JPS6078349A - 生ｄｎａに対する抗体の免疫分析の改良方法 - Google Patents
生ｄｎａに対する抗体の免疫分析の改良方法Info
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- JPS6078349A JPS6078349A JP59155092A JP15509284A JPS6078349A JP S6078349 A JPS6078349 A JP S6078349A JP 59155092 A JP59155092 A JP 59155092A JP 15509284 A JP15509284 A JP 15509284A JP S6078349 A JPS6078349 A JP S6078349A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/553—Metal or metal coated
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
木発明は生ＤＮＡに対する抗体の定量的かつ定性的検出
のための改良免疫分析方法に関する。
のための改良免疫分析方法に関する。
技術背景
抗ＤＮＡ抗体は、器官特異性や種特異性のない、ある種
の細胞成分に対する機能障害免疫反応の結果として生じ
る。このような抗体は一般的人口母集団の血清では出現
頻度は低いが、老齢者や種々の全身性リューマチや自己
免疫疾患、例えば全身性ループス（浪癒）の患者などで
は出現率が増加する。
の細胞成分に対する機能障害免疫反応の結果として生じ
る。このような抗体は一般的人口母集団の血清では出現
頻度は低いが、老齢者や種々の全身性リューマチや自己
免疫疾患、例えば全身性ループス（浪癒）の患者などで
は出現率が増加する。
血清試料から抗ＤＮへ抗体を簡単に検出する技法は数多
く印られている。それらは固定化の過程を伴う。−例と
しては、胸腺ＤＮＡのセルロース７４ルター上の固定が
ある。しかしながら、胸腺ＤＮＡは線状のへテロＤＮＡ
であり、小さな一重鎖の領域を含みうる。
く印られている。それらは固定化の過程を伴う。−例と
しては、胸腺ＤＮＡのセルロース７４ルター上の固定が
ある。しかしながら、胸腺ＤＮＡは線状のへテロＤＮＡ
であり、小さな一重鎖の領域を含みうる。
臨床研究所においては、染色技術のうち、間接的免疫螢
光法が望ましい方法であった。しかしながら、その主要
な限界性は染色パターン強度の測定が主観的解釈による
ことである。
光法が望ましい方法であった。しかしながら、その主要
な限界性は染色パターン強度の測定が主観的解釈による
ことである。
さらに問題となるのは、抗胸腺ＤＮＡ螢光抗体分析ニオ
いては血清蛋白質や免疫グロブリンとセルロース基体と
の非特異的結合による高レベルのパックグラウンｐ螢光
が存在することである。このバックグラウンｒレベルは
血清によって変動し試料の量が大きくなる程急速に増加
する。
いては血清蛋白質や免疫グロブリンとセルロース基体と
の非特異的結合による高レベルのパックグラウンｐ螢光
が存在することである。このバックグラウンｒレベルは
血清によって変動し試料の量が大きくなる程急速に増加
する。
従来の分析技術におけるもう一つの難しさは、その特性
がもっばら客観的であるかあるいは主観的であるかとい
う点である。すなわち、染色パターン強度が顕微鏡検査
により主観的に解釈されるか、あるいはその強度が計器
により測定されるかのいずれかであり、螢光顕微鏡では
、螢光の特性とその関連する疾患については何も示され
ない。
がもっばら客観的であるかあるいは主観的であるかとい
う点である。すなわち、染色パターン強度が顕微鏡検査
により主観的に解釈されるか、あるいはその強度が計器
により測定されるかのいずれかであり、螢光顕微鏡では
