JPS6045533A - プロスタグランジン調節剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はカワラタケ属に属する担子菌由来の蛋白多糖体
を主成分とづるプロスタグランジン調節剤に係り、詳し
くはクレスチンよりなるプロスタグランジン調節剤に関
する。該クレスチンは、抗腫瘍剤゛として既に社会に提
供されており、極めＣ低毒性で、且つ腸内菌Ｍ撹乱など
の心配がなく、長期投与が可能である。また、変異原性
やアレルギー反応などにも影響を与えず、したがって、
健康な人に対する催奇形成や、アレルギー反応の危険も
なく、極めて安全な物質である。

一般にプロスタグランジン（以下ＰＧｓと略ず）は全身
の各種臓器に見い出され、その臓器の機能と密接に関係
する作用を有づる。ＰＯ３の生理作用、薬理作用も既に
現イ［までに、極め（中広いしのを有することが判明し
ている。循環器系の薬理作用として、血管の拡張、収縮
に関与し、血１十の１ｒ、降下をもたらし、また血小板
凝集に対しく拮抗的、誘発あるいは促進作用を承りこと
により動脈硬化、脳卒中に対して治療並びに予防薬どし
て有用である。さらに抗不整脈作用、抗「んイく作用、
呼吸促進作用、鎮咳・去たん作用、抗アレルギー作用、
抗アナフイラキシー作用、免疫調整作用、抗潰瘍作用、
利尿作用、子宮の運動促進。

閑張促進、緊張抑制作用、癌の転移防止作用等がみられ
Ｃおり、利尿剤、抗潰瘍剤２分娩促進剤。

避妊剤、妊娠中絶剤、抗癌剤さらには老化防止剤として
有用である。

本発明考等は、本発明の前記蛋白多糖体が抗腫瘍効果に
加えてプ１」スタブランジン調節作用の薬理効果をも有
していることを知見し、本発明に至ったものである。本
発明蛋白多糖体がこれらＰＧｓを調節覆ることは、既述
した種′々の疾患の治療並びに予防に役立つことが期待
される。

本発明プロスタグランジン調節剤の活性成分である蛋白
多糖体は、例えば特公昭４６−１７１４９号公報。

特公昭５１−３６３２２号公報、特公昭５６−１４２７
４号公報。

特公昭５６−１４２７６号公報、特公昭５６−３９２８
８号公報などに記載されている公知の物質であり、カワ
ラタケ属に属づる担子菌を１！３　ｆｉ　シ’を得られ
る菌糸体培養物（３ｒｏｔｌ＋）又は子実体の熱水又は
アルカリ溶液による抽出物であって、約１８−３８％の
蛋白質を含み、５．００（１〜３００，０００　（ＨＡ
遠心分１１１１測定Ｖ、）の分子（６）を有するもので
ある。本発明の蛋白多糖体のうち、カワラタケ菌糸体［
［ＥｌでＭ−Ｐ　２４１２（ＡＴＣＣ２０５４７）　］
由来の蛋白多糖体は、前記したとおり、クレスチンとい
う商品名で市販されているものでありく最近の新薬　第
２８集１４−１６ページ、　１９７７年及び第２９集９
６〜１０１ページ、　１９７８イ１１医薬品要麗　第１
３４６ページ、昭和５４年５月第６版。

薬業時報社発行、医療薬　日本医薬品巣箱７版第２４０
ページ、　１９８３年、桑業時報社発行）、１）Ｓ、−
にとも呼称されているものであって、その竹状の一端を
示せば次のとおりである。

主要画分の糖部分はβ−］〕−グルカンぐ、このグルカ
ン部分の構造は１→３，１→４および１→６結合を含む
分枝描造であり、蛋白質の構成アミノ酸は、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ酸とバリン、ロイシ
ン等の中性アミノ酸が多く、リジン、アルギニン等の塩
基性アミノ酸は少ない。水に可溶で、メタノール、ピリ
ジン、クロロボルム、ベンゼン、ヘキサンには殆んど溶
けない。約１２０℃から徐々に分解する。

