JPS6087299A - ナチユラルキラ−細胞活性増大用ペプチド - Google Patents
ナチユラルキラ−細胞活性増大用ペプチドInfo
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- JPS6087299A JPS6087299A JP59181626A JP18162684A JPS6087299A JP S6087299 A JPS6087299 A JP S6087299A JP 59181626 A JP59181626 A JP 59181626A JP 18162684 A JP18162684 A JP 18162684A JP S6087299 A JPS6087299 A JP S6087299A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C7/00—Purification; Separation; Use of additives
- C07C7/04—Purification; Separation; Use of additives by distillation
- C07C7/05—Purification; Separation; Use of additives by distillation with the aid of auxiliary compounds
- C07C7/06—Purification; Separation; Use of additives by distillation with the aid of auxiliary compounds by azeotropic distillation
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/57—IFN-gamma
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野1
この発明は、ナチュラルキラー細胞活性増大用ノナおよ
びドデカペプチド、その製造法およびそ4− れからなる医薬に関するものである。
びドデカペプチド、その製造法およびそ4− れからなる医薬に関するものである。
[従来の技術I
R,N−スリング、R,B、ハーバ−マンおよびR,に
、オールドハム等の研究者による早期の研究から、ひと
提供者から得たリンパ様細胞による天然の細胞毒活性の
存在が確認されていた。この天然に起るインビトロ細胞
仲介細胞毒性は、その後も上記研究者および他の研究者
により研究され、マウスおよびひとで確認された。
、オールドハム等の研究者による早期の研究から、ひと
提供者から得たリンパ様細胞による天然の細胞毒活性の
存在が確認されていた。この天然に起るインビトロ細胞
仲介細胞毒性は、その後も上記研究者および他の研究者
により研究され、マウスおよびひとで確認された。
天然細胞仲介細胞毒性を仲介するエフェクター細胞は、
ナチュラルキラー細胞として集合的に知られている。ナ
チュラルキラー細胞は、当初、細胞毒性TIJンパ球お
よびその池の典型的T細胞、B細胞、単球または顆粒球
のある種の特性を欠如した細胞として、消極的に定義さ
れていた。その後の同定研究から、例えば、ナチュラル
キラー活性が種々の異なる型のリンパ様細胞間に広範に
分布するのではなく、末梢性血液単核細胞の僅が5〜1
0%からなる別個の副次集団細胞に限定されていること
等の、多数の積極的性質が明らかになった。このような
細胞のほとんどは、IgGのFc部のレセプターを示す
ことも明らかになった。ひとナチュラルキラー細胞はま
た、典型的T細胞に密接な関係を有するマーカーを含む
他の数種の特徴的な細胞表面マーカーをもっことが判明
した。これらの特性はナチュラルキラー細胞像を構成す
る役には立つが、その明確な特徴は現在も得られていな
い。
ナチュラルキラー細胞として集合的に知られている。ナ
チュラルキラー細胞は、当初、細胞毒性TIJンパ球お
よびその池の典型的T細胞、B細胞、単球または顆粒球
のある種の特性を欠如した細胞として、消極的に定義さ
れていた。その後の同定研究から、例えば、ナチュラル
キラー活性が種々の異なる型のリンパ様細胞間に広範に
分布するのではなく、末梢性血液単核細胞の僅が5〜1
0%からなる別個の副次集団細胞に限定されていること
等の、多数の積極的性質が明らかになった。このような
細胞のほとんどは、IgGのFc部のレセプターを示す
ことも明らかになった。ひとナチュラルキラー細胞はま
た、典型的T細胞に密接な関係を有するマーカーを含む
他の数種の特徴的な細胞表面マーカーをもっことが判明
した。これらの特性はナチュラルキラー細胞像を構成す
る役には立つが、その明確な特徴は現在も得られていな
い。
さらに、細胞仲介細胞毒性の自然発生も未解明である。
多数の要因が活性化機構として示唆され、例えば細菌寄
生体、ウィルスまたはその同類等の環境要因がナチュラ
ルキラー細胞活性の誘発の起因剤として関係づけられた
。遺伝的要因もナチュラルキラー細胞活性発現に一役担
うと主張された。
生体、ウィルスまたはその同類等の環境要因がナチュラ
ルキラー細胞活性の誘発の起因剤として関係づけられた
。遺伝的要因もナチュラルキラー細胞活性発現に一役担
うと主張された。
他の一見重要なナチュラルキラー細胞活性の賦活剤はイ
ンターフェロンである。インターフェロンに対する抗体
でくり返し処理した正常マウスは、自然発生ナチュラル
キラー細胞活性が完全にではないが実質的に減少し、こ
のことは体内性インターフェロンがナチュラルキラー細
胞活性の自然発達に寄与している可能性を示す。
ンターフェロンである。インターフェロンに対する抗体
でくり返し処理した正常マウスは、自然発生ナチュラル
キラー細胞活性が完全にではないが実質的に減少し、こ
のことは体内性インターフェロンがナチュラルキラー細
胞活性の自然発達に寄与している可能性を示す。
細胞仲介毒性の代表的概観は、ハーバ−マンおよびオー
ルドハム、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・レスポ
ンス・モディファイアズ(、Iournalof Bi
ological Re5ponse Modifie
rs)2巻111〜120頁(1983年)およびスタ
ットマン等、7エデレーシヨン・プロシーデインダス(
Fede−ration Proceedings)
40巻(12)2699頁(1981年)に記載されて
いる。
ルドハム、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・レスポ
ンス・モディファイアズ(、Iournalof Bi
ological Re5ponse Modifie
rs)2巻111〜120頁(1983年)およびスタ
ットマン等、7エデレーシヨン・プロシーデインダス(
Fede−ration Proceedings)
40巻(12)2699頁(1981年)に記載されて
いる。
[発明の開示1
この発明は、ひとインターフェロンガンマ体の蛋白部分
の生産者であると決定されたDNA7ラグメントの転写
であるポリペプチドのN末端から全体または一部をとっ
たノナペプチドおよびドデカペプチドに関するものであ
る。もっとも、天然材料であるひとインターフェロンガ
ンマ体は、この発明の優先権主張臼には完全に整理およ
び同定されていなかった。1984年6月に、リンダー
ネクス等が、天然HuIFN−γの配列を決定した[J
ournal of Biological Chem
istry 259巻(11)6790〜6797頁(
1,984年)1゜(要約) 第1に、この発明は、式 %式% () 1式中、XはN−アシルGln、ピローGluまたはN
−アシル−Cys−Tyr−Cys Gln、YはGl
y。
の生産者であると決定されたDNA7ラグメントの転写
であるポリペプチドのN末端から全体または一部をとっ
たノナペプチドおよびドデカペプチドに関するものであ
る。もっとも、天然材料であるひとインターフェロンガ
ンマ体は、この発明の優先権主張臼には完全に整理およ
び同定されていなかった。1984年6月に、リンダー
ネクス等が、天然HuIFN−γの配列を決定した[J
ournal of Biological Chem
istry 259巻(11)6790〜6797頁(
1,984年)1゜(要約) 第1に、この発明は、式 %式% () 1式中、XはN−アシルGln、ピローGluまたはN
−アシル−Cys−Tyr−Cys Gln、YはGl
y。
Glu、GlyN(R)2またはGIuN(R)2(R
は水素または炭素原子数1ないし6のアルキルである)
を意味する1 で示されるノナペプチドおよびドデカペプチド、並びに
その製薬上許容される非毒性塩に関するものである。
は水素または炭素原子数1ないし6のアルキルである)
を意味する1 で示されるノナペプチドおよびドデカペプチド、並びに
その製薬上許容される非毒性塩に関するものである。
第2に、この発明は、上記ノナペプチドまたはドデカペ
プチド1種またはそれ以上のナチュラルキラー細胞活性
増大に充分な有効量を投与することからなる、ナチュラ
ルキラー細胞毒性の増大法に関するものである。
プチド1種またはそれ以上のナチュラルキラー細胞活性
増大に充分な有効量を投与することからなる、ナチュラ
ルキラー細胞毒性の増大法に関するものである。
第3に、この発明は、上記ノナペプチドまたはドデカペ
プチド1種またはそれ以上と製薬上許容8− される賦形剤からなる医薬組成物、ま、たは上記ノナペ
プチドまたはドデカペプチド1種またはそれ以上、ひと
インターフェロンおよび製薬」二許容される賦形剤から
なる医薬組成物に関するものである。
プチド1種またはそれ以上と製薬上許容8− される賦形剤からなる医薬組成物、ま、たは上記ノナペ
プチドまたはドデカペプチド1種またはそれ以上、ひと
