JPS6119933B2 - - Google Patents
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- JPS6119933B2 JPS6119933B2 JP12371684A JP12371684A JPS6119933B2 JP S6119933 B2 JPS6119933 B2 JP S6119933B2 JP 12371684 A JP12371684 A JP 12371684A JP 12371684 A JP12371684 A JP 12371684A JP S6119933 B2 JPS6119933 B2 JP S6119933B2
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
-
- G—PHYSICS
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- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
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- G01N2021/3148—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths using three or more wavelengths
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Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明はクロモゲンの測定方法に係り、特に検
体中に含まれる乳び、溶血および黄疸などのクロ
モゲンを定量するに好適な測定方法に関する。
体中に含まれる乳び、溶血および黄疸などのクロ
モゲンを定量するに好適な測定方法に関する。
臨床検査によつて分析測定しようとする検体の
中には、溶血(ヘモグロビン)、黄疸(ビリルビ
ン)、乳び(濁り)の著しいものがあり、これら
の存在が分析項目の測定結果に影響する場合が少
なくない。
中には、溶血(ヘモグロビン)、黄疸(ビリルビ
ン)、乳び(濁り)の著しいものがあり、これら
の存在が分析項目の測定結果に影響する場合が少
なくない。
このような妨害クロモゲンによる影響は、特に
エンドポイント法及び比濁分析において著しく、
レート法(反応速度測定法)においては殆どな
い。しかしながら、生化学検査の全ての物質に対
してレート法を用いることは原理的には可能であ
つても、試薬の価格、操作の簡便さ、処理速度等
の点に問題がある。従つて、現状では、検査件数
全体に対してエンドポイント法の占める割合は依
然として極めて高い。
エンドポイント法及び比濁分析において著しく、
レート法(反応速度測定法)においては殆どな
い。しかしながら、生化学検査の全ての物質に対
してレート法を用いることは原理的には可能であ
つても、試薬の価格、操作の簡便さ、処理速度等
の点に問題がある。従つて、現状では、検査件数
全体に対してエンドポイント法の占める割合は依
然として極めて高い。
従来から行なわれている、このようなクロモゲ
ンの妨害を防ぐ最も基本的な方法は、全ての検
体、全ての検査項目毎に検体ブランクを測定する
ものである。勿論、検体ブランクを測定するため
の試薬の組成など、検討すべき問題も多くある
が、基本的には測定反応に関与する物質の中の適
当なものを除いた試薬を用いて検体ブランクを測
定し、これとその検体の反応液との差より目的物
質を算出すれば、前述のような妨害物質の影響の
ない真値に近い正確な分析値が得られる。しかし
ながら、このような検体ブランク補正法を自動分
析装置に用いると、1試料に対し2回ずつ測定が
必要となるため、必然的に装置の検体処理速度が
半分に低下し、しかも必要な試薬の種類が増大す
る等の欠点もあり、1部の特殊な検査項目の検査
以外には適用されていないのが現状である。
ンの妨害を防ぐ最も基本的な方法は、全ての検
体、全ての検査項目毎に検体ブランクを測定する
ものである。勿論、検体ブランクを測定するため
の試薬の組成など、検討すべき問題も多くある
が、基本的には測定反応に関与する物質の中の適
当なものを除いた試薬を用いて検体ブランクを測
定し、これとその検体の反応液との差より目的物
質を算出すれば、前述のような妨害物質の影響の
ない真値に近い正確な分析値が得られる。しかし
ながら、このような検体ブランク補正法を自動分
析装置に用いると、1試料に対し2回ずつ測定が
必要となるため、必然的に装置の検体処理速度が
半分に低下し、しかも必要な試薬の種類が増大す
る等の欠点もあり、1部の特殊な検査項目の検査
以外には適用されていないのが現状である。
〔発明の目的〕
本発明の目的は、乳び、溶血および黄疸の3種
のクロモゲンを、同じ検体から同時期に定量し得
るクロモゲンの測定方法を提供することにある。
のクロモゲンを、同じ検体から同時期に定量し得
るクロモゲンの測定方法を提供することにある。
