JPS5913192B2 - 新規物質ｕａａ−３およびその製造法 - Google Patents
新規物質ｕａａ−３およびその製造法Info
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- JPS5913192B2 JPS5913192B2 JP9579078A JP9579078A JPS5913192B2 JP S5913192 B2 JPS5913192 B2 JP S5913192B2 JP 9579078 A JP9579078 A JP 9579078A JP 9579078 A JP9579078 A JP 9579078A JP S5913192 B2 JPS5913192 B2 JP S5913192B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規物質ＵＡＡ−３訃よびその酸付加塩ならび
にその製造法に関する。
にその製造法に関する。
ＵＡＡ−３は広範囲のグラム陽性菌や陰性菌に対して強
い抗菌力を有している。
い抗菌力を有している。
従来ミクロモノスポラ属に属する微生物が産生する抗生
物質は数多く知られている。
物質は数多く知られている。
例えばジエンタマイシンＣＯｍｐｌｅｘ（Ｍ．Ｊ．Ｗａ
ｉｎｓｔｅｉｎらＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂ．Ａｇ．，Ｃｈ
ｅｍＯｔｈｅｒ．ｌ９６３，ｌ訃よびＤ．Ｊ．ＣＯＯｐ
ｅｒＣ）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．ｌｌ９，３４２，
ｌ９６９，Ｊ．Ａ．ＷｅｉｔｚらＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂ
．Ａｇ．ＣｈｅｍＯｔｈｅｒ．２，４６４，ｌ９７２）
、アンチバイオチツク腐４６０（特公昭４６−１６１５
３号公報）、シソマイシン（Ｍ．Ｊ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉ
ｎら、Ｊ．ＡｎｔｉｂｌＯｔｉｃｓ，２３，５５ｌ，５
５５，５５９，ｌ９７Ｏ）、ベルダマイシン（Ｍ．Ｊ．
Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら、ＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂ．Ａｇ．
ＣｈｅｍＯｔｈｅｒ．７，２４６，ｌ９７５）、アンチ
バイオチツクＧ−５２（Ｊ．Ａ．Ｍａｒ（１ｕｅｚら、
Ｊ．ＡｎｔｉｂｌＯｔｉｃｓ．２４，４８３，ｌ９７６
およびＰ．Ｊ．Ｌ．Ｄａｎｉｅｌｓら、Ｊ．Ａｎｔｉｂ
ｌＯｔｉｃｓ．２４，４８８，ｌ９７６）、ＸＫ−６２
−２（特公昭５０−３９１５５号公報）、ホーテイマイ
シンＡ（特公昭５１−４５６７５号公報）、ホーテイマ
イシンＣ（特開昭５２−１８８８８号公報）、ホーテイ
マイシンＤ（特開昭５３−５６６４０号公報）、ＸＫ−
６２−３（特願昭５２−５７８２７号明細書）、ＸＫ−
６２−４（特願昭５２−８３０３８号明細書）、ＳＵ−
２（特願昭５２−１２４０３０号明細書）ＳＵＭ一３（
特願昭５３−２２９７０号明細書）、ＳＵＭ一４（特願
昭５３−４３２８５号明細書）などの抗生物質がある。
本発明者らは、種々の微生物を用いて新規物質の生産に
ついて個究した。
ｉｎｓｔｅｉｎらＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂ．Ａｇ．，Ｃｈ
ｅｍＯｔｈｅｒ．ｌ９６３，ｌ訃よびＤ．Ｊ．ＣＯＯｐ
ｅｒＣ）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．ｌｌ９，３４２，
ｌ９６９，Ｊ．Ａ．ＷｅｉｔｚらＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂ
．Ａｇ．ＣｈｅｍＯｔｈｅｒ．２，４６４，ｌ９７２）
、アンチバイオチツク腐４６０（特公昭４６−１６１５
３号公報）、シソマイシン（Ｍ．Ｊ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉ
ｎら、Ｊ．ＡｎｔｉｂｌＯｔｉｃｓ，２３，５５ｌ，５
５５，５５９，ｌ９７Ｏ）、ベルダマイシン（Ｍ．Ｊ．
Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎら、ＡｎｔｉｍｉｃｒＯｂ．Ａｇ．
ＣｈｅｍＯｔｈｅｒ．７，２４６，ｌ９７５）、アンチ
バイオチツクＧ−５２（Ｊ．Ａ．Ｍａｒ（１ｕｅｚら、
Ｊ．ＡｎｔｉｂｌＯｔｉｃｓ．２４，４８３，ｌ９７６
およびＰ．Ｊ．Ｌ．Ｄａｎｉｅｌｓら、Ｊ．Ａｎｔｉｂ