インターフェロンおよび製薬」二許容される賦形剤から
なる医薬組成物に関するものである。
最後に、この発明は、式(I)のペプチドの製造法、並
びに式(1)の化合物および/またはその塩を含む医薬
組成物の製造法に関するものである。
びに式(1)の化合物および/またはその塩を含む医薬
組成物の製造法に関するものである。
(態様)
前記および後記の記述において、便宜上、生化学命名法
に関するIUPAC=IUB委員会が勧告したペプチド
分野で一般に受入れられている種々の慣用一般アミノ酸
記号(B iochemistry 11巻1726頁
、1972年)を用いる。これらは、非キラルアミノ酸
であるグリシンを除きL−アミノ酸を表わす。
に関するIUPAC=IUB委員会が勧告したペプチド
分野で一般に受入れられている種々の慣用一般アミノ酸
記号(B iochemistry 11巻1726頁
、1972年)を用いる。これらは、非キラルアミノ酸
であるグリシンを除きL−アミノ酸を表わす。
ペプチド配列はすべて、一般に受入れられている慣行に
したがって記載し、N−末端アミノ酸を左に、C−末端
アミノ酸を右に示す。
したがって記載し、N−末端アミノ酸を左に、C−末端
アミノ酸を右に示す。
これらノナペプチドおよびドデカペプチドを構成するア
ミノ酸は、キラル性を有するもの全部がL配置であるこ
とが望ましい。しかし、この発明のポリペプチドは、1
個またはそれ以上のI、−アミノ酸を対応する1)−ア
ミノ酸で置とかえて作ることもできる。
ミノ酸は、キラル性を有するもの全部がL配置であるこ
とが望ましい。しかし、この発明のポリペプチドは、1
個またはそれ以上のI、−アミノ酸を対応する1)−ア
ミノ酸で置とかえて作ることもできる。
N−アシルの語は、アミノ窒素がカルボン酸残基と結合
してアミノ結合を作る官能基を示す。カルボン酸残基と
しては、炭素原子1ないし6個を有するアルキルカルボ
ン酸および安息香酸の残基を含む。アルキルカルボン酸
は、直鎖または分枝鎖のアルキルを有するものであって
、ぎ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸1、吉草
酸、イソ吉草酸、ピバリン酸およびヘキサン酸を含む。
してアミノ結合を作る官能基を示す。カルボン酸残基と
しては、炭素原子1ないし6個を有するアルキルカルボ
ン酸および安息香酸の残基を含む。アルキルカルボン酸
は、直鎖または分枝鎖のアルキルを有するものであって
、ぎ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸1、吉草
酸、イソ吉草酸、ピバリン酸およびヘキサン酸を含む。
N−Aeの記号は特にN−アセチル基を示す。
製薬上許容される非毒性塩の語は、母体化合物の生物活
性を保持し望ましくない毒性を示さない塩類を示す。こ
のような塩の例は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、
硫酸、燐酸、硝酸等との塩、および有機酸、例えば酢酸
、修酸、酒石酸、こはく酸、マレイン酸、7マール酸、
グルコン酸、<タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリ
グルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジス
ルホン酸、ポリガラクツロン酸等、との塩、多価金属カ
チオン、例えば亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム
、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケ
ル、カドミウム等との塩、または有機カチオン、例えば
N、N−ジベンジルエチレンジアミン、エチレンジアミ
ン等との塩、またはその組合わせ、例えばタンニン酸亜
鉛塩等である。
性を保持し望ましくない毒性を示さない塩類を示す。こ
のような塩の例は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、
硫酸、燐酸、硝酸等との塩、および有機酸、例えば酢酸
、修酸、酒石酸、こはく酸、マレイン酸、7マール酸、
グルコン酸、<タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリ
グルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジス
ルホン酸、ポリガラクツロン酸等、との塩、多価金属カ
チオン、例えば亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム
、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケ
ル、カドミウム等との塩、または有機カチオン、例えば
N、N−ジベンジルエチレンジアミン、エチレンジアミ
ン等との塩、またはその組合わせ、例えばタンニン酸亜
鉛塩等である。
(アッセイ法)
この発明の化合物(塩を含む)は、ナチュラルキラー細
胞活性を増大する。
胞活性を増大する。
このような増大の1つの尺度は、K2O2で示すひと骨
髄腫細胞の溶解測定で得られる。溶解は”Crの放出に
より測定される。アッセイは、ザーリング等(Jour
nal of Tmmunology 123巻63頁
、1979年)またはプラトソーカス等(Journa
l of Immunology 125巻1216−
1223頁、1980年)にしたがって行なう。
髄腫細胞の溶解測定で得られる。溶解は”Crの放出に
より測定される。アッセイは、ザーリング等(Jour
nal of Tmmunology 123巻63頁
、1979年)またはプラトソーカス等(Journa
l of Immunology 125巻1216−
1223頁、1980年)にしたがって行なう。
(ペプチドの合成法)
この発明のペプチドは、ペプチド分野の専門家に公知の
方法で合成することができる。使用できる多数の技術の
すぐれた要約は、スチュワードおよびヤング「ソリッド
7エーズ・ペプチドシンセシXJ(Solid Pha
se Peptide 5ynthesis) (W。
方法で合成することができる。使用できる多数の技術の
すぐれた要約は、スチュワードおよびヤング「ソリッド
7エーズ・ペプチドシンセシXJ(Solid Pha
se Peptide 5ynthesis) (W。
[1,フリーマン、サンフランシスコ、1969年)お
よびマイエンホ7ア[ホルモナルプロテインズやアンド
・ペプチドJ Hor+nonal Proteins
andPeptides)2巻46頁(アカデミツク
プレス、ニューヨーク、1973年)に固相法ペプチド
合成が、シュロダーおよびラブク「ザ・ペプチドJ(T
I+ePeptides) 1巻(アカデミツクプレス
、ニューヨーク、1965年)に古典的溶液合成法が記
載されている。
よびマイエンホ7ア[ホルモナルプロテインズやアンド
・ペプチドJ Hor+nonal Proteins
andPeptides)2巻46頁(アカデミツク
プレス、ニューヨーク、1973年)に固相法ペプチド
合成が、シュロダーおよびラブク「ザ・ペプチドJ(T
I+ePeptides) 1巻(アカデミツクプレス
、ニューヨーク、1965年)に古典的溶液合成法が記
載されている。
一般に、これらの方法は、ペプチド鎖に1個またはそれ
以上のアミノ酸または適当に保護されたアミノ酸を連続
的に追加して行くことからなっている。通常、第1のア
ミノ酸のアミノ基またはカルボキシ基が適当な保護基で
保護される。保護さ12− れた、または誘導体にされたアミノ酸は、不活性な固体
担体に結合するか、または溶液状態で、アミド結合形成
に適した条件下に、補完(アミ/またはカルボキシ)基
が適当に保護された次位のアミノ酸との結合に用いる。
以上のアミノ酸または適当に保護されたアミノ酸を連続
的に追加して行くことからなっている。通常、第1のア
ミノ酸のアミノ基またはカルボキシ基が適当な保護基で
保護される。保護さ12− れた、または誘導体にされたアミノ酸は、不活性な固体
担体に結合するか、または溶液状態で、アミド結合形成
に適した条件下に、補完(アミ/またはカルボキシ)基
が適当に保護された次位のアミノ酸との結合に用いる。
次いで、この新規結合アミノ酸残基から保護基を除外、
次の(適当に保護されたアミノ酸を加え、以下同様に行
なう。所望のアミノ酸を全部適当な配列で結合した後、
残留し得る保護基(および固体担体)を逐次または同時
に除いて最終ペプチドを得る。この−膜性の簡単な変更
により、生長中の鎖に1個以上のアミノ酸を、例えば保
護トリペプチドと適当に保護されたジペプチドの縮合(
キラル中心のラセミ化を起さない条件下)と脱保護後に
ペンタペプチドを得る方法等により、結合させることが
可能である。
次の(適当に保護されたアミノ酸を加え、以下同様に行
なう。所望のアミノ酸を全部適当な配列で結合した後、
残留し得る保護基(および固体担体)を逐次または同時
に除いて最終ペプチドを得る。この−膜性の簡単な変更
により、生長中の鎖に1個以上のアミノ酸を、例えば保
護トリペプチドと適当に保護されたジペプチドの縮合(
キラル中心のラセミ化を起さない条件下)と脱保護後に
ペンタペプチドを得る方法等により、結合させることが
可能である。
さらに、この発明のポリペプチドは、組換えDNA技術
、例えばヨーロッパ出願公開0032134(BioF
len、ダーウエントNo、53697D/30)およ
びヨーロッパ出願公開004.8970(Genent
ech、ダーウエントNo、28974E/15)に開
示されたインターフェロン様ペプチドコード゛のDNA
配列の修正・使用により合成でとると期待される。
、例えばヨーロッパ出願公開0032134(BioF
len、ダーウエントNo、53697D/30)およ
