JPS6039566A - ビリルビン含有検体の処理法及びビリルビンの定量法 - Google Patents
ビリルビン含有検体の処理法及びビリルビンの定量法Info
- Publication number
- JPS6039566A JPS6039566A JP14669083A JP14669083A JPS6039566A JP S6039566 A JPS6039566 A JP S6039566A JP 14669083 A JP14669083 A JP 14669083A JP 14669083 A JP14669083 A JP 14669083A JP S6039566 A JPS6039566 A JP S6039566A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bilirubin
- specimen
- oxidase
- quantitative determination
- protease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は検体中のビリルビンを遊離させる方法に関する
。
。
そして、本発明は、検体中のビリルビンを遊離させ、全
ビリルビン蓋を正確に測定する方法に関するものである
。
ビリルビン蓋を正確に測定する方法に関するものである
。
一般に、ビリルビンは血液中においてその大部分がアル
ブミンと結合して存在し、これを間接ビリルビンといい
、また少量のビリルビンはグルクロン酸や硫酸基と結合
し、これを直接ビリルビンといっている。
ブミンと結合して存在し、これを間接ビリルビンといい
、また少量のビリルビンはグルクロン酸や硫酸基と結合
し、これを直接ビリルビンといっている。
従来、生体に由来する血液、尿等の検体に存在するビリ
ルビンを定量するには、４６０ｎｍ の波長を用いて総
ビリルビンに比例する吸光度よりビリルビン量を定量す
る直接法、ジアゾ試薬を用いてジアゾ反応により生じた
アゾ色集を定量するジアゾ法、酸化剤を用いビリベルジ
ンに酸化せしめ、６００ ｎｍで比色定量する酸化法等
によシ足量されていた。しかしながら直接法は検体中に
含まれるアルブミンのｆｆ１Ｍおよび性質によりビリル
ビンの吸光極大が異なるという欠点があり、またジアゾ
反応、酸化法では操作が煩雑なうえ、ジアゾ法では感度
が低く、溶血の影響を受けやすいという欠点があり、好
ましいものではなかった。
ルビンを定量するには、４６０ｎｍ の波長を用いて総
ビリルビンに比例する吸光度よりビリルビン量を定量す
る直接法、ジアゾ試薬を用いてジアゾ反応により生じた
アゾ色集を定量するジアゾ法、酸化剤を用いビリベルジ
ンに酸化せしめ、６００ ｎｍで比色定量する酸化法等
によシ足量されていた。しかしながら直接法は検体中に
含まれるアルブミンのｆｆ１Ｍおよび性質によりビリル
ビンの吸光極大が異なるという欠点があり、またジアゾ
反応、酸化法では操作が煩雑なうえ、ジアゾ法では感度
が低く、溶血の影響を受けやすいという欠点があり、好
ましいものではなかった。
これらビリルビンの直接定量法の欠点を改善するために
、ビリルビンオキシダーゼを用いてビリルピンを定量す
る方法も提案されたがミロセシウム属菌から得られたビ
リルビンオキシ々゛−ゼは、単独ではアルブミンと結合
している間接ビリルビンには作用しないため、実用化さ
れることはなかった。しかしながら、ビリルビンオキシ
タ゛−ゼを用いてビリルビンを確実に測定することがで
きれば、検体中のビリルビンの定量がきわめて容易とな
るのは明らかである。
、ビリルビンオキシダーゼを用いてビリルピンを定量す
る方法も提案されたがミロセシウム属菌から得られたビ
リルビンオキシ々゛−ゼは、単独ではアルブミンと結合
している間接ビリルビンには作用しないため、実用化さ
れることはなかった。しかしながら、ビリルビンオキシ
タ゛−ゼを用いてビリルビンを確実に測定することがで
きれば、検体中のビリルビンの定量がきわめて容易とな
るのは明らかである。
本発明者らは、ビリルビンオキシタ゛−ゼを用いて検体
中のビリルビン余計を定量できる方法をめて鋭意研究し
た結果、検体を界面活性剤、プロテアーゼ及びリパーゼ
の１椎もしくは２種以上により処理すれば直接ビリルビ
ンだけでなく、間接ビリルビンも同時にビリルビンオキ
シタ゛−ゼによって酸化され得ることを知ったのである
。
中のビリルビン余計を定量できる方法をめて鋭意研究し
た結果、検体を界面活性剤、プロテアーゼ及びリパーゼ
