JPS61176856A - 非ａ非ｂ型肝炎抗原 - Google Patents
非ａ非ｂ型肝炎抗原Info
- Publication number
- JPS61176856A JPS61176856A JP60018201A JP1820185A JPS61176856A JP S61176856 A JPS61176856 A JP S61176856A JP 60018201 A JP60018201 A JP 60018201A JP 1820185 A JP1820185 A JP 1820185A JP S61176856 A JPS61176856 A JP S61176856A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- hepatitis
- antigen
- virus
- sucrose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/085—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus, Epstein-Barr virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は、非Ａ非Ｂ型肝炎抗原に関する。
〈従来の技術〉
ウィルス性肝炎のうち、Ａ型及びＢ減についてはそのウ
ィルスが見出され、免疫学的な方法による診断も可能と
なっている。
ィルスが見出され、免疫学的な方法による診断も可能と
なっている。
しかしながら、Ａ型でもＢ型でもなく、非Ａ非Ｂ型とい
われる肝炎は輸血後肝炎の２０％以上を占めるとされて
いるが、その原因フィルスが同定されておらず、ヒトの
非Ａ非Ｂ型肝炎がチンパンジーへ感染可能であることが
確認されているにすぎない。非Ａ非Ｂ型肝炎に関連した
抗原抗体系の検索は、多くの研究者によって患者の血清
を中心になされてきたが、未だ明確な系は見出されてい
ない。
われる肝炎は輸血後肝炎の２０％以上を占めるとされて
いるが、その原因フィルスが同定されておらず、ヒトの
非Ａ非Ｂ型肝炎がチンパンジーへ感染可能であることが
確認されているにすぎない。非Ａ非Ｂ型肝炎に関連した
抗原抗体系の検索は、多くの研究者によって患者の血清
を中心になされてきたが、未だ明確な系は見出されてい
ない。
〈発明が解決しようとする問題点〉
本発明者らは、上記非Ａ非Ｂ型肝炎に関連した抗原抗体
系を見出すべく糧々検討を重ねた。
系を見出すべく糧々検討を重ねた。
〈発明の構成〉
￥３結果、非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的な抗原を見出し、本
発明に到達した。
発明に到達した。
すなわち、本発明の要旨は、（１）蔗糖密度勾配遠心法
による密度が約／、／ ７〜八コｔであり、（１１）非
Ａ非Ｂ型肝炎発症個体のりンノく球をコＢウィルスでト
ランスフオームすることにより非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗体
陽性の培養細胞を得、ついでこれをクローン化して得ら
れる抗体、と反応しく１ｉｉ）非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的
な抗原にある。
による密度が約／、／ ７〜八コｔであり、（１１）非
Ａ非Ｂ型肝炎発症個体のりンノく球をコＢウィルスでト
ランスフオームすることにより非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗体
陽性の培養細胞を得、ついでこれをクローン化して得ら
れる抗体、と反応しく１ｉｉ）非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的
な抗原にある。
以下、本発明の詳細な説明する。
まず、本発明に係る抗原は、たとえば次のような方法に
よって得られる。 、 抗原の原料としては通常非Ａ非Ｂ型肝炎発症個体（ヒト
又はチンパンジー）の肝組織が用いられる。すなわち、
これをホモジナイズした後、１．０００〜／ ０．００
０ ｒ、ｐ、ｍ程度で３０分〜１時間程度遠心し、つい
で約１０万を程度で超遠心し、沈査を得る。さらに、こ
の沈査を蔗糖、ＣｓＯ２，ＫＢｒ等による密度勾配遠心
に付すことにより、精製しうる。また、必要に応じ、上
記密度勾配遠心の前段として、イオン交換体クロマトグ
ラフィー又はアフイニテイカラムクロマトグラフイーに
付することができる。また、上記沈査を、任意の段階で
ゲルろ過クロマトグラフィーにかけ含有フェリチンを除
去することができる。
よって得られる。 、 抗原の原料としては通常非Ａ非Ｂ型肝炎発症個体（ヒト
又はチンパンジー）の肝組織が用いられる。すなわち、
これをホモジナイズした後、１．０００〜／ ０．００
０ ｒ、ｐ、ｍ程度で３０分〜１時間程度遠心し、つい
で約１０万を程度で超遠心し、沈査を得る。さらに、こ
の沈査を蔗糖、ＣｓＯ２，ＫＢｒ等による密度勾配遠心
に付すことにより、精製しうる。また、必要に応じ、上
記密度勾配遠心の前段として、イオン交換体クロマトグ
ラフィー又はアフイニテイカラムクロマトグラフイーに
付することができる。また、上記沈査を、任意の段階で
ゲルろ過クロマトグラフィーにかけ含有フェリチンを除
去することができる。
上記精製は、次の抗体を用いて抗原をアッセイしながら
行なわれる。すなわち、抗体としてウィルスでトランス
フオームすることにより非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗体陽性の
培養細胞を得、ついでこれをクローン化して得られるも
のが用いられる。この抗体は非Ａ非Ｂ型肝炎の感染を防
御する能力を有するものが好ましい。
行なわれる。すなわち、抗体としてウィルスでトランス
フオームすることにより非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗体陽性の
培養細胞を得、ついでこれをクローン化して得られるも
のが用いられる。この抗体は非Ａ非Ｂ型肝炎の感染を防
御する能力を有するものが好ましい。
この抗体の調製法を例示する。
たとえば、非Ａ非Ｂ型肝炎回復期のチンパンジーおよび
ヒトの末梢血をヘパリン加採血し、Ｐｉｃｏｌ −Ｃｏ