びヨーロッパ出願公開004.8970(Genent
ech、ダーウエントNo、28974E/15)に開
示されたインターフェロン様ペプチドコード゛のDNA
配列の修正・使用により合成でとると期待される。
(好ましい態様)
この発明の化合物の特に好ましい製造法は、固相法によ
るペプチド合成である。
るペプチド合成である。
この特に好ましい方法では、アミノ酸のα−7ミノ官能
基を酸または塩基に敏感な基で保護する。
基を酸または塩基に敏感な基で保護する。
このような保護基は、ペプチド結合形成条件下で安定で
あり、生長しつつあるペプチド合成を破壊することなく
、またその中に含まれるキラル中心をラセミ化すること
なく、容易に除去できる性質をもたなければならない。
あり、生長しつつあるペプチド合成を破壊することなく
、またその中に含まれるキラル中心をラセミ化すること
なく、容易に除去できる性質をもたなければならない。
適当な保護基は、第3級ブトキシカルボニル(Boc)
、ベンジルオキシカルボニル(Cbz)、ビフェニルイ
ソプロピルオキシカルボニル、第3級アミルオキシカル
ボニル、イソボルニルオキシカルボニル、a、a−ジメ
チル−3,5−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、
0−ニトロフェニルスルフェニル、2−シアノ−第3級
ブチルオキシカルボニル、9−フルオレニルメチルオキ
シカルボニル等、特に第3級ブトキシカルボニル(Bo
C)である。
、ベンジルオキシカルボニル(Cbz)、ビフェニルイ
ソプロピルオキシカルボニル、第3級アミルオキシカル
ボニル、イソボルニルオキシカルボニル、a、a−ジメ
チル−3,5−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、
0−ニトロフェニルスルフェニル、2−シアノ−第3級
ブチルオキシカルボニル、9−フルオレニルメチルオキ
シカルボニル等、特に第3級ブトキシカルボニル(Bo
C)である。
特に好ましいチロシンの側鎖保護基は、ベンノル、0−
ブロモベンジルオルジカルボニル、2,6−ジクロロベ
ンジル、イソプロピル、シクロヘキシル、シクロペンチ
ルおよびアセチルであり、セリンの側鎖保護基はペンシ
ル、第3級ブチルおよびテトラヒドロピラニルである。
ブロモベンジルオルジカルボニル、2,6−ジクロロベ
ンジル、イソプロピル、シクロヘキシル、シクロペンチ
ルおよびアセチルであり、セリンの側鎖保護基はペンシ
ル、第3級ブチルおよびテトラヒドロピラニルである。
C−末端アミノ酸は、適当な固体担体に結合させる。上
記合成法で用いるに適した固体担体は、順次に1行なう
縮合・脱保護反応の反応試薬および反応条件に対して不
活性であり、使用媒質に不溶の材料である。適当な固体
担体は、クロロメチルポリスチレン命ジビニルベンゼン
・ポリマー、ヒドロキシメチル・ポリスチレン中ジビニ
ルベンゼン・ポリマー等であり、特にクロロメチルポリ
スチレン・1%ジビニルベンゼン・ポリマーである。
記合成法で用いるに適した固体担体は、順次に1行なう
縮合・脱保護反応の反応試薬および反応条件に対して不
活性であり、使用媒質に不溶の材料である。適当な固体
担体は、クロロメチルポリスチレン命ジビニルベンゼン
・ポリマー、ヒドロキシメチル・ポリスチレン中ジビニ
ルベンゼン・ポリマー等であり、特にクロロメチルポリ
スチレン・1%ジビニルベンゼン・ポリマーである。
化合物のC末端がグリシンアミド主たけグルタミンアミ
ドの場合には、特に有用な担体はベンス゛ヒトリルアミ
ノポリスチレン◆ジビニルベンゼン・15− ポリマー(リベイル等、Hlv、 Chim、Acta
54巻2772頁、1971年に記載)。クロロメチ
ルポリスチレン・ノビニルベンゼン型樹脂への結合は、
エタノール、アセトニトリル、N、N−ジメチルホルム
アミド(DMF)等巾、セシウム、テトラメチルアンモ
ニウム、トリエチルアンモニウム、1,5−ジアザビシ
クロ[5,4,(>’lウンデカー5−エンまたは同様
な塩基との塩の形のN−α−保護アミノ酸、特にBoc
−アミノ酸、特にDMF中のセシウム塩と、クロロメチ
ル樹脂を、−上昇温度、例えば40〜60℃、好ましく
は約50℃で、約12〜48時間、好ましくは約24時
間反応させることにより行なわれる。N−α−Boc−
アミノ酸は、ベンズヒドリルアミン樹脂に、ジクロロメ
タンまたはD M F 、好ましくはジクロロメタン中
、約10〜50℃、好ましくは25℃で、約2〜約24
時間、好ましくは約12時間、N。
ドの場合には、特に有用な担体はベンス゛ヒトリルアミ
ノポリスチレン◆ジビニルベンゼン・15− ポリマー(リベイル等、Hlv、 Chim、Acta
54巻2772頁、1971年に記載)。クロロメチ
ルポリスチレン・ノビニルベンゼン型樹脂への結合は、
エタノール、アセトニトリル、N、N−ジメチルホルム
アミド(DMF)等巾、セシウム、テトラメチルアンモ
ニウム、トリエチルアンモニウム、1,5−ジアザビシ
クロ[5,4,(>’lウンデカー5−エンまたは同様
な塩基との塩の形のN−α−保護アミノ酸、特にBoc
−アミノ酸、特にDMF中のセシウム塩と、クロロメチ
ル樹脂を、−上昇温度、例えば40〜60℃、好ましく
は約50℃で、約12〜48時間、好ましくは約24時
間反応させることにより行なわれる。N−α−Boc−
アミノ酸は、ベンズヒドリルアミン樹脂に、ジクロロメ
タンまたはD M F 、好ましくはジクロロメタン中
、約10〜50℃、好ましくは25℃で、約2〜約24
時間、好ましくは約12時間、N。
N゛−ジシクロへキシルカルボジイミド(r+cc)/
1−ヒドロキシベンゾYリアゾール(HBT)仲介縮合
を行なうことにより結合される。連続的保=16− 護アミノ酸の縮合は、当分野で周知の自動ポリペプチド
シンセサイザーにより行なうことができる。
1−ヒドロキシベンゾYリアゾール(HBT)仲介縮合
を行なうことにより結合される。連続的保=16− 護アミノ酸の縮合は、当分野で周知の自動ポリペプチド
シンセサイザーにより行なうことができる。
N−α−保護基の除去は、例えばトリフルオロ酢酸のメ
チレンクロライド溶液、塩化水素のジオキサン溶液、塩
化水素の酢酸溶液、または他の強酸溶液、好ましくは5
0%トリフルオロ酢酸ジクロロメタン溶液の存在下、は
ぼ室温で行なう。各保護アミノ酸は、好ましぐは約2.
5モル過剰を導入シ、縮合は、ジクロロメタン、ジクロ
ロメタン/DMF混合物、DMF等、特にメチレンクロ
ライド中、はぼ室温で行なう。縮合剤は、通常ジクロロ
メタン中T)CCであるが、N、N’−ンイソプロビル
カルボジイミドまたは他のカルボジイミドを単独もしく
はHBT、N−ヒドロキシスクシンイミド、他のN−ヒ
ドロキシイミドまたはオキシムの存在下に用いてもよい
。別の方法として、保護アミノ酸の活性エステル(例え
ば0−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル等)ま
たは対称無水物を用いることもできる。
チレンクロライド溶液、塩化水素のジオキサン溶液、塩
化水素の酢酸溶液、または他の強酸溶液、好ましくは5
0%トリフルオロ酢酸ジクロロメタン溶液の存在下、は
ぼ室温で行なう。各保護アミノ酸は、好ましぐは約2.
5モル過剰を導入シ、縮合は、ジクロロメタン、ジクロ
ロメタン/DMF混合物、DMF等、特にメチレンクロ
ライド中、はぼ室温で行なう。縮合剤は、通常ジクロロ
メタン中T)CCであるが、N、N’−ンイソプロビル
カルボジイミドまたは他のカルボジイミドを単独もしく
はHBT、N−ヒドロキシスクシンイミド、他のN−ヒ
ドロキシイミドまたはオキシムの存在下に用いてもよい
。別の方法として、保護アミノ酸の活性エステル(例え
ば0−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル等)ま
たは対称無水物を用いることもできる。
同相合成法の終りに、完全に保護したポリペプチドを脱
保護し樹脂から外す。これは、例えば無水液体ぶつ化水
素をアニソールまたは池のカルボニウム・スカベンジャ
ー(除去剤)の存在下に用いる処理、ぶつ化水素/ピリ
ジン錯体による処理、トリス(トリフルオロアセチル)
はう素とトリフルオロ酢酸による処理、水素とパラジウ
ノ、・炭素もしくはポリビニルピロリドンによる還元、
液体アンモニア中ナトリウムによる還元、好ましくは液
体ぷり化水素とアニソールを用い、約−10〜+10℃
、好ましくは約+1 ℃で約15分〜・1時間、好まし
くは約30分間反応させることにより達成される。完全
に脱保護したポリペプチドは、次いで下記方法の一部ま
たは全部を用いる一連のクロマトグラフ技術、すなわち
アセテート型弱塩基性樹脂上のイオン交換、非誘導体化
ポリスチレン・ジビニルベンゼン(例えばアンバーライ
)XAD)上の疎水性吸着クロマトグラフィー、シリカ
ゲル吸着クロマトグラフィー、カルボキシメチルセルロ
ース」二のイオン交換クロマトグラフィー、例えばセフ
ァデックスG−25上の分配クロマトグラフィーもしく
は向流分配、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)
、特にオクチルもしくはオクタデシルシリル・シリカ結
合相カラム充填剤−にの逆相HPLCにより精製される
。この方法により、使用担体がクロロメチル樹脂系のも
の(エステル結合)の場合C末端に遊離カルボキシ官能
基をもつポリペプチド、または担体がベンズヒドリル樹
脂の場合C末端がアミドのものが得られる。置換アミド
C末端、例えば−NHEtは、まず保護ポリペプチドを
所望のアミン(H2NEt)によるエステルのアミノリ
ンスにより樹脂から外し、次いで上記試薬、特に液体H
Fによる脱保護を行なって製造される。
保護し樹脂から外す。これは、例えば無水液体ぶつ化水
素をアニソールまたは池のカルボニウム・スカベンジャ
ー(除去剤)の存在下に用いる処理、ぶつ化水素/ピリ