本発明では、可視光波長域のうちの乳びの影響
はあるが溶血および黄疸の影響が実質的にない長
波長域での適正な波長における吸光度を測定して
乳びの程度を求めること、可視光波長域のうちの
黄疸の影響が実質的にない中波長域での適正な波
長における吸光度の値および長波長域における測
定値に基づいて溶血の程度を求めること、および
可視波長域のうちの溶血の影響がある短波長域で
の適正な波長における吸光度の値および中波長域
における測定値に基づいて黄疸の程度を求めるこ
とを、同じ検体に対して行う点に特徴がある。
はあるが溶血および黄疸の影響が実質的にない長
波長域での適正な波長における吸光度を測定して
乳びの程度を求めること、可視光波長域のうちの
黄疸の影響が実質的にない中波長域での適正な波
長における吸光度の値および長波長域における測
定値に基づいて溶血の程度を求めること、および
可視波長域のうちの溶血の影響がある短波長域で
の適正な波長における吸光度の値および中波長域
における測定値に基づいて黄疸の程度を求めるこ
とを、同じ検体に対して行う点に特徴がある。
本発明に基づく実施例の詳細を説明するに先立
ち、本発明に対する理解を助けるための説明をす
る。
ち、本発明に対する理解を助けるための説明をす
る。
これらの妨害クロモゲンを解析しやすい分析項
目としては、例えば、ダルタミン酸オキザロ酢酸
トランスアミナーゼ(以下GOTと称する)、グル
タミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(以下
GPTと称する)、乳酸脱水素酵素(以下LDHと称
する)、ヒドロキシ酪酸脱水素酵素(以下HBDH
と称する)のように、紫外部吸収によつて目的物
質を測定する分析項目があげられる。これらの分
析項目の測定においては、その目的物質であるニ
コチンアミドアデニンデヌクレオチツド還元形
(以下NADHと称する)の吸収が紫外部のみにあ
り、可視波長域においては前述の妨害物質による
吸収スペクトルと重ならない。このような紫外部
のみに吸収を有する補酵素としては、NADHの他
にNADPHを用いることができ、340nm付近の吸
収が測定される。しかも、液性も中性の緩衝液
(PH7.4)であるため、前述の妨害物質のスペクト
ルが比較的単純な形状をしており、その解析が容
易である。
目としては、例えば、ダルタミン酸オキザロ酢酸
トランスアミナーゼ(以下GOTと称する)、グル
タミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(以下
GPTと称する)、乳酸脱水素酵素(以下LDHと称
する)、ヒドロキシ酪酸脱水素酵素(以下HBDH
と称する)のように、紫外部吸収によつて目的物
質を測定する分析項目があげられる。これらの分
析項目の測定においては、その目的物質であるニ
コチンアミドアデニンデヌクレオチツド還元形
(以下NADHと称する)の吸収が紫外部のみにあ
り、可視波長域においては前述の妨害物質による
吸収スペクトルと重ならない。このような紫外部
のみに吸収を有する補酵素としては、NADHの他
にNADPHを用いることができ、340nm付近の吸
収が測定される。しかも、液性も中性の緩衝液
(PH7.4)であるため、前述の妨害物質のスペクト
ルが比較的単純な形状をしており、その解析が容
易である。
第2図に、GOTの紫外部領域を含む吸収スペ
クトルを示す。図において、14はNADHの吸収
であり前述の妨害クロモゲンを全く含まない理想
的な正常血清の反応液のスペクトルを水対象で示
したもの、16は、高乳び血清の反応液のスペク
トルを試薬ブランク対象で示したもの、18は、
高黄疸血清の反応液のスペクトルを同様に試薬ブ
ランク対象で示したものである。ここで、水対象
スペクトル14は、試料セルに収容した妨害クロ
モゲンを含まない血清の反応液の吸収スペクトル
と、対照セルに収容した水の吸収スペクトルとを
測定し、各波長点における両者の吸光度差を表示
したものである。また、試薬ブランク対象スペク
トル16は、試料セルに収容した高乳び血清の反
応液の吸収スペクトルと、対照セルに収容した測
定用試薬(血清試料を含まない)の吸収スペクト
ルとを測定し、各波長における両者の吸光度差を
表示したものである。試薬ブランク対象スペクト
ル18は、試料セルに収容した高黄疸血清の反応
液の吸収スペクトルと、対照セルに収容した測定
用試薬(血清試料を含まない)の吸収スペクトル
とを測定し、各波長における両者の吸光度差を表
示したものである。又、第2図において、波長λ
11は340nm、λ12は376nm、λ13は415nm、λ14は
450nm、λ15は480nm、λ16は505nm、λ17は
546nm、λ18は570nm、λ19は600nm、λ20は
660nm、λ21は700nm、λ22は850nmである。第
2図から明らかなごとく、GOT測定用の反応液
の可視波長域のスペクトルを解析すれば、前記妨
害クロモゲンの量を求めることができる。
クトルを示す。図において、14はNADHの吸収