、螢光の特性とその関連する疾患については何も示され
ない。
ホモの全く二重鎖のみのＤＮＡを用いることによって、
従来の分析技術の欠点が克服されることが見出された。
従来の分析技術の欠点が克服されることが見出された。
以上述べたことから、木発明の目的の１つは、固定化し
た抗原がホモでかつ全く二重鎖のみのＤＮＡである抗Ｄ
ＮＡ抗体分析方法を提供することである。
た抗原がホモでかつ全く二重鎖のみのＤＮＡである抗Ｄ
ＮＡ抗体分析方法を提供することである。
もう１つの目的は、分析試料中の血清タンパク質＋免疫
、ｒロデリンの非特異的結合によるバックグラウンｒ＠
光を最小限に抑制するような抗ＤＮＡ抗体分析方法Ｚ提
供することである。
、ｒロデリンの非特異的結合によるバックグラウンｒ＠
光を最小限に抑制するような抗ＤＮＡ抗体分析方法Ｚ提
供することである。
さらに、もう一つの目的は、迅速な臨床分析に適用しう
るように、また低レベルの抗ＤＮＡ抗体を顕微ｉ検査に
よって検出する機会を与えるよ４な客観的かつ主観、的
に解釈できるような分析方法を提供することである。
るように、また低レベルの抗ＤＮＡ抗体を顕微ｉ検査に
よって検出する機会を与えるよ４な客観的かつ主観、的
に解釈できるような分析方法を提供することである。
発明の開示
木発明はり下の事項から成る抗ＤＮＡ抗体の螢光免疫分
析方法でトる；十分に純すいなオツドワークＤＮＡを固
体基体に適用することによる抗原試薬の形成；その抗原
試薬を生ＤＮＡに対する抗体を生じさせると思われる宿
主由来の血清溶液中での複合化：抗体を識別し結合しう
る標識レセプター溶液中での上記複合化抗原試薬のイン
キュベーション；抗原抗体複合物に結合した標識レセプ
ター存在の分析。
析方法でトる；十分に純すいなオツドワークＤＮＡを固
体基体に適用することによる抗原試薬の形成；その抗原
試薬を生ＤＮＡに対する抗体を生じさせると思われる宿
主由来の血清溶液中での複合化：抗体を識別し結合しう
る標識レセプター溶液中での上記複合化抗原試薬のイン
キュベーション；抗原抗体複合物に結合した標識レセプ
ター存在の分析。
木発明は、生ＤＮＡＶＣ対する杭体を検出するために用
いる基本的分析法を犬きく前進させるものである。提供
されるネットワークＤＮＡ免疫分析は従来の分析法の望
ましくない性質を除去する。
いる基本的分析法を犬きく前進させるものである。提供
されるネットワークＤＮＡ免疫分析は従来の分析法の望
ましくない性質を除去する。
抗原試薬において抗原として用いられるネットワークＤ
ＮＡは、Ｃｒ１ｔｈｉｄｉａ １ｕｃｉｌｉａ又はＣｒ
１ｔｈｌｉａｆａｓｉｃｕｌａｔａから得られるキネド
プラスト由来のものである。このネットワークＤＮＡは
それぞれ約１×１０６〃ゞルトンの無数の二重鎖ＤＮＡ
環から１ぶる。ネットワークＤＮＡには約ｉｏ、ｏｏｏ
のＤＮＡ環があり、環状ＤＮ八はほとんど明確な二重鎖
であり、小さな一重俸領域の出現は最小になっている。
ＮＡは、Ｃｒ１ｔｈｉｄｉａ １ｕｃｉｌｉａ又はＣｒ
１ｔｈｌｉａｆａｓｉｃｕｌａｔａから得られるキネド
プラスト由来のものである。このネットワークＤＮＡは
それぞれ約１×１０６〃ゞルトンの無数の二重鎖ＤＮＡ
環から１ぶる。ネットワークＤＮＡには約ｉｏ、ｏｏｏ
のＤＮＡ環があり、環状ＤＮ八はほとんど明確な二重鎖
であり、小さな一重俸領域の出現は最小になっている。
精製したＣｒ１ｔｈｉｄｉａのネットワークＤＮＡをア
ルミニウム処理マイラーの表面に固定し、螢光分析の基
体として用いる。アルミニウム処理マイラーハＦＩＡＸ
”螢光光度計（よりＴ、サンタ クララカリフォルニア
）に挿入するのに適した５ｔＩＱ′Ｉ′（ナンデラー面
に接着することができる。
ルミニウム処理マイラーの表面に固定し、螢光分析の基
体として用いる。アルミニウム処理マイラーハＦＩＡＸ
”螢光光度計（よりＴ、サンタ クララカリフォルニア
