JPS6043357B2 - 新規物質ｓｕ−１およびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規物質ＳＵ−１およびその酸付加塩ならびに
その製造法に関する。

こ）においてＳＵ一１の酸付加塩はＳＵ−１、１分子と
酸１〜４当量との反応により生成されるモノ、ジ、トリ
、テトラ塩を意味する。

この場合、酸としては塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸
、硫酸、リン酸、炭酸、硝酸などの無機酸、酢酸、フマ
ル酸、リンゴ酸、クエン酸、マンデル酸、アスコルビン
酸、酒石酸、コハク酸などの有機酸があげられる。本発
明者らは、種々の微生物を用いて新規物質の生産につい
て研究した。その結果ミクロモノスポラ属に属するある
種の微生物の培養物中に既知の抗生物質とは種々のクロ
マトグラフィーに於ける挙動が異なる物質が存在するこ
とを見出した。本発明者らは該物質を該培養物中より精
製・単離し、その理化学的性状を調べた結果、該物質が
新規な物質であることをみいだし、これをＳＵ−１と命
名した。以下、本物鄭Ｕ−１ならびにその製造法につい
て詳細に説明する。

本発明にかかわるＳＵ−１の遊離塩基の理化学″的性状
は次の通りである。

（１） 塩基性の白色粉末 （２）元素分析値（％） Ｃ４９．６０ Ｈ８．７９ （５）紫外線部吸収スベクトルニ本物質の水溶液の紫外
部吸収スペトルは２２０〜３６０ｒ１ｗＬの間で特徴的
な吸収極大を示さず、末端吸収を示すのみである。

（６）本物質は、水にきわめて易溶、メタノールにも溶
け、エタノール、アセトンにもやや溶けるが、クロロホ
ルム、ベンゼン、酢酸エチル、酢酸ブチル、エーテル、
ブタノール、石油エーテル、ｎ−ヘキサンなどの有機溶
媒には不溶である。

（８）ＰＭＲスベクトルニ本物質の重水溶液（塩酸酸性
ＰＤＯ．８）中でのＰＭＲスペクトルは次のようなケミ
カルシフト値を与える。

（単位はＰｐｍ）（９）マススベクトルニ本物質のマス
スペクトルは次のようなＭ＋Ｈイオンおよびフラグメン
トイオンを与える。但し括弧内は精密質量測定により得
られた組成式を示す。これから本物質の分子量は４６４
、分子式はＣ２ＯＨ４ＯＮ４Ｏ８と決定された。

またこの分子式から得られる本物質（１水和物）の元素
分析値（％）の理論量はＣ４９．７８、Ｈ８．７７、Ｎ
ｌｌ．６ｌとなる。［相］ 本物質の各種展開剤による
ベーパークロマトグラフィーおよび薄層クロマトグラフ
ィーのＲｆ値は、第１〜第３表の通りである。

なお、既知物質との比較のために、近縁と思われるもの
を選び、そのもののＲｆ値を併記する。上昇式ベーパー
クロマトグラフィー（ベーパーとして東洋戸紙ＮＯ．５
ｌを使用し２８℃で展開）でＳＵ一１のＲｆ値シリカゲ
ル薄層クロマトグラフィー〔Ｅ．Ｍｅｒｃｋ製Ｋｉｅｓ
ｅｌ．Ｇｅｌ６Ｏ（室温で行う。

展開時間３時間）〕でのＲｆ値※展開剤１：１０％酢酸
アンモニウム、メタノー ル（１：１）（容量比）※展
開剤■：クロロホルム、メタノール、濃ア ンモニア水
（１：１：１）（容量比）の下 層部※※特開昭５４−
５９２０鰻公報に記載された抗生 物質※※※特開昭５
４−１１７４７７号公報に記載された抗 生物質※※※
※特開昭５４−１３５７０４号公報に記載の物質※※※
※※ＲｆＣｌ＝※※※※※※特開昭５３−５６６４吋公
報に記載さ れた抗生物質展開剤として、クロロホルム
、メタノール、１７％アンモニア水（２：１：１）（容
量比）の下層一部を用いた上昇式ベーパークロマトグラ
フィー（室温で行う。