であり前述の妨害クロモゲンを全く含まない理想
的な正常血清の反応液のスペクトルを水対象で示
したもの、16は、高乳び血清の反応液のスペク
トルを試薬ブランク対象で示したもの、18は、
高黄疸血清の反応液のスペクトルを同様に試薬ブ
ランク対象で示したものである。ここで、水対象
スペクトル14は、試料セルに収容した妨害クロ
モゲンを含まない血清の反応液の吸収スペクトル
と、対照セルに収容した水の吸収スペクトルとを
測定し、各波長点における両者の吸光度差を表示
したものである。また、試薬ブランク対象スペク
トル16は、試料セルに収容した高乳び血清の反
応液の吸収スペクトルと、対照セルに収容した測
定用試薬(血清試料を含まない)の吸収スペクト
ルとを測定し、各波長における両者の吸光度差を
表示したものである。試薬ブランク対象スペクト
ル18は、試料セルに収容した高黄疸血清の反応
液の吸収スペクトルと、対照セルに収容した測定
用試薬(血清試料を含まない)の吸収スペクトル
とを測定し、各波長における両者の吸光度差を表
示したものである。又、第2図において、波長λ
11は340nm、λ12は376nm、λ13は415nm、λ14は
450nm、λ15は480nm、λ16は505nm、λ17は
546nm、λ18は570nm、λ19は600nm、λ20は
660nm、λ21は700nm、λ22は850nmである。第
2図から明らかなごとく、GOT測定用の反応液
の可視波長域のスペクトルを解析すれば、前記妨
害クロモゲンの量を求めることができる。
次に、測定波長として12波長を同時検出し得る
多波長光度計(例えば特開昭50−18090参照)を
備えた自動分析装置を用いた場合の、本発明の実
施例を詳細に説明する。
多波長光度計(例えば特開昭50−18090参照)を
備えた自動分析装置を用いた場合の、本発明の実
施例を詳細に説明する。
第1図に、多波長光度計を備えた自動分析装置
を使用して分析した場合に得られる吸収スペクト
ラムを示す。図において、20は、GOT測定液
で希釈した乳び基準液のスペクトル、22は、同
じくGOT測定液で希釈した溶血基準液のスペク
トル、24は、同じくGOT測定液で希釈した黄
疸基準液のスペクトルである。乳び基準液は、20
クンケル単位相当の微細ポリスチレン粉末を
GOT試薬で希釈乳濁させたもの、溶血基準液
は、1000mg/dlのヘモグロビン基準液を、検体血
清と同一条件でGOT測定液で希釈溶解したも
の、黄疸基準液は、10mg/dlのピリルビンコント
ロール血清を検体血清と同一条件でGOT測定液
で希釈溶解したものである。前記スペクトル2
0,22,24は、いずれも試薬ブランク対象の
スペクトルである。この場合、各試薬対象スペク
トルは、各試料セルに収容した各基準液の吸収ス
ペクトルと、対照セルに収容した測定用試薬(血
清試料を含まない)の吸収スペクトルとを測定
し、各波長における各基準液と試薬ブランク液と
の吸光度差を表示したものである。又各波長は、
第2図と同一である。
を使用して分析した場合に得られる吸収スペクト
ラムを示す。図において、20は、GOT測定液
で希釈した乳び基準液のスペクトル、22は、同
じくGOT測定液で希釈した溶血基準液のスペク
トル、24は、同じくGOT測定液で希釈した黄
疸基準液のスペクトルである。乳び基準液は、20
クンケル単位相当の微細ポリスチレン粉末を
GOT試薬で希釈乳濁させたもの、溶血基準液
は、1000mg/dlのヘモグロビン基準液を、検体血
清と同一条件でGOT測定液で希釈溶解したも
の、黄疸基準液は、10mg/dlのピリルビンコント
ロール血清を検体血清と同一条件でGOT測定液
で希釈溶解したものである。前記スペクトル2
0,22,24は、いずれも試薬ブランク対象の
スペクトルである。この場合、各試薬対象スペク
トルは、各試料セルに収容した各基準液の吸収ス
ペクトルと、対照セルに収容した測定用試薬(血
清試料を含まない)の吸収スペクトルとを測定
し、各波長における各基準液と試薬ブランク液と
の吸光度差を表示したものである。又各波長は、
第2図と同一である。
第1図から明らかなごとく、GOT試薬液で可
視波長域に表われる検体ブランク吸収のうち、λ
20以降の長波長域は乳びによるものであり、λ17
〜19の中間波長域は乳びと溶血によるものであ
り、λ16以前の短波長域は、乳び、溶血、黄疸の
3成分によるものであることが分かる。従つて、
以下に述ベる方法によつて、これら3成分を弁別
測定することが可能である。
視波長域に表われる検体ブランク吸収のうち、λ
20以降の長波長域は乳びによるものであり、λ17
〜19の中間波長域は乳びと溶血によるものであ
り、λ16以前の短波長域は、乳び、溶血、黄疸の
3成分によるものであることが分かる。従つて、
以下に述ベる方法によつて、これら3成分を弁別
測定することが可能である。
即ち、GOT測定の検体反応液の吸収スペクト
ルを多波長光度計によつて全波長域にわたつて測
定し、その紫外部吸収により目的物質のGOTを
測定すると同時に、可視波長域のスペクトルより