ｎｒａｙ比重遠心法でリンパ球を分離する。
ヒトの末梢血をヘパリン加採血し、Ｐｉｃｏｌ −Ｃｏ
ｎｒａｙ比重遠心法でリンパ球を分離する。
一方、Ｉｌ！Ｂウィルスを産生放出している細胞（九と
えば、Ｂり！−りを培地中で培養し、 。
えば、Ｂり！−りを培地中で培養し、 。
その培養上清を分離し、ウィルス源（ＩＩＣＢウィルス
液）を得る。
液）を得る。
ついで、このＥＢウィルス液と上記リンパ球を接触させ
た後、種々の培養密度で、組織培養用マイクロタイター
プレートに接種して培養する。
た後、種々の培養密度で、組織培養用マイクロタイター
プレートに接種して培養する。
このトランスフォーメーション法は、適宜常法を選ぶこ
とができるが、少ない細胞密度で接種するオリゴクロー
ン法が好適に使用される。
とができるが、少ない細胞密度で接種するオリゴクロー
ン法が好適に使用される。
細胞の増殖がみられる時期に、培養上清を集め、非Ａ非
Ｂ型肝炎発症の肝切片を用いて抗体活性のスクリーニン
グを行ない、抗体活性陽性のものについて、クローニン
グを行なう。
Ｂ型肝炎発症の肝切片を用いて抗体活性のスクリーニン
グを行ない、抗体活性陽性のものについて、クローニン
グを行なう。
クローニングに際しては、軟寒天（ｓｏｆｔ ａｇａｒ
）法、限界希釈（ｔｉｍｉｔｉｎｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ
）法又はシングルセルマニピュレークヨン（ｓｉｎｇ
ｌｅｃｅｌｌｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ）法の常法を
用いることができるが、主として軟寒天法および限界希
釈法が用いられる。
）法、限界希釈（ｔｉｍｉｔｉｎｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ
）法又はシングルセルマニピュレークヨン（ｓｉｎｇ
ｌｅｃｅｌｌｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ）法の常法を
用いることができるが、主として軟寒天法および限界希
釈法が用いられる。
軟寒天法の場合、たとえば細胞をおる密度で支持寒天層
上の接種寒天層に植え込み、増殖してき九コロニーを分
離し、再び浮遊培養に移し、抗体陽性のクローン株を取
得する。
上の接種寒天層に植え込み、増殖してき九コロニーを分
離し、再び浮遊培養に移し、抗体陽性のクローン株を取
得する。
また、限界希釈法の場合、たとえばＸ線照射した腫瘍化
Ｂ細胞をフィダー細胞として、細胞をある密度で組織培
養用マイクロタイターグレー）Ｋ植込み、抗体陽性のク
ローン株を取得する。
Ｂ細胞をフィダー細胞として、細胞をある密度で組織培
養用マイクロタイターグレー）Ｋ植込み、抗体陽性のク
ローン株を取得する。
このクローン化された細胞株が産生ずる抗体は常法によ
り取得でき、この抗体は非Ａ非Ｂ型肝炎発症時の肝細胞
内に出現する抗原に特異的に反応する。
り取得でき、この抗体は非Ａ非Ｂ型肝炎発症時の肝細胞
内に出現する抗原に特異的に反応する。
得られる抗体は、常法により、たとえば・ ８コ；、、
ｚｐ；、 ” Ｅｌ−Ｊ ｏ ｏｅｌ！Ｋ よ
４）ｌ＋ＰＡ／ロマトグラフィー等によりｆ＃製する
ことができ、次のような性質を有する。
ｚｐ；、 ” Ｅｌ−Ｊ ｏ ｏｅｌ！Ｋ よ
４）ｌ＋ＰＡ／ロマトグラフィー等によりｆ＃製する
ことができ、次のような性質を有する。
ｌ）Ｒ精密度勾配遠心法及びゲルー過法による分子量が
約デｏ ｏ、ｏ ｏ ｏであシ、コ）８Ｄ８−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動法による分子量約Ａ Ｊ、００
００Ｒ鎖と分子量約コＪ、０００のＬ鎖からなるチンパ
ンジー又はヒトの工ｇＭ抗体である。
約デｏ ｏ、ｏ ｏ ｏであシ、コ）８Ｄ８−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動法による分子量約Ａ Ｊ、００
００Ｒ鎖と分子量約コＪ、０００のＬ鎖からなるチンパ
ンジー又はヒトの工ｇＭ抗体である。
たとえば上記抗体を用いて、上記アッセイを行なう場合
、ラジオイムノアッセイ（ＲＸ人）法によるのが一般的
であるが、酵素抗体（］！Ｌ工８Ａ）法、受身赤血球凝
集（ＰＨＡ）法、等のアッセイ法によるとともできる。
、ラジオイムノアッセイ（ＲＸ人）法によるのが一般的
であるが、酵素抗体（］！Ｌ工８Ａ）法、受身赤血球凝
集（ＰＨＡ）法、等のアッセイ法によるとともできる。
このようにして得られる抗原は、蔗糖密度勾配遠心法に
よる密度が約／、／ ７〜１．コｔであり、上記抗体と
反応し、非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的である。
よる密度が約／、／ ７〜１．コｔであり、上記抗体と
反応し、非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的である。
〈発明の効果〉
本発明に係る抗原は、たとえば次のような利肝炎感染歴
等の診断が可能になる。また、この抗原を動物（ウサギ
、マウス等）に免疫することにより安定なポリクローナ
ル抗体あるいはモノクローナル抗体を得ることができる
。
等の診断が可能になる。また、この抗原を動物（ウサギ
、マウス等）に免疫することにより安定なポリクローナ
ル抗体あるいはモノクローナル抗体を得ることができる
。
（２）抗原の構造（−次構造から高次構造）を解析して
、抗原決定基を推定し、合成ペプチドで同決定基の抗原
性を発現できれば、本来供給源としても少ない抗原（診
断あるいはワクチンの材料）を人工的に産生ずることが
可能になる。
、抗原決定基を推定し、合成ペプチドで同決定基の抗原
性を発現できれば、本来供給源としても少ない抗原（診
断あるいはワクチンの材料）を人工的に産生ずることが
可能になる。
（３）得られた抗原の一次構造（アミノ酸配列）を解析
することＫより、組換えＤＮＡ技術による同抗原の生産
を可能とするｃＤＮＡの調製が可能になる。
することＫより、組換えＤＮＡ技術による同抗原の生産
を可能とするｃＤＮＡの調製が可能になる。
〈実施例〉
以下、実施例及び参考例によりさらに本発明の詳細な説
明する。
明する。
（抗原の単離精製法）
（１） 非Ａ非Ｂ型肝炎発症時のチンパンジー肝細胞
