JPS61129137A - アレルゲンに対する即時過敏症の治療用組成物及び治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 この発明は、アレルギー、特にアレルゲンに対する即時
過敏症の治療用組成物及びその組成物によるアレルギー
、特にアレルゲンに対する即時過敏症の治療方法に関す
るものである。

従来の技術 即時過敏症（又は過敏性の反応ンは非常に短時分以内に
その症状が現われる。アレルゲンに対するアレルギー反
応は、３９７７球によって作られるＩｇＥ抗体によって
伝えられる。アレルギー症状のない患者は、ＩｇＥａ度
が非常に低いが、アレルギーに病む人は、ＩｇＥａ度が
非常に高い。

この高い濃度のＩｇＥが皮膚リンパ器官、目や鼻や口の
粘膜、呼吸樹や腸に豊富にある肥満細胞を満たすことに
よって、即時過敏症を伝える。肥満細胞は表面ＩｇＥ受
容体をもっており、アレルギー患者は、高濃度のＩｇＥ
が受容体と結合している。この結合したＩｇＥが°、そ
の後適切なアレルゲンによって接触すると、肥満細胞は
脱顆粒（顆粒消失）を引き起こし、周囲の組織にヒスタ
ミンのような様々な物質を放出する。即時過敏症の特有
な臨床の症候、即ち気道あるいは腸の平滑筋の委縮９毛
細血管の膨張、水及び血漿タンパク質に対する浸透性の
増加、濃厚な粘液の分泌作用、及び（皮膚中の）神経の
刺激の原因となるこれらの物質を投下するとかゆみや痛
みを招く。

即時過敏症は、患者にとって有害物であり、最悪の場合
には、非常に重大な問題を与え、極めて稀な場合には、
死に至らしめることもある。患者を効果的に治療する方
法を発見するために、過去長い年月にわたって努力がな
されており、そのような方法が３つ発見されている。そ
れらは、（１）アレルゲンの忌避、（２）除感作及び、
（３）薬剤の使用でるる。このうち、アレルゲンの忌避
はある意味では最良の方法でめるが、当然実際問題とし
て非常に困難でろり、達成するのは通常下司能である。

薬剤の便用による治療は有用であるが、概して、その原
因を処理することよりも、むしろアレルギーの症候を緩
和することに向けられている。また、ある薬剤の使用に
は不都合があり、患者が要求する治療をするために、薬
剤を使用することが常に可能というわけではない。

３つめの治療方法、すなわち除感作は、その問題につい
て、おそらく最も有望な実用的方法であると長い間認め
られてきた。この除感作療法によれば最初はアレルゲン
の投与量は少量でろるが、その後しだいに増量して、あ
る期間以上患者に注入するとアレルゲンに対する抵抗力
が増加してアレルゲンに普通に触れさせても、即時過敏
症の発現を弱める傾向がしばしば起こり得ることが６０
年以上にわたって知゛られている。この処置は「除感作
」　（又は「アレルゲン免疫療法」）として知られてい
る。これは、食物アレルギーの治療には有用でないが、
例えば、アレルゲンを誘導する吸入因子の感受性や虫の
刺し傷によるアレルギー反応の治療に有用である。

除感作は過去長い年月の間首尾よく実行されてきたが、
そのメカニズムは１だ知られていない。

大部分の患者においては、アレルゲンの注入は、ＩｇＥ
抗体でなく、むしろ（議論されている患者のアレルゲン
の注入に関して）肥満細胞のＩｇＥを結びつける能力の
障害となるために、アレルゲンと結合するＩｇＧ抗体を
起こすと思われる。これらのＩｇＧ抗体は「遮断抗体」
と呼ばれている。

しかし、この仮定は常に事実にあてはするわけではない
。首尾よく除感作される患者には血液中の特効のあるＩ
ｇＧの量が少なく、その注入がアレルギーに対して明ら
かに効果のない患者には、多量の特殊なＩｇＧかめる。

どのようなメカニズムだとしても、即時過敏症の患者の
多くは（すべてではないけれども）除感作によってかな
りその症状が緩和されているという事実は残る。その技
術は比較的長い期間、例えば１年あるいはそれ以上、患
者にアレルゲン（そのアレルゲンに患者は感作される）
を注入すること全必要とする。最初に使用される服用量
又は投与量は非常に少量だが、禁忌のないときはその治
療が有効であるならば、その服用量は必要とされる量ま
で迅速に増加される。

アレルギー及び除感作治療法に関して背景となる報告は
、ピサレフト、ポール　デー（Ｂｕｉｓｓｅｒｅｔ　。

ＰａｕｌＤ）、ｒアレルギー」サイエンティフィックア
メリカｙ　（”　Ａｌｌｅｒｇｙ　’　５ｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｃ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　）（１９８２年）；サンダ
ース、フォワードジェイ（５ａｎｄｅｒｓ、　Ｈｏｗａ
ｒｄ　Ｊ　）　、　　「アレルギー」プロテクティブ・
メカニズム・アウトオフ゛・コントロールじＡｌｌｅｒ
ｇｙ　”　Ａ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｍｅｃｈａｎｉ
ｓｍ　ｏｕｔ　ｏｆｃｏｎｔｒｏｌ　）　　シーアンド
イーニュースＣＣ＆ＥＮｅｗｓ　）　　４８巻８４〜１
３４頁（１９７０年）及び「アレルギー性及び免疫学的
疫患に関する入門書Ｊ　　（”　Ｐｒｉｍｅｒ　ｏｎ　
Ａｌｌｅｒｇｉｃ　ａｎｄ　ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃＤ
ｉｓｅａｓｅ　’　）ジェイエイエムエイ（ＪＡＭＡ１
２４Ｂ巻＆　２０　（１９８２年１１月２６日）に示さ
れている。

