JPS60500029A - 免疫グロブリンａ結合性抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫グロブリンＡ結合性抗体 本発明は、連鎖球菌グルーｆＢから単離可能な、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）　 に結合する抗体及びこれを単離する方法、更にナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ 　）　属細菌の感染が起っているか百刀・を知るために、哺乳動物の体液を検査 することを含む種々の目的に該従体を使用することに関する。

ＩｇＡは、既に知られている様に、免疫グロブリンの１つ一’ｃ６す、粘膜表面 でバクテリア及びビールスの感染に対して免疫性を示すことに関係のある］種の 抗体である。

そしてそれは、すべての哺乳動物の分泌物、例えば体乳液、背髄液及び月経液（ ｖａｇｉｎａｌ　ｗａｓｈｉｎｇｓ　）中に存在する。

すべての人間の抗体と同様に、ＩｇＡは重鎖と軽鎖成分から成っており、結晶性 分画（Ｆｃ）と抗体分画（Ｆａｂ　）で特徴づけられる。ＩｇＡ　（免疫グロブ リンＡ）には２つの小分類ＩｇＡ、及び１ｇＡ２がある。これらば゛重鎖の構造 で異っている。更に、抗体（は血清中てはモノマー態（分子量約１６ｏ、ｏｏｏ ）及びダイマー態で存在するが、哺乳動物の分泌物中ではダイマー態のみが存在 する。そしてこれは分ｌ、片といわれるもうひとつの分子分画（ｍｏｉｅｔｙ） に灯着している。ＩｇＡｆｆｉ体（グ、ずへての抗体と同様に、免疫組織の中の リン・ぐ球によって産生される。分ｌ、片は、例えば、乳房腺、消化管線、唾液 腺又は付属器官のような体内器官の表面を被う上皮細胞によって産生される。

リンパ球によって産生されたＩｇＡは、循纏血液と接触している側で、上皮細胞 により係留され（ｉｓ　ｐｊｃｋｅｄ　ｕｐ　）、分泌片が追補され分泌性Ｉｇ Ａは上皮細胞の外表面で分泌される。

細菌性及びビールス性感染に抵抗する過程で、ＩｇＡは既知のルートで抗原の不 活性化（ｎｅｕｔｒａｌ　１ｚａｔｉｏｎ　）の動きをする。感染によって生起 する抗原とＩｇＡとの間の相互作用を積出することに依る臨床的試験が感染の有 無を知るために考案され広く利用されている。

連鎖球菌グループＢは、既に詳細に研究され分類されている微生物であるが、此 の分類に属する菌種（ｍｅｍｂ　ｅ　ｒ　）でＩｇＡに結合することが知られて いるものは無い。しかしこれら連鎖球菌の成る種のもの、一般的に云って、血清 型１ｂ又は１ｃのものがＩｇＡに結合する能力のあることが発見された。更に、 ■ｇＡ結合性蛋白（ＩｇＡＢＰ　）　を、結合が生起する連鎖球菌グループＢの 表面から分離する手段も発見された。

そのだめの１つの方法は、連鎖球菌を稀薄な鉱酸水溶液中で５０℃乃至６０℃で 、１５乃至２５時間加熱することである。好適な酸は、例えば０．１５乃至０２ ５Ｍの稀塩酸であるが、他の稀鉱酸も採用し得る。好適な方法は０．２　Ｍ塩酸 で２時間、５６℃の条件で加熱することである。溶液は例えば０．２　Ｍ可曲ソ ーダのような稀アルカリ試薬で中和する。所望の物質（ｐｒｏｄｕｃｔ　）はト リクロル酢識又は他の試薬を加えて沈澱さぜそれがら積装することが出来る。

他の代替方法は連鎖球菌を、非イオン活性剤の稀薄溶液中に３６乃至７２時間、 好適には４０乃至５０時間、浸す。蛋白ｔまエタノールのような選択しｔ試鵡に よって沈澱する。