内に出現する抗原の単離精製法 （１）非Ａ非Ｂ型肝炎発症時のチンパンジー肝細胞塊（
Ｊｅ？）を小片、にミンスして、冷トリス緩衝液（ｓｏ
ｍＭトｙス塩酸緩衝液、含０．／！Ｍ＃ＩＬ化ナトリウ
ムおよび／ ｍＭＦｉＤＴＡ、 ｐＨ７，！ ）に懸濁
し、全容積が３１０−になるように調製し九。次に、外
套が０℃によく冷えるように設定したヒスコトロン超高
速万能ホモジナイザー（Ｋ、Ｋ。
内に出現する抗原の単離精製法 （１）非Ａ非Ｂ型肝炎発症時のチンパンジー肝細胞塊（
Ｊｅ？）を小片、にミンスして、冷トリス緩衝液（ｓｏ
ｍＭトｙス塩酸緩衝液、含０．／！Ｍ＃ＩＬ化ナトリウ
ムおよび／ ｍＭＦｉＤＴＡ、 ｐＨ７，！ ）に懸濁
し、全容積が３１０−になるように調製し九。次に、外
套が０℃によく冷えるように設定したヒスコトロン超高
速万能ホモジナイザー（Ｋ、Ｋ。
日音医理科器械製作所）でホモジナイズし、♂、０００
ｒｐｍ％参℃で１時間遠心し、その上清をＪＯＯｒｔｔ
ｌ採取した。
ｒｐｍ％参℃で１時間遠心し、その上清をＪＯＯｒｔｔ
ｌ採取した。
（２） このようにして得られた試料をＲＰ≠λロー
ター（Ｈｌｔａｃｈｉ ）で３０，０００ ｒｐｍ、
１７℃でＪＯ時間超遠心を行い上清と沈査とに分別した
。上清と沈査（ｊＯｄ冷トリス緩衝液に懸濁可溶化）に
ついて各々後述のラジオイムノアッセイ法により抗原の
測定を試みた。その結果りｊ％以上の抗原は沈査に回収
された。
ター（Ｈｌｔａｃｈｉ ）で３０，０００ ｒｐｍ、
１７℃でＪＯ時間超遠心を行い上清と沈査とに分別した
。上清と沈査（ｊＯｄ冷トリス緩衝液に懸濁可溶化）に
ついて各々後述のラジオイムノアッセイ法により抗原の
測定を試みた。その結果りｊ％以上の抗原は沈査に回収
された。
（３） このようにして得られた抗原画分／７ｍｌを
ｔｏチ蔗糖２−および３０％蔗糖（”／’ ｉトリス緩
衝液）２０−の上に重層させ（遠心管３本）、ＲＰ８−
２３０−ター （Ｈｌｔａｃｈｉ ）で２３，０００ｒｐｍ％４’ｔｌ
：で２≠時間超遠心を行い上清と沈査（ｔｏｔ４蔗糖上
層）とに分別した。上清と沈査（／ Ｏｎｌ冷トリス緩
衝液に懸濁可溶化）について各々ＲＩＡ法により抗原の
測定を試みた。その結果？！チ以上の抗原は沈査に回収
された。
ｔｏチ蔗糖２−および３０％蔗糖（”／’ ｉトリス緩
衝液）２０−の上に重層させ（遠心管３本）、ＲＰ８−
２３０−ター （Ｈｌｔａｃｈｉ ）で２３，０００ｒｐｍ％４’ｔｌ
：で２≠時間超遠心を行い上清と沈査（ｔｏｔ４蔗糖上
層）とに分別した。上清と沈査（／ Ｏｎｌ冷トリス緩
衝液に懸濁可溶化）について各々ＲＩＡ法により抗原の
測定を試みた。その結果？！チ以上の抗原は沈査に回収
された。
（４） このようにして得られた抗原画分ｊｍ（遠心
管２本）を非平衡蔗糖密度勾配遠心（ｗ／ｗ％１Ｏ−４
Ｃｊ％蔗糖密度勾配トリス緩衝液、ＲＰ８−２ｊｏ−タ
ー（Ｈｌｔａｃｈｉ ）、２！、０００ｒｐｍ１４’
℃、１時間）を行い、１ｍｌ／１ｕｂｅの分画を行い、
各々の両分についてＦｔＩＡ法により抗原の測定を試み
た。その結果、蔗糖濃度ｉｔ←→１％の画分に抗原が回
収された。
管２本）を非平衡蔗糖密度勾配遠心（ｗ／ｗ％１Ｏ−４
Ｃｊ％蔗糖密度勾配トリス緩衝液、ＲＰ８−２ｊｏ−タ
ー（Ｈｌｔａｃｈｉ ）、２！、０００ｒｐｍ１４’
℃、１時間）を行い、１ｍｌ／１ｕｂｅの分画を行い、
各々の両分についてＦｔＩＡ法により抗原の測定を試み
た。その結果、蔗糖濃度ｉｔ←→１％の画分に抗原が回
収された。
（５） このようにして得られた抗原画分、画分■：
蔗糖濃度／ｒ−２ｊ％
画分■：
蔗糖濃度２５〜３３チおよび
画分■：
蔗糖濃度３３〜≠ｌチの各画分を各々
０、！ｗｔｌに濃縮し、蔗糖密度勾配遠心（Ｗ／Ｗ％１
０〜６０％蔗糖密度勾配トリス緩衝液１２ｍ１、ＲＰＢ
−４ｏＴＩｆｆ−ター（Ｈｌｔａｃｈｉ ）、２１７，
０００ ｒｐｍ、 ４’ Ｃ１７２時間〕を行い、０
．７１ｎｌ／ ｔｕｂｓの分画を行い、各々の画分につ
いてＲＩＡ法により抗原の測定金試みた。その結果、画
分Ｉ、■、■ともに蔗糖密度ρ＝八／７〜１．λｔの画
分に抗原が回収された。
０〜６０％蔗糖密度勾配トリス緩衝液１２ｍ１、ＲＰＢ
−４ｏＴＩｆｆ−ター（Ｈｌｔａｃｈｉ ）、２１７，
０００ ｒｐｍ、 ４’ Ｃ１７２時間〕を行い、０
．７１ｎｌ／ ｔｕｂｓの分画を行い、各々の画分につ
いてＲＩＡ法により抗原の測定金試みた。その結果、画
分Ｉ、■、■ともに蔗糖密度ρ＝八／７〜１．λｔの画
分に抗原が回収された。
（Ｕ） 非Ａ非Ｂ型肝炎発症時のチンパンジー肝細胞
内に出現する抗原の単離精製法 （１）非Ａ非Ｂ型肝炎発症時のチンパンジー肝細胞塊（
３４？）を小片にミンスして、冷トリス緩衝液（！ Ｏ
ｍＭ ） リス塩酸緩衝液、含０．／ｊＭ塩化ナトリウ
ムおよび／ ｍＭＫＤＴＡ％ｐＨ７，！ ）に懸濁し、
全容積が３３０−になるように調製した。次に、外套が
０℃によく冷えるように設定した１ヒスコトロン”超高
速万能ホモジナイザー（Ｋ、に、日音医理科器械製作所
）でホモジナイズし、１．００Ｏｒｐｍ％４”Ｃで１時
間遠心し、その上清をＪＯＯｔｌ採取した。
内に出現する抗原の単離精製法 （１）非Ａ非Ｂ型肝炎発症時のチンパンジー肝細胞塊（
３４？）を小片にミンスして、冷トリス緩衝液（！ Ｏ
ｍＭ ） リス塩酸緩衝液、含０．／ｊＭ塩化ナトリウ
ムおよび／ ｍＭＫＤＴＡ％ｐＨ７，！ ）に懸濁し、
全容積が３３０−になるように調製した。次に、外套が
０℃によく冷えるように設定した１ヒスコトロン”超高
速万能ホモジナイザー（Ｋ、に、日音医理科器械製作所
）でホモジナイズし、１．００Ｏｒｐｍ％４”Ｃで１時
間遠心し、その上清をＪＯＯｔｌ採取した。
（２） このようＫして得られた濃縮試料２コーｔｔ
ｏｔｓ庶糖３プおよび一２０％蔗糖（Ｗ／Ｙ。
ｏｔｓ庶糖３プおよび一２０％蔗糖（Ｗ／Ｙ。
トリス緩衝液）コＯａｌの上に重層させ（遠心管２本）
、ＲＰ４Ｃコロ−ター（１ｉｉｔａｃｈｉ ）で３０．
００Ｏｒｐｍ、ダ℃で２時間超遠心を行い上清と沈査（
４０％蔗糖上層）とに分別した。上清と沈査（／４（ａ
Ｊ冷トリス緩衝液に懸濁可溶化）について各々ＲＩＡ法
により抗原の測定を試みた。その結果Ｐ！チ以上の抗原
は沈査に回収され喪。
、ＲＰ４Ｃコロ−ター（１ｉｉｔａｃｈｉ ）で３０．
００Ｏｒｐｍ、ダ℃で２時間超遠心を行い上清と沈査（
４０％蔗糖上層）とに分別した。上清と沈査（／４（ａ
