JPS6087299A - ナチユラルキラ−細胞活性増大用ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野１ この発明は、ナチュラルキラー細胞活性増大用ノナおよ
びドデカペプチド、その製造法およびそ４− れからなる医薬に関するものである。

［従来の技術Ｉ Ｒ，Ｎ−スリング、Ｒ，Ｂ、ハーバ−マンおよびＲ，に
、オールドハム等の研究者による早期の研究から、ひと
提供者から得たリンパ様細胞による天然の細胞毒活性の
存在が確認されていた。この天然に起るインビトロ細胞
仲介細胞毒性は、その後も上記研究者および他の研究者
により研究され、マウスおよびひとで確認された。

天然細胞仲介細胞毒性を仲介するエフェクター細胞は、
ナチュラルキラー細胞として集合的に知られている。ナ
チュラルキラー細胞は、当初、細胞毒性ＴＩＪンパ球お
よびその池の典型的Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球または顆粒球
のある種の特性を欠如した細胞として、消極的に定義さ
れていた。その後の同定研究から、例えば、ナチュラル
キラー活性が種々の異なる型のリンパ様細胞間に広範に
分布するのではなく、末梢性血液単核細胞の僅が５〜１
０％からなる別個の副次集団細胞に限定されていること
等の、多数の積極的性質が明らかになった。このような
細胞のほとんどは、ＩｇＧのＦｃ部のレセプターを示す
ことも明らかになった。ひとナチュラルキラー細胞はま
た、典型的Ｔ細胞に密接な関係を有するマーカーを含む
他の数種の特徴的な細胞表面マーカーをもっことが判明
した。これらの特性はナチュラルキラー細胞像を構成す
る役には立つが、その明確な特徴は現在も得られていな
い。

さらに、細胞仲介細胞毒性の自然発生も未解明である。

多数の要因が活性化機構として示唆され、例えば細菌寄
生体、ウィルスまたはその同類等の環境要因がナチュラ
ルキラー細胞活性の誘発の起因剤として関係づけられた
。遺伝的要因もナチュラルキラー細胞活性発現に一役担
うと主張された。

他の一見重要なナチュラルキラー細胞活性の賦活剤はイ
ンターフェロンである。インターフェロンに対する抗体
でくり返し処理した正常マウスは、自然発生ナチュラル
キラー細胞活性が完全にではないが実質的に減少し、こ
のことは体内性インターフェロンがナチュラルキラー細
胞活性の自然発達に寄与している可能性を示す。

細胞仲介毒性の代表的概観は、ハーバ−マンおよびオー
ルドハム、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・レスポ
ンス・モディファイアズ（、Ｉｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｂｉ
ｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ　Ｍｏｄｉｆｉｅ
ｒｓ）２巻１１１〜１２０頁（１９８３年）およびスタ
ットマン等、７エデレーシヨン・プロシーデインダス（
Ｆｅｄｅ−ｒａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ）　
４０巻（１２）２６９９頁（１９８１年）に記載されて
いる。

［発明の開示１ この発明は、ひとインターフェロンガンマ体の蛋白部分
の生産者であると決定されたＤＮＡ７ラグメントの転写
であるポリペプチドのＮ末端から全体または一部をとっ
たノナペプチドおよびドデカペプチドに関するものであ
る。もっとも、天然材料であるひとインターフェロンガ
ンマ体は、この発明の優先権主張臼には完全に整理およ
び同定されていなかった。１９８４年６月に、リンダー
ネクス等が、天然ＨｕＩＦＮ−γの配列を決定した［Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ　２５９巻（１１）６７９０〜６７９７頁（
１，９８４年）１゜（要約） 第１に、この発明は、式 ％式％ （） １式中、ＸはＮ−アシルＧｌｎ、ピローＧｌｕまたはＮ
−アシル−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ　Ｇｌｎ、ＹはＧｌ
ｙ。

Ｇｌｕ、ＧｌｙＮ（Ｒ）２またはＧＩｕＮ（Ｒ）２（Ｒ
は水素または炭素原子数１ないし６のアルキルである）
を意味する１ で示されるノナペプチドおよびドデカペプチド、並びに
その製薬上許容される非毒性塩に関するものである。

第２に、この発明は、上記ノナペプチドまたはドデカペ
プチド１種またはそれ以上のナチュラルキラー細胞活性
増大に充分な有効量を投与することからなる、ナチュラ
ルキラー細胞毒性の増大法に関するものである。

第３に、この発明は、上記ノナペプチドまたはドデカペ
プチド１種またはそれ以上と製薬上許容８− される賦形剤からなる医薬組成物、ま、たは上記ノナペ
プチドまたはドデカペプチド１種またはそれ以上、ひと
インターフェロンおよび製薬」二許容される賦形剤から
なる医薬組成物に関するものである。

最後に、この発明は、式（Ｉ）のペプチドの製造法、並
びに式（１）の化合物および／またはその塩を含む医薬
組成物の製造法に関するものである。

（態様） 前記および後記の記述において、便宜上、生化学命名法
に関するＩＵＰＡＣ＝ＩＵＢ委員会が勧告したペプチド
分野で一般に受入れられている種々の慣用一般アミノ酸
記号（Ｂ　ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１１巻１７２６頁
、１９７２年）を用いる。これらは、非キラルアミノ酸
であるグリシンを除きＬ−アミノ酸を表わす。

ペプチド配列はすべて、一般に受入れられている慣行に
したがって記載し、Ｎ−末端アミノ酸を左に、Ｃ−末端
アミノ酸を右に示す。

これらノナペプチドおよびドデカペプチドを構成するア
ミノ酸は、キラル性を有するもの全部がＬ配置であるこ
とが望ましい。しかし、この発明のポリペプチドは、１
個またはそれ以上のＩ、−アミノ酸を対応する１）−ア
ミノ酸で置とかえて作ることもできる。

Ｎ−アシルの語は、アミノ窒素がカルボン酸残基と結合
してアミノ結合を作る官能基を示す。カルボン酸残基と
しては、炭素原子１ないし６個を有するアルキルカルボ
ン酸および安息香酸の残基を含む。アルキルカルボン酸
は、直鎖または分枝鎖のアルキルを有するものであって
、ぎ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸１、吉草
酸、イソ吉草酸、ピバリン酸およびヘキサン酸を含む。