発明が解決しようとする問題点 除感作治療法には、ある問題かめる。１ず第１に患者は
非常に頻繁に、例えば最初は１日おきか２日おきに、次
第に減らしていって２〜３週間に１度、注入しなければ
ならない。これは時間のかかる処置であるばかりでなく
、患者の正常生活を阻害する結果となる。また投与する
アレルゲンの服用量は、注意深く監視し、制御しなけれ
ばならず、それが処置の複雑さを増している。第２の問
題は治療自身に、患者にとって危険な要素があるという
ことである。前述したように、最初のアレルゲンの服用
量が非常に少なく、どんなアレルギー反応に対しても、
日常予防措置が取られているとは言え、それにもかかわ
らず、（ジンマシン。

ぜんそく、失神のような）局部的あるいは全身のアレル
ギー反応が時には起こり、稀な場合には死に至ることも
ある。これらの理由及び他の理由の友めに、多くの医師
は除感作技術を信用していない。

これらの問題を克服あるいは避ける試みが過去において
なされてきた。注入の回数を減らすために、ある時間を
通してゆっくりとアレルゲンを投下する処理がなされで
き比。これらは、幾かの理由のために非常に好結果をも
たらすというわけではなかった。そのうち最も重要な理
由は、いかに管理しても一度アレルゲンを投与したら、
患者の血液に投下されたアレルゲンの量以上に、働かせ
ることはできないということである。注入の回数を減ら
せるかもしれないもう１つの方法は、より多く投与しな
ければならないアレルゲンの服用量を患者により早く投
与できる治療法を案出することであるが、現在１でその
ような治療法は案出されていない。過去にはまた「純粋
な」物質の代わりに緩和したアレルゲンを投与する可能
性に注意が注がれた。このように免疫を生じる能力（ｉ
ｍｍｕｎｏｇｅｎｅｎｉｃｉｔｙ　）　（すなわち患者
に免疫性の反応を引き起こす能力）が変化しないと同時
に、アレルギーを起こす能力が十分に減じられるように
アレルゲンを化学的に緩和する試みがなされてきた。こ
の方法で、いくつかの限られた成功が達成されたが、そ
れ自身、ある不利益を有している。

１ず第一に、各々にアレルゲン（及び、もちろんそこに
はばく大な数のアレルゲンがあり、そのアレルゲンに対
して患者が感作され、このように除感作治療法が必要と
なる）を特定の化学構造に従って個別的に緩和しなけれ
ばならない。このように除感作治療法に関して、アレル
ゲンを緩和するために、例外なく適用モきる満足な技術
はない。

第二に受は入れられる緩和したアレルゲンを案出するの
に、かなりの研究を必要とする。そしてその研究が、除
感作治療法に有用な必要条件であると考えられ患者に相
反する反応を引き起こすための化学的緩和も必要である
。第三に除感作治療法では服用量の正確な制御がこのよ
うに重要であるので（偶然にも服用量が多過ぎると患者
を死に至らしめる可能性がある）、必要とされる適当な
服用量を決めることが、緩和し之アレルゲンとともに問
題である。

問題点を解決するための手段 発明者等は、即時過敏症に関して、以前に知られてい友
装置の問題及び不利益の多くを減じ、あるいは克服さえ
もする除感作治療法を実行する方法を発見した。特に我
々はすべてのアレルゲンに例外なく適用できるアレルゲ
ンの投与方法全発見した。その方法は患者をどんな危険
にもさらさず、その方法によって、アレルゲンを多量に
投与することもできる。

本発明によれば、アレルゲンに対して即時過敏症をもつ
患者（人間であるか動物であるかンは、アレルゲンに対
して指示される抗体と混合した前記のアレルゲンを投与
することによって感作される。本発明はさらに投与の適
当な形式、むしろ無菌の注入形式で、上記方法に使用す
るための、アレルゲンとそれに対する抗体との混合物か
らなる組成物を供給する。

特定のアレルゲンに対するアナフィラキシ−反応（ａｎ
ａｐｈｙｌａｃｔｉｃ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　）に苦しむ
患者が、１以上の別のアレルゲンに対する反応に苦しむ
のは異常なことではない。しかし、二以上のアレルゲン
を同時に顕慮して、そのような患＠を除感作することは
、本発明の方法、すなわち各々のアレルゲンに対する抗
体を混合して、前記のアレルゲンを投与することによっ
て可能となる。このように例えば本発明の構成２つのア
レルゲンと２つの抗体（各々のアレルゲンに対してそれ
ぞれ指示されるもの）の混合物から成ることができる。

２以上のアレルゲンのために同時に起こる除感作は本発
明の２以上の組成物、すなわち、１つのアレルゲンのみ
と、各々の抗体から成る各々の組成物を投与することに
よって遂げられる。

我々は上記のことをアレルゲンに対する抗体から成る本
発明の組成物に留意する。すべての抗体の代わりにＦ　
（ａｂ’）２のような抗体の断片を用いることもできる
。また、もし要望するならば、巣クローン抗体を用いる
ことができるものと考えられる。