Ｊ冷トリス緩衝液に懸濁可溶化）について各々ＲＩＡ法
により抗原の測定を試みた。その結果Ｐ！チ以上の抗原
は沈査に回収され喪。
（３） このようにして得られた抗原画分７Ｎ（遠心
管２本）を蔗糖密度勾配遠心（ｗ／’ｗ。
管２本）を蔗糖密度勾配遠心（ｗ／’ｗ。
／ ０−Ａ Ｏ％蔗糖密度勾配、トリス緩衝液、ＲＰＢ
−ＪｊＥ２−ター（Ｈｌｔａｃｈｉ ）、２４４，００
０ｒｐｍ、４”ｔ：、２０時間）を行い、／ 、７ ｍ
ｌ ／１ｕｂｅの分画を行い、各々の画分についてＲＩ
Ａ法により抗原の測定を試みた。その結果、蔗糖密度ρ
ミへ７７〜八−６の画分に抗原が回収された。
−ＪｊＥ２−ター（Ｈｌｔａｃｈｉ ）、２４４，００
０ｒｐｍ、４”ｔ：、２０時間）を行い、／ 、７ ｍ
ｌ ／１ｕｂｅの分画を行い、各々の画分についてＲＩ
Ａ法により抗原の測定を試みた。その結果、蔗糖密度ρ
ミへ７７〜八−６の画分に抗原が回収された。
（４） この抗原画分をさらに（５）と同様の方法に
より蔗糖密度勾配遠心をくシ返し、蔗糖密度ρ＝／、１
７〜７．２６の画分に抗原が回収された。
より蔗糖密度勾配遠心をくシ返し、蔗糖密度ρ＝／、１
７〜７．２６の画分に抗原が回収された。
（５） このようにして得られた抗原画分を” ５ｅ
ｐｈａｒｏａｅ ’ −４ｃＢカラム（／ＸｊＯ５）ク
ロマトグラフィー（トリス緩衝液）を行い抗原画分に混
在するフエリチｙを除去した。
ｐｈａｒｏａｅ ’ −４ｃＢカラム（／ＸｊＯ５）ク
ロマトグラフィー（トリス緩衝液）を行い抗原画分に混
在するフエリチｙを除去した。
（ト） ラジオイムノアッセイ法（Ｒ工Ａ）（１）抗体
のヨードラベル法 ／ −５ｅｐｈａｄｅｘ ” Ｇ −２ｊカラＡ （
０，７Ｘ２０ｃｍ）に７−の／ ０ ％ Ｂ ８ Ａ
（Ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍムｌ’ｂｕｍｉｎ 、 ウシ
血清アルブミン）０．２ Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（
ｐＨ２，０）を流し担体をアルブミンでブロックする。
のヨードラベル法 ／ −５ｅｐｈａｄｅｘ ” Ｇ −２ｊカラＡ （
０，７Ｘ２０ｃｍ）に７−の／ ０ ％ Ｂ ８ Ａ
（Ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍムｌ’ｂｕｍｉｎ 、 ウシ
血清アルブミン）０．２ Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（
ｐＨ２，０）を流し担体をアルブミンでブロックする。
λ ポリスチレンチューブ（７ｓｘ／コｍ）にｊ００μ
０ＩＮａ 工を分注する、３ ｊＯμＬ ：［ｇＭ抗
体（後述の参考例１で得られたヒトエｇＭモノクローン
抗体、５０μ？、０．２ＭＭホウ酸ナトリウム緩衝液ｇ
り、ｏ ）を加えよく攪拌する、 ４Ａ ５ｏｐｔりＥｌ ５ ミ７ ’１’溶液（／ｑ
／ｄ０．２Ｍホウ酸ナナトリウム緩衝液ｐＨ，Ｏ）を加
えよく攪拌し室温で１分間反応させる。
０ＩＮａ 工を分注する、３ ｊＯμＬ ：［ｇＭ抗
体（後述の参考例１で得られたヒトエｇＭモノクローン
抗体、５０μ？、０．２ＭＭホウ酸ナトリウム緩衝液ｇ
り、ｏ ）を加えよく攪拌する、 ４Ａ ５ｏｐｔりＥｌ ５ ミ７ ’１’溶液（／ｑ
／ｄ０．２Ｍホウ酸ナナトリウム緩衝液ｐＨ，Ｏ）を加
えよく攪拌し室温で１分間反応させる。
ｚ ｚｏｐｔメタ重亜硫酸ナトリウム（２，５ｍｙ／
ｄ％０．２ Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液ｐＨり、ｏ ）
を加えよく攪拌する、 ６ ｊ ００ ｊｌ Ｅつ化カリ溶液（／ｗｑ／ｍｊ
ホウ酸ナトリウム緩衝液ｐＨ２，Ｏ１含０、／ ％ Ｂ
日Ａ）を加えよく攪拌する、７ ” ８ｅｐｈａｄｅ
ｘ”（）−ＪｊカラムでＩｇＭ画分管分画する、 （ｌｉ） ラジオイムノアッセイ法 ／ ０，２ＭＭホウ酸ナトリウム緩衝液Ｈｙ、ｏに可
溶化した工ｇＭ抗体（／ ００１１９／クロタイター）
（＠ＦＩＬｌｃｏｎ Ｊタム１）に吸着させる（参℃
、−昼夜） λ 抗体溶液を除き０．０ ／ Ｍ ９ン酸緩衝液ｐＨ
７，コ（ＰＢ８）で洗浄ｊ％ＢＳＡ−ＰＢＳでプレート
をブロックする、 ３ 標準抗原あるいは抗原画分をゼラチン−Ｐ Ｂ ８
（０，２ｊ ％セラｆ７−１’ Ｂ ８ 。
ｄ％０．２ Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液ｐＨり、ｏ ）
を加えよく攪拌する、 ６ ｊ ００ ｊｌ Ｅつ化カリ溶液（／ｗｑ／ｍｊ
ホウ酸ナトリウム緩衝液ｐＨ２，Ｏ１含０、／ ％ Ｂ
日Ａ）を加えよく攪拌する、７ ” ８ｅｐｈａｄｅ
ｘ”（）−ＪｊカラムでＩｇＭ画分管分画する、 （ｌｉ） ラジオイムノアッセイ法 ／ ０，２ＭＭホウ酸ナトリウム緩衝液Ｈｙ、ｏに可
溶化した工ｇＭ抗体（／ ００１１９／クロタイター）
（＠ＦＩＬｌｃｏｎ Ｊタム１）に吸着させる（参℃
、−昼夜） λ 抗体溶液を除き０．０ ／ Ｍ ９ン酸緩衝液ｐＨ
７，コ（ＰＢ８）で洗浄ｊ％ＢＳＡ−ＰＢＳでプレート
をブロックする、 ３ 標準抗原あるいは抗原画分をゼラチン−Ｐ Ｂ ８
（０，２ｊ ％セラｆ７−１’ Ｂ ８ 。
含０．０ ｊ ％ ＭＰ−４’ Ｏｊ？ ヨＣＦ ０．
０２ ％ ＮＩＬＭＳ）で希釈し、ｕ ｊ ｘＬをｄｕ
ｐｌｉｃａｔｅ で分注し、２〜／Ａ時間、室温で反応
させる、４ｃＰＢ８− ＠ｔｖｅｅｎ’２ｏｃＯ，／％
）で洗浄する１ 、 １１８工ラベル抗体をゼラチン−ＰＢ８で希釈し
、ｊ Ｘ ／ ０’ ｃｐｍ／ ｊ Ｏ＃Ａ浴溶液ｓｏ
μｔずつ分注し、２〜７６時間、室温で反応させる、 ６Ｐ Ｂ Ｓ −＠ｔｗｅｅｎ”コＯで洗浄する、７
個々のウェルを切断し、放射能活性をガンマ−カウンタ
ーで測定する、 参考例１ １ 非Ａ非Ｂ型肝炎回復期のヒト末梢血リンノく球のト
ランスフォーメーション ｌ）培 地 ＲＩ’Ｍ工／６４ＡＯ培地（遺伝子実験法講座■「培養
細胞遺伝子実験法」（共立出版■発行％／ ｔｒｉ年）
）に、リラシリン１ｏｏｐｙ／−、ストレプトマイシン
１００μｙ ７ｍ。
０２ ％ ＮＩＬＭＳ）で希釈し、ｕ ｊ ｘＬをｄｕ
ｐｌｉｃａｔｅ で分注し、２〜／Ａ時間、室温で反応
させる、４ｃＰＢ８− ＠ｔｖｅｅｎ’２ｏｃＯ，／％
）で洗浄する１ 、 １１８工ラベル抗体をゼラチン−ＰＢ８で希釈し