の１椎もしくは２種以上により処理すれば直接ビリルビ
ンだけでなく、間接ビリルビンも同時にビリルビンオキ
シタ゛−ゼによって酸化され得ることを知ったのである
。
木兄り」の第１は、ビリルビンを含有する検体を界面活
性剤、プロテアーゼ及びリパーゼの１種もしくは２８１
以上により処理することを特徴とするビリルビン含有検
体の処理法である。この方法によって処理すれば、間接
ビリルビンはアルブミンと分離し、ビリルビンオキシタ
゛−七による反応を完全に受けるようになる。検体をこ
の方法によって処理し、次いでビリルビンオ・トンタ゛
−ゼを作用さぜれば、検体中からビリルビンの黄濁色を
除去することができ、検体をその他成分の分析に供する
こともできるようになるのでめ◇。
性剤、プロテアーゼ及びリパーゼの１種もしくは２８１
以上により処理することを特徴とするビリルビン含有検
体の処理法である。この方法によって処理すれば、間接
ビリルビンはアルブミンと分離し、ビリルビンオキシタ
゛−七による反応を完全に受けるようになる。検体をこ
の方法によって処理し、次いでビリルビンオ・トンタ゛
−ゼを作用さぜれば、検体中からビリルビンの黄濁色を
除去することができ、検体をその他成分の分析に供する
こともできるようになるのでめ◇。
本発明の第２は、ビリルビンを金石する検体を界面活性
剤、プロテアーゼ及びリパーゼの１独もしくは２種以上
により処理し、処理物にビリルビンオキシタ゛−ゼを添
加し、検体中のビリルビ／ＩＡを定量することを特徴と
するビリルビンの定Ｊｊｉ、’法である。
剤、プロテアーゼ及びリパーゼの１独もしくは２種以上
により処理し、処理物にビリルビンオキシタ゛−ゼを添
加し、検体中のビリルビ／ＩＡを定量することを特徴と
するビリルビンの定Ｊｊｉ、’法である。
本発明の特色とするところは検体中に存在するアルブミ
ンと結合した間接ビリルビンにあらかじめ界面活性剤、
プロテアーゼ、リパーゼを弔独もし混合して作用させア
ルブミンとビリルビンの結合を切ったのちビリルビンオ
キシ〃゛−ゼを作用させ４４０ ｎｍによる吸光度の減
少よりビリルビン全量を定板する点にある。
ンと結合した間接ビリルビンにあらかじめ界面活性剤、
プロテアーゼ、リパーゼを弔独もし混合して作用させア
ルブミンとビリルビンの結合を切ったのちビリルビンオ
キシ〃゛−ゼを作用させ４４０ ｎｍによる吸光度の減
少よりビリルビン全量を定板する点にある。
本発明のビリルビン定、；ｔ（法によｉＬば検体にビリ
ルビンオキシダーゼを単独に作用させることによりグル
クロン酸等と結合した直接ビリルビンを測定し、さらに
検体をあらかじめ界面活性剤、プロテアーゼ、リパーゼ
等によシ前処理した後ビリルビンオキシタ゛−ゼを作用
させることによりアルブミンと結合した間接ビリルビン
をも定量しうることになる。即ち、本発明においては検
体中の総ビリルビン量を定１＠−できるものである。
ルビンオキシダーゼを単独に作用させることによりグル
クロン酸等と結合した直接ビリルビンを測定し、さらに
検体をあらかじめ界面活性剤、プロテアーゼ、リパーゼ
等によシ前処理した後ビリルビンオキシタ゛−ゼを作用
させることによりアルブミンと結合した間接ビリルビン
をも定量しうることになる。即ち、本発明においては検
体中の総ビリルビン量を定１＠−できるものである。
本発明において、あらかじめ検体を前処理する界面活性
剤としてはカチオン系、ノニオン系、アニオン系のいず
れでもよいが、好ましくは、アニオン系界面活性剤であ
るラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）かあげられる。ま
た、プロテアーゼとしてｅｉ、自デ素の種類はなんでも
よく、粗プロテアーゼで十分であシ、特異性のＵ、い酵
素は特に必要ではなく、１イ束類のみ作用させるのでは
なく二イ勺■以上の混合物として作用させた方が好まし
い。
剤としてはカチオン系、ノニオン系、アニオン系のいず
れでもよいが、好ましくは、アニオン系界面活性剤であ
るラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）かあげられる。ま
た、プロテアーゼとしてｅｉ、自デ素の種類はなんでも
よく、粗プロテアーゼで十分であシ、特異性のＵ、い酵
素は特に必要ではなく、１イ束類のみ作用させるのでは
なく二イ勺■以上の混合物として作用させた方が好まし
い。
またリパーゼとしては、プロチアーゼ同様酵素の種類は
問わないが、好ましくはＩＪ ７蛋白質に作用するリポ
プロティンリパーゼがあげられる。