ｌＯｔｉｃｓ．２４，４８８，ｌ９７６）、ＸＫ−６２
−２（特公昭５０−３９１５５号公報）、ホーテイマイ
シンＡ（特公昭５１−４５６７５号公報）、ホーテイマ
イシンＣ（特開昭５２−１８８８８号公報）、ホーテイ
マイシンＤ（特開昭５３−５６６４０号公報）、ＸＫ−
６２−３（特願昭５２−５７８２７号明細書）、ＸＫ−
６２−４（特願昭５２−８３０３８号明細書）、ＳＵ−
２（特願昭５２−１２４０３０号明細書）ＳＵＭ一３（
特願昭５３−２２９７０号明細書）、ＳＵＭ一４（特願
昭５３−４３２８５号明細書）などの抗生物質がある。
本発明者らは、種々の微生物を用いて新規物質の生産に
ついて個究した。
その結果ミクロモノスポラ属に属するある種の微生物の
培養物中に既知の抗生物質とは種々のクロマトグラフイ
一に｝ける挙動が異なる物質が存在することを見い出し
た。本発明者らは該物質を該培養物中より精製・単離ｖ
、その理化学的性状を調べた結果、該物質が新規な物質
であることをみいだし、これをＵＡＡ一３と命名した。
以下、本物質ＵＡＡ−３ならびにその製造法について詳
細に説明する。
培養物中に既知の抗生物質とは種々のクロマトグラフイ
一に｝ける挙動が異なる物質が存在することを見い出し
た。本発明者らは該物質を該培養物中より精製・単離ｖ
、その理化学的性状を調べた結果、該物質が新規な物質
であることをみいだし、これをＵＡＡ一３と命名した。
以下、本物質ＵＡＡ−３ならびにその製造法について詳
細に説明する。
本発明にかかわるＵＡＡ−３の遊離塩基の理化学的性状
は次の通りである。
は次の通りである。
（１）塩基性の白色粉末
（２）元素分析値（（！））
Ｃ４８．７５％
Ｈ８．７４％
Ｎｌ２．Ｏｌ％
（３）分子量 ４５０
（４）分子式 Ｃｌ９Ｈ３８Ｎ４Ｏ８
（５）紫外部吸収スベクトルリ本物質の水溶液の紫外部
吸収スペクトルは２２０〜３６０ｎｍの間で特徴的な吸
収極大を示す、末端吸収を示すのみである。
吸収スペクトルは２２０〜３６０ｎｍの間で特徴的な吸
収極大を示す、末端吸収を示すのみである。
（６）本物質は、水にきわめて易溶、メタノールにも溶
け、エタノール、アセトンにもやや溶けるが、クロロホ
ルム、ベンゼン、酢酸ブチル、酢酸プチノレ、エーテノ
にブタノ→レ、石油エーテル、ｎ−ヘキサンなどの有機
溶媒には不溶である。
け、エタノール、アセトンにもやや溶けるが、クロロホ
ルム、ベンゼン、酢酸ブチル、酢酸プチノレ、エーテノ
にブタノ→レ、石油エーテル、ｎ−ヘキサンなどの有機
溶媒には不溶である。
（７）呈色反応：
ニンヒドリン反応：陽性
過マンガン酸カリ反応：陽性
エルソンモルガン反応：陰性
ピウレツト反応：陰性
（８） ＰＭＲスベクトルリ本物質の重水溶液（ＰＤｌ
Ｏ．４）中でのＰＭＲスペクトルは次のようなケミカル
シフト値を与える。
Ｏ．４）中でのＰＭＲスペクトルは次のようなケミカル
シフト値を与える。
（単位はＰｐｍ）δ １．２１（３Ｈ，ｓ）、０．９０
〜２．２０（６Ｈ，ｍ）、２．５３（３Ｈ，ｓ）、２．
６１（１Ｈ，ｄＪ＝１０．９）、２．７０〜３．１０（
３Ｈ，ｍ）、３．３０（１Ｈ，ｄＪ＝１２，４）、３．
８１（１Ｈ，ｄ，ｄＪ＝４．０，１０．９）、４．０４
（１Ｈ，ｄＪ二１２．４）、３．１０〜４．２０（６Ｈ
，ｍ）、５．０８（１Ｈ，ｄＪ＝４．０）、５６１４（
１Ｈ，ｄＪ＝３．２）（９）マススベクトルリ本物質の
マススペクトルは次のような分子イオンおよびフラグメ
ントイオンを与える。
〜２．２０（６Ｈ，ｍ）、２．５３（３Ｈ，ｓ）、２．
６１（１Ｈ，ｄＪ＝１０．９）、２．７０〜３．１０（
３Ｈ，ｍ）、３．３０（１Ｈ，ｄＪ＝１２，４）、３．
８１（１Ｈ，ｄ，ｄＪ＝４．０，１０．９）、４．０４
（１Ｈ，ｄＪ二１２．４）、３．１０〜４．２０（６Ｈ
，ｍ）、５．０８（１Ｈ，ｄＪ＝４．０）、５６１４（
１Ｈ，ｄＪ＝３．２）（９）マススベクトルリ本物質の
マススペクトルは次のような分子イオンおよびフラグメ
ントイオンを与える。
但し括弧内は精密質量測定により得られた組成式を示す
。Ｉ４５ＯＭ（Ｃｌ９Ｈ３８Ｎ４Ｏ８】３５０（Ｃｌ４
Ｈ２８Ｎ３Ｏ７）、３２２（Ｃｌ３Ｈ２８Ｎ３Ｏ６′）
．３０４（Ｃ，３Ｈ２６Ｎ３Ｏ５）、２８９（Ｃｌ３Ｈ
２５Ｎ２Ｏ５）、２５９（Ｃ，２Ｈ２３Ｎ２Ｏ４）、１
９１（Ｃ７Ｈｌ５Ｎ２Ｏ４）、Ｊｌ６３（Ｃ６Ｈｌ５Ｎ
２Ｏ３）、１６０（Ｃ７Ｈ，４ＮＯ３）、１３０（Ｃ６
Ｈｌ２ＮＯ２）（自）本物質の各種展開剤によるペーパ
ークロマトグラフイ一（東洋淵紙腐５１）訃よび薄層ク
ロマイグラフイ一（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ製Ｋｉｅｓｅｌ・Ｇ
ａｌ６Ｏ）のＲｆ値は第１〜第３表の通Ｄである。
。Ｉ４５ＯＭ（Ｃｌ９Ｈ３８Ｎ４Ｏ８】３５０（Ｃｌ４