、ｊ Ｘ ／ ０’ ｃｐｍ／ ｊ Ｏ＃Ａ浴溶液ｓｏ
μｔずつ分注し、２〜７６時間、室温で反応させる、 ６Ｐ Ｂ Ｓ −＠ｔｗｅｅｎ”コＯで洗浄する、７
個々のウェルを切断し、放射能活性をガンマ−カウンタ
ーで測定する、 参考例１ １ 非Ａ非Ｂ型肝炎回復期のヒト末梢血リンノく球のト
ランスフォーメーション ｌ）培 地 ＲＩ’Ｍ工／６４ＡＯ培地（遺伝子実験法講座■「培養
細胞遺伝子実験法」（共立出版■発行％／ ｔｒｉ年）
）に、リラシリン１ｏｏｐｙ／−、ストレプトマイシン
１００μｙ ７ｍ。
グルタミン２ ｍＭ 、炭酸水素ナトリウム１、ルｔ
／ ｊを加えた後、二酸化炭素を吹きこみｐＨ７，０〜
７．４ｃとし、牛胎児血清（ＦｅｔｌＬｌ Ｃａ１ｆ
Ｅｌａｒｕｍ ： ＦＯ８）を２０％となるように加え
て使用する。
／ ｊを加えた後、二酸化炭素を吹きこみｐＨ７，０〜
７．４ｃとし、牛胎児血清（ＦｅｔｌＬｌ Ｃａ１ｆ
Ｅｌａｒｕｍ ： ＦＯ８）を２０％となるように加え
て使用する。
コ）ＩＣＢウィルス液の作製
ＢＢウィルスを産生するＢりｒ−を細胞（Ｐｒｏｃｅｅ
ｄｌｎｇｅ ｏｆ １ｉａｔｉｏｎａｌムｃａａｅｍｙ
ｏｆ８ｃｉｅｎｃｅ、７０（１）、／り０−／り＄（
／Ｖ７Ｊ））ヲＪ Ｘ ／ ０ ’ ／１１４ Ｏ細胞
密１ｊ ”ｔ” ＲＰ Ｍ Ｘ ／ ｔ ４！０十１０
％ＷＯ日培地を用いて７日間培養し、０、ｕ ！ ａｍ
のミリポアフィルタ−で−過した培養上清をウィルス液
として用いる。ウィルスの力価判定には、廣帯血のトラ
ンスフォーメーションを利用したＴＤ、・ｉｄを用いる
。ウィルスは、その力価が１０ＳＴＩ）、・７４以上の
ものを用いる。
ｄｌｎｇｅ ｏｆ １ｉａｔｉｏｎａｌムｃａａｅｍｙ
ｏｆ８ｃｉｅｎｃｅ、７０（１）、／り０−／り＄（
／Ｖ７Ｊ））ヲＪ Ｘ ／ ０ ’ ／１１４ Ｏ細胞
密１ｊ ”ｔ” ＲＰ Ｍ Ｘ ／ ｔ ４！０十１０
％ＷＯ日培地を用いて７日間培養し、０、ｕ ！ ａｍ
のミリポアフィルタ−で−過した培養上清をウィルス液
として用いる。ウィルスの力価判定には、廣帯血のトラ
ンスフォーメーションを利用したＴＤ、・ｉｄを用いる
。ウィルスは、その力価が１０ＳＴＩ）、・７４以上の
ものを用いる。
３） リンパ球の分離
重遠心法（Ｆｉｃｏｌ −０ｏｎｒａｙの比重へ０７７
）で単核球を分取し、末梢血リンパ球として用いる。上
記の方法で末梢血ｌ−当クシ約７０６個末梢血リンパ球
が分離される。
）で単核球を分取し、末梢血リンパ球として用いる。上
記の方法で末梢血ｌ−当クシ約７０６個末梢血リンパ球
が分離される。
リ コツウィルスの吸着及び培養
遠心により沈査とした末梢血リンパ球
ＩＯ’個当Ｄ ７ｍ０ＩＩｆＢ ウィルスｆｉ（＃７Ｓ
ＴＩ）。
ＴＩ）。
／′−以上）を加え、３７℃で１時間放置する。
その後、遠心によりウイルス液を除き
ＲＩ’ＭＩ Ｉ６’ＩＯ＋Ｊ Ｏ％ Ｆ ＣＢ培地を加
え細胞密度を調整し、平底マイクロタイタープレートに
ｏ、ｉｄずつ細胞を植えこむ。参日後に培地を０．／−
加え以後４ｃ〜７日に１度培地の半量交換を行う。植え
こむ細胞数によって異々るが、平底マイクロタイタープ
レートのウェル歯１）１０％個では、７〜ＩＯ日で細胞
が細胞集塊を形成し活発に増殖してくる。通常、ＢＢウ
ィルスを吸着させた末梢血リンパ球を、平底マイクロタ
イタープレートのウェル当シ／ ０” ％ ／ ０”個
の細胞密度で植えこむ。
え細胞密度を調整し、平底マイクロタイタープレートに
ｏ、ｉｄずつ細胞を植えこむ。参日後に培地を０．／−
加え以後４ｃ〜７日に１度培地の半量交換を行う。植え
こむ細胞数によって異々るが、平底マイクロタイタープ
レートのウェル歯１）１０％個では、７〜ＩＯ日で細胞
が細胞集塊を形成し活発に増殖してくる。通常、ＢＢウ
ィルスを吸着させた末梢血リンパ球を、平底マイクロタ
イタープレートのウェル当シ／ ０” ％ ／ ０”個
の細胞密度で植えこむ。
り培養上滑中の非ム非Ｂ型肝炎関連抗体の検出。
細胞が増殖してき九ら、培養上清を集め抗体価を測定す
る。その時期は、植えこむ細胞数によって異なるが、３
週目から参週目にかけて抗体活性陽性のウェルが認めら
れる。抗体陽性のウェルは、２参大マルチウエルプレー
ト、Ｊｊ園のシャーレ、ｔＯ■のシャーレと培養貴を拡
大し、トランスフオームを週目位からクローニングを行
う。
る。その時期は、植えこむ細胞数によって異なるが、３
週目から参週目にかけて抗体活性陽性のウェルが認めら
れる。抗体陽性のウェルは、２参大マルチウエルプレー
ト、Ｊｊ園のシャーレ、ｔＯ■のシャーレと培養貴を拡
大し、トランスフオームを週目位からクローニングを行
う。
りａ−二ング
軟寒天法により行った。
（Ｍａｒｉｎ＠ ０Ｏ１１ｏｉ（ＩＪ ［′ＩＲ８ｅ！
Ｌ ｒｌａｑｕ１８７７Ｆ ｉｆｆ−ス１含むＲＰＭ工
／ ｔ４ｔＯ＋コＱ％ＦＧＩ８培地を用いる。細胞はプ
レート当シｉｏｏ〜１０．０００個植えこむ。培養開始
後ｉｏ−−〇日で肉眼で認められるコロニーが形成され
る。
Ｌ ｒｌａｑｕ１８７７Ｆ ｉｆｆ−ス１含むＲＰＭ工
／ ｔ４ｔＯ＋コＱ％ＦＧＩ８培地を用いる。細胞はプ
レート当シｉｏｏ〜１０．０００個植えこむ。培養開始
後ｉｏ−−〇日で肉眼で認められるコロニーが形成され
る。
この時点で、パスツールピペットを用いてコロニーを吸
い上げ、あらかじめ０．／ＩＲＩのＲＰＭ工／ Ａ ４
ｃＯ＋ ２０ ％ Ｆ Ｃ８培地ｆ 入しｆｌ−マイク
ロタイタープレートに細胞を移して培養し、クローン株
を得る。
い上げ、あらかじめ０．／ＩＲＩのＲＰＭ工／ Ａ ４
ｃＯ＋ ２０ ％ Ｆ Ｃ８培地ｆ 入しｆｌ−マイク
ロタイタープレートに細胞を移して培養し、クローン株
を得る。
３ 抗体の取得および精製
上記クローン株をＯ，７％牛血清アルブミン（ＰＥ８
）含熱血清培地（Ｒ工Ｔｏ ｊ！−２培地）中で増殖さ
せ、培養上清を集め抗体を取得する。この上清を限外濾
過（分子量３０万以下の分子を排除する）後、“８ｅｐ
ｈａｃｒｙｌ ’５−ｓｏｏによるゲル濾過クロマトグ
ラフィー （０，２Ｍホウ酸緩衝液ｐＨ２，０）で精製
し抗体を得九。このヒト型の精製抗体は、オフタロニー
法および免疫電気泳動法で、工ｆＭ抗体に対応する沈降
線を示し九。還元条件下のＢＤＢ電気泳動分析では工ｆ
ＭのＨ鎖とＬ鎖に和尚する２本のバンドが認められた。
）含熱血清培地（Ｒ工Ｔｏ ｊ！−２培地）中で増殖さ
せ、培養上清を集め抗体を取得する。この上清を限外濾
