JPS61167624A

JPS61167624A - 心臓肥大抑制剤

Info

Publication number: JPS61167624A
Application number: JP61010308A
Authority: JP
Inventors: エドワード　エツチ．ブレイン
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1985-01-22
Filing date: 1986-01-22
Publication date: 1986-07-29
Also published as: US4652549A; CA1269934A; EP0189084A3; EP0189084A2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】永年にわたって哺乳類の心房は細胞外液の容量変化を検
知するために重要なセンサーとして作動していると主張
されてきた（ガウアー（Ｇａｕｅｒ）等、フィシオル・
レブ（Ｐｈｙｓｉｏｌ−Ｒｅｖ、）第４３巻、４２３真
、１９６３年）。心房における該受容器としての役割は
、体液の浸透圧濃度を制御するために重要な視床下部ホ
ルモンであるバソプレッシンの場合に知られていた。

尿中のナトリウム排泄を増大させ、細胞外液容量の制御
にも関与している物質の存在が考えられ、最近証明され
た。デボルド（ｄｅ　Ｂｏｌｄ）等、ライフサイ（Ｌｉ
ｆｅ　５ｃｉ）、第２８巻、８９頁、１９８１年はラッ
トの部分的に精製した心房抽出物を他の麻酔ラットに注
射し、尿量及び尿中のナトリウム排泄が非常に増加する
ことを観察した。この比較的粗精製抽出物は内生ナトリ
ウム排泄性物質の特有の性質を有していた。

強力な利尿及びナトリウム排泄効果、特に体液の容量制
御における主効果を発揮するために特に適した材料を生
じさせる性質に加え、この心房抽出物が強力な平滑筋弛
緩作用を有することも発見された（キュリー（Ｃｕｒｒ
ｉｅ）等、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、第２２１
巻、７１頁、１９８３年）。

該作用は細胞外液の容量を調節する役割と同様に血圧の
調節に関し直接的かつ強力な役割を担っていることを意
味している。

この発見が体液容量及び血圧の制御、充血性心疾患及び
高血圧の治療における該天然物質の明確な治療の可能性
をただちに認識させる重要性を有していたため、多くの
研究室で心房抽出物からの活性物質（群）の単離同定並
びに性質を明らかにし化学的に確立することを始めた。

心房からの活性物質（群）は、心房性ナトリウム排泄因
子またはＡＮＦと呼ばれたが、またカルジオナトリン（
ｃａｒｄｉｏｎａｔｒｉｎ）　　（デ　ボルド（ｄｅ　
Ｂｏｌｄ）等、ライフ　サイ、第３３巻、２９７−３０
２真、１９８３年）、アトリオペプチン（ａｔｒｉｏｐ
ｅｐｔｉｎ）（キュリー（Ｃｕｒｒｉｅ）等、サイエン
ス第１）１巻、６７頁、１９８４年）、アウリタリン（
ａｕｒｉｃｕｌｉｎ）（アトラス（＾ｔｌａｓ）等、ネ
イチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）、第３０９巻、７１７−７
１９頁、１９８４年）とも呼ばれた。心房性ナトリウム
排泄因子は一群のペプチドであり、共通アミノ酸配列を
有するが、アミノ末端またはカルボキシル末端のｔ−Ｓ
アミノ酸の有無により長さが異なることが示された。

本発明の目的は心臓肥大抑制剤を与えることである。ま
た心臓肥大抑制活性を有するＡＮＦペプチドを与えるこ
とも本発明の目的である。さらにＡＮＦの生物学的に活
性のあるペプチド断片を含み哺乳類に対し生理学的に投
与することが適した組成物を与えることも目的である。