展開時間１満間）でのＲｆ値１特開昭５３−５６６４吋
公報に記載された抗生名質２特開昭５３−９０２４１号
公報に記載された抗生牡質３特開昭５３−１４４５４７
号公報に記載された抗生形質４特開昭５４−１９９豹号
公報に記載された抗生骸質５特開昭５４−５９２屹号公
報に記載された抗生骸質５特開昭５４−１１７４７７号
公報に記載された抗生物質７特開昭Ｍ−１３５７０４号
公報に記載された抗生物質次にＳＵ−１の抗菌スペクト
ル（ＭＩＣγＩｍｔ）を第４表に示す。

測定はＰＨ７．２のハード・インフュージョン●プロス
（ＤｉｆｃＯ）培地を用い、寒天稀釈法によつた。ｌス
タフイロコツカス・アウレウスＫＹ８９７ＯＯ．６２〔
，ＡＮＴ（４゛）〕※※※ジエンタマイシンアセチルト
ランスフエラー ゼタイプＩを産生※※アミノグリコ
シドヌクレオチジルトランス フェラーゼ産生このよ
うにＳＵ−１は広範囲のグラム陽性菌や陰性菌に対して
きわめて強い抗菌力を有している。

その広範囲で強力な抗菌性の中でも、従来有効な抗生物
質が少ないとされてきたプロテウス属やプシユードモナ
ス属の菌に対してもきわめて有効であることは著しい特
徴である。以上述べたようなきわめてすぐれた抗菌性を
有するＳＵ−１は、抗菌剤として医薬上有用である。

さらにＳＵ−１は実験室用ガラス器具および装置の殺菌
など、衛生上の目的で消毒剤に用いることもできる。つ
ぎに本発明を他の物質を比較してみる。

ミクロモノスポラ属菌の生産する水溶性、塩基性で且つ
広範囲の抗菌スペクトルを有する抗生物質としては、ジ
エンタマイシンＣＯｍｐｌｅｘ（Ｍ．Ｊ．Ｗｅｉｎｓｔ
ｅｉｎらＡｒｌｔｉｍｉｃｒＯｄ．Ａｇ．ＣｈｅｍＯｔ
ｈｅｆ．、１９６３、１およびＤ．Ｊ．ＣＯＯｐｅｒら
Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．世、３４２、１９６９ＳＪ
．Ａ．ＷｅｉｔＺらＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂ．Ａｇ．Ｃｈ
ｅｍＯｔｈｅｒ．、２、４６４、１９７２）、アンチバ
イオチツクＮＯ．４６Ｏ（特公昭４６−１６１５３号公
報）、シソマイシン（Ｍ．Ｊ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら、
Ｊ．ＡｎｔｉｂｌＯｔｉｃｓ，．？、５５１、５５５、
５５９、１９７０）、ベルダマイシン（Ｍ．Ｊ．Ｗｅｉ
ｒｌｓｔｅｉｎら、ＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂ．Ａｇ．Ｃｈ
ｅｍＯｔｈｅｒ．、Ｌｌ２４６、１９７５）、アンチバ
イオチツクＧ−５２（Ｊ．Ａ．Ｍａｒｑｕｅｚら、Ｊ．
ＡｎｔｉｂｌＯｔｊｃｓ，．幻、４８３、１９７臥およ
びＰ．Ｊ．Ｌ．Ｄａｎｉｅｌｓら、Ｊ．ＡｎｔｉｂｉＯ
ｔｉｃｓ．ｓ幻、４８８、１９７６）、ＸＫ−６２−２
（特公昭５０−３９１５５号公報）、ホーテイマイシン
Ａ（特公昭５１−４５６７５号公報）、ホーテイマイシ
ンＣ（特開昭５２−１８８８８号公報）、ホーテイマイ
シンＤ（特開昭５３−５６６４０号公報に記載）、ＸＫ
−６２−３（特開昭５３−１４４５４７号公報に記載）
、ＸＫ−６２−４（特開昭５４−１９９３９号公報に記
載）、ＳＵ−２（特開昭５４−５９２０２号公報に記載
）ＳＵＭ−３（特開昭５４−１１７４７７号公報に記載
）、ＳＵＭ−４（特開昭５４−１３５７０４号公報に記
載）などの抗生物質がある。しかしながら第１、２およ
び３表に示されるように、ベーパークロマトグラフィー
及び薄層クロマトグラフィーの挙動に於いてＳＵ−１は
上記のいずれとも異なつている。さらにミクロモノスポ
ラ属に属する微生物以外の放線菌が生産する水溶性、塩
基性で且つ広範囲の抗菌スペクトルを有する抗生物質と
して、ストレプトマイシン、リボスタマイシン、リビド
マイシン、ネオマイシン、カナマイシン、パロモマイシ
ン、ネブラマイシン、などがあげられるが、ＳＵ−１は
第３表から明らかのごとく、Ｒｆ値においてこれらの抗
生物質とは区別される。さらにマススペクトルのデータ
からも、ＳＵ−１は他の抗生物質とは明らかに区別され
る。以上のことからＳＵ−１は新規な抗生物質と考えら
れる。次に本発明におけるＳＵ−１の製造法について説
明する。

