KR20210063534A

KR20210063534A - 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트

Info

Publication number: KR20210063534A
Application number: KR1020190151717A
Authority: KR
Inventors: 김윤원; 김영진; 이병철; 이원진; 박상진
Original assignee: 주식회사 이뮨메드
Priority date: 2019-11-22
Filing date: 2019-11-22
Publication date: 2021-06-02

Abstract

본 발명은 장티푸스 및 파라티푸스 항원을 포함하는 장티푸스 및 파라티푸스 감염 동시 감별진단 키트, 진단용 조성물 및 이를 이용한 장티푸스 및 파라티푸스 진단 방법에 관한 것이다.
본 발명의 장티푸스 및 파라티푸스 감염 동시 감별진단 키트를 이용하면 보다 정확하게 장티푸스 및 파라티푸스의 감염 유무를 동시에 구분하며 진단할 수 있다.

Description

장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트 {A kit for concurrent distinct detecting of Typhoid fever and Paratyphoid fever}

본 발명은 살모넬라 타이피 및 살모넬라 파라타이피 항원을 포함하는 장티푸스 및 파라티푸스 감염 동시 감별진단 키트, 진단용 조성물 및 이를 이용한 장티푸스 및 파라티푸스 진단 방법에 관한 것이다.

살모넬라는 세균 분류학상 장내세균과(Enterobacteriaceae)에 속하는 중요한 장내 감염을 일으키는 세균으로서, 살모넬라 감염증의 임상 증상은 국소감염, 위장관염, 장염, 균혈증, 만성보균상태 등 경한 장내 감염으로부터 심한 질환에 이르기까지 다양한 임상 증상을 보인다.

대부분의 살모넬라균은 가금류, 돼지, 소, 개 등의 애완동물, 가축 및 야생동물 모두를 병원소로 하지만 장티푸스균은 오직 사람만을 병원소로 한다.

상기 장티푸스는 주로 환자나 보균자의 대?소변으로 배출된 병원체로 인하여 오염된 식수와 음식물, 어패류를 통해서 전염된다. 보통 발병 1주 후부터 회복기에 대변이나 소변으로 균을 배출하므로 전염가능하며, 회복기 이후부터는 일정하지 않다. 치료하지 않는 경우 약 10%의 환자는 발병 후 3개월까지 균을 배출하고 2~5%는 영구보균자가 된다. 체내로 균이 들어온 후 소장의 점막 상피를 침투하면, 대식 세포에 의해 탐식되고 균혈증을 유발시키는데, 장티푸스균의 병원소는 오직 사람이며 만성보균자가 될 수 있기 때문에, 장티푸스 보균자의 색출과 환자 관리를 잘하면 장티푸스 감염을 효과적으로 예방할 수 있다.

환자의 치료가 적절히 이루어지지 않을 경우 약 10%의 환자는 발병 후 3개월까지 균을 배출하기 때문에, 장티푸스 보균자의 진단이 정확히 이루어지고 적절한 대처가 이루어져야 해당 보균자로부터 지속적으로 확산을 막을 수 있다.

세계보건기구(WHO)에 의하면 장티푸스 감염으로 인해 전세계적으로 매년 약 2,000만 명 이상의 환자가 발생하고 이 중 30%가 사망에 이르며 이들 사망의 90%는 아시아 지역에서 발생하고 있다. 미국, 캐나다, 서부 유럽, 호주, 일본 등의 일부 선진국을 제외한 전세계 대부분의 국가에서 발생하며, 특히 아시아, 아프리카, 라틴아메리카에서 발병하고 있는 실정이다. 개발도상국의 연간 발생률은 인구 10만 명당 150~1,000명 수준이며, 4~19세에 주로 발병하는 특성을 보인다. 국내에서는 제 1군 법정감염병으로 분류되어 1960년도 후반에 연평균 4,000명 이상의 환자가 발생하여 약 1.48%의 치명률을 보였으며, 현재도 매년 200명 내외로 미신고 사례를 감안할 때 인구 10만 명당 1명 이상으로 연중 지속적으로 발병하고 있는 것으로 파악된다. 또한, 해외여행의 증가 및 환경오염, 내성 균주의 증가 등 다양한 원인으로 국내의 발병환자는 계속 증가할 것으로 예상된다.

정확한 진단을 위해서는 배양검사(혈액, 대변, 소변, 골수, 담즙 등에서 균이 배양되면 확진)가 가장 일반적으로 이루어진다. 그러나 세균배양 검사 중 혈액 배양검사에서는 발병 첫째 주에는 80% 정도의 양성률을 보이지만, 셋째 주에는 50% 정도로 감소하며 항생제 투여에 의한 영향을 받는다. 대?소변 배양 검사는 초기에는 양성률이 낮으나 발병 셋째 주에 75% 정도의 양성률을 보인다. 또한, 골수 배양은 약 90%의 높은 양성률을 나타내며, 항생제 복용 여부와 관계없이 혈액배양에서 음성이라도 골수배양에서 균이 자라므로 병원균을 증명할 수 있다. 그러나, 배양검사를 통한 장티푸스의 확인진단은 균 분리가 가장 중요하나 시간적인 소모와 잦은 항생제의 사용으로 인하여 균양성률의 감소가 나타나고 있으며, 혈청형확인을 위한 O & H 항원의 확인까지는 수일에서 수주의 시간이 소요되기 때문에 신속한 진단이 어렵다는 문제점이 있다.

한편 1987년 국내에서 보고된 자료에 따르면 장티푸스 균의 항체 진단 시 Vi 항원에 대한 항체 진단이 효율적이며 감염 초기에도 Vi에 대한 항체 검출이 가능함을 확인하였고, Vi 항원을 이용한 항체 진단법에는 Vi-수동혈구응집법(Vi-Passive hemagglutination assay, Vi-PHA), 간접면역형광항체법(indirect fluorescent antibody test, IFAT), 효소면역측정법(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 등이 있다. Vi-indirect fluorescent antibody test (Vi-IFAT ? 1:64) 혈청학적 검사는 급성감염과 만성 보균상태의 감별에 도움이 되는데 보균자에서는 Vi 항체가 증가될 수 있다. 그러나 Vi항원은 열민감 다당(heat-labile polysaccharide)인 피막항원(capsular antigen)으로, Vi항원을 가지고 있는 균은 S. Typhi 뿐이나 분리 과정 혹은 계대 중에 Vi항원이 손실될 수 있는 문제점이 있다(한국등록특허 10-0578114).