問わないが、好ましくはＩＪ ７蛋白質に作用するリポ
プロティンリパーゼがあげられる。
検体に界面活性剤、プロテアーゼ及びリパーゼの１種も
しくは２種以上が加温、好ましくは３７℃程度に加温し
、５分以上インキュベートすれば、間接ビリルビンはア
ルブミンと分削させることかできる。この処理検体にビ
リルビ／オキシタ゛−ゼが添加される。
しくは２種以上が加温、好ましくは３７℃程度に加温し
、５分以上インキュベートすれば、間接ビリルビンはア
ルブミンと分削させることかできる。この処理検体にビ
リルビ／オキシタ゛−ゼが添加される。
本発明においてビリルビ／を定量する際に用いるビリル
ビンオキシｌ−上としてはミロセシウム属菌よシ得られ
たビリルビンオキシタ゛−ゼに眠らず・ぐクチリ乙動物
、植物等からのビリルビンを酸化せしめる酵素であれば
いずれでもよい。
ビンオキシｌ−上としてはミロセシウム属菌よシ得られ
たビリルビンオキシタ゛−ゼに眠らず・ぐクチリ乙動物
、植物等からのビリルビンを酸化せしめる酵素であれば
いずれでもよい。
ビリルビンオキシタ゛−ゼによる反応は３７°Ｃで１５
分程度加潟し、４４ Ｄ ｎｍの吸光度の減少を測定し
て、ビリルビンが定量される。
分程度加潟し、４４ Ｄ ｎｍの吸光度の減少を測定し
て、ビリルビンが定量される。
本発明では、界面活性剤、プロテアーゼ又（まリパーゼ
の１種もしくは２種以上により前処理することによシ間
接ビリルビンを遊ＦＪさせ、総ビリルビンの定量を可能
としたもので、ビリルビン定量の自動分析にきわめて適
した方法ということができる。
の１種もしくは２種以上により前処理することによシ間
接ビリルビンを遊ＦＪさせ、総ビリルビンの定量を可能
としたもので、ビリルビン定量の自動分析にきわめて適
した方法ということができる。
次に本発明の実施例を示す。
実施例１゜
２０ｍ９７ｄｌ濃度になるようにビリルビンを溶解した
血清ｇ、５ｍｌに、０．１％、０．５％になるように調
整したラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液を等量加
え６７℃で６０分間インキュベートした後、４ｍＭ Ｅ
ＤＴＡを含む０．２ Ｍ ）リス緩衝液２ｍｌに約１５
０ ｕ／ｍｌビリルビンオキ７グーゼを１００μｌ添加
し、さらにラウリル硫酸ナトリウムで前処理した検体を
２０μ！添加し、６７℃で１５分間反応させた後ビリル
ビンオキシダーゼによるビリルビンの酸化に伴なう４４
０ ｎｍの吸光度の減少を測定した。
血清ｇ、５ｍｌに、０．１％、０．５％になるように調
整したラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液を等量加
え６７℃で６０分間インキュベートした後、４ｍＭ Ｅ
ＤＴＡを含む０．２ Ｍ ）リス緩衝液２ｍｌに約１５
０ ｕ／ｍｌビリルビンオキ７グーゼを１００μｌ添加
し、さらにラウリル硫酸ナトリウムで前処理した検体を
２０μ！添加し、６７℃で１５分間反応させた後ビリル
ビンオキシダーゼによるビリルビンの酸化に伴なう４４
０ ｎｍの吸光度の減少を測定した。
その結果は表１に示される。
表 １
無添加 １９％
ＳＤＳ ０．１％ ７０％
０．３％ ８９％
表１に示したようにビリルビンオキシタ゛−ゼ単独では
はとんど吸光度の減少は°認められなかったが、ラウリ
ル硫酸ナトリウム０．３％以上の睦度で前処理した検体
では＃１とんど完全にビリルビンが酸化されたのが分る
。
はとんど吸光度の減少は°認められなかったが、ラウリ
ル硫酸ナトリウム０．３％以上の睦度で前処理した検体
では＃１とんど完全にビリルビンが酸化されたのが分る
。
実施例２
実施例１で示したビリルビン浴）すｔ血Ｙ１ｔに、１０
０ａ／ｍｌ、５ＣＪＯｕ／ｍｌ、１０［］Ｏｃ４／ｊ”
７！（Ｄ各濃度になるように調整したプロテアーゼ−Ｐ
（大野製薬品）を加え実施例１と同禄に前処理し／こ後
、ビリルビン含量を足ｍｌ した。
０ａ／ｍｌ、５ＣＪＯｕ／ｍｌ、１０［］Ｏｃ４／ｊ”
７！（Ｄ各濃度になるように調整したプロテアーゼ−Ｐ
（大野製薬品）を加え実施例１と同禄に前処理し／こ後
、ビリルビン含量を足ｍｌ した。
その結果は、表２に示される７、
この表から１００ｕ／Ｍ以上の濃度になるようにプロテ
アーゼ−Ｐ−を検体に作用させることにより完全にビリ
ルビンはビリルビンオキシダーゼにより酸化されたのが
分る。
アーゼ−Ｐ−を検体に作用させることにより完全にビリ
ルビンはビリルビンオキシダーゼにより酸化されたのが
分る。
実施例３
実施例１で示したビリルビン溶解血清に、１００μ／７