Ｎ−Ａｅの記号は特にＮ−アセチル基を示す。

製薬上許容される非毒性塩の語は、母体化合物の生物活
性を保持し望ましくない毒性を示さない塩類を示す。こ
のような塩の例は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、
硫酸、燐酸、硝酸等との塩、および有機酸、例えば酢酸
、修酸、酒石酸、こはく酸、マレイン酸、７マール酸、
グルコン酸、＜タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリ
グルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジス
ルホン酸、ポリガラクツロン酸等、との塩、多価金属カ
チオン、例えば亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム
、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケ
ル、カドミウム等との塩、または有機カチオン、例えば
Ｎ、Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、エチレンジアミ
ン等との塩、またはその組合わせ、例えばタンニン酸亜
鉛塩等である。

（アッセイ法） この発明の化合物（塩を含む）は、ナチュラルキラー細
胞活性を増大する。

このような増大の１つの尺度は、Ｋ２Ｏ２で示すひと骨
髄腫細胞の溶解測定で得られる。溶解は”Ｃｒの放出に
より測定される。アッセイは、ザーリング等（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ｔｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１２３巻６３頁
、１９７９年）またはプラトソーカス等（Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１２５巻１２１６−
１２２３頁、１９８０年）にしたがって行なう。

（ペプチドの合成法） この発明のペプチドは、ペプチド分野の専門家に公知の
方法で合成することができる。使用できる多数の技術の
すぐれた要約は、スチュワードおよびヤング「ソリッド
７エーズ・ペプチドシンセシＸＪ（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａ
ｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）　（Ｗ。

［１，フリーマン、サンフランシスコ、１９６９年）お
よびマイエンホ７ア［ホルモナルプロテインズやアンド
・ペプチドＪ　Ｈｏｒ＋ｎｏｎａｌ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
　ａｎｄＰｅｐｔｉｄｅｓ）２巻４６頁（アカデミツク
プレス、ニューヨーク、１９７３年）に固相法ペプチド
合成が、シュロダーおよびラブク「ザ・ペプチドＪ（Ｔ
Ｉ＋ｅＰｅｐｔｉｄｅｓ）　１巻（アカデミツクプレス
、ニューヨーク、１９６５年）に古典的溶液合成法が記
載されている。

一般に、これらの方法は、ペプチド鎖に１個またはそれ
以上のアミノ酸または適当に保護されたアミノ酸を連続
的に追加して行くことからなっている。通常、第１のア
ミノ酸のアミノ基またはカルボキシ基が適当な保護基で
保護される。保護さ１２− れた、または誘導体にされたアミノ酸は、不活性な固体
担体に結合するか、または溶液状態で、アミド結合形成
に適した条件下に、補完（アミ／またはカルボキシ）基
が適当に保護された次位のアミノ酸との結合に用いる。

次いで、この新規結合アミノ酸残基から保護基を除外、
次の（適当に保護されたアミノ酸を加え、以下同様に行
なう。所望のアミノ酸を全部適当な配列で結合した後、
残留し得る保護基（および固体担体）を逐次または同時
に除いて最終ペプチドを得る。この−膜性の簡単な変更
により、生長中の鎖に１個以上のアミノ酸を、例えば保
護トリペプチドと適当に保護されたジペプチドの縮合（
キラル中心のラセミ化を起さない条件下）と脱保護後に
ペンタペプチドを得る方法等により、結合させることが
可能である。

さらに、この発明のポリペプチドは、組換えＤＮＡ技術
、例えばヨーロッパ出願公開００３２１３４（ＢｉｏＦ
ｌｅｎ、ダーウエントＮｏ、５３６９７Ｄ／３０）およ
びヨーロッパ出願公開００４．８９７０（Ｇｅｎｅｎｔ
ｅｃｈ、ダーウエントＮｏ、２８９７４Ｅ／１５）に開
示されたインターフェロン様ペプチドコード゛のＤＮＡ
配列の修正・使用により合成でとると期待される。

（好ましい態様） この発明の化合物の特に好ましい製造法は、固相法によ
るペプチド合成である。

この特に好ましい方法では、アミノ酸のα−７ミノ官能
基を酸または塩基に敏感な基で保護する。

このような保護基は、ペプチド結合形成条件下で安定で
あり、生長しつつあるペプチド合成を破壊することなく
、またその中に含まれるキラル中心をラセミ化すること
なく、容易に除去できる性質をもたなければならない。

適当な保護基は、第３級ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）
、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ビフェニルイ
ソプロピルオキシカルボニル、第３級アミルオキシカル
ボニル、イソボルニルオキシカルボニル、ａ、ａ−ジメ
チル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、
０−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−第３級
ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキ
シカルボニル等、特に第３級ブトキシカルボニル（Ｂｏ
Ｃ）である。

特に好ましいチロシンの側鎖保護基は、ベンノル、０−
ブロモベンジルオルジカルボニル、２，６−ジクロロベ
ンジル、イソプロピル、シクロヘキシル、シクロペンチ
ルおよびアセチルであり、セリンの側鎖保護基はペンシ
ル、第３級ブチルおよびテトラヒドロピラニルである。

Ｃ−末端アミノ酸は、適当な固体担体に結合させる。上
記合成法で用いるに適した固体担体は、順次に１行なう
縮合・脱保護反応の反応試薬および反応条件に対して不
活性であり、使用媒質に不溶の材料である。適当な固体
担体は、クロロメチルポリスチレン命ジビニルベンゼン
・ポリマー、ヒドロキシメチル・ポリスチレン中ジビニ
ルベンゼン・ポリマー等であり、特にクロロメチルポリ
スチレン・１％ジビニルベンゼン・ポリマーである。

化合物のＣ末端がグリシンアミド主たけグルタミンアミ
ドの場合には、特に有用な担体はベンス゛ヒトリルアミ
ノポリスチレン◆ジビニルベンゼン・１５− ポリマー（リベイル等、Ｈｌｖ、　Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ
　５４巻２７７２頁、１９７１年に記載）。クロロメチ
ルポリスチレン・ノビニルベンゼン型樹脂への結合は、
エタノール、アセトニトリル、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）等巾、セシウム、テトラメチルアンモ
ニウム、トリエチルアンモニウム、１，５−ジアザビシ
クロ［５，４，（＞’ｌウンデカー５−エンまたは同様
な塩基との塩の形のＮ−α−保護アミノ酸、特にＢｏｃ
−アミノ酸、特にＤＭＦ中のセシウム塩と、クロロメチ
ル樹脂を、−上昇温度、例えば４０〜６０℃、好ましく
は約５０℃で、約１２〜４８時間、好ましくは約２４時
間反応させることにより行なわれる。Ｎ−α−Ｂｏｃ−
アミノ酸は、ベンズヒドリルアミン樹脂に、ジクロロメ
タンまたはＤ　Ｍ　Ｆ　、好ましくはジクロロメタン中
、約１０〜５０℃、好ましくは２５℃で、約２〜約２４
時間、好ましくは約１２時間、Ｎ。