過（分子量３０万以下の分子を排除する）後、“８ｅｐ
ｈａｃｒｙｌ ’５−ｓｏｏによるゲル濾過クロマトグ
ラフィー （０，２Ｍホウ酸緩衝液ｐＨ２，０）で精製
し抗体を得九。このヒト型の精製抗体は、オフタロニー
法および免疫電気泳動法で、工ｆＭ抗体に対応する沈降
線を示し九。還元条件下のＢＤＢ電気泳動分析では工ｆ
ＭのＨ鎖とＬ鎖に和尚する２本のバンドが認められた。
参考例コ
（１）非Ａ非Ｂ型肝炎陽性肝組織との反応性参考例１で
得られた抗体を用いて、非Ａ非Ｂ型肝炎発症時の肝組織
を螢光抗体法により反応させ反応性の有無を調べた。
得られた抗体を用いて、非Ａ非Ｂ型肝炎発症時の肝組織
を螢光抗体法により反応させ反応性の有無を調べた。
す々わち、クリオスタクトで薄切し九肝組織切片をア七
トンを用いて室温で７０分間処置する。乾燥後、上記の
非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗体（−次抗体）を切片の上にのせ
湿潤箱に入れて３７℃で６０分間反応させる。このとき
に用いる抗体液は、あらかじめ濃度を適当に希釈したも
のを用いる。ＰＢＳで一次抗体を洗い流し、振盪しなが
らＰＥＳ中で洗浄する。
トンを用いて室温で７０分間処置する。乾燥後、上記の
非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗体（−次抗体）を切片の上にのせ
湿潤箱に入れて３７℃で６０分間反応させる。このとき
に用いる抗体液は、あらかじめ濃度を適当に希釈したも
のを用いる。ＰＢＳで一次抗体を洗い流し、振盪しなが
らＰＥＳ中で洗浄する。
次にＰ工Ｔｏラベルした抗ヒトエｆＭ抗体（２次抗体）
を上記と同様１１ＣＪ７℃で６０分間反応させる。ＰＥ
８で標識抗体を洗い流し、振盪しながらＰＢＳ中で洗浄
す、る。風乾後、封入剤〔グリセリｙ ： ０．ｒＭ
Ｎａｇ（！Ｏ，−ＮａＨＣＯ３緩衝液（り：ｌ）〕を滴
下し、カバーグラスで封入する。水銀ランプを光源とし
た螢光顕微鏡を用いて観察する。
を上記と同様１１ＣＪ７℃で６０分間反応させる。ＰＥ
８で標識抗体を洗い流し、振盪しながらＰＢＳ中で洗浄
す、る。風乾後、封入剤〔グリセリｙ ： ０．ｒＭ
Ｎａｇ（！Ｏ，−ＮａＨＣＯ３緩衝液（り：ｌ）〕を滴
下し、カバーグラスで封入する。水銀ランプを光源とし
た螢光顕微鏡を用いて観察する。
その結果、本抗体は、非Ａ非Ｂ型肝炎の発症時に出現し
九抗原に対して反応する抗体であることが判明した。
九抗原に対して反応する抗体であることが判明した。
（２）非Ａ非Ｂ型肝炎陰性肝組織との反応性上記（１）
におけると同様の方法で、実施例１及びコで得られた抗
体を用いて、非Ａ非Ｂ型肝炎陰性肝組織を螢光抗体法に
より反応させ反応性の有無を調べた。
におけると同様の方法で、実施例１及びコで得られた抗
体を用いて、非Ａ非Ｂ型肝炎陰性肝組織を螢光抗体法に
より反応させ反応性の有無を調べた。
その結果、本抗体は、Ａ型肝炎もしくはＢ型肝炎の肝組
織切片と反応せず、非ウィルス性肝炎の肝組織切片とも
反応せず、また、正常肝組織切片とも反応しないことが
判明した。
織切片と反応せず、非ウィルス性肝炎の肝組織切片とも
反応せず、また、正常肝組織切片とも反応しないことが
判明した。
参考例３ （感染防御能の有無の判定）（１） 非Ａ
非Ｂ型肝炎に感染発症したチンパンジーより血液を採取
し、これより感染血清を調製した。
非Ｂ型肝炎に感染発症したチンパンジーより血液を採取
し、これより感染血清を調製した。
この感染血清コＭと、参考例１で得喪、ヒ） ＃ （工
ｆＭ ） （／”／ｄ、 、２ ｒ Ｏｎｍ）０．２
−を３７℃で１時間反応させた後、参℃で一夜放置量る
。ついで、抗ヒトエｆＭ抗体（ヘキスト社製）を加え、
さらに３７℃で２時間反応させ九後、参℃で一夜放置す
る。ついで／ ０．０００ ｒｐｍでｌｏ分間遠心分離
し、上清を得た。この上清２１１Ｌｌを用いて正常ラン
プくンジーに静注し、発症の有無を調べた。その結果、
２週間経過後も非Ａ非Ｂ型肝炎の発症体に代えて、抗８
ＲＢＯ抗体（羊赤血球表面抗原に対する抗体）（１０”
／−１Ｊｔｏ品）を用いる以外は、上記と同様の方法で
上清を得、この上清コ―を正常チンパンジーに静注した
。
ｆＭ ） （／”／ｄ、 、２ ｒ Ｏｎｍ）０．２
−を３７℃で１時間反応させた後、参℃で一夜放置量る
。ついで、抗ヒトエｆＭ抗体（ヘキスト社製）を加え、
さらに３７℃で２時間反応させ九後、参℃で一夜放置す
る。ついで／ ０．０００ ｒｐｍでｌｏ分間遠心分離
し、上清を得た。この上清２１１Ｌｌを用いて正常ラン
プくンジーに静注し、発症の有無を調べた。その結果、
２週間経過後も非Ａ非Ｂ型肝炎の発症体に代えて、抗８
ＲＢＯ抗体（羊赤血球表面抗原に対する抗体）（１０”
／−１Ｊｔｏ品）を用いる以外は、上記と同様の方法で
上清を得、この上清コ―を正常チンパンジーに静注した
。
Claims (1)
- （１）（ｉ）蔗糖密度勾配遠心法による密度が約１．１
７〜１．２６であり、 （ｉｉ）非Ａ非Ｂ型肝炎発症個体のリンパ球をＥＢウイ
ルスでトランスフォームすること により非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗体陽性の培養 細胞を得、ついでこれをクローン化して得 られる抗体と反応し、 （ｉｉｉ）非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的な 抗原。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60018201A JPS61176856A (ja) | 1985-02-01 | 1985-02-01 | 非ａ非ｂ型肝炎抗原 |
| CA000500722A CA1259921A (en) | 1985-02-01 | 1986-01-30 | Non-a non-b hepatitis antigens |
| EP19860400216 EP0190972A3 (en) | 1985-02-01 | 1986-01-31 | Non-a non-b hepatitis antigens |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60018201A JPS61176856A (ja) | 1985-02-01 | 1985-02-01 | 非ａ非ｂ型肝炎抗原 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61176856A true JPS61176856A (ja) | 1986-08-08 |
