JPS6035241A - クロモゲンの測定方法 - Google Patents
クロモゲンの測定方法Info
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- JPS6035241A JPS6035241A JP12371684A JP12371684A JPS6035241A JP S6035241 A JPS6035241 A JP S6035241A JP 12371684 A JP12371684 A JP 12371684A JP 12371684 A JP12371684 A JP 12371684A JP S6035241 A JPS6035241 A JP S6035241A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
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- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明はクロモゲンの測定方法に係シ、特に検体中に含
まれる乳び、溶血および黄色などのクロモゲンを定量す
るに好適な測定方法に関する。
まれる乳び、溶血および黄色などのクロモゲンを定量す
るに好適な測定方法に関する。
臨床検査によって分析測定しようとする検体の中には、
溶血（ヘモグロビン）、黄色（ビリルビン）、乳び（濁
り）の著しいものがあシ、これらの存在が分析項目の測
定結果に影響する場合が少々くない。
溶血（ヘモグロビン）、黄色（ビリルビン）、乳び（濁
り）の著しいものがあシ、これらの存在が分析項目の測
定結果に影響する場合が少々くない。
このような妨害クロモゲンによる影響は、特にエンドポ
イント法及び比濁分析において著しく、レート法（反応
速度測定法）においては殆どない。
イント法及び比濁分析において著しく、レート法（反応
速度測定法）においては殆どない。
しかしながら、生化学検査の全ての物質に対してレート
法を用いることは原理的には可能であっても、試薬の価
格、操作の簡便さ、処理速度等の点に問題がある。従っ
て、現状では、検査件数全体に対してエンドポイント法
の占める割合は依然として極めて高い。
法を用いることは原理的には可能であっても、試薬の価
格、操作の簡便さ、処理速度等の点に問題がある。従っ
て、現状では、検査件数全体に対してエンドポイント法
の占める割合は依然として極めて高い。
従来から行なわれている、このようなりロモゲンの妨害
を防ぐ最も基本的な方法は、全ての検体、全ての検査項
目毎に検体ブランクを測定するものである５勿陶、検体
ブランクを測定するだめの試薬の組成など、検討すべき
問題も多くあるが、基本的には測定反応に関与する物質
の中の適当なものを除いた試薬を用いて検体ブランクを
測定し、これとその検体の反応液との差よシ目的物質を
算出すれば、前述のような妨害物質の影響のない真値に
近い正確な分析値が得られる。しかしながら、このよう
カ検体プラ／り補正法を自動分析装置に用いると、１試
料に対し２回ずつ測定が必要となるため、必然的に装置
の検体処理速度が半分に低いないのが現状である。
を防ぐ最も基本的な方法は、全ての検体、全ての検査項
目毎に検体ブランクを測定するものである５勿陶、検体
ブランクを測定するだめの試薬の組成など、検討すべき
問題も多くあるが、基本的には測定反応に関与する物質
の中の適当なものを除いた試薬を用いて検体ブランクを
測定し、これとその検体の反応液との差よシ目的物質を
算出すれば、前述のような妨害物質の影響のない真値に
近い正確な分析値が得られる。しかしながら、このよう
カ検体プラ／り補正法を自動分析装置に用いると、１試
料に対し２回ずつ測定が必要となるため、必然的に装置
の検体処理速度が半分に低いないのが現状である。
本発明の目的は、乳び、溶血および黄色の３種のクロモ
ゲンを、同じ検体から同時期に定量し得るクロモゲンの
測定方法を提供することにおる。
ゲンを、同じ検体から同時期に定量し得るクロモゲンの
測定方法を提供することにおる。
本発明では、可視光波長域のうちの乳びの影響はあるが
溶血および黄色の影響が実質的にない長波長域での適正
な波長における吸光度を測定して乳びの程度をめること
、可視光波長域のうちの黄色の影響が実質的に々い中波
長域での適正な波長における吸光度の値および長波長域
における測定値に基づいて溶血の程度をめること、およ
び可視波長域のうちの溶血の影響がある短波長域での適
正な波長における吸光度の値および中波長域における測