ジン錯体による処理、トリス(トリフルオロアセチル)
はう素とトリフルオロ酢酸による処理、水素とパラジウ
ノ、・炭素もしくはポリビニルピロリドンによる還元、
液体アンモニア中ナトリウムによる還元、好ましくは液
体ぷり化水素とアニソールを用い、約−10〜+10℃
、好ましくは約+1 ℃で約15分〜・1時間、好まし
くは約30分間反応させることにより達成される。完全
に脱保護したポリペプチドは、次いで下記方法の一部ま
たは全部を用いる一連のクロマトグラフ技術、すなわち
アセテート型弱塩基性樹脂上のイオン交換、非誘導体化
ポリスチレン・ジビニルベンゼン(例えばアンバーライ
)XAD)上の疎水性吸着クロマトグラフィー、シリカ
ゲル吸着クロマトグラフィー、カルボキシメチルセルロ
ース」二のイオン交換クロマトグラフィー、例えばセフ
ァデックスG−25上の分配クロマトグラフィーもしく
は向流分配、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)
、特にオクチルもしくはオクタデシルシリル・シリカ結
合相カラム充填剤−にの逆相HPLCにより精製される
。この方法により、使用担体がクロロメチル樹脂系のも
の(エステル結合)の場合C末端に遊離カルボキシ官能
基をもつポリペプチド、または担体がベンズヒドリル樹
脂の場合C末端がアミドのものが得られる。置換アミド
C末端、例えば−NHEtは、まず保護ポリペプチドを
所望のアミン(H2NEt)によるエステルのアミノリ
ンスにより樹脂から外し、次いで上記試薬、特に液体H
Fによる脱保護を行なって製造される。
したがって、この発明の別の目的は、この発明の化合物
およびその製薬上許容される塩の製造法にあり、上記方
法は、 保護基と、所望により共有結合した固体担体を、ポリペ
プチドから除去して式(I)の化合物またはその塩を得
、さらに所望により、 (、)式(I)の化合物を製薬−L許容される塩に変1
9− 換するか、または (b)式(I)の化合物の塩を製薬上許容される塩に変
換するか、または (c)式(I)の化合物の塩を式(1)の遊離ポリペプ
チドに分解すること からなる。
およびその製薬上許容される塩の製造法にあり、上記方
法は、 保護基と、所望により共有結合した固体担体を、ポリペ
プチドから除去して式(I)の化合物またはその塩を得
、さらに所望により、 (、)式(I)の化合物を製薬−L許容される塩に変1
9− 換するか、または (b)式(I)の化合物の塩を製薬上許容される塩に変
換するか、または (c)式(I)の化合物の塩を式(1)の遊離ポリペプ
チドに分解すること からなる。
上記(、)、(1))および(c)の変換は、通常0〜
50℃で行なわれる。
50℃で行なわれる。
[実施例1
以下に示す実施例は、この発明をさらに詳細に理解する
ためのものであり、単に説明し代表するものであって、
この発明の範囲を限定するものではない。
ためのものであり、単に説明し代表するものであって、
この発明の範囲を限定するものではない。
実施例1
ベックマン990ペプチドシンセサイサ゛−の反応器に
、クロロメチルポリスチレン−1%−ジビニルベンゼン
樹脂(1ミリモルCj2/gtjl脂)とBoc−GI
y−OCs塩[ギシン、He1v、 Cfu++im。
、クロロメチルポリスチレン−1%−ジビニルベンゼン
樹脂(1ミリモルCj2/gtjl脂)とBoc−GI
y−OCs塩[ギシン、He1v、 Cfu++im。
Acta56巻1476頁(1973年)1の反応で製
造したBoa−Gly−0−樹脂1.0ミリモルを=2
0− 入れる。この樹脂に、合成プログラムによりアミノ酸を
順次加える。
造したBoa−Gly−0−樹脂1.0ミリモルを=2
0− 入れる。この樹脂に、合成プログラムによりアミノ酸を
順次加える。
工程 作業 呻□」芋同−
1CH2C,e2洗浄 1 ]、5分
2 50%CF3CO2H/CH2Cf2脱保護 1
1.5分 3 50%CF3CO2H/CH2CC2脱保護 1
30分 4 CH2CR2洗浄 3 1.5分 510%(C2H5)3N/CH2Cで、2 1.5分
6 CH2Cl、2洗浄 3 1.5分7NO−Boc
−アミノ酸溶液 1 添加8 N、N’−ジノクルへキ
シルカ ルボジイミド溶液 1 添加 9 CH2Cl2すすぎおよび 縮合反応 1 2時間 11 C82C/22洗浄 3 1.5分12 エタノ
ール洗浄 3 1.5分 13 CH2Cj22洗浄 3 1.5分1〜13の工
程により、1個のアミノ酸の縮合サイクルが完了し、反
応の完全さはカイザー等(Anal、 Biocl+e
m、 34巻595頁、1970年)のニンヒドリン法
により検査する。
1.5分 3 50%CF3CO2H/CH2CC2脱保護 1
30分 4 CH2CR2洗浄 3 1.5分 510%(C2H5)3N/CH2Cで、2 1.5分
6 CH2Cl、2洗浄 3 1.5分7NO−Boc
−アミノ酸溶液 1 添加8 N、N’−ジノクルへキ
シルカ ルボジイミド溶液 1 添加 9 CH2Cl2すすぎおよび 縮合反応 1 2時間 11 C82C/22洗浄 3 1.5分12 エタノ
ール洗浄 3 1.5分 13 CH2Cj22洗浄 3 1.5分1〜13の工
程により、1個のアミノ酸の縮合サイクルが完了し、反
応の完全さはカイザー等(Anal、 Biocl+e
m、 34巻595頁、1970年)のニンヒドリン法
により検査する。
樹脂を、約2.5モル過剰の各保護アミノ酸およびDC
Cと連続的に縮合させる。こうして、樹脂を連続縮合サ
イクルにおいて、 BocAla−(月((1,−473g。
Cと連続的に縮合させる。こうして、樹脂を連続縮合サ
イクルにおいて、 BocAla−(月((1,−473g。
Boc−Glu−(OBzl) OHO,843g、B
oc Lys(Z) 0I−(0,951g、Boc−
Val−Of(0,543g、Boc−Tyr−OHO
,703g、 Boc−Pro−OHO,538g。
oc Lys(Z) 0I−(0,951g、Boc−
Val−Of(0,543g、Boc−Tyr−OHO
,703g、 Boc−Pro−OHO,538g。
Boc Asp(OBzl)OHO,806g。
Boc−Gln−OHO,616gおよび1−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール 0.51g、およびAc20
3.0J 反応器から樹脂を除外、CH2Cl、で洗浄し、真空乾
燥して、保護ポリペプチド樹脂、1.5gを得る。
シベンゾトリアゾール 0.51g、およびAc20
3.0J 反応器から樹脂を除外、CH2Cl、で洗浄し、真空乾
燥して、保護ポリペプチド樹脂、1.5gを得る。
無水液体HFで処理することにより、同時にポリペプチ
ド体を樹脂から除き完全に脱保護する。
ド体を樹脂から除き完全に脱保護する。
保護ポリペプチド樹脂1.5gと7ニソール(スカベン
ジャー)2Jの混合物をKel −F反応器に入れ、再
蒸留(CoF3使用)無水液体HF20m、(’:と0
℃で1時間処理する。HFを真空留去し、残留物Ac−
Gin−Asp−Pro Tyr−Val−Lys −
Glu−Ala−Gly−OHのHF塩をエーテル洗浄
する。次いで、残留物を氷酢酸で抽出する。酢酸抽出液
を凍結乾燥して、粗製品0.725gを得る。
ジャー)2Jの混合物をKel −F反応器に入れ、再
蒸留(CoF3使用)無水液体HF20m、(’:と0
℃で1時間処理する。HFを真空留去し、残留物Ac−
Gin−Asp−Pro Tyr−Val−Lys −
Glu−Ala−Gly−OHのHF塩をエーテル洗浄
する。次いで、残留物を氷酢酸で抽出する。酢酸抽出液
を凍結乾燥して、粗製品0.725gを得る。
プレバラティブ(分取)高速液体クロマトグラフィーに
より試料150mgを20〜40ミクロンのオクタデシ
ルシリル化シリカ(メルク・リクプレプC,,)を充填
した2、5X100cmのカラムで精製する。溶離剤と
して91%0.03モルNH,0Ac−/9%アセFニ
トリルを用いる。4回の実験で合計的600111gの
粗製品を精製する。水から3回凍結乾燥し、純Ac−G
ln−Asp−Pro−Tyr−Val−Lys−Gl
u−Ala−Gly−OHの酢酸塩260報を得る。
より試料150mgを20〜40ミクロンのオクタデシ
ルシリル化シリカ(メルク・リクプレプC,,)を充填
した2、5X100cmのカラムで精製する。溶離剤と
して91%0.03モルNH,0Ac−/9%アセFニ
トリルを用いる。4回の実験で合計的600111gの
粗製品を精製する。水から3回凍結乾燥し、純Ac−G
ln−Asp−Pro−Tyr−Val−Lys−Gl
u−Ala−Gly−OHの酢酸塩260報を得る。
分解点:約180℃
実施例2
(A) Ac−Gln−Asp−Pro−Tyr−Va
t−Lys−GILL−Ala−Gly−OHのHF塩
(実施例1で得たもの)0.Igの溶液を水50−に溶
かし、酢酸で平衡化し脱イオン水で洗浄したダウエック
ス3アニオン交換樹脂50gのカラムに通す。カラムを
脱イオン水で溶離し、流出液を凍結乾燥して、Ac−G
ln−Asp−Pro−Tyr−Val−Glu−At
a−Gly−OHの酢酸塩を得る。
t−Lys−GILL−Ala−Gly−OHのHF塩
(実施例1で得たもの)0.Igの溶液を水50−に溶
かし、酢酸で平衡化し脱イオン水で洗浄したダウエック
ス3アニオン交換樹脂50gのカラムに通す。カラムを
脱イオン水で溶離し、流出液を凍結乾燥して、Ac−G
ln−Asp−Pro−Tyr−Val−Glu−At
a−Gly−OHの酢酸塩を得る。
樹脂の平衡化に酢酸以外の酸を用いて上記方法を反復し
、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、硝酸、安息香
酸等の塩が得られる。
、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、硝酸、安息香