作用 本発明による治療法においては、アレルゲンと抗体の混
合物が必要的にアレルゲンに対して免疫性のある抗体の
混合物を含み、抗体がこのように、アレルゲンのアレル
ギーを起こす能力を減じるものと考えられる。これによ
り、この混合物のアレルギーを起こす能力が非常に減ら
されるという観察結果が説明されるでろろう。

実施例 本発明を実行するには本質的に３つの段階がある。すな
わち、 （イ）アレルゲンの同定とそれに対する抗体の調製（ロ
）本発明の組成物を作るためのアレルゲンと抗体の混合
物の形成 ←９患者への組成物の投与 これらの段階について、さらに詳細に述べる。

（イ）抗体の調製 アレルギーの原因となるアレルゲンは、既知の標準的な
技術によって決定できる。それに対する抗体は、その後
生成される。抗体の出所は３つある。すなわち、（ａ）
免疫化された動物、（ｂ）個々の血液供与体及び多数の
供与体から集められ友血漿、（Ｃ）患者自身である。

患者は通常血液供与体よりも、多量の特定の抗体を有し
ているので、我々は患者からの抗体を好んで使用する。

動物からの抗体は、好１しくない副作用の危険がるるた
め、一般に使用することは望１しくない。

抗体は多クローン性、あるいは単クローン性であり、例
えば分画されていない血漿あるいは血清、つ１り免疫グ
ロブリン画分（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｆｒａｃ
ｔｉｏｎ　）のように精製された形のどちらの形式をと
っても使用することができる。多クローン抗体ヲ使用す
れば、はがされた抗原決定基に対するアレルギー反応の
危険性が低下する。抗体を精製することは治療上無関係
な物質を取り除くのに利益がある。抗体はいろいろな既
知の技術、例えば固相に結合させることにより溶解して
いないアレルゲンを吸収するような技術によって精製で
きる。

抗体は、その後、極端なｐＨの状態のような抗原抗体複
合体全分離する状態下で溶離によって、あるいは破壊的
な試薬の使用によって回収できる。

（ロ）本発明の組成物の形成 本発明の組成物は１以上のアレルゲンを１以上の抗体と
採用される特定の投与ルートに都合のよい形式で混合す
ることによって調製される。抗体は特定の抗原（アレル
ゲン）とのみ反りするのでアレルゲンの調整は、非常に
粗製な調整でさえ有毒な物質を取り除けば、はとんどの
場合使用することができる。しかし、アレルゲンの存在
量を評価し、制御することは容易なので、アレルゲンを
純粋に、あるいは比較的純粋に調整することが望ましい
。そして、その調整は服用量を制御するために重要なこ
とである。

アレルゲンに加えられる抗体の割合は、本来抗体の中和
能力によって明らかになる。組成物を投与したときに実
際には、アレルゲンによるアレルギーの影響がないよう
に、必要なだけの抗体を用いなければならない。この最
小量は、通常、少なくともアレルゲンの量の３倍のモル
数の抗体が必要だろう。必要ならば、日常的な試験を行
なうことによって、特定のアレルゲンと抗体について、
使用する抗体の最小量を決めることができるだろう。使
用される抗体の量には最大量はない。安全のために我々
は約５００倍１でのモル数の過剰量を用いる。より多量
の過剰な抗体であっても利用できるが、それはもちろん
、貴重な物質のむだ使いである。アレルゲンと抗体の混
合物全調整する簡単な方法の１つは、免疫沈殿物を用い
ることである。この方法はアレルゲンあるいは抗体の精
製の必要がない。これは、患者の血漿あるいは血清をア
レルゲンとともに定温放置し、それから遠心分離するこ
とによって得ることが出来る。その沈殿の進行は、ポリ
エチレングリコール及びデキストランのようなポリマー
または補体のリウマチ様の要素（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ
　ｆａｃｔｏｒ　）　　６るいはＣ１ｑ要素（Ｃ１ｑ　
ｆａｃｔｏｒ　）のような生物試薬を加えることによっ
て高めることができる。

本発明の構成は、アレルゲンと抗体に加えて、いくつか
の別の適当な成分を含めることができる。

例えば、注入可能な場合には、抗体、防腐剤（例えばフ
ェノール）及び補助薬（例えばペプチドグリカン、チロ
ミンクリスタル）の変性を防ぐために人間のアルブミン
を含むことができる。

注入可能な液体の保菌媒体（ｃａｒｒｉｅｒ　）は、例
えば、蒸留水、あるいは、なるべくなら食塩水（９ｇ／
Ｌ塩化ナトリウム）り石いは食塩の緩衝溶液（ｐ　Ｈ７
，０）でるる。一般に液体の保菌媒体は刺激の少ないも
の、例えば中性のｐＨで生理学上のイオン強度から成る
べきである。組成物の強度はなるべくならアレルゲン濃
度及びアレルゲン／抗体比によりて表わすのがよい。一
般に抗体は少なくとも３倍のモル数存在し、最も一般的
にはモル数が５００倍箇でだろう。

本発明の組成物は（上述したように）投与ルートによっ
ているいろな形態がある。このように、この組成物は例
えば無菌の注入又は注射による投与可能な形態である。

あるいはまた、この組成物は鼻、気管支、涙腺及び胃腸
の粘膜等に局部的に適用するのに都合がよい。この場合
、この組成物は、目や鼻の点滴薬と同様な形、あるいは
保護された腸のカプセル等の形態とすることも可能であ
る。