定値に基づいて黄色の程度をめることを、同じ検体に対
して行う点に特徴がある。
溶血および黄色の影響が実質的にない長波長域での適正
な波長における吸光度を測定して乳びの程度をめること
、可視光波長域のうちの黄色の影響が実質的に々い中波
長域での適正な波長における吸光度の値および長波長域
における測定値に基づいて溶血の程度をめること、およ
び可視波長域のうちの溶血の影響がある短波長域での適
正な波長における吸光度の値および中波長域における測
定値に基づいて黄色の程度をめることを、同じ検体に対
して行う点に特徴がある。
本発明に基づ〈実施例の詳細を説明するに先立ち、本発
明に対する理解を助けるための説明をする。
明に対する理解を助けるための説明をする。
これらの妨害クロモゲンを解析しやすい分析項目として
は、例えば、ダルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナ
ーゼ（以下ＧＯＴと称する）、グルタミン酸ピルビン酸
トランスアミナーゼ（以下ＧＰＴと称する）、乳酸脱水
素酵素（以下ＬＤＨと称する）、ヒドロキシ酪酸脱水素
酵素（以下■（Ｂ Ｄ Ｈと称する）のように、紫外部
吸収によって目的物質を測定する分析項目があげられる
。これらの分析項目の測定においては、その目的物質で
あるニコチンアミドアデニンデヌクレオチツド還元形（
以下ＮＡＤＨと称する）の吸収が紫外部のみにあシ、可
視波長域においては前述の妨害物質による吸収スペクト
ルと重ならない。このような紫外部のみに吸収を有する
補酵素としては、ＮＡＤＩ（の他にＮＡＤＰＨを用いる
ことができ、３４ ｏｎｍ付近の吸収が測定される。し
かも、液性も中性の緩衝液（ＰＨ７，４）であるため、
前述の妨害物質のスペクトルが比較的単純な形状をして
おシ、その解析が容易である。
は、例えば、ダルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナ
ーゼ（以下ＧＯＴと称する）、グルタミン酸ピルビン酸
トランスアミナーゼ（以下ＧＰＴと称する）、乳酸脱水
素酵素（以下ＬＤＨと称する）、ヒドロキシ酪酸脱水素
酵素（以下■（Ｂ Ｄ Ｈと称する）のように、紫外部
吸収によって目的物質を測定する分析項目があげられる
。これらの分析項目の測定においては、その目的物質で
あるニコチンアミドアデニンデヌクレオチツド還元形（
以下ＮＡＤＨと称する）の吸収が紫外部のみにあシ、可
視波長域においては前述の妨害物質による吸収スペクト
ルと重ならない。このような紫外部のみに吸収を有する
補酵素としては、ＮＡＤＩ（の他にＮＡＤＰＨを用いる
ことができ、３４ ｏｎｍ付近の吸収が測定される。し
かも、液性も中性の緩衝液（ＰＨ７，４）であるため、
前述の妨害物質のスペクトルが比較的単純な形状をして
おシ、その解析が容易である。
第２図に、ＧＯＴの紫外部領域を含む吸収スペクトルを
示す。図において、１４はＮＡＤＨの吸収であシ前述の
妨害クロモゲンを全く含まない理想的な正常血清の反応
液のスペクトルを水対象で示したもの、１６は、窩孔び
血清の反応液のスペクトルを試薬ブランク対象で示した
もの、１８は、高黄色血清の反応液のスペクトルを同じ
く試薬ブランク対象で示したものである。又、図におい
て、波長λ１！は３４０ｎｍ、 λ１２は３７６ｎｍ、
λ１３は４１５ｎｍ、λ１４は４５０ｎｍ、λ１５は４
８０ｎｍ、Ａ１６は５０５ｎｍ、Ａ１７は５４５ｎｍ。
示す。図において、１４はＮＡＤＨの吸収であシ前述の
妨害クロモゲンを全く含まない理想的な正常血清の反応
液のスペクトルを水対象で示したもの、１６は、窩孔び
血清の反応液のスペクトルを試薬ブランク対象で示した
もの、１８は、高黄色血清の反応液のスペクトルを同じ
く試薬ブランク対象で示したものである。又、図におい
て、波長λ１！は３４０ｎｍ、 λ１２は３７６ｎｍ、
λ１３は４１５ｎｍ、λ１４は４５０ｎｍ、λ１５は４
８０ｎｍ、Ａ１６は５０５ｎｍ、Ａ１７は５４５ｎｍ。
Ａ１８は５７０ｎｍ、λ１．は６００ｎｍ、Ａ２゜は６
６０ｎｍ、λｚｌＢ７００ ｎｍ、Ａ３２は８５０ｎｍ
である。８２図から明らかなどと＜、ＧＯＴ測定用の反
応液の可視波長域のスペクトルを解析すれば、前記妨害
クロモゲンの量をめることができる。
６０ｎｍ、λｚｌＢ７００ ｎｍ、Ａ３２は８５０ｎｍ
である。８２図から明らかなどと＜、ＧＯＴ測定用の反
応液の可視波長域のスペクトルを解析すれば、前記妨害
クロモゲンの量をめることができる。
次に、測定波長として１２波長を同時検出し得る多波長
光度計（例えば特開昭５０−１８０９０参照）を備えた
自動分析装置を用いた場合の、本発明の実施例を詳細に