또한, 혈청학적 검사 시 장티푸스 원인균은 다른 살모넬라 혈청형과 같은 항원을 공유하고 있으며, 다른 장내세균과(Enterobacteriaceae) 세균과 교차반응을 하는 항원결정인자를 공유하고 있어서, 교차반응으로 인한 위양성이 발생할 수 있어서 진단적 가치가 떨어진다.

이로 인해, 기존의 진단법의 한계인 감염 초기에 효과적으로 진단할 수 있는 검사법의 개발이 필요한 실정이다.

이와 관련하여 장티푸스의 진단 키트에 대하여는 보고된 바 있으나, 상기 장티푸스 및 파라티푸스를 동시에 진단하며 감별하는 키트에 대하여는 보고된 바가 없다.

따라서, 본 발명은 이전의 키트보다 특이도가 뛰어난 장티푸스 및 파라티푸스 진단 키트를 제공하며, 또한 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트를 최초로 제공한다는 것에 이의 의의가 있다.

이러한 배경하에, 본 발명자들은 수 분 이내에 장티푸스 및 파라티푸스 균 감염의 신속 진단 및 민감도와 특이도가 향상된 진단 방법을 개발하고자 예의 노력 연구한 결과, 장티푸스 및 파라티푸스를 동시에 구분하여 신속히 진단 할 수 있으며, 기존의 키트보다 민감도 및 특이도를 향상시켜, 상기 균에 의한 감염을 빠르게 진단할 수 있음을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 하나의 목적은 살모넬라 타이피 및 살모넬라 파라타이피의 항원을 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스 감염 동시 감별진단 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 항원을 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스 감염 동시 감별진단용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 키트를 이용하여, 장티푸스 및 파라티푸스 감염 진단을 위한 정보제공방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 살모넬라 타이피(Salmonella Typhi)의 H, O 항원, 살모넬라 파라타이피(Salmonella Paratyphi) A의 H, O 항원 및 B의 H 항원을 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스 감염 동시 감별진단 키트를 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 “장티푸스(typhoid fever)”는 살모넬라 타이피(Salmonella typhi)에 감염되어 발생하는 소화기 계통의 급성전염병이며 제1종법정전염병으로 분류되어 있다. 장티푸스는 발열과 복통 등의 신체 전반에 걸친 증상이 나타나는 질환으로 살모넬라 타이피는 오염된 식품, 물 등의 섭취에 의해 구강을 통해 체내에 감염된다. 균은 소장에 도달하여 장벽 및 장관막 림프절에 침입하여 증식하고 림프관에서 흉관을 거쳐 혈류로 들어가 간, 비장, 골수 등의 조직에 운반되어 전신감염증을 일으킨다. 보통 복통, 구토, 설사 또는 변비 등 위장관계 증상이 나타나며 발열 등의 다양한 증상을 동반하는 전신 질환이다. 환자의 혈액, 대변, 소변, 골수 등의 검체에서 살모넬라 타이피가 검출되면 장티푸스로 진단할 수 있다. 세균배양검사가 가장 기본이며 감염 초기에는 혈액에서 균이 분리될 수 있으며 감염 1주일 후에는 소변이나 대변에서 균이 나타난다.

본 발명에서 사용되는 용어 "살모넬라 타이피(Salmonella typhi)"는 그람음성의 간균으로 주모성의 편모를 가지고 운동성을 나타내는 장내세균이다. 호기성 또는 통성혐기성으로 37℃에서 보통 한천배지에 잘 발육한다. 살모넬라 타이피는 경구적으로 침입하고 10 ~ 14일 정도의 잠복기를 거처 장티푸스(typhoid fever)를 일으키며 독력이 강하다.

본 발명에서 사용되는 용어 “파라티푸스(Paratyphoid fever)”는 살모넬라 파라타이피(Salmonella Paratyphi)에 감염되어 발생하며 전신의 감염증 또는 위장염의 형태로 나타나는 감염성 질환이다. 장티푸스와 유사한 증상을 나타내지만 증상의 강도나 경과가 더 가볍고 사망률도 훨씬 낮다. 파라티푸스는 발열과 복통 등의 신체 전반에 걸친 증상이 나타나는 질환으로 살모넬라 파라타이피로 오염된 식품, 물 등의 섭취에 의해 구강을 통해 체내에 감염된다. 보통 복통, 구토, 설사 또는 변비 등 위장관계 증상이 나타나며 발열 등의 다양한 증상을 동반하는 전신 질환이다. 환자의 혈액, 대변, 소변, 골수 등의 검체에서 살모넬라 파라타이피가 검출되면 파라티푸스로 진단할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 “살모넬라 파라타이피(Salmonella Paratyphi)”는 상기 파라티푸스를 일으키는 균이다.

본 발명의 용어 “살모넬라”는 장티푸스균(Salmonella Typhi; S. Typhi)과 기타 살모넬라균(S. Paratyphi, S. Typhimurium, S. Enteritidis 등)의 감염에 의한 질병으로, 병원체인 살모넬라균은 그람음성 막대균이다. 살모넬라균 속에 속하는 수많은 혈청형들은 사람과 동물에 병원체로 작용한다. 그러나 장티푸스(Typhoid fever)는 기타 살모넬라와는 달리 사람에게만 감염되어 증상을 나타낸다.

본 발명의 용어 "항원(Antigen)"은 면역 반응을 일으켜 특히 항체를 생산하게끔 만드는 물질로서, 일반적으로 생명체내에서 이물질로 간주되는 물질의 총체이다. 항원은 주로 병원균이나 바이러스로서 단백질이지만 다당류, 인공적으로 합성된 물질, 부착소, 자신의 몸 속에 생긴 변이세포(암세포) 등의 다양한 것들도 항원이 될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 장티푸스 및 파라티푸스 항원을 포함하는, 특이성이 우수한 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트를 개발하였다. 구체적으로, 상기 키트는 Salmonella Typhi의 H 항원을 포함하는 것일 수 있고, Salmonella Typhi의 O 항원을 포함하는 것일 수 있고, Salmonella Paratyphi A의 H 항원을 포함하는 것일 수 있고, Salmonella Paratyphi의 A의 O 항원을 포함하는 것일 수 있고, Salmonella Paratyphi B의 H 항원을 포함하는 것일 수 있으며, 상기 항원은 균체에서 분리한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 이용되는 서열은, 생물학적으로 균등 활성을 갖는 변이를 고려한다면, 서열목록에 기재된 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기 용어, '실질적인 동일성'은 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인(align)하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 60%의 상동성, 더욱 구체적으로 70%의 상동성, 더더욱 구체적으로 80%의 상동성, 가장 구체적으로 90%의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다.