不発明に係るＩｇＡＥＰを単離する好適な方法は、陰イオン活性剤中で煮沸する ことである。

本発明に好適な非イオン活性剤としては、例えば［・リドン８−１００及びトウ イン２０がある。両者は共に既知であシ、商業的に入手可能。前者はポリエチレ ングリコールｐ−インオクチルフェニルエーテルであり、後者はポリオキシエチ レンノルビクンモノオＬニー１・である。

此処で選択した陰イオン活性剤は商業入手可能なドデンル硫酸ソーダ塩（ＳＤＳ ）である。又他のものも既知であり、使用可能である。

本発明に係るＩｇＡＢＰを陰イオン活性剤を用いて分離するに好適な方法は次の 通りである。

連鎖球菌グループＢの菌株Ｈ３６Ｂ５の］、　Ｏｍｌをトソドーヒウィソ）　（ Ｔｏｄｄ　−Ｈｅｗｉ　ｔｔ　）培養器で対数期後期迄培養する。細菌は遠心分 離によって被レノ［・化し、次いで２％５ＤＳ７１（溶液の］ｍｌ、中で］０分 間煮沸した。

細菌は遠心分離で除云し、上澄徹〒の蛋白は０．５　ｍの３０％トリクロル酢酸 を亦えて沈澱した。遠心分離て荀たベレットはエタノールで１回、アセトノて］ 回洗浄した。

残留したにレットは２５ｍ１の標準５ＤＳ−ＰＡＧＥ煮４　’、４中に懸濁させ て、１０％デリアクリルアミドスラブケ゛ル中で電気泳動に付した。コーマシ　 ブリリアントブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ　ｂｒｉｌｌｉａｎｔ　ｂｌｕｅ　） で染色してから、５ＤＳ−ＰＡＧＥパターン、これは分子量１３２０００の蛋白 に相幽するＳ’Ｄ　Ｓ　−Ｐ　Ａ　Ｇ　Ｅ移動度を示す単一バンドから主として 成っているが、これを脱色する。分子量１３２，０００−４０，０００の分子量 範囲の他の副次的バンドも多数現われた。

ＩｇＡ結合性蛋白を得るだめの第２の方法は、５ＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動を行っ て後に、ニトロセルローズ　ストリップの上にウェスタン　プロット（Ｗｅｓｔ ｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を行う方法である。そして此のストリップを０．０ ５％トウイン２０液に３０分間浸漬してから　＋２６１で標識したＩｇＡの１． ＸＸ１０７ｃｐを４ｍＬ；／／−の濃度で４時間ストリップに付着させた。次い でス）　ｌ）ツブは０．０５％トウイン２０液で十分に洗浄し、写真フィルムに 当てて感光させる方法である。このテクニックによって、示された事は、５ＤＳ −ＰＡＧＥで観察された主要な蛋白及び他の副次蛋白が＋　２５　工ｆ　ｇＡに 結合する能力をもっていること及びそれ故写真フィルムに感光したことであった 。

ＴｇＡＢＰの分子量の評価で中いた分子量マーカーは次の通り：βガラクトシダ ーゼ（１３６Ｋ）、ヒトトランスフェリン（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ）　（８０ Ｋ　）、オパルブミン（４５Ｋ）、チトクロームＣ（１２，５Ｋ　）。

５ＤＳ−ＰＡＧＥは１、ドデシル鎖酸ソーダ及びボリア白目物質の′分離方法で 、周知であり広く用いられ゛ている。

運鎖涼菌グループＢから不発明のＩｇＡＲＰを分離する手順は、例えば稀酸又は 活性剤の、様な細胞衰面への蛋白の付着を破壊する物質を含有する水溶注媒体中 で、生成物の抽出を行うことを常に含んでいる。抽出は培養が対数期にある時に 実施することが好ましい。目的物（ｄｅｒｉｖｅｄｍａｔｅｒｉａｌ　）は、エ タノールの様な蛋白沈澱試薬によって抽出物から沈澱分離する。目的物が連鎖球 菌基質から分離されたら、本明細書に記載の様にして単離し、精製出来る。そう でなければ、生成物の溶液を比較的稀薄或いシま不純な状態で利用してもよい。