本発明のこれらの目的及び他の目的は以下の記載から明
らかになるであろう。

ＡＮＦ、そのペプチドサブユニット、及びＡＮＦ様活性
を有する化合物が哺乳類における心臓肥大を減少させ及
びなくすことが発見された。

本発明のＡＮＦペプチドはそれらの構成アミノ酸から蛋
白質合成の標準的な方法、例えば、シュローダ−（Ｓｃ
ｈｒｏｅｄｅｒ）等、ザ　ペプチデス（ＴｈｅＰｅｐｔ
ｉｄｅｓ）　、第１巻、アカデミツク　ブレス（Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）　、１９６５年；ボタンスキ
ー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）等、ペプチド　シンセシス（
ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎ　ｔｈｅｓ　ｉｓ）　　インター
サイエンス　バブリ・ノシャーズ（Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅ
ｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）　、１９６６年；マツ
コミ−（Ｍｃ、０ｍ１ｅ）＆ｉ、有機化学における保護
基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｖｐｓ　ｉｎ　Ｏｒ
ｌ＜ａｎｔｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）。

プレナム　プレス（Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ）　、１
９７３年により製造することができる。これらの文献は
参考文献としてここに挿入する。

本発明のペプチドはまた、組換えＤＮＡ技術、例えば、
適当なりＮＡ配列を単離または製造し、この配列をベク
ターに組込みさらにこのベクターを適当な宿主に導入し
、これから目的のペプチドを発現させる、ことにより製
造することができる。

組換えＤＮＡ技術の使用は多くの出版物に記載されてい
る；例えば、マニアテイス（Ｍａｎｔａｔｉｓ）等、モ
レキュラー　クローニング（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏ
ｎｉｎｇ）、ア　ラボラトリ−マニュアル（Ａ　Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ）　、コールド　スプリ
ングハーバ−（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂａｒ
）　　、ニーニーヨーク、１９８２年。この文献は参考
文献としてここに挿入する。

ＡＮＦペプチド発現の適当な宿主としては、Ｅ。

ｃｏｌｉ　　及びビー　サブティリス（Ｂ、　５ｕｂｔ
ｉｌｉｓ）のような原核生物やサツカロマイセス　セレ
ビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏａ＋ｙｃｅｓ　　ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ）及びチャイニーズ　ハムスターの卵細胞
のような真核生物が含まれる。これらの蛋白質はワクシ
ニア、水痘−帯状庖疹、アデノ、ヘルブス　シムプレッ
クス　ウィルスのような適当な発現ベクトルにより直接
哺乳類で発現させることができることも理解させるもの
である。

本発明の範囲内にある特異的なペプチドは以下のもので
ある：　＾−Ｃｙｓ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｙ　
−＾ｒｇ　−Ｘ　−Ａｓｐ−＾ｒｇ−１）ｅ　−Ｇａｙ
−Ａｌａ　−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−５ｅｒ−８（式中、ＸはＩｌｅまた
はＭｅｔであり、Ａは５ｅｔ−。

５ｅｔ−５ｅｔ−＋Ａｒｇ−３ｅｒ−５ｅｒ−。

＾ｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｔ−。

Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−５ｅｒ−３ｅｒ−。

５ｅｒ−Ｌｅｕ−＾ｒｇ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｓｅｒ−。

Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−＾ｙｇ−Ａｒｇ−５ｅｒ−５
ｅｒ−。

Ｐｒｏ−＾ｒｇ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−３
ｅｒ−３ｅｒ−。

Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ
ｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｔ−＋Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａ
ｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−５ｅｒ−５ｅ
ｒ−。

Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌ
ｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｔ−であり、Ｂは −Ｐｈｅ。

−Ｐｈｅ−Ａｒｇ＋ −Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ＋ −Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ。

−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇであり、Ｃ
末端はカルボキシル基またはそのアミドであり、Ｔｙｒ
残基はヨード化またはヨード化していなくともよい〕。

これらのペプチドは直線状または２個のシスティン残基
の共有結合、例えば、ジスルフィド結合により環化して
もよい。ヨード化した誘導体はヨード化していないペプ
チドをリン酸ナトリウム緩衝液を含む媒体中クロラミン
（Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ）　−Ｔ　（Ｎ−クロロ−４−
メチルベンゼンスルホンアミドナトリウム塩）存在下ヨ
ウ化ナトリウムと処理することにより製造する。ヨード
化反応はチオ硫酸ナトリウムの添加により停止させ、ヨ
ード化ペプチドは、高速液体クロマトグラフィ　（ＨＰ
　Ｌ　Ｃ）カラムにより単離する。放射活性を有するヨ
ード化ペプチドは同様に１２５１を用いて製造す不。