본 발명의 용어 "상동성" 이란, 단백질을 코딩하는 염기 서열이나 아미노산 서열의 유사한 정도를 의미하는데, 상동성이 충분히 높은 경우 해당 유전자의 발현 산물은 동일하거나 유사한 활성을 가질 수 있다. 또한, 상동성은 주어진 아미노산 서열 또는 염기 서열과 일차하는 정도에 따라 백분율로 표시될 수 있다. 본 명세서에서, 주어진 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열과 동일하거나 유사한 활성을 가지는 그의 상동성 서열이 "% 상동성"으로 표시된다. 예를 들면, 점수(score), 동일성(identity) 및 유사도(similarity) 등의 매개 변수(parameter)들을 계산하는 표준 소프트웨어, 구체적으로 BLAST 2.0을 이용하거나, 정의된 엄격한 조건(stringent condition)하에서 썼던 혼성화 실험에 의해 서열을 비교함으로써 확인할 수 있으며, 정의되는 적절한 혼성화 조건은 해당 기술 범위 내이고, 당업자에게 잘 알려진 방법(예컨대, J. Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory press, Cold Spring Harbor,New York, 1989; F.M. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York)으로 결정될 수 있다.

본 발명의 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트는 장티푸스 또는 파라티푸스의 감염 여부를 진단하는 것일 수 있으며, 이는 구체적으로 상기 균들의 특이 IgM 및 IgG를 동시에 검출하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 진단 키트는 상기 균의 IgM 항체 및 IgG 항체 둘 모두를 검출하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.

본 발명의 용어 "IgM" 및 "IgG"는 면역글로불린(Immunoglobulin; Ig)의 하위 그룹에 속하는 물질이다. 면역글로불린은 항체(Antibody)로도 불리우며, 항원과 특이적 결합을 하여 항원-항체 반응을 일으키는 물질이다. 구체적으로, 면역 체계에서 세균이나 바이러스 같은 외부항원들과 특이적 결합을 하여 항원을 인식하게 하고 동시에 무력화시키는 작용을 하는 면역글로불린은 면역 항체라고 하는데 보통 항체라고 하면 면역 항체를 뜻한다. 상기 면역글로불린은 일반적으로 5가지 종류(IgG, IgA, IgM, IgD, 및 IgE)로 분류된다.

본 발명의 IgM은 면역 반응 시 최초로 만들어지는 항체로서, 다섯 개의 Y가지가 결합된 형태이다. 또한, IgG는 면역 반응을 주로 담당하는 항체로서, 면역 반응이 진행되면서 IgM이 IgG로 바뀌어 생산된다. 상기 IgM은 최초 면역 반응과 관계되어 1차 감염 또는 현재 감염 여부를 확인할 수 있는 지표로 이용될 수 있고, IgG는 2차 감염 또는 과거 감염 여부를 확인할 수 있는 지표로 이용될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 용어 “진단”은, 병리 상태를 확인하는 것을 의미한다. 구체적으로, 본 발명의 목적상, 진단은 장티푸스 및 파라티푸스 특이적인 항원-항체 반응 유무를 확인하여, 장티푸스 및 파라티푸스균에 의해 야기되는 질병의 감염 여부를 확인하는 것이다.

상기 용어 “진단”은 “검출”과 같은 의미로 사용될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 용어 “키트”는, 시료에 포함된 항체(장티푸스균 및 파라티푸스균)의 존재 여부를 확인하기 위한 수단으로 사용된다.

본 발명의 키트는 3개의 반응선(Test line)을 가지며, 제1반응선에는 살모넬라 타이피의 O 항원 및 살모넬라 파라타이피 A의 O 항원이 고정되고, 제2반응선에는 살모넬라 타이피의 H 항원이 고정되고, 제3반응선에는 살모넬라 파라타이피 A의 H 항원 및 살모넬라 파라타이티 B의 H 항원이 고정될 수 있으며, 보다 구체적으로, 상기 제1반응선 및 제2반응선에서 반응이 일어날 경우 시료가 장티푸스에 감염된 것으로 진단할 수 있으며, 제1반응선 및 제3반응선에서 반응이 일어날 경우 시료가 파라티푸스에 감염된 것으로 진단할 수 있다.

또한, 상기 키트는 장티푸스 및 파라티푸스에 대한 IgM 항체를 검출하는 스트립, 및 장티푸스 및 파라티푸스에 대한 IgG 항체를 검출하는 스트립을 포함하여, 장티푸스 및 파라티푸스에 대한 IgM 항체 및 IgG 항체 둘 모두를 검출할 수 있어, 진단 대상이 어떠한 혈청형의 살모넬라에 1차 감염 또는 2차 감염되었는지 뿐만 아니라 과거 또는 현재에 어떠한 혈청형의 살모넬라에 감염되었는지 명확하게 확인할 수 있다.

본 발명의 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트는 (a) 시료가 흡수되는 샘플패드(sample pad); (b) 시료 내의 인간의 항체와 결합하는 금 결합 패드(gold conjugation pad); (c) 살모넬라 타이피 또는 살로넬라 파라타이피 항원을 포함하는 반응선(test line)과 대조군 단백질을 포함하는 대조선(control line)이 처리되어 있는 나이트로셀룰로오스 멤브레인 (nitrocellulose membrane; NC membrane; membrane); 및 (d) 잔량의 시료가 흡수되는 흡수패드(absorption pad)를 포함하는 테스트 스트립을 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트는 샘플패드, 금 결합 패드, 멤브레인 및 흡수패드를 포함하는 테스트 스트립을 포함하고 있다. 샘플패드는 금 결합 패드 위에 겹쳐져 있어 제1 중첩 부분을 형성하고, 금 결합 패드는 멤브레인 위에 겹쳐져 있어 제2 중첩 부분을 형성한다. 또한 멤브레인과 흡수패드는 제3중첩 부분을 형성한다. 시료가 샘플패드 상에 점적되면 모세관 현상에 의하여 시료는 금 결합 패드, 예를 들어 골드-라벨된 염소 항 인간 IgM 항체(goldlabeled goat anti-human IgM antibody) 또는 골드-라벨된 염소 항 인간 IgG 항체(goldlabeled goat anti-human IgG antibody) 등을 포함하고 있는 금 결합 패드를 통과하게 된다. 골드-라벨을 형성하는 금 입자는 바람직하게 20 내지 55nm의 지름 크기, 보다 바람직하게는 20 내지 40nm의 지름 크기를 가지며, 염색 지시자(indicator dye)로서 작용한다. 상기 금 결합 패드를 통과함에 따라, 시료 내의 항체는 골드-라벨된 염소 항 인간 IgM 항체(goldlabeled goat anti-human IgM antibody) 등과 결합하여 복합체를 형성하고, 상기 복합체는 멤브레인을 따라 이동한다.