これ迄、本発明の有用生成物を単離するだめの３つの方法を記述した。最後の方 法において、本発明の生成物ハＳ　Ｄ　Ｓ　Ｐ　Ａ　Ｇ　Ｅ電気泳動において分 子量１．３２０００であることが示された。これは本発明のＩｇＡＢＰ生成物の 特性である。即ち５ＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動に付された時の見掛け（ａｐｐａｒ ｅｎｔ　）分子量は１３２，０００である。

もし上記の生成物をトリクロル酢酸又はエタノールで沈澱させたまＸで２％ＳＤ Ｓ液中て煮沸し、更に好二産とした手順で処理すると、５Ｄｓ−ｐＡｃＥｔ気泳 動では、他の主要バンド及び副次バンドが現われる。これらのバンドの出現は分 子量の相違を示すものである。しかし、それらはＩｇＡに結合する能力を持って いる。

従って、本発明の生成物、即ちＩｇＡ結合注蛋白は、蛋白と結合する固定部分及 び違った長さを持ち、結合部分に閘連している変動部分によって特性づけられる 。これは一連Ｏ矢（ａｒｒｏｗ）があって、その長さはすべて異るが、同じ目的 に役立つ。それは長さの異るシャフトはすべて１つの先頭をもっている故である ことに唸えられる。

ＩｇＡに結合した蛋白というものは今まで報告されていない。更に連鎖球菌グル ーｆＢからの単離についても報告されていない。

本発明の新規なＩｇＡＢＰの特性は次の２つの異った同相／ステムに活用するこ とが出来る。そのひとつは、結合タンパクを、カラムクロマトグラフィの様な同 相支持物に吸着させること。第２の主な用途は、ＩｇＡＢＰをプラスチックプレ ート、特定して云えば、試験用ウェル（ｗｅｌｌ）の様な吸着面に結合させて、 酵素吸着検定（ｅｎｚｙｍｅ　ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓＯｒｂｅｎｔ　ａｓ ｓａｙ、　ＥＬ　Ｉ　ＳＡ　）として知られている試験に使用し得ることである 。

第１のタイプの固定相の利用は： ］、、ＩｇＡ結合結合口蛋白相吸着させることは、血清等信のすべてのヒト体液 からＩｇＡを除くことに利用出来る。

溶離液にはＩｇＡは含まれていない。従って分泌畝、血清等からＩｇＡ属の抗体 を選択的に除去することを目的とする場合、有効である。又一方、■ｇＡ免疫グ ロブリンは何か目的があれば高純度で固相支付物から回収することが出来る。

２、ＩｇＡ結合性蛋白が固相吸着剤として役立りことは、ＩｇＡ抗体に対する抗 原の特異反応性（５ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　）を決めることに使用し得る。即ち 放射ぎ元素で標識を付した至原混合物をＩｇＡ苺体を金回する血清又は分泌物１ て加える。抗原−抗体反応を生起さゼてから、固体支持物を加え、選択的にＩｇ Ａ抗体及びＩｇＡと％異的に結合する抗原のみを結合させる。固体支持物を十分 洗浄し、結合した抗原の量を放射線測定で検知する。結合抗原の本質（ｎａｔｕ ｒｅ　）はケ゛ル電気泳動分析及び自動放射写真法（ａｗｔｏｒａｄｉｏｇｒａ ｐｈｙ　）又は螢光写真法（ｆ　Ｉｕｏｒｏｇｒａｐｈｙ　）によって試験でき る。