ヨード化誘導体はそれ自体で活性であるが、非ヨード化
合成ペプチドの合成における標準物質としζも有用であ
り、一方放射活性を有するヨード化ペプチドは本発明の
ペプチドのインビトロ及び臨床的な代謝半減期の研究に
有用である。ヨード化誘導体は実質的に非ヨード化ペプ
チドと同様の生物学的活性を有する。

本発明記載の心臓肥大治療法は上記の特異的ペプチドに
限定されず、上記の特異的ペプチドと同様な活性を有す
る同族物、類似物及び合成誘導体を含むことを意味する
ことが理解される。

本発明のペプチド類は、哺乳類、例えば、ハムスター、
マウス、ラットにおいて電解質の均衡の疾患又は／及び
変化した血管系の抵抗性を約１０から約２０００ピコモ
ル／ｋｇ／分、好適には約１００から約１０００ピコモ
ル／ｋｇ／分で単独に、または組合わせて治療すること
が有用である。ペプチド類は、例えば生理食塩水または
リン酸緩衝溶液のような適当な生理学的に許容される担
体を用いて、静脈注射法により投与することができる。

以下の実施例は本発明を説明するものであるが、これを
制限するものではない。以下の実施例において記載した
各文献の開示は参考文献としてここに挿入する。

実施例１ペプチド５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇ
ｌｙ−Ａｒｇ−ｌ１ｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−１）ｅ−Ｇｌ
ｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌ６ｕ−Ｇｌｙ
−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ　　はキュリー（Ｃｕｒｒｉ
ｅ）等、サイエンス、１９８４年１月６日号、６７−６
９頁の記載に従って製造する。

実施例２ペプチド５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇ
ｌｙ−Ａｒｇ−ｌ１ｅ−Ａｓｐ−八ｒｇ−１）ｅ−Ｇｌ
ｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ　　はキュ
リー（Ｃｕｒｒｉｅ）等、上記文献により製造する。

実施例３ペプチド＾ｒｇ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−＾ｒｇ−１）ｅ−＾ｓｐ−Ａｒｇ−１）
ｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−八ｒｇは
アトラス（Ａｔｌａｓ）等、ネイチャー、第３０９巻、
７１７−７１９頁、１９８４年７月２１日号の記載に従
って製造する。

実施例４ペプチドＡｒｇ−５ｅｔ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−’ｌ１ｅ−Ａｓｐ−八ｒｇ−１
）ｅ−Ｇｌｙ−＾１ａ−Ｇｌｎ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＾ｓｎ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−＾ｒｇ
−Ｔｙｒはミソノ（Ｍｉｓｏｎｏ）等、バイオケム、パ
イオフィス、レス、コムン、（Ｂｉｏｃｈｅｎ＋、　Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

Ｃｏｓ＋ｎ＋ｕｎ、）、第１）９巻、５２４−５２９頁
、１９８４年３月１５日号の記載により製造する。

実施例５ペプチドＡｒｇ−Ａｒｇ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−１）ｅ−Ａｓｐ−Ａｒ
ｇ−１）ｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−３ｅｒ−Ｇｌｙ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＾ｓｎ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−
Ａｒｇ−Ｔｙｒはセイダー（Ｓｅｉｄａｈ）等、ブロク
、ナトル。

アカド、サイ、（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　
Ｓｃｉ、）　Ｕ　Ｓ　Ａ、第８１巻、２６４０−２６４
４頁、１９８４年の記載に従って製造する。

実施例６ペブチド５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−＾ｒｇ−５ｅｒ−５
ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−１）
ｅ−＾ｓｐ−＾ｒｇ−１）ｅ−Ｇｌｙ−八ｌａ−Ｇｌｎ
−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−
５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒはフリン（Ｆｌｙｎｎ
）等、バイオケム、パイオフィス、レス、コムン、第１
）１巻、８５９−８６５頁の記載に従って製造する。