본 발명의 용어 "시료"란, 장티푸스 또는 파라티푸스균에 감염되어, 상기 질환이 발병되거나 발병될 가능성이 있는 개체로부터 유래한 물질을 의미하며, 구체적으로 혈액, 전혈, 혈청, 혈장, 림프액, 소변, 분변, 조직, 세포, 기관, 골수, 타액, 객담, 뇌척수액 또는 그들의 조합일 수 있으며, 보다 구체적으로, 혈청, 혈장, 전혈일 수 있으나, 개체의 IgM 및 IgG를 확보할 수 있고 그로부터 장티푸스 또는 파라티푸스 특이 IgM 및 IgG 발현 여부를 확인할 수 있는 한, 그 종류는 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 시료는 본 발명의 진단 키트의 샘플 패드에 점적하기 전에 희석하여 사용하거나 또는 희석하지 않고 사용할 수 있다. 시료에 혈청형별 장티푸스 또는 파라티푸스 특이 항체가 있는 경우에는 본 발명의 상기 진단 키트 내 장티푸스 또는 파라티푸스 항원과 결합하여 육안으로 식별할 수 있도록 멤브레인 위의 반응선에서 색 변화가 일어난다. 그러나 시료에 혈청형별 장티푸스 또는 파라티푸스 특이 항체가 없는 경우에는 본 발명의 상기 항원과 결합하지 않아 멤브레인 위의 반응선에서 아무런 변화가 일어나지 않는다. 즉, 본 발명의 바람직한 실시예에서는, 장티푸스 또는 파라티푸스 특이 항체는 멤브레인 위의 반응선에 고정되어 있는 혈청형별 장티푸스 또는 파라티푸스로 항원에 결합한다. 이 항원-항체 복합체의 형성으로 시료의 항체와 골드 라벨(염소 항 인간 IgM 등)과 멤브레인 상의 항원이 복합체를 형성하여 붉은 보라색 밴드를 나타내고 이에 따라 시료 내에 혈청형별 장티푸스 또는 파라티푸스에 대한 항체가 존재하는 양성 반응을 나타내게 된다.

장티푸스 또는 파라티푸스 감염에 대한 양성 반응 결과는 대조선 외에 항원을 포함하고 있는 반응선이 발색하는 경우이다. 상기 대조선은 진단 키트의 이상 유무를 확인하기 위한 것이다. 장티푸스 또는 파라티푸스 감염에 대한 음성 반응 결과는 대조선만이 발색하는 경우이다. 상기 대조선은 골드-라벨과 결합하는 대조군 단백질을 포함하고 있는데, 이는 예를 들어 토끼 항-염소 IgG 다클론 항체, 염소 항-인간 IgG 다클론 항체, 토끼 항-인간 IgM 다클론 항체 또는 염소 항-인간 IgM 다클론 항체 등을 포함할 수 있으며, 이들 대조군 단백질을 0.1mg/ml 내지 2.0mg/ml의 농도로 포함할 수 있다. 상기 반응선은 장티푸스 또는 파라티푸스 항원을 포함하고 있으며, 이들 항원 단백질은 0.5 내지 2.0mg/ml의 농도로 반응선에 포함된다.

금 결합 패드는 적합한 마커, 예를 들어 마커로서 건조된 콜로이드성 골드-라벨된 프로틴 A(gold labeled portein A), 골드-라벨된 항-인간 IgG 항체(glodlabeled anti-human IgG antibody) 또는 골드-라벨된 항-인간 IgM 항체(goldlabeled anti-human IgM antibody) 등을 포함할 수 있으며, 바람직하게 샘플패드에 인접하여 위치할 수 있다. 상기 골드 라벨된 마커가 금 결합 패드에 과량으로 포함될 경우에는 분석하고자 하는 장티푸스 또는 파라티푸스에 대한 항체가 비교적 낮은 영역에서도 비특정신호로 증가됨으로써 위양성 결과를 초래할 수 있으므로, 본 발명에서는 골드-콜로이드 원액을 희석하여 흡광도(optical density; OD)가 1 내지 6, 바람직하게는 흡광도가 2 내지 4의 농도로 포함할 수 있다. 흡수패드는 막의 반대편 말단에 위치하며 모세관 현상에 의해 막을 따라 이동한 생물학적 시료, 예를 들면 혈청, 혈장 등을 흡수한다.

본 발명의 용어 "개체"는, 장티푸스 또는 파라티푸스 감염, 이의 질환이 발병되거나 발병될 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라 이와 유사한 증상의 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 다른 하나의 양태는, 살모넬라 타이피(Salmonella Typhi)의 H 항원, 살모넬라 타이피의 O 항원, 살모넬라 파라타이피(Salmonella Paratyphi) A의 H 항원, 살모넬라 파라타이피 A의 O 항원 및 살모넬라 파라타이티 B의 H 항원을 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 진단용 조성물을 제공한다.

상기 용어, “살모넬라 타이피”, “살모넬라 파라타이피”, “항원”, 및 “진단”은 상기에서 서술한 바와 같다.

본 발명의 용어 “조성물”은 상기 항원 중 어느 하나 이상을 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 본 발명의 키트를 이용하여, 개체로부터 분리된 시료에서 항체를 검출하는 단계를 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스의 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.

상기 용어, “키트”, “개체”, “시료”, “검출”, “장티푸스”, “파라티푸스” 및 “진단”은 상기에서 서술한 바와 같다.