第２の固定相（プラスチックプレート）の利用としては： １、ＩｇＡ結合性蛋白は血清又は分泌物中のＩｇＡの濃度の決定に利用出来る。

ひとつの方法はポリスチレン又は他のプラスチックプレートを用いて、その表面 にＩｇＡ結合性蛋白を吸着させることである。適当に洗浄してから、プレートを 試験する体液の種々な稀薄液に浸し、適宜な保温（１ｎｃｕｂａｔｉｏｎ　）の 後に、洗浄する。ＩｇＡの結合はアルカリフォスファターゼ酵素に結合していた （　ｃｏｎｊｎｇａｔｅ　）軽鎖に特異性のある抗体の存在によって検知される 。此の薄紫の存在、従って軽鎖：ま、パラニトロフェニルフォスフェートから・ 七うニトロフェノール発色−が遊心することで検知される。

２．　ＩｇＡ結合蛋白は淋病（ｇＯｎｏｒｒｈｅａ　）の感染を検出するシステ ムとして使用出来る。原理は、病、漿淋菌が、サブクラスＩｇＡ、　を包含する ヒトＩｇＡを、ヒンノ領域として知られている領域で、分子■中央から分裂させ る能力つある酵素を同化することである。従って、３つの分画片が出来ることに なる。即ち分子のＦｃ部分と２つ同一の倉ａｂ分画片である。後者が以前の（１ ｎｔａｃｔ　）　ＩｇＡ１分子の軽鎖を保有している。試験はＩｇＡ結合性蛋白 でプラスチックプレートをコートする。洗浄後フ０レートをヒトＩｇＡ、免疫グ ロブリンに接触させる。洗浄後、分泌物又は月経液をプレートウェルに加え、保 温する。洗浄後、プレートをアルカリフォスファターゼに結合した反軽鎖抗体に 接触させ、そしてフォスファターゼ基質であるｐ−ニトロフェニルフォスフェー トで発色させる。もし分泌物が活性なＩｇＡ蛋自分解酵素を含有していると、Ｆ ａｂ部分は分子から引裂かれて、軽鎖はプレートウェルから消失している。僅か な色の生成はＩｇＡ、蛋白分解酵素の存在の指標となる。

れるバクテリア性髄膜炎の存在を検知することに使用出来る。これらの微生物は すべて同様なＩｇＡ、分解＝プロテアーゼを産生ずる。試験は、分解酵素（プロ テアーゼ）の存在を、髄膜炎の疑いのある患者に対して通常行う腰部穿刺によっ て得られる背柱液で行うことを除いて、前記第２項で記述した方法と同一に行え ばよい。

４、ＩｇＡ結合性蛋白は、、ｒｇＡに属する抗体の特異反応性を決定することに 使用し得る。ＩｇＡは人間の上皮細胞表面に存在する主要な保護筈体であるから 、ＩｇＡが反しするバクテリア性、ビールス性抗原を測定し得るということに重 要な意味がある。そして、これは次の手ｊ］「でなし得る。即ちＩｇＡ結合注蛋 白をプレートにコートする。

此のプレートを結合反応に付する。洗浄後、抗原の存在を知る検知システムは、 例えばバクテリア性産生物又は問題のビールスに対する抗体として使用する。そ して、此の過程で酵素又は放射性検出／ステムを利用する。

５、ＩｇＡ結合註蛋白はその２つのサブクラスのＴｇＡ。

及びＩｇＡ２の各々に含まれるＩｇＡ抗体を決定するのに用いられる。これは下 記の点を除けば前記４項知記した方法と同じ試験でなし得る。即ち特定の抗原を 加える以前に、フ０レートに固定されたＩ　ｇＡ、′抗体を精製した淋菌又は他 のＩｇＡ、プロテアーゼて破壊する。前出実験記録第３項と第４項による試験の 間の反応性の相違によってサブクラスの抗体の関与程度が決定できる。