Ｈ２８Ｎ３Ｏ７）、３２２（Ｃｌ３Ｈ２８Ｎ３Ｏ６′）
．３０４（Ｃ，３Ｈ２６Ｎ３Ｏ５）、２８９（Ｃｌ３Ｈ
２５Ｎ２Ｏ５）、２５９（Ｃ，２Ｈ２３Ｎ２Ｏ４）、１
９１（Ｃ７Ｈｌ５Ｎ２Ｏ４）、Ｊｌ６３（Ｃ６Ｈｌ５Ｎ
２Ｏ３）、１６０（Ｃ７Ｈ，４ＮＯ３）、１３０（Ｃ６
Ｈｌ２ＮＯ２）（自）本物質の各種展開剤によるペーパ
ークロマトグラフイ一（東洋淵紙腐５１）訃よび薄層ク
ロマイグラフイ一（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ製Ｋｉｅｓｅｌ・Ｇ
ａｌ６Ｏ）のＲｆ値は第１〜第３表の通Ｄである。
なお、既知物質との比較のために、近縁と思われるもの
を選び、そのもののＲｆ値を併記する。第１表展開剤と
してクロロホルムリメタノｉル：２８％（Ｖｌ／／Ｖ）
アンモニア水−１：１：１（容量比）の下層部を用いた
場合の薄層クロマトグラフイ一でのＲｆ値第２表 展開剤としてクロロホルムリメタノール：２８％（Ｗ／
Ｖ）アンモニア水＝３：４：２（容量比）を用いた場合
の薄層クロマトグラフイ一でのＲｆ値※１） Ｒｆ ｓａ７ 原点からの該物質の距離 原点からのサガミシンの距離 ※２）特願昭５２−１２ 載された抗生物質 ※３）特願昭５３−５６ れた抗生物質 ※４）特開昭５１−５６ れた抗生物質 ４０３０号明細書に記 ６４０号公報に記載さ ４３０号公報に記載さ 第３表 展開剤としてクロロホルムリメタノール：１７％（Ｗ／
Ｖ）アンモニア水−２：１：１（容量比）の下属部を用
いた上昇式ペーパークロマトグラJャC一でのＲｆ値。
を選び、そのもののＲｆ値を併記する。第１表展開剤と
してクロロホルムリメタノｉル：２８％（Ｖｌ／／Ｖ）
アンモニア水−１：１：１（容量比）の下層部を用いた
場合の薄層クロマトグラフイ一でのＲｆ値第２表 展開剤としてクロロホルムリメタノール：２８％（Ｗ／
Ｖ）アンモニア水＝３：４：２（容量比）を用いた場合
の薄層クロマトグラフイ一でのＲｆ値※１） Ｒｆ ｓａ７ 原点からの該物質の距離 原点からのサガミシンの距離 ※２）特願昭５２−１２ 載された抗生物質 ※３）特願昭５３−５６ れた抗生物質 ※４）特開昭５１−５６ れた抗生物質 ４０３０号明細書に記 ６４０号公報に記載さ ４３０号公報に記載さ 第３表 展開剤としてクロロホルムリメタノール：１７％（Ｗ／
Ｖ）アンモニア水−２：１：１（容量比）の下属部を用
いた上昇式ペーパークロマトグラJャC一でのＲｆ値。
次にＵＡＡ−３の抗菌スペクトル（ＭＩＣ−Ｖ−）を第
４表に示す。
４表に示す。
測定はＰＨ７．２の一〜 一ト・インフユージヨン・プ
ロス（ＤｉｆｃＯ）培地を用い、寒天希釈法によつた。
第 表 このようにＵＡＡ−３は広範囲のグラム陽性菌や陰性菌
に対して強い抗菌力を有している。
ロス（ＤｉｆｃＯ）培地を用い、寒天希釈法によつた。
第 表 このようにＵＡＡ−３は広範囲のグラム陽性菌や陰性菌
に対して強い抗菌力を有している。
特筆すべきは、従来有効な抗生物質が少ないとされてき
たプロテウス属の菌に対しても有効であること、｝よび
アミノグリコシド−３しリン酸化酵素、アミノグリコシ
ド−６′−アセチル化酵素、あるいはアミノグリコシド
−４！−ヌクレオチジル化酵素を産生する耐性菌に対し
ても有効であることである。つぎに本物質を他の物質と
比較してみる。ミクロモノスボラ属菌の生産する水溶性
、塩基性で且つ広範囲の抗菌スペクトルを有する抗性物
質としては前記したごとくジエンタマイシンＣＯｍｐｌ
ｅｘｌアンチバイオチツクＳ）．４６０、シソマイシン
、ベルダマイシン、アンチバイオチツクＧ−５２、ＸＫ
−６２−２、ホーテイマイシンＡ１ホーテイマイシンＣ
１ホーテイマイシンＤ．ＸＫ−６２−３、ＸＫ−６２−
４、ＳＵ−２、ＳＵＭ−３、ＳＵＭ−４などがある。
たプロテウス属の菌に対しても有効であること、｝よび
アミノグリコシド−３しリン酸化酵素、アミノグリコシ
ド−６′−アセチル化酵素、あるいはアミノグリコシド
−４！−ヌクレオチジル化酵素を産生する耐性菌に対し
ても有効であることである。つぎに本物質を他の物質と
比較してみる。ミクロモノスボラ属菌の生産する水溶性
、塩基性で且つ広範囲の抗菌スペクトルを有する抗性物
質としては前記したごとくジエンタマイシンＣＯｍｐｌ
ｅｘｌアンチバイオチツクＳ）．４６０、シソマイシン
、ベルダマイシン、アンチバイオチツクＧ−５２、ＸＫ
−６２−２、ホーテイマイシンＡ１ホーテイマイシンＣ
１ホーテイマイシンＤ．ＸＫ−６２−３、ＸＫ−６２−
４、ＳＵ−２、ＳＵＭ−３、ＳＵＭ−４などがある。
しかしながら第１，２｝よび３表に示されるようにペー
パークロマトグラフイ一及び薄層クロマトグラフイ一の
挙動に卦いてＵＡＡ−３は上記のいずれとも異つている
。さらにミクロモノスポラ属に属する微生物以外の放線