Ｎ゛−ジシクロへキシルカルボジイミド（ｒ＋ｃｃ）／
１−ヒドロキシベンゾＹリアゾール（ＨＢＴ）仲介縮合
を行なうことにより結合される。連続的保＝１６− 護アミノ酸の縮合は、当分野で周知の自動ポリペプチド
シンセサイザーにより行なうことができる。

Ｎ−α−保護基の除去は、例えばトリフルオロ酢酸のメ
チレンクロライド溶液、塩化水素のジオキサン溶液、塩
化水素の酢酸溶液、または他の強酸溶液、好ましくは５
０％トリフルオロ酢酸ジクロロメタン溶液の存在下、は
ぼ室温で行なう。各保護アミノ酸は、好ましぐは約２．
５モル過剰を導入シ、縮合は、ジクロロメタン、ジクロ
ロメタン／ＤＭＦ混合物、ＤＭＦ等、特にメチレンクロ
ライド中、はぼ室温で行なう。縮合剤は、通常ジクロロ
メタン中Ｔ）ＣＣであるが、Ｎ、Ｎ’−ンイソプロビル
カルボジイミドまたは他のカルボジイミドを単独もしく
はＨＢＴ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、他のＮ−ヒ
ドロキシイミドまたはオキシムの存在下に用いてもよい
。別の方法として、保護アミノ酸の活性エステル（例え
ば０−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル等）ま
たは対称無水物を用いることもできる。

同相合成法の終りに、完全に保護したポリペプチドを脱
保護し樹脂から外す。これは、例えば無水液体ぶつ化水
素をアニソールまたは池のカルボニウム・スカベンジャ
ー（除去剤）の存在下に用いる処理、ぶつ化水素／ピリ
ジン錯体による処理、トリス（トリフルオロアセチル）
はう素とトリフルオロ酢酸による処理、水素とパラジウ
ノ、・炭素もしくはポリビニルピロリドンによる還元、
液体アンモニア中ナトリウムによる還元、好ましくは液
体ぷり化水素とアニソールを用い、約−１０〜＋１０℃
、好ましくは約＋１　℃で約１５分〜・１時間、好まし
くは約３０分間反応させることにより達成される。完全
に脱保護したポリペプチドは、次いで下記方法の一部ま
たは全部を用いる一連のクロマトグラフ技術、すなわち
アセテート型弱塩基性樹脂上のイオン交換、非誘導体化
ポリスチレン・ジビニルベンゼン（例えばアンバーライ
）ＸＡＤ）上の疎水性吸着クロマトグラフィー、シリカ
ゲル吸着クロマトグラフィー、カルボキシメチルセルロ
ース」二のイオン交換クロマトグラフィー、例えばセフ
ァデックスＧ−２５上の分配クロマトグラフィーもしく
は向流分配、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
、特にオクチルもしくはオクタデシルシリル・シリカ結
合相カラム充填剤−にの逆相ＨＰＬＣにより精製される
。この方法により、使用担体がクロロメチル樹脂系のも
の（エステル結合）の場合Ｃ末端に遊離カルボキシ官能
基をもつポリペプチド、または担体がベンズヒドリル樹
脂の場合Ｃ末端がアミドのものが得られる。置換アミド
Ｃ末端、例えば−ＮＨＥｔは、まず保護ポリペプチドを
所望のアミン（Ｈ２ＮＥｔ）によるエステルのアミノリ
ンスにより樹脂から外し、次いで上記試薬、特に液体Ｈ
Ｆによる脱保護を行なって製造される。

したがって、この発明の別の目的は、この発明の化合物
およびその製薬上許容される塩の製造法にあり、上記方
法は、 保護基と、所望により共有結合した固体担体を、ポリペ
プチドから除去して式（Ｉ）の化合物またはその塩を得
、さらに所望により、 （、）式（Ｉ）の化合物を製薬−Ｌ許容される塩に変１
９− 換するか、または （ｂ）式（Ｉ）の化合物の塩を製薬上許容される塩に変
換するか、または （ｃ）式（Ｉ）の化合物の塩を式（１）の遊離ポリペプ
チドに分解すること からなる。

上記（、）、（１））および（ｃ）の変換は、通常０〜
５０℃で行なわれる。

［実施例１ 以下に示す実施例は、この発明をさらに詳細に理解する
ためのものであり、単に説明し代表するものであって、
この発明の範囲を限定するものではない。

実施例１ ベックマン９９０ペプチドシンセサイサ゛−の反応器に
、クロロメチルポリスチレン−１％−ジビニルベンゼン
樹脂（１ミリモルＣｊ２／ｇｔｊｌ脂）とＢｏｃ−ＧＩ
ｙ−ＯＣｓ塩［ギシン、Ｈｅ１ｖ、　Ｃｆｕ＋＋ｉｍ。

Ａｃｔａ５６巻１４７６頁（１９７３年）１の反応で製
造したＢｏａ−Ｇｌｙ−０−樹脂１．０ミリモルを＝２
０− 入れる。この樹脂に、合成プログラムによりアミノ酸を
順次加える。

工程　作業　呻□」芋同− １ＣＨ２Ｃ，ｅ２洗浄　１　］、５分 ２　５０％ＣＦ３ＣＯ２Ｈ／ＣＨ２Ｃｆ２脱保護　１　
１．５分 ３　５０％ＣＦ３ＣＯ２Ｈ／ＣＨ２ＣＣ２脱保護　１　
３０分 ４　ＣＨ２ＣＲ２洗浄　３　１．５分 ５１０％（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ／ＣＨ２Ｃで、２　１．５分
６　ＣＨ２Ｃｌ、２洗浄　３　１．５分７ＮＯ−Ｂｏｃ
−アミノ酸溶液　１　添加８　Ｎ、Ｎ’−ジノクルへキ
シルカ ルボジイミド溶液　１　添加 ９　ＣＨ２Ｃｌ２すすぎおよび 縮合反応　１　２時間 １１　Ｃ８２Ｃ／２２洗浄　３　１．５分１２　エタノ
ール洗浄　３　１．５分 １３　ＣＨ２Ｃｊ２２洗浄　３　１．５分１〜１３の工
程により、１個のアミノ酸の縮合サイクルが完了し、反
応の完全さはカイザー等（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｌ＋ｅ
ｍ、　３４巻５９５頁、１９７０年）のニンヒドリン法
により検査する。