液体の場合、これらは溶液ｌ之は懸濁液である。

その液体はアンプルに貯蔵することができ、１友は凍結
乾燥して直ちに使用前の状態にもどすことができる。本
発明の組成物はかなり安定であり、殺菌し之アンプル中
では標準的には室温で少なくとも４〜５週間あるいは４
℃で少なくとも１２〜２４ケ月の間、貯蔵することがで
きる。凍結あるいは凍結乾燥すると貯蔵できる期間はさ
らに長くなる。

ビラ組成物の投与 本発明の注入可能な組成物はいろいろなルー　トで注入
することができる。すなわち、皮膚内、皮下、筋肉内お
よび（非常に注意して行う場合のみ）静脈内に注入でき
る。これらの投与方法のうち、皮膚内に投与するのが望
ましい。そのルートには、不適当な抗体が存在して、組
成物中のアレルゲンに必要な中和を行なうと、非常にき
れいな皮膚反Ｃ’ｒ起こすという利点がある。注入の回
数は非常に広範囲にわたって変えることができ、例えば
アレルゲンの種類、疾患の軽重、及び除感作の程度によ
って毎日から年１回１で変えることができる。

アレルゲンの投与量は通常、注入ごとに２倍にする。そ
して、当然、服用量は非常に急速に増加する。増加量を
より多くするか、より少なくするかは、当然、臨床の状
態によって決めることができる。

本発明の組成物は、他の注入可能なものより、投与する
のに適当だろう。例えば、呼吸作用のアレルギーは、例
えば０．３５　ｍｌ　／　ｍｉｎ　　の割合で。、５か
ら５μｍの粒子金与えるマイクロネビーライザー、バー
ド（Ｍｉｃｒｏｎｅｂｕｌ　１ｚｅｒ）（Ｅｉｒｄ　）
　ｆ用いて、エーロゾル投与によって治療することがで
きる。

その際、患者は、一度深く呼吸し、２秒間呼吸しないよ
うにしなければならない。服用は例えば望壕れる期間中
、週に１度の間隔でくり返すことができる。

最初の投与、例えば注射に使われる組成物中のアレルゲ
ンの量は、典型的な除感作技術に使われるアレルゲンの
量と同じか、あるいは通常それよりも多く例えば、８０
倍程度にすることができる。

このように、典型的な技術では、通常の最初の服用量は
約１０−１０　ｇから１０　　ｇである。すなわち、例
えば、典型的な除感作技術では、ダニ（ｔｈｅ　ｈｏｕ
ｓｅｄｕｓｔ　ｍ１ｔｅ　）から精製した０、　１から
１ナノグラムのアレルゲンを最初の注入に使用すること
ができる。

本発明の方法では、アレルゲンの最初の服用は３倍から
５００倍のモル数の抗体とともに（すなわち抗体；アレ
ルゲンのモル比は３がら５００）ｊｉ用される。本発明
で選んだ最初の服用量は、通常ある患者と別の患者では
異なり、皮膚内に注入しｔ後、直径３〜５　ｒｎｍの皮
膚反応を引き起こす服用量と一致する。

本発明をさらに十分に理解するために、ダニ（ｔｈｅ　
ｈｏｕｓｅ　ｄｕｓｔ　ｍ１ｓｔ　＝　ｌ）ｅｒｍａｔ
ｏｐｈａｇｏｉｄｅｓｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ　（
Ｄ　Ｄ　Ｔ　）　）によって引き起こされたアレルギー
性のぜんそくに病む３人の患者の治療を実例金挙げて示
す。

臨床例 １、患者 ３人の患者を次のとおりに確認した 患者　　かしら文字　　性別　　年令 Ｉ　　　　　　　Ｌ、　　Ｌ　　　　　　　女　　　　
４０２　　　　　　　　Ｂ、　　Ｊ　　　　　　　　男
　　　　　２１３　　　　　　　Ｗ、Ｅ　　　　　　　
女　　　　３７彼等は次の基準により選ばれた。

■長期間（５年以上）気管支のぜんそくがな（１年のう
ち少なくとも３ケ月は仕事から離れて、少なくとも１度
は集中的な管理金堂けなければならなかつ友こと。

■明うかに１）ＰＴ（ジフテリア、百日ぜき、破傷風（
ワクチン））が原因となる試薬である外部からのぜんそ
くの形跡があること。

■アレルゲンを用いた皮膚内の試験及び気管支の刺激試
験によって、ＤＰＴに対して高い感度を示すこと。

■ＤＰＴの特異的抗体が高水準であること。

■ＤＰＴの之めに少なくとも１度典型的な除感作が失敗
していること。

■皮膚の治療を継続的に必要としないこと。

３人の患者にはすべて毎日、薬剤を投与し友。

この薬剤はエーロゾル中にテオフィリン及び誘導体β２
−作用物質（β２−　ａｇｏｎｉｓｔｓ　）を含み一患
者のひとりは問題のネイザルベクロメタゾン（ｎａｓａ
ｌｂｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ　）　　ｆ含んでいｉ
（Ｂ、Ｊ）、彼等は、二人ＣＢ、Ｊ及びＷ、Ｅ）が慢性
鼻炎になっていることを除いて、他の既知の疾患をわず
らっていない。