）に挿入するのに適した５ｔＩＱ′Ｉ′（ナンデラー面
に接着することができる。
ネットワークＤＮＡの実験的調製
精製したネットワークＤＮＡはプレイン争ハート浸出液
培地（ＢＨＩ ＤＩＦＣＯ’）でＣｒ１ｔｈｉｄｉａ
Ｌｕｃｉｌｉａ（アメリカンタイプカルチャーコレクシ
ョン、ロソクヴイル、メリーランド）を成育させること
によりｑａられる。、１石のＢＨＩに微生物１０６個／
ｍＩ！を接種し、２２°Ｃ１暗中で約２４時間振盪させ
る。
培地（ＢＨＩ ＤＩＦＣＯ’）でＣｒ１ｔｈｉｄｉａ
Ｌｕｃｉｌｉａ（アメリカンタイプカルチャーコレクシ
ョン、ロソクヴイル、メリーランド）を成育させること
によりｑａられる。、１石のＢＨＩに微生物１０６個／
ｍＩ！を接種し、２２°Ｃ１暗中で約２４時間振盪させ
る。
微生物の数はこの間に約５０ないし１００倍に増加し、
最終濃度はＣｒ１ｔ、ｈｉｄｉａ、 ７ Ｘ １０フな
いし８×１０１１固／ ｍｌになる。これはＣｒ１ｔｈ
ｉｄｉａ生育サイクルの対数増殖後期にＣｒ１ｔｈｉｄ
ｉａ Ｙ採取することを可能にする。
最終濃度はＣｒ１ｔ、ｈｉｄｉａ、 ７ Ｘ １０フな
いし８×１０１１固／ ｍｌになる。これはＣｒ１ｔｈ
ｉｄｉａ生育サイクルの対数増殖後期にＣｒ１ｔｈｉｄ
ｉａ Ｙ採取することを可能にする。
Ｃｒ１ｔｈｉｄｉａを遠心分離にかけて集め、ナ） １
１ウムーＥＤＴＡ緩衝液で２度洗浄し、直ちにネットワ
ークＤＮＡ欠抽出するのに用いるか、あるいは−７００
０で冷凍保存し後で抽出する。
１ウムーＥＤＴＡ緩衝液で２度洗浄し、直ちにネットワ
ークＤＮＡ欠抽出するのに用いるか、あるいは−７００
０で冷凍保存し後で抽出する。
ネットワークＤＮＡ抽出には、Ｃｒ１ｔｈｉｄｉａ細胞
ペレツトをナトリウム−ＥＤＴＡ緩衝ｉ（０，１５Ｍ４
化ナトリウム、０．２Ｍエチレンジアミン四酢酸（ＥＤ
ＴＡ））（ＳＥ緩衝液）中で洗浄し、再度ＳＲ緩衝液に
懸濁させる。このときヌクレアーゼ活性を抑制するため
Ｋ 、最大濃度１．２ Ｘ １０’細胞数／ゴにする。
ペレツトをナトリウム−ＥＤＴＡ緩衝ｉ（０，１５Ｍ４
化ナトリウム、０．２Ｍエチレンジアミン四酢酸（ＥＤ
ＴＡ））（ＳＥ緩衝液）中で洗浄し、再度ＳＲ緩衝液に
懸濁させる。このときヌクレアーゼ活性を抑制するため
Ｋ 、最大濃度１．２ Ｘ １０’細胞数／ゴにする。
細胞懸濁液を１８ｒ−ジの短い針を通過させ、細胞凝集
塊を分離する。そして、３７°Ｏにおいて６０分間あら
かじめ消化しておいたプロナーゼ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅ
ｍ ）をこの細胞懸濁液に最終濃度０．５１／ｍｌ！ま
で加える゛。
塊を分離する。そして、３７°Ｏにおいて６０分間あら
かじめ消化しておいたプロナーゼ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅ
ｍ ）をこの細胞懸濁液に最終濃度０．５１／ｍｌ！ま
で加える゛。
３０％ナルコシネート保存液（Ｎ−ラウリルナル′コシ
ンナトリウムｔｌｉ、ＳＩＧＭ八ケミへルカンパニー）
を細胞懸濁液に最終濃度３％まで加える。次いで、微生
物のすべての蛋白質および脂質成分を消化させるために
、その懸゛濁液を６０℃において時々攪拌しながら１１
０分間インキュベートする。それからほぼ同容量のＳＥ
緩衝液で細胞溶解物を希釈し、線状の核ＤＮＡを切るた
めに１８）ｆ−ジの短い針ン４回通過させる。ネットワ
ークは微小でありまた小さな環の強度もあってこの切断
に敏感ではない。
ンナトリウムｔｌｉ、ＳＩＧＭ八ケミへルカンパニー）
を細胞懸濁液に最終濃度３％まで加える。次いで、微生
物のすべての蛋白質および脂質成分を消化させるために
、その懸゛濁液を６０℃において時々攪拌しながら１１
０分間インキュベートする。それからほぼ同容量のＳＥ
緩衝液で細胞溶解物を希釈し、線状の核ＤＮＡを切るた