樹脂を、約２．５モル過剰の各保護アミノ酸およびＤＣ
Ｃと連続的に縮合させる。こうして、樹脂を連続縮合サ
イクルにおいて、 ＢｏｃＡｌａ−（月（（１，−４７３ｇ。

Ｂｏｃ−Ｇｌｕ−（ＯＢｚｌ）　ＯＨＯ，８４３ｇ、Ｂ
ｏｃ　Ｌｙｓ（Ｚ）　０Ｉ−（０，９５１ｇ、Ｂｏｃ−
Ｖａｌ−Ｏｆ（０，５４３ｇ、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−ＯＨＯ
，７０３ｇ、 Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨＯ，５３８ｇ。

Ｂｏｃ　Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）ＯＨＯ，８０６ｇ。

Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨＯ，６１６ｇおよび１−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール　０．５１ｇ、およびＡｃ２０　
３．０Ｊ 反応器から樹脂を除外、ＣＨ２Ｃｌ、で洗浄し、真空乾
燥して、保護ポリペプチド樹脂、１．５ｇを得る。

無水液体ＨＦで処理することにより、同時にポリペプチ
ド体を樹脂から除き完全に脱保護する。

保護ポリペプチド樹脂１．５ｇと７ニソール（スカベン
ジャー）２Ｊの混合物をＫｅｌ　−Ｆ反応器に入れ、再
蒸留（ＣｏＦ３使用）無水液体ＨＦ２０ｍ、（’：と０
℃で１時間処理する。ＨＦを真空留去し、残留物Ａｃ−
Ｇｉｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ　Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ　−
Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨのＨＦ塩をエーテル洗浄
する。次いで、残留物を氷酢酸で抽出する。酢酸抽出液
を凍結乾燥して、粗製品０．７２５ｇを得る。

プレバラティブ（分取）高速液体クロマトグラフィーに
より試料１５０ｍｇを２０〜４０ミクロンのオクタデシ
ルシリル化シリカ（メルク・リクプレプＣ，，）を充填
した２、５Ｘ１００ｃｍのカラムで精製する。溶離剤と
して９１％０．０３モルＮＨ，０Ａｃ−／９％アセＦニ
トリルを用いる。４回の実験で合計的６００１１１ｇの
粗製品を精製する。水から３回凍結乾燥し、純Ａｃ−Ｇ
ｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨの酢酸塩２６０報を得る。

分解点：約１８０℃ 実施例２ （Ａ）　Ａｃ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａ
ｔ−Ｌｙｓ−ＧＩＬＬ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨのＨＦ塩
（実施例１で得たもの）０．Ｉｇの溶液を水５０−に溶
かし、酢酸で平衡化し脱イオン水で洗浄したダウエック
ス３アニオン交換樹脂５０ｇのカラムに通す。カラムを
脱イオン水で溶離し、流出液を凍結乾燥して、Ａｃ−Ｇ
ｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｔ
ａ−Ｇｌｙ−ＯＨの酢酸塩を得る。

樹脂の平衡化に酢酸以外の酸を用いて上記方法を反復し
、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、硝酸、安息香
酸等の塩が得られる。

同様にして、この発明に属する知のペプチドの酸付加塩
も得られる。

（Ｂ）　低水溶性塩は、所望の酸を用いて水から沈殿さ
せることによｌ）ｉ！！造できる。例えば：タンニン酸
亜鉛塩：　Ａｃ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ−Ｐｒｏ　−Ｔｙｒ　
Ｖａｌ　Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ　ＯＨ酢酸塩
１１０ｌｌ１と水０．１−の溶液をタンニン酸８ｍｇと
０．２５Ｍ−ＮａＯＨＯ，（１８Ｊの溶液で処理した。

Ｚｎ５Ｏ＝７水化物５ＩＩ１ｇと水０，１−の溶液を直
ちに上記ポリペプチド溶液に加えた。

得られるけんだく液を水り劃で希釈し、沈殿を遠心分離
した。上清を傾斜してとり、残留物を水ｌｌｌ１ｐ　を
用いて沈殿を遠心分離することにより２回洗浄し上清を
傾斜して除いた。沈殿を真空乾燥して、上記ノナペプチ
ドのタンニン酸亜鉛塩混合物１５ＩＩ１ｇを得た。

パモ酸塩：　Ａｃ−Ｇｌｎ　Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−
Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨ酢酸塩
０．Ｏ５ｌｌ１ｇをエタノール１，６ｏ＋４と０．０２
５（閤ｐ）Ｍ・ＮａＯＨ０，１ｍＪに溶かした溶液に、
パモ酸１１ｍｇと０．２６Ｍ−ＮａＯＨＯ，３１Ｉｊ２
の溶液を加えた。

溶媒を減圧留去し、残留物を水２ｍｆ　にけんだくし、
遠心分離し、上清を傾斜で除いた。沈殿を水１．５Ｊで
洗浄し、遠心分離し、真空乾燥して、上記ノナペプチＹ
のバモ酸塩５４１１１ｇを得る。

同様にして、他の水難溶性塩を製造することができる。

（Ｃ）　遊離ペプチドから酸イ］加塩の製造。

Ａｃ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ａｓｐ−Ｐｒｏ　−Ｔｙｒ　−Ｖ
ａｌ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｙ−ＯＨ遊離
塩基５０ｍｇの溶液に１Ｎ酢酸３０ｍＣを加える。得ら
れる溶液を凍結乾燥して、−１１記酢酸塩５０ｍ８を得
る。

同様にして、酢酸の代りに他の酸（ペプチドに対して化
学当量）を用い、この発明のペプチドの他の酸付加塩、
例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、硝酸等との塩が
得られる。

（１））　金属カチオンとの塩、例えば亜鉛塩の製造。

Ａｃ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｔ−Ｌｙ
ｓ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　Ｉａ　−Ｇ　ｌｙ　−ＯＨ酢酸
塩５（ｈｇを、０．２５Ｍ−ＮａＯＨ０，４−１水（１
，３＋ｎ　ｉ、エタノールＩｍＩ！の混合物に溶かした
溶液に、ＺｎＳ０，７氷化物１５ｍｇと水０．２ｍ、Ｉ
２の溶液を加えた。沈殿を遠心分離し、」１清を傾斜で
除いた。沈殿を水１＋ｎｌを遠心分離して洗浄し、」１
清を傾斜して除いた。沈殿を真空乾燥して、上記ノナペ
プチドの亜鉛塩４Ｌｏｇを得た。

同様にして、池の多価金属カチオンとの塩、例えばカル
シウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニ
ウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム等との塩を
製造でとる。

実施例３ Ａｃ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ　Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｌｙ
ｓ　−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨ５０ｍｇの水溶液
を、ＮａＯＨで平衡化したダウエックス１　（強塩基性
４級アンモニウムアニオン交換樹脂）に通して対イオン
をヒドロキシドにする。カラムを水１５　Ｔｌｍ、、（
で溶離し、溶離液を凍結乾燥してポリペプチドの遊離塩
基４５ｍｇを得る。