本発明の寓する技術分野に精通した者は、此処に記述した本発明のＩ　ｇＡＢＰ を単離し、同定する手２項を理解ずれば、その生成物を第１」中する手段を理解 することは仔馬てあろう。又ＩｇＡＢＰを不発明の種々の実施態様の実施のため に、単離し精製することは本質的な問題ではない。実際、例えば結合蛋白を含有 しているクロマトグラノ・カラムからの溶出液のように、結合蛋白を種々の濃度 に含んでいる組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ　）を利用することは、殆どす べての場合について便宜でるる。このような浴数：ま下記の万、去で作ることが 出来る。

連鎖球菌グルーｆＢのＨ，！補液を先づ、これがＩｇＡと紺へすることについて 確かめる試験を行う。このためには、連鎖球菌のにレットを放射線標識したＩｇ Ａと一緒にして、室温で２０分間保温して、次いで結合した（　ｃｏｎｊｕｇａ ｔｅｄ　）ＩｇＡの存在を試験する。連鎖球菌グルーｆＨの既知の菌株でありそ して一般に入手可能であり、かつ本発明の実施に採用し得るものは、Ａ９０９、 Ｆ　３４．５−３及びＨ３６Ｂ−５である。最初の２菌株は血清型１ｃ０最後の ものは血清型１ｂ０ 、選択した菌株の懸濁液は対数期で抽出に付される、即ち１％乃至１０％のドデ ンル硫酸ソーダ水溶液中で、１０分乃至２時間、ｐＨ約６乃至９で煮沸する。ｐ 旧ま臨界的ではないが０．１　Ｍ　）　！Ｊスス−酸のような適当な緩衝液で上 記の範囲に保つことが都合よい。バクテリアは例えば、遠心分離で分離される。

蛋白は溶液中に残留するので既知の方法で沈澱せしめる。例えば値設アンモニウ ム、エタノール、又は他の蛋白沈澱剤を加える。

沈澱を行うに最も便利な方法は、温度約０℃乃至１０℃で、エタノールを加えて 、エタノール中６０係乃至９０チ、好適には６５％乃至７５係の混合物を作るこ とである。沈澱物は、例えばグリノン−塩酸、酢酸ソーダー酢酸、又は酒石酸緩 沓徹のような適宜な１．汚液で約ｐＩＩ５５乃至６５に保った水中に再び晋・蜀 する。ｐ＋＋　５．５の１０　ｚ　Ｍ酒石設緩衝液が最も便宜である。此のｐＨ ゛では、負に帯電している、汚れたＤ　Ｎ−Ａ又はＲＮＡｆ除去するため、溶液 は、沈澱物を可溶化するために用いた同じ緩衝液で平衡化しだＤＥＡＥ−セファ ローズ（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　）カラムを通す。吸着剤は正に帯電しているので 、、ＤＮＡ。

ＲＮＡと容易に結合する。カラムからの溶出液は、上記したような種々の目的に 対して有効な４度て結合タン・ぐりを含んでいる。

ＤＥＡＥ−セファローズはファーマシア　ファインケミカルズ（Ｐｈａｒｍａｃ ｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ　）から入手可能。

これはアーガローズ（ａｒｇａｒＯ３ｅ　）から成るビーズ状のケ８ルて、ノエ チルアミノエチル誘導体にしたもの。他の陰イオン交換樹脂も使用可能である。

本発明を理解するだめの追加的な助けとして、淋菌又は髄膜炎菌の感染を検知す る方法をより詳細に言己述する。

い ヒトＩｇＡ、を２つ○分画、Ｆｃ分画とＦａｂ分画５に分裂させる。連鎖球菌グ ループＢから単離されるＪｇＡＢＰをにより開発されたものである。

この検定では、ＩｇＡＢＰ（酵素吸着検定用プレートに結合している）は、Ｉｇ ＡのＦｃ　部分に結合させるために用いられる。ＩｇＡ、プロテアーゼはＩｇＡ を分裂させることが出来、軽鎖を有するＦａｂ分画を放出する。軽鎖の存否＝（ 酵素の存否に対応する）：よ、適宜な試薬を用いることで検知し得る。