めに１８）ｆ−ジの短い針ン４回通過させる。ネットワ
ークは微小でありまた小さな環の強度もあってこの切断
に敏感ではない。
次いで、ネットワークＩ）ＮＡを５ＰＩＮＣＯＳ １９
０−ターで１８０００ Ｒ，ＰＭで６０分間処理して上
澄液からペレットにし、そしてそのペレットをＳＦ緩衝
液ｉ８ｍＡ’中にうす状に攪拌して再懸濁させる。
０−ターで１８０００ Ｒ，ＰＭで６０分間処理して上
澄液からペレットにし、そしてそのペレットをＳＦ緩衝
液ｉ８ｍＡ’中にうす状に攪拌して再懸濁させる。
凝集塊を短時間磨砕することにより除去する。
ネットワーク溶液を３０００ ＲＰＭで１０分間遠心分
離し、ベンツ）Ｙ捨てる。そして１８ｒｒＬｌのトリス
−ＥＤＴＡ緩衝液（０，０１Ｍ壊基性ＴＲｌ５ ＰＨ７
，９，０，０［：ｌ １ Ｍ ｇＤＴＡ ） （ＴＥ緩
衝液）を加え、この溶液欠５Ｗ２８０−ター（ｗ２ｔ＝
１．１２ Ｘ １０１０）中で２７．００ ＯＲＰＭ
で２５分間遠心分離する。
離し、ベンツ）Ｙ捨てる。そして１８ｒｒＬｌのトリス
−ＥＤＴＡ緩衝液（０，０１Ｍ壊基性ＴＲｌ５ ＰＨ７
，９，０，０［：ｌ １ Ｍ ｇＤＴＡ ） （ＴＥ緩
衝液）を加え、この溶液欠５Ｗ２８０−ター（ｗ２ｔ＝
１．１２ Ｘ １０１０）中で２７．００ ＯＲＰＭ
で２５分間遠心分離する。
次いで、ペレットをＴＥ緩衝液３ ｍｌに再懸濁し、ぺ
Ｖットが溶液になるまでうす状に攪拌する。
Ｖットが溶液になるまでうす状に攪拌する。
細胞溶解物溶液を脱タンパクするために、２４：１ （
容ｔ／ｇ量）のクロロホルム：インアミルアルコール（
フィッシャー ケミカルズ）溶液ｔつくる。６ｄのクロ
ロホルム：イソアミルアルコール溶液乞細胞溶解物に加
え、試験管に栓をして約１５〜２０秒間静かにひつくり
返したり揺すったりして混合する。この試験管を６００
ＯＲＰＭで１０分間遠心分離して、相分離を促進する
。ネットワークＤＮＡを含む上方の水性層な円錐型遠心
分離用ガラス管に移し、クロロホルム：イソアミルアル
コール溶液をＴＥ緩衝液３−を加えて再抽出し、前述の
ように混合する。この混合物を３００ＯＲＰＭ で１０
分間遠心分離し、相の分離を促進する。次いで、上方の
水性層を先に得た水性層に加え、そのネットワーク抽出
液を振動バケツ型ローター中で３００ ＯＲＰＭで１０
分間遠心分離し、ペレットを捨てる。
容ｔ／ｇ量）のクロロホルム：インアミルアルコール（
フィッシャー ケミカルズ）溶液ｔつくる。６ｄのクロ
ロホルム：イソアミルアルコール溶液乞細胞溶解物に加
え、試験管に栓をして約１５〜２０秒間静かにひつくり
返したり揺すったりして混合する。この試験管を６００
ＯＲＰＭで１０分間遠心分離して、相分離を促進する
。ネットワークＤＮＡを含む上方の水性層な円錐型遠心
分離用ガラス管に移し、クロロホルム：イソアミルアル
コール溶液をＴＥ緩衝液３−を加えて再抽出し、前述の
ように混合する。この混合物を３００ＯＲＰＭ で１０
分間遠心分離し、相の分離を促進する。次いで、上方の
水性層を先に得た水性層に加え、そのネットワーク抽出
液を振動バケツ型ローター中で３００ ＯＲＰＭで１０
分間遠心分離し、ペレットを捨てる。
清浄な試験管にネットワーク抽出液’＆２ｄずつ分注し
、あらかじめ−２０°ＯＫ冷却したエタノール１０ｍ１
乞加える。最後に２ Ｍ ＮａＣＪを加え、最終濃度０
．０４ Ｍ ＮａｔＪ Ｋ Ｌ、、必要時まで一２０’
ＣＫｋいて試験管乞貯蔵する。
、あらかじめ−２０°ＯＫ冷却したエタノール１０ｍ１
乞加える。最後に２ Ｍ ＮａＣＪを加え、最終濃度０
．０４ Ｍ ＮａｔＪ Ｋ Ｌ、、必要時まで一２０’
ＣＫｋいて試験管乞貯蔵する。
ネットワークはこのようにして一２０’Ｏにおいて無期
限に貯蔵し、かつプールし、所望のロットナイズをつく
ることができる。核ＤＮＡの不純物混合率は１％未満で
ある。
限に貯蔵し、かつプールし、所望のロットナイズをつく