菌が生産する水溶性、塩基性で且つ広範囲の抗菌スペク
トルを有する抗生物質として、ストレプトマイシン、リ
ボスタマイシン、リピドマイシン、ネオマイシン、カナ
マイシン、バロモマイシン、ネブラマイシンなどがあげ
られるが、ＵＡＡ一３は第３表から明らかなごとく、Ｒ
ｆ値に訃いてこれらの抗生物質とは区別される。さらに
マススペクトルのデータからも、ＵＡＡ−３は他の抗生
物質とは明らかに区別される。以上のことからＵＡＡ−
３は新規な抗生物質と考えられる。本発明化合物はＵＡ
Ａ−３およびその酸付加塩であるが、該酸付加塩はＵＡ
Ａ−３，１分子と酸１−４当量との反応により生成され
るモノ、ジ、トリ、テトラ塩を意味する。この場合酸と
しては塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸
、炭酸、硝酸などの無機酸、酢酸、フマル酸、リンゴ酸
、クエン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、洒石酸、コ
・・ク酸などの有機酸があげられる。以上述べたような
すぐれた抗菌性を有するＵＡＡ一３卦よびその酸付加塩
は、抗菌剤として医薬上有用である。さらにＵＡＡ−３
は実験室用ガラス器具訃よび装置の殺菌など、衛生上の
目的で用いることもできる。次に本発明に｝けるＵＡＡ
−３の製造法について説明する。
パークロマトグラフイ一及び薄層クロマトグラフイ一の
挙動に卦いてＵＡＡ−３は上記のいずれとも異つている
。さらにミクロモノスポラ属に属する微生物以外の放線
菌が生産する水溶性、塩基性で且つ広範囲の抗菌スペク
トルを有する抗生物質として、ストレプトマイシン、リ
ボスタマイシン、リピドマイシン、ネオマイシン、カナ
マイシン、バロモマイシン、ネブラマイシンなどがあげ
られるが、ＵＡＡ一３は第３表から明らかなごとく、Ｒ
ｆ値に訃いてこれらの抗生物質とは区別される。さらに
マススペクトルのデータからも、ＵＡＡ−３は他の抗生
物質とは明らかに区別される。以上のことからＵＡＡ−
３は新規な抗生物質と考えられる。本発明化合物はＵＡ
Ａ−３およびその酸付加塩であるが、該酸付加塩はＵＡ
Ａ−３，１分子と酸１−４当量との反応により生成され
るモノ、ジ、トリ、テトラ塩を意味する。この場合酸と
しては塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸
、炭酸、硝酸などの無機酸、酢酸、フマル酸、リンゴ酸
、クエン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、洒石酸、コ
・・ク酸などの有機酸があげられる。以上述べたような
すぐれた抗菌性を有するＵＡＡ一３卦よびその酸付加塩
は、抗菌剤として医薬上有用である。さらにＵＡＡ−３
は実験室用ガラス器具訃よび装置の殺菌など、衛生上の
目的で用いることもできる。次に本発明に｝けるＵＡＡ
−３の製造法について説明する。
ＵＡＡ−３はミクロモノスボラ属に属するＵＡＡ３生産
性菌株を栄養培地に培養し、培養物中にＵＡＡ−３を生
成、養積せしめ、該培養物から該物質を採取することに
よつて得ることができる。
性菌株を栄養培地に培養し、培養物中にＵＡＡ−３を生
成、養積せしめ、該培養物から該物質を採取することに
よつて得ることができる。
本発明に｝いて利用される微生物としては、ミクロモノ
スポラ属に属し、ＵＡＡ−３生産能を有する歯株であれ
ばいずれも使用でき、具体例としてはミクロモノスポラ
・サガミエンシスＵＡＡ−３菌（微工佃菌寄４５４６号
）（ＮＲＲＬｌｌ３３４）があげられる。この菌種の菌
学的性質は特公昭５０−３９１５５号に記載されている
。ＵＡＡ−３を製造するための培養は次の方法により行
なう。
スポラ属に属し、ＵＡＡ−３生産能を有する歯株であれ
ばいずれも使用でき、具体例としてはミクロモノスポラ
・サガミエンシスＵＡＡ−３菌（微工佃菌寄４５４６号
）（ＮＲＲＬｌｌ３３４）があげられる。この菌種の菌
学的性質は特公昭５０−３９１５５号に記載されている
。ＵＡＡ−３を製造するための培養は次の方法により行
なう。
即ち本発明に｝いて用いる微生物の培養においては通常
の放線菌の培養法が一般に用いられる。
の放線菌の培養法が一般に用いられる。
培養のための培地としては資化可能な炭素源、窒素源、
無機物等をほどよく含有する培地であれぱ天然培地、合
成培地のいずれでも使用可能である。炭素源としてはブ
ドウ糖、殿粉、デキストリン、マンノース、フラグドー
ズ、シユークローズ、糖蜜などが単独または組み合わせ
て用いられる。
無機物等をほどよく含有する培地であれぱ天然培地、合
成培地のいずれでも使用可能である。炭素源としてはブ
ドウ糖、殿粉、デキストリン、マンノース、フラグドー