１、ＩｇＡＢＰ　（１−５μｇ／−のＩｇＡＢＰを０．　］　Ｍ　ＴｒｉｓＨα ｐＨ９，８に溶かしたもの）を、１００μｌ／ウエルを備えたＥＬＩＳＡプレー トの表面に塗り、ｐ）＋６−１１で常温（２０−４０℃）に、１０−１６時間放 置する。

２、　プレートを、等張力食塩水、即ち０９％食塩水中に０．０２％及び０２％ ブリーツ（Ｂｒｉｊ）を含む水溶液で６回洗滌する。

３、ＩｇＡ　（０，２−２５０ｔｔｇ／ｍｌのＩｇＡを１．　Ｏｍ　Ｍ　）リス ＨＬｙ！ｐＨ７，５＋１０　ｍ　Ｍ　Ｋｇ（Ｊ　ｚ　０．０５　％ブリーツ３５ 中に溶かしたもの）を各ウェルに加える。ｐ）Ｉば５−１０に保つ。１時間後、 ＩｇＡ、７’ロチアーゼを含有する液（例、昨分泌液）を丁ｇＡに加える、そし て１５分乃至４時間常温で反応させる。

４　プレートを上述の方法で洗浄する。

５、　抗ヒト軽鎖血奨（ｓｅｒａ）　と結合しているアルカリ性ホスファターゼ を各ウェルに加える。そして少くとも３０分開好ましくは１−２時間常温に保温 する。

６　プレートを第２項記載のように洗浄する。

７、　アルカリ性ホスファターゼの基質であるパラニトロフェノールホスフェー トを好ましくは緩衝液で、ｐＩＩ最低７、好ましくは７−９に保ち、各ウェルに 加える。そして最低３０分間、好ましくは２時開に近い時８間常温に保ＩｇＡ、 プロテアーゼに対して陰性のウェルは、ＩｇＡヲそのま＼いｎｔａｃｔ）含んで いる、従って基質との反応で黄色を呈する。ＩｇＡ、プロテアーゼに対して陽性 のウェルばそのま＼のＩｇＡを含んでいない、従って基質を加えたことによる呈 色反応を示さない。

ブリーノ３５は脂肪酸のポリオキシエチレンエーテルより成る非イオン活性剤で ある。これは吸着表面を反応に無関係な余計な蛋白の非特異性吸着から保護する ために用いるものである。塩化マグネシウムは必要成分ではなく、特に燐酸綴部 液を用いる場合の好適成分である。

■ｇＡ＋プロテアーゼは最適の作用を果すには微量のマグネ／ラムイオンを必要 とする。

以上に説明した方法の各段階で、濃度、温度及び保温時間等のパラメーターにつ いては、悪い結果を及ぼすことなく、改変を加えることが出来ることは農業者に とっては明らかなことである。等価な他の緩衝液も使用し得る。

・国際調査報告、 ｌｎｌｎｍｎｍ１１６ＩＩ＾ｏｐＨｃｍ＋１０ｎＮｏ、ＰＣＴ／ＵＳ８３１０１ ９０４Ｉ耐ａ＋ｎａ＋１ａｎａｌＡｏｏｌ＋ｅｉｌｌａｎＮａ、ＰＣＴ／ＬＩＳ ８３１０１９０４第１頁の続き ■Ｉｎｔ、Ｃ１，４識別記号　庁内整理番号／／　Ｃ１２Ｑ　１１０４　８２１ ３−４Ｂ［相］発　明　者　ゴチリック、エミール　アメ−ジエー、　アベ リカー 二二