同様にして、この発明のペプチドの池の酸付加塩、例え
ば実施例２記載の塩を対応する遊離塩基に変換できる。

実施例４ 以下に示すのは、有効成分としてのこの発明のポリペプ
チド、例えばＡｃ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ　−Ｔｙｒ
−Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨ自体
またはその製薬上許容される塩、例えば酢酸塩、亜鉛塩
、タンニン酸亜鉛塩等を含む代表的医薬組２７− 酸物である。

（Ａ）　口内（例えば舌下）錠　（ｍｇ）１、ポリペプ
チド　１０．０ 圧縮性砂糖（米国薬局方）　８６．０ ステアリン酸カルシウム　４．０ ２、ポリペプチド　１０．０ 圧縮性砂糖（米国薬局方）　８８．５ ステアリン酸マグネシウム　１．５ ３、ポリペプチド　５．０ マンニトール（米国薬局方）　８３．５ステアリン酸マ
グネシウム （米国薬局方）１．５ ゼラチン化でんぷん（米国薬局方）１０．０４、ポリペ
プチド　１０．０ 乳糖（米国薬局方）　７４．５ ゼラチン化でんぷん（米国薬局方）１５．０ステアリン
酸マグネシウム （米国薬局方）１．５ 実施例５ Ａｃ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｌｙ
ｓ　−＝２８− Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ　ＯＨの固相合成。

ペプチドシンセサイザーの反応器に、（クロロメチル）
ポリスチレン−１％ジビニルベンゼン樹脂（０，７６１
ミリモル／ｇ樹脂）とｔ　−Ｂｏｃ　−ＧＩｎ−ＱＣｓ
塩の反応で製造したｔ−Ｂｏｃ　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）
−０−樹脂２ミリモルを入れる。この樹脂に、約２．５
モル過剰のアミノ酸を実施例１に記載した自動固相ペプ
チド合成プログラムにより連続的に加える。こ）して、
Ａｌａ、　Ｇｌｕ、　Ｌｙｓ、　ＶａｔＳＴｙｒＳＰｒ
ｏ、　ＡｓｐおよびＧｌｎを上記のような保護型として
樹脂に連続的に加える。

樹脂についた保護ポリペプチドを反応器から取出し、デ
シケータ中で真空乾燥して樹脂についた保護ペプチド２
，４４．を得る。無水ＨＦを用い（前記のように）０℃
で１時間処理して樹脂からペプチドを外し脱保護する。

ＨＦを真空留去し、残留物をジエチルエーテルで３回洗
浄する。脱保護したペプチドを氷酢酸に溶かし、濾過し
て樹脂を除く。酢酸洗液を集めて溶媒を除外、イオン交
換樹脂カラム（Ａｇ３アセテ−ト）に通してＦイオンを
アセテートに変える。

凍結乾燥して粗製ペプチド６００ｍｇを得る。実施例１
と同様にＲＰ−１８カラムを用いて３回プレパラテイブ
ＨＰ　Ｉ−（ｉを行ない、ペプチドを精製する（１２％
ＣＩ（３ＣＮ、（１，０３Ｍ酢酸アンモニウム、ｐＨ４
，５）。

対応フラクションから溶媒を除き、水から化合物を凍結
乾燥して生成物２１０ｍｇを得る。

分解点：１５５〜１７０’Ｃ 同様にして、上記クロロメチルポリスチレン樹脂の代り
にベンズヒドリルアミノポリスチレン樹脂を用い、下記
生成物を得る。

Ａｃ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｌｙ
ｓ　−Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ−ＮＨ２ ビａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｌｙ
ｓ　−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ　Ｎｌ−１２ 試験例１（バイオアッセイ） この発明の化合物のナチュラルキラー細胞活性増大能力
を次のようにして測定した。プラトソーカス等（Ｊ、　
Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１２５巻１２１６−１２２３頁、１
９８０年）の記載にしたがって正常な健康志願者の末梢
血液白血球（ＰＢＬ）から分離したヒストパック１０７
７（シグマ社）会用いて、インビトロひとＮＫ細胞毒性
を測定した。ＰＢＩ−をマイクロタイタープレート中、
”Ｃｒラベルに一５６２ターゲット細胞と４時間の共培
養前に、１８時間インキュベートした。データを、スチ
ューデン）１検定で分析した。ＨｕＩＦＮ−γ（、）ま
たは実施例１のノナペプチド（ｂ）を、５ＩＣｒラベル
に一５６２ターゲット細胞との４時間インキュベーショ
ン１８時間前に１０６／ｎ＋タＰＢＬに加えた。データ
は、ノナペプチドとＨｕＩＮＦ−γを比較した２回の実
験を示す。簡単にするために、Ｅ：Ｔは３０：　１を示
したが、他の試験ターゲット比でも同様な結果が得られ
た。提供者の間に顕著な変動が存在するが、インターフ
ェロンに応答する者では常に、ノナペプチドにも応答が
見られた。ＨｕＩＦＮ−γの０．１０／ｍ、ｅ以上また
はノナペプチドの５Ｘ１０−’モル以下のあらゆる濃度
で、下記表によると、Ｐ〈０．００１で対照と差がある
応答を誘発した。

ひとナチーラＪｂ−４７−釧Ｄ！？ｉＧ！−の渥μこ対
照％ 化合物　濃度　Ｅ：Ｔ＝３０：１での ”Ｃｒ世肥 実施例１の　０．０５（１０−９Ｍ）　１３０ノナペプ
チド　＋１．５０　１５８ ５．０　２１１ ＨｕＩＦＮ−γ　１．．０（Ｕ／Ｊ）　１４１１０．０
　１７０ １００．０　１９０ 実施例５のノナペプチドも、同様にインビトロＮＫ細胞
毒性を増大した。

試験例２（家兎発熱性） この実験には、体重２．５ｋｇの正常健康ニューシーラ
ント白色家兎を用いた。投薬前に、直腸体温を半時間お
きに３回測定した。実施例１のノナペプチドを無菌水に
入れて耳静脈から注射し、直腸体温を５時間にわたって
１時間おきに測定した。

用量は、１０８ナノグラム／ｋｇを無菌水に入れで用い
た。投薬前体温は１０３．２〜１０３，４°Ｆの範囲で
投薬後体温は１０３．１〜１０３．２°Ｆの範囲であっ
た。結果として、投与量におけるノナペプチドは観測可
能な発熱性を示さなかった。