１１％ ５ＧＯｕ／ｍｌ濃度になるように調整したリポ
プロティンリパーゼ（東洋醸造品）を加え、実施例１１
と（Ｉ小虫に前処理した後、ビリルビン含量奮定址し／
ヒ・ その結果Ｖｌ’！４５に示される。
１１％ ５ＧＯｕ／ｍｌ濃度になるように調整したリポ
プロティンリパーゼ（東洋醸造品）を加え、実施例１１
と（Ｉ小虫に前処理した後、ビリルビン含量奮定址し／
ヒ・ その結果Ｖｌ’！４５に示される。
表 ３
Claims (2)
- （１） ビリルビンを含有する検体を界面活性剤、プロ
テアーゼ及びリパーゼの１種もしくは２種以上により処
理することを特徴とするビリルビン含有検体の処理法。 - （２）ビリルビンを含有する検体を界面活性剤、プロテ
アーゼ及びリパーゼの１種もしくは２種以上により処理
し、処理物にビリルビンオキシダーゼを添加し、検体中
のビリルビン量を定量することを特徴とするビリルビン
の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14669083A JPS6039566A (ja) | 1983-08-12 | 1983-08-12 | ビリルビン含有検体の処理法及びビリルビンの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14669083A JPS6039566A (ja) | 1983-08-12 | 1983-08-12 | ビリルビン含有検体の処理法及びビリルビンの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6039566A true JPS6039566A (ja) | 1985-03-01 |
Family
ID=15413365
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14669083A Pending JPS6039566A (ja) | 1983-08-12 | 1983-08-12 | ビリルビン含有検体の処理法及びビリルビンの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6039566A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0387784A2 (en) * | 1989-03-13 | 1990-09-19 | Unitika Ltd. | Quantitative determination of bilirubin and a reagent therefor |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5974997A (ja) * | 1982-10-22 | 1984-04-27 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 総ビリルビンの定量法 |
| JPS59130198A (ja) * | 1983-01-11 | 1984-07-26 | Nippon Shoji Kk | ビリルビン測定試薬および測定法 |
| JPS6233880A (ja) * | 1985-04-25 | 1987-02-13 | 三洋化成工業株式会社 | 合成繊維の親水化処理剤 |
-
1983
- 1983-08-12 JP JP14669083A patent/JPS6039566A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5974997A (ja) * | 1982-10-22 | 1984-04-27 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 総ビリルビンの定量法 |
| JPS59130198A (ja) * | 1983-01-11 | 1984-07-26 | Nippon Shoji Kk | ビリルビン測定試薬および測定法 |