구체적으로, 장티푸스 또는 파라티푸스 감염이 의심되거나, 이의 발병이 의심되는 환자로부터 시료, 예를 들어 혈청을 채취하고, 이 채취된 시료를 상기 진단 키트의 시료가 흡수되는 부위인 샘플패드(sample pad)에 점적하면, 시료는 모세관 현상에 의해 금 결합 패드(gold conjugation pad)에 도달하여 시료 내의 항체가 금 결합 패드 내의 마커, 예를 들어 골드-라벨된 프로틴 A(goldlabeled protein A), 골드-라벨된 항 인간 IgG 항체(gold-labeled anti-human IgG antibody) 및 골드-라벨된 항인간 IgM 항체(gold-labeled anti-human IgM antibody) 등에 결합하여 콜로이드를 형성하게 된다. 이때, 검출하고자 하는 시료는 상기 금 결합 패드에 고정화되지 않고 계속 이동하여 혈청형별 장티푸스 또는 파라티푸스 항원이 고정화되어 있는 반응선(test line)에 도달하게 된다. 장티푸스 또는 파라티푸스 감염 환자의 시료인 경우에는 상기 혈청형별 항원과 항원-항체 반응을 일으키게 되는데, 즉 환자의 금 결합 패드 내의 특정 마커에 결합된 항체는 반응선에 고정된 장티푸스 또는 파라티푸스 항원에 결합하여 붉은 보라색 밴드를 형성함으로써 육안으로 관찰할 수 있게 된다. 그리고, 시료 내 항체와 반응하지 않은 나머지 금 결합 패드 내의 마커는 대조선에 도달하여 대조군 단백질과 반응하여 붉은 보라색 밴드를 형성함으로써 검사의 적합성을 나타내게 된다.

보다 구체적으로, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명의 키트의 제1반응선 및 제2반응선에서 반응이 일어날 경우 시료가 장티푸스에 감염된 것으로 진단하는 것이고, 제1반응선 및 제3반응선에서 반응이 일어날 경우 시료가 파라티푸스에 감염된 것으로 진단하는 것일 수 있다.

살모넬라 타이피의 H, O 항원, 살모넬라 파라타이피 A의 H, O 항원 및 B의 H 항원을 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트를 이용하면 두 질병을 구분 하면서도 보다 정확하게 장티푸스 및 파라티푸스의 감염 유무를 동시에 진단할 수 있다.

도 1은 장티푸스 및 파라티푸스 감염을 동시에 감별진단할 수 있는 키트의 모식도이다.
도 2는 본 발명의 키트의 장티푸스 및 파라티푸스의 양성 결과 판독 방법을 나타내는 모식도이다.
도 3은 본 발명의 키트의 장티푸스 또는 파라티푸스 항원에 대한 특이성을 나타내는 사진이다.
도 4는 본 발명의 키트의 장티푸스 또는 파라티푸스 양성 검체에 대한 민감성을 나타내는 사진이다.
도 5는 본 발명의 키트의 장티푸스 또는 파라티푸스 음성 검체에 대한 특이성을 나타내는 사진이다.
도 6은 본 발명의 키트의 장티푸스 또는 파라티푸스 외 항원의 교차반응 여부를 나타내는 사진이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전 하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

실시예 1. 장티푸스 및 파라티푸스 항원 선정

장티푸스 및 파라티푸스를 동시에 구별하여 진단하는 키트를 개발하기 위하여, 키트에 포함될 수 있는 항원을 선정하였다.

보다 구체적으로, 상기 질병을 동시에 감별하며 진단하고자 할 경우, 항원간의 교차반응으로 인한 위양성 또는 위음성 등의 문제가 발생할 수 있기에, 이러한 문제를 일으키지 않기 위해, 살모넬라 타이피(Salmonella Typhi; S. Typhi)의 H, O 항원, 살모넬라 파라타이피(Salmonella Paratyphi; S. Paratyphi) A의 H, O 항원 및 B의 H 항원을 선택하였다.

실시예 2. 장티푸스 및 파라티푸스 H 항원 생산

장티푸스 및 파라티푸스 항원을 포함하는 동시 감별진단 키트를 제조하기 위하여, 먼저 장티푸스 및 파라티푸스의 H 항원을 생산하였다.

2-1. H 항원 제조

2L flask에 LB broth 12.5g, 정제수 500mL을 녹인 후, 121℃에서 15분간 멸균하여 배지를 준비하였다. S. Typhi와 S. Paratyphi A, B의 stock 500㎕을 준비한 배지에 각각 첨가하여 호일로 flask를 감싸고 37℃, 100rpm 조건에서 16시간 배양하였다. 그 뒤, 500mL 원심분리 용기 2개에 상기 배양액을 나누어 담고 4℃, 5,000 x g 조건으로 30분간 원심분리를 하여, 상층액을 제거하고 2개의 용기에 각각 1X PBS 10mL을 넣고, 실온에서 220rpm으로 풀어준 뒤, 20mL 비이커로 옮겼다. 옮긴 비이커에 마그네틱 바를 넣고 250rpm으로 교반하면서 1M HCl을 조금씩 넣어주면서 pH를 2.0으로 맞춰주었다. 1시간 뒤, 25mL 원심분리 용기에 옮기고 4℃, 10,000 x g 조건에서 30분간 원심분리 하였다. 원심분리 후, 상층액을 회수하고 초고속 원심분리 용기 하나에 옮기고, 1X PBS를 용기 입구까지 채웠다. 이후, 4℃, 100,000 x g 조건에서 1시간 초고속 원심분리를 진행한 뒤, 상층액을 회수 후 20mL 비이커에 옮기고 250rpm으로 교반하면서 1M NaOH를 이용하여 pH를 7.2로 맞춰주었다. 용액을 100mL 용기에 옮기고 마그네틱 바를 이용하여 250rpm으로 교반하며 4M 황산암모늄을 천천히 첨가하여 20분간 혼합하였다. 혼합 후, 4℃에서 1일간 보관하였다. 혼합한 용액을 25mL 원심분리기 용기 3개에 나누어 옮긴 다음 4℃, 13,000rpm 조건으로 20분간 원심분리하고, 상층액을 제거한 뒤, FDW 2mL로 펠렛을 녹이고 15mL 용기에 모아, dialysis tubing bag(50,000 Da)에 패킹하였다.