本発明の活性物質である前記蛋白多糖体は、ＰＧＡ、Ｐ
ＧＢ、ＰＧＣ，ＰＧＤ、ＰＧＥ、Ｐ、ＧＦ。

ＰＧＧ、ＰＧＩ−１，ＰＧ　Ｉ等のＰＧＳ　、ＴＸＡ、
ＴＸＢ並びにそれらの代謝産物の調節に関与している。

しかも該活性物質はこれらの１種のみならず数種のＰＧ
ｓの調節をしている。

該活性物質がｌ）　Ｇ　Ｓとその代謝物の産生を調節す
ることは次のことより示される。

■　本発明蛋白多糖体は、細胞内メッセンジャーとして
ＰＧｓと密接に関与しているザイクリックアデノシンモ
ノホスフエイト（ＣＡＭ＋１）のレベルを上昇させる（
実施例３参照）。

■　アラキドン酸を出発物質とするリンパ球のＰＧｓ代
謝に関覆るインヒドロ実験で、本発明蛋白多糖体はＰＧ
Ｅ２．　ＰＧＩ）２．６−ｋｅｔｏ−ＰＧＦｌ。、ＰＧ
Ｆ２ＣＬの産生に関与している（実施例１参照）。

■　インビトロで本発明蛋白多糖体が培ｖ１癌細胞のＰ
ＧＥ、ＰＧＦ、、（Ｘの生合成に影菅をりえる（実施例
４参照）。

■　担癌動物に本発明蛋白多糖体を投与し、腫瘍増殖、
腫瘍細胞内Ｐ　Ｇ　Ｅレベルを測定したところ、腫瘍増
殖抑制とともに腫瘍細胞内ＰＧＥレベルが上昇する（実
施例５参照）。また、担癌動物では血漿中の６−ｋｅｔ
ｏ　−Ｐ　Ｇ　Ｆ　が顕著に増ｃＬ 大するが、該蛋白多糖体の投与により正常レベルまで回
復する（実施例７参照）。

■　本発明蛋白多糖体の抗不整脈作用が、プロスタグラ
ンジン代謝阻害剤インドメタシンにＪ：り閉止される（
実施例８参照）。

本発明の蛋白多糖体は、イのｍ性が極めで低く且つ副作
用も殆んど生起しないなど、生体に対しＣ非常に安全な
物質であることが知られている。

本発明の蛋白多糖体の急性毒性値を下記表−１に示す。

表−１ なｊ５、十掲表−１に示される急性毒性値は、下記試験
法により調べたものである。

マウスはＩ　ＣＲ−Ｊ　ＣＬ系、４へ・５週令、体重２
１〜２４１１１のものを、ラットは容量系、４〜５週令
、体重１００〜１５０ｇのものを用いた。本発明蛋白多
糖体の投与経路は、静脈内、皮下、腹腔内および経Ｌ１
の四経路の投与を実施した。本発明の蛋白多糖体を生理
食塩水に溶解して投与し、１日間にわたり、一般症状、
死亡ならびに体重について観察し、観察期間終了後に層
膜剖検した。

表−１に示されるように、ラット、マウスとも投与可能
な最大投与量においてもまったく死亡例は認められず、
ＬＤ５ｏ値の算定が事実上不可能な程に、本発明の蛋白
多糖体は生体に対して極めて安全である。

なお、本発明蛋白多糖体の胃腸に対づる影響を体重９〜
１２ｋｇのピーグル大に該蛋白多糖体を５ａ／四ｍ投与
して９０分後の胃の出面状況を調べることにより調べた
が、本発明蛋白多糖体の投与による出血は全くみられな
かった。

このように、本発明の蛋白多糖体は急竹馬竹す極めて低
く、安全な医薬品であり、プロスタグランジン調節剤と
して有用である。

本発明の蛋白多糖体は、ブ［１スタブランジン調節剤と
して用いる場合、任意の剤型にづることができる。又、
投与も各経路０行なわれる。また、アスピリンやインド
メタシンなどの従来のプ１」スタブランジン調節剤と併
用することがで′きる。

経口投与の場合には、それに適用される錠剤、顆粒剤、
散剤、カゾレル剤などは、それらの組成物中に製剤上一
般に使用される結合剤、包含剤、賦形剤、潤滑剤、崩壊
剤、湿潤剤のＪ：うな添加物を含有していてもよく、又
経日用液体製剤とじて用いる場合は、内用水剤、振とう
合剤、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤の形態であってもよ
く、又使用づる前に再溶解させる乾燥生成物の形態であ
ってもよい。さらに、このような液体製剤は普通用いら
れる添加剤、保存剤のいずれを含有してもよい。