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １．対数期にある連鎖球菌を、その細胞表面と免疫グロブリンＡ結合性蛋白との 間の結びつきを解く物質を含有している水性媒体で抽出し、グロブリンＡ蛋白を 含有する溶・没を作シ、これに蛋白沈澱試薬を加えて、沈澱させることを特徴と する、免疫グロブリンＡ　（ＩｇＡ）との結合性を有する連鎖法・菌グループＢ の表面から免疫グロブリンＡ結合蛋白を分離する方法。 ２１　対数期にある連鎖球菌を非イオン活性剤を含有する水性媒体で抽出するこ と、 ２６　得られる混合物の固体部分を分離すること、３　蛋白沈澱試薬を加えて、 得られる溶液から固相分を沈澱させること、 を特徴とする、免疫グロブリンＡ　（ＩｇＡ）との結合性を有する連鎖球菌グル ープＢの表面から免疫グロブリンＡ結合性蛋白を分離する方法。 ３　抽出媒体がｐＨ６乃至９の１チ乃至１０％のドデシル硫酸ソーダから成る水 性緩衝溶液であり、沈澱試薬が０℃乃至１０℃のエタノールであることを特徴と する請求の範囲第２項の方法。 ４１　対数期にある連鎖球菌を非イオン活性剤を含有する水性媒体で抽出するこ と、 ２　得られる混合物の固体部分を分離すること、３　蛋白沈澱試薬を加えて、得 られる溶液から固相分を沈澱させること、 を特徴とする免疫グロブリンＡ　（ＩｇＡ）との結合性を有する連鎖球菌グルー プＢの表面から免疫グロブリンＡ結合蛋白を分離する方法。 ５　抽出媒体が、ｐＨ６乃至９のポリエチレングリコールｐ−インブチルフェニ ルエーテル１％乃至１０％の水溶・左緩衝溶液であシ、沈澱試薬が０℃乃至１０ ℃のエタノールであることを特徴とする請求の範囲第４項の方法。 ６、抽出媒体が稀薄な塩酸水溶液であることを特徴とする請求の範囲第４項の方 法。 ７、　ドガンル硫酸ンーダポリアクリルアミドヶ８ル電気泳動法による測定で分 子量１３２，０００を有し且つヒトＩｇＡのＦｃ部分と特異的に反応することで 特徴づけられるＩｇＡ結合性連鎖球菌グループＢがら単離可能な免疫グロブリン Ａ　（ＩｇＡ）結合性蛋白。 ８１　ドデシル硫酸ソーダデリアクリルアミドヶゝル電気泳動法による測定で分 子量１３２，０００を有し且っヒ）ＩｇＡのＦｃ部分と常ｆ、　ｐＨ６乃至１１ で特異的に反応することで特徴づけられる免疫グロブリンＡ結合蛋白溶液に吸着 面を接触させ、該吸着面を該グロブリン結合蛋白でコートすること、 ２　吸着面を、非イオン活性剤を含有する等張力食塩水溶液で洗浄すること、 ３　吸着面を、ｐｌ’ｔ　５　乃至１０ｆＯ２乃至２５０　ｐｇ／−の濃度で免 疫グロブリンＡ　（ＩｇＡ）を含有する水溶、夜白と結合させること、 ４　感染の疑いのある哺乳動物の分泌液を加えて常温で１５分乃至４時間保温す る、 ５　上記手順２と同様に洗浄する、 ６　抗ヒト軽鎖血瑣と結合しているアル刀り性ホスファターゼを加えて最低３０ 分間常温で保温する、７　吸着面を手順２と同様に洗浄する、８　パラニトロフ ェノールホスフェートの緩衝ｓをｐｒ＋最低７にして加え、最低３０分間常温に 保持する、９８　得られた液の４０５ｎｍにおける吸光度を測定する、 手順を包含することを特徴とする、体液中に免疫グロフ゛リンＡ１が存在するこ とに特徴づけられる淋菌又は髄膜炎菌の感染を検知する方法。 ９　手順３の溶液が塩化マグネシウムを含有していることを特徴とする請求の範 囲第８項の方法。