2-2. H 항원 투석

정제수 5L당 25g의 활성탄을 혼합하여 투석용액을 제조하고, 2-1에서 제조한 용액이 담긴 dialysis tubing bag을 투석용액에 넣고 2시간 동안, 130rpm으로 교반하며 투석시켰다. 이후, 투석용액을 교체하고 1일간 투석하고, 다시 투석용액을 교체하고 2시간 추가 투석을 한 뒤, 회수하여 15mL 용기에 담았다. 이후, 실온에서 1,000 x g로 5분간 원심분리하여 재회수하였다.

2-3. 항원농축 및 정량

회수한 용액을 단백질 정량 SOP에 따라 농도를 측정하고, 최종 농도가 1.5mg/mL 보다 미달이면 농축 과정을 진행하였다.

보다 구체적으로, 50K amicon 용기에 FDW를 3mL 넣고 3,000rpm에서 1분간 원심분리하여 필터를 activation 시키고 잔여 버퍼는 제거하였다. Activation 시킨 용기에 농축하고자 하는 항원을 넣고 표 1과 같이 적정농도가 넘지 않도록 계산하여 3,000rpm에서 5분 단위로 원심분리하였다.

-	S. Typhi	S. Paratyphi		부피계산식
		A	B
적정농도	1.5mg/ml	1.5mg/ml		항원부피 / (농축농도 / 정량한농도)
최고농도	2.0mg/ml	2.0mg/ml

단백질 정량 SOP에 따라 농도를 측정하며, 표 2의 농도 범위에 들어올 때까지 원심분리와 전량 과정을 반복하였다. 이후, 항원의 부피를 확인하고 10 % NaN₃를 0.02%가 되도록 첨가하였다.

-	S. Typhi	S. Paratyphi A	S. Paratyphi B
농도	1.9 ~ 2.0mg/ml	1.5 ~ 2.0mg/ml

실시예 3. 장티푸스 및 파라티푸스 O 항원 생산

장티푸스 및 파라티푸스 항원을 포함하는 동시 감별진단 키트를 제조하기 위하여, 먼저 장티푸스 및 파라티푸스의 O 항원을 생산하였다.

3-1. O 항원 제조

2L flask에 LB broth 12.5g, 정제수 500mL을 녹인 후, 121℃에서 15분간 멸균하여 배지를 준비하였다. S. Typhi와 S. Paratyphi A, B의 stock 500㎕을 준비한 배지에 각각 첨가하여 호일로 flask를 감싸고 37℃, 100rpm 조건에서 16시간 배양하였다. 그 뒤, 500mL 원심분리 용기 2개에 상기 배양액을 나누어 담고 4℃, 5,000 x g 조건으로 30분간 원심분리를 하여, 상층액을 제거하고 2개의 용기에 각각 1X PBS 25mL을 넣고 풀어준 뒤, 각 용기에 75mL을 첨가하고 상층액을 제거하고 2개의 용기에 각각 1X PBS 25mL을 넣고 풀어주는 과정을 반복하였다. 상층액을 제거하고 2개의 용기에 1X PBS 15mL을 각각 넣고 풀어준 뒤, 14mL round 용기 6개에 5mL씩 나누어 담다. 물이 끓기 시작하면 1시간 동안 15분 간격으로 교반하여 열처리 하였다. 냉동보관 된 20mg/mL proteinase K를 실온에 녹이고 25㎕를 완전히 식힌 펠렛이 담긴 용기에 첨가하고 cap을 딱 소리가 날 때까지 닫고, 파라필름으로 봉인한 후, 220rpm, 37℃ 조건으로 하룻동안 incubation 하였다. 이후, 각 용기에 0.5M EGTA를 40㎕(2mM)씩 첨가하고 볼텍스믹서로 섞은 후, 70±1℃의 워터배스에서 15분간 반응 시키고, 얼음에서 식혀주었다. 그 다음, 초고속원심분리 용기 2개에 15mL을 넣고 1X PBS를 용기 입구까지 채운 뒤, 4℃, 180,000 x g 조건으로 2시간 동안 원심분리하였다. 원심분리 후 상층액을 제거하고 FDW를 2mL씩 넣고 펠렛을 풀어준 뒤 14mL round 용기에 회수하고, 빈 용기에 FDW 3mL을 넣고 워싱을 하여 펠렛을 모아준 뒤 상기 14mL round 용기에 추가하였다.

3-2. O 항원 정량

O 항원 샘플 10㎕에 정제수 90㎕를 첨가하고 볼텍싱한 뒤, 230, 254, 260, 280nm에서 흡광도를 6회 반복하여 측정하여, 유사한 값이 나오는지 확인하였다. 이때 blank는 샘플을 희석한 정제수로 사용하였다.

실시예 4. 패드 제조

4-1. 검체희석액 제조

5L 비이커에 정제수, 1580mL, 10X PBS(pH 6.8) 200mL(1X), 10% BSA 200mL(1%), 10% NaN3 2mL(0.1%)을 넣고 30분간 교반한 뒤, 진공 펌프 필터링 세트를 사용하여 0.22㎛ 필터로 필터링한 후 실온에 보관하였다.

4-2. 샘플패드 버퍼 제조

2L 비이커에 정제수 336mL, 0.2M Sodium borate buffer(pH 8.6) 400mL(0.1M), 20% Tween 20 40ml(1%), 10% BSA 16mL(0.2%) 및 10% NaN3 8mL(0.1%)을 넣고 30분간 교반한 뒤, 진공 펌프 필터링 세트를 사용하여 0.22㎛ 필터로 필터링한 후 실온에 보관하였다.

4-3. 샘플패드 제조

스테인레스 트레이(36.2cm x 32.4cm x 6.5cm)에 랩을 씌우고 70% 알코올로 닦은 후 흡수 패드(20mm x 300mm)를 앞면이 위로 오도록 넣고 샘플패드 버퍼를 1장당 10mL씩 넣고 패드를 충분히 적셔지도록 한 뒤, 24시간 건조하였다.

4-4. IgM 스트립 골드패드 버퍼 제조

100mL 유리병에 정제수 14.3mL, 25% Trehalose 6.8mL(5%), Gold conjugate-Chicken IgY(OD10) 1.02mL(OD0.3) 및 Gold conjugate-Goat anti-human IgM(OD10) 11.88mL(OD3.5)을 넣고 파이펫에이드로 3회 피펫팅 한 후, 뚜껑을 닫고 유리병을 바닥에 놓고 5회 이상 원을 그리며 혼합한 뒤, 4℃에서 보관하였다.

