応試薬、９・・・反応管、１０・・・蛍光
検出器、１１・・・記録計、１２・・・廃液容器、１３
．１４・・・切換バルブ、１５〜２２・・・接続部。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、溶出液に試料を添加してカラムを通過させて前記試
料を分離し、前記カラムから溶出した前記試料の各成分
にそれを蛍光性物質に変換するための反応試薬を混合し
て反応管で反応させ、蛍光検出器にて蛍光強度を測定す
るようにしてなる反応液体クロマトグラフにおいて、前
記反応試薬中のアルカリ試薬を分離した第１の反応試薬
と、前記アルカリ試薬よりなる第２の反応試薬とを用意
し、前記カラムから溶出した前記試料の各成分に混合す
る直前で前記第１の反応試薬と前記第２の反応試薬とを
混合して前記試料の各成分に混合する混合手段を具備し
ていることを特徴とする反応液体クロマトグラフ。 ２、前記試料がアミン酸である特許請求の範囲第１項記
載の反応液体クロマトグラフ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14053284A JPS6120861A (ja) | 1984-07-09 | 1984-07-09 | 反応液体クロマトグラフ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14053284A JPS6120861A (ja) | 1984-07-09 | 1984-07-09 | 反応液体クロマトグラフ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6120861A true JPS6120861A (ja) | 1986-01-29 |
Family
ID=15270854
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14053284A Pending JPS6120861A (ja) | 1984-07-09 | 1984-07-09 | 反応液体クロマトグラフ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6120861A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007292620A (ja) * | 2006-04-26 | 2007-11-08 | Shimadzu Corp | 流路切換えバルブ、それを用いた高速液体クロマトグラフ及び分析方法 |
| WO2014175251A1 (ja) * | 2013-04-22 | 2014-10-30 | 積水メディカル株式会社 | フロー式分析装置用切換バルブ |
-
1984
- 1984-07-09 JP JP14053284A patent/JPS6120861A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007292620A (ja) * | 2006-04-26 | 2007-11-08 | Shimadzu Corp | 流路切換えバルブ、それを用いた高速液体クロマトグラフ及び分析方法 |
| WO2014175251A1 (ja) * | 2013-04-22 | 2014-10-30 | 積水メディカル株式会社 | フロー式分析装置用切換バルブ |
| JP5677649B1 (ja) * | 2013-04-22 | 2015-02-25 | 積水メディカル株式会社 | フロー式分析装置用切換バルブ |
| JP2015092166A (ja) * | 2013-04-22 | 2015-05-14 | 積水メディカル株式会社 | フロー式分析装置用切換バルブ |
| CN105324665A (zh) * | 2013-04-22 | 2016-02-10 | 积水医疗株式会社 | 流式分析设备用的切换阀 |
| CN105324665B (zh) * | 2013-04-22 | 2017-10-13 | 积水医疗株式会社 | 流式分析设备用的切换阀 |
| US9841406B2 (en) | 2013-04-22 | 2017-12-12 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Switching valve for flow type analysis apparatus |
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