ることができる。核ＤＮＡの不純物混合率は１％未満で
ある。
ネットワークＤＮＡ ｙアルミニウム処理マイラー表面
にスポットするため、エタノールから遠心分離してネッ
トワークＤＮＡをペレットにＬ、０．０１％から０，１
％の、望ましくは０．［］ １％の結晶ヒト血清アルブ
ミンおよび水の溶液に再懸濁する。溶液中のネットワー
クＤＮＡ濃度はこの溶液０．Ｉ Ｎおよび５０μｐの０
Ｄ２６０に調節するか、もしくはネットワークＤＮＡ約
２５０ナノグラムｔ７ｃれぞれ６．５ ｍｍの表面にス
ポットする。スポットしたアルミニウム処理１イラーは
一般［２〜３７℃の湛・ 度下で完全′に乾燥させる。
にスポットするため、エタノールから遠心分離してネッ
トワークＤＮＡをペレットにＬ、０．０１％から０，１
％の、望ましくは０．［］ １％の結晶ヒト血清アルブ
ミンおよび水の溶液に再懸濁する。溶液中のネットワー
クＤＮＡ濃度はこの溶液０．Ｉ Ｎおよび５０μｐの０
Ｄ２６０に調節するか、もしくはネットワークＤＮＡ約
２５０ナノグラムｔ７ｃれぞれ６．５ ｍｍの表面にス
ポットする。スポットしたアルミニウム処理１イラーは
一般［２〜３７℃の湛・ 度下で完全′に乾燥させる。
別の方法としては、ネットワークＤＮＡは、セルロース
硝酸塩フィルター表面（５ＡＲＴｏｎ工Ｕｓ又はＭＩＬ
ＬＩＰＯＲＢ ）のような、他の固体基体如適用しても
よい。
硝酸塩フィルター表面（５ＡＲＴｏｎ工Ｕｓ又はＭＩＬ
ＬＩＰＯＲＢ ）のような、他の固体基体如適用しても
よい。
ネットワークＤＮＡを表面につける方法は、何枚ものア
ルミニウム処理マイラーシートに固定したネットワーク
の製造のように、その適用とと忙変りうるものである。
ルミニウム処理マイラーシートに固定したネットワーク
の製造のように、その適用とと忙変りうるものである。
ネットワーク溶液は大きなアルミニウム処理マイラーシ
ートに適用できる。ネットワークＤＮＡＹ溶液からアル
ミニウム処理表面に田定し、次いで、溶液を除去し、メ
タノールで會キかエル（フィッシャーケミカルズ）。こ
れはネットワークを決まった湯所に固定する。次いで、
これらのシートを乾燥し、ＦＩＡＸ■５ｔｉＯ，ｓ”上
に接着し、パンチする。
ートに適用できる。ネットワークＤＮＡＹ溶液からアル
ミニウム処理表面に田定し、次いで、溶液を除去し、メ
タノールで會キかエル（フィッシャーケミカルズ）。こ
れはネットワークを決まった湯所に固定する。次いで、
これらのシートを乾燥し、ＦＩＡＸ■５ｔｉＯ，ｓ”上
に接着し、パンチする。
ヤギ抗ヒト抗体の調製
この分析の例示ηセデターとして、フルオレセインで標
識したヤギ抗ヒト抗体を商品として人手できる。（Ａｔ
１ａｎｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ 、スカーフ々う
、メーン州）。
識したヤギ抗ヒト抗体を商品として人手できる。（Ａｔ
１ａｎｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ 、スカーフ々う
、メーン州）。
分析操作
抗原試薬を１：１０から１−５０の宿主血清緩衝液（リ
ン酸緩衝塩類溶液、ｐＨ７，６，０，１２５％ウシ血清
アルブミンおよびり、１％アジ化ナトリウム含有）希釈
液中にインキュベートする。ろ０分インキュベーション
後、抗原試薬を緩衝液中で５分間洗浄し、次いで、前述
のヤギ抗ヒトレセプター含有レセプター溶液に移す。レ
セプターは既知の技法により螢光マーカーで標識してお
く。
ン酸緩衝塩類溶液、ｐＨ７，６，０，１２５％ウシ血清
アルブミンおよびり、１％アジ化ナトリウム含有）希釈
液中にインキュベートする。ろ０分インキュベーション
後、抗原試薬を緩衝液中で５分間洗浄し、次いで、前述
のヤギ抗ヒトレセプター含有レセプター溶液に移す。レ
セプターは既知の技法により螢光マーカーで標識してお
く。