説明する。
光度計（例えば特開昭５０−１８０９０参照）を備えた
自動分析装置を用いた場合の、本発明の実施例を詳細に
説明する。
第１図に、多波長光度計を備えた自動分析装置を使用し
て分析した場合に得られる吸収スペクトラムを示す。図
において、２０は、ＧＯＴ測定液で希釈した乳び基準液
のスペクトル、２２は、同じ＜ＧＯＴ測定液で希釈した
溶血基準液のスペクトル、２４は、同じ＜ＧＯＴ測定液
で希釈した黄色基準液のスペクトルである。乳び基準液
は、２０クンケル単位相当の微細ポリスチレン粉末を、
ＧＯＴ試薬で希釈乳濁させたもの、溶血基準液は、ｘｏ
ｏｏｍｇ／ｃｉｚのヘモグロビン基準液を、検体血清と
同一条件でＧＯＴ測定液で希釈溶解したもの、黄色基準
液は、１０ｍｇ／ｄｔのビリルビンコントロール血清を
検体血清と同一条件でＧＯＴ測定液で希釈溶解したもの
である。前記スペクトル２０゜２２．２４は、いずれも
試薬ブランク対象のスペクトルである。又各波長は、第
２図と同一である。
て分析した場合に得られる吸収スペクトラムを示す。図
において、２０は、ＧＯＴ測定液で希釈した乳び基準液
のスペクトル、２２は、同じ＜ＧＯＴ測定液で希釈した
溶血基準液のスペクトル、２４は、同じ＜ＧＯＴ測定液
で希釈した黄色基準液のスペクトルである。乳び基準液
は、２０クンケル単位相当の微細ポリスチレン粉末を、
ＧＯＴ試薬で希釈乳濁させたもの、溶血基準液は、ｘｏ
ｏｏｍｇ／ｃｉｚのヘモグロビン基準液を、検体血清と
同一条件でＧＯＴ測定液で希釈溶解したもの、黄色基準
液は、１０ｍｇ／ｄｔのビリルビンコントロール血清を
検体血清と同一条件でＧＯＴ測定液で希釈溶解したもの
である。前記スペクトル２０゜２２．２４は、いずれも
試薬ブランク対象のスペクトルである。又各波長は、第
２図と同一である。
第１図から明らかなごとく、ＧＯＴ試薬液で可視波長域
に表われる検体ブランク吸収のうち、λ２Ｇ以降の長波
長域は乳びによるものでｓｂ、２１７〜１ｇの中間波長
域は乳びと溶血によるものでアシ、Ａ１６以前の短波長
域は、乳び、溶血、黄色の３成分によるものであること
が分かる。従って、以下に述べる方法によって、これら
３成分を弁別測定することが可能である。
に表われる検体ブランク吸収のうち、λ２Ｇ以降の長波
長域は乳びによるものでｓｂ、２１７〜１ｇの中間波長
域は乳びと溶血によるものでアシ、Ａ１６以前の短波長
域は、乳び、溶血、黄色の３成分によるものであること
が分かる。従って、以下に述べる方法によって、これら
３成分を弁別測定することが可能である。
即ち、ＧＯＴ測定の検体反応液の吸収スペクトルを多波
長光度計によって全波長域にわたって測定し、その紫外
部吸収により目的物質のＧＯＴを測定すると同時に、可
視波長域のスペクトルよシ次の方法によって、その検体
血清中の乳び度、溶血贋、黄色度をめる。
長光度計によって全波長域にわたって測定し、その紫外
部吸収により目的物質のＧＯＴを測定すると同時に、可
視波長域のスペクトルよシ次の方法によって、その検体
血清中の乳び度、溶血贋、黄色度をめる。
まずλ２ｏ以降の適当な２波長（例えばλ２ｏとλ、１
）の吸光度差より、次式を用いて乳び度Ｘをめる。
）の吸光度差より、次式を用いて乳び度Ｘをめる。
ここで、Ａ２０−２１は、検体における波長λ２゜とＡ
２１の吸光度差）Ｔ２ｏ−ａｔは、スペクトル２０より
予めめた、単位濁度尚たシの吸光度差を表わす定数であ
る。
２１の吸光度差）Ｔ２ｏ−ａｔは、スペクトル２０より
予めめた、単位濁度尚たシの吸光度差を表わす定数であ
る。
次に、中波長域の適当な２波長（例えばＡ１８とλＩり
における吸光度差Ａｌ５−ｔｏよシ次式を用いて溶血度
Ｙをめる。
における吸光度差Ａｌ５−ｔｏよシ次式を用いて溶血度
Ｙをめる。
ここで、Ｔ１５−ｔｏは、スペクトル２０よシ予めめた
、単位温度当たりの吸光度差を示す定数、Ｈｌｌｌ−１
９は、同じくスペクトル２２よシ予めめた、単位溶血適
当たｐの吸光度差を示す定数である。
、単位温度当たりの吸光度差を示す定数、Ｈｌｌｌ−１
９は、同じくスペクトル２２よシ予めめた、単位溶血適
当たｐの吸光度差を示す定数である。
次に、更に短波長域の適当な２波長（例えば、λ１．と
Ａ１６）における吸光度差Ａ１５−１６よ、！１ｌｌＳ
次式を用いて、黄色度Ｚをめる。
Ａ１６）における吸光度差Ａ１５−１６よ、！１ｌｌＳ
次式を用いて、黄色度Ｚをめる。
・・・・・・・・・（３）
ここで５Ｔ１６−１６は１スペクトル２０よシ予めめた
単位？ｉ度適当シの吸光度差を示す定数、ｎｌ、−１，
は、同じくスペクトル２２よシ予めめた単位溶血度尚た