次の方法によつて、その検体血清中の乳び度、溶
血度、黄疸度を求める。
ルを多波長光度計によつて全波長域にわたつて測
定し、その紫外部吸収により目的物質のGOTを
測定すると同時に、可視波長域のスペクトルより
次の方法によつて、その検体血清中の乳び度、溶
血度、黄疸度を求める。
まずλ20以降の適当な2波長(例えばλ20とλ
21)の吸光度差より、次式を用いて乳び度Xを求
める。
21)の吸光度差より、次式を用いて乳び度Xを求
める。
X=A20−21/T20−21 ……(1)
ここで、A20-21は、検体における波長λ20とλ
21の吸光度差、T20-21は、スペクトル20より予
め求めた、単位濁度当たりの吸光度差を表わす定
数である。
21の吸光度差、T20-21は、スペクトル20より予
め求めた、単位濁度当たりの吸光度差を表わす定
数である。
次に、中波長域の適当な2波長(例えばλ18と
λ19)における吸光度差A18-19より次式を用いて
溶血度Yを求める。
λ19)における吸光度差A18-19より次式を用いて
溶血度Yを求める。
Y=A18−19−X・T18−19/H18−1
9……(2) ここで、T18-19は、スペクトル20より予め求
めた、単位濁度当たりの吸光度差を示す定数、
H18-19は、同じくスペクトル22より予め求め
た、単位溶血度当たりの吸光度差を示す定数であ
る。
9……(2) ここで、T18-19は、スペクトル20より予め求
めた、単位濁度当たりの吸光度差を示す定数、
H18-19は、同じくスペクトル22より予め求め
た、単位溶血度当たりの吸光度差を示す定数であ
る。
次に、更に短波長域の適当な2波長(例えば、
λ15とλ16)における吸光度差A15-16より、次式を
用いて、黄疸度Zを求める。
λ15とλ16)における吸光度差A15-16より、次式を
用いて、黄疸度Zを求める。
Z=A15−16−X・T15−16−Y・H15−
16/B15−16 ……(3) ここで、T15-16は、スペクトル20より予め求
めた単位濁度当たりの吸光度差を示す定数、
H15-16は、同じくスペクトル22より予め求めた
単位溶血度当たりの吸光度差を示す定数、B15-16
は、同じくスペクトル24より予め求めた単位黄
色度当たりの吸光度差を示す定数である。
16/B15−16 ……(3) ここで、T15-16は、スペクトル20より予め求
めた単位濁度当たりの吸光度差を示す定数、
H15-16は、同じくスペクトル22より予め求めた
単位溶血度当たりの吸光度差を示す定数、B15-16
は、同じくスペクトル24より予め求めた単位黄
色度当たりの吸光度差を示す定数である。
前記のようにして求めた、検体中の乳び度X、
溶血度Y、黄疸度Zから、次式を用いて、比色分
析法による分析値Sを補正し、正確度の高い補正
分析値S1を得ることができる。
溶血度Y、黄疸度Zから、次式を用いて、比色分
析法による分析値Sを補正し、正確度の高い補正
分析値S1を得ることができる。
S1=S−α・X−β・Y−γ・Z ……(4)
ここで、α,β,γは、前述した乳び、溶血、
黄疸の各基準液を検体と同一条件で測定して予め
求めた換算定数である。
黄疸の各基準液を検体と同一条件で測定して予め
求めた換算定数である。
前記各式で用いられる定数、T20-21,T18-19,
T15-16,H18-19,H15-16,B15-16,α,β,γは、
自動分析装置と試薬が同一であれば一定であるた
め、一度測定すれば、必ずしも毎回求める必要は
ない。
T15-16,H18-19,H15-16,B15-16,α,β,γは、
自動分析装置と試薬が同一であれば一定であるた
め、一度測定すれば、必ずしも毎回求める必要は
ない。
本実施例においては、検体中の妨害クロモゲン
である乳び度を、可視波長域の吸収スペクトルの
長波長域における適当な2波長の吸光度差から求
め、同じく溶血度を前記乳び度及び中波長域にお
ける適当な2波長の吸光度差から求め、更に、同
じく黄疸度を、前記乳び度、溶血度及び短波長域
における適当な2波長の吸光度差から求めるよう
にしているので、各妨害クロモゲン濃度を、分離
して、かつ精度良く求めることが可能である。
である乳び度を、可視波長域の吸収スペクトルの
長波長域における適当な2波長の吸光度差から求
め、同じく溶血度を前記乳び度及び中波長域にお
ける適当な2波長の吸光度差から求め、更に、同
じく黄疸度を、前記乳び度、溶血度及び短波長域
における適当な2波長の吸光度差から求めるよう
にしているので、各妨害クロモゲン濃度を、分離
して、かつ精度良く求めることが可能である。
なお、前記実施例においては、妨害クロモゲン
の量を求めるのに、GOTの測定液のスペクトル
を用いていたが、妨害クロモゲンを求めるための
スペクトルは前記実施例に限定されず、GPT,
LDH,HBDH等の紫外部測定の測定液のスペク
トルを用いることもできる。
の量を求めるのに、GOTの測定液のスペクトル
を用いていたが、妨害クロモゲンを求めるための
スペクトルは前記実施例に限定されず、GPT,
LDH,HBDH等の紫外部測定の測定液のスペク