| JPS6233880A (ja) * | 1985-04-25 | 1987-02-13 | 三洋化成工業株式会社 | 合成繊維の親水化処理剤 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0387784A2 (en) * | 1989-03-13 | 1990-09-19 | Unitika Ltd. | Quantitative determination of bilirubin and a reagent therefor |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kingsley et al. | Direct ultramicro glucose oxidase method for determination of glucose in biologic fluids | |
| Slot | Plasma creatinine determination a new and specific Jaffe reaction method | |
| US5288606A (en) | Reagent for specific determination of fructosamine | |
| DE69835268T2 (de) | Verfahren zum enzymatischen nachweis eines verzuckerungsproteins | |
| DE69028591T2 (de) | Haloperoxidase-Säure-Optimum Chemilumineszenztestsystem | |
| JP3159451B2 (ja) | 糖化タンパク質の測定 | |
| EP0387784B1 (en) | Quantitative determination of bilirubin and a reagent therefor | |
| EP1197564B1 (en) | Method of pretreatment of sample for quantitating cholesterol and method for quantitating cholesterol in specific lipoproteins by using the same | |
| DE69108439T2 (de) | Verfahren zur Bestimmung des Glykationsprozentsatzes eines bestimmten Proteins. | |
| US5149633A (en) | Process and reagent for the specific determination of fructosamine content in blood and samples obtained from blood | |
| JPS62220199A (ja) | 体液の試料中の総−ビリルビンの測定のための方法および試薬 | |
| JPS6039566A (ja) | ビリルビン含有検体の処理法及びビリルビンの定量法 | |
| CH651318A5 (de) | Verfahren und reagenz zur bestimmung der peroxidase. | |
| JPH07155196A (ja) | 生体成分の測定法 | |
| Dahlqvist et al. | Accurate assay of low intestinal lactase activity with a fluorometric method | |
| JP2001286297A (ja) | コレステロール定量用試料の前処理方法およびこれを利用する特定のリポ蛋白中のコレステロール定量法 | |
| JPS6233880B2 (ja) | ||
| Kuan et al. | An alternative method for the determination of uric acid in serum | |
| US3862010A (en) | Method of heat fractionating ldh into isoenzyme components | |
| JP3727392B2 (ja) | 抱合ビリルビン測定試薬 | |
| EP0348144B1 (en) | Method for treating mucus-containing immunoassay samples | |
| JP2665673B2 (ja) | グルコースを含有する試料中の１，５−アンヒドログルシトールの測定法 | |
| JPS59159798A (ja) | 生体体液成分の測定法 | |
| JPS5852640B2 (ja) | ペルオキシダ−ゼ活性の測定方法 | |
| JPH1172497A (ja) | 直接型ビリルビンの測定方法および測定用試薬 |