注射用の場合には、その組成物は安定剤、緩衝剤、保存
剤、等張化剤などの添加剤を含んでいてもよく、単位投
勾聞アンプル、又は多投塔間容器中で提供される。なお
、上記組成物は水溶液、懸濁液）Ｂ液、油性または水性
ビヒクル中の乳液のような形態であつＣもに＜、一方晶
性成分は使用する前に適当なビヒクルたとえば発熱物質
不含の滅菌した水で再溶解させる粉末であってもよい。

本発明の１０スタグランジン調節剤は人間及び動物に経
口的または非経口的に投与されるが経口投１ノがりＩま
しい。経］コ的投ちは舌Ｆ投勺を包含覆る。非経口的投
与は注射、例えば皮下、筋肉、静脈Ｕ−川、点滴などを
含む。

本発明の１０スタグランジン調節剤の投句行１は動物か
人間により、また年齢、個人差、病状などに影響される
ので、場合によつＣは下記範囲外の量を投与づる場合も
生ずるが、一般に人間を対象とする場合、本発明活性物
質の経口投与量は体重１ｋｉ７、１日当り１０〜１００
０ｍｇ、好ましくは２０〜６００ｍｇを１回から３回に
分りで投与する。

実施例１ リンパ球に取り込まけたアラキドン酸のＰＧＳへの代謝
に対するクレスチンの影響 ＢＡＬＢ／Ｃマウス牌リンパ球全リンパ球、１Ｘ１０　
個／ｍｌに調整し、そこに　ｌ」−アラキドン酸を２μ
Ｃ１添加し、３７℃にて９０分インキｌベートシた。そ
のものを３回培地で洗った。再び１×１０７個／Ｉｎ＋
にして、シリコン化した試験管に２１１１分注した。こ
の試験管を６本用意し、２木は＝ｊントＤ−ルとし、２
本はＩＪ＃／ｍｌのクレスチンを加え、残りの２木には
１００ｇ／ｍｌのクレスチンを加えた。

３７’Ｃで６０分インキｊベートし、その俊０℃にで１
２００　ｒｐｔｌｌｔｃ　５分間遠心分離した。そのペ
レットをとり、２ｍｌの培地を加えたものに、５１１１
の石油エーテルを入れて振とうした。石油ニーデル層を
除去し、残った水層を、０．５ＮのトＩＣＡｌに−Ｕ　
１１１−１３．５に調整した。

その酸性液を５ｍｌのエーテルにて３回抽出し、］−チ
ル層を蒸発乾固して、ジアゾメタン溶液により、エステ
ル化を行なった。このものをメルク着の薄層クロマトグ
ラフィーにて、酢酸エヂル：イソＡクタン：酢Ｍ：水の
９０：　５０：　２０：　１００の容積比の混合溶剤に
て展開し、分ｌ！Ｉｔを行なった。このスポットの同定
は標品ＰＧＤ　、ＰＧＥ２．ＰＧ　Ｆ２．　、６−ｋｅ
ｔＯ−Ｐ　Ｇ　Ｆｌｃｃを用いて行なった。分離したシ
リカゲル層をかきとって、液体シンヂレター液に懸濁し
、カウントをめ、ＰＧｓの変動を調べた。

その結果、クレスチン添加により、ＰＯ［〕　。

ＰＧＦ、、のあきらかな変動、６−ｋｃｔｏ−Ｐ　Ｇ　
Ｉ□□。

Ｐ　Ｇ　Ｆ　の変動がみられｌｊ　（表−２参照）。

Ｌ 表−２ 割」乱１ 摘出つ（ツキ空腹のＰＧｓ生成に及ぽづクレスチンの作
用 日本在来種画性つ（ツギ（体重約ｚｋｇ　）がら空腹片
を摘出し、潅流培養器中テＫ　ｒｃｂｓ−ｂｉｃａｒｂ
ｏｎａｔｃ液、３７℃、９５％０２ト５％Ｃ０２通気条
イ’ｌ　トｒ　３０分間インキュベートし、培養液中に
遊離したＰＧＥ含ｍを測定した。空隔摘出２時間前にク
レスチン１ｇ／ｋｇをＩ！■」投与したところ、非投与
群に比し、ＰＧＥ生成の増加がみられた。