りの吸光度差を示す定数、１３ｔｓ−ｔ６は、同じくス
ペクトル２４よシ予めめた単位黄色度尚たシの吸光度差
を示す定数である。
単位？ｉ度適当シの吸光度差を示す定数、ｎｌ、−１，
は、同じくスペクトル２２よシ予めめた単位溶血度尚た
りの吸光度差を示す定数、１３ｔｓ−ｔ６は、同じくス
ペクトル２４よシ予めめた単位黄色度尚たシの吸光度差
を示す定数である。
前記のようにしてめた、検体中の乳び度Ｘ１溶血度Ｙ１
黄色度Ｚから、次式を用いて、比色分析法による分析値
Ｓを補正し、正確度の高い補正分析値Ｓ１を得ることが
できる。
黄色度Ｚから、次式を用いて、比色分析法による分析値
Ｓを補正し、正確度の高い補正分析値Ｓ１を得ることが
できる。
ｓ’＝ｓ−α・Ｘ−β・Ｙ−γ・Ｚ ・・・・・・・・
・（４）ここで、α、β、γは、前述した乳び、溶血、
黄 の各基準液を検体と同一条件で測定して予めめた換
算定数である。
・（４）ここで、α、β、γは、前述した乳び、溶血、
黄 の各基準液を検体と同一条件で測定して予めめた換
算定数である。
前記各式で用いられる定数、Ｔ、。−１１＋ Ｔ１８−
１１ ＋Ｔ１５−１６ ＋ Ｈｌｌｌ−１９＋ ＨＩＢ
−１６＋ ＢＩＳ−１８＋αｔβ、γは、自動分析装置
と試薬が同一であれば一定であるため、一度測定すれば
、必ずしも毎回求める必要はない。
１１ ＋Ｔ１５−１６ ＋ Ｈｌｌｌ−１９＋ ＨＩＢ
−１６＋ ＢＩＳ−１８＋αｔβ、γは、自動分析装置
と試薬が同一であれば一定であるため、一度測定すれば
、必ずしも毎回求める必要はない。
本実施例においては、検体中の＃害りロモゲンである乳
び度を、可視波長域の吸収スペクトルの長波長域におけ
る適当な２波長の吸光度差からめ、同じく溶血度を前記
孔び度及び中波長域における適当な２波長の吸光度差か
らめ、更に、同じく黄色度を、前記孔び度、溶血度及び
短波長域における適当な２波長の吸光度差からめるよう
にしているので、各妨害クロモゲン濃度を、分離して、
かつ精度良くめることが可能である。
び度を、可視波長域の吸収スペクトルの長波長域におけ
る適当な２波長の吸光度差からめ、同じく溶血度を前記
孔び度及び中波長域における適当な２波長の吸光度差か
らめ、更に、同じく黄色度を、前記孔び度、溶血度及び
短波長域における適当な２波長の吸光度差からめるよう
にしているので、各妨害クロモゲン濃度を、分離して、
かつ精度良くめることが可能である。
なお、前記実施例においては、妨害クロモゲンの量をめ
るのに、ＧＯＴの測定液のスペクトルを用いていたが、
妨害クロモゲンをめるためのスペクトルは前記実施例に
限定されず、ＧＰＴ。
るのに、ＧＯＴの測定液のスペクトルを用いていたが、
妨害クロモゲンをめるためのスペクトルは前記実施例に
限定されず、ＧＰＴ。
ＬＤＨ，ＨＢＤＨ等の紫外部測定の測定液のスペクトル
を用いることもできる。
を用いることもできる。
又、前記実施例は、２波長測定法を用いた比色分析方法
に本発明を適用したものであるが、本発明の適用範囲は
これに限定されず、適当な１波長における吸光度で代用
することによシ、１波長吸光分析にも適用できる。
に本発明を適用したものであるが、本発明の適用範囲は
これに限定されず、適当な１波長における吸光度で代用
することによシ、１波長吸光分析にも適用できる。
なお、前記実施例は、本発明を、血清に対する比色分析
方法に適用したものであるが、本発明の適用範囲がこれ
に限定されず、一般の比色分析方法に適用できることは
明らかである。
方法に適用したものであるが、本発明の適用範囲がこれ
に限定されず、一般の比色分析方法に適用できることは
明らかである。
本発明によれば、同じ液について可視域の複数波長の吸
光度を測定することによって、乳び、溶血、黄色の３種
のクロモゲンについて定量的に測定することができるの
で、臨床検査結果の判定に役立てることができる。
光度を測定することによって、乳び、溶血、黄色の３種
のクロモゲンについて定量的に測定することができるの
で、臨床検査結果の判定に役立てることができる。
第１図は、ＧＯＴ反応液中における乳び、溶血。
黄色の各基準吸収スペクトルを示す図、第２図は、代表
的な検体血清のＧＯＴ反応液における吸収スペクトル例
を示す図である。 一一一一波長 羊 ２ 図 →ノ皮長−
的な検体血清のＧＯＴ反応液における吸収スペクトル例
を示す図である。 一一一一波長 羊 ２ 図 →ノ皮長−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、乳び、溶血および黄色の内の少なくとも１つによる
クロモゲンの影響がある試料に光を照射し、その試料の