実施例１の７ナペプチドは毒性の徴候を示さず、この発
明の他の７ナペプチドまたはペプチドでも毒性が期待さ
れなかった。

特許出願人　シンテックス（ニー・ニス・エイ）インコ
ーホレイテッド 代理人弁理士青山　葆はか１名 手続補正書（睦） 昭和５９年１０月　９日 １　事件の表示 昭和５９年特許願第　１８１６２６　号２発明の名称 ナチュラルキラー細胞活性増大用ペプチド３補正をする
者 事件との関係　特許出願人 住所　アメリカ合衆国カリフォルニア　９４３０４．パ
ー口・アルド、ヒルビュー・アベニュー　３４０１番名
称　シンテックス（ニー・ニス・エイ）インコーホレイ
テッド４、代理人 ５補正命令の日付：自　発 ６補正の対象：明細書の特許請求の範囲の欄２、特許請
求の範囲 （１）式 ％式％ （） １式中、ＸはＮ−アシル−（１−６Ｃ）−Ｃ：　Ｉｎ、
またはＮ−アシル−（１−６Ｃ）−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｇｌｎ−１またはピローグルタミン酸残基、Ｙは
ＧｌｙＳＧｌｕＳＧｌｙＮ（Ｒ）２またはＧｌｕＮ（Ｒ
）、（Ｒは水素または炭素原子数１−６のアルキルであ
る）を意味する１ で示される化合物およびその製薬−４−許容される非毒
性塩。

（２）ＸがＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）　−Ｌ−Ｇｌｎ、Ｙ
がＧｌｙの化合物、すなわちＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）Ｌ
−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｔｙｒ−１−
Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙｓ−１−−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｙおよびその製薬上許容される非毒性塩である、特許請
求の範囲第１項記載の化合物。

（３）ＸがＮ−Ａｃ　（１−６Ｃ）　−１−−ＧＩｎ、
１− Ｙが１−、Ｇ１１１７７）化合物、すなわちＮ−Ａｅ−
＜１−６　Ｃ）−Ｌ−Ｇｌｎ−１−−Ａｓｐ−１−−Ｐ
ｒｏ−Ｉ−−Ｔｙｃ−１、−Ｖａｔ−Ｌ−１，ｙｓ−１
−Ｇｌｕ−１−−Ａｌａ　−Ｌ　−Ｇ　ｌ　ｕおよびそ
の製薬−１−許容される非毒性塩である、特許請求の範
囲第１項記載の化合物。

（４）ＸかＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）−１、−Ｃｙｓ−Ｌ
−Ｔｙｒ−１−−Ｃｙｓ−１−−Ｇｌｎ、　ＹがＧｌｙ
の化合物、すなわちＮ−Ａｃ　（１−６０）　Ｌ−Ｃｙ
ｓ　−［−−Ｔｙｒ−１−−Ｃｙｓ−１−−Ｇｌｎ−Ｌ
　Ａｓｐ７Ｌ　−Ｐｒｏ　−Ｌ−Ｔｙｒ−１−−Ｖａｌ
−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｙお
よびその製薬上許容される非毒性塩で・ある、特許請求
の範囲第１項記載の化合物。

（５）ＸがＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）−Ｌ、−Ｃｙｓ　−
■、−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｃｙｓ−１−−Ｇｌｎ、ＹがＧｌｕ
の化合物、すなわちＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）−Ｌ−Ｃｙ
ｓ　−Ｌ−Ｔｙｒ−１−−Ｃｙｓ−Ｌ−Ｇｌｎ−１−−
Ａｓｐ−Ｌ　−Ｐｒｏ−Ｌ＝Ｔｙｒ−１−−Ｖａｌ−１
−Ｌｙｓ　Ｌ　Ｇｌｕ−Ｌ　−Ａ　ｌａ　−１−−Ｇ　
ｌｕお、よびその製薬上許容される非毒性塩である、特
許請求の範囲第１項記載の化合物。

（６）Ｘがビｏ−Ｇｌｕ、　ＹがＧｌｙの化合物、すな
わちピＤ　Ｇｌｕ　Ｌ　Ａｓｐ　Ｉ−−Ｐｒｏ−１、−
Ｔｙｒ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙｓ−１、−Ｇ　ｌｕ　−
１−−Ａ　ｌａ　−Ｇｌｙおよびその製薬」二許容され
る非毒性塩である、特許請求の範囲第１項記載の化合物
。

（７）Ｘがピ０Ｇｌｙ、ＹがＧｌｕの化合物、すなわち
ピｏ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｔｙｒ−
Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｇｌｕ−１−−Ａｌａ　
−Ｌ−Ｇｌｕおよびその製薬上許容される非毒性塩であ
る、特許請求の範囲第１項記載の化合物。

（８）前記特許請求の範囲の１項に記載の化合物の有効
量を製薬上許容される賦形剤中なくとも１種と混合して
なる、医薬組成物。

（９）ナチュラルキラー細胞活性を増大するための活性
物質として用いるものである、特許請求の範囲第１〜７
項の何れか１項に記載の化合物。

（１０）ナチュラルキラー細胞活性を増大するために用
いるものである、特許請求の範囲第８項記載の組成物。

（１１）式 Ｘ−Ａｓｐ−’Ｐｒｏ−Ｔｙｒ　Ｖａｔ　Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｕ　−Ａｌａ−’ｌ’　（Ｉ） １式中、Ｘｔ、ｔＮ−アシル−（１−６Ｃ）−Ｇｉｎ、
またはＮ−アシル−（１−６Ｃ）−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｇ　ｌ　ｎ−１またはピローグルタミン酸残基、
ＹはＧｌｙ、Ｇｌｕ、ＧｌｙＮ（Ｒ）２またはＧｌｕＮ
（Ｒ）２（Ｒは水素または炭素原子数１−６のアルキル
である）を意味する１ で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
の製造法において、 （１）式 ％式％ ［式中、ＸおよびＹは前記の意味１ で示される樹脂固相結合ペプチド中間体と、脱保護剤を
反応させて、式（Ｉ）の化合物またはその製薬上許容さ
れる非毒性塩を得、 （ｉ　ｉ）　適当に保護されたオリゴペプチド類を、０
℃ケいＬ５０℃の温度で反応させて式（Ｔ）のポリペプ
チドを生成させ、 （山）式（Ｉ）のポリペプチドを得るために、ヨーロッ
パ特許出願第００３２１３４号または００４ｆ３９７０
号記載の組換えＤＮＡ技術技術用使用（ｉｖ）　式（Ｉ
）の化合物を製薬上許容される塩に変換し、 （ｖ）　式（Ｉ）の化合物の塩を製薬」二許容される塩
に変換し、 （■ｉ）式（１）の化合物の塩を式（Ｔ）の遊離塩基に
変換すること からなる方法。