次いで、抗原試薬を緩衝液中で洗浄し、螢光レベルは螢
光光度計での値を読みとることにより定量測定すること
かできる。たとえば、？ＩＡＸ■螢光光度計（ＩＤＴ、
サンタクララ、カリフォルニア州）が螢光定量記録に用
いることができる。
光光度計での値を読みとることにより定量測定すること
かできる。たとえば、？ＩＡＸ■螢光光度計（ＩＤＴ、
サンタクララ、カリフォルニア州）が螢光定量記録に用
いることができる。
もし、螢光の読みが陽性試料もしくは不確かな試料を示
すならば、抗原試薬の表面を螢光顕微鏡で検鏡し、螢光
がネットワークに関連したものであるか、あるいは特定
の血清によって引き起された非特異的染色によるもので
あるかどうかＺ判定することができる。
すならば、抗原試薬の表面を螢光顕微鏡で検鏡し、螢光
がネットワークに関連したものであるか、あるいは特定
の血清によって引き起された非特異的染色によるもので
あるかどうかＺ判定することができる。
代理人浅村 皓
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）生ＤＮＡに対する抗核抗体螢光免疫分析方法にお
いて、 ａ、十分に純粋なネットワークＤＮＡ （ｎｅｔｗｏｒ
ｋＤＮＡ ） Ｙ固体基体に適用させることにより抗原
試薬を形成させ、 ｂ、生ＤＮＡを識別しそれと結合しうる抗体な生産する
と思われる宿主から得た血清溶液中で上記抗原試薬乞複
合化し、 Ｃ０上記抗体を識別しそれと結合しうる標識レセゾター
溶液中で上記複合化した抗原試薬をインキュベートし、 ｄ、抗原抗体複合物と結合した標識レセプターの存在を
分析することからなる方法。 ＋２１ １ｊＪ光マーカーによってレセプターを標識す
ることから成る特許請求の範囲第（１）項記載の方法。 （３） 螢光マーカーとしてフルオレセインを用いるこ
とから成る特許請求の範囲第（２）項記載の方法。 （４） レセプターとして宿主から導かれる抗体を識別
し結合しうる抗体を用いることから成る特許請求の範囲
第（１）項記載の方法。 （５）抗体としてヤヤ抗ヒトがンマーグロブリンを用い
ることから成る特許請求の範囲第（４）項記載の方法。 （６） 複合化した抗原試薬を標識レセプター中でイン
キュベートする前に、洗浄することから成る特許請求の
範囲第（１）項記載の方法。 （７） 標識レセプター存在乞分析する前に、複合化し
た抗原試薬を中性緩衝液中で洗浄することから成る特許
請求の範囲第（６）項記載の方法。 （８）固体基体としてアルミニウム処理マイラー７用い
ることから成る特許請求の範囲第（１）項記載の方法。 （９）固体基体に結合させた十分に純粋なネットワーク
ＤＮＡ ０
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US51658383A | 1983-07-25 | 1983-07-25 | |
| US516583 | 1983-07-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6078349A true JPS6078349A (ja) | 1985-05-04 |
Family
ID=24056220
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59155092A Pending JPS6078349A (ja) | 1983-07-25 | 1984-07-25 | 生ｄｎａに対する抗体の免疫分析の改良方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0135051B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6078349A (ja) |
| AT (1) | ATE40475T1 (ja) |