ＳＵ−１はミクロモノスポラ属に属するＳＵ−１生産性
菌株を栄養物中にＳＵ−１を生成、蓄積せしめ、該培養
物から該物質を採取することによつて得ることができる
。

本発明において利用される微生物としては、ミクロモノ
スポラ属に属し、ＳＵ−１生産能を有する菌株であれば
いずれも使用でき、具体例としてはミクロモノスポラ・
サガミエンシスＳＵ−２（微工研菌寄４２３（１）ｊ＋
）、（ＮＲＲＬｌｌｌ８２）（特願昭５２一１２４０（
至）号明細書に記載）があげられる。

この菌種の菌学的性質は特公昭５０−９３１５５号に記
載されている。ＳＵ−１を製造するための培養は次の方
法により行なう。

即ち本発明において用いる微生物の培養においては通常
の放線菌の培養法が一般に用いられる。

培養のための栄養源としてはいろいろのものが用いられ
る。炭素源としてはブドウ糖、澱粉、デキストリン、マ
ンノース、フラクトース、シュークローズ、糖蜜などが
単独または組み合わせて用い”られる。無機および有機
窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、などがまた
天然窒素源としてはペプトン、肉工キズ、酵母工キズ、
乾燥酵母、コーン・スチーブ・りーカー、大豆粉、カザ
ミノ酸、ソリユブルベジタブル●プロテイン、綿実ガス
などが単独または組み合せて用いられる。そのほか必要
に応じて食塩、塩化カリウム、炭酸カルシウム、燐酸塩
などの無機塩類を適当に加えるほか、使用菌の生育やＳ
Ｕ−１の生産を促進する有機物や無機物を適当に加える
ことができる。培養法としては、液体培養法、とくに深
部攪拌培養法がもつとも適している。培養温度は２５〜
４０℃、ＰＨは中性付近で培養することが望ましい。液
体培養で通常１日ないし１２日間培養を行うとＳＵ一１
が培養液中に蓄積される。培養液中の生成量が最大に達
したときに、培養を停止し、培養液中より目的物を精製
単離する。培養液からのＳＵ−１の精製単離は微生物代
謝産物をその培養液から単離するためにふつう用いられ
る分離・精製の方法が利用される。

ＳＵ−１は、前述の如く水溶性、塩基性物質なので、い
わゆる水溶性・塩基性物質の精製によく用いられる方法
により精製を行うことができる。

すなわちカチオン交換樹脂による吸脱着法、セルロース
カラムクロマトグラフィー、セフアデツクスＬＨ−２０
カラムによる吸脱着法、シリカゲルクロマトグラフィー
、カーボンクロマトグラフィーなどの方法を適当に組み
合わせて行なうことができる。また本物質の遊離塩基は
アセトンに溶けるが、硫酸塩は同溶液に溶けにくいので
、この点を利用して本物質の遊離塩基または硫酸塩を単
離・精製することができる。次に培養液からＳＵ−１の
精製・単離の一例を示す。