実施例３ ３ａｒｃｏｍａ　１８０胛瘍細胞のｃＡＭＰレベルに及
ぼすクレスチン０作用 ３ａｒｃｏｍａ　１８０担癌マウス腹部より腹水型腫瘍
を取り出し、この細胞１０　個にクレスチン１００ｉ／
ｍ１を加え、室温にて　５分間培養した。培養終了後、
煮沸、ボモゲナイズ、遠心分離を行ない、得られた上清
中のＣＡＭＰｆｉｆｉｌをＧｌｉｍａｎ法により測定し
た。

ＣＡＭＰレベルは、クレスチン投与群では１１８１１ｍ
０１／１０　個細胞、クレスチン非投与群では８９ｐｍ
ｏｌ／１０　個細胞であった。

この結果、クレスチンは癌細胞中のＯＡＭＰを上昇させ
る作用を右していることが認められた、１実施例４ 培養筋細胞のＰＧ［Ｅ、１）Ｇｌ”２ケレベルに及ば４
クレスチンの作用 イーグル培養液に１０％の牛胎児血清を添加した培地１
０ｍ１を、底表面積７５ｃｍ２　の組織培養用ポリスヂ
レン製フラス：］　（Ｃｏｄｅ　Ｎｏ、２５１１０　、
　Ｃｏｒｎｉｎｇ社製（ＵＳＡ））に入れ、ヒト単核性
白血病培養細胞株Ｊ−１１１を５×１０　個移植し、３
７℃、５％Ｃｏ２．９５％空気条件下で７日間培養を行
なった。

培地は、培養開始後２日目及び４日目に新鮮な培地と交
換した。

クレスチンを５ｏＩＪ９／ｍ＋の濃度で添加した。培養
済培地を４℃、　１５００　ｒｐｍで遠心分離し、上清
を得、ＰＧＥとＰ　Ｇ　Ｆ２．レベルをクリ二カルアッ
レイン１（ＵＳＡ）の３Ｈ−プロスタグランジンＥラジ
オイムノアッセイキット及び　１−１プロスタグランジ
ンＦラジＡイ１８ノアツセイキツトを用いて測定した。

そり結果、クレスチン添加により培地中のＰＧＥ及びＰ
ＧＦ２（ｉレベルの減少がみられたく第１図及び第２図
参照）。

実施例５ エールリッヒ癌細胞中ＰＧＥレベルに及はずクレスチン
投与の影響 ８週令の細性Ｃ５７ＢＬ／６マウスにエールリッヒ癌を
１×１０６個皮下移桶し、２週後にニーデルにてマウス
を層殺し、腫瘍を得た。クレスチンを腫瘍移植後の翌日
からＩａ／　ｋｏを連日経口投与した。

腫瘍組織をハサミにて細くきざみ、ガラスホモグナイザ
ーに入れ、メチルアルコールを腫瘍１ｇ当り７ｍｌ添加
し、０°Ｃでホモグナイズ後、濾紙濾過により濾液を得
た。この濾液にりし１０ボルムを２倍容量入れ、Ｊ：り
混合し、４℃で３０分間放置した。

沈澱した蚤白賀を吸収縮退づることにより除き、得た濾
液をロータリーエバボレーターで４０℃以上で乾燥させ
た。この乾固物をクロＬ」ボルム、メタノール、希塩酸
（ｐＨ２，０）と共に分液ローｉ〜に入れ、よく混合さ
せた後の下層の溶液２ｍｌに溶解させた。この溶液のＰ
ＧＥ含■をクリニカルノアッセイ社製　１−１プロスタ
グランジン［ラジオイムノアッセイキットを用いて測定
した。

クレスチン投与群ではＰＧＥ含闇は４．７１１（１／１
ｑ腫瘍、対照群（クレスチンは投与せｆ）はＬ８ｎｇ／
ｌｏ８Ｈであった。

この結果、クレスチン投与群では癌細胞中の１つＧＥの
増量がみられた。

実施例６ クレスチンの癌転移防止効果 ８週令の雌性Ｃ３１−１／１−１ｅマウス尾静脈Ｊ、す
Ｍｌ−１１３４１７７癌細胞２×１０　個を移植し、２
週後に層殺し、肺を摘出し、転移巣をｈ１測した。クレ
スチンを、癌移植の１３．　７．　１時間前および移植
後５゜４１、１７時間後にそれぞれＩＭｋ（ｌｆｆｉを
経口投与した。