患者の一人（Ｗ、　Ｅ　）は、花粉の季節中、枯草熱や
ぜんそく、及び花粉に対して高度に特異的なＩｇＥ抗体
によって、示されるように草の花粉に非常に敏感である
。

これらの患者に対して、本発明による治療方法を３ケ月
間実施した。

治療には彼等自身から摂取した抗体で作られた抗原抗体
を用いた。

２抗体の精製 ａ、血漿の収集及び取り扱い それぞれの患者から採った血漿１００ｍｔ’ｒ３７℃で
４時間、１８％のＮａ２８０４　ｋ用いて沈殿させた。

沈殿物全洗い、ＬＭのＮａＣ１ｋ含むりん酸塩にて緩衝
化し之食塩水（ＰＢＳ）で再び懸濁させ、小さい粒子を
沈降さぜる友め遠心分離をしｔ後、０．４５μのフィル
ターに通してろ過した。この溶液２５ｍ１ｋ　９Ｘ９０
ｆｆＴＳＫ　　ＨＦ−５５（Ｍｅｒｃｋ　。

ｐａｒｍｓｔａｄｔ　）のゲルカラムに用いて、２５０
　ｍｌ／　ｔの割合でクロマトグラムを行ない、１０ｒ
ｒＬｔの留分全回収した。２つの主なピークはＩｇＭと
ＩｇＧ（及びＩｇＡとＩｇＥ）ｋ示す。免疫拡散によっ
て、混ざっ友混入物は、示されるように約５％だった。

ＩｇＭとＩｇＧ（及びＩｇＡとＩｇＥ）は、２５ｍｔ以
下の容積にＸＭ−１００アミコア　（Ａｍ１ｃｏｎ　）
膜全通して、限外ろ過によって別個に濃縮し、透析槽を
いくつか変えながら、ＰＢＳに対して３日間透析した。

それから、その溶液全０．２２μＧＶフイルター（Ｍｉ
ｌｌｉｐｏｒｅ　）に通し、無菌状態で貯蔵する。

ｂ、免疫吸着剤の調製 商業上利用できるアレルゲンをウルトロゲル（Ｕｌｔｒ
ｏｇｅｌ　）　Ａ　ｃ　Ａ　４４及び（又は）ウルトロ
ゲル（Ｕｌｔｒｏｇｅｌ）ＡｃＡ５４　（ＬＫＢ）でゲ
ルろ過クロマトグラフィーによって、−ｆｆｃある場合
には、不溶性の特異的な多クローン抗体あるいは単クロ
ーン抗体で特別の免疫吸着によって精製した。

その後アレルゲンをカルボジイミドとともに、カルボキ
シル化したアガロースと結合させＩｃＨ−セ７７０−　
ス４　Ｂ　；　Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ｌｉ’ｉｎｅ　ｃ
ｈｅｍｉｃａｌｓ）。

この目的の之め、アレルゲン’ｔ　Ｏ，Ｉ　Ｍのカルボ
ジイミド及びカルボキシル化し次アガローストドもに、
２１℃で２４時間ｐ　Ｈ４，５で温育した。

固相に残存している反応性の基を２１℃で３時間ＩＭの
グリシンとともに温育することによって、不活性化し友
。その後、免疫吸着剤を０．５　ＭのＮａＣ１ｆ含む０
．１Ｍアセテート緩衝液ｐ　Ｈ４，０か０、５　Ｍ　１
７）　Ｎａｃｚを含む０．１Ｍ炭酸塩緩衝液ｐｉ（８，
３のいずれかで洗った。必要な抗体とともに不必要な物
質が溶離するのを避ける友め、免疫吸着する前に、この
後述べられるように、ゲルを溶離状態にしておき、３Ｍ
のチオシアン酸アンモニウムでもう一度洗つ友。

Ｃ９特異的な抗体の抽出 それぞれの患者から取った免疫グロブリンの部分（１〜
２ｇ）ｔ”免疫吸着剤カラムに用いる（５ｍｔ；１０×
２Ｃｒｎ；流速２０ｍｔ／ｈＪ、適当に洗つ之後、特定
の抗体が回収される。− １，２８０ｎｍにおける吸光度が０．０２以下になる１
でＰＢＳで洗った。

２非特異的な吸収全除去するために、ＩＭのＮａＣ１金
含むＰＢＳで洗った。

３、９　ｇ／ｌのＮａＣ１５０ｍｌ、で洗った。

４、溶離は、ＰＢＳに随伴するクエン酸５０ｍＭ。

ｐＨ２，７の一部を継続的に流して行なった。

新たな洗浄と溶離操作はそれぞれ、流水中にタンパク質
が見つけられなくなる１で行なった。クエン酸とＰＢＳ
で溶離し比部分を直ちにプールし、２ＭのＴＲｌ５−Ｈ
Ｃｔ緩衝液を１滴ずつ加えて中和し、ＹＭＩＯ限外ろ過
膜で濃縮し、ＰＢＳに対して４８時間透析した。その後
、溶出液Ｔｈ　０．２２μのフィルターでろ過し、無菌
のガラスビンに貯蔵シ比。免疫吸着剤を３Ｍのチオンア
ン酸アンモニウムで、２０分間洗浄し、最後に１００　
ｍｌのＰＢＳで洗浄し友。