| DE (1) | DE3476458D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0192660A (ja) * | 1987-01-30 | 1989-04-11 | Nippon Dpc Corp | 生物学的液体中の抗ｄｎａ抗体価の測定法および測定用キット |
| JPH03167473A (ja) * | 1989-11-08 | 1991-07-19 | Nippon Dpc Corp | 抗ｄｎａ抗体結合活性測定法および測定用キット |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE61670T1 (de) * | 1985-06-25 | 1991-03-15 | Progen Biotechnik Gmbh | Immuntest zum nachweis von antikoerpern gegen dns. |
| AU649725B2 (en) * | 1990-10-22 | 1994-06-02 | Sumitomo Electric Industries, Ltd. | Assay of substances using flow cytometry |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4234563A (en) * | 1978-06-02 | 1980-11-18 | American Hospital Supply Corporation | Insolubilized deoxyribonucleic acid (DNA) |
| US4251514A (en) * | 1979-11-05 | 1981-02-17 | American Hospital Supply Corporation | Insolubilized deoxyribonucleic acid (DNA) |
-
1984
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- 1984-07-21 AT AT84108635T patent/ATE40475T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-07-21 EP EP84108635A patent/EP0135051B1/de not_active Expired
- 1984-07-25 JP JP59155092A patent/JPS6078349A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0192660A (ja) * | 1987-01-30 | 1989-04-11 | Nippon Dpc Corp | 生物学的液体中の抗ｄｎａ抗体価の測定法および測定用キット |
| JPH0562301B2 (ja) * | 1987-01-30 | 1993-09-08 | Nitsuhon Deii Pii Shii Corp | |
| JPH03167473A (ja) * | 1989-11-08 | 1991-07-19 | Nippon Dpc Corp | 抗ｄｎａ抗体結合活性測定法および測定用キット |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0135051B1 (de) | 1989-01-25 |
| EP0135051A1 (de) | 1985-03-27 |
| ATE40475T1 (de) | 1989-02-15 |
| DE3476458D1 (en) | 1989-03-02 |
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