クレスチン投与群（１０匹平均）では転移陽性率が６０
％で転移巣の数が２．１であったのに対し、対照群（ク
レスチン投与せず）（１０匹平均）ではそれぞれ１００
％、４．！ｉであった。

この結果、クレスチン投与により転移陽性率及び転移巣
数の減少が確認された。

実施例７ 自然発症高面圧ラッＩ−（Ｓｔ−ＩＲ）の背部皮下にメ
ヂルコラントレン誘発肉腫細胞１×１０　個を移植し、
２週後に腹部大静脈より採血を行ない、血漿を得た。ク
レスチンを腫瘍移植後２４時時間上り１３日間、１０（
ｌｏｍｇ／　ｋｇ量を連日経口投与した。

得られた血漿のエーテル抽出物を薄層クロマトグラフィ
ー（Ｔ　Ｌ　Ｃ＞にて分離し、メチルオキシムシリル誘
導体に導いてから、ガスクロマトグラフィー・スペクト
ラム（ＧＣ−ＭＳ）により、６−ｋｃｔｏ　−Ｐ　Ｇ　
Ｆ　１ａＬの変動を調べた。

担癌クレスチン投与群では６−ｋｅｔｏ　−Ｐ　Ｇ　Ｆ
　ｌ（Ｘの量が４，４ｎｇ／血堕ｍｌであったのに対し
、担癌無処置群（クレスチン投与せず）では１１．Ｏｎ
ｇ／血漿ｍ１であった。囚みに、非担癌無処同対照ｎＹ
の６−　ｋ　（！　ｔ、。

−Ｐ　Ｇ　Ｆ　は３．Ｏｎｇ／血９１ｍ１であった。。

ｃｔ その結果、腫瘍移植動物では血漿６−ｋｃｔｏ−Ｉ〕Ｇ
「　レベルの上昇がみられたが、腫瘍移植後、り１α レスヂンを投与した動物では、非担癌１１常動物のそれ
と同レベルであった。

実施例８ クレスチンの抗不整脈作用 Ｗ　１ｓｔａｒ系雌性ラツト（体重約２００（１）にウ
レタンを投与して麻酔口しめた後、不整脈誘起剤Ｃある
ａｃｏｎｉｔｉｎｃを５０＃／ｋｇ静脈内投与覆ること
にＪ、す、不整脈状態を誘起せしめた。ａｃｏｎｉｔｉ
ｎｅ投与１時間前にクレスチンＩａ／　ｋａを経口投与
したところ、ａｃｏｎｒｔｔｎｅ投与によるＥ　ＣＧ　
（Ｅ　！ｅｃｔｒｏ　−ｄｉａｇｒａｍ　）の乱れが正
常に回復される傾向がみられ１こ。

次に、ａｃｏｎｉｔｉｎｅ投与の１時間及び１分前に１
１コスタグランジン代謝阻害剤であるインドメタシンを
１０ｍｇ／　ｋｏ静脈内投与すると、クレスチンの抗不
整脈作用が消失した。このことからクレスチンの抗不整
脈作用はプロスタグランジンを介していることが示され
た。

実施例９ カプセル剤の作製 圧力式自動充填機を用い、０号硬カプセルにクレスチン
を３３０ｍ（ｌ充填し、カブ廿ルを作製した。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は、実施例４に於【）る培養癌細胞の
ＰＧＥ、ＰＧＦ　に及はり本発明蛋白多糖２α。 体の作用を示ずグラフである。 代理人弁理士今　村　元 第１図 第２図 ［ 培養開け２に日数 ］−ル

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）　カワラタケ属に属Ｊる担子菌を培養して得られ
   る菌糸体又は子実体の熱水又はアルカリ溶液による抽出
   物であって、約１８〜３８％の蛋白質を含み、分子■が
   ５，０００〜３００，０００　（超遠心分離測定法）で
   ある蛋白多糖体を活性成分とりるプロスタグランジン調
   節剤。
2. （２）　前記蛋白多糖体がクレスチンであることを特徴
   とする特許請求の範囲第１項に記載のプロスタグランジ
   ン調節剤。