緩衝液はすべて０．２２μのフィルターでろ過し友。

ｄ、特異的な抗体の収量及び類別 ２８０　ｎｍにおける吸光度によって評価された特異的
な抗体の量は、血漿１００　ｍｔあ之り２から６ｍｇの
範囲であった。

溶離した抗体を分析しても、リウマチ様の要素（ａｎｔ
ｉ　−Ｉ　ｇ　Ｇ自己抗体）のような自己抗体の存在を
示すことはできなかったが、特異的な抗体が次の種類か
ら成っていることが示された。ＩｇＧ（５０％Ｊ、Ｉｇ
Ｍ（３５％）、ＩｇＡ（１４，５％）及びＩ　ｇ　Ｅ　
（０，５％）であっ之。免疫比濁分析によって別の血漿
タンパク質は見つけられなかっ之。

３、抗原抗体複合体の調整 ａ、沈殿曲線 特異的な抗体によって、抗原の決定要素が湛されている
複合体中の抗原と抗体の最適な比率を決定するために、
次のような沈殿曲線を作った。同じ量の抗体を含む一連
の管の中に、０．１Ｍボラートバッファーｐ　Ｈ８，５
中の希釈度を増加していった抗原をピペーｌトで分注す
る。その後、ポリエチレングリコールを最終濃度２００
ｇ／４になる壕で加えた。２１℃で４時間温育し友後、
４°Ｃで１６時間温育し、８０００ｇで２０分間遠心分
離をする。沈殿を洗浄し、上澄み及び沈殿中のタンパク
質の量をローリ−の技術によって見積った。安全のため
に、最も大きい沈殿を与える抗原の量の塊全注入に用い
友。この状態では、抗体は大過剰にある（抗原／抗体１
重量比１１５００　）ｂ、複合体及び注入できる組成物
の調整０．３％の人間の血清アルブミンと４％のフェノ
ールを含む９ｇ／ｌのＮａＣ２中において、抗原と抗体
全重量比１１５００で混ぜ合わせた。溶液はすべて、無
菌の０．２２μフイルターを通し、無菌状態で処理した
。最終的な体積は２　ｍｔであり、４００μｇの抗体と
８００μｇの抗原を含んでいた。注入可能な溶液は、使
用する１で、密封したガラスビンに入れ、４℃で保存し
た。

４、注入 ａ、患者の耐性 組成物に対する患者の耐性を評価するために、抗体の量
を一定にしたま１、抗原を連続的に希釈した（組成物は
概して上記３（ｂ）節で述べたとおりである）。それら
の希釈物をそれぞれ２０μｔずつ、最低の抗原抗体比か
ら始めて、皮膚内に注入した。注入の間隔は１５分だっ
た。本研究を通じて、満足な皮膚反応（最大の直径が３
Ｃｒｎの影疹）全与える最も高い抗原抗体比を選び使用
した。

１１５００の比で、通常複合体は、小さな皮膚反応を引
き起こすか、あるいは１つたく反応しなかつ几。

ｂ、注入の概要 腕の内側への皮膚注入は、６週間、毎週繰り返し、それ
から合計３ケ月間は２週間ごとに繰り返し友。代表的な
案として、４μｇの抗体と８　ｎｇの抗原を含む体積２
０μｔ’ｃ最初の注入に使用した。この体積は最大２０
０μｔまで毎週２倍にし、この研究の終了（３ケ月）１
で継続し之。

５゜臨床結果 ａ、主観的評価 副作用には特に言及しない。患者によくなつ友と知らせ
、ぜんそくの症候に関する限りよくなつ几。３人の患者
のだれもが、１回の注入では、きれいなアレルギー反応
全示啓なかった（全部で４０回の注入が必要たつｆｃ）
。注入位置には、比較的弱い皮膚反応があるか、又は１
つたく反応金示さなかった。

ｂ、臨床的評価 患者の臨床結果を評価するために、３つの基準を用いた
。

一アレルゲンに対する皮膚の反応性 −アレルゲンによる気管支の刺激検査 −基線量肺ＦＡ能（ｂａｓｅｌｉｎｅ　ｌｕｎｇ　ｆｕ
ｎｃｔｉｏｎ　）−１皮膚の反応性 アレルゲン’ｅ　０．３　％アルジミンと４％のフェノ
ールを含む９　ｇ／ｌのＮａＣｔで連続的に希釈し、２
０μｔｆ腕の中の皮膚内に注入し友。２０分後、膨疹全
面積を平面面積測定法によって測定し、アレルゲン濃度
に対して、グラフにグロｙトした。

ある彰疹の面積を得るのに必要なアレルゲンの量はその
曲線から読み取っ几。同様なアレルゲンの調合剤は、免
疫療法前及び免疫療法後にされる試験のために便用した
。３人の患者の場合、治療前に見られたのと同じくらい
激しい皮膚反応を引き起こすために、１６回以上、アレ
ルゲンを使用する必要があることが治療後にわかった。

２　気管支の刺激検査 免疫療法前後に、ＤＰＴＫ対する気管支の反応性を評価
するために、覆々の希釈度のＤＰＴの煙霧質を患者に与
えた。十分に標準比した状態下で、１秒当９、無理矢理
息を吐き出した体積（ＦＥＶ、）と気道コンダクタンス
を評価した。これらの２つのパラメーターの値をアレル
ゲンの希釈度に対してプｃＩヴトすることＫより、ＦＥ
Ｖｌの２ｏチ降下あるいは気道コンダクタンスの３５チ
減少を与えルアレルケンノ希釈度を決定した。アセチル
コリンに対する気管支の非特異的な反厄をこの方法で評
価した。次の表は、我々の患者の気管支の敏感性を３ケ
月の免疫療法前後で比較している。