実施例７ペプチド５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−５ｅｒ−５
ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｍｅ
ｔ−Ａｓｐ−＾ｒｇ−１）ｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ
−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＾５ｎ−
Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒはカンガワ（Ｋａｎｇ
ａｗａ）等、バイオケム。パイオフィス、レス、コムン
、第１）８巻、１３１−１３９頁、１９８４年１月１３
日号の記載に従って製造する。

実施例８ペプチドＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａ
ｒｇ−＾ｒｇ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｔｉｅ−＾ｓｐ−＾ｒｇ−１）ｅ
−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＾ｓｎ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔ
ｙｒはセイダー（Ｓｅｉｄａｈ）等、上記文献の記載に
従って製造する。

実施例９ペプチドＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−＾ｒｇ−５ｅｒ−Ｌ
ｅｕ−＾ｒｇ−八ｒｇ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈ
ｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−１ｉｅ−＾ｓｐ−＾ｒｇ
−１）ｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＾ｓｎ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａ
ｒｇ−Ｔｙｒはセイダ−（Ｓｅｉｄａｈ）等、上記文献
の記載に従って製造する。

実施例１０ペプチドＬｅｕ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−＾ｒｇ−５
ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙ
ｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｌ１ｅ−Ａｓｐ
−Ａｒｇ−１）ｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−５ｅｒ−
Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｐ
ｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒはセイダ−（Ｓｅｉｄａｈ）等、
上記文献の記載に従って製造する。

実施例１）以下の結果は本発明の代表的なペプチド、即ち実施例５
のペプチドを心臓肥大の抑制のために３０ピコモル／ｋ
ｇ／分の投与量で７日間連続注入した効果を示したもの
である。

心臓重量（１００ｇ組織に対するｇＨｚｏ）処理生理食塩水　　　　　０．８２　　＋　０．０３ｎ＝２
４実施例５のペプチド　０．７０　　＋　０．０３　”ｎ
＝２３正常時処理生理食塩水　　　　　０．５３　　＋　０．０３０＝１
７実施例５のペプチド　０．４５　　＋　０．０２ｎ＝２
２前記の結果は本発明の典型的なペプチドが心臓肥大抑制
に対し有効であることを証明するものである。

＊　ｐ値が０．０５以下で統計的に有意出願　　人　；
　メルク　エンド　カムパニーインコーポレーテッド

Claims

【特許請求の範囲】

（１）心臓肥大抑制活性を有するペプチドの、心臓肥大
を阻止するために有効な量を投与することから成る哺乳
類の心臓肥大治療法。
（２）アミノ酸配列【アミノ酸配列があります】〔式中
、ＸはＩｌｅまたはＭｅｔであり、ＡはＳｅｒ−、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】であり、Ｂは −Ｐｈｅ、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】、【アミノ酸配列があります】であり、Ｃ末端基はカルボキシル基またはそのアミドで
あり、Ｔｙｒ残基はヨード化またはヨード化していなく
ともよい〕を有する直線状または環状ペプチドの、心臓
肥大を阻止するために有効な量を投与することから成る
特許請求の範囲第（１）項記載の方法。
（３）有効量が約１０から約２０００ピコモル／ｋｇ／
分である特許請求の範囲第（１）項記載の方法。
（４）ペプチドを注入法により所定の量を投与すること
から成る特許請求の範囲第（１）項記載の方法。
（５）ペプチドを生理学的に許容される担体と共に投与
することから成る特許請求の範囲第（１）項記載の方法
。
（６）担体が、生理食塩水またはリン酸緩衝溶液である
特許請求の範囲第（５）項記載の方法。
（７）ペプチドが直線状である特許請求の範囲第（１）
項記載の方法。
（８）ペプチドが環状である特許請求の範囲第（１）項
記載の方法。
（９）ペプチドがジスルフィド結合により環化させるこ
とから成る特許請求の範囲第（８）項記載の方法。