ズ、シユークローズ、糖蜜などが単独または組み合わせ
て用いられる。
無機および有機窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウ
ムなどが、また天然窒素源としてはペプトン、肉工キズ
、酵母工キズ、乾燥酵母、コーン・スチープ・りカー、
大豆粉、カザミノ酸、ソリユプルペジタブル・プロテイ
ン、綿実ガスなどが単独または組み合せて用いられる。
そのほか必要に応じて食塩、塩化カリウム、炭酸カルシ
ウム、燐酸塩などの無機塩類を適当に加えるほか、使用
菌の生育やＵＡＡ−３の生産を促進する有機物や無機物
を適当に加えることができる。培養法としては、液体培
養法、とくに深部攪拌培養法がもつとも適している。
アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウ
ムなどが、また天然窒素源としてはペプトン、肉工キズ
、酵母工キズ、乾燥酵母、コーン・スチープ・りカー、
大豆粉、カザミノ酸、ソリユプルペジタブル・プロテイ
ン、綿実ガスなどが単独または組み合せて用いられる。
そのほか必要に応じて食塩、塩化カリウム、炭酸カルシ
ウム、燐酸塩などの無機塩類を適当に加えるほか、使用
菌の生育やＵＡＡ−３の生産を促進する有機物や無機物
を適当に加えることができる。培養法としては、液体培
養法、とくに深部攪拌培養法がもつとも適している。
培養温度は２５〜４０℃、ＰＨは中性付近で培養するこ
とが望ましい。液体培養で通常１日ないし１２日間培養
を行うとＵＡＡ−３が培養液中に蓄積される。培養液中
の生成量が最大に達したときに、培養を停止し、培養液
中より目的物を精製単離する。培養液からのＵＡＡ−３
の精製単離は微生物代謝産物を、その培養液から単離す
るためにふつう用いられる分離・精製の方法が利用され
る。
とが望ましい。液体培養で通常１日ないし１２日間培養
を行うとＵＡＡ−３が培養液中に蓄積される。培養液中
の生成量が最大に達したときに、培養を停止し、培養液
中より目的物を精製単離する。培養液からのＵＡＡ−３
の精製単離は微生物代謝産物を、その培養液から単離す
るためにふつう用いられる分離・精製の方法が利用され
る。
ＵＡＡ−３は、前述の如く水溶性、塩基性物質なので、
いわゆる水溶性・塩基性物質の精製によく用いられる方
法により精製を行うことができる。すなわちカチオン交
換樹脂による吸脱着法、セルロースカラムクロマトグラ
フイ一、セフアデツクスＬＨ−２０カラムによる吸脱着
法、シリカゲルクロマトグラフイ一、カーボンクロマト
グラフイ一などの方法を適当に組み合わせて行うことが
できる。また本物質の遊離塩基はアセトンに溶けるが、
硫酸塩は同溶媒に溶けにくいので、この点を利用して本
物質の遊離塩基または硫酸塩を単離・精製することがで
きる。次に培養液からＵＡＡ−３の精製・単離の一例を
示す。
いわゆる水溶性・塩基性物質の精製によく用いられる方
法により精製を行うことができる。すなわちカチオン交
換樹脂による吸脱着法、セルロースカラムクロマトグラ
フイ一、セフアデツクスＬＨ−２０カラムによる吸脱着
法、シリカゲルクロマトグラフイ一、カーボンクロマト
グラフイ一などの方法を適当に組み合わせて行うことが
できる。また本物質の遊離塩基はアセトンに溶けるが、
硫酸塩は同溶媒に溶けにくいので、この点を利用して本
物質の遊離塩基または硫酸塩を単離・精製することがで
きる。次に培養液からＵＡＡ−３の精製・単離の一例を
示す。
培養終了後、培養液から固形物を除き、得られる培養淵
液を、弱アルカリ性に調整した後、カチオン交換樹脂ア
ンバーライトＩＲＣ−５０（口ーム・アンド・・・−ス
社製、Ｕ．Ｓ．Ａ．）（ＮＨ４一噂）に通して活性物質
を吸着し、水洗後２Ｎ−アンモニア水で活性物質を溶出
する。
液を、弱アルカリ性に調整した後、カチオン交換樹脂ア
ンバーライトＩＲＣ−５０（口ーム・アンド・・・−ス
社製、Ｕ．Ｓ．Ａ．）（ＮＨ４一噂）に通して活性物質
を吸着し、水洗後２Ｎ−アンモニア水で活性物質を溶出
する。
活性区分を集め減苗濃縮後、弱アルカリ性に調整し、こ
れをアンバーライトＣＧ−５０タイプＩ（ローム・アン
ド・・・−ス社製、Ｕ．Ｓ．Ａ．）（ＮＨ４＋型）に通
して活性物質を吸着せしめる。水洗後稀アンモニア水で
活性物質を溶出する。数個の微量成分が溶出された後、
ＵＡＡ−３が溶出されてくる。ＵＡＡ−３を含む活性区
分を集め減圧下で最縮乾固して粗物質ＵＡＡ−３の白色
粉末を得る。つぎにこれを水に溶かし弱アルカリ性に調
整し、バイオレツクス７０（バイオラットＬａｂ．製、
Ｕ．Ｓ．Ａ．）に通して吸着させた後、水洗後、稀アン
モニア水で活性物質を溶出する。数個の微量成分が溶出
された後、ＵＡＡ−３が溶出されてくる。この区分を集