（Ｊ−ス下＃−白） ＊ＮＤ＝測定しなかつ友。

＊＊使用したアセチルコリンまたはＤＰＴの最も濃度の
高い所では気管支の反応性はみられなかっ友。

３　基線全肺機能 臨床の追跡調査の間、基線量ＦＥＶ、と気道レジスタン
スを評価した。３人の患者は３〜４゛週間の治療の後、
正常な値の１００％に達した（患者１゜２及び３に関し
てそれぞれ１１１，１２７及び１０２％）。これらの値
は患者１を除いて、研究中ずつと維持畑れた。、ｅ者１
のＦＥＶ、は正常な値の７０φ１で低下したが、これは
、この患者には気管支の刺激検査が行われなかったから
である。

６、実験室における研究 ａ、特異的な抗体 実験室における研究を治療の前後９週間に渡って行なっ
た。上記の表にその結果が与えられている。この結果か
ら、次のように見ることができる。

ａ、ＤＰＴの特異的なＩｇＧは適度に増加する。

ｂ、ＤＰＴの特異的なＩｇＥは劇的に増加する。

Ｃ０全体のＩｇＥはわずかに減少する。

同様の変化が３人の患者に見られた。

ｂ、ガラス中のＩｇＥ合成 ガラス中のＩｇＥ合成の総量は、７日間、培養した周辺
のリンパ球（細胞）によって評価し之。

ＩｇＥの分析は放射標識免疫定量法（ｒａｄｉｏｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙｌによって表面に浮かぶ物質を用いて
行なった。結果は次のとおりである。

ｅｅｋｓ ＊は表面に浮かぶ物質（ｐｇ／ｍｊ）を表わす。

ＮＤは決定できなか−）　之（ｎｏｔ　ｄｅｔｅｒｍｉ
ｎｅ山）ことを意味する。

上記の表に示された結果から７週間の研究を通して、３
人の患者はすべてガラス中のＩｇＥの総生産量が減少す
る傾向にあることがわかる。これらの結果は患者２及び
３については１８週間継続した。しかし、ＩｇＨの総量
の水準は、いくつかの要因に影響される。研究の経過中
において、患者１は伝染性の気管支炎が現われ、それに
よりＩｇＥａ量の増加を説明できることがわかった。

結論として、典型的な免疫療法に抵抗したひどいぜんそ
くをもった３人の患者は、（本発明に従りてン抗原抗体
複合体の注入を繰り返した後主にＤＰＴとともに皮膚内
あるいは気管支内の激しい攻撃によって示されるように
はっきりとよくなった。　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　（ｙ又Ｔ余ｆｌ）さら
に加えて二人の患者に上記と同様に治療を施した。こｎ
らの患者は患者４及び５とする。

患者委は草の花粉に対してひどいアレルギー性の過感作
をもった３９歳の女性である。彼女はひどい気管支のぜ
んそく、血管運動性鼻炎及び一般に言うしん１疹の再発
性エピソード（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｅｐｉｓｏｄｅｓ）
など花粉の季節（彼女の住んでいる国、ベルギーでは４
月から７月）Ｋ限って、抗原として作用するアレルゲン
によって発現さｎるあらゆる症状を被っている。

他にどんなアレルギーも診断さｎなかった、約１０年間
、彼女はテオフィリン誘導体、ベーター２−作用薬（ｂ
ｅｔａ−２−ａｇｏｎｉｓｔｓ）及びクロモグリケート
ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ　ｃｒｏｍｏｇｌｙｃａｔｅ
）を定期的に使用することに加えて経口コルチコステロ
イドをのまなけｎばならなかった。

我々は、彼女自身の特異的な抗アレｌレゲン抗体ととも
に、アレルゲンによって作らｎる溶液を毎週注入するこ
とによってこの患者を治療した。調整の段階はすべて上
記プロトコルに従って厳密になさｎた。治療は４月に始
め、６週間続けた。その後２週問おきに前記の溶液の注
入を継続した。

副作用は何も示さなかった。花粉に対してアレルギー症
状を有する患者は、この季節の間ひどい症状を経験する
けルども、この女性はぜんそぐ、鼻炎、あるいはじんま
疹の形跡はまったく示さなかった。さらに印象的な事は
、彼女が花粉の季節に薬物を服用しなかったことだ。７
月の終わりになって彼女は軽い鼻炎にかかったが抗ヒス
タミン性の薬剤によって治癒した。

患者５はひどいアトピー性皮膚炎をわずらっている４２
歳の女性である。彼女は、皮膚の検査及び彼女の血漿中
の特異的なＩｇＥ抗体のタイターによつ゛て明示さｎた
ように、幾つかのアレルゲンに対して敏感である。彼女
の皮膚炎は、はとんど−年中症状を示しているが、草の
花粉の季節になると、定期的にひどく悪化する。治療は
４月の症状がすでに顕著になったころに始めた。彼女は
他のどんな薬物も服用していなかった。２週間後（又は
３回の注入後）、その後皮膚の障害は全く見えなくなり
、６年以上の間、観察さ几ていない。また日と比べｎば
、明らかに好転していた。