4-5. IgG 스트립 골드패드 버퍼 제조

100mL 유리병에 정제수 12.58mL, 25% Trehalose 6.8mL(5%), Gold conjugate-Chicken IgY(OD10) 1.02mL(OD0.3), Gold conjugate-Goat anti-human IgG(OD10) 13.6mL(OD4)을 넣고 파이펫에이드로 3회 피펫팅 한 후, 뚜껑을 닫고 유리병을 바닥에 놓고 5회 이상 원을 그리며 혼합한 뒤, 4℃에서 보관하였다.

4-6. 골드패드 제조

아크릴판에 랩을 씌워 준비한 뒤, Glass fiber를 올리고 IgM 골드패드 버퍼 1mL을 골고루 흡수될 수 있도록 분주하여 IgM 골드패드를 제조하였다. IgG 골드패드 역시 IgG 골드패드 버퍼를 위와 같은 방법을 통해 제조하였다. 제조된 골드패드는 24시간 건조하였다.

실시예 5. 점적 물질 제조 (IgM)

5-1. IgM 스트립 T - line 1 ( S . Typhi LPS 및 S . Paratyphi A LPS)

15mL tube에 0.1M Potassium phosphate buffer(pH 7.5) 200㎕(10mM), 10% BSA 100㎕(0.5%), 25% Trehalose 8㎕(0.1%), LPS(S. Typhi 및 S. Paratyphi A)를 각각 2.0mg을 넣은 후 최종 용량이 2mL이 되도록 정제수를 넣었다.

5-2. IgM 스트립 T - line 2 ( S . Typhi H:d)

15mL 용기에 0.1M Potassium phosphate buffer(pH 7.5) 200㎕(10mM), 10% BSA 20㎕(0.1%), 25% Trehalose 8㎕(0.1%) 및 S. Typhi H:d 3mg을 넣은 후 최종 용량이 3mL이 되도록 정제수를 넣었다.

5-3. IgM 스트립 T - line 3 ( S . Paratyphi A H:a 및 S . Paratyphi B H:b)

15mL tube에 0.1M Potassium phosphate buffer(pH 7.5) 200ul(10mM), 10% BSA 20ul(0.1%), 25% Trehalose 8ul(0.1%), S. Paratyphi A H:a 및 S. Paratyphi B H:b를 각각 2mg, 1mg을 넣은 후 최종 용량이 2ml이 되도록 정제수를 넣었다.

실시예 6. 점적 물질 제조 (IgG)

6-1. IgG 스트립 T - line 1 ( S . Typhi LPS 및 S . Paratyphi A LPS)

15mL 용기에 0.1M Potassium phosphate buffer(pH 7.5) 200㎕(10mM), 10% BSA 100㎕(0.5%), 25% Trehalose 8㎕(0.1%), LPS(S. Typhi 및 S. Paratyphi A)를 각각 2.0mg을 넣은 후 최종 용량이 2mL이 되도록 정제수를 넣었다.

6-2. IgG 스트립 T - line 2 ( S . Typhi H:d)

6-3. IgG 스트립 T - line 3 ( S . Paratyphi A H:a 및 S . Paratyphi B H:b)

15mL 용기에 0.1M Potassium phosphate buffer(pH 7.5) 200ul(10mM), 10% BSA 20ul(0.1%), 25% Trehalose 8ul(0.1%), S. Paratyphi A H:a 및 S. Paratyphi B H:b를 각각 2mg, 1mg을 넣은 후 최종 용량이 2ml이 되도록 정제수를 넣었다.

6-4. Control line

15mL 용기에 1X PBS 2mL, Goat anti-chicken IgY(2mg/mL) 2mL을 넣어 1mg/mL, 4mL을 제조하였다.

실시예 7. 멤브레인 점적 공정

7-1. Uncut sheet 제조

디스펜서를 이용하여 멤브레인이 부착된 지지카드의 라인 1에 Control line 배합액, 라인 2에 IgM test line 배합액, 라인 3에 IgM test line 용액, 라인 4에 IgM test line 용액을 점적하고, 라인 2 - 4에 IgG test line 배합액을 점적한 뒤, 48시간 건조하였다. 건조가 끝난 뒤, 제조된 골드패드를 멤브레인 아래쪽에 1 ~ 2mm 겹치도록 부착하고, 지지카드 하단에 맞추어 샘플패드를 부착하였으며, 멤브레인 위쪽에 1 ~ 1.5mm 겹치도록 흡수패드를 부착하였다.

7-2. 스트립 제조 및 조립

Rotary slitter를 이용하여 uncut sheet를 4mm로 컷팅하여 스트립을 제조한 뒤, 어셈블리 컨베이어(압착기)를 통해 키트를 제조하였다.

보다 구체적으로, 3개의 반응선(Test line)을 갖도록 제조하였으며, 제1반응선에는 살모넬라 타이피의 O 항원 및 살모넬라 파라타이피 A의 O 항원이 고정되고, 제2반응선에는 살모넬라 타이피의 H 항원이 고정되고, 제3반응선에는 살모넬라 파라타이피 A의 H 항원 및 살모넬라 파라타이티 B의 H 항원이 고정되도록 제조하였다(도 1).

실시예 8. 양성 결과 판독

상기 실시예를 통해 장티푸스 및 파라티푸스를 구별하며 동시 감별진단이 가능한 키트를 제조하였다.

그 결과, 도 2에서 볼 수 있듯이, 시료를 투입하였을 때, 장티푸스에 대한 양성반응이 나올 때는 제1반응선 및 제2반응선에 반응이 나타나고, 파라티푸스에 대한 양성반응이 나올 때는 제1반응선 및 제3반응선에 반응이 나타나도록 구성하였다.

실시예 9. 특이적 항원-항체 반응 확인

본 발명의 키트의 장티푸스 및 파라티푸스 항체정성진단 성능을 확인하기 위하여, 토끼면역 혈청을 이용해 이의 성능 평가를 수행하였다.