酸等の塩が得られる。
同様にして、この発明に属する知のペプチドの酸付加塩
も得られる。
も得られる。
(B) 低水溶性塩は、所望の酸を用いて水から沈殿さ
せることによl)i!!造できる。例えば:タンニン酸
亜鉛塩: Ac Gln Asp−Pro −Tyr
Val Lys−Glu−Ala−Gly OH酢酸塩
110ll1と水0.1−の溶液をタンニン酸8mgと
0.25M−NaOHO,(18Jの溶液で処理した。
せることによl)i!!造できる。例えば:タンニン酸
亜鉛塩: Ac Gln Asp−Pro −Tyr
Val Lys−Glu−Ala−Gly OH酢酸塩
110ll1と水0.1−の溶液をタンニン酸8mgと
0.25M−NaOHO,(18Jの溶液で処理した。
Zn5O=7水化物5II1gと水0,1−の溶液を直
ちに上記ポリペプチド溶液に加えた。
ちに上記ポリペプチド溶液に加えた。
得られるけんだく液を水り劃で希釈し、沈殿を遠心分離
した。上清を傾斜してとり、残留物を水lll1p を
用いて沈殿を遠心分離することにより2回洗浄し上清を
傾斜して除いた。沈殿を真空乾燥して、上記ノナペプチ
ドのタンニン酸亜鉛塩混合物15II1gを得た。
した。上清を傾斜してとり、残留物を水lll1p を
用いて沈殿を遠心分離することにより2回洗浄し上清を
傾斜して除いた。沈殿を真空乾燥して、上記ノナペプチ
ドのタンニン酸亜鉛塩混合物15II1gを得た。
パモ酸塩: Ac−Gln Asp−Pro−Tyr−
Val−Lys−Glu−Ala−Gly−OH酢酸塩
0.O5ll1gをエタノール1,6o+4と0.02
5(閤p)M・NaOH0,1mJに溶かした溶液に、
パモ酸11mgと0.26M−NaOHO,31Ij2
の溶液を加えた。
Val−Lys−Glu−Ala−Gly−OH酢酸塩
0.O5ll1gをエタノール1,6o+4と0.02
5(閤p)M・NaOH0,1mJに溶かした溶液に、
パモ酸11mgと0.26M−NaOHO,31Ij2
の溶液を加えた。
溶媒を減圧留去し、残留物を水2mf にけんだくし、
遠心分離し、上清を傾斜で除いた。沈殿を水1.5Jで
洗浄し、遠心分離し、真空乾燥して、上記ノナペプチY
のバモ酸塩54111gを得る。
遠心分離し、上清を傾斜で除いた。沈殿を水1.5Jで
洗浄し、遠心分離し、真空乾燥して、上記ノナペプチY
のバモ酸塩54111gを得る。
同様にして、他の水難溶性塩を製造することができる。
(C) 遊離ペプチドから酸イ]加塩の製造。
Ac −G In −Asp−Pro −Tyr −V
al −Lys −Glu Ala Gly−OH遊離
塩基50mgの溶液に1N酢酸30mCを加える。得ら
れる溶液を凍結乾燥して、−11記酢酸塩50m8を得
る。
al −Lys −Glu Ala Gly−OH遊離
塩基50mgの溶液に1N酢酸30mCを加える。得ら
れる溶液を凍結乾燥して、−11記酢酸塩50m8を得
る。
同様にして、酢酸の代りに他の酸(ペプチドに対して化
学当量)を用い、この発明のペプチドの他の酸付加塩、
例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、硝酸等との塩が
得られる。
学当量)を用い、この発明のペプチドの他の酸付加塩、
例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、硝酸等との塩が
得られる。
(1)) 金属カチオンとの塩、例えば亜鉛塩の製造。
Ac−Gln−Asp−Pro−Tyr−Vat−Ly
s −G lu −A Ia −G ly −OH酢酸
塩5(hgを、0.25M−NaOH0,4−1水(1
,3+n i、エタノールImI!の混合物に溶かした
溶液に、ZnS0,7氷化物15mgと水0.2m、I
2の溶液を加えた。沈殿を遠心分離し、」1清を傾斜で
除いた。沈殿を水1+nlを遠心分離して洗浄し、」1
清を傾斜して除いた。沈殿を真空乾燥して、上記ノナペ
プチドの亜鉛塩4Logを得た。
s −G lu −A Ia −G ly −OH酢酸
塩5(hgを、0.25M−NaOH0,4−1水(1
,3+n i、エタノールImI!の混合物に溶かした
溶液に、ZnS0,7氷化物15mgと水0.2m、I
2の溶液を加えた。沈殿を遠心分離し、」1清を傾斜で
除いた。沈殿を水1+nlを遠心分離して洗浄し、」1
清を傾斜して除いた。沈殿を真空乾燥して、上記ノナペ
プチドの亜鉛塩4Logを得た。
同様にして、池の多価金属カチオンとの塩、例えばカル
シウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニ
ウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム等との塩を
製造でとる。
シウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニ
ウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム等との塩を
製造でとる。
実施例3
Ac−Gln−Asp Pro−Tyr−Val−Ly
s −Glu−Ala−Gly−OH50mgの水溶液
を、NaOHで平衡化したダウエックス1 (強塩基性
4級アンモニウムアニオン交換樹脂)に通して対イオン
をヒドロキシドにする。カラムを水15 Tlm、、(
で溶離し、溶離液を凍結乾燥してポリペプチドの遊離塩
基45mgを得る。
s −Glu−Ala−Gly−OH50mgの水溶液
を、NaOHで平衡化したダウエックス1 (強塩基性
4級アンモニウムアニオン交換樹脂)に通して対イオン
をヒドロキシドにする。カラムを水15 Tlm、、(
で溶離し、溶離液を凍結乾燥してポリペプチドの遊離塩
基45mgを得る。
同様にして、この発明のペプチドの池の酸付加塩、例え
ば実施例2記載の塩を対応する遊離塩基に変換できる。
ば実施例2記載の塩を対応する遊離塩基に変換できる。
実施例4
以下に示すのは、有効成分としてのこの発明のポリペプ
チド、例えばAc−Gln−Asp−Pro −Tyr
−Val Lys Glu−Ala−Gly−OH自体
またはその製薬上許容される塩、例えば酢酸塩、亜鉛塩
、タンニン酸亜鉛塩等を含む代表的医薬組27− 酸物である。
チド、例えばAc−Gln−Asp−Pro −Tyr
−Val Lys Glu−Ala−Gly−OH自体
またはその製薬上許容される塩、例えば酢酸塩、亜鉛塩
、タンニン酸亜鉛塩等を含む代表的医薬組27− 酸物である。
(A) 口内(例えば舌下)錠 (mg)1、ポリペプ
チド 10.0 圧縮性砂糖(米国薬局方) 86.0 ステアリン酸カルシウム 4.0 2、ポリペプチド 10.0 圧縮性砂糖(米国薬局方) 88.5 ステアリン酸マグネシウム 1.5 3、ポリペプチド 5.0 マンニトール(米国薬局方) 83.5ステアリン酸マ
グネシウム (米国薬局方)1.5 ゼラチン化でんぷん(米国薬局方)10.04、ポリペ
プチド 10.0 乳糖(米国薬局方) 74.5 ゼラチン化でんぷん(米国薬局方)15.0ステアリン
酸マグネシウム (米国薬局方)1.5 実施例5 Ac−Gln−Asp−Pro−Tyr−Val−Ly
s −=28− Glu−Ala−Gly OHの固相合成。
チド 10.0 圧縮性砂糖(米国薬局方) 86.0 ステアリン酸カルシウム 4.0 2、ポリペプチド 10.0 圧縮性砂糖(米国薬局方) 88.5 ステアリン酸マグネシウム 1.5 3、ポリペプチド 5.0 マンニトール(米国薬局方) 83.5ステアリン酸マ
グネシウム (米国薬局方)1.5 ゼラチン化でんぷん(米国薬局方)10.04、ポリペ
プチド 10.0 乳糖(米国薬局方) 74.5 ゼラチン化でんぷん(米国薬局方)15.0ステアリン
酸マグネシウム (米国薬局方)1.5 実施例5 Ac−Gln−Asp−Pro−Tyr−Val−Ly
s −=28− Glu−Ala−Gly OHの固相合成。
ペプチドシンセサイザーの反応器に、(クロロメチル)
ポリスチレン−1%ジビニルベンゼン樹脂(0,761
ミリモル/g樹脂)とt −Boc −GIn−QCs
塩の反応で製造したt−Boc Glu (OBzl)
−0−樹脂2ミリモルを入れる。この樹脂に、約2.5
モル過剰のアミノ酸を実施例1に記載した自動固相ペプ
チド合成プログラムにより連続的に加える。こ)して、
Ala、 Glu、 Lys、 VatSTyrSPr
o、 AspおよびGlnを上記のような保護型として
樹脂に連続的に加える。
ポリスチレン−1%ジビニルベンゼン樹脂(0,761
ミリモル/g樹脂)とt −Boc −GIn−QCs
塩の反応で製造したt−Boc Glu (OBzl)
−0−樹脂2ミリモルを入れる。この樹脂に、約2.5
モル過剰のアミノ酸を実施例1に記載した自動固相ペプ
チド合成プログラムにより連続的に加える。こ)して、
Ala、 Glu、 Lys、 VatSTyrSPr
o、 AspおよびGlnを上記のような保護型として
樹脂に連続的に加える。
樹脂についた保護ポリペプチドを反応器から取出し、デ
シケータ中で真空乾燥して樹脂についた保護ペプチド2
,44.を得る。無水HFを用い(前記のように)0℃
で1時間処理して樹脂からペプチドを外し脱保護する。
シケータ中で真空乾燥して樹脂についた保護ペプチド2
,44.を得る。無水HFを用い(前記のように)0℃
で1時間処理して樹脂からペプチドを外し脱保護する。
HFを真空留去し、残留物をジエチルエーテルで3回洗
浄する。脱保護したペプチドを氷酢酸に溶かし、濾過し
て樹脂を除く。酢酸洗液を集めて溶媒を除外、イオン交
換樹脂カラム(Ag3アセテ−ト)に通してFイオンを
アセテートに変える。
浄する。脱保護したペプチドを氷酢酸に溶かし、濾過し
て樹脂を除く。酢酸洗液を集めて溶媒を除外、イオン交