（１２、特許請求の範囲第１１項記載の方法と、生成す
る化合物を製薬上許容される組成物に変換する工程から
なる、医薬組成物の製造法。

４− 手続補正書（睦） 昭和５９年１１月２２日 特許庁長官　殿 ２発明の名称 −）−チー１ラルキラー細胞活性増大用ペプチド３補正
をする者 事件との関係　特許出願人 ４代理人 ５− ［別　紙１ ２、特許請求の範囲 （１）式 ％式％ （） １式中、ＸはＮ−アシル［すなわち（１−６Ｃ）７シル
またはベンゾイル１−Ｇｌｎ、またはＮ−アシル［すな
わち（１−６Ｃ）アシルまたはベンゾイル１−Ｃｙｓ　
−Ｔｙｒ　−Ｃｙｓ　−Ｇ　Ｉｎ−１またはピローグル
タミン酸残基、ＹはＧｌｙＳＧｌｕ、ＧｌｙＮ（Ｒ）２
またはＧｌｕＮ（Ｒ）２（Ｒは水素または炭素原子数１
−６のアルキルである）を意味する］ で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
。

（２）ＸがＮ　−Ａ　ｃＤ３十ｔ（１−６Ｃ）ア２悲ま
たはベンゾイル］−Ｌ−Ｇｌｎ、ＹがＧｌｙの化合物、
すなわちＮ　−Ａｃ［すなわも（１−６Ｃ）ヱ乞へまた
はベンゾイル］−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏ
−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｇｌｕ−
Ｌ−Ａｌａ　Ｇｌｙおよびその製薬上許容される非毒性
塩である、特許請求の範囲第１項記載の化合物。

（３）ＸかＮ　−Ａ　ｃＬ朋（１−６Ｃ）ア＞ｔｂまた
はベンゾイル１−Ｌ−Ｇｌｎ、ＹがＩ−−Ｇｌｕの化合
物、すなわちＮ−Ａｃ［すなわち（１−６Ｃ）ア予ソｂ
＊？、、：ｌ土ベンゾイノＬ＝１−１−−Ｇｌｎ−１−
−Ａｓｐ　−Ｌ−Ｐｒｏ−１−−Ｔｙｒ−Ｉ−−Ｖａｔ
−１−−Ｌｙｓ−１−−Ｇｌｕ−Ｌ　Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌ
ｕおよびその製薬上許容される非毒性塩である、特許請
求の範囲第１項記載の化合物。

（４）ＸがＮ−Ａｃけｔｔ上方（１−６Ｃ）ア＞ｔｖま
たはベンゾイルｌ−１−−Ｃｙｓ−１−Ｔｙｒ　Ｌ−Ｃ
ｙｓ−Ｌ−Ｇｌｎ、ＹがＧｌｙの化合物、すなわちＮＡ
ｃＬｔなり（１６Ｃ）了シルまたはベンゾイノｕｌ−Ｌ
−Ｃｙｓ−１−−Ｔｙｒ−１−−Ｃｙｓ−Ｌ−Ｇｌｎ−
Ｌ−Ａｓｐ−１−−Ｐｒｏ−１−−Ｔｙｒ−１−−Ｖａ
ｌ−Ｌ−Ｌｙｓ−１−Ｇｌｕ　Ｉ−−Ａｌａ−１−−Ｇ
ｌｙおよびその製薬−Ｌ許容される非毒性塩である、特
許請求の範囲第１項記載の化合物。

（５）ＸがＮ−Ａｃ［土な、ｂ’ｂ（１−６Ｃ）ヱ之悲
またはベンゾイル］　Ｌ　Ｃｙｓ　Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ　−
Ｃｙｓ　−Ｌ　Ｇ　Ｉｎ、　ＹがＧｌｕの化合物、すな
わもＮ−Ａｃ［すなわち（１−６Ｃ）ヱシルまｔ也さン
ヅイｚｋ］−Ｌ−Ｃｙｓ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｃｙｓ−１
，、−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｓｐ　Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｔｙｒ−
１−−＼７ａｌ−Ｉ−−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ　Ａｌ
ａ　Ｌ−Ｇｌｕおよびその製薬上許容される非毒性塩で
ある、特許請求の範囲第１項記載の化合物。

（６）ＸがピＵ−Ｇｌｕ、　ＹがＧｌｙの化合物、すな
わちビＯＧｌｕ−Ｌ−ＡＳＩ）−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｔｙ
ｒ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ
　−Ｇｌｙおよびその製薬上許容される非毒性塩である
、特許請求の範囲第１項記載の化合物。

（７）Ｘがピｏ−Ｑｌｙ、ＹがＧｌｕの化合物、すなわ
ちビ０−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ　Ｌ　Ｆ’ｒｏ　Ｌ　Ｔｙ
ｒ−Ｌ−Ｖａｌ−１−−Ｌｙｓ　Ｌ　Ｇｌｕ−Ｌ　Ａｌ
ａ−Ｌ−Ｇｌｕおよびその製薬上許容される非毒性塩で
ある、特許請求の範囲第１項記載の化合物。

（８）前記特許請求の範囲の１項に記載の化合物の有効
量を製薬上許容される賦形剤中なくとも２− １種と混合してなる、医薬組成物。

（９）ナチュラルキラー細胞活性を増大するための活性
物質としで用いるものである、特許請求の範囲第１〜７
項の何れか１項に記載の化合物。

（１０）ナチュラルキラー細胞活性を増大するために用
いるものである、特許請求の範囲第８項記載の組成物。

（１１）式 ％式％ （） −Ｃｙｓ−Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｎ−１またはピローグ
ルタミン酸残基、ＹはＧｌｙ、Ｇｌｕ、ＧｌｙＮ（Ｒ）
２またはＧＩｕＮ（Ｒ）ｚ　（Ｒは水素または炭素原子
数１−６のアルキルである）を意味する１ で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
の製造法において、 （ｉ）式 ％式％ ［式中、ＸおよびＹは前記の意味１ で示される樹脂固相結合ペプチド中間体と、脱保護剤を
反応させて、式（１）の化合物またはその製薬上許容さ
れる非毒性塩を得、 （ｉｉ）　適当に保護されたオリゴペプチド類を、０℃
ないし５０℃の温度で反応させて式（Ｉ）のポリペプチ
ドを生成させ、 （ｉｉｉ）式（Ｉ）のポリペプチドを得るために、ヨー
ロッパ特許出願第００３２１３４号または００４８９７
０号記載の組換えＤＮＡ技術を使用し、（ｉい　式（Ｉ
）の化合物を製薬上許容される塩に変換し、 （ｖ）　式（Ｉ）の化合物の塩を製薬上許容される塩に
変換し、 （ｖｉ）　式（Ｉ）の化合物の塩を式（■）の遊離塩基
に変換すること からなる方法。