보다 구체적으로, 음성혈청을 준비하였고, 자체적으로 제작한 장티푸스 토끼 면역 혈청 및 파라티푸스 토끼 면역 혈청을 이용하여 상기 키트 시제품에 대한 평가를 수행하였다.

그 결과, 도 3에서 볼 수 있듯이, 음성혈청에서는 검체선에서 어떠한 반응도 일어나지 않았으며, 살모넬라 타이피에 감염된 혈청에서는 살모넬라 타이피 항원이 점적된 제2반응선에서 발색 반응이 나타났고, 살모넬라 파라타이피 A가 감염된 혈청 및 살모넬라 파라타이피 B가 감염된 혈청에서는 살모넬라 파라타이피 항원이 점적된 제3반응선에서 반응이 나타났다.

이를 통해, 본 발명의 키트가 살모넬라 타이피 또는 살모넬라 파라타이피 A, B에 감염된 혈청과 특이적으로 반응하는 것을 확인하였다.

실시예 10. 민감성 및 특이성 확인

본 발명의 키트의 민감성 및 특이성을 시험하기 위하여, 양성 검체 및 음성 검체를 검체희석액에 희석하여, 정성 진단 시험을 수행하였다.

보다 구체적으로, 인체자원은행의 장티푸스 확진 환자로부터 수집한 양성 검체를 분양받아 검체희석액 300μl을 첨가하여, 10건의 양성 검체를 본 발명의 키트에 15분간 반응시켰다.

그 결과, 도 4에서 볼 수 있듯이, 10건의 양성 검체 결과 중 8건에 양성으로 나타났다.

또한, 일반인 음성 검체 3μl에 검체희석액 300μl을 첨가하여, 20건의 음성 검체를 본 발명의 키트에 15분간 반응시켰다.

그 결과, 도 5에서 볼 수 있듯이, 20건의 음성 검체 결과 중 20건 모두 음성으로 나타났다.

이를 통해, 본 발명의 키트가 음성 검체에 반응을 하지 않으며, 높은 확률로 양성 검체에 양성 반응을 나타내는 것을 확인하였다.

실시예 11. 교차반응 확인

장티푸스 및 파라티푸스와 유사 또는 기타 질병에 의하여 판독이 됨으로써 오류가 생기는지 여부를 확인하기 위해, 본 발명에서 제조한 키트를 통해 교차반응 여부를 확인하고자 하였다.

보다 구체적으로, 쯔쯔가무시증(Scrub typhus) 양성 검체 2건, 신증후군출혈열(HFRS) 양성 검체 2건, 렙토스피라증(Leptospirosis) 양성 검체 2건 및 말라리아(Malaria) 양성 검체 1건을 이용하여 교차반응 여부를 확인하였으며, 각 검체 3μl를 이용하여, 본 발명의 키트에 15분간 반응시켰다.

그 결과, 도 6에서 볼 수 있듯이, 상기 4종의 질병에 대한 검체 모두, 본 발명의 키트에서 음성으로 나타났다.

이를 통해, 본 발명의 키트가 장티푸스 및 파라티푸스 이외의 질병과의 교차반응이 없어, 장티푸스 및 파라티푸스를 특이적으로 검출 및 진단할 수 있음을 확인하였다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 다른 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변경된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

살모넬라 타이피(Salmonella Typhi)의 H, O 항원, 살모넬라 파라타이피(Salmonella Paratyphi) A의 H, O 항원, 및 살모넬라 파라타이피 B의 H 항원을 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트.
청구항 1항에 있어서, 상기 살모넬라 타이피의 H 항원을 포함하고, 살모넬라 타이피의 O 항원을 포함하고, 살모넬라 파라타이피 A의 H 항원을 포함하고, 살모넬라 파라타이피 A의 O 항원을 포함하고, 살모넬라 파라타이피 B의 H 항원을 포함하는 것인, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트.
제1항에 있어서, 상기 키트는 3개의 반응선(Test line)을 가지며, 제1반응선에는 살모넬라 타이피의 O 항원 및 살모넬라 파라타이피 A의 O 항원이 고정되고, 제2반응선에는 살모넬라 타이피의 H 항원이 고정되고, 제3반응선에는 살모넬라 파라타이피 A의 H 항원 및 살모넬라 파라타이티 B의 H 항원이 고정된 것인, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트.
제1항에 있어서, 상기 제1반응선 및 제2반응선에서 반응이 일어날 경우 시료가 장티푸스에 감염된 것으로 진단하는 것인, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트.
제1항에 있어서, 상기 제1반응선 및 제3반응선에서 반응이 일어날 경우 시료가 파라티푸스에 감염된 것으로 진단하는 것인, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트.
제1항에 있어서, 상기 키트는 장티푸스 및 파라티푸스에 대한 IgM 항체 및 IgG 항체 둘 모두를 검출하는 것을 특징으로 하는, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트.
제1항에 있어서, 상기 키트는 장티푸스 및 파라티푸스에 대한 IgM 항체를 검출하는 스트립, 및 장티푸스 및 파라티푸스에 대한 IgG 항체를 검출하는 스트립을 포함하는 것인, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단 키트.
살모넬라 타이피(Salmonella Typhi)의 H 항원, 살모넬라 타이피의 O 항원, 살모넬라 파라타이피(Salmonella Paratyphi) A의 H 항원, 살모넬라 파라타이피 A의 O 항원 및 살모넬라 파라타이티 B의 H 항원을 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스 동시 감별진단용 조성물.
제1항 내지 제7항의 키트를 이용하여, 개체로부터 분리된 시료에서 항체를 검출하는 단계를 포함하는, 장티푸스 및 파라티푸스의 진단을 위한 정보제공방법.
제8항에 있어서, 상기 제1반응선 및 제2반응선에서 반응이 일어날 경우 시료가 장티푸스에 감염된 것으로 진단하는 것인, 장티푸스 및 파라티푸스의 진단을 위한 정보제공방법.
제9항에 있어서, 상기 제1반응선 및 제3반응선에서 반응이 일어날 경우 시료가 파라티푸스에 감염된 것으로 진단하는 것인, 장티푸스 및 파라티푸스의 진단을 위한 정보제공방법.
제9항에 있어서, 상기 키트는 장티푸스 및 파라티푸스에 대한 IgM 항체 및 IgG 항체 둘 모두를 검출하는 것을 특징으로 하는, 장티푸스 및 파라티푸스의 진단을 위한 정보제공방법.