換樹脂カラム(Ag3アセテ−ト)に通してFイオンを
アセテートに変える。
凍結乾燥して粗製ペプチド600mgを得る。実施例1
と同様にRP−18カラムを用いて3回プレパラテイブ
HP I−(iを行ない、ペプチドを精製する(12%
CI(3CN、(1,03M酢酸アンモニウム、pH4
,5)。
と同様にRP−18カラムを用いて3回プレパラテイブ
HP I−(iを行ない、ペプチドを精製する(12%
CI(3CN、(1,03M酢酸アンモニウム、pH4
,5)。
対応フラクションから溶媒を除き、水から化合物を凍結
乾燥して生成物210mgを得る。
乾燥して生成物210mgを得る。
分解点:155〜170’C
同様にして、上記クロロメチルポリスチレン樹脂の代り
にベンズヒドリルアミノポリスチレン樹脂を用い、下記
生成物を得る。
にベンズヒドリルアミノポリスチレン樹脂を用い、下記
生成物を得る。
Ac−Gin−Asp−Pro−Tyr−Val−Ly
s −Glu Ala Glu−NH2 ビa−Glu−Asp−Pro−Tyr−Val−Ly
s −Glu−Ala−Glu Nl−12 試験例1(バイオアッセイ) この発明の化合物のナチュラルキラー細胞活性増大能力
を次のようにして測定した。プラトソーカス等(J、
Immunol、 125巻1216−1223頁、1
980年)の記載にしたがって正常な健康志願者の末梢
血液白血球(PBL)から分離したヒストパック107
7(シグマ社)会用いて、インビトロひとNK細胞毒性
を測定した。PBI−をマイクロタイタープレート中、
”Crラベルに一562ターゲット細胞と4時間の共培
養前に、18時間インキュベートした。データを、スチ
ューデン)1検定で分析した。HuIFN−γ(、)ま
たは実施例1のノナペプチド(b)を、5ICrラベル
に一562ターゲット細胞との4時間インキュベーショ
ン18時間前に106/n+タPBLに加えた。データ
は、ノナペプチドとHuINF−γを比較した2回の実
験を示す。簡単にするために、E:Tは30: 1を示
したが、他の試験ターゲット比でも同様な結果が得られ
た。提供者の間に顕著な変動が存在するが、インターフ
ェロンに応答する者では常に、ノナペプチドにも応答が
見られた。HuIFN−γの0.10/m、e以上また
はノナペプチドの5X10−’モル以下のあらゆる濃度
で、下記表によると、P〈0.001で対照と差がある
応答を誘発した。
s −Glu Ala Glu−NH2 ビa−Glu−Asp−Pro−Tyr−Val−Ly
s −Glu−Ala−Glu Nl−12 試験例1(バイオアッセイ) この発明の化合物のナチュラルキラー細胞活性増大能力
を次のようにして測定した。プラトソーカス等(J、
Immunol、 125巻1216−1223頁、1
980年)の記載にしたがって正常な健康志願者の末梢
血液白血球(PBL)から分離したヒストパック107
7(シグマ社)会用いて、インビトロひとNK細胞毒性
を測定した。PBI−をマイクロタイタープレート中、
”Crラベルに一562ターゲット細胞と4時間の共培
養前に、18時間インキュベートした。データを、スチ
ューデン)1検定で分析した。HuIFN−γ(、)ま
たは実施例1のノナペプチド(b)を、5ICrラベル
に一562ターゲット細胞との4時間インキュベーショ
ン18時間前に106/n+タPBLに加えた。データ
は、ノナペプチドとHuINF−γを比較した2回の実
験を示す。簡単にするために、E:Tは30: 1を示
したが、他の試験ターゲット比でも同様な結果が得られ
た。提供者の間に顕著な変動が存在するが、インターフ
ェロンに応答する者では常に、ノナペプチドにも応答が
見られた。HuIFN−γの0.10/m、e以上また
はノナペプチドの5X10−’モル以下のあらゆる濃度
で、下記表によると、P〈0.001で対照と差がある
応答を誘発した。
ひとナチーラJb−47−釧D!?iG!−の渥μこ対
照% 化合物 濃度 E:T=30:1での ”Cr世肥 実施例1の 0.05(10−9M) 130ノナペプ
チド +1.50 158 5.0 211 HuIFN−γ 1..0(U/J) 14110.0
170 100.0 190 実施例5のノナペプチドも、同様にインビトロNK細胞
毒性を増大した。
照% 化合物 濃度 E:T=30:1での ”Cr世肥 実施例1の 0.05(10−9M) 130ノナペプ
チド +1.50 158 5.0 211 HuIFN−γ 1..0(U/J) 14110.0
170 100.0 190 実施例5のノナペプチドも、同様にインビトロNK細胞
毒性を増大した。
試験例2(家兎発熱性)
この実験には、体重2.5kgの正常健康ニューシーラ
ント白色家兎を用いた。投薬前に、直腸体温を半時間お
きに3回測定した。実施例1のノナペプチドを無菌水に
入れて耳静脈から注射し、直腸体温を5時間にわたって
1時間おきに測定した。
ント白色家兎を用いた。投薬前に、直腸体温を半時間お
きに3回測定した。実施例1のノナペプチドを無菌水に
入れて耳静脈から注射し、直腸体温を5時間にわたって
1時間おきに測定した。
用量は、108ナノグラム/kgを無菌水に入れで用い
た。投薬前体温は103.2〜103,4°Fの範囲で
投薬後体温は103.1〜103.2°Fの範囲であっ
た。結果として、投与量におけるノナペプチドは観測可
能な発熱性を示さなかった。
た。投薬前体温は103.2〜103,4°Fの範囲で
投薬後体温は103.1〜103.2°Fの範囲であっ
た。結果として、投与量におけるノナペプチドは観測可
能な発熱性を示さなかった。
実施例1の7ナペプチドは毒性の徴候を示さず、この発
明の他の7ナペプチドまたはペプチドでも毒性が期待さ
れなかった。
明の他の7ナペプチドまたはペプチドでも毒性が期待さ
れなかった。
特許出願人 シンテックス(ニー・ニス・エイ)インコ
ーホレイテッド 代理人弁理士青山 葆はか1名 手続補正書(睦) 昭和59年10月 9日 1 事件の表示 昭和59年特許願第 181626 号2発明の名称 ナチュラルキラー細胞活性増大用ペプチド3補正をする
者 事件との関係 特許出願人 住所 アメリカ合衆国カリフォルニア 94304.パ
ー口・アルド、ヒルビュー・アベニュー 3401番名
称 シンテックス(ニー・ニス・エイ)インコーホレイ
テッド4、代理人 5補正命令の日付:自 発 6補正の対象:明細書の特許請求の範囲の欄2、特許請
求の範囲 (1)式 %式% () 1式中、XはN−アシル−(1−6C)−C: In、
またはN−アシル−(1−6C)−Cys−Tyr−C
ys−Gln−1またはピローグルタミン酸残基、Yは
GlySGluSGlyN(R)2またはGluN(R
)、(Rは水素または炭素原子数1−6のアルキルであ
る)を意味する1 で示される化合物およびその製薬−4−許容される非毒
性塩。
ーホレイテッド 代理人弁理士青山 葆はか1名 手続補正書(睦) 昭和59年10月 9日 1 事件の表示 昭和59年特許願第 181626 号2発明の名称 ナチュラルキラー細胞活性増大用ペプチド3補正をする
者 事件との関係 特許出願人 住所 アメリカ合衆国カリフォルニア 94304.パ
ー口・アルド、ヒルビュー・アベニュー 3401番名
称 シンテックス(ニー・ニス・エイ)インコーホレイ
テッド4、代理人 5補正命令の日付:自 発 6補正の対象:明細書の特許請求の範囲の欄2、特許請
求の範囲 (1)式 %式% () 1式中、XはN−アシル−(1−6C)−C: In、
またはN−アシル−(1−6C)−Cys−Tyr−C
ys−Gln−1またはピローグルタミン酸残基、Yは
GlySGluSGlyN(R)2またはGluN(R
)、(Rは水素または炭素原子数1−6のアルキルであ
る)を意味する1 で示される化合物およびその製薬−4−許容される非毒
性塩。
(2)XがN−Ac−(1−6C) −L−Gln、Y
がGlyの化合物、すなわちN−Ac−(1−6C)L
−Gln−L−Asp−L−Pro−L−Tyr−1−
Val−L−Lys−1−−Glu−L−Ala−Gl
yおよびその製薬上許容される非毒性塩である、特許請
求の範囲第1項記載の化合物。
がGlyの化合物、すなわちN−Ac−(1−6C)L
−Gln−L−Asp−L−Pro−L−Tyr−1−
Val−L−Lys−1−−Glu−L−Ala−Gl
yおよびその製薬上許容される非毒性塩である、特許請
求の範囲第1項記載の化合物。
(3)XがN−Ac (1−6C) −1−−GIn、
1− Yが1−、G11177)化合物、すなわちN−Ae−
<1−6 C)−L−Gln−1−−Asp−1−−P
ro−I−−Tyc−1、−Vat−L−1,ys−1
−Glu−1−−Ala −L −G l uおよびそ
の製薬−1−許容される非毒性塩である、特許請求の範
囲第1項記載の化合物。
1− Yが1−、G11177)化合物、すなわちN−Ae−
<1−6 C)−L−Gln−1−−Asp−1−−P
ro−I−−Tyc−1、−Vat−L−1,ys−1
−Glu−1−−Ala −L −G l uおよびそ
の製薬−1−許容される非毒性塩である、特許請求の範
囲第1項記載の化合物。
(4)XかN−Ac−(1−6C)−1、−Cys−L
−Tyr−1−−Cys−1−−Gln、 YがGly
の化合物、すなわちN−Ac (1−60) L−Cy
s −[−−Tyr−1−−Cys−1−−Gln−L
Asp7L −Pro −L−Tyr−1−−Val
−L−Lys−L−Glu−L−Ala−L−Glyお
よびその製薬上許容される非毒性塩で・ある、特許請求
の範囲第1項記載の化合物。
−Tyr−1−−Cys−1−−Gln、 YがGly
の化合物、すなわちN−Ac (1−60) L−Cy
s −[−−Tyr−1−−Cys−1−−Gln−L
Asp7L −Pro −L−Tyr−1−−Val
−L−Lys−L−Glu−L−Ala−L−Glyお
よびその製薬上許容される非毒性塩で・ある、特許請求