トルを用いることもできる。
又、前記実施例は、2波長測定法を用いた比色
分析方法に本発明を適用したものであるが、本発
明の適用範囲はこれに限定されず、適当な1波長
における吸光度で代用することにより、1波長吸
光分析にも適用できる。
分析方法に本発明を適用したものであるが、本発
明の適用範囲はこれに限定されず、適当な1波長
における吸光度で代用することにより、1波長吸
光分析にも適用できる。
なお、前記実施例は、本発明を、血清に対する
比色分析方法に適用したものであるが、本発明の
適用範囲がこれに限定されず、一般の比色分析方
法に適用できることは明らかである。
比色分析方法に適用したものであるが、本発明の
適用範囲がこれに限定されず、一般の比色分析方
法に適用できることは明らかである。
本発明によれば、同じ液について可視域の複数
波長の吸光度を測定することによつて、乳び、溶
血、黄疸の3種のクロモゲンについて定量的に測
定することができるので、臨床検査結果の判定に
役立てることができる。
波長の吸光度を測定することによつて、乳び、溶
血、黄疸の3種のクロモゲンについて定量的に測
定することができるので、臨床検査結果の判定に
役立てることができる。
第1図は、GOT反応液中における乳び、溶
血、黄疸の各基準吸収スペクトルを示す図、第2
図は、代表的な検体血清のGOT反応液における
吸収スペクトル例を示す図である。
血、黄疸の各基準吸収スペクトルを示す図、第2
図は、代表的な検体血清のGOT反応液における
吸収スペクトル例を示す図である。
Claims (1)
- 1 乳び・溶血および黄疸の内の少なくとも1つ
によるクロモゲンの影響がある試料に光を照射
し、その試料のクロモゲンを測定する方法におい
て、可視波長域のうちの乳びの影響はあるが溶血
および黄疸の影響が実質的にない長波長域での適
正な波長における吸光度を測定して乳びの程度を
求めること、可視波長域のうちの黄疸の影響が実
質的にない中波長域での適正な波長における吸光
度の値および長波長域における測定値に基づいて
溶血の程度を求めること、および可視波長域のう
ちの溶血の影響がある短波長域での適正な波長に
おける吸光度の値および中波長域における測定値
に基づいて黄疸の程度を求めることを特徴とする
クロモゲンの測定方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP12371684A JPS6035241A (ja) | 1984-06-18 | 1984-06-18 | クロモゲンの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP12371684A JPS6035241A (ja) | 1984-06-18 | 1984-06-18 | クロモゲンの測定方法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP12960277A Division JPS5463785A (en) | 1977-10-31 | 1977-10-31 | Colorimetric analysis method |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6035241A JPS6035241A (ja) | 1985-02-23 |
JPS6119933B2 true JPS6119933B2 (ja) | 1986-05-20 |
Family
ID=14867592
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP12371684A Granted JPS6035241A (ja) | 1984-06-18 | 1984-06-18 | クロモゲンの測定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6035241A (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11220704B2 (en) | 2016-08-10 | 2022-01-11 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for measuring HbA1c |
CN110609002B (zh) * | 2018-12-29 | 2024-05-31 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 一种干扰检测方法及样本分析仪 |
-
1984
- 1984-06-18 JP JP12371684A patent/JPS6035241A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS6035241A (ja) | 1985-02-23 |
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