Family
ID=11965021
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60018201A Pending JPS61176856A (ja) | 1985-02-01 | 1985-02-01 | 非ａ非ｂ型肝炎抗原 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0190972A3 (ja) |
| JP (1) | JPS61176856A (ja) |
| CA (1) | CA1259921A (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4673634A (en) * | 1985-03-08 | 1987-06-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Purified antigen from non-A, non-B hepatitis causing factor |
| US5218099A (en) * | 1986-04-01 | 1993-06-08 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Post-transfusion, non-A, non-B hepatitis virus polynucleotides |
| JPS6391328A (ja) * | 1986-10-07 | 1988-04-22 | Mitsubishi Kasei Corp | 非ａ非ｂ型肝炎抗原 |
| US5032511A (en) * | 1987-03-31 | 1991-07-16 | Mitsubishi Kasei Corporation | DNA fragments coding for antigens specific to non-A non-B hepatitis, expression vectors containing said DNA fragments, transformants and process for producing said antigens |
| US5698390A (en) * | 1987-11-18 | 1997-12-16 | Chiron Corporation | Hepatitis C immunoassays |
| US6861212B1 (en) | 1987-11-18 | 2005-03-01 | Chiron Corporation | NANBV diagnostics and vaccines |
| US6171782B1 (en) | 1987-11-18 | 2001-01-09 | Chiron Corporation | Antibody compositions to HCV and uses thereof |
| US5191064A (en) * | 1988-09-30 | 1993-03-02 | The Research Foundation For Microbial Diseases (Osaka University) | Non-a, non-b hepatitis virus antigen peptide |
| US7166287B1 (en) | 1989-12-18 | 2007-01-23 | Glaxo Wellcome Inc. | Viral agent |
| NO905438L (no) | 1989-12-18 | 1991-06-19 | Wellcome Found | Virusmiddel. |
| ES2098511T3 (es) * | 1991-03-26 | 1997-05-01 | Dade Int Inc | Procedimiento de diagnosis de hepatitis no-a no-b. |
| DE4422238C2 (de) * | 1994-06-24 | 1996-05-30 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Isolierung einer Antigenpräparation |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59134029U (ja) * | 1983-02-26 | 1984-09-07 | ティーディーケイ株式会社 | 温度検出装置 |
| JPS59184436U (ja) * | 1983-05-26 | 1984-12-07 | ティーディーケイ株式会社 | 温度検出装置 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4542016A (en) * | 1981-03-27 | 1985-09-17 | Institut Merieux | Non-a non-b hepatitis surface antigen useful for the preparation of vaccines and methods of use |
| JPS58183629A (ja) * | 1982-04-21 | 1983-10-26 | Eisai Co Ltd | 非ａ非ｂ型肝炎関連モノクロナ−ル抗体および診断薬 |
| EP0093438B1 (en) * | 1982-05-05 | 1988-07-20 | Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College | Non-a, non-b hepatitis antigen |
-
1985
- 1985-02-01 JP JP60018201A patent/JPS61176856A/ja active Pending
-
1986
- 1986-01-30 CA CA000500722A patent/CA1259921A/en not_active Expired