（」・大王＃ｔθ 発明の効果 アレルゲンを抗体と混ぜることによって、従来技術の処
理以上に、幾つかの有利な点を達成できることを発見し
た。

１ず第一に、これは例外なく適用でき、比較的簡単なア
レルゲンの処理方法である。抗体はいくつかの、１几す
べでのアレルゲンのために増加することができ、アレル
ゲンとの混合は、全く簡単な操作にすぎない。第二に、
抗体は患者自身から得られるので、それに相反する反応
の危険は実際には取り除かれる。これはアレルゲンを化
学的に緩和する念めの従来技術の方法（従来技術では相
反する反応が得られる）と著しく対照的である。

実際、アレルゲンが化学的にもう一つの物質と結合する
ことにより緩和されると、患者はこの別の物質に敏感に
なり得る。これは自然に発生する抗体を働かせて生じる
のではない。第三に純粋なアレルゲンを用いることがで
き、アレルゲンの服用量が非常に精密に、簡単に制御で
きる。さらに、この治療法の臨床的効能は非常に良い。

従来の除感作技術で失敗した患者でも、本発明の方法の
恩恵を被ることがわかっ之。さらに本発明の治療に必要
な期間は、従来の処置に比べ著しく減少できることがわ
かった。これは本発明により、従来の処置よりも早く、
より多いアレルゲンの服用量に達することが通常可能で
あるためだろう。ま定本発明の治療法にはいかなる局部
的な、あるいは全身的なアレルギー反応も起さないよう
に思われ、このように、この治療法の使用による危険は
従来技術により緩和したアレルゲンを使用する治療法よ
りも少ない。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）アレルゲンと、該アレルゲンに対する抗体との組
   成物にて成るアレルゲンに対する即時過敏症の治療用組
   成物。 （２）前記抗体の量は、前記組成物投与時に著しいアレ
   ルギー反応を引き起こさない量とした特許請求の範囲第
   １項に記載した組成物。 （３）前記抗体はアレルゲンに対して少なくとも３倍の
   モル数以上の量である特許請求の範囲第１項又は第２項
   に記載した組成物。 （４）液体を含有し、無菌の注入可能な液状となつてい
   る特許請求の範囲第１項乃至第３項のいずれかに記載し
   た組成物。 （５）前記液体は塩水である特許請求の範囲第４項に記
   載した組成物。 （６）鼻、気管支、涙腺、胃腸の粘膜に投与可能なエア
   ーゾル又は滴下して投与する粘性液状とした特許請求の
   範囲第１項乃至第３項のいずれかに記載した組成物。 （７）前記抗体は治療を行なう患者より摂取する特許請
   求の範囲第１項乃至第６項のいずれかに記載した組成物
   。 （８）２以上のアレルゲンとそれらに対する抗体とにて
   成る特許請求の範囲第１項乃至第７項のいずれかに記載
   した組成物。 （９）凍結乾燥された状態である特許請求の範囲第１項
   乃至第３項のいずれかに記載した組成物。 （１０）アレルゲンと、該アレルゲンに対する抗体との
   混合剤にて成るアレルゲンに対する即時過敏症の治療用
   組成物を調製し、該組成物を動物に反復して投与するこ
   とを特徴とするアレルゲンに対する即時過敏症の治療方
   法。 （１１）前記組成物の抗体の量は、前記組成物投与時に
   著しいアレルギー反応を引き起こさない量とした特許請
   求の範囲第１０項に記載した治療方法。 （１２）前記組成物中の前記抗体はアレルゲンに対して
   少なくとも３倍のモル数以上の量である特許請求の範囲
   第１０項又は第１１項に記載した治療方法。 （１３）前記組成物を液体を含有し、無菌の注入可能な
   液状に調製した特許請求の範囲第１０項乃至第１２項の
   いずれかに記載した治療方法。 （１４）前記の組成物に含有される液体は塩水である特
   許請求の範囲第１３項に記載した治療方法。 （１５）前記組成物は、鼻、気管支、涙腺、胃腸の粘膜
   に投与可能なエアーゾル又は滴下して投与する粘性液状
   である特許請求の範囲第１０項乃至第１２項のいずれか
   に記載した治療方法。 （１６）前記組成物中の前記抗体は治療を行なう患者よ
   り摂取する特許請求の範囲第１０項乃至第１５項のいず
   れかに記載した組成物。 （１７）前記組成物は２以上のアレルゲンとそれらに対
   する抗体とにて成る特許請求の範囲第１０項乃至第１６
   項のいずれかに記載した治療方法。 （１８）アレルゲンと、該アレルゲンに対する抗体の混
   合物を形成し、該混合物を動物に繰返し投与する動物の
   アレルゲンに対する即時過敏症の除感作治療方法。 （１９）前記組成物の抗体の量は、前記組成物投与時に
   著しいアレルギー反応を引き起こさない量とした特許請
   求の範囲第１８項に記載した治療方法。 （２０）前記組成物中の前記抗体はアレルゲンに対して
   少なくとも３倍のモル数以上の量である特許請求の範囲
   第１８項又は第１９項に記載した治療方法。 （２１）前記組成物を液体を含有し、無菌の注入可能な
   液状に調製した特許請求の範囲第１８項乃至第２０項の
   いずれかに記載した治療方法。 （２３）アレルゲンと、該アレルゲンに対する抗体とを
   混合する第一のステップと、該第一のステップにて形成
   されたアレルゲンと抗体の混合物をアレルゲンに対する
   即時過敏症を有する動物に反復して投与する第二のステ
   ップとにてなる動物のアレルゲンに対する即時過敏症の
   治療方法。