培養終了後、培養液から固形物を除き、得られる培養戸
液を弱アルカリ性に調整した後、カチオン交換樹脂アン
パーライトＩＲＣ−５０（ローム●アンド・ハース社製
、Ｕ．Ｓ人）（ＮＨ４＋型）に通して活性物質を吸着し
、水洗後ボーアンモニア水で活性物質を溶出する。

活性区分を集め減圧濃縮後、弱アルカリ性に調整し、こ
れをアンパーライトＣＧ−５０タイプＩ（ローム・アン
ド・ハーズ社製）、Ｕ．Ｓ．Ａ）（ＮＨ４＋型）に通し
て活性物質を吸着せしめる。水洗後稀アンモニア水で活
性物質を溶出する。数個の微量成分が溶出された後、Ｓ
Ｕ一１が溶出されてくる。ＳＵ−１を含む活性区分を集
め減圧下で濃縮乾固て粗物質ＳＵ−１の白色粉末を得る
。つぎにこれを水に溶かし弱アルカリ性に調整し、バイ
オレツクス７０（バイオラツドレＢ．製、Ｕ．Ｓ．Ａ．
）に通して吸着させた後、水洗後、稀アンモニア水で活
性物質を溶出する。数個の微量成分が溶出された後、Ｓ
Ｕ−１が溶出されてくる。この区分を集めて減圧濃縮し
、残渣を少量の水に溶かし、凍結乾燥を行うことにより
精製されたＳＵ−１を得ることができる。上記の精製工
程中の活性物質ＳＵ−１の動向は、東洋枦紙ＮＯ．５ｌ
を用い上昇式ベーパークロマトグラフィーによりチェッ
クする。展開溶媒としては、クロロホルム、メタノール
、１７％アンモニア水（容量比２：１：１）の下層を用
い、６〜川時間室温にて展関する。以上に実施例によつ
て本発明のＳＵ−１の製造法について具体的に説明する
。

実施例１ Ａミクロモノスポラ●サガミエンシスＳＵ−２の培養：
種菌としてミクロモノスポラ●サガミエンシス（Ｍｉｃ
ｒＯｍＯｎＯｓｐＯｒａｓａｇａｍｉｅｎｓｉｓ）ＳＵ
−２（微工研菌寄第４２３吋ＮＲＲＬｌｌｌ８２）を用
いる。

第１種培地としては、スタビローズＫ〔松谷化学（株）
製〕２％（ＷＩＶ）（以下同じ）、グルコース０．５％
、ペプトン０．５％、酵母工キズ０．５％、肉工キズ０
．３％、炭酸カルシウム０．２％（殺菌前ＰＨ８．Ｏ）
の培地を用いる。

種菌１白金耳を、大型試験管中１０ｍＬの上記培地に植
菌し、３０℃で３日間振盪培養する。この種培養液１０
ｍｔを２ｅバッフル付きエルレンマイヤーフラスコ中に
入つた３５０ｍｔの第１種培地と同じ組成の第２種培地
に植菌する。第２種培養は３０℃で２日間振盪培養する
。この種培養液１．５ｅ（フラスコ５本分）を３０′容
量のジヤーフアーメンター中第１種培地と同じ組成の第
３種培地１５′に植菌し。３４゜Ｃで２峙間通気攪拌方
式（回転数２５０ｒ″Ｐｍｌ通気量１５ｅ１ｍｉｎ）に
より培養を行う。