めて減圧濃縮し、残渣を少量の水に溶かし、凍結乾燥を
行うことに工う精製されたＵＡＡ−３を得ることができ
る。上記の精製工程中の活性物質ＵＡＡ一３の動向は、
東洋ろ紙７１６．５１を用い上昇式ペーパークロマトグ
ラフイ一によりチエツクする。展開溶媒としては、クロ
ロホルム、メタノール、１７％アンモニア水（容量比２
：１：１）の下層を用い、６〜１６時間室温にて展開す
る。以下に実施例によつて本発明のＵＡＡ−３の製造法
について具体的に説明する。
れをアンバーライトＣＧ−５０タイプＩ（ローム・アン
ド・・・−ス社製、Ｕ．Ｓ．Ａ．）（ＮＨ４＋型）に通
して活性物質を吸着せしめる。水洗後稀アンモニア水で
活性物質を溶出する。数個の微量成分が溶出された後、
ＵＡＡ−３が溶出されてくる。ＵＡＡ−３を含む活性区
分を集め減圧下で最縮乾固して粗物質ＵＡＡ−３の白色
粉末を得る。つぎにこれを水に溶かし弱アルカリ性に調
整し、バイオレツクス７０（バイオラットＬａｂ．製、
Ｕ．Ｓ．Ａ．）に通して吸着させた後、水洗後、稀アン
モニア水で活性物質を溶出する。数個の微量成分が溶出
された後、ＵＡＡ−３が溶出されてくる。この区分を集
めて減圧濃縮し、残渣を少量の水に溶かし、凍結乾燥を
行うことに工う精製されたＵＡＡ−３を得ることができ
る。上記の精製工程中の活性物質ＵＡＡ一３の動向は、
東洋ろ紙７１６．５１を用い上昇式ペーパークロマトグ
ラフイ一によりチエツクする。展開溶媒としては、クロ
ロホルム、メタノール、１７％アンモニア水（容量比２
：１：１）の下層を用い、６〜１６時間室温にて展開す
る。以下に実施例によつて本発明のＵＡＡ−３の製造法
について具体的に説明する。
実施例 １
Ａミクロモノスボラ・サガミエンシスＵＡＡ一３の培養
：種菌としてミクロモノスポラ・サガミエンシスＵＡＡ
−３（微工研菌寄第４５４６号）（ＮＲＲＬｌｌ３３４
）を用いる。
：種菌としてミクロモノスポラ・サガミエンシスＵＡＡ
−３（微工研菌寄第４５４６号）（ＮＲＲＬｌｌ３３４
）を用いる。
第１種培地としては、スタビローズＫ〔殿粉の加水分解
物、松谷化学（株）製〕２０Ｕ１、グルコース５７／１
１酵母工キズ５Ｌ１１肉工キズ３（Ｉｔ／ｌ、コーン・
スチープ・りカー１ｆｋ１．ＣａＣ０３２ｆ７／ｌ（殺
菌前ＰＨ８．Ｏ）の培地を用いる。種菌１白金耳を、大
型試験管中１０ＴＩＬＩ！の上記培地に植菌し、３０℃
で３日間振盪培養する。この種培養液１０ｍ１を２１バ
ツフル付きエルレンマイヤーフラスコ中に入つた３５０
ｍ１の第１種培地と同じ組成の第２種培地に移す。第２
種培養は３０℃で２日間振盪培養する。この種培養液３
５０Ｔｎ１を５１容量のジヤーフアーメンタ一中の第１
種培地と同じ組成の第３種培地３１に移し３６℃で２４
時間通気攪拌方式（回転数４００Ｒｐｍｌ通気量３１／
Ｍｉｎ）により培養を行なう。最後にこの第３種培養液
１．５１を３０１容量のジヤーフアーメンタ一中の下記
発酵培地１５１に移す。
物、松谷化学（株）製〕２０Ｕ１、グルコース５７／１
１酵母工キズ５Ｌ１１肉工キズ３（Ｉｔ／ｌ、コーン・
スチープ・りカー１ｆｋ１．ＣａＣ０３２ｆ７／ｌ（殺
菌前ＰＨ８．Ｏ）の培地を用いる。種菌１白金耳を、大
型試験管中１０ＴＩＬＩ！の上記培地に植菌し、３０℃
で３日間振盪培養する。この種培養液１０ｍ１を２１バ
ツフル付きエルレンマイヤーフラスコ中に入つた３５０
ｍ１の第１種培地と同じ組成の第２種培地に移す。第２
種培養は３０℃で２日間振盪培養する。この種培養液３
５０Ｔｎ１を５１容量のジヤーフアーメンタ一中の第１
種培地と同じ組成の第３種培地３１に移し３６℃で２４
時間通気攪拌方式（回転数４００Ｒｐｍｌ通気量３１／
Ｍｉｎ）により培養を行なう。最後にこの第３種培養液
１．５１を３０１容量のジヤーフアーメンタ一中の下記
発酵培地１５１に移す。
発酵培地：シユークロース４０ｆ／ｌ、大豆粕１０ｙ／
ｌ、綿実粕３０１ｒフィチッ酸２１１、大豆カゼイン５
７／１．Ｋ２ＨＰＯ４Ｏ．２５Ｌｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ
２００．５Ｌ１．ＦｅＳ０４・７Ｈ２００．１５Ｍ１．
Ｌ−グルタミン１ｍ１／／１．Ｌ−シスチン５０ｍｖ１
、β−アラニン５０ＪＩ、パントテン酸カルシウム５ｍ
ｖ１、ニコチン酸５ａ、モリブデン酸アンモニウム（４
水塩）２５０ｍＶ１、硫酸亜鉛（７水塩）５ｍＶ′ｌ、
硫酸アルミニウムカリウム（２４水塩）１０１ｎ（！／
１１炭酸バリウム１０ｍｖ１、塩化コバルト１０μ１ｑ
、ＰＨ８．５。
ｌ、綿実粕３０１ｒフィチッ酸２１１、大豆カゼイン５
７／１．Ｋ２ＨＰＯ４Ｏ．２５Ｌｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ
２００．５Ｌ１．ＦｅＳ０４・７Ｈ２００．１５Ｍ１．
Ｌ−グルタミン１ｍ１／／１．Ｌ−シスチン５０ｍｖ１
、β−アラニン５０ＪＩ、パントテン酸カルシウム５ｍ
ｖ１、ニコチン酸５ａ、モリブデン酸アンモニウム（４
水塩）２５０ｍＶ１、硫酸亜鉛（７水塩）５ｍＶ′ｌ、
硫酸アルミニウムカリウム（２４水塩）１０１ｎ（！／
１１炭酸バリウム１０ｍｖ１、塩化コバルト１０μ１ｑ
、ＰＨ８．５。
この発酵は３４℃で７日間通気攪拌培養方式（回転数２
５０ｒｐｍ、通気費１５１／Ｍｉｎ）により行う。
５０ｒｐｍ、通気費１５１／Ｍｉｎ）により行う。
ＢＵＡＡ−３の精製単離
前記培養終了後、培養液のＰＨを１２Ｎ一硫酸でＰＨ２
．Ｏに調整し、８０℃で１０分間加熱攪拌する。
．Ｏに調整し、８０℃で１０分間加熱攪拌する。
そのの淵過助剤としてラジオライト＃６００〔昭和化学
工業（株）製〕を３ｋ９加え、菌体を涙別する。この沢
液をダイヤイオンＨＰＫ一２５〔強酸性カチオン交換樹
脂、三菱化成（株）事〕（ＮＨ４＋型）１１を充填した
カラムに通し、流出液は捨てる。水で樹脂を洗浄後２Ｎ
−アンモニア水で溶出し、活性物質のある区分を集め減
圧下で４１まで濃縮する。濃縮液を６Ｎ一塩酸でＰＨ８
．Ｏに調整したのちアンバーライトＩＲＣ−５０（弱酸
性カチオン交換樹脂、ローム・アンド・・・−ス社製）
（ＮＨ４＋型）１１を充填したカラムに通し、水洗後、
２Ｎ−アンモニア水で活性物質を溶出し、活性区分を集
めて減圧下で乾固する。残渣を水に溶かし、ＰＨ８．Ｏ
に調整したあとアンバーライトＣＧ−５０タイプＩ（弱
酸性カチオン交換樹脂、ローム・アンド・ハース社製）
（ＮＨ４＋型）５００ｄを充填したカラムに通し、水洗
後０。２Ｍ一塩化アンモニウムを含む０．１Ｎ−アンモ
ニア水で溶出する。はじめに数個の微量成分が溶出され
たあとＵＡＡ３が溶出されてくる。ＵＡＡ−３を含む画
分を集めて６Ｎ一塩酸にてＰＨ７．８に調整後アンバー
ライトＩＲＣ−５０（ＮＨ４＋型）１００ｍ１を充填し
たカラムに通塔し、水洗後２Ｎ−アンモニア水で溶出す
る。活性物質を含む区分を集めて減圧下で乾固する。残
渣を約１０培量のワコーゲルＣ−２００〔シリカゲル、
和光純薬工業［相］】町に吸着せしめた後ワコーゲルＣ
−２００５０１を充填したカラムにチヤージし、クロロ
ホルムリメタノール：２８％アンモニア水＝１：１：１
（容量比）の下層部で溶出する。
工業（株）製〕を３ｋ９加え、菌体を涙別する。この沢
液をダイヤイオンＨＰＫ一２５〔強酸性カチオン交換樹
脂、三菱化成（株）事〕（ＮＨ４＋型）１１を充填した
カラムに通し、流出液は捨てる。水で樹脂を洗浄後２Ｎ
−アンモニア水で溶出し、活性物質のある区分を集め減
圧下で４１まで濃縮する。濃縮液を６Ｎ一塩酸でＰＨ８
．Ｏに調整したのちアンバーライトＩＲＣ−５０（弱酸
性カチオン交換樹脂、ローム・アンド・・・−ス社製）
（ＮＨ４＋型）１１を充填したカラムに通し、水洗後、
２Ｎ−アンモニア水で活性物質を溶出し、活性区分を集
めて減圧下で乾固する。残渣を水に溶かし、ＰＨ８．Ｏ
に調整したあとアンバーライトＣＧ−５０タイプＩ（弱
酸性カチオン交換樹脂、ローム・アンド・ハース社製）
（ＮＨ４＋型）５００ｄを充填したカラムに通し、水洗
後０。２Ｍ一塩化アンモニウムを含む０．１Ｎ−アンモ
ニア水で溶出する。はじめに数個の微量成分が溶出され
たあとＵＡＡ３が溶出されてくる。ＵＡＡ−３を含む画
分を集めて６Ｎ一塩酸にてＰＨ７．８に調整後アンバー
ライトＩＲＣ−５０（ＮＨ４＋型）１００ｍ１を充填し
たカラムに通塔し、水洗後２Ｎ−アンモニア水で溶出す
る。活性物質を含む区分を集めて減圧下で乾固する。残
渣を約１０培量のワコーゲルＣ−２００〔シリカゲル、
和光純薬工業［相］】町に吸着せしめた後ワコーゲルＣ
−２００５０１を充填したカラムにチヤージし、クロロ
ホルムリメタノール：２８％アンモニア水＝１：１：１
（容量比）の下層部で溶出する。
溶出区分を５ｍｊずつ分取し、活性区分を前述の方法に
て検出しＵＡＡ−３を含む画分を集める。この画分を減
圧下で濃縮後、凍結乾燥を行力うＵＡＡ−３の遊離塩基
６．７ｍ９の精製標品が得られる。
て検出しＵＡＡ−３を含む画分を集める。この画分を減
圧下で濃縮後、凍結乾燥を行力うＵＡＡ−３の遊離塩基
６．７ｍ９の精製標品が得られる。
実施例 ２
実施例１と同様にして得られたＵＡＡ−３遊離塩基５即
を水２ｍ１に溶かし、０．０５Ｎ一硫酸０．３ｄを加え
る。
を水２ｍ１に溶かし、０．０５Ｎ一硫酸０．３ｄを加え
る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の理化学的性質を有するＵＡＡ−３およびその酸
付加塩（１）塩基性の白色粉末 （２）元素分析値（％）：Ｃ４８．７５％Ｈ８．７４％ Ｎ１２．０１％ （３）分子量：４５０ （４）分子式：Ｃ＿１＿９Ｈ＿３＿８Ｎ＿４Ｏ＿８（５