の範囲第1項記載の化合物。
(5)XがN−Ac−(1−6C)−L、−Cys −
■、−Tyr−L−Cys−1−−Gln、YがGlu
の化合物、すなわちN−Ac−(1−6C)−L−Cy
s −L−Tyr−1−−Cys−L−Gln−1−−
Asp−L −Pro−L=Tyr−1−−Val−1
−Lys L Glu−L −A la −1−−G
luお、よびその製薬上許容される非毒性塩である、特
許請求の範囲第1項記載の化合物。
■、−Tyr−L−Cys−1−−Gln、YがGlu
の化合物、すなわちN−Ac−(1−6C)−L−Cy
s −L−Tyr−1−−Cys−L−Gln−1−−
Asp−L −Pro−L=Tyr−1−−Val−1
−Lys L Glu−L −A la −1−−G
luお、よびその製薬上許容される非毒性塩である、特
許請求の範囲第1項記載の化合物。
(6)Xがビo−Glu、 YがGlyの化合物、すな
わちピD Glu L Asp I−−Pro−1、−
Tyr−L−Val−L−Lys−1、−G lu −
1−−A la −Glyおよびその製薬」二許容され
る非毒性塩である、特許請求の範囲第1項記載の化合物
。
わちピD Glu L Asp I−−Pro−1、−
Tyr−L−Val−L−Lys−1、−G lu −
1−−A la −Glyおよびその製薬」二許容され
る非毒性塩である、特許請求の範囲第1項記載の化合物
。
(7)Xがピ0Gly、YがGluの化合物、すなわち
ピo−Glu−L−Asp−L−Pro−L−Tyr−
L−Val−L−Lys−L−Glu−1−−Ala
−L−Gluおよびその製薬上許容される非毒性塩であ
る、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
ピo−Glu−L−Asp−L−Pro−L−Tyr−
L−Val−L−Lys−L−Glu−1−−Ala
−L−Gluおよびその製薬上許容される非毒性塩であ
る、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
(8)前記特許請求の範囲の1項に記載の化合物の有効
量を製薬上許容される賦形剤中なくとも1種と混合して
なる、医薬組成物。
量を製薬上許容される賦形剤中なくとも1種と混合して
なる、医薬組成物。
(9)ナチュラルキラー細胞活性を増大するための活性
物質として用いるものである、特許請求の範囲第1〜7
項の何れか1項に記載の化合物。
物質として用いるものである、特許請求の範囲第1〜7
項の何れか1項に記載の化合物。
(10)ナチュラルキラー細胞活性を増大するために用
いるものである、特許請求の範囲第8項記載の組成物。
いるものである、特許請求の範囲第8項記載の組成物。
(11)式
X−Asp−’Pro−Tyr Vat Lys−Gl
u −Ala−’l’ (I) 1式中、Xt、tN−アシル−(1−6C)−Gin、
またはN−アシル−(1−6C)−Cys−Tyr−C
ys−G l n−1またはピローグルタミン酸残基、
YはGly、Glu、GlyN(R)2またはGluN
(R)2(Rは水素または炭素原子数1−6のアルキル
である)を意味する1 で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
の製造法において、 (1)式 %式% [式中、XおよびYは前記の意味1 で示される樹脂固相結合ペプチド中間体と、脱保護剤を
反応させて、式(I)の化合物またはその製薬上許容さ
れる非毒性塩を得、 (i i) 適当に保護されたオリゴペプチド類を、0
℃ケいL50℃の温度で反応させて式(T)のポリペプ
チドを生成させ、 (山)式(I)のポリペプチドを得るために、ヨーロッ
パ特許出願第0032134号または004f3970
号記載の組換えDNA技術技術用使用(iv) 式(I
)の化合物を製薬上許容される塩に変換し、 (v) 式(I)の化合物の塩を製薬」二許容される塩
に変換し、 (■i)式(1)の化合物の塩を式(T)の遊離塩基に
変換すること からなる方法。
u −Ala−’l’ (I) 1式中、Xt、tN−アシル−(1−6C)−Gin、
またはN−アシル−(1−6C)−Cys−Tyr−C
ys−G l n−1またはピローグルタミン酸残基、
YはGly、Glu、GlyN(R)2またはGluN
(R)2(Rは水素または炭素原子数1−6のアルキル
である)を意味する1 で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
の製造法において、 (1)式 %式% [式中、XおよびYは前記の意味1 で示される樹脂固相結合ペプチド中間体と、脱保護剤を
反応させて、式(I)の化合物またはその製薬上許容さ
れる非毒性塩を得、 (i i) 適当に保護されたオリゴペプチド類を、0
℃ケいL50℃の温度で反応させて式(T)のポリペプ
チドを生成させ、 (山)式(I)のポリペプチドを得るために、ヨーロッ
パ特許出願第0032134号または004f3970
号記載の組換えDNA技術技術用使用(iv) 式(I
)の化合物を製薬上許容される塩に変換し、 (v) 式(I)の化合物の塩を製薬」二許容される塩
に変換し、 (■i)式(1)の化合物の塩を式(T)の遊離塩基に
変換すること からなる方法。
(12、特許請求の範囲第11項記載の方法と、生成す
る化合物を製薬上許容される組成物に変換する工程から
なる、医薬組成物の製造法。
る化合物を製薬上許容される組成物に変換する工程から
なる、医薬組成物の製造法。
4−
手続補正書(睦)
昭和59年11月22日
特許庁長官 殿
2発明の名称
−)−チー1ラルキラー細胞活性増大用ペプチド3補正
をする者 事件との関係 特許出願人 4代理人 5− [別 紙1 2、特許請求の範囲 (1)式 %式% () 1式中、XはN−アシル[すなわち(1−6C)7シル
またはベンゾイル1−Gln、またはN−アシル[すな
わち(1−6C)アシルまたはベンゾイル1−Cys
−Tyr −Cys −G In−1またはピローグル
タミン酸残基、YはGlySGlu、GlyN(R)2
またはGluN(R)2(Rは水素または炭素原子数1
−6のアルキルである)を意味する] で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
。
をする者 事件との関係 特許出願人 4代理人 5− [別 紙1 2、特許請求の範囲 (1)式 %式% () 1式中、XはN−アシル[すなわち(1−6C)7シル
またはベンゾイル1−Gln、またはN−アシル[すな
わち(1−6C)アシルまたはベンゾイル1−Cys
−Tyr −Cys −G In−1またはピローグル
タミン酸残基、YはGlySGlu、GlyN(R)2
またはGluN(R)2(Rは水素または炭素原子数1
−6のアルキルである)を意味する] で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
。
(2)XがN −A cD3十t(1−6C)ア2悲ま
たはベンゾイル]−L−Gln、YがGlyの化合物、
すなわちN −Ac[すなわも(1−6C)ヱ乞へまた
はベンゾイル]−L−Gln−L−Asp−L−Pro
−L−Tyr−L−Val−L−Lys−L−Glu−
L−Ala Glyおよびその製薬上許容される非毒性
塩である、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
たはベンゾイル]−L−Gln、YがGlyの化合物、
すなわちN −Ac[すなわも(1−6C)ヱ乞へまた
はベンゾイル]−L−Gln−L−Asp−L−Pro
−L−Tyr−L−Val−L−Lys−L−Glu−
L−Ala Glyおよびその製薬上許容される非毒性
塩である、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
(3)XかN −A cL朋(1−6C)ア>tbまた
はベンゾイル1−L−Gln、YがI−−Gluの化合
物、すなわちN−Ac[すなわち(1−6C)ア予ソb
*?、、:l土ベンゾイノL=1−1−−Gln−1−
−Asp −L−Pro−1−−Tyr−I−−Vat
−1−−Lys−1−−Glu−L Ala−L−Gl
uおよびその製薬上許容される非毒性塩である、特許請
求の範囲第1項記載の化合物。
はベンゾイル1−L−Gln、YがI−−Gluの化合
物、すなわちN−Ac[すなわち(1−6C)ア予ソb
*?、、:l土ベンゾイノL=1−1−−Gln−1−
−Asp −L−Pro−1−−Tyr−I−−Vat
−1−−Lys−1−−Glu−L Ala−L−Gl
uおよびその製薬上許容される非毒性塩である、特許請
求の範囲第1項記載の化合物。
(4)XがN−Acけtt上方(1−6C)ア>tvま
たはベンゾイルl−1−−Cys−1−Tyr L−C
ys−L−Gln、YがGlyの化合物、すなわちNA
cLtなり(16C)了シルまたはベンゾイノul−L
−Cys−1−−Tyr−1−−Cys−L−Gln−
L−Asp−1−−Pro−1−−Tyr−1−−Va
l−L−Lys−1−Glu I−−Ala−1−−G
lyおよびその製薬−L許容される非毒性塩である、特
許請求の範囲第1項記載の化合物。
たはベンゾイルl−1−−Cys−1−Tyr L−C
ys−L−Gln、YがGlyの化合物、すなわちNA
cLtなり(16C)了シルまたはベンゾイノul−L
−Cys−1−−Tyr−1−−Cys−L−Gln−
L−Asp−1−−Pro−1−−Tyr−1−−Va
l−L−Lys−1−Glu I−−Ala−1−−G
lyおよびその製薬−L許容される非毒性塩である、特
許請求の範囲第1項記載の化合物。
(5)XがN−Ac[土な、b’b(1−6C)ヱ之悲
またはベンゾイル] L Cys L−Tyr−L −
Cys −L G In、 YがGluの化合物、すな