- 1986-01-31 EP EP19860400216 patent/EP0190972A3/en not_active Withdrawn
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59134029U (ja) * | 1983-02-26 | 1984-09-07 | ティーディーケイ株式会社 | 温度検出装置 |
| JPS59184436U (ja) * | 1983-05-26 | 1984-12-07 | ティーディーケイ株式会社 | 温度検出装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0190972A3 (en) | 1988-12-07 |
| EP0190972A2 (en) | 1986-08-13 |
| CA1259921A (en) | 1989-09-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mellors et al. | Antigen related to mammalian type-C RNA viral p30 proteins is located in renal glomeruli in human systemic lupus erythematosus. | |
| Mellor et al. | Expression of marine H–2Kb histocompatibility antigen in cells transformed with cloned H–2 genes | |
| Wise et al. | Selective association of murine T lymphoblastoid cell surface alloantigens with Mycoplasma hyorhinis. | |
| JPS61176856A (ja) | 非ａ非ｂ型肝炎抗原 | |
| CA1341431C (en) | Immunotherapy for aids patients | |
| Bellini et al. | Immune reactivity of the purified hemagglutinin of measles virus | |
| JPS58183629A (ja) | 非ａ非ｂ型肝炎関連モノクロナ−ル抗体および診断薬 | |
| JPS63502962A (ja) | ウイルス特異的な永久増殖性組織細胞 | |
| US7871621B2 (en) | Anti-HBs monoclonal antibody | |
| US5610035A (en) | Methods for the preparation of hybridomas producing lymphadenopathy-associated virus (LAV) GP110-specific monoclonal antibodies and methods for the purification of GP110 employing said monoclonal antibodies | |
| Nakai et al. | Monoclonal antibodies to genus-and type-specific papillomavirus structural antigens | |
| Klein et al. | Demonstration of “naturally occurring mitochondrial antibodies” in family members of patients with primary biliary cirrhosis | |
| PT87244B (pt) | Processo para a preparacao de receptores do grupo de receptores pequenos com actividade de ligacao a rhinovirus | |
| PT86117B (pt) | Processo para a preparacao de anticorpos monoclonais antigram negativos | |
| Vora et al. | Production and characterization of monoclonal antibodies to the subunits of human phosphofructokinase: new tools for the immunochemical and genetic analyses of isozymes | |
| Ricciardi-Castagnoli et al. | T-cell lymphoma induction by radiation leukemia virus in athymic nude mice. | |
| JPS62181798A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| DAUSSET | THE HL‐A SYSTEM. GENETIC AND BIOLOGICAL IMPLICATIONS | |
| JPS6156196A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS6125484A (ja) | 抗体を産生する細胞株 | |
| US4743538A (en) | Test for rheumatic fever and monoclonal antibodies useful therefor | |
| US5407811A (en) | Monoclonal antibodies to GP110 of HIV and hybridomas secreting these antibodies | |
| JPS60136599A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JP2994074B2 (ja) | スギ花粉およびヒノキ花粉の定量法 | |
| JPS60130600A (ja) | 抗犬ジステンバ−モノクロ−ナル抗体及びそれを使用する測定方法 |