（１２、特許請求の範囲第１１項記載の方法と、生成す
る化合物を製薬−１−許容される組成物に変換する工程
からなる、医薬組成物の製造法。

＃　−６＝

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）式 ％式％ （） ［式中、ＸはＮ−アシル−（１−６Ｃ）−Ｇｌｎ、また
   はＮ−アシル−（１−６Ｃ）　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ−Ｃｙｓ
   −Ｇｌｎ−１またはピローグルタミン酸残基、ＹはＧｌ
   ｙＳＧｌｕ、ＧｌｙＮ（Ｒ）２またはＧｈ＋Ｎ（Ｒ）２
   （Ｒは水素または炭素原子数１−６のアルキルである）
   を意味する１ で示される化合物およびその製薬上許容される非毒性塩
   。 （２）ＸがＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）−Ｌ−Ｇｌｎ。 ＹがＧｌｙの化合物、すなわちＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）
   −Ｌ−Ｇｌｎ−１−−Ａｓｐ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｔｙｒ
   −Ｌ−Ｖａｔ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｇｌｕ　＝Ｌ−Ａｌａ
   −Ｇｌｙおよびその製薬−Ｌ許容される非毒性塩である
   、特許請求の範囲第１項記載の化合物。　、 （３）　ＸがＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）−Ｌ−Ｇｌｎ、Ｙ
   がＬ−Ｇｌｕの化合物、すなわちＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ
   ）−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｓｐ−１−−Ｐｒｏ−１−−Ｔ
   ｙｒ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙｓ−１−−Ｇｌｕ−ｒ−−
   Ａｌａ　−Ｌ−Ｇｌｕおよびその製薬」二許容される非
   毒性塩である、特許請求の範囲第１項記載の化合物。 （４）ＸがＮ　Ａｃ　（１−６Ｃ）−Ｌ−Ｃｙｓ−Ｌ　
   Ｔｙｒ−Ｌ−Ｃｙｓ　Ｌ　Ｇ１ｎ５ＹがＧｌｙの化合物
   、すなわちＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）−Ｌ−Ｃｙｓ　−Ｌ
   −Ｔｙｒ−Ｌ−Ｃｙｓ−１−−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｓｐ−１
   −−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙｓ−１
   −−ＧｌｕＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｙおよびその製薬上許
   容される非毒性塩である、特許請求の範囲第１項記載の
   化合物。 （５）ＸがＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）　Ｌ−Ｃｙｓ　−Ｌ
   −Ｔｙｒ−Ｌ−Ｃｙｓ−Ｌ−Ｇｌｎ、　ＹｆＪ’Ｇｌｕ
   の化合物、すなわちＮ−Ａｃ−（１−６Ｃ）−Ｌ−Ｃｙ
   ｓ　−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｃｙｓ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ａｓ
   ｐ−Ｌ　−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｔｙｒ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙ
   ｓ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｉ−−Ａｌａ−１−−Ｇｌｕおよびそ
   の製薬上許容される非毒性塩である、特許請求の範囲第
   １項記載の化合物。 （６）Ｘがピｏ−Ｇｌｕ、ＹがＧｌｙの化合物、すなわ
   ちビＣＩ　Ｇｌｕ　Ｉ−Ａｓｐ　ｌ−４−１？ｒｏ　Ｌ
   　Ｔｙｒ−Ｌ−Ｖａｌ−１−−Ｌｙｓ　Ｌ−Ｇｌｕ−Ｉ
   −Ａｌａ　−Ｇｌｙおよびその製薬」二許容される非毒
   性塩である、特許請求の範囲第１項記載の化合物。 （７）Ｘがピｔ７Ｇｌｙ、ＹがＧｌｕの化合物、すなわ
   ちビｏ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｓｐ　Ｌ　Ｐｒｏ−１−−Ｔｙ
   ｒ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｙｓ　Ｌ　Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ
   −Ｌ−ＧＩＬＩおよびその製薬−に許容される非毒性塩
   である、特許請求の範囲第１項記載の化合物。 （８）前記特許請求の範囲の１項に記載の化合物の有効
   量を製薬」二許容される賦形剤中なくとも１種と混合し
   てなる、医薬組成物。 （９）ナチュラルキラー細胞活性を増大するための活性
   物質として用いるものである、特許請求の範囲第１〜７
   項の何れか１項に記載の化合物。 （１０）ナチュラルキラー細胞活性を増大するために用
   いるものである、特許請求の範囲第８項記載の組成物。 （１１）式 ％式％ （） １式中、ＸはＮ−アシル−（１−６Ｃ）　−Ｇｉｎ、ま
   たはＮ−アシル−（１−６Ｃ）−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙ
   ｓ−Ｇｌｎ−１またはピローグルタミン酸残基、ＹはＧ
   ｌｙ、　Ｇｌｕ、　ＧｌｙＮ（Ｒ，）２またはＧｌｕＮ
   （Ｒ）２（Ｒは水素または炭素原子数１−６のアルキル
   である）を意味する１ で示される化合物およびその製薬」二許容される非毒性
   塩の製造法において、 （ｉ）式 ％式％ Ｅ式中、ＸおよびＹは前記の意味１ で示される樹脂固相結合ペプチド中間体と、脱保護剤を
   反応させて、式（Ｉ）の化合物またはその製薬上許容さ
   れる非毒性塩を得、 ３− （ｉｉ）　適当に保護されたオリゴペプチド類を、０℃
   ないし５０℃の温度で反応させて式（Ｔ）のポリペプチ
   ドを生成させ、 （ｉｉｉ）式（Ｉ）のポリペプチドを得るために、ヨー
   ロッパ特許出願第００３２１３４号または００４、８９
   ７０号記載の組換えＤＮＡ技術を使用し、（ｉｖ）　式
   （Ｉ）の化合物を製薬上許容される塩に変換し、 （Ｖ）　弐ｍの化合物の塩を製薬上許容される塩に変換
   し、 （ｖｉ）　式（Ｔ）の化合物の塩を式（Ｉ）の遊離塩基
   に変換すること からなる方法。 （１０）特許請求の範囲第９項記載の方法と、生成する
   化合物を製薬上許容されるｌｌＩ＆物に変換する工程か
   らなる、医薬組成物の製造法。