わもN−Ac[すなわち(1−6C)ヱシルまt也さン
ヅイzk]−L−Cys−L−Tyr−L−Cys−1
,、−Gln−L−Asp L−Pro−L−Tyr−
1−−\7al−I−−Lys−L−Glu−L Al
a L−Gluおよびその製薬上許容される非毒性塩で
ある、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
またはベンゾイル] L Cys L−Tyr−L −
Cys −L G In、 YがGluの化合物、すな
わもN−Ac[すなわち(1−6C)ヱシルまt也さン
ヅイzk]−L−Cys−L−Tyr−L−Cys−1
,、−Gln−L−Asp L−Pro−L−Tyr−
1−−\7al−I−−Lys−L−Glu−L Al
a L−Gluおよびその製薬上許容される非毒性塩で
ある、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
(6)XがピU−Glu、 YがGlyの化合物、すな
わちビOGlu−L−ASI)−L−Pro−L−Ty
r−L−Val−L−Lys−L−Glu−L−Ala
−Glyおよびその製薬上許容される非毒性塩である
、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
わちビOGlu−L−ASI)−L−Pro−L−Ty
r−L−Val−L−Lys−L−Glu−L−Ala
−Glyおよびその製薬上許容される非毒性塩である
、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
(7)Xがピo−Qly、YがGluの化合物、すなわ
ちビ0−Glu−L−Asp L F’ro L Ty
r−L−Val−1−−Lys L Glu−L Al
a−L−Gluおよびその製薬上許容される非毒性塩で
ある、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
ちビ0−Glu−L−Asp L F’ro L Ty
r−L−Val−1−−Lys L Glu−L Al
a−L−Gluおよびその製薬上許容される非毒性塩で
ある、特許請求の範囲第1項記載の化合物。
(8)前記特許請求の範囲の1項に記載の化合物の有効
量を製薬上許容される賦形剤中なくとも2− 1種と混合してなる、医薬組成物。
量を製薬上許容される賦形剤中なくとも2− 1種と混合してなる、医薬組成物。
(9)ナチュラルキラー細胞活性を増大するための活性
物質としで用いるものである、特許請求の範囲第1〜7
項の何れか1項に記載の化合物。
物質としで用いるものである、特許請求の範囲第1〜7
項の何れか1項に記載の化合物。
(10)ナチュラルキラー細胞活性を増大するために用
いるものである、特許請求の範囲第8項記載の組成物。
いるものである、特許請求の範囲第8項記載の組成物。
(11)式
%式%
()
−Cys−Tyr Cys Gln−1またはピローグ
ルタミン酸残基、YはGly、Glu、GlyN(R)
2またはGIuN(R)z (Rは水素または炭素原子
数1−6のアルキルである)を意味する1 で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
の製造法において、 (i)式 %式% [式中、XおよびYは前記の意味1 で示される樹脂固相結合ペプチド中間体と、脱保護剤を
反応させて、式(1)の化合物またはその製薬上許容さ
れる非毒性塩を得、 (ii) 適当に保護されたオリゴペプチド類を、0℃
ないし50℃の温度で反応させて式(I)のポリペプチ
ドを生成させ、 (iii)式(I)のポリペプチドを得るために、ヨー
ロッパ特許出願第0032134号または004897
0号記載の組換えDNA技術を使用し、(iい 式(I
)の化合物を製薬上許容される塩に変換し、 (v) 式(I)の化合物の塩を製薬上許容される塩に
変換し、 (vi) 式(I)の化合物の塩を式(■)の遊離塩基
に変換すること からなる方法。
ルタミン酸残基、YはGly、Glu、GlyN(R)
2またはGIuN(R)z (Rは水素または炭素原子
数1−6のアルキルである)を意味する1 で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
の製造法において、 (i)式 %式% [式中、XおよびYは前記の意味1 で示される樹脂固相結合ペプチド中間体と、脱保護剤を
反応させて、式(1)の化合物またはその製薬上許容さ
れる非毒性塩を得、 (ii) 適当に保護されたオリゴペプチド類を、0℃
ないし50℃の温度で反応させて式(I)のポリペプチ
ドを生成させ、 (iii)式(I)のポリペプチドを得るために、ヨー
ロッパ特許出願第0032134号または004897
0号記載の組換えDNA技術を使用し、(iい 式(I
)の化合物を製薬上許容される塩に変換し、 (v) 式(I)の化合物の塩を製薬上許容される塩に
変換し、 (vi) 式(I)の化合物の塩を式(■)の遊離塩基
に変換すること からなる方法。
(12、特許請求の範囲第11項記載の方法と、生成す
る化合物を製薬−1−許容される組成物に変換する工程
からなる、医薬組成物の製造法。
る化合物を製薬−1−許容される組成物に変換する工程
からなる、医薬組成物の製造法。
# −6=
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 (1)式 %式% () [式中、XはN−アシル−(1−6C)−Gln、また
はN−アシル−(1−6C) Cys Tyr−Cys
−Gln−1またはピローグルタミン酸残基、YはGl
ySGlu、GlyN(R)2またはGh+N(R)2
(Rは水素または炭素原子数1−6のアルキルである)
を意味する1 で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
。 (2)XがN−Ac−(1−6C)−L−Gln。 YがGlyの化合物、すなわちN−Ac−(1−6C)
−L−Gln−1−−Asp−L−Pro−L−Tyr
−L−Vat−L−Lys−L−Glu =L−Ala
−Glyおよびその製薬−L許容される非毒性塩である
、特許請求の範囲第1項記載の化合物。 、 (3) XがN−Ac−(1−6C)−L−Gln、Y
がL−Gluの化合物、すなわちN−Ac−(1−6C
)−L−Gln−L−Asp−1−−Pro−1−−T
yr−L−Val−L−Lys−1−−Glu−r−−
Ala −L−Gluおよびその製薬」二許容される非
毒性塩である、特許請求の範囲第1項記載の化合物。 (4)XがN Ac (1−6C)−L−Cys−L
Tyr−L−Cys L G1n5YがGlyの化合物
、すなわちN−Ac−(1−6C)−L−Cys −L
−Tyr−L−Cys−1−−Gln−L−Asp−1
−−Pro−L−Tyr−L−Val−L−Lys−1
−−GluL−Ala−L−Glyおよびその製薬上許
容される非毒性塩である、特許請求の範囲第1項記載の
化合物。 (5)XがN−Ac−(1−6C) L−Cys −L
−Tyr−L−Cys−L−Gln、 YfJ’Glu
の化合物、すなわちN−Ac−(1−6C)−L−Cy
s −L−Tyr−L−Cys−L−Gln−L−As
p−L −Pro−L−Tyr−L−Val−L−Ly
s−L−Glu−I−−Ala−1−−Gluおよびそ
の製薬上許容される非毒性塩である、特許請求の範囲第
1項記載の化合物。 (6)Xがピo−Glu、YがGlyの化合物、すなわ
ちビCI Glu I−Asp l−4−1?ro L
Tyr−L−Val−1−−Lys L−Glu−I
−Ala −Glyおよびその製薬」二許容される非毒
性塩である、特許請求の範囲第1項記載の化合物。 (7)Xがピt7Gly、YがGluの化合物、すなわ
ちビo−Glu−L−Asp L Pro−1−−Ty
r−L−Val−L−Lys L Glu−L−Ala
−L−GILIおよびその製薬−に許容される非毒性塩
である、特許請求の範囲第1項記載の化合物。 (8)前記特許請求の範囲の1項に記載の化合物の有効
量を製薬」二許容される賦形剤中なくとも1種と混合し
てなる、医薬組成物。 (9)ナチュラルキラー細胞活性を増大するための活性
物質として用いるものである、特許請求の範囲第1〜7
項の何れか1項に記載の化合物。 (10)ナチュラルキラー細胞活性を増大するために用
いるものである、特許請求の範囲第8項記載の組成物。 (11)式 %式% () 1式中、XはN−アシル−(1−6C) −Gin、ま
たはN−アシル−(1−6C)−Cys−Tyr−Cy
s−Gln−1またはピローグルタミン酸残基、YはG
ly、 Glu、 GlyN(R,)2またはGluN
(R)2(Rは水素または炭素原子数1−6のアルキル
である)を意味する1 で示される化合物およびその製薬」二許容される非毒性
塩の製造法において、 (i)式 %式% E式中、XおよびYは前記の意味1 で示される樹脂固相結合ペプチド中間体と、脱保護剤を
反応させて、式(I)の化合物またはその製薬上許容さ
れる非毒性塩を得、 3− (ii) 適当に保護されたオリゴペプチド類を、0℃
ないし50℃の温度で反応させて式(T)のポリペプチ
ドを生成させ、 (iii)式(I)のポリペプチドを得るために、ヨー
ロッパ特許出願第0032134号または004、89
70号記載の組換えDNA技術を使用し、(iv) 式
(I)の化合物を製薬上許容される塩に変換し、 (V) 弐mの化合物の塩を製薬上許容される塩に変換
し、 (vi) 式(T)の化合物の塩を式(I)の遊離塩基
に変換すること からなる方法。 (10)特許請求の範囲第9項記載の方法と、生成する
化合物を製薬上許容されるllI&物に変換する工程か
らなる、医薬組成物の製造法。
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