クロモゲンを測定する方法において、可視波長域のうち
の乳びの影響はあるが溶血および黄色の影響が実質的に
ない長波長域での適正な波長における吸光度を測定して
乳びの程度をめること、可視波長域のうちの黄色の影響
が実質的にない中波長域での適正な波長における吸光度
の値および長波長域における測定値に基づいて溶血の程
度をめること、および可視波長域のうちの溶血の影響が
ある短波長域での適正な波長における吸光度の値および
中波長域における測定値に基づいて黄色の程度をめるこ
とを特徴とするクロモゲンの測定方法。 ２、乳び、溶血および黄色のうちの少なくとも１つによ
るクロモゲンの影響がある試料に光を照射し、その試料
のクロモゲンを測定するクロモゲンの影響がある検体の
分析方法において、上記光が照射される試料は、ＮＡＤ
Ｈ法の補酵素と検体とを含む材料液であること、この試
料液について可視波長域のうちの乳びの影響はあるが溶
血および黄色の影響が実質的にない長波長域での適正な
波長における吸光度を測定して乳びの程度をめること、
上記試料液について可視波長域のうちの黄色の影響が実
質的にない中波長域での適正な波長における吸光度の値
および長波長域における測定値に基づいて溶血の程度を
めること、および上記試料液について可視波長域のうち
の溶血の影響がある短波長域での適正な波長における吸
光度の値および中波長域における測定値に基づいて黄色
の程度をめることを含むことを特徴とするクロモゲンの
影響がある検体の分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12371684A JPS6035241A (ja) | 1984-06-18 | 1984-06-18 | クロモゲンの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12371684A JPS6035241A (ja) | 1984-06-18 | 1984-06-18 | クロモゲンの測定方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12960277A Division JPS5463785A (en) | 1977-10-31 | 1977-10-31 | Colorimetric analysis method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6035241A true JPS6035241A (ja) | 1985-02-23 |
| JPS6119933B2 JPS6119933B2 (ja) | 1986-05-20 |
Family
ID=14867592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12371684A Granted JPS6035241A (ja) | 1984-06-18 | 1984-06-18 | クロモゲンの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6035241A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018030531A1 (ja) * | 2016-08-10 | 2018-02-15 | 積水メディカル株式会社 | ＨｂＡ１ｃの測定法 |
| CN110609002A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-12-24 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 一种干扰检测方法及样本分析仪 |
| CN110609002B (zh) * | 2018-12-29 | 2024-05-31 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 一种干扰检测方法及样本分析仪 |
-
1984
- 1984-06-18 JP JP12371684A patent/JPS6035241A/ja active Granted
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018030531A1 (ja) * | 2016-08-10 | 2018-02-15 | 積水メディカル株式会社 | ＨｂＡ１ｃの測定法 |
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