最後にこの第３種培養液５ｅを３００ｅ容量のタンク中
の発酵培地１５０ｅに植菌する。発酵培地組成はスタビ
ローズＫ４％、ソイビーンミール（ＳＯｙｂｅａｎｍｅ
ａｌ）１％、フアーマメデイア（Ｐｈａｒｍａｍｅｄｉ
ａ）（ＴｒａｄｅｒＯｉｌＭｉｌｃＯｍｐａｎｙ製、Ｕ
．Ｓ．Ａ）２％、大豆力ティン０．５％、燐酸２カリウ
ム０．０２５％、硫酸マグネシウム０．０５％、カルシ
ウムフイチン０．２％、コーンオイル（ＣＯｍＯｌｌ）
０．１％、硫酸第１鉄０．０１５％Ｌ−グルクミン０．
０００１％、Ｌ−シスチン０．００５％、β−アラニン
０．００５％、ニコチン酸０．０００５％、パントテン
酸カルシウム０．０００５％、硫酸亜鉛（７水塩）０．
０００５％、カリウム明ばん（２４水塩）０．００１％
、モリブデン酸アルミニウム（４水塩）０．０２５％（
殺菌前ＰＨ８．Ｏ）の培地を用いる。

この発酵は３０゜Ｃで３０日間通気攪幻培養方式（回転
数１８０ｒ′Ｐｍｌ通気量１５０ｅ１ｍｉｎ）により行
う。１ＳＵ−１の精製単離 前記培養終了後、培養液のＰＨを１２Ｎ一硫酸でＰＨ２
．Ｏに調整し、８０℃で１０分間加熱攪拌する。

そののち炉別助剤としてラジオライト＃６００（昭和化
学工業（株）製〕を２ｋ９加え、菌体を淵別する。この
戸液をダイヤイオンＨＰＫ−２５（三菱化成製）（ＮＨ
４＋型）１０ｅを充填したカラムに通し、流水液は捨て
る。水で樹脂を洗滌後ボーアンモニア水で溶出し、活性
物質のある画分を集め減圧下で３０ｅまで濃縮する。濃
縮液を？塩酸でＰＨ８．Ｏに調整したのちアンパーライ
トＩＲＣ−５０（ＮＨ４＋型）４ｅを充填したカラムに
通し、水洗後、△−アンモニア水で活性物質を溶出し、
活性区分を集めて減圧下て乾固する。残渣を水に溶かし
、ＰＨ８．Ｏに調整した後アンパーライトＣＧ−５０タ
イプＩ（Ｎｌｌｌ＋型）２００ｍ１を充填したカラムに
通し、水洗後０．２Ｍ一塩化アンモニウムを含む０．１
Ｎアンモニア水にて溶出する。始めに数個の微量成分が
溶出されたあとＳＵ−１が溶出されてくる。ＳＵ−１を
含む画分を集めて酷塩酸にてＰＨ７．８に調整後アンパ
ーライトＩＲＣ−５０（ＮＨ４＋型）５０ｍｔを充填し
たカラムに通塔し、水洗後１Ｎ−アンモニア水で溶出す
る。活性物質を含む区分を濃縮し、凍結乾燥を行なうと
、粉末５８ｍ９が得られる。これを少量の水に溶かし、
ＰＨ７．８に調整後、バイオレツクス７０（ＮＨ４＋型
）１０ｍ１を充填したカラムに通し、水洗後０．１Ｍ酢
酸アンモニウムを含む０．０６Ｎ−アンモニア水で溶出
する。溶出画分を５ＴｒＬ１ずつ分取し、活性区分を前
述の方法に検出しＳＵ−１を含む画分を集める。この画
分を？塩酸でＰＨ７．７に調整し、アンパーライトＣＧ
−５０タイプＩ（ＮＨ４＋型）１０ｍ１を充填したカラ
ムに通し、水洗後１−Ｎアンモニア水で溶出し、活性区
分を集めて減圧下で濃縮後、凍結乾燥を行なうとＳＵ−
１の遊離塩基１０．５ｍ９の精製標品が得られる。実施
例２ 実施例１と同様に実施して得られたＳＵ−１遊離塩基５
ｍ９を水２ｍ１に溶かし、０．５Ｎ硫酸０．３ｍｔを加
える。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるＳＵ−１およびその酸付加塩。 ２ ミクロモノスポラ属に属するＳＵ−１生産菌を栄養
   培地に培養し、培養液中にＳＵ−１を生成せしめ、該培
   養物から該物質を採取することを特徴とするＳＵ−１の
   製造法。