）紫外部吸収スペクトル：本物質の水溶液の紫外部吸収
スペクトルは２２０〜３６０ｎｍの間で特徴的な吸収極
大を示さず末端吸収を示すのみである。 （６）呈色反応 ニンヒドリン反応：陽性 過マンガン酸カリ反応：陽性 エルソンモルガン反応：陰性 ビウレツト反応：陰性 （７）ＰＭＲスペクトル：本物質の重水溶液（ｐＤ１０
．４）中でのＰＭＲスペクトルは次のようなケミカルシ
フト値を与える。 （単位はｐｐｍ）δ１．２１（３Ｈ、ｓ）、０．９０〜
２．２０（６Ｈ、ｍ）、２．５３（３Ｈ、ｓ）、２．６
１（１Ｈ、ｄＪ＝１０．９）、２．７０〜３．１０（３
Ｈ、ｍ）、３．３０（１Ｈ、ｄＪ＝１２．４）、３．８
１（１Ｈ、ｄ、ｄＪ＝４０、１０．９）、４．０４（１
Ｈ、ｄＪ＝１２．４）、３．１０〜４．２０（６Ｈ、ｍ
）、５．０８（１Ｈ、ｄＪ＝４．０）、５．１４（１Ｈ
、ｄＪ＝３．２）（８）マススペクトル：本物質のマス
スペクトルは次のような分子イオンおよびフラグメント
イオンを与える。 但し括弧内は精密質量測定により得られた組成式を示す
。ｍ／ｅ４５０Ｍ（Ｃ＿１＿９Ｈ＿３＿８Ｎ＿４Ｏ＿８
）、３５０（Ｃ＿１＿４Ｈ＿２＿８Ｎ＿３Ｏ＿７）、３
２２（Ｃ＿１＿３Ｈ＿２＿８Ｎ＿３Ｏ＿６）、３０９（
Ｃ＿１＿３Ｈ＿２＿６Ｎ＿３Ｏ＿５）、２８９（Ｃ＿１
＿３Ｈ＿２＿５Ｎ＿２Ｏ＿５）、２５９（Ｃ＿１＿２Ｈ
＿２＿３Ｎ＿２Ｏ＿４）、１９１（Ｃ＿７Ｈ＿１＿５Ｎ
＿２Ｏ＿４）、１６３（Ｃ＿６Ｈ＿１＿５Ｎ＿２Ｏ＿３
）、１６０（Ｃ＿７Ｈ＿１＿４ＮＯ＿３）、１３０（Ｃ
＿６Ｈ＿１＿２ＮＯ＿２）（９）各種展開剤によるペー
バークロマトグラフィー（東洋濾紙Ｎｏ．５１）および
薄層クロマトグラフィー（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ製Ｋｉｅｓｅ
ｌＧｃｌ６０）のＲｆ値：展開剤としてクロロホルム：
メタノル：２８％アンモニア水＝１：１：１（容量比）
の下層部を用いた場合の薄層クロマトグラフィーでのＲ
ｆｓａｇ値：０．６９展開剤としてクロホルム：メタノ
ール：２８％アンモニア水＝３：４：２（容量比）を用
いた場合の薄層クロマトグラフィーでのＲｆｓａｇ値：
０．９９ただしＲｆｓａｇ値＝原点からの本物質の距離
／原点からのサガミシンの距離展開剤としてクロロホル
ム：メタノール：１７％アンモニア水＝２：１：１（容
量比）の下層部を用いた上昇式ペーパークロマトグラフ
ィーでのＲｆ値：０．１６２ ミクロモノスポラ属に属
するＵＡＡ−３生産菌を栄養培地に培養し、培養物中に
ＵＡＡ−３を生成せしめ、該培養物からＵＡＡ−３を採
取することを特徴とするＵＡＡ−３の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9579078A JPS5913192B2 (ja) | 1978-08-08 | 1978-08-08 | 新規物質ｕａａ−３およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9579078A JPS5913192B2 (ja) | 1978-08-08 | 1978-08-08 | 新規物質ｕａａ−３およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5523909A JPS5523909A (en) | 1980-02-20 |
| JPS5913192B2 true JPS5913192B2 (ja) | 1984-03-28 |
Family
ID=14147244
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9579078A Expired JPS5913192B2 (ja) | 1978-08-08 | 1978-08-08 | 新規物質ｕａａ−３およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5913192B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GR77567B (ja) * | 1982-08-26 | 1984-09-24 | Lepetit Spa |
-
1978
- 1978-08-08 JP JP9579078A patent/JPS5913192B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5523909A (